JPH0215055A - スパガリン類の精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は抗癌剤または免疫抑制剤として有用なスパガリ
ン類またはスパガリン類製造中間体の新規な精製法に関
する。

〔従来の技術〕

スパガリンは、梅沢らにより見出された制癌活性を有す
る抗生物質であり（特開昭５７−４８９５７号）、これ
をもとに多くの誘導体や類縁化合物が発表されている（
特開昭５８−６２１５２号、同５９−４２３５６号、同
６０−１８５７５８号、同６２−４８６６０号）。

また作用に関して、免疫抑制作用も見出されている（特
開昭６１−１２９１１９号）。これらの化合物は、培養
法や、生合成法や、全合成法により製造される。

上記スパガリンおよびその誘導体もしくは類縁化合物（
以下これらをすべて含めて単にスパガリン類という）の
なかで、特に活性の高いスパガリンや１５−デオキシス
パガリン等は、比較的不安定なため、それらの高純度品
を大量に製造することは極めて困難であった。すなわち
、スパガリン類および中間体グリオキシリルスペルミジ
ンまたはそれらの誘導体は精製工程における加熱濃縮操
作によって容易に分解する。例えばイオン交換樹脂およ
び／または多孔性合成吸着剤のカラムから、無機塩を含
む溶液でスパガリン類を溶出した場合、活性画分から目
的物の分解を抑えながら脱塩および／または濃縮する工
程に問題があった。この脱塩および／または濃縮につい
てはこれまで適当な手段がなかったために巳むおえず濃
縮乾固と有機溶媒抽出で行われていたが、この場合分解
防止のため少量ずつ低温下で濃縮操作を行わざるを得ず
、生産性は当然低下することになり、工業的製造法とし
ては十分とはいえなかった。更に従来の脱塩および／ま
たは濃縮法は、その大量生産に適用できるものとは言い
がたく、効率的、経済的な方法が望まれていた。

〔発明が解決しようとする課品〕

本発明は工業的に実施できる脱塩工程および／または濃
縮工程を組入れたスパガリン類またはスパガリン類製造
中間体の精製法を提供することを目的とする。

〔課題を解決するための手段〕

本発明を概説すれば、スパガリン類またはスパガリン類
製造中間体を精製する方法において、その精製工程に、
電気透析工程および／または逆浸透新工程を組入れるこ
とを特徴とするスパガリン類またはスパガリン類製造中
間体の精製法に関する。

本発明者らは、前述した如くカラムから無機塩溶液で溶
出して得られるスパガリン類と塩を、含有する溶液、ま
たはスパガリン類の製造中間体と塩を含有する溶液より
塩のみを除去する方法を鋭意検討した結果、電気透析法
を用いると、スパガリン類または中間体の分解も少なく
極めて効率よく脱塩できることを見出した。また塩以外
にも、酸または塩基も所望に応じて除去できることを見
出した。しかもスパガリン類およびその中間体のように
アミンやグアニジンなどの陽電荷の官能基を有する低分
子化合物であっても、極めて高い回収率が得られること
を見出した。更に本発明者らは、スパガリン類またはそ
の製造中間体を含有する溶液を濃縮する方法を鋭意検討
した結果、逆浸透法を用いると、スパガリン類または中
間体の分解も少なく極めて効率よく濃縮できることを見
出した。しかもスパガリン類およびその製造中間体のよ
うに低分子化合物であっても、極めて高い回収率が得ら
れることを見出し本発明を完成した。

本発明におけるスパガリン類としては、特に制限はない
が、 例えば−数式 ％式％ または−ｃＨ（ｃｏ、ｏｎ）−を示す。更にＸは水素、
またはアミノ酸、若しくはペプチドのカルボキシル基か
ら水酸基を除去した基を示す。）で示されるスパガリン
類化合物、およびその薬理学上許容される塩が挙げられ
る。

具体的に示すと、例えば次の化合物を挙げることができ
る。

アミド アミ ド キシメチルエタンアミ ド Ｑつスパガリン エタンアミ ド アミド 等があり、 第 １表に示す構造を有する。

本発明のスパガリン類の製造中間体には、例えばグリオ
キシルスペルミジン 体を挙げることができる。

上述したスパガリン類またはその製造中間体は例えば前
述した特開昭５８−６２１５２号、同第５９−４２３５
６号、同６０−１８５７５８号および同６２−４８６６
０号等に記載された方法で製造できる。これらの方法で
製造された生成物含有液は通常不純物もしくは副生成物
を除くため、イオン交換樹脂および／または多孔性合成
吸着剤のカラムを用いて、無機塩例えば塩化ナトリウム
等を含む溶液で溶出して精製している。

スパガリン類および／またはその製造中間体を含有する
溶液中でのこれらの物質の濃度は、−数的に０．１〜１
０重量％であり、またその時の塩の濃度は０．１〜１０
重量％であるが、特に限定するものではなく、このよう
な濃度の溶液は、上述した如くスパガリン類の製造工程
において各種イオン交換樹脂や多孔性合成吸着剤のカラ
ムからの溶出液として得られる。このとき用いられるイ
オン交換樹脂としては、陽イオン交換樹脂が用いられ、
例えば、ＣＭ−七ファデツクス、ダイヤイオンＳＫシリ
ーズ、ダイヤイオン　ＷＫシリーズ、などがあげられる
。また合成吸着剤としては、ダイヤイオン　ＩＰシリー
ズ、セパビーズ　ＳＰシリーズ等が挙げられる。

本発明によればこの溶出液を更に脱塩および／または濃
縮するに当って電気透析工程および／または逆浸透工程
を行うのである。

本発明で使用する電気透析法の原理は、スルホン酸基や
カルボキシル基等の陰電荷をもつ陽イオン交換膜と、第
４アンモニウム塩基やアミ７基などの陽電荷をもつ陰イ
オン交換膜とを交互に並べて、直流電流を通ずる。電気
透析の駆動力は、両端にある電極によって与えられる電
位差であり、膜の有する電荷が被処理物質イオンの動き
を阻止したり通過させたりする役目を果たしている。す
なわち、陽イオン交換膜は、膜内にマイナスの電荷が固
定されており、陽イオンは膜内を透過できるが、陰イオ
ンはマイナス電荷と反発して透過できない。これとは逆
に、プラスの電荷が膜内に固定されているのが陰イオン
膜で、陰イオンは膜内を透過するが、（支）イオンは透
過しない。これらのイオン交換膜は、それぞれの反対の
電荷をもつイオンに対して選択性を持つものである。例
えば塩化ナトリウムを電気透析にかけると交換膜を通し
てナトリウムイオンは陰電極に、塩素イオンは陽電極に
移動し、脱塩が進行することになる。

本発明の目的とするスパガリン類およびその製造中間体
の精製工程に使用する電気透析法に利用できるイオン交
換膜は、上記機能に加えて、次の条件が必要とされる。

すなわち、スパガリン類およびその製造中間体のように
分子量が比較的小さく（約１０００以下）、アミノ基、
グアニジノ基などのカチオン性官能基を有している物質
の透過を阻止し、除去したい塩の解４６イオンのみを選
択透過するものでなければならない。

このような性能をもつイオン交換膜は、選択透過性膜と
呼ばれ、最近では、同符号イオン間で選択透過性を有す
る種々の方式のイオン交換膜が開発されている。イオン
選択透過性を付与する方式としてはいろいろな提案がな
されている。大別すると、１）架橋度の高い、ち密な栂
造にする、２）表面に反対電荷を導入する等がある。

すなわち、膜の有する細孔のサイズを調節することによ
って、被処理物哲の分子量の差によりその透過性を制御
することができる。あるいは、交換膜の表面に股母体と
は反対荷電の薄層をつけることにより、１価イオンと２
価イオンの選択ができる。更に、このＮ層が、荷電をも
つ低分子量有機物の回収率を上げる働きをする。

本発明のスパガリン類およびその製造中間体の精製工程
に利用できるイオン交換膜はよく知られており、例えば
株式会社フジ・テクノシステム昭和５９年８月発行「最
新の膜処理技術とその応用」第２１６頁に示されている
ものがある、これらを第２表に示すが、これらの中から
適宜選択使用することができる。特に上記原理に基づい
て、表面処理を施して選択性を向上させた交換膜が好ま
しい。何故ならスパガリン類またはその製造中間体の有
するアミン基若しくはグアニジノ基の陽電荷により、−
数的にこれらの化合物が膜に吸着したり、外液に漏出す
る現象が起り、脱塩効果が低下したり回収率が低下する
ことがあるからこれを防ぐためである。

特に好ましい交換膜の組合せとして、例えば旭化成社製
のアシプレックスカートリッジＡＯ−１１０を挙げるこ
とができるが、特にこれに限定するものではなく、更に
本発明の目的を達成するためにこれらの交換膜を基本に
して、性能向上、修飾、改造した製品を利用することが
できる。

このような電気透析を実施するには、市販されている各
種電気透析装置を利用することができる。例えば旭化成
■のＡＯ−１１０系のイオン交換膜を装着した電気透析
装置は、最もこのましい成績が得られ、スパガリン類ま
たはその製造中間体の外液への漏出損失を極力抑えて無
機塩を除去することが判った。装置の脱塩能力は一般に
交換膜の面積で決定されるが、本発明においても規模に
応じて適切な面積の交換膜を装着した装置を使用できる
。

除去できる塩としては例えば、塩化す）　ＩＪウム、塩
化カリウム、塩化リチウム、塩化カルシウム、塩化マグ
木シウム、臭化カリウム、臭化ナトリウム、臭化リチウ
ム、臭化カルシウム、臭化マグネシウム、酢酸カリウム
、酢酸ナトリウム、酢酸リチウム、酢酸カルシウム、酢
酸マグネシウム、ギ酸カリウム、ギ酸ナトリウム、ギ酸
リチウム、ギ酸カルシウム、ギ酸マグネシウム、炭酸カ
リウム、炭酸ナトリウム、炭酸リチウム、炭酸カルシウ
ム、炭酸マグネシウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリ
ウム、リン酸リチウム、リン酸カルシウム、リン酸マグ
ネシウム、硫酸カリウム、硫酸ナトリウム、硫酸リチウ
ム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウムなどを挙げるこ
とができる。

除去できる酸または塩基としては、塩酸、臭化水素、酢
酸、ギ酸、炭喰、リン酸、硫酸など、また水酸化カリウ
ム、水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化マグネ
シウム、水酸化カルシウムなどを拳げることかできる。

本発明で使用する逆浸透法の原理は、溶媒（一般に水）
は通すが溶質は通さない半透膜を用いて、溶液に浸透圧
に抗した王力を加えることにより、溶媒が通常の浸透と
は逆方向に進む現象、即ち逆浸透を応用して、溶媒と溶
質の分離を行なうものである。従って逆浸透法の駆動力
は圧力差である。

この半透膜は、逆浸透膜とも呼ばれ、一般に天然高分子
の酢酸セルロースまたは合成高分子からなる合成高分子
の膜素材としては、ポリエーテル−アミド、ポリエーテ
ル−尿素、芳香族ポリアミド、スルホン化ポリフルフリ
ルアルコール、ポリベンズイミダゾール、ポリピペラジ
ンアミド、スルホン化ポリスルホン、スルホン化フェニ
レンオキシド、ポリエチレンイミン−トルエンジイソシ
アネート、ポリエチレンイミン−酸クロリド、ポリアミ
ドカルボン酸、ポリベンズイミダシロン、ポリイミド、
ポリエーテル、変性ポリアクリロニトリル、ポリエチレ
ンイミン縮合体等が広く用いられている。これらの半透
膜は、平膜、スパイラル、チューブ、中空糸形式の逆浸
透モジュールとして商品化されている。逆浸透モジュー
ルの性能は、溶質の排除率、溶媒（水）の透過量で評価
される。本発明では、低分子量有機化合物の濃縮に適し
た排除率の高い、しかも比較的低い圧力下でも透水量の
多いモジュールが好ましい。現在市販されている高排除
性の逆浸透膜モジュールを第３表本発明の目的とするス
パガリン類およびその製造中間体の濃縮工程に用いる逆
浸透膜は、これらの市販品から適宜選択して使用するこ
とができる。これらの逆浸透膜の中で、特に好ましいも
のとしては、ＰＥＯ−１０００（東し社製）、Ｈｏ１ｌ
ｏｓｅｐ　（東洋紡社製）　、ＮＴＲ−７１００シリー
ズ（日ＴＪｒ、電工社製）などを挙げることができる。

このような逆浸透法により、スパガリ＞　１１１　オよ
びその製造中間体をＳ縮するには、上記のような逆浸透
膜モジュールを組入れた市販の各種逆浸透装置を利用す
ることができる。装置は本発明の目的を達成するもので
あれば制限はない。

装置の濃縮能力は一般に逆浸透膜の有効面積で決まるた
め、本発明においても規模に応じて適切な面積の膜モジ
ュールを装着した装置を使用できる。

濃縮しようとするこれらの溶出液に無機塩を含む場合は
脱塩処理を行って、無機塩による浸透圧を下げた後、逆
浸透装置による濃縮工程にかけるのが好ましい。脱塩処
理としては、先述した電気透析法が最も好ましい。かく
してスパガリン類またはスパガリン製造中間体の精製に
おいて、電気透析法による脱環工程および逆浸透法によ
る濃縮工程を目的に応じて、単独にあるいは直列にお１
合せて使用することができる。

〔実施例〕

以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本
発明は下記の実施例に制限されるものではない。

実施例　１ グリオキシリルスペルミジン２塩ｎｍ５９−を含有する
１ＭＮａｏｊ？溶１５００ｍεを、有効膜面積４００Ｃ
Ｉｌの交換膜（アシプレックスカートリッジＡａ−１１
０−４００：旭化成社製）を装着した電気透析装置（マ
イクロアシライザーＧ−３：旭化成社製）に通液し、外
液には４００ｍεの水道水を使用して電気透析を行った
。サンプル溶液中の塩濃度は、溶液のＭ導度（ル）でモ
ニターした。また同時に、サンプル濃度の定量を、高速
液体クロマトグラフィーを用いて行った。試験結果を第
４表と第１図に示す。脱塩は、約６０分で終了した。サ
ンプル溶液を回収し、減圧濃縮してグリオキシロイルス
ペルミジン２塩酸塩４、９５　Ｐを得た（回収率：９９
％）。

第　４表マイクロアシライザー　０３／ＡＯ−１１０−
４００実施例　２ １５−デオキシスパガリン３塩酸塩５ｙ−を含有する１
ＭＮａ０Ｊ？溶液５００ｍＡを、有効膜面積４００ｃｊ
ｃｒ＋交換膜（カー）！Ｊ７ジＡＯ−１１０−４００＝
旭化成社製）を装着した電気透析装置（マイクロアシラ
イザーロー３＝旭化成社製）に通液し、外液には４００
ｍ１の水道水を使用して電気透析を行った。サンプル溶
液中の塩濃度は、溶液の電導度（ｍｓ／ｚ　）でモニタ
ーした。

また同時に、サンプル濃度の定量を、高速液体クロマト
グラフィーを用いて行った。脱塩は、約６０分で終了し
た。サンプル溶液を［ｉ［Ｌ、減圧濃縮して１５−デオ
キシスパガリン３塩酸塩４．７Ｆを得た（回収率：９４
％）。

実施例　３ グリオキシリルスペルミジン２塩酸塩６００ψを含有す
る６０Ｉ！の水溶液をＨＯＬＬＯ８ＫＰ　ＨＲ５１５５
（東洋紡社製）を装着した逆浸透装置により、圧力５５
Ｋｚ／ｃｄにて処理した。運転時間３７分間で透過液５
０１を得た。その透過液中にはグリオキシリルスペルミ
ジンは検出されなかった。濃縮液と洗浄液をあわせてｉ
ｉ、ｓｚを回収した（濃縮率５．２倍、グリオキシリル
スペルミジンの回収率９８．３％）。

経時的に測定した透過液量、圧力、およびグリオキシリ
ルスペルミジン２塩酸塩の回収率を第５表に示す。

第５表逆浸透法によるグリオキシリルスペルミジンの濃
縮実施例　４ １５−デオキシスパガリン３塩酸塩３００１を含有する
３０１の水溶液をＨｏＬＬｏｓＥｐ　ＨＲ５１５５（東
洋紡社製）を装着した逆浸透装置により、圧力５５Ｋｇ
／ｃ＋ｆｌにて処即した。迎転時間１８分で透過液２５
１を得た。その透過液中には１５−デオキシスパガリン
は検出されなかった。濃縮液と洗浄液をあわせて７Ｉ！
を回収した（濃縮率４３倍、１５−デオキシスパガリン
の回収率９９％）。

実施例　５ １５−デオキシスパガリン３塩酸塩５？を含有する１Ｍ
Ｎａｏｌ溶液５００ｍＪを、有効膜面積４００ｄの交換
膜（カートリッジＡＣ−１１０−４００：旭化成社製）
を装着した電気透析装置（マイクロアシライザーＧ−３
：旭化成社製）に通液し、外液には４００　ｍｔの水道
水を使用して電気透析を行った。サンプル溶液（４０（
ＭＺ）を回収し、Ｎｌ’　−７０ＮｈＮｏＦ工ＬＭ　（
Ｆｉｌｍ　Ｔｅｃｈ社製）の平膜（膜直径７６嘔）を装
着した逆浸透ろ過器を用い、Ｎ２ガスで１５Ｋｐ／ｃＪ
に加圧しろ過した。加圧時間７０分で透過液３２０ｍ１
を得た。濃縮液８０ｍｔを回収した（濃縮率５倍、１５
−デオキシスパガリンの回収率９３．５％）。

〔発明の効果〕

本発明の電気透析による脱塩工程および／または逆浸透
法による濃縮工程を組入れたスパガリン類の精製法は、
医薬品として要求される高純度品を大量に製造する上で
、極めて効率的で経済的な手段を提供するものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１の電気透析法による脱塩工程の試験結
果であり、横軸は時間、縦軸は電導度および回収率を示
すグラフである。 特許出願人　′ｇ！酒造株式会社 手 続 補 正 書 （自発〕

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、スパガリン類またはスパガリン類製造中間体を精製
   する方法において、その精製工程に、電気透析工程およ
   び／または逆浸透工程を組入れることを特徴とするスパ
   ガリン類またはスパガリン類製造中間体の精製法。