JPH0220263A

JPH0220263A - 経口摂取組成物

Info

Publication number: JPH0220263A
Application number: JP63169685A
Authority: JP
Inventors: Ryuji Sugai; 菅井　隆二; Umeji Murakami; 村上　梅司; Taira Takemoto; 平竹本
Original assignee: Kanebo Ltd
Current assignee: Kanebo Ltd
Priority date: 1988-07-07
Filing date: 1988-07-07
Publication date: 1990-01-23

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は降圧用の経口摂取組成物（食品又は医薬品）に
関する。

（従来の技術）今日、高血圧症は我が国において死亡率の上位を占める
疾病の一つであり、その治療あるいは予防は緊急かつ重
要な課題となっている。

高血圧症には、二次性高血圧症と本態性高血圧症とがあ
るが、前者のうち野性高血圧症あるいは内分泌性高血圧
症等とさらに後者の本態性高血圧症の発症、病態に、い
ずれも血中活性プベチド産生系、特にレニン・アンジオ
テンシン系が深いかかわりを持っ”ζいることはよ（知
られている。このレニン・アンジオテンシン系には、血
圧調節に関与するアンジオテンシン転換酵素（Ａｎｇｉ
ｏｔｅｎｓｉｎＣｏｎｖｅｒｔ、ｉｒｒｇ　、Ｈｎｚｙ
ｍｅ、以下ＡＣＢということがある）が存在しており、
該酵素によって、血管壁平滑筋収縮作用を有する活性ペ
プチド（アンジオテンシン■）が産生されることにより
、強い血圧上昇がもたらされる。

従って、この酵素活性を阻害すれば、血圧上昇を抑制す
ること（降圧）が可能となることが考えられ、現にかか
る観点から種々の天然物および合成物について阻害物質
の探索が進められ、既に合成物についてはプロリン誘導
体化合物のある種のものがその有効性を認められて降圧
剤として実用に供されている。

一方、天然物からのＡＣＥ阻害物質として、ゼラチンを
細菌のコラゲナーゼで加水分解して得られる分解物中に
阻害活性を有するものが見い出されており、また最近牛
山来のカゼインのトリブシン分解物中に阻害ペプチドが
存在することが面認され、単離・精製されている（特開
昭５８１０９４、２５号公報参照）これら天然物由来のＡＣＥ阻害物質は、食品あるいは食
品原料から得られるものであるので、低毒性で安全性の
高い降圧剤となることが期１）できるが、なかでもカゼ
イン由来の阻害ペプチＦ−４；ｌ、安全性、有効性に加
えて、製造面に於ても比較的容易かつ低コストでの量産
化が可能と見込まれるところから、その降圧剤としての
実用化か検３・１されている。

しかして、生理活性ペプチド類は、一般に親水性で比較
的高分子量であるため消化管からの吸収が悪く、また場
合によっては消化管液により分解を受けてその活性を失
うことがあるため、投与経路は多くの場合、注射による
静脈内投与に限定されており、上記のカゼイン由来のＡ
ＣＥ阻害ペプチドにあってもその例にもれず、従来はも
っばら静脈内投与時の有効性が検討されてきたが、その
際の血圧降下作用は不十分なものであった。

（発明の目的）本発明者等は安全性が裔く、有効性の高い降圧用の経１
」摂取組成物を捉供すべく鋭意研究を行った結果、意外
にも経口投与で有効であり、静脈投与よりも優れた本発
明を完成するに至った。

（発明の構成）即ち、本発明は下記構造式（＋）Ｔ　ｈ　ｒ　−Ｔｈ　ｒ　−Ｍ　（！　ｔ　−Ｐ　ｒ　
ｏ　−Ｌ　ｅ　ｕ　−Ｔ　ｒ　ｐ　　　（Ｉ）で表され
るペプチドもしくは、その酸イ１加塩を有効成分として
なる降圧用の経［］摂取組成物に関する。

こ＼で酸付加塩としては、製薬上許容される塩、例えば
塩酸塩、硫酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩な
どが好ましいものとして挙げられる。

前記した通り、生理活性ペプチド類は、消化管液による
加水分解・失活、あるいは消化管からの吸収不良等の理
由により経口投与によって有効な生理活性を発揮せしめ
ることは甚だ困難であると考えられている。

これら事実よりすれば、本発明で用いる構造式（Ｉ）で
表わされるペプチドが、後に試験例で示す通り経口投与
（摂取）によっても強い降圧作用を発揮することは全く
予想外であり、かかる事実は本発明を俟って初めて明ら
かとなったところである。しかも、従来試みられていた
静脈内投与では、血圧降下作用が不十分である為に高血
圧症治療剤としての実用化が為されなかったのに反し、
本発明により、初めて実用化が可能となった意義は大き
い。

本発明に使用するペプチｌ”は、既に公知で、牛カゼイ
ンの部分構造物であり、該蛋白のトリプシン加水分解に
よって得ることができる。又、イｑａ化学的な合成手法
を用いることができる。

ペプチド（Ｉ）の調製は、例えば以下のようにして行わ
れる。牛山来カゼインを、ｐＨ５，０〜９．０の条件下
トリプシンにより分解し、分解物から加熱処理あるいは
酸処理により反応停止、未分解カゼインを沈降・除去せ
しめる。次に母液を要すればアルカリで中和し、減圧下
に２〜３倍に濃縮した上、セフアゾ・７クス１．、　Ｈ
−２０等のカラｌ、に添加し、蒸留水で溶出さ−ｖ７Ａ
　Ｃｒ３阻害活性を示す両分を集め、さらに必要に応じ
て同様の精製を繰返し、ペプチド（Ｉ）を取得する。ま
た、以下にペプチド（Ｉ）の合成法の一例を示す。

（Ｃ，化学合成法）以下に合成法の一例を示す。ここでは、不溶性担体とし
てポリスチレン樹脂を用いる同相対称酸無水物法を利用
し、ペプチド合成を行う。なお、ここでは、アミノ酸は
すべてＬ体を意味し、アミノ酸の保護基の略号はそれぞ
れ次の残基を表す。

Ｂｏｃ　　：　ｔｅｒｔ、　ｌ１ｕｔｙｌｏｘｙ−ｃａ
ｒｂｏｎｙｌ　基ＰＡＭ　　　：　　ｐ−ｍｅｔｈｏｘ
ｙ　　ｐｈｅｎｙｌ　　ａｃｅｔａｍｉｄｏｍｅｔｈｙ
ｌ　　ｒｅｓｉｎＢｚｌ　　：ヘンジル基Ｚ　　：ブンジルオキシカルボニル基Ｔｏｓ：ｐ−トリルスルホニル基ＡＡ”：ｎ番目のアミノ酸ポリスチレン樹脂に架橋されたＡＡ’　　（ＡＡ’ＰＡ
Ｍ）をＴＦＡにより、脱保護基反応により、Ｈ−ＡＡＩ
−ＰＡＭを合成し、それにＢｏｃＡＡ”−０１−１をジ
クロルメタン中でＤＣＣを用いをジメチルホルムアミド
中で縮合させ、ＢｏｃＡＡ２−ＡＡ’　−ＰＡＭを合成
し、未反応のＡへＰＡＭを無水酢酸を用い、キャッピン
グする。

得られたＢｏＣ−ＡＡ”　−ＡＡ’　　−ＰＡＭを再び
ＴＦＡを用い、脱保護基反応を行ない、同様にしてＢ　
ｏ　ｃ−ＡＡ”−ＯＨを縮合し、以下同様にして、ＡＡ
６まで縮合反応を行う。なお用いるアミノ酸側鎖の官能
基は以下の様に封鎖しておく。

Ｔｈｒ（Ｂｚｊり、　　Ｍｅｔ（ＳｕＩｌｆｏｘｉｄｅ
）、　　Ｐｒｏ（なし）Ｔｒｐ　（Ｆｏｒｍｙ　Ｉｌ）
　＋　　Ｌｅｕ　（なし）縮合反応終了後、ＨＦを用い
、脱保護基反応を行い、１３ｏｃ及びＰＡＭ、側鎖の保
護基を除き、Ｈ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｌ
ｅｕ−Ｔｒｐを得るＯ本発明の経口摂取組成物を降圧用
の治療あるいは予防のための医薬として用いる場合は、
構造式（Ｉ）のペプチドを薬学的に許容される担体（賦
形剤、滑沢剤、結合剤、着色剤、矯味剤、賦香剤等）と
共に常法に従って、経口投与用の製剤の形態、例えば錠
剤、カプセル剤、トローチ剤、粉末剤、細粒剤、顆粒剤
等とした上経口投与される。

一方、健康食品として用いる場合には、上記と同様の経
口投与用製剤の形態とするか、もしくは固形あるいは液
状の食品ないしは嗜好品（例えば菓子類、粉末茶、アル
コール飲料、スポーツ飲料等）の形態とすればよい。配
合量は剤型により異なるが、一般的にばＯ，１〜３０％
が好ましい。

用量は、一般に成人男子１日当り０．１　ｍ　ｇ〜５０
０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、か＼る範囲から投与（
摂取）の目的に応じて適宜の量が選択される。又、摂取
は１度に、または数回に分けて行なう。

以下に本発明経ｌコ摂取組成物の活性成分たるペプチド
（Ｉ）の製造例と、動物実験（血圧降下試験および急性
毒性試験）の結果を挙げる。

なお、ＡＣＥ阻害ペプチドの活性（Ｉ　Ｄ　ｓ。）は、
以下の方法によって測定したものである。

（ＡＣＥ阻害ペプチドのＡＣＥ阻害活性の測定〕ｉ）ア
ンジオテンシン転換酵素液（ＡＣＥ液）の調製５ｇのラビットアングアナンドパウダー（シグマ社製）
を５０　ｍ　Ｉｔの０．１’Ｍホウ酸緩衝液（＋）　１
１８．３）に溶解し、４０．０００ｘｇ、４０分の条件
下で遠心処理し、その上清液をさらに、上記緩衝液で、
１０倍に稀釈し、アンジオテンシン転換酵素液を得た。

ｉｉ　）活性の測定試料を試験管に０．０３　ｍ　ｌ入れ、これに基質とし
て、２５０μｌのヒプリルーし一ヒスチジルし一ロイシ
ン〔シグマ社（Ｓｉｇｍａ、　Ｃｏ、）製、最終濃度５
　ｍＭ、　ＮａＣ＃　３００　ｍＭを含む。〕を添加し
、３７℃で１０分間保温後、上記酵素液を０．１ｍｌ添
加し、３７℃で３０分間反応させた。その後、ＩＮ塩酸
０．２５　ｍ　ｊ！を添加して反応を停止させた後、１
．５　ｍ　１１の酢酸エチルを加え、１５秒間激しく攪
拌した。その後、３．５０Ｏｒｐｍで１５分間遠心して
、酢酸エチル層１ｍ７！を採取した。その酢酸エチル層
を１２０℃で３０分間加熱し、溶媒を除去した。溶媒除
去後、蒸留水１ｍＡ！を添加し、抽出されたヒプリル酸
の吸収（２２８ｎｍの吸光度）を測定し、これを酵素活
性とした。

阻害率は、次式より算出した。

阻害率−（Ａ−Ｂ）／ＡＸ　１００％Ａ：阻害剤を含まない場合の２’２８ｎｍの吸光度Ｂ：阻害剤添加の場合の２２８ｎｍの吸光度そして阻害
率が５０％となるときの酵素反応溶液中の阻害剤濃度を
ＩＤ、。とする。

〈製造例１〉牛乳カゼイン３２０ｇとｌ・リプシン（ＰＬＢｉｏｃｈ
ｅｍ製、　　ＥＣ，３，４，２１，４）　　　８００ｍ
ｇを０．０４　Ｍリン酸緩衝液（ｐ　Ｉ−１７，４）　
８１に加え、３７℃で１５時間反応さ−ｌた。濃塩酸４
００ｍ＋２を加え、反応を停止し、生じた沈澱を消去す
る。炉液をＮ　ａ　ＯＩｆを用いてｆ）Ｈ７に中和する
。

ｔｒ＝液２００ｍｊ２をセファデックスＬ　Ｈ〜２ｏカ
ラム（５Ｘ１３０ｃｍ）に供し、Ａ’　ＣＢ阻害活性を
有する両分を集め、これを３回くりかえす。これをバイ
オラド社製ＡＣ−１１Ａ８カラム（４×６３ｃｍ）に供
し、分画、濃縮後、更にセファデックスＬ　Ｈ−２０カ
ラム（５Ｘ１３０ｃｍ及び３Ｘ１０５ｃｍ）に供し、Ａ
ＣＥ阻害活性画分ペプチド（Ｉ）が得られる。

ペプチド（Ｉ）の■Ｄ５ｏを求めたところ１６μＭであ
った。

く製造例２〉次に合成により得られた構造式（Ｉ）のペプチドの降圧
作用についての試験例を示す。

試験例１　構造式（Ｉ）のペプチドのラソＩ・経１丁−
１１回投与時の降圧作用（Ｉ）　　試験方法１２週齢雄の自然発症高血圧ラット（日本チャールズ・
リバー社）１５匹を、温度２３±２°Ｃ１湿度５５±５
％の動物室に収容し、水および飼料（オリエンタル酵母
社製、ＭＦ）を自由に摂食させた。ラットは週に一度血
圧を測定しながら２週間にわたって馴化飼育したのち、
高血圧を発症したところで実験に供した。

検体は試料を蒸留水に溶解した液（投与直前に調製）を
、投与量が１３０ｍｇ／ｋｇ体重となるように調整して
経Ｌ１投与した。

血圧測定は、投与前と投与３時間後に、それぞれ無加温
・非観血的ラット血圧ａ１（トーイデン製、ＤＳＲ８０
１Ａ）を用い、ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法で各ラットの最高
血圧値を連続１０回測定し、その平均値を求めることに
より行った。結果は１群５匹の平均値で示した。

（２）　　試験結果結果を第１表に示す。

第１表血圧（ｍｍＨｇ）投与直前　　　　　　（２０４）投与２時間後　　　　（Ｉ８１）〃４　　’　　　　　　　（Ｉ９９）第１表の結果から明らかな通り、構造式（Ｉ）のペプチ
ドは経［１投与によって顕著な降圧作用を有する事がわ
かる。

試験例２　急性毒性試験（Ｉ）　　試料構造式（Ｉ）のベプチＦの１０％水溶液を試料とした。

（２）　　実験動物動物：ＩＣＲ系マウス（口本夕レア）供試数：雌雄各２０匹試験開始時の体重：雄２４〜２６ｇ雌２２〜２４ｇ期間中の飼育条件：　？！Ａ度２２±２℃湿度５０±５
％固型試料（ＣＢ−２、日本タレア）水道水を自由摂取（３）　　試験方法動物は１週間予備飼育した後に、１群１０匹として実験
に供した。投与前１６時間絶食さセ実験群には最大可能
投与量の試料３ｇ（Ｉ０％水溶液３０ｍ１り／ｋｇ、対
照群には水道水を３０ｍｆｆ／ｋｇ、それぞれ胃ゾンデ
を使って強制的に経口投与した。

投与後７日間、動物の生死と−・般症状について毎日観
察を行った。

（４）　　試験結果構造式（Ｉ）のペプチドのＬＤｓｏは３　ｇ／ｋ　ｇ以
上で、動物の死亡は全く無かった。一般症状として衰弱
、るいそう、虚脱、うずくまり、腹這い、横臥、体毛色
変化、皮膚温変化、発汗、立毛、脱毛、毛の汚染、呼吸
数増減、不整呼吸、喘鳴等についても観察したが、全く
変化は無かった。

この結果と、さらに食品成分のカゼイン由来であること
からして、本発明の構造式（Ｉ）のペプチドが極めて安
全性の高いものであることが明らかである。

（発明の効果）本発明により、安全性が高く、有効性の高い降圧用の経
口摂取組成物（食品又は医薬品）の提供が可能となった
。

以下、実施例において、詳細に説明する。

なお、実施例中の部とは、すべて重量部を意味する。

実施例１　錠剤〔組成〕構造式（Ｉ）のペプチド　　　　　　　２０．０部ヒド
ロキシプロピルメチルセルロース　　５．０乳　　’ｒ
＊　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　６　１．　５蔗　　糖　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５カルボキシ
メチルセルロース　　　　　　７．５ステアリン酸マグ
ネシウム　　　　　　　１．０デンプングリコール酸ソ
ータ５．０構造式（Ｉ）のペプチド２０．０部、乳Ｆ’　６１．５
部、蔗糖０．０５部およびカルボキシメチルセルロース
７．５部をヒドロキシプロピルメチルセルロース５部を
含む７０％エタノール水溶液２５部に懸濁し、練り合わ
せた後、真空乾燥して乾燥物を得た。この乾燥物に、ス
テアリン酸マグネシウム１．０部とデンプングリコール
酸ソーダ５．０部を加え、常法に従って錠剤（Ｉ錠４０
０ｍｇ）を調製した。

実施例２トローチ剤〔組成〕構造式（Ｉ）のペプチド　　　　　　　　５．０部乳　
　糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　５０．０蔗　　＠　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　３　９．　８トラガカン
ト末　　　　　　　　　　　　　５．０ペパーミント油
　　　　　　　　　　　　　０．２乳糖５０．０部、蔗
１７！　３９．８部、トラガカント末５．０部およびペ
バーミンｌ−０，２部を混合し、これに、構造式（Ｉ）
のペプチドＡ５．０部を蒸留水３．５部に溶解した溶液
を加え、よく練合した。

次に、デンプンを散布したガラス板上に、上記の練合物
をめん棒で展延して厚さ約５ｍｍのシート状として後、
型で打ち抜き、乾燥してトローチ剤（Ｉ，０ｇ／個）と
した。

実施例３　アイスクリーム脱脂粉乳　　　　　　　　　　　　　８．０％植物脂肪
　　　　　　　　　　　　１０．０砂Ｉ！　　　　　　
　　　　　　　　　１３．０安定剤　　　　　　　　　
　　　　　０．３乳化剤　　　　　　　　　　　　　　
０．３バニラフレーバ゛−０，１製造例１のペプチド卵黄水通常の製造法にて作成した。

実施例４　ヨーグルト牛乳全乳脱脂粉乳グラニユー糖水製造例１のペプチド卵黄通常の製造法にて作成した。

０、　１１２．４５５．８（Ｉ０，０ｇ　／カップ）６４．０４、　０５．０７．０１　０、　００、　１９．９（Ｉ０，０ｇ／ｃｕｐ）＝１７

Claims

【特許請求の範囲】下記構造式（ I ）【遺伝子配列があります】（ I ）で表されるペプチドもしくは、その酸付加塩を有効成分
としてなる降圧用の経口摂取組成物。