JPH02221294A - ペプチド合成法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 プチドの新規な製法及び該方法で使用される新規な中間
体に係る。

レトロ逆転ペプチドは、ペプチド鎖内に含有される１以
上のアミド結合の方向が相互に異なる公知のペプチドの
構造異性体である（レトロ逆転ペプチドでは方向が逆で
ある）。

従って、レトロ逆転ペプチドは、一般式（１）（式中、
Ｒ及びＲ１は好適なアミノ酸の側鎖であり、Ａは単なる
結合又は少なくとも１のアミノ酸を含有するペプチド鎖
である）で表される少なくともｌの基を結合する。

このような骨格ペプチド結合の逆転は、国際的に認めら
れた表示法によれば、 −　（ｇ）ＡＡＡ．　−　Ａ−　（ａ）ＡＡＡ（ここで
、Ａは上記と同意義であり、ＡＡＡ及びＡＡＡ　。

は、それぞれ側鎖に基Ｒ及びＲ１を有するアミノ酸を示
す基準３文字コードを示し、アミノ酸残基ＡＡ＾１に関
する表示の直前の（ｇ）は、該アミノ酸残基が一般式（
ＩＩ） −　ＮＨ−　ＣＨ−　ＮＨ− Ｒ。

の相当するジェム−ジアミノアルキル誘導体によって置
換されていることを示し、一方、（―）はアミノ酸残基
ＡＡＡが一般式（Ｉ［［） ％式％ の相当するマロニル誘導体によって置換されていること
を示す）として表示される。

１以上のアミド結合の逆転は、一般に、該結合を安定化
させ、このようにして得られるレトロ逆転ペプチドは酵
素分解に対する抵抗性が増大する。

生物活性ペプチドの場合、生物学的受容体（特殊な活性
を与える）との相互作用は実質的に側鎖によるものであ
り、レトロ逆転類似体は「親ペプチド」の生物活性と同
じパターンを示す。このように、高い安定性と共に、親
ベブチドと同様の生物活性を示すため、新規なペプチド
は治療手段として興味深いものとなっている。

このため、レトロ逆転法が最近注目され、多数のケース
で適用され、かなりの成功を収めている（たとえばｒｌ
ｎｔ．　Ｊ．　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅ
ｓ．Ｊ　１７。

１９８１、　ｐｐ．７２−８８に記載された部分レトロ
逆転Ｌ）Ｉ−ＲＨ類似体：［サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ）Ｊ　２０４，Ｊｕｎｅ　１９７９。

ｐｐ．１２１０−　１２に記載された部分レトロ逆転エ
ンケファリンアミド；ヨーロッパ特許公開第１６１，０
０７号に記載されたサブスタンスＰのレトロ逆転類似体
；米国特許第４，７１６，１４９号に記載のニューロテ
ンシ様物質：ヨーロッパ特許公開第１８５，４３３号及
び同第１９０、５９７号に記載のＢｒＦ３，類似体；ヨ
ーロッパ特許公開第１２７，２３５号及び同第１２７，
２３４号記載のアンジオテンシノーケン５−１４デカベ
プチドフラグメント；ヨーロッパ特許公開第２５３，　
１９０号記載のタフトシン類似体；及びヨーロッパ特許
公開第２８２．１１１９１号記載のサイモポイエチン類
似体参照）。

一般に、レトロ逆転ペプチドの合成は、ペプチドの調製
に従来より使用されているものと実質的に類似し、鎖に
存在する各種残基（又はフラグメント）の縮合を順次行
うものではあるが、少なくともｌのマロニル残基及び少
なくとも１のジェムジアミノアルキル残基を導入する点
で異なる方法に従って行われる。

一般式（ＩＩＩ）のジェム−ジアミノアルキル残基の導
入は、遊離のカルボキシル基によるペプチド結合を形成
する際、一般式（ＩＶ） Ｈ．Ｎ−　ＣＯ−　ＣＨ−　ＮＨｔ Ｒ，１ （式中、Ｒ，／は、官能基が必要により過当に保護され
た側鎖Ｒ１である）で表される相当のアミドを使用し、
ついでＴＩＢとの反応によって末端アミド基を第１級ア
ミノ基に変化させることによって容易に実施される（イ
タリー国特許出願第２２１２８１　Ａ／８１参照）。

一方、マロニル残基の導入は、実際には、一般式（Ｖ） Ｒ”Ｏ−Ｃｏ　−ＣＩ　−Ｃ００Ｈ Ｒ′ （式中、Ｒ″は低級アルキル基であり　Ｒ／は、官能基
が必要により適当に保護された側鎖Ｒである）の２−置
換マロン酸モノエステルを使用することによって行われ
る。

このモノエステル（Ｖ）は、２−置換マロン酸エステル
の調製のための一般的な化学法によって調製される相当
するジエステルのモノケン化によって得られる。

しかしながら、Ｒ′によっては、連続して操作を行うこ
とが要求されるため、高純度のモノエステルを多量に調
製することは非常に困難である。

一般に、ジエステルの調製では混合生成物を生じ、クロ
マトグラフィー精製法を使用しなければ、該混合物から
の所望ジエステルの回収は容易ではない。さらに、モノ
エステルは安定性に乏しいため、ジエステルのモノケン
化による調製は、ペプチド鎖にモノエステルを導入する
ために要求される多段階法（前記モノケン化以外に、活
性化、カップリング及び最終のケン化を包含する）の一
部として考えざるをえない。例として、４−アミノ−ｌ
ブタノールを原料とする２−（４−第３級ブトキシカル
ボニル−アミノ−ブチル）マロン酸モノエチルエステル
［（ｍ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）ＯＥｔ］の調製（ジエステル
のクロマトグラフィー精製を包含する多段階法）では、
全体の収率は２０％以下である（Ｐ、Ｖ、　Ｐａ１ｌａ
ｉら「バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
）Ｊ　２４゜（１９８５）、　１９３３−４１参照）。

このような方法は、導入されたマロニル残基からエステ
ル基を選択的に除去する際の条件下で安定でなければな
らないことから、合成の全体的戦略において保護基の選
択が非常に制限されるとの欠点がある。

別法によれば、数年前にＭｅｌｄｒｕ−酸誘導体の使用
が提案された（Ｍ、　Ｇｏｏｄｍａｎ及びＭ、　Ｃｈｏ
ｒｅｖ　ｒＰｅｒ−ｓｐｅｃｔｉｖｅｓ　ｉｎ　Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ　ＣｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　Ｅｂｅｒｌｅ編。

Ｇｅｙｅｒ　＆　ｆｉｅｌａｎｄ出版、　（１９８１）
、　９．２８３〜参照）。

さらに詳述すれば、一般式（Ｖｒ） （式中、Ｒ′は、官能基が必要により適当に保護された
側鎖Ｒである）で表される５−置換−２，２，−ジメチ
ル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオンが使用される
。

実際には、２，２．５−トリメチル−１，３−ジオキサ
ン−４，６−ジオン（一般式（Ｖｌ）において、Ｒ′が
メチル−アラニン側鎖によって５−置換されたｋｌｅｌ
ｄｒｕａ酸（滅）＾ｌａである化合物）を使用して（ａ
）Ａｌａ残基を導入することが行われたが、満足できる
結果が得られていない。事実、アミノ酸パートナ−の部
分Ｎ−アシル化のみが観察され、所望の偽像ペプチドの
収率は低い（イタリー国特許出願第２３４１７　Ａ／８
２参照）。

発明者らは、縮合反応のパートナ−を、反応性アミノ系
窒素部でトリアルキルシリル化した相当する誘導体とし
て使用する場合には、レトロ逆転ペプチドの調製に当た
り、マロニル残基（Ｉ［［）を導入させるために、一般
式（Ｖｌ）のＭｅｌｄｒｕａ＋酸誘導体を有効に使用で
きるとの知見を得た。

縮合反応におけるパートナ−としては、所望の偽像ペプ
チド鎖にマロニル基が結合されるアミノ酸、アミノ酸ア
ミド、ペプチドフラグメント又は偽像ペプチドフラグメ
ント（これらの側鎖官能基は必要により適当に保護され
る）が使用される。

固相縮合法を利用する場合、当分野で公知のようにこの
パートナ−は、Ｃ末端を介して適当に選ばれる不溶性支
持体に固定される（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相ペプチド
合成法）。特に、最も広く知られている方法（Ａ、　Ｐ
ｅ５ｓｉら［ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサエテ４
−（ｊ、Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、）Ｊ　Ｃｈｅａ、　Ｃｏ
ａａｕｎ。

（１９８３）、　１９５参照）によるレトロ逆転ペプチ
ドの固相合成法では、必要なモノマロン酸アミドの調製
のために、一般式（Ｖｌ）の化合物が有利に使用される
。

従って、本発明の目的に関して、「Ｎ−トリアルキルシ
リル誘導体」とは、側鎖の官能基及び末端カルボキシ基
が、必要により、アミノ基の活性化を介してトリアルキ
ルシリル基によって保護されたアミノ酸、アミノ酸アミ
ド、ペプチドフラグメント又は偽像ペプチドフラグメン
トから得られる化合物を表示する。これら原料のアミノ
酸、アミノ酸アミド、ペプチドフラグメント又は偽像ペ
プチドフラグメントを任意に不溶性支持体に固着させる
。

「アルキル基」とは、炭素数１ないし６の直鎖状又は分
枝状のアルキル鎖であり、好ましくはメチル基又はエチ
ル基である。

一般式（Ｖｌ）の化合物と好適に選択された１１−）リ
アルキルシリル誘導体との縮合により、容易にかつ効果
的にアミノ基のアシル化が行われる。

マロニル残基を導入するためにこの方法を使用すること
によって得られる他の利点は、得られた生成物の中性又
はわずかに酸性のｐｔ＋における簡単な加水分解によっ
て、偽像ペプチド末端カルボニル残基のカルボニル基を
フリーにすることが可能である点にあり、その後、つづ
くアミノ結合の形成に利用される。

実際には、Ｍｅｌｄｒｕｍ酸誘導体（ＶＩ）と好適に選
択されたＮ−トリアルキルシリル誘導体との間の縮合は
、一般式（Ｖｌ）の化合物（Ｒ’は上述と同意義である
）を、少なくとも等モル量、好ましくはわずかに過剰の
Ｎ−トリアルキルシリル化反応パートナ−と接触させる
ことによって行われる。

これら２つの反応体を不活性有機溶媒の存在下で反応さ
せる。一般に、たとえばハロゲン化脂肪族又は芳香族炭
化水素（塩化メチレン、ジクロロエタン、クロロホルム
、クロルベンゼン等）、環状又は線状エーテル（テトラ
ヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル等）、及
びエーテル化グリコール（エチレングリコールモノメチ
ル又はモノエチルエーテル）の如き極性、非プロトン性
の不活性有機溶媒を有利に使用できる。

該縮合反応は、代表的には０℃ないし反応混合物の還流
温度の範囲の温度、好ましくは１５ないし５０℃で行わ
れる。

縮合の完了後、有機又は無機の酸の冷水溶液（たとえば
５％又は１０％クエン酸水溶液）を使用する温和な酸加
水分解を行い、末端マロニル残基が導入された所望の遊
離カルボキシル基含有偽像ペプチド鎖を生成する。

マロニル残基の導入の前又は後に、ペプチド化学におい
て広く知られ、ペプチド合成において有利に使用されて
いる技術に従い、所望のレトロ逆転のペプチドの全体合
成における各種の他の工程を実施できる。

原料のＮ−トリアルキルシリル化誘導体は、各種文献に
おいて知られている方法に従い、一般的なシリル化剤を
使用して有利に調製される。代表的には、シリル化剤と
してトリアルキルシリルハロゲン化物又はＮ、Ｏ−ビス
−トリアルキルシリルアセトアミドを使用する。

特に、たとえば所望のＮ−トリアルキルシリル誘導体は
、反応の進行を妨げない極性、非プロトン性有機溶媒の
存在下、一般に室温ないし反応混合物の還流温度の範囲
の温度において、好適に選ばれたアミノ酸、アミノ酸ア
ミド、ペプチド又は偽像ペプチド配列と、少なくとも等
モル量、好ましくは過剰量のＮ、Ｏ−ビス−トリアルキ
ルシリルアセトアミドとを反応させることによって調製
される。

シリル化反応の終了後、得られたＮ−トリアルキルシリ
ル化誘導体を常法（たとえば蒸留又は抽出）によって分
離できる。

別法としては、縮合反応は、一般式（ＶＩ）の化合物を
シリル化反応からの混合物に直接添加することによって
行われる。

この場合、アミノ基の窒素の活性化を定量的に生じさせ
るために、大過剰のシリル化剤（たとえば基質１モル当
たりシリル化剤２−３モル）を使用してシリル化を行う
。このように過剰量である場合、反応混合物中の極微量
の水分を中和するためにも有効である。

本発明の好適なｌ具体例によれば、縮合反応を実施する
に当たり、Ｎ−トリアルキルシリル誘導体を直接「その
場」で調製することもできる。この場合、縮合は、−数
式（ＶＩ）の化合物を、遊離の末端アミノ基を有するア
ミノ酸、アミノ酸アミド、ペプチド又は偽像ペプチド鎖
及びシリル化剤と接触させることによって行われる。こ
の場合にも、反応条件を上記の如くし、大過剰量のシリ
ル化剤を使用することが好適である。

一般式（ＶＴ）で表される原料化合物のいくつかのもの
、特にＲ′がフェニルアラニンの側鎖（Ｒ’・−ＣＩ（
。

−ｃｓｕｓ）、アラニンの側ＩＩ　（Ｒ’　−−ＣＨ３
）、バリンの側鎖（Ｒ’　＝　−ＣＨ（ＣＨ３）り、イ
ソロイシンの側鎖（Ｒ’＝　−ＣＨ（ＣＨｓ）ＣＩ（＊
ＣＨｓ）、グルタミン酸γ−エチルエステルの側鎖（Ｒ
’　＝　−ＣＨ，ＣＩｌ、Ｃ００Ｃ，Ｈ８）及びトリプ
トファンの側鎖（Ｒ’　＝　−ＣＨ，（３−インドリー
ル））である−数式（Ｖｌ）の化合物は公知の物質であ
り、文献上公知の方法に従って合成される。

しかしながら、一般に、−数式（Ｖｌ）で表される化合
物はいずれも、式（■） で表されるＷｅｌｄｒｕａ＋酸の５位の炭素のアルキル
化（置換基Ｒ′の構造に応じて操作法が異なる）によっ
て調製される。

たとえば、このような方法の１つは、Ｍｅｌｄｒｕｍ酸
（■）とケトン又は芳香族又はα−分技脂肪族アルデヒ
ドとの反応であり、この方法によりクネベナゲル様生成
物を生成し、該物質はナトリウムボロヒトリッドにより
容易に還元されて５−アルキル置換Ｍｅｌｄｒｕｓ酸を
生成する（Ａ、Ｄ、　ｆｒｉｇｈｔら［テトラヘドロン
・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、）Ｊ
（１９７８）、　ｐｐ、１７５９−６２）。

直鎖状脂肪族アルデヒドを使用する場合、該方法はつづ
くミカエル反応によるビス付加物を主として生成するた
め、クネベナゲル様生成物は単離されない。従って、こ
の場合、Ｍｅｌｄｒｕｍ酸のワン−ボット還元アルキル
化は、二重結合に選択的に作用する還元剤を使用して行
われる（　Ｄ、　ＬＨｒｕｂｏｖｃｈａｋら［テトラヘ
ドロン・レターズＪ　（１９７９）Ｐｐ、２３２５−８
）。

これら化合物を合成するための他の方法は、Ｍｅｌｄｒ
ｕ鳳酸陰イオンの求電子オレフィンへのミカエル付加で
ある（Ｃｈｅｎｇ−Ｃｈｕ　Ｃｈａｎら［シンセシス（
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）Ｊ　（１９８４）、　ｐｐ、２２
４−５）。

−数式（ＶＩ）の化合物の調製に実際に使用される方法
は、当分野で公知の若干の変更（特定の物質に該方法を
適合させるため）を加えてはいるが、上述したものと実
質的に同じである。

５位の置換基に存在する保護基に関して、各種文献にお
いて公知であり、ペプチド合成において一般的に使用さ
れている側鎖官能基の保護基を使用できる。特定の場合
では、−数式（Ｖｌ）の化合物の調製に使用される特別
な方法により、５位に導入される基の保護基に関して若
干の制限がありうる。

しかしながら、−旦、５−置換ｋｌｅｌｄｒｕｍ酸誘導
体が合成されると、この生成物の調製の際に使用された
保護基をペプチド合成に最も好適な他の置換基で交換す
ることが常に可能である。

本発明の方法は、少なくとも１のレトロ逆転ペプチド結
合を含有する各種ペプチドの合成に使用される。特に、
ヨーロッパ特許公開第２５３．１９０号に記載のＴｈｒ
−Ｌｙｓ結合にレトロ逆転を包含するタフトシン類似体
の合成において最高の結果が得られる。

従って、本発明のさらに他の目的は、式％式％ で表されるレトロ逆転タフトシン類似体を製造するため
のペプチド合成法において、−数式（ＶＴａ）（式中、
ＰＬはリシンアミノ官能基の保護基である）で表される
５−置換−２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４
，６−ジオンを使用して、式（ＩＩ［ａ）ＣＯ−ＣＨ−
Ｃ０− （ＣＨｚ）４ ＮＨ。

のマロニル残基の導入を行うことを特徴とするペプチド
合成法を提供することにある。

予測されるように、Ｐは一般的ないずれかのアミノ保護
基であり、好ましくはトリフルオロアセチル基、第３級
ブトキシカルボニル基、第３級アミロキシカルボニル又
は任意にニトロ又はハロー置換したベンジルオキシカル
ボニル基である。

一般式（ＶＩａ）の化合物は、４−アミノ−ブチルアル
デヒドジエチルアセタールを原料として有利に調製され
る。特に、一般式（■ａ）においてＰがトリフルオロア
セチル基である化合物は、４−アミノ−ブチルアルデヒ
ドジエチルアセタールを無水トリフルオロ酢酸によって
Ｎ−アシル化し、つづいて得られた４−トリフルオロア
セトアミドブチルアルデヒドジエチルアセタールをわず
かに酸性の水溶液中で加熱加水分解することによって調
製される。この場合、混合生成物が得られ、該混合物は
そのままでＭｅｌｄｒｕ−酸（■）の還元アルキル化し に使用され、一般式（Ｖｌａ）においてＰがトリフルオ
ロアセチル基である化合物を生成する。

必要であれば、トリフルオロアセチル基のアルカリ加水
分解につづいて、各種のアシル化剤による反応を行うこ
とにより、各種の他の化合物（Ｖｌａ）を容易に生成で
きる。

好適な具体例によれば、Ｔｈｒ−Ｌｙｓ結合においてレ
トロ逆転されたタフトシン類似体の調製法は、ａ）一般
式（■ａ）で表される化合物を（Ｄ）−トレオニンアミ
ド（ヒドロキシ基は保護基ＰＴによって適当に保護され
る）のＮ　　−’トリアルキルシリル誘導体と縮合させ
る工程、ｂ）温和な酸性条件下、得られた生成物を加水
分解させて、一般式（■）Ｌ （式中、Ｐ及びＰは萌記と同意義である）で表されるフ
ラグメントを生成する工程、ｃ）この一般式（■）のフ
ラグメントを一般式（ＩＸ） プチドフラグメントと縮合させる工程、ｄ）ＴＩＢによ
る処理を介して、末端トレオニンアミド基をアミノ基に
変化させる工程、及びｅ）すべての保護基を除去する工
程を包含する。

本発明の方法に従い、相当する５−置換Ｍｅｌｄｒｕｍ
酸誘導体と適当に選択されたＮ−トリアルキルシリル誘
導体との縮合を介してマロニル残基を導入することによ
って有利に生成される他のレトロ逆転ペプチドは、「ケ
ミカル・アブストラクッ（Ｃｈｅｓｉｃａｌ　Ａｂｓｔ
ｒａｃｔｓ）Ｊ　１０３．１７８６１６に記載のデスモ
ルフインレトロ逆転類似体及びヨーロッハ特許公開第２
８２，８９１号に記載のサイモペンチン（ＴＰ５）レト
ロ逆転類似体である。後者の場合には、一般式（Ｖｉａ
）のＭｅｌｄｒｕａ＋酸誘導体が使用され、前者の場合
には、原料のＭｅｌｄｒｕ−酸誘導体は、一般式（■ｂ
）ＣＧ （式中、Ｐはカルボキシ保護基であり、Ｐはアルギニン
グアニジノ保護基である）で表されるノぺの新規な化合
物を提供することにある。

下記の実施例は本発明の好適な具体例を説明するための
ものであって、本発明の精神を限定するものではない。

実施例１ （式中Ｐはチロシンヒドロキシ官能基の保護基である）
で表される。

この場合にも、ペプチド合成においてチロシンヒドロキ
シ基の保護に有利に使用される各種の基を使用できる。

特に好適な基は、第３級ブチル基、第３級アミル基、ベ
ンジル基（任意にハロー又はニトロ−置換したもの）及
びトリフルオロアセチル基である。

従って、本発明の他の目的は、レトロ逆転ペプチドの合
成における中間体として使用される一般式（Ｖｌ）の新
規な化合物、特に−数式（ＶＩａ）及び（ＶＩｂ）（２
，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−５−（４−トリ
フルオロアセトアミド−ブチル）−４゜６−ジオン） ジメチルアミノピリジン（２５，６ｇ、２１０ミリモル
）と塩化メチレン（ｌｏｏｉ＋ｉ２）にトリフルオロ無
水酢酸（２９，４ｚ１２．２１０ミリモル）を含有する
溶液を、撹拌しながら、０℃に冷却した塩化メチレン（
６００ＪＩ１２）に４−アミノブチルアルデヒドジエチ
ルアセタール（３２，２９，２００ミリモル）を含有す
る溶液に満願した。さらに混合物を０℃で３０分間撹拌
し、その沈殿物を濾過してとり除き、炉液を水で洗浄し
た（２００１１Ｑで４回）。有機相をＮａ５Ｏａで乾燥
させ、減圧下で蒸発させ、油状生成物（４８ｇ）を得た
。次いで、ＩＮ　ＨＣＱ（５００ｘｆｆ）を強く撹拌し
ながら加え、室温にて溶液が均質化するまで撹拌を続け
た（約１５分間）。

溶液を冷却し、ＩＮ　ＮａＯＨを加えてｐＨを６にした
。

次に溶液を１５分間１００℃に加熱し、冷却し、減圧下
で小容量（約２００ｆｆＱ）にした。溶液を塩化メチレ
ンで数回抽出し、有機抽出物を合わせ、Ｎａ５Ｏ＊で乾
燥させ、減圧下に蒸発させて４−トリフルオロアセトア
ミド−ブチルアルデヒド６０重量％を含有する油状残渣
（２７ｇ）を得た。

得られた生成物をＮ、　Ｎ’−ジメチルホルムアミド（
ＤＭＦ）（５０ｆｆｉ２）にナトリウムシアノボロヒド
リド（３，３ｇ、５２ミリモル）及び２．２−ツメチル
−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（Ｍｅｌｄｒｕ
ａｉ酸）（１２ｇ、８４ミリモル）を含有する溶液に加
えた。

室温にて１時間撹拌した後、水（１５０ｘ＆）を加え、
ｐｌを４．５にして沈殿物を生成させ、得られた沈殿物
を戸数し、少量の冷水、さらにエチルエーテルで洗浄し
、最後に減圧下で乾燥させた。収率は１７．５９（２８
％）である。−、ｐ、　１３１−２℃元素分析 Ｃ＋　ｔＨ＋ａｏｓＮＰｓに対して 理論値（％）：　　Ｃ４６，３，Ｈ５，１５；　Ｎ　４
．５実測値（％）：　　Ｃ４６，５，Ｈ５，３、Ｎ　４
．６質量及び’Ｈ−ＮＭＲ分析にて構造を確認した。

（Ｎ−２−（４−）リフルオロアセトアミド）ブチル−
マロニル＝（〇−第３級ブチル１−（Ｄ）−トレオニン
カルボキサミド） Ｎ、Ｏ−ビス−トリメチルシリルアセトアミド（８，１
ｇ、４０ミリモル）を、塩化メチレン（９０峠）にＯ第
３級ブチル−Ｄ−トレオニンカルボキサミド（３，５９
，２０ミリモル）を含有する溶液（９０Ｉ１２）に加え
、撹拌しながら６時間還流させた。溶液を室温まで冷却
した後、上述のステップｌ）で得られた生成物（５，６
ｇ、１８ミリモル）を加え、反応混合物を１８時間撹拌
した。混合物を５％クエン酸水溶液で２．３回洗浄し、
溶媒を留去し、このようにして得られた残渣を水／アセ
トン混合物で粉砕した。無定形固形物（５，２９）が得
られ、１Ｈ−ロＲ及び質量（電子衝撃）分析でその同一
性を確認した。

３　）　［（ｍ）Ｌｙｓ　−Ｄ　−Ｔｈｒ（Ｂｕｔ）Ｎ
ｌｌｔ］　−Ｐｒｏ　−Ａｒｇ−ＯＨ前述のステップで
得られた生成物（２，１ｇ、５ミリモル）を塩化メチレ
ン（３０３１１２）／　ＤＭＰ（４ｘＱ）に溶解し、得
られた溶液を０℃に冷却し、次いでＮ−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０，６７ｇ、５ミリモル
）及びＮ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド（Ｄ
ＣＣ）（１９，５ミリモル）を撹拌混入した。０℃で３
０分間、室温にてさらに３０分間撹拌した後、生成した
Ｎ、　Ｎ’−ジシクロヘキシル尿素（ＯＣＵ）を濾過し
て取り除き、ＨＣＱ　・Ｐｒｏ　−Ａｒｇ（Ｎｏ、）　
−０Ｂｚ（ＭＦｉｄｋｉｎらにより「バイオシミ力・工
・バイオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ、＾ｅｔａ、）　４９８゜ｐｐ、２０３−１１
（１９７７）に記載されたようにして調製したもの）（
２，２ｇ、５ミリモル）とトリエチルアミン（０，’ｌ
ｘＱ、　　５ミリモル）を炉液に加えた。

室温にて１８時間撹拌した後、溶液を減圧下で蒸発させ
、残渣をＡｃ０Ｅｔ（１００ｉ１２）で抽出し、得られ
た溶液を５％ＮａＨＣＯ＝、１０％クエン酸溶液及び水
で連続して洗浄した。

有機相をＮａ５Ｏｉで乾燥させ、溶媒を留去して固形物
（３，８９）を得た。次いでメタノール（５０峠）に溶
解した。パラジウムスポンジ（４ｇ）及びギ酸アンモニ
ウム（０，９５９，１５ミリモル）を、得られた溶液に
加えた。混合物を２時間室温にて静かに撹拌し、次いで
触媒をデカンテーションにて取り除き、メタノールで洗
浄した。メタノール相を合わせ、減圧下にて、約２０ｆ
ｆｉ１２の容量となるまで蒸発させた。

次いで水（３０１１Ｊ）を加え、１ＮＮａＯＨを加えて
Ｉ）Ｈを１２とした。室温に４５分間維持した後、ＩＮ
　ＨＣＱを加えて溶液のｐＨを５に調整し、溶液を減圧
下で一部蒸発させ、１．２回水から凍結乾燥させた。

固定相としてＬｉｃｈｒｏｐｒｅｐ　ＲＰ　−１８カラ
ムを使用し、キャリヤーとして０．１％トリフルオロ酢
酸水溶液を使用し、展開液として５０−Ｍベンジル−ト
リブチル−塩化アンモニウムを使用し、固形残留物の逆
相変位クロマトグラフィーにて所望の生成物を得た。各
フラクションの混合物の成分の力価及び純度を逆相ＨＰ
ＬＣによって算定した。粗固形物（１，２ｙ）の一定量
について操作を行い、純粋な化合物（０，９２９）を得
た。’ＨＮＭＲ及び質量（ＦＡＢ）分析にしてその同一
性を確認した。

４　）　（ＡｃＯＨ）ｙ　＊　Ｈ−（ｇ）Ｔｈｒ−（ｉ
）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−＾ｒｇ−ＯＨ（（（２）−２［Ｎ−
（１−アミノ−２−ヒドロキシプロピル）カルバミル］
−６−アミノ）−ヘキサノイル＝Ｌ−プロリル−し一ア
ルギニンジアセテート） 前述のステップで得られた化合物（０，７ｇ、１ミリモ
ル）をアセトニトリル／水（１／　１）（４０ｉ１２）
の中に溶解させ、窒素雰囲気下、１．１−ビス−トリフ
ルオロアセトキシ−ヨード−ベンゼン（ＴＩＢ）（０，
５６ｇ、１．３ミリモル）を撹拌混入した。６時間撹拌
した後、混合物を減圧下で蒸発させ、得られた残渣を濃
Ｈ（４に懸濁させ、０℃にて８時間維持した。次いで混
合物を減圧下２．３回蒸発させ、水で残渣を抽出し、最
後に凍結乾固させた。得られた残渣をＣｋｌ　−５ｅｐ
ｈａｄｅｘ　Ｃ−２５（２，６ｘ　３０ｃｍ）カラムク
ロマトグラフィーにおいて、０．０５−０．５Ｍ酢酸ア
ンモニウムの線状グラデイエンドにより、流！１５村・
分−１、全容積２１２で溶出して精製した。

純粋なフラクションの凍結乾固により固形物（０，３１
９）を得た。

’ＨＮＭＲ及び質量（ＦＡＢ）分析にて構造を確認した
。

実施例２ （２，２−ジメチル−５−（４−第３級〜ブトキシカル
ボニルアミノ−ブチル）−１，３−ジオキサン−４，６
−ジオン） 実施例１のステップｌ）で得られた化合物［（Ｍ）Ｌｙ
ｓ（ＴＦＡ）］（６，２２９，２０ミリモル）の水（５
０ｉ０溶液を２Ｎ　ＮａＯＨを加えてｐＨ１２，５にし
た。混合物を室温にて３０分間撹拌し、次いで０℃に冷
却した。ジオキサン（７５１ｅ）にジー第３級ブチル−
カーボネート＜８．１２９．４０ミリモル）を含有する
溶液（７５村）を加え、反応混合物を室温まで暖め、ｐ
Ｈ９に維持して２時間撹拌を行った。ジオキサンを減圧
下で留去し、水溶液をｎ−ヘキサンで洗浄した。クエン
酸を加えてｐＨを３．５とし、溶液を塩化メチレンで２
．３回抽出した。有機抽出物を合わせ、ＮａｔＳＯ４で
乾燥させ、蒸発させて、ｓ、ｐ、１１２−３℃を有する
白色の固形物（５，４ｇ、８６％）を得た。構造を’Ｈ
ＮＭＲで確認した。

メタノール（２０１１２）にギ酸アンモニウム（１，３
ｇ、２０ミリモル）を含有する溶液及びパラジウムスボ
７　シ（３，５９）を、メ９　／　−ル（８ＱｘＱ）ｌ
コＺ−Ａｓｐ（Ｂｕ’）−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ
）　−０Ｂｕｔ（ヨーロー）パ特許公開第２８２．８９
１号の実施例１１ステツプ３）に記述されているように
して調製したちの０４．９４９．７ミリモル）を含有す
る溶液に窒素雰囲気下で添加した。

得られた溶液を短時間４０℃に加熱し、室温に１時間維
持した。混合物を沈降させ、シーライト上で濾過し、フ
ィルター上の固形物をメタノールで洗浄した。溶媒を留
去し、得られた残渣をＡｃ０Ｅｔで抽出した。有機溶液
をｌＯ％ＮａｔＣ０３溶液、水で洗浄し、最後にＭｇ５
Ｏ＊で乾燥させた。

溶媒を蒸発させて、油状生成物としてＨ−Ａｓｐ（Ｂｕ
ｔ）−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ（Ｂｕ’）ＯＢｕｔ化合物（３
，７５ｇ、６．６６ミリモル）を得た。

トリーメチル−クロローンラン（０，８２５峠、６．６
６ミリモル）を、テトラヒドロフラン（６０，ｗ１２）
に、このようにして得られた生成物、上述のステップり
に従って調製した化合物（２，：（９，７，３２ミリモ
ル）及びＮ、Ｏ−ビス−トリメチルシリル−アセトアミ
ド（３，３３ｚ＆、　１３．３２ミリモル）を含有する
溶液に添加した。反応混合物を室温にて一夜放置し、つ
いで、溶媒を除去し、残渣を塩化メチレンで抽出した。

溶液をｐＨ４のクエン酸水溶液で洗浄し、Ｍｇ５Ｏ＊で
乾燥させ、小容量とした。Ａｃ０Ｅｔ／ｎ−ヘキサンを
添加して所望の生成物（４，３５ｇ、７６％）を沈殿さ
せた。

’Ｉ（ＮＭＲ及びＰＡＢ−ＭＳ分析にて得られた構造を
確認した。

前述のステップで得られた化合物（１，２３ｇ、１．５
ミリモル）及び）ｌＯＢｔ（０，２０２ｇ、１．５ミリ
モル）を、０℃に冷却したＤｋｌＦ（ｌ　ＩＱ）を含有
する塩化メチレン（３０１１２）に溶解し、得られた溶
液にＤＣＣ（０，３０９９，１，５ミリモル）を添加し
た。０℃で３０分間放置した後、反応混合物を室温とし
、さらに３０分間撹拌した。

次いでＤＣＵを炉去し、Ｎ−（４−メトキシ−２，３，
６トリメチル）ベンゼンスルホニル−Ｄ−アルギニンア
ミド（（０，５８０ｇ、１．５ミリモル）を残った溶液
に添加した。反応混合物を室温にて一夜放置し、次いで
溶媒を除去し、残渣を＾ｃＯＥｔで抽出した。有機溶液
を、５％ＮａＨＣＯ３溶液、１０％クエン酸溶液、及び
水で連続して洗浄した。溶液を１１１ｇ５０４で乾燥し
、溶媒を留去し、残渣をｎ−ヘキサンで粉砕して所望の
生成物（１，６３９，９０％）を得た。

４　）　ＡｃＯＨ・Ｈ−（ｇ）＾ｒｇ　　（Ｒ，５Ｘａ
）Ｌｙｓ−＾５ｐ−Ｖａｌｙｒ−ＯＨ 前述のステップで得られた化合物（１，１８７ｇ、ｌミ
リモル）をＨ，Ｏ／ＣＨ，ＣＮ／ＤｋｌＦ（３５／６０
１５）（２０ｍ１２）中に溶解させ、窒素雰囲気下に溶
液を維持しながら、ＴＩＢ（０，４７３９，１，１ミリ
モル）を添加した。混合物を室温にて一夜放置し、。次
いで蒸発させた。残渣をエチルエーテルにて抽出し、溶
液を再度蒸発させた。この最後の処理を３回繰り返し、
次いで、０℃に冷却したトリフルオロ酢酸／トリフルオ
ロメタンスルホン酸／エタンジチオール（８９／　１／
　１ｏ）混合物（６０３１７２）を添加した。０°Ｃに
て１０分後、トリエチルアミン（ｏ、９ｘ（りを加え、
温度を４０’Ｃにし、混合物を窒素雰囲気下蒸発させた
。残渣を水（１００１１Ｑ）で抽出し、エチルエーテル
（１００ｚＮ）で洗浄した。

有機相を水（５０ｉＮ）で洗浄し、水相を合わせ、エチ
ルエーテル（５０１ずつ、３回）で再度洗浄し、凍結乾
燥させた。得られた生成物のイオン交換クロマトグラフ
ィーによる精製を、ヨーロッパ特許公開第２８２，８９
１号の実施例１、ステップ１１に記述の如くして実施し
た。

（２，２ジメチル−５−（４−第３級ブトキシ）ベンジ
ル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン）Ｎ、Ｎ−ジ
メチルホルムアミド第３級ブチルアセタール（４８峠、
２００ミリモル）を、８０℃、窒素雰囲気下に維持した
ベンゼン（５０１Ｒ）に４−ヒドロキシベンズアルデヒ
ド（８，０９，５０ミリモル）を含有する溶液に添加し
た（０．１ｌ（２／分）。次いで、混合物を室温に冷却
し、減圧上蒸発させた。残渣を塩化メチレンに溶解させ
、５％ＮａＨＣＯ，溶液で洗浄し、次いで水で洗浄し、
Ｎａ！Ｓ０４で乾燥させ、蒸発させて暗色の油状物を得
た。この油状物を、シリカゲルカラムにおいて、Ａｃ０
Ｅｔ／ｎ−ヘキサン２／　８（ｖ／　ｖ）によって溶出
して精製した。精製された生成物（５９，２８ミリモル
）を、ＤｋｌＦ（３０ｉｆｆ）にＭｅｌｄｒｕｍ酸Ｃ４
，４６９，３１ミリモル）及びピペリジ：ｚ（０，６ｘ
Ｑ、　　６ミリモル）を含有する溶液に添加した。室温
にて３時間攪拌した後、溶媒を減圧下で留去し、残渣を
メタノール（５ＧＮｏに溶解した。固状ＮａＢＩｉ、　
（１、１４９，３０ミリモル）を、得られた溶液に１５
分間で徐々に添加し、水（１００，ｗ□及ヒｌｌｌ　Ｈ
Ｃｇを添加しテｐＨ３とすることによって反応を停止さ
せた。得られた沈殿物を濾過して回収し、冷水で洗浄し
、減圧上乾燥させ、ヘキサンにて粉砕してｔｐ、７５−
７°Ｃを有する（ｋｌ）Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）（−数式（Ｖ
Ｉｂ）におけるＰｏが第３級ブチル基であるｋｌｅｌｄ
ｒｕ−酸誘導体）６．１２９（４０％）を得た。

’　ＨＮＭＲ分析にて得られた構造を確認した。

上記ステップで得られた化合物を、「ケミカル・アブス
トラクツＪ　１０３．１７８６１６ｐに報告されたスキ
ームに従い、ただしフラグメントＨ−Ｇｌｙ［Ｚ　−Ｄ
　−Ａｌａ　−（ｇ）Ｐｈｅ］のＮ−トリメチルシリル
誘導体を上記ステップ１）で得られた化合物と縮合させ
る点で変更を加えて、標記の化合物の合成に使用した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼ で表されるマロニル基を結合するレトロ逆転ペプチドを
   製造するためのペプチド合成法において、一般式（VI） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ′は、必要により官能基が適当に保護された
   側鎖Ｒである）で表される５−置換−２，２−ジメチル
   −１，３−ジオキサン−４，６−ジオンを、末端カルボ
   キシ基及び側鎖官能基が必要により適当に保護されてお
   りかつ反応性アミノ基がトリアルキルシリル化されてい
   るアミノ酸、アミノ酸アミド、ペプチドフラグメント又
   は偽似ペプチドフラグメントと縮合させることによって
   前記マロニル残渣を導入することを特徴とする、ペプチ
   ド合成法。 ２　請求項１記載の方法において、末端カルボニル基及
   び側鎖官能基が必要により適当に保護されたアミノ酸、
   アミノ酸アミド、ペプチドフラグメント又は偽似ペプチ
   ドフラグメントを、任意に一般式（VI）で表される化合
   物の存在下、過剰のトリアルキルシリル化剤と接触させ
   ることにより、Ｎ−トリアルキルシリル誘導体を「その
   場」で調製する、ペプチド合成法。 ３　請求項２記載の方法において、前記トリアルキルシ
   リル化剤を、活性化されるアミノ酸、アミノ酸アミド、
   ペプチドフラグメント又は偽似ペプチドフラグメントの
   少なくとも２倍のモル量で使用する、ペプチド合成法。 ４　請求項２記載の方法において、前記トリアルキルシ
   リル化剤が、トリアルキルシリルハロゲン化物及びビス
   −トリ−アルキルシリルアセトアミドの中から選ばれる
   ものである、ペプチド合成法。 ５　請求項１記載の方法において、反応性アミノ基がト
   リメチル又はトリエチルシリル化される、ペプチド合成
   法。 ６　請求項１記載の方法において、前記縮合反応を極性
   、非プロトン性の有機溶媒の存在下で行う、ペプチド合
   成法。 ７　請求項６記載の方法において、前記縮合反応を０℃
   ないし反応混合物の還流温度の範囲内の温度で行う、ペ
   プチド合成法。 ８　式 （ｇ）Ｔｈｒ−（Ｒ，Ｓ）（ｍ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒ
   ｇ−ＯＨで表されるレトロ逆転タフトシン類似体を製造
   するためのペプチド合成法において、一般式（VIａ） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｐはリシンアミノ官能基の保護基である）で表
   される５−置換−２，２−ジメチル−１，３−ジオキサ
   ン−４，６−ジオンを使用して、式（IIIａ）▲数式、
   化学式、表等があります▼ のマロニル残基の導入を行うことを特徴とする、ペプチ
   ド合成法。 ９　請求項８記載の方法において、さらに、ａ）一般式
   （IVａ）で表される化合物を（Ｄ）−トレオニンアミド
   （ヒドロキシ基は保護基Ｐ＾Ｔによって適当に保護され
   る）のＮ＾α−トリアルキルシリル誘導体と縮合させる
   工程、ｂ）温和な酸性条件下、得られた生成物を加水分
   解させて、一般式（VIII）▲数式、化学式、表等があり
   ます▼ （式中、Ｐ＾Ｔ及びＰ＾Ｌは前記と同意義である）で表
   されるフラグメントを生成する工程、ｃ）この一般式（
   VIII）のフラグメントを一般式（IX） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｐ＾Ｃはカルボキシ保護基であり、Ｐ＾Ｇはア
   ルギニングアニジノ保護基である）で表されるジペプチ
   ドフラグメントと縮合させる工程、ｄ）ＴＩＢによる処
   理を介して、末端トレオニンアミド基をアミノ基に変化
   させる工程、及びｅ）すべての保護基を除去する工程を
   包含する、ペプチド合成法。 １０　一般式（VI） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ′は、官能基が適当に保護されたリシン及び
   チロシンの中から選ばれるアミノ酸の側鎖である）で表
   される、５−置換−２，２−ジメチル−１，３−ジオキ
   サン−４，６−ジオン。 １１　請求項１０記載のものにおいて、前記Ｒ′が、ア
   ミノ基がトリフルオロアセチル基、第３級ブトキシカル
   ボニル基、第３級アミロキシカルボニル基及び任意にニ
   トロ又はハロ置換されたベンジルオキシカルボニル基の
   中から選ばれる基で保護されたリシンの側鎖である、５
   −置換−２，２，−ジメチル−１，３−ジオキサン−４
   ，６−ジオン。 １２　請求項１０記載のものにおいて、前記Ｒ′が、ヒ
   ドロキシ基が第３級ブチル基、第３級アミル基、ベンジ
   ル基、ハロ又はニトロ置換ベンジル基及びトリフルオロ
   アセチル基の中から選ばれる基によって保護されたトリ
   プシンの側鎖である、５−置換−２，２，−ジメチル−
   １，３−ジオキサン−４，６−ジオン。