JPH02223595A - 血小板結合阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、新規な血小板結合阻害剤に関する。また、こ
れを用いてフィブリノーゲンの結合、血小板凝集、糖蛋
白質第１Ｊｂ−１１１ａ複合体の結合、血栓症、および
癌の転移を阻害する方法にも関する。更に、これに対す
る抗体、および、これを暗号化したヌクレオヂド配列か
ら成る核酸フラグメントにも関する。

［従来の技術］ フィブリノーゲン、フィブロネクチン、フオンビルプラ
ント因子、ビトロネクチン（ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ）
など、多くの粘着性蛍白質には、粘着受容体に対する認
識部位として機能するアミノ酸配列が含まれている。こ
れらの蛋白質内部のアミノ酸配列は、各種哺乳類細胞表
面の構造関連受容体によって認識され、これらはインテ
グリン（ｉｎｔｅｇｒｉｎ）、あるいは細胞粘着（ｃｙ
ｔｏａｄｈｅｓｉｏｎ）という用語でよばれている［ハ
インズ（ｔ（ｙｎｅｓ）　　：セル（Ｃｅｌｌ）　、第
４８巻（１，９８７年）　５４９−５５４ベーシ：ルオ
スラーティ（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ）ら：サイエンス（Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ）　、第２３８巻（１９８７年）４９１〜
４９７ページＪ。

インテダリンの部類の中で特性の良く知られている一員
は、血小板の脱糖蛋白質第１１ｂ−１１１ａ複合体（Ｇ
ＰＩＩｂ−Ｉｌｌａ）である［フィリップス（Ｐｈｉｌ
ｌｉｐｓ）ら；ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）　、第７１巻（
１９８８年）　８３１−８４３ベージ］。血小板の活性
化に際し、ＧＰ　ＴＩ　ｂ−Ｉｌｌ　ａはフィブリノー
ゲンと結合できるようになるが、これが血小板凝集に必
要な過程なのである［ベネッ）　（Ｂｅｎｎｅｔｔ）ら
；ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーシ
ョン（Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、）　、第６４
巻（１９７９年）　１，３９３−１．４００ベージ；マ
ルゲリー（Ｍａｒｇｕｅｒｉｅ）ら、ジャーナル−オブ
＋バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　
Ｃｈｅｍ、）　、第２５４巻（１，９７９年）５．３５
７〜５．３６３ベージ］。合成ペプチドに関する研究に
よれば、フィブリノーゲンＡａ鎖の第５７２−５７５番
目に位置するＡｒｇ−Ｇ　１ｙ−Ａｓｐ−３ｅｒなるア
ミノ酸配列が、ＧＰＴＴｂ−１１１ａとこの蛋白質との
相互作用に主要な役割を果たしているように見えるが、
同時にフィブリノーゲンの他の領域も関与している可能
性があるＵガルトナー（Ｇａｒｔｎｅｒ）ら゛ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、第２６０巻
（１，９８５年＞　１１，８９１〜１．１，８９４ベー
ジ；ギンスバーグ（Ｇｉｎｓｂｅｒｇ）ら：ジャーナル
・オブ　、（イオロジカル・ケミストリー、第２６０巻
（１，９８５年）３，９３１〜３，９３６ベージ；ヘイ
バースティック（ｌｌａｖｅｒｓｔｉｃｋ）らニブラッ
ド、第６６巻（１９８５年）　９４６−９５２ページ、
パイテラ（Ｐｙｔｅｌａ）ら：サイエンス、第２３１巻
（１９８６年）　１．、１５９−１．１６２ベージ；ク
ロッエビアク（Ｋｌｏｃｚｅｗｉａｋ）らニスロンボー
シス・リサーチ（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　Ｒｅｓ、　）
、第２９巻（１９８３年）２４９〜２５５ベージ：クロ
ッエビアクら：バイオヶミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍ、
　）、第２３巻（１９８４年）　１，７６７〜１，７７
４ページ］。しかしながら、フィブリノーゲンとＧｆ’
ｌＩｂ−１１１ａとの間の分子的相互作用の詳細な細目
は、現在のところ、未知である。

Ａｒｇ−Ｇ　１ｙ−Ａｓｐなるトリペプチド配列も、フ
ィブロネクチンなる粘着性蛋白質、フオンビルフ゛ラン
ト因子、およびビトロネクチン中に同定されている［ハ
インズ：セル、第４８巻（１９８７年）５４９〜５５４
ページ；ルオスラーティら°サイエンス、第２３８巻（
１９８７年）４９１〜４９７ページコ。

フィブロネクチンのＡｒｇ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌな
る配列を含む類似の領域は、この蛍白質の黒色腫細胞と
の結合に関与する［ハンフリーズ（Ｈｕｎｐｌｙｉｅｓ
）ら：ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー（Ｊ、　
Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏ＋、）　、第１０３巻（１９８６年）
２，６３７〜２．６４７ベージ］。更に、活性化された
血小板の表面でＣＰＩｌ　ｂ−１１１ａに結合できるフ
オンピルプラント因子には、その長い（５０残基よりも
著しく大きい）アミノ酸配列中に、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ−Ｓｅｒの配列に加えてΔｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−
Ａｌａなる配列が含まれる［ティクーニ（Ｔｉｔａｎｉ
）ら：バイオケミストリー、第２５巻（１９８６年）　
３．１．７１〜３．１８４ベージコ。

更に、主要組織適合抗原を構成する、５０アミノ酸残基
を大きく超える長さのペプチドである長鎖ペプチド中に
は、Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−３ｅｒおよびＡｒｇ−Ｔ
ｙｒ−Ａｓｐ−３ｅｒなる配列が見出されている［オー
フレイ　（Ａｕｆｆｒａｙ）ら：ヒューマン・イミュノ
ロジー（Ｈｕｍａｎ　ｒｍｍｕｎｏｌ、　）　、第１５
巻（１９７９年）３８１〜３９０ベージコ。

Ａｒｇ−Ｇ　１ｙ−Ａｓｐなるアミノ酸配列を含むペプ
チドに関しては、多数の適用例が知られている。例えば
、血小板とのフィブリノーゲンの結合が、Ａｒｇ−０１
ｙ−Ａｓｐ含有ペプチドによって阻害されることは周知
である。

フィブリノーゲンと同様に、活性化血小板表面でＧＰＩ
Ｉｂ−１１１ａと結合するらしいマウスＩｇＭ−にモノ
クローナル抗体であるＰＡＣＩも、やはりこのようなペ
プチドによって阻害される。Ａｒｇ−〇１ｙ−Ａｓｐ−
Ｓｅｒなるテトラペプチドを用いた場合、フィブリノー
ゲンおよびＰＡＣＩの阻害は約１０〜２０ｐＭという見
かけのに、で起こる［シャッティルら：ジャーナル・オ
ブ・バイオロジカル・ケミストリー、第２６０巻（１９
８５年）１１，１０７〜１１．１１４ページ；ベネット
ら：ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ、
第　巻（１９８８年）　　　　　　ベージ；シャッティ
ルら、ブラッド、第６８巻（１９８６年）　１，２２４
〜１，２３１ベージ］。更に、米国特許第４、６８３．
２９１号明細書には、一般的には細胞接着を、また特定
的には血小板の結合を阻害するに際しての、Ａｒｇ−Ｇ
ａｙ−Ａｓｐ配列含有ベプヂドの有用性が開示されてい
る。そのようなペプチドが、血栓形成を抑止するのに役
立つとも報告されている。

［発明が解決しようとする課題］ フィブリノーゲンと血小板との結合、血小板同士の結合
、または血栓の形成を阻害するには、この重要な目的に
合致する別の、またはより優れたペプチドが必要である
。本発明は、これら、およびその他の重大な必要性に応
えることを志向するものである。

［課題を解決するための手段］ 本発明は、一般式 ％式％（） （式中、Ｘ＋およびＸ２は、独立に１〜約５０のアミノ
酸残基を意味し、ただしＸｌおよびＸ２のアミノ酸残基
の合計した総数は約５０以下であるものとし、ｍおよび
ｎは、独立に０または１であり、Ｒ１は、保護され、ま
たは保護されていない末端アミノ基を意味し、Ｒ２は、
保護され、または保護されていない末端カルボキシル基
を意味する） で示される化合物、およびその生理的に許容可能な塩を
提供する。

本発明の対象としては、一般式 ％式％） （式中、Ｘ＋、およびＸ２は、独立に１あるいはそれ以
上のアミノ酸残基を意味し、Ｙは、セリンあるいはアラ
ニン残基を含まない１あるいはそれ以上のアミノ酸残基
を意味し、ｍ、　ｎ、および０は、独立に０または１、
ただしｍ＝１のときは必ず０＝１であるものとし、Ｒ１
は、保護され、または保護されていない末端アミン基を
意味し、Ｒ２は、保護され、または保護されていない末
端カルボキシル基を意味する） で示され、フィブリノーゲンの結合、血小板凝集、糖蛋
白質第ｒＩｂ−１１１ａ複合体の結合、血栓症、または
癌の転移を阻害する化合物、およびその生理的に許容可
能な塩も含まれる。

また、本発明は、上記化合物の１種類またはそれ以上か
ら成る組成物、および、該化合物または組成物を用いて
フィブリノーゲンの結合、血小板凝集、または糖蛋白質
第１Ｉｂ−１１１ａ複合体の結合を阻害する方法をも提
供する。与件の化合物または組成物は、血栓症、または
癌の転移など、特定の生理的状態の治療にも有効であり
、本発明は、このような用途をも志向する。

更に、本発明の範囲には、上記の化合物、および、該化
合物を暗号化したヌクレオチド配列を含む核酸フラグメ
ントに対するモノクローナル抗体、およびポリクローナ
ル抗体も含まれる。

更にまた、本発明は、ＰＡＣＩなるモノクローナル抗体
のμ重鎖可変領域のアミノ酸配列に対応するアミノ酸を
含むペプチドも、該配列が組み込まれた抗体とともに包
含する。本発明はまた、ＰＡＣＩなるモノクロ−ナル抗
体のμ重鎖可変領域のアミノ酸配列に対応するアミノ酸
と、ＰＡＣＩなるモノクローナル抗体のに軽鎖可変領域
のアミノ酸配列に対応するアミノ酸とを含むペプチドを
も、該配列が組み込まれた抗体とともに含む。本発明が
志向する対象を最も特定的に示せば、それはＰＡＣＩな
るモノクローナル抗体である。

本発明は、アミノ末端からカルボシキル末端へとアルギ
ニン−チロシン−アスパラギン酸の順に結合したトリペ
プチド配列を含む、新規かつ非常に活性の強い化合物の
発見に関連する。　　本発明は、マウスＰＡＣＩモノク
ローナル免疫グロブリンの重鎮の高頻度可変領域の１つ
にアルギニン−チロシン−アスパラギン酸なる配列が存
在し、この位置には、血小板の膜フィブリノーゲン受容
体、すなわち糖螢白質第１Ｉ　ｂ−１１１ａ複合体との
該モノクローナル抗体の結合における強力な介在物質が
あるという、驚くべき発見に由来する。

更に特定すれば、本発明は、一般式 ％式％ で示されるペプチド化合物、およびその生理的に許容可
能な塩を包含する。更に、本発明は、一般式 ％式％） で示されるペプチド化合物、およびその生理的に許容可
能な塩をも包含する。これらの化合物は、その阻害能力
、すなわち、下記の事項を抑止あるいは防止するその能
力が特徴的である。その事項とは、粘着性蛋白質である
フィブリノーゲンの血小板との結合（本明細書中では「
血小板の結合」の阻害と称する）：血小板同士の結合（
本明細書中では「血小板凝集」の阻害と称する）；血小
板の膜に見出される糖蛋白質第１１　ｂ−ＩＩＩ　ａ複
合体との化合物あるいは物質、特に蛋白質の結合（本明
細書中では［糖蛋白質第Ｔｒｂ−１１１ａ複合体の結合
」の阻害と称する）などである。　この化合物はまた、
血液凝固物、すなわち血栓の形成を抑止あるいは防止し
く本明細書中では「血栓症」の阻害と称する）、または
、癌細胞の体内への拡散を抑止あるいは防止する（本明
細書中では「癌の転移」の阻害と称する）のに役立つ。

これらの化合物は、上記に関連する作用性を選択的に発
揮するが故に、治療薬または診断薬として特別に有用で
ある。

本明細書を通じての用語法として、アミノ酸残基は、下
記の略記によって示される。

アラニン　　　　　　　　−Ａｌａ アルギニン　　　　　　　＝　　Ａｒｇアスパラギン　
　　　　　＝　　Ａｓｉアスパラギン酸　　　　　＝’
　Ａｓｐシスティン　　　　　　　＝　　Ｃｙｓグルタ
ミン酸　　　　　　　＝　　Ｇｌｕグルタミン　　　　
　　　＝　　Ｇｉｎダリシン　　　　　　　　＝　　ｃ
ｒｙヒスデシン　　　　　　　−ＩＨｓ インロイシン　　　　　　−１１ｅ ロイシン　　　　　　　　＝　　Ｌｅｕノシン　　　　
　　　　　＝　Ｌｙｓ メチオニン　　　　　　　＝　Ｍｅｔ フェニルアラニン　　　　＝　　Ｐｈｅプロリン　　　
　　　　　　＝　　Ｐｒ。

セリン　　　　　　　＝　Ｓｅｒ トレオニン　　　　　　　＝　Ｔｈｒ トリプトファン　　　　　＝　Ｔｒｐ チロシン　　　　　　　　＝　　Ｔｙｒバリン　　　　
　　　＝　　Ｖａｌ 最大の活性を得るには、与件の発明の核心をなすトリペ
プチド領域であるＡｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐから成るアミ
ノ酸残基は、Ｌ型装置でなければならない。与件の発明
の残余のアミノ酸残基は、Ｄ型ある１１はＬ型のｌ、ｚ
ずれの配置をもとることができる。

前述のとおり、上記（ｒ）式におけるＸｌおよびＸ２、
また、上記（Ｉ＋）式におけるＸｌ、Ｘ２、およびＹは
、それぞれ独立に１またはそれ以上のアミノ酸残基から
成る。ｘ’、ｘ２、またはＹのアミノ酸残基は、その時
々によって、それらの間で、すなわち互いに分岐し、環
状となり、あるいは直鎖形態をとることができるが、直
鎖の結合が好適である。技術の習熟者であれば理解する
はずであるが、側鎖、あるいは環状の形態は、アミン基
あるいはカルボキシル基を余分に含むアミノ酸側鎖基に
よるペプチド結合の形成によってこれを生成できる。そ
のような側鎖基を含むアミノ酸は、例えば、グルタミン
酸（カルボキシル基）、アスパラギン酸（カルボキシル
基）、リジン（アミノ基）などである。システィンのよ
、うな、硫黄を含む側鎖基を有するアミノ酸残基同士の
間での共有結合によるジスルフィド結合の形成によって
も、側鎖、あるいは環状の鎖を生成できる。

前述の通り、（Ｉ）式においては、ｍおよびｎは、独立
に０または１であることができる。すなわち、ｍおよび
ｎは、ともにＯまたは１であることもできるし、ｎ＝１
の場合はｍ＝ｏ、あるいはｎ＝０の場合はｍ＝１である
こともできる。ｍおよびｎがともに０の場合は、与件の
発明は、アミン末端からカルボキシル末端までこの順で
結合した、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐなる配列のトリペプ
チドから成ることになる。同様に、（ＴＩ）式において
は、ｍ、ｎ、および０がすべて０の場合に、この発明は
やはり、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐなるトリペプチドを志
向することになる。

Ｄ）式、あるいは（Ｉ＋）式のＲ１なる置換基は、保護
され、あるいは保護されていない末端アミン基（アミン
末端）のいずれでも良い。

同様に、Ｒ２は、保護され、あるいは保護されていない
末端カルボキシル基（カルボキシル末端）のいずれでも
良い。

本明細書中の用語法として、　「保護された」末端アミ
ノ基とは、ペプチド合成の際に慣用的に用いられる各種
アミノ末端保護基のいずれかと結合した末端アミン基を
意味する。適切な基の例としては、アシル保護基（例え
ば、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、トリフルオロア
セチル、スクシニル、およびメトキシスクシニル）、芳
香族ウレタン保護基（例えば、ベンジルオキシカルボニ
ル）、および脂肪族ウレタン保護基（例えば、ｔ−ブト
キシカルボニル、すなわちアダマンチルオキシカルボニ
ル）があげられる。クロス（Ｇｒｏｓｓ）およびミーン
ホーフ７−　（Ｍｉｅｎｈｏｆｅｒ）編、［ペプチド（
Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ）」、第３巻３〜８８ページ［
ニューヨーク所在アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍ
ｉｃＰｒｅｓｓ）　１９８１年発行］には、適切な末端
アミン保護基が多数記載されている。

好適なアミン末端保護基を下記に示す。側鎖アミン基を
有するｘ’、Ｘ２、およびＹ置換体のアミノ酸残基、例
えばリシンあるいはアルギンは、選択的に、側鎖に結合
した適切なアミン末端保護基となることができる。

（ＣＨ３）３ＣＯＣ− ＣＨ３０ＣＣＨ２ＣＨ２Ｃ− ＨＯ□Ｃ（ＣＨ２）２Ｃ 本明細書中の用語法として、「保護された」末端カルボ
キシル基とは、各種カルボキシル末端保護基のいずれか
と結合した末端カルボキシル基を意味する。技術の習熟
者には容易に明らかな通り、適切な基としては、エステ
ルまたはエーテル結合で末端カルボキシル基と結合した
、ｔ−ブヂル、ベンジル、その他許容可能な基がある。

酸性の、あるいはヒドロキシル基の側鎖を有するＸｌ、
Ｘ２、およびＹＷ置換体アミノ酸残基も同様にして保護
することができる。

本発明はまた、式（Ｔ）および式（旧の化合物の生理的
に許容可能な塩もその意図としている。これらの塩とし
ては、酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、酢酸、ト
リフルオロ酢酸、クエン酸、コノ＼り酸、ベンゼンスル
ホン酸などの塩、あるいは他の適切な酸付加塩があげら
れる。

式（１）の範囲に入れられる好適な化合物の部類には、
・ｍ＝ｏかつ１１＝０である化合物 ・ＸｌおよびＸ２が直鎖形である化合物・Ｘｌおよびｘ
２のアミノ酸残基の総数が、合計して約４０未満である
化合物 ・Ｘｌおよびｘ２のアミノ酸残基の総数が、合計して約
２５未満である化合物 ・ＸｌおよびＸ２のアミノ酸残基の総数が、合計して約
１０未満である化合物 ・Ｘｌが、Ａ　Ｉａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−３ｅｒ−Ｐｒｏ
−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒで示され、Ｘ２が、Ｇｔｙ−
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｍ
ｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒで示され、ｍ＝１かつｎ＝１であ
る化合物 ・Ｘｌが、Ａ　Ｉａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−３ｅｒ−Ｐｒｏ
−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒで示され、Ｘ２が、Ｇｌｙ−
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｍ
ｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒで示され、ｍ＝１かツｎ１である
化合物 ・　Ｘｌが、　ＧＩｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｙ
ｓ−ＧＩｎ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−ＧＩｎ−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｇ　］　］ｎ−３
ｅｒ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｔ　］　］ｅ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ
−Ｔｈｒ−ＶａＩ　−３ｅｒ−Ｇ　１ｙ−Ｐｈｅ−３ｅ
ｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｖ
ａ　ｌ　−Ｈｉ　５−Ｔｒｐ−Ｖａ　Ｉ　−Ａｒｇ−Ｌ
ｅｕ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｌｙｓ−Ｇ　Ｉ　
ｙ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉ　ｙ
−Ｖａ　Ｉ−１１ｅ−Ｔｒｐ−３ｅｒ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｇ
　Ｉ　ｙ−３ｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−
Ａ　Ｉａ−Ａ　Ｉａ−Ｐｈｅ−１１ｅ−３ｅｒ−Ａｒｇ
−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｔ　Ｉ　ｅ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｓ
ｐ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−３ｅｒ−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｖ
ａ　Ｉ　−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−１−ｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ
−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ａ　Ｉ　ａ−Ａｓｎ−
Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｇ　Ｉ　ｙ−１１ｅ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ
−Ｃｙｓ−Ａ　Ｉａ−ＡｒｇＡｒｇ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−
３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒで示され、Ｘ２が、Ｇ　Ｉ　ｙ
−Ａ　Ｉａ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａ
　Ｉ　ａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｇ　Ｉｙ
−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｔｈｒ−３ｅｒ−Ｖａ　１
−ＴｈｒＶａｌ−３ｅｒ−３ｅｒで示され、ｍ＝１、か
つｎ＝１である化合物・Ｘｌが、Ｇ　Ｉｎ−Ｖａ　Ｉ　
−〇　Ｉ　ｎ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ　Ｉ　ｎ−５ｅｒ−
Ｇ　］　］ｙ−Ｐｒｏ−Ｇ］　］ｙ−Ｌｅｕ−ＶａＩ　
−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｇ　Ｉｎ−３ｅｒ−Ｌ
ｅｕ−３ｅｒ−Ｔ　Ｉｅ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｖ
ａ　１−３ｅｒ−Ｇ　１ｙ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−
Ｔｈｒ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇ　１　ｙ−Ｖａ　Ｉ　−Ｈ
１ｓ−Ｔｒｐ−Ｖａ　Ｉ　−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−
Ｐｒｏ−Ｇ　ｌ　ｙ（ｙｓ−０１ｙ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉ　
ｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｙ−Ｙａ　１−　Ｉ　１ｅ
−Ｔｒｐ−３ｅｒ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｇ　Ｉ　ｙ−３ｅｒ−
Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ａ　Ｉａ−Ａ　１ａ
−Ｐｈｅ−Ｉ　Ｉｅ−３ｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−３ｅｒ
−１１ｅ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−３ｅｒ−
Ｌｙｓ−３ｅｒ−Ｇ　］　ｎ−Ｖａ　Ｉ　−Ｐｈｅ−Ｐ
ｈｅ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−ＧＩ
ｎ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−ＧＩｙ−１１ｅ
−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−ＡＩａ−ＡｒｇＡｒｇ−３
ｅｒ−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒで示され、Ｘ２
が、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ
−Ａ　Ｉａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｇ　１
　ｙ−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｔｈｒ−３ｅｒ−Ｖａ
　１−ＴｈｒＶａｌ−３ｅｒ−３ｅｒで示され、ｍ＝１
、かつ＋１＝１である化合物・Ｒ１が、保護されていな
い末端アミノ基であり、Ｒ２が、保護されていない末端
カルボキシル基である化合物が含まれる。

式（１１）の範囲に入れられる化合物の好適な部類には
、・ｍ−０、ｎ−０、かつ０−０である化合物・ｘ’、
ｘ’、およびＹが直鎖形である化合物・Ｘｌ、Ｘ２、お
よびＹのアミノ酸残基の総数が、合計して約２５０未渦
である化合物 ・Ｘｌ、Ｘ２、およびＹのアミノ酸残基の総数が、合計
して約２００未渦である化合物 ・ｘｌ、Ｘ２、およびＹのアミノ酸残基の総数が、合計
して約１００未満である化合物 ・Ｘｌ、Ｘ２、およびＹのアミノ酸残基の総数が、合計
して約５０未満である化合物 ・ｘｌ、Ｘ２、およびＹのアミノ酸残基の総数が、合計
して約４０未満である化合物 ・Ｘｌ、Ｘ２、およびＹのアミノ酸残基の総数が、合計
して約２５未満である化合物 ・Ｘｌ、ｘ２、およびＹのアミノ酸残基の総数が、合計
して約１０未満である化合物 ・Ｘｌが、Ａｌａ−ん−ｇ−Ａｒｇ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−
３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒで示され、Ｘ２が、Ｇｌｙ−Ａ
ｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｍｅ
ｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒで示され、ｍ＝１、Ｉ］＝１、かつ
０＝０である化合物 ・Ｘｌが、Ａ　Ｉａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−３ｅｒ−Ｐｒｏ
−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒで示され、Ｘ２が、ｃ＋ｙ−
Ａｌａ−Ｇ　Ｉｙ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−
Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒで示され、ｍ＝１、ｎｌ、かつ
Ｏ＝　Ｏである化合物 ・ｘ’が、Ｇ　１ｎ−Ｖａ　Ｉ　−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｌｅｕ
−Ｌｙｓ−Ｇ　Ｉｎ−３ｅｒ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｐｒｏ−Ｇ
　Ｉ　ｙ−Ｌｅｕ−Ｖａ　Ｉ　−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｐｒｏ−
３ｅｒ−Ｇ　Ｉ　ｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−１１ｅ
−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｖａ　Ｉ　−３ｅｒ−Ｇ　
Ｉ　ｙ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−３ｅｒ−Ｔ
ｙｒ−ＧＩｙ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ａｒ
ｇ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｙ−Ｌｙｓ−０１
ｙ−Ｌｅｕ−Ｇ　１　ｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｙ−
Ｖａ　１−　Ｉ　Ｉ　ｅ−Ｔｒｐ−３ｅｒ−Ｇ　Ｉ　ｙ
−Ｇ　Ｉ　ｙ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｓ
ｎ−Ａ　１ａ−Ａ　Ｉａ、−Ｐｈｅ−Ｔ　ｌ　ｅ−３ｅ
ｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｔ　Ｉ　ｅ−３ｅｒ−Ｌ
ｙｓ−Ａｓ　ｐ−Ａｓ　ｎ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−３ｅｒ−
Ｇ　１　ｎ−Ｖａ　ｌ　−Ｐ　ｈｅ−Ｐｈ　ｅ−Ｌｙｓ
−Ｍｅ　ｔ−Ａｓ　ｎ　−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉ　ｎ
−Ａ　Ｉａ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｇ　Ｉｙ−１１
ｅ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａ　Ｉａ−ＡｒｇＡｒｇ
−３ｅｒ−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒで示され、
Ｘ２が、Ｇ　Ｉ　ｙ−Ａ　Ｉａ−Ｇ　１ｙ−Ｐｒｏ−Ｔ
ｙｒ−Ｔｙｒ−Ａ　ｌａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｔ
ｒｐ−Ｇ　Ｉｙ−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｔｈｒ−３
ｅｒ−Ｖａ　Ｉ　−ＴｈｒＶａ　１−３ｅｒ−３ｅｒで
示され、ｍ＝＝１、ｎ＝１、かつｏ−Ｏである化合物 ・Ｘが、Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｖａ　Ｉ　−Ｇ　］　］ｎ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｙｓ−ＧＩｎ−３ｅｒ−Ｇ　Ｉｙ−Ｐｒｏ−Ｇ　
］　］ｙ−Ｌｅｕ−ＶａＩ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｒｏ−３ｅ
ｒ−Ｇ　１ｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｔ　ｌ　ｅ−
Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｖａ　ｌ−３ｅｒ−Ｇ　Ｉ　
ｙ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−３ｅｒ−Ｔｙｒ
−Ｇ　］　ｙ−Ｖａ　１−Ｈｉ　５−Ｔｒｐ−Ｖａ　］
　−］Ａｒｇ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−ＰｒｏＧ　］　］ｙ−
１．．ｙｓ−ＧＩｙ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅ
ｕ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｖａ　Ｉ−Ｔ　Ｉ　ｅ−Ｔｒｐ−３ｅ
ｒ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｇ　Ｉ　ｙＳｅｒ−Ｔ１１ｒ−Ａｓｐ
−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ａ　Ｉａ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｐｈｅ−Ｔ
　ｌ　ｅ−３ｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−１１ｅ−
３ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−３
ｅｒ−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｖａ　］　−］Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｉ
−ｙｓ−ＭｅｔＡｓｎ−３ｅｒ−１，、ｅｕ−Ｇｌｎ−
Δｌ　ａ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｇ　Ｉｙ−１１ｅ
−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａ　Ｉ　ａ−ＡｒｇＡｒｇ
−３ｅｒ−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒで示され、
Ｘ２が、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔ
ｙｒ−Ａ　］　］ａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ
Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｔｈｒ−３ｅｒ
−Ｖａ　Ｉ　−ＴｈｒＶａｌ−３ｅｒ−３ｅｒで示され
、ｍ＝１、ｎ＝１、かつＯ−０である化合物 ・Ｒ１が、保護されていない末端アミン基であり、Ｒ”
が、保護されていない末端カルボキシル基である化合物
前述の化合物と明らかに同等な化合物には、より一般的
でない、あるいは修飾されたアミノ酸、例えば、ヒドロ
キシプロリン、ヒドロキシリシン、チロキシン、ノルロ
イシン、ピログルタミン酸、あるいはその他、本発明の
ペプチドに組み込み可能な誘導体が含まれる。

側鎖を有する、あるいは環状の、あるいは直鎖の、式（
ｒ）および式（旧のペプチドは、慣用の多数の調製およ
び回収方法のいずれを用いてもこれを合成することがで
き、それは技術の習熟者には容易に明らかであると思わ
れる。

直鎖であって、特に比較的低分子の、本発明のペプチド
の好適な合成経路は固相法である。この方法は、当業界
においては広く公知であり、例えば、米国特許第４，６
８３，２９１号明細書、同じく第４．２４４．９４６号
明細書、同じく第４　、３０５．８７２号明細書、およ
び同じく第４，３１６，８９１号明細書に、また、多く
の論文［メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）　　
：ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエテ
ィー（Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、）、第８５
巻（］９９６４年２，１４９ベージ：ベール（Ｖａｌｅ
）ら：サイエンス、第２１３巻（１９８１年）　Ｌ３９
４−１，３９７ベージ；マルテ（Ｍａｒｋｅ）ら　ジャ
ーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー、
第１０３巻（１，９８１年）３．１７８ページ］にも記
載されており、その開示は、これを参照することによっ
て本明細書に組み込まれる。用いることが可能なその他
の調製方法としては、ヒユートン（Ｈｏｕｇｈｔｏｎ）
の方法［プロシーデインダス・オブ・ナショナル・アカ
デミ−・オブ・サイエンセズ・オブ・ザ・ユナイテド・
ステープ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａ
ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ。

Ｓ、Ａ、）、第８２巻（１９８５年）５，１３２ページ
］があり、その開示もまた、これを参照することによっ
て本明細書に組み込まれる。特に比較的低分子の側鎖を
有し、あるいは環状のペプチドの好適な合成方法には、
習熟した技術者が認める通り、慣用の液相法を含めるこ
とができる。

液相法は、他の合成方法とともにボダンスキー（Ｍ、　
Ｂｏｄａｎｓｋｙ）編、「ペプチド合成の原理（Ｐｒｉ
ｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ）　Ｊ　　［シュプリンガー・フェルラーク（Ｓ
ｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）　１９８４年発行］に
記載されており、その開示も、これを参照することによ
って本明細書に組み込まれる。技術に通しる者には明ら
かなように、比較的高分子のペプチドに関しては、好適
な調製方法として、慣用の組換えＤＮＡの手法がある。

この手法については、後述で詳細に考察する。組換え法
は広く公知であって、例えば、マニアテイス（Ｍａｎｉ
ａｔｉｓ）ら著、［分子クローニング゛研究室マニュア
ル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：　Ａ　Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ）　Ｊ　　［コールドス
プリング＋ｌハーバ−・プレス（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎ
ｇＨａｒｂｏｒ　Ｐｒｅｓｓ）　１９８２年発行］に記
載されており、その開示は、これを参照することによっ
て本明細書に組み込まれる。

適当な回収方法は、前記の出版物に記載されている。用
いることが可能なその他の回収方法としては、リバー（
Ｒｉｖｅｒ）らによる「ペプチド：その構造と生物学的
機能（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：　Ｔｈｅ　５ｔｒｕｃｔｕｒ
ｅ　ａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎ）
　Ｊ　　（］］９７９年度１２５−１２８ベージ記載の
ものがあり、その開示も、これを参照することによって
本明細書に組み込まれる。

更に、本発明は、フィブリノーゲンの結合、血小板凝集
、および糖脂質１１ｂ−１１１ａ複合体の結合を阻害す
る際に、本件の化合物および組成物を利用するための組
成物、および方法を提供する。本件の化合物に前記の作
用を阻害する能力があることが、これらを血栓症の生理
的過程を阻害するのに役立たせている。更に、立証され
たその作用性からすれば、本発明の化合物を癌の転移、
すなわち、癌細胞との血小板の粘着が必要であると考え
られる異常な生理的現象を阻害するのに用いることもで
きる。本件の化合物は、このような関連機能を特異的に
行うことから、治療薬または診断薬として特に有用であ
る。

特に、本発明の組成物は、有効量の式（Ｔ）の化合物と
、生理的に許容可能な担体あるいは希釈剤とから成る。

治療、診断、あるいはその他の用途のための許容可能な
担体あるいは希釈剤は、製薬業界においては広く公知で
あって、例えば、ジェンナロ（Ａ、　Ｒ，Ｇｅｎｎａｒ
ｏ）編、「レミントンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ
’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ
ｓ）　」［ペンシルバニア州イーストン所在、マッグ・
パブリッシング社（ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃ
ｏ、　）　１９８５年発行］に記載されている。

本発明の方法を実施するには、この化合物または組成物
を、単独または相互に組み合わせ、あるいは、他の治療
薬または診断薬と組み合わせて用いることができる。こ
れらは、通常は哺乳類、好ましくはヒトにおける生体内
で、あるいは生体外で利用できる。生体外で用いるには
、この化合物または組成物を細胞溶液、すなわち、単数
または複数の細胞成分を含有する溶液に投与する。生体
内で用いるには、この化合物または組成物を哺乳類に、
経口、静脈内、皮下、筋向、結腸内、直腸内、鼻内、腹
腔内など各種の投与方法を用い、各種の与薬形態を用い
て投与できる。技術の習熟者には容易に明らかな通り、
有効な投与量、および特定すべき投与形式は、治療を施
す哺乳類の年齢、体重、および動物種により、用いる化
合物の種類により、また、これらの化合物が用いられる
特定の用途によって変化するものと思われる。有効投与
量、すなわち、所望の結果を得るのに必要な投与量の決
定は、充分に、技術の習熟者の掌握範囲内にあるものと
思われる。典型的には、少ない投与量から初めて、所望
の効果が現れるまでこれを増加させる方式がとられる。

本発明のペプチド化合物に対するモノクローナルおよび
ポリクローナル抗体は両者とも、対象となる蛋白質の単
離および同定に役立ち、したがって、本発明は、このよ
うな抗体にも関係する。ここの抗体を調製するには、業
界で公知の多数の手法のいずれをも用いることができる
、そのような１手法においては、動物（例えばウサギ）
に対する本発明の化合物の１種類あるいはそれ以上の注
射によって、ポリクローナル抗体を生成させることがで
きる。注射後、動物はこれらの化合物に対する抗体を自
発的に作り出す。抗体の血中濃度が充分な水準に達すれ
ば、次に、抗血清とよばれる、抗体を含有する血液をそ
の動物から抽出し、多数の分離手法のいずれか（例えば
、アフィニティークロマトグラフィー）を用いて、抗血
清中の他の抗体からこの化合物に特異的な抗体を単離す
る。モノクローナル抗体は、コーラ−（Ｋｏｈｌｅｒ）
およびミルシュタイン（Ｍｉ　ｌ５ｔｅｉｎ）の方法［
ネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）、第２５６巻（１９７５
年）４９５ベージコを用いてこれを調製できる。

更に、本発明は、本発明のペプチド化合物を暗号化した
核酸、好ましくはＤＮＡの配列にも関する。そのような
フラグメントは、標準的な核酸合成手法を用いてこれを
合成でき、あるいは代替的に、慣用の遺伝子工学の手順
書を用いて、各種供給源のゲノム材料から得ることがで
きる。ゲノム材料の供給源の１種としては、シャティル
らの論文［ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミス
トリー、第２６０巻（１９８５年）１１，１０７〜１１
．１１４ベージ］記載のＰＡＣＩハイブリドーマ細胞特
にそのゲノムのＰＡＣＩ−μ重鎖可変領域がある。標準
的な組換えＤＮＡ手法を用い、この核酸配列を、所望の
場合は適切なりローニングベクター中に組み込んで、適
切な宿主細胞に形質導入することができ、この核酸フラ
グメントに暗号化されている蛋白質を発現させ、回収し
てこれをその後の用途に用いることができる。したがっ
て、これは、本発明の蛋白質、特に長大な直鎖蛋白質の
製造のための簡便となり得る方法である。前記マニアテ
ィスら著、　「分子クローニング：研究室マニュアル」
［コールドスプリング・ハーバ−・プレス１９８２年発
行］には、各種組換えＤＮＡ方法に関する詳細な考察が
掲載されている。

本明細書中で用いられるクローニングベクターとは、Ｄ
ＮＡ　（あるいはＲＮＡ）配列であって、実験的な特異
的異種ＤＮＡ　（あるいはＲＩＩＩＡ）を取り込むこと
ができ、これと組み合わされたＤＮＡ　（あるいはＲＮ
Ａ）が宿主細胞内に導入されて、安定的に存在し、かつ
その実験的なりＮＡ　（あるいはＲＮＡ）によって指令
される蛋白質を発現できるものとして定義される。ベク
ターＤＮＡ　（あるいはＲＮＡ）と組み合わされた異種
ＤＮＡ　（あるいはＲＮＡ）は、組換え技術によっても
たらされた組換えＤＮＡ　（あるいはＲＮＡ）分子を構
成する。クローニングベクターとしては、プラスミド、
バクテリオファージ、ウィルス、およびコスミドをあげ
ることができる。

本明細書においては、発現ベクターとは、遺伝子のクロ
ーン化された複製物の転写、および、適切な宿主中での
それらのｍＲＮＡの翻訳に必要なりＮＡ　（あるいはＲ
ＮＡ）配列として定義される。そのようなベクターは、
細菌、酵母、昆虫、哺乳類の細胞など各種の細胞中で、
原核遺伝子あるいは真核遺伝子のいずれかを発現させる
のに用いることができる。

また、多数のウィルス系において蛋白質を発現させるこ
ともできる。

適切に形成された発現ベクターは、宿主細胞における自
律的な複製のための複製基点選択的なマーカー、限定数
の有用な制限酵素部位、高い模写数、および強力なプロ
モーターを含んでいなければならない。

プロモーターとは、ＲＪ’ｌＡ重合酵素をＤＮＡと結合
させ、ＲＮＡ合成を開始させるＤＮＡ　（あるいはＲＮ
Ａ）配列として定義される。強力なプロモーターとは、
ｍＲＮＡ合成が高頻度で開始されるようにするプロモー
ターのことである。発現ベクターとしては、クローニン
グベクター、修飾されたクローニングベクター、特異的
に設計されたプラスミド、あるいはウィルスなどをあげ
ることができるが、これらに限られるわけではない。

更に、本発明は、第２図に示したＰＡＣＩなるモノクロ
ーナル抗体のμ重鎖可変領域のアミノ酸配列に対応する
アミノ酸から成るペプチド、および、そのような配列が
組み込まれたいかなる抗体をも包含する。

本発明は更に、第２図に示したＰＡＣＩなるモノクロー
ナル抗体のμ重鎖可変領域のアミノ酸配列に対応するア
ミノ酸と、第１図に示したＰＡＣＩなるモノクローナル
抗体のに軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対応するアミノ
酸とから成るペプチド、および、そのような配列が組み
込まれたいかなる抗体をも包含する。技術の習熟者には
明白な通り、また、リーチマン（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ）
らによる論文［ネイチャー、第３３２巻（１９８８年）
３２３〜３２７ベージ］記載のような化学的方法および
組換え法を用いたペプチド合成に関する前記の考察で述
べた通り、このようなペプチドの調製には各種の手法が
利用できる。組換えＤＮＡの手法は、抗体操作の分野に
も適用できる。抗体工学についての考察に関しては、前
記リーチマンらの論文［ネイチャー、第３３２巻（１９
８８年）３２３〜３２７ベージ］を参照のこと。その開
示は、これを参照することによって本明細書に組み込ま
れる。

本発明は、ＰＡＣＩなるモノクローナル抗体をその対象
とするのが最も好適である。このモノクローナル抗体を
産生ずるハイブリドーマ細胞系は、前記シャティルらの
論文［ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
ー、第２６０巻（１９８５年）　１．１．．１０７〜１
１−、］−１４ページ］に記載されており、その開示は
、これを参照することによって本明細書に組み込まれる
。ＰＡＣＩのハイブリドーマ細胞、および、これに産生
されるＰＡＣ］モノクローナル抗体の双方とも、下記の
実施例中で考察されている。式（１）および（Ｉ＋）の
ペプチドにおけると同様に、本段落中に記載のペプチド
およびモノクローナル抗体は、フィブリノーゲンの結合
、血小板凝集、または糖蛍白質第１ｔ　ｂ−ＩＩＩ　ａ
複合体の結合の阻害剤として有用であり、かつ同様に、
血栓症、または癌の転移など、特定の生理的状態の治療
にも効果的であるので、本発明は更に、このような使途
をも志向している。

［実施例］ 以下、実施例に基づき、本発明を更に説明する。これら
の実施例は、随伴する請求範囲の対象範囲を制約するも
のと解してはならない。

実施例１ 細胞培養、およびｍｌ島の単離 前記シャティルらの論文［ジャーナル・オブ・バイオロ
ジカル・ケミストリー、第２６０巻（１９８５年）ＬＬ
１０７〜１１，１１４ベージ］記載の方法で調製したＰ
ＡＣＩのハイブリドーマ細胞を、ウシ胎児血清を含有す
る標準培地中で増殖させ、５ｘｌＯ８個の細胞を収穫し
て、チャーブウィン（Ｃｈｉｒｇｗｉｎ）らの論文［バ
イオケミストリー、第１８巻（１９７９年）５，２９４
〜５，２９９ベージ］記載の４モルのチオシアン化グア
ニジンに懸濁する。

塩化セシウムをクツションにした遠心分離を施した後、
全ＲＮＡを単離し、アビブ（Ａｖｉｖ）らの論文［プロ
シーデインダス・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ
・サイエンセズ・オブ・ザ・ユナイテド・ステーゾ・オ
ブ・アメリカ、第６９巻（１９７２年）２６４〜２６８
ページ］に解説されている方法に従って、オリゴデミジ
ンセルロースを用いてボリアデル酸とＲＮＡの混合物を
単離する。

実施例２ ＰＡＣＩ免疫グロブリン可変領域の配列決定マウス１ｔ
およびに不変部領域のｍｌ島の５′領域（それぞれ、５
°−ＧＣＴＣＴＣＧＣＡＧＧＡＧＡＣＧＡＧ、および５
’−ＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧＡＴＡＣＡＧＴＴ）か
らの相補的オリゴヌクレオチドプライマーを用い、ゲリ
ープタ−（Ｇｅｌｉｅｂｔｅｒ）の論文［）オーカス、
第９巻（１９８７年）第１部５〜８ベージ］記載の直接
デオキシ鎖終止法を用いて、ＰＡＣＩ−μ重鎮ｍｌ晶、
およびＰＡＣＩ−に軽鎖ｍＲＮＡの塩基配列を決定する
。簡単に説明すると、末端標識したプライマー２０ｎｇ
を５０℃でアニールして、ポリアデニル酸＋ｍＲＮＡ１
０μｇを得、ジデオキシヌクレオヂドおよび逆転写酵素
の存在下で、プライマーを伸展させる。この反応の生成
物を、６％の変性用ポリアクリルアミドゲル上で電気泳
動させ、次いで、オートラジオグラフィーの露光を行う
のである。はぼ２００塩基対程度の配列が決定されたな
ら、不変部領域から約１５０塩基対はど遡った可変領域
内の相補的プライマーを合成して、可変領域内の５′以
降の配列を伸展させる。ＰＡＣＩ−ｚｚの反応に用いら
れるプライマーは５′−ＣＡＴＴＡＧＣＴＴＧＣＡＧＡ
ＣＴＧＴＴＣであり、ＰＡＣＩ−にの反応に用いられる
それは、５’　−ＡＴＣＴＴＧＡＧＴＧＴＧＡＡＡＴＣ
ＴＧＴである。に成品の３゜末端の約５０ヌクレオチド
はどの短い部分は、シュロムシフ（Ｓｃｈｌｏｍ：ｈｉ
ｋ）らの論文［ジャーナル・オブ・エクスベリメンタル
・メディシン（Ｊ。

Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、）　、第１６４巻（１９８６年）　
４０７−４２７ベージ］記載の、マクサム（Ｍａｘａｍ
）およびギルバー）　（Ｇｉｌｂｅｒｔ）の手法を改良
した方法を用いて決定する。第１図は、ＰＡＣＩハイブ
リドーマ細胞のに軽鎖可変領域のヌクレオチド配列を、
予測されるアミノ酸配列とともに示している。

第２図は、ＰＡＣＩハイブリドーマ細胞のμ重鎖可変領
域のヌクレオチド配列を、予測されるアミノ酸配列とと
もに示している。第１図および第２図ともに、相補的決
定領域（ＣＤＲ）は枠で囲んでこれを示した。

慣例に従い、アミノ酸には番号が付されている［カバッ
ト（Ｅ、　Ａ。

Ｋａｂａｔ）　、ウー（Ｔ、　Ｔ、　Ｗｕ）　、ライド
・ミラー（Ｍ、　Ｒｅｉｄ−Ｍｉｌｌｅｒ）、べり−（
Ｈ，Ｍ、　Ｐｅｒｒｙ）　、ゴソテスマン（Ｋ、　Ｓ、
　（ｉｏｔｔｅｓｍａｎ）　　：　　ｒ免疫学的に興味
の持たれる蛋白質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ　Ｉｎ
ｔｅｒｅｓｔ）　Ｊ　、米国厚生省、公衆衛生局、国立
衛生研究所１９８７年発行］。

実施例３ ペプチドの合成および分析 ＰＡＣＩ−μ可変領域の９３〜１０２番目のアミノ酸に
対応し、本明細書中でＡｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量
体と称される、ＮＯ３−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−３ｅ
ｒ−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ
−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ａ　Ｉ　ａ−０１ｙ−Ｐｒｏ−
Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａ　ｌａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−
ＣＯＯＲなるペプチド、および本明細書で用いられる他
の各種ペプチドを、アプライド・バイオシステムズ社（
Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　Ｉｎｃ、　）
製４３０Ａ型自動合成器を用いた同相法によって合成す
る。Ｂｏｃアスパラギン酸（Ｃｈｘ）以外は、上記メー
カーより提供されたＢｏｃアミノ酸を用いる。

Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体のＡｒｇ”、Ｓｅｒ
’、Ｔｙｒ’、Ｔｙｒ’、Ａｒｇ３、Ａｒｇ’、および
Ａｌａ’については、３重カップリング法を用いる。残
余の残基は、２重カップリング法の手順に従って組み込
む。タム（Ｔａｍ）の論文［ジャーナル・オブ・アメリ
カン・ケミカル・ソサエティー、第１０５巻（１９８３
年）　６．４４２−６．４５５ベージ］記載のｒＳｎ２
／Ｓｎｌ　ＨＦ開裂法」を用いて、ペプチドを固相支持
体から開裂させ、ゲル濾過法（セファデックスＧ−５０
Ｆ、５０％酢酸）および逆相高性能クロマトグラフィー
［バイダック（Ｖｙｄａｃ）　Ｃ−１８、粒子径１５ミ
クロン、５ｘ３０ｃｍカラム、流速１００ｍＱ／分で９
５％Ａ−Ｂから７５％Ａ−Ｂまでを６０分以上行う：Ａ
は０．１％トリフルオロ酢酸−水、Ｂは０．１％トリフ
ルオロ酢酸−アセトニトリル］を用いて精製する。酸性
加水分解後のアミノ酸分析、ＦＡＢ質量分析（ＦＡＢＭ
Ｓ）　、核磁気共鳴分光分析、および、エドマン分解に
よって生成物の特性を調べる。分析結果は、期待された
構造と一致する。製品純度は９５％以上である。

実施例４ 血小板とのＰＡＣＩおよびフィブリノーゲンの結合ゲル
濾過を施したヒト血小板とのＰＡＣＩモノクローナル抗
体、およびフィブリノーゲンの結合を、シャッティルら
による論文［ブラッド、第７０巻（１９８７年）３０７
〜３１５ページ］記載の方法を用いた、螢光活性化フロ
ーサイトメトリーによって測定した。健康な供血者から
の静脈血を米国国立衛生研究所処方Ａの酸−クエン酸塩
−デキストロースの溶液７分の１容中に抽出して、血小
板に富む血漿を得る。次いで、血小板にゲル濾過を施し
、シャッティルらによる論文［ブラッド、第６８巻（１
９８６年）　１，２２４〜１，２３１ページ］記載のよ
うにして、ｐＨ７，４で等張のグツドの緩衝液用試薬（
ＨＥＰＥＳ）を含有する緩衝液中に通す。活性化血小板
に結合しているＰＡＣＩに対する合成ペプチドの作用を
調べるために、最終容積を５０μ９として、種々の濃度
（０〜１．ＯＯ＃Ｍ）のペプチド、４０Ｆｇ／ｍＱのフ
ルオレセイン標ｍＰＡｃ１　（ＦＩＴＣ−ＰＡＣＩ）　
、ｌＯｐＭのＡＤＰ、および１ｅｒＭのエピネフリンの
存在下で、５　ｘ　１０’個の血小板を室温で１５分間
温装する。次いで、上記の等張緩衝液５００μ９を加え
、前記シャッティルらによる論文［ブラッド、第７０巻
（１９８７年）３０７〜３１５ベージ］記載の通り、流
動細胞針を用いて、結合している抗体を定量した。血小
板と結合しているフィブリノーゲンは、前記ベネットら
による論文［ジャーナル・オブ・クリニカル・インベス
ティゲーション、第６４巻（１９７９年）　１，３９３
−１，４００ページ］記載の通り、５０Ｆｇ／ｍｔのヒ
ト精製フィブリノーゲンを加えること、および、ＦＩＴ
Ｃ−ＰＡＣＩに代えてＦＩＴＣ−９Ｆ９なるモノクロー
ナル抗体を加えること以外は同一の装置系を用いてこれ
を測定した。９Ｆ９なる抗体はフィブリノーゲンに特異
的であり、血小板に結合したフィブリノーゲン量の測定
に用いられて好成績を得ている［エイブラムス（Ａｂｒ
ａｍｓ）らニブラッド、第７０巻（１９８７年）３３５
ページａ］。フローサイトメトリーを用いて測定される
、血小板に結合したＦＩＴＣ標識抗体の量は、慣用の放
射性リガンド結合試験で測定される結合抗体の量と線形
の関係にあることが、以前の研究で確認されている［シ
ャッティルらニブラッド、第７０巻（１９８７年）３０
７〜３１５ベージコ。

血小板に結合したＦＩＴＣ−ＰＡＣＩあるいはＦＩＴＣ
−９Ｆ９の量は、１０．０００個の血小板について、４
８８ｎｍの螢光の程度を分析し、任意の螢光単位のもと
て平均螢光強度として結合を表すことによってこれを測
定した。

このような条件下で、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量
体ペプチドは、血小板に対するＦＩＴＣ−ＰＡＣＩの結
合を阻害し、ＩＣ，。は２０〜３０μＭであった（第３
図へに黒丸で示す）。これは、ＮＨｚ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ
−Ａｓｐ−３ｅｒ−ＣＯＯＨ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ
−３ｅｒ　）なるテトラペプチドのＩＣ５゜（第３図Ａ
に白丸で示す）と同程度である。独立した５回の実験で
、シーゲル（Ｓｅｇｅｌ　）著、「酵素動力学（Ｅｎｚ
ｙｍｅ　Ｋｉｎｅｔｉｃｓ）　Ｊ　　［ニューヨーク所
在ワイリー・インターサイエンス（Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔ
ｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）　１９７５年発行コに従ッて実施
したデイクソンプロワ１−分析によって、ＡｒＢ−Ｔｙ
ｒ−Ａｓｐ−２］量体によるＰＡＣＩの結合の阻害に要
する見かけのに１は、１０．２±４．３ｐＭ（標準誤差
）であることが判明した。対照群としてのＮｌ２−Ｔｙ
ｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｇｌ　ｎ−Ｃｙ
ｓ−（Ａｃｍ）Ｇ　Ｉ　ｕ−３ｅｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−
Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇ　Ｉｙ−Ｇ　］　ｙ−Ｍｅ
ｔ（０）−Ｃｙｓ−（Ａｃｍ）−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓ
ｐ−１１ｅ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ
−Ｐｈｅ−ＣＯＯＨ（無関係な２８量体）（対照群）な
る配列の、類似の長さの無関係なペプチドには、ＦＩＴ
Ｃ−ＰＡＣＩの結合に対する作用が皆無である（第３図
Ａ、白い方形）。ＡＤＰおよびエピネフリンに代えて、
ホルボールミリステートアセテートを用いて血小板を活
性化させた場合にも、全く同じ結果が得られる（データ
は示さず）。活性化血小板に対するフィブリノーゲンの
結合を阻害するＡｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体の能
力も試験した。フィブリノーゲンの結合は、ＦＩＴＣで
標識した９Ｆ９なる抗フィブリノーゲンモノクローナル
抗体を用い、フローザイトメトリーによってこれを評価
した。５０μｇ／ｍＱのフィブリノーゲンの存在下で、
ＡＤＰおよびエピネフリンを用いて血小板を活性化した
場合、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体は、フィブリ
ノーゲンの結合を阻害し、そのＩＣ５ｏは１５μＭであ
った（第３図Ｂ、黒丸）。対照ペプチド（無関係な２８
量体）には９Ｆ９の結合に対する作用が皆無であった（
第３図Ｂ、白い方形）。３回の実験で、デイクソンプロ
ット分析によれば、このペプチドはフィブリノーゲンの
結合を阻害し、その見かけのＫｉは５．５±３．５＋＋
Ｍであることが判明した。

ＰＡＣＩモノクローナル抗体の結合の阻害に対するＡｒ
ｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体の特異性を調べるために
、他の血小板糖蛋白質とのモノクローナル抗体の結合に
対する、このペプチドの作用を調べた。休止血小板表面
の血小板糖蛋白質第Ｔｂ複合体とのＦＴＴＣ−Ｐｈｅ１
の結合に対しては、ＡｒｇＴｙｒ−Ａｓｐ−２１量体の
作用は皆無であった（第４図、白丸）。更に、活性化さ
れた血小板表面の糖蛋白質第１１ｂ複合体とのＦＩＴＣ
−ＢＩＢ５、あるいはＧＭＰ−１４０とのＦＩＴＣ−３
１２の、どちらの結合に対しても、このペプチドの作用
は皆無であった（第４図、それぞれ、黒い方形、白い三
角形）。

このペプチドは、ＰＡＣＩの結合に対しては顕著な作用
がある（第４図、黒丸）。α顆粒膜蛋白質（ＧＭＰ）に
特異的な、マツキーパ−（ＭｃＥｖｅｒ）らの論文［ジ
ャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、第２
５９巻（１９８４年）９，７９９ページ］に記載のＳ］
、２なる抗体は、活性化された血小板の表面で発現する
。ＢＩＢ５なる抗体は、糖蛋白質第１１ｂ複合体に特異
的であって、シャッティルらによる論文［ジャーナル・
オブ・バイオロジカル・ケミストリー、第２６０巻（１
，９８５年）ＩＬ１０７〜ＬＬ１．１４ベージ］および
ベネットらによる論文［プロシーデインダス・オブ・ナ
ショナル・アカデミ−・オブ・ザイエンセズ・オブ・ザ
・ユナイテド・ステーゾ・オブ・アメリカ、第８０巻（
］、９９８３年　２，４１７〜２．４２１ベージコにお
いて考察されている。

実施例５ 血小板凝集の研究 血小板凝集に対するＡｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ〜２１量体
の作用を調べた。シャッティルらによる論文［ブラッド
、第６８巻（１９８６年）　１．２２４〜１，２３１ペ
ージ］記載の通りにして、血小板凝集を実施した。ヒト
フィブリノーゲン（１，００＋＋ｇ／ｍＱ）　、および
塩化カルシウム（１＋ｕＭ）の存在下で、血小板（２ｘ
１０８個／ｍ９）を３７℃に保って撹拌し、１０μＭの
ＡＤＰを加えて、凝集を開始させる。凝集は、透光度の
変化としてこれを計測し、凝集の初速度として表した。

３回の実験において、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量
体は、ＡＤＰによって誘発された血小板凝集の初速度を
阻害し、そのＩＣ５゜は約４０μＭであった（第５図、
黒丸）。１０μｇ／ｍｔのフィブリノーゲン濃度では、
ＩＣ５ｏは約１０μＭとなった（データは示さず）。

実施例６ ２１量体のＡｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ配列の変更Ａｒｇ−
Ｔｙｒ−Ａｓｐの領域に限っての変更以外はＡｒｇ−Ｔ
ｙｒ−Ａｓｐ−２１量体と同一ナヘフ−１−ト３種類を
更に試験して、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体中の
Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ配列に特有の役割を調べた。Ａ
ｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ中のチロシンをダリシンに置き換
えたＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−２１量体を調製すると、
凝集試験（Ａｒｇ−Ｇ　１ｙ−Ａｓｐ−２１量体につい
ては第５図、黒い方形；　Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２
１量体については第５図、黒丸）、および、ＰＡＣＩお
よびフィブリノーゲンの結合試験（Ａｒｇ−〇１ｙ−Ａ
ｓｐ−２１量体については第６図、黒い方形；　Ａｒｇ
−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体については第６図、黒丸）
の双方で、ペプチドの阻害能力は、約１０倍も増大する
。一方、チロシンをＤ−アラニンに置き換えて７１μｇ
−ｄ−Ａｌａ−Ａｓｐ−２１量体を調製し、あるいは、
アルギニン残基とアスパラギン酸残基を入れ換えてＡｓ
ｐ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−２１量体を調製すると、ペプチド
の阻害能は相当程度減少する（Ａｒｇ−ｄ−Ａｌａ−Ａ
ｓｐ−２１量体については第６図、白丸：Ａｓｐ−Ｔｙ
ｒ−Ａｒｇ−２１量体については第６図、黒い三角形）
。第６図には、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−３ｅｒテトラ
マーを白い方形として示した）。

このように、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体ペプチ
ド中のＡｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ配列に限って変更を加え
ることによって、３個のアミノ酸のこのような配列には
、ペプチド全体の機能的特性に関する重大な意味がある
ことが明確に立証される。

本明細書中の図示および記載以外に本発明に対して各種
の変更を加え得ることは、技術の習熟者にとっては、上
記の記載から明らかであると思われる。そのような変更
もまた、随伴する請求項の対象範囲に包含されるものと
考えられる。

４、図面の簡単な説明 第１図は、ＰＡＣＩハイブリドーマ細胞のに軽鎖可変領
域のヌクレオチド配列を、その」二にヌクレオチドに番
号を付して示した図である。■からＪまでの領域結合部
の部位を示す。予測されるアミノ酸配列を、アミノ酸番
号とともにその下の２行に示す。アミノ酸に対する番号
は慣例に従って付されている［カバッＩ・（Ｅ、　Ａ、
　Ｋａｂａｔ）　、ウー（Ｔ、　ＴＷｕ）　、ライド・
ミラー（Ｍ、　Ｒｅｉｄ−Ｍｉｌｌｅｒ）　、べり−（
１，Ｍ、　Ｐｅｒｒｙ）、ゴッテスマン（Ｋ、　Ｓ、　
Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ）　　：　　ｒ免疫学的に興味の持
たれる蛋白質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ　Ｉｎｔ
ｅｒｅｓｔ）　」、米国厚生省、公衆衛生局、国立衛生
研究所１９８７年発行］。相補的決定領域（ＣＤＲ）は
枠で囲んでこれを示した。

第２図は、ＰＡＣＩハイブリドーマのμ重鎖可変領域の
ヌクレオチド配列を、その上にヌクレオチドに番号を付
して示した図である。■からＪまでの領域結合部の部位
を示す。予測されるアミノ酸配列を、アミノ酸番号とと
もにその下の２行に示す。アミノ酸に対する番号は慣例
に従って付されている［カバット、ウー、ライト・ミラ
ー、べり−ゴッテスマン：　「免疫学的に興味の持たれ
る蛋白質の配列」、米国厚生省、公衆衛生局、国立衛生
研究所１９８７年発行］。相補的決定領域は枠で囲んで
これを示した。ＣＤＲ３は、Ａｒｇ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−
３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＡｒｇＴｙｒ−Ａｓｐ−Ｇ　
Ｉ　ｙ−Ａ　ｌ　ａ−Ｇ　１ｙ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙ
ｒ−Ａ　Ｉａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙなるアミノ酸配列
で構成されている。

第３図は、ヒト活性化血小板とのＰＡＣ］およびフィブ
リノーゲンの結合に対する、ＰＡＣＩ−μ重鎖の可変部
に由来する２１個のアミノ酸のペプチド（以下ｒＡｒｇ
−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体ベプヂド」と称する）の作
用を示す図である。Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体
はＡ　Ｉａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−３ｅｒ
−Ｔｙｒ−ＴｙｒΔｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉ　ｙ
−Ａ　Ｉ　ａ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−
Ａ　Ｉ　ａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙなるアミノ酸配列を
有する。各種ペプチド、およびＦＩＴＣ−ＰＡＣＩ　（
第３図へ）あるいはＦＩＴＣ−９Ｆ９　（第３図Ｂ）の
いずれか、および、フィブリノーゲン（５（ｂ＋ｇ／ｍ
９）の存在下で、ＡＤＰ　（ＩＯＪＩＭ）およびエピネ
フリン（１０ｐＭ）とともに、ゲル濾過を行った血小板
を１５分間温流した。試験した特異的なペプチドは、Ａ
ｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体（黒丸）　、Ａｒｇ−
Ｇｌｙ−Ａｓｐ−３ｅｒ　（白丸）、および無関係な詔
量体（対照群、白い方形）である。フローサイトメトリ
ーを用いて、結合を測定した。抗体の結合は、追加ペプ
チドの不在下で観察された結合のパーセントとじて表さ
れている。誤差を示す棒は、独立した５回の実験の平均
値上標準誤差を表している。第３図Ａで、誤差を示す棒
のないデータ点は、２回の実験の平均を表している。

第４図は、血小板に対する各種モノクローナル抗体の結
合に対するＡｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体の作用を
示している。Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体、およ
びＦＩＴＣで標識した各種の抗血小板モノクローナル抗
体の存在下で、ゲル濾過を施した血小板を溢流した。モ
ノクローナル抗体の結合は、フローサイトメトリーを用
いて測定した。ＡＰＩなる抗体（血小板の糖蛋白質第Ｔ
ｂに特異的に作用する）の場合（白丸）、血小板は活性
化されなかった。ＰΔＣ１抗体（活性化された糖蛋白質
第１１ｂ−１１１ａ複合体に特異的）（黒丸）　、ＢＩ
Ｂ５　（糖蛋白質第１１ｂ複合体に特異的）（黒い方形
）、およびＳ１２　（ＧＭＰ−１４０に特異的）（白い
三角形）の場合は、血小板は、ＡＤＰおよびエピネフリ
ンを用いて（それぞれ１ｅｒＭ）活性化された。ここに
示したデータは、記載の通り実施された２回の実行で表
される１回の実験から得たものである。

第５図は、血小板凝集に対するＡｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ
−２１量体の作用を示す図である。ＡＤＰ　（１０ｐＭ
）　、フィブリノーゲン（１００＋＋ｇ／ｍｕ）　、塩
化カルシウム（１ｍＭ）、および、下記のいずれか１種
類、すなわち、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体（黒
丸）　、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体のチロシン
をグリシンに置き換えたもの（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ
−２１量体）（黒い方形）　、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ
−２１量体のアスパラギン酸とアルギニンを入れ換えた
もの（Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−２１量体）（黒い三角
形）、あるいは、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体の
チロシンをＤ−アラニンに置き換えたもの（Ａｒｇ−ｄ
−Ａｌａ−Ａｓｐ−２１量体）（白丸）の存在下で、ゲ
ル瀘過した血小板を凝集計のキュベラ１〜中で３分間撹
拌した。凝集の初期速度として凝集を表したが、この際
、加えるべきペプチドの不在下での凝集速度を任意に１
００％としている。データは、記載の通り実施した独立
した３回の実験の平均値で表した。

第６図は、ＡＤＰおよびエピネフリン（それぞれ１ｅｒ
Ｍ）で刺激した血小板に対する、ＦＩＴＣ−ＰＡＣＩ　
（第６図Ａ）またはＦＩＴＣ−９Ｆ９　（第６図Ｂ）、
およびフィブリノーゲンの結合に対するＡｒｇ−Ｔｙｒ
−Ａｓｐの作用を示す図である。試験した特異的なペプ
チドは、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−２１量体（黒丸）、
へｒｇ−Ｇｌｙ−Δ５ｐ−２１量体（黒い方形）　、　
Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−２１量体（黒い三角形）　、
Ａｒｇ−ｄ−Ａｌａ−Ａｓｐ−２１量体（白丸）、ある
いは、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−３ｅｒ（白い方形）で
ある。各結合試験の条件は、第３図における場合と同一
である。ここに示したデータは、記載の通り実施された
３回の実行で表される１回の実験を示している。

手続補正書（方式） 平成２年３月６日 発明の名称 血小板結合阻害剤 補正命令通知の日付 平成２年２月２７日 補正の内容 別紙の通り

Claims (25)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 Ｒ＾１−（Ｘ＾１）＿ｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−（
   Ｘ＾２）＿ｍ−Ｒ＾２（式中、Ｘ＾１およびＸ＾２は、
   独立に１〜約５０のアミノ酸残基を意味し、ただしＸ＾
   １およびＸ＾２のアミノ酸残基の合計した総数は約５０
   以下であるものとし、ｍおよびｎは、独立に０または１
   であり、Ｒ＾１は、保護され、または保護されていない
   末端アミノ基を意味し、Ｒ＾２は、保護され、または保
   護されていない末端カルボキシル基を意味する） で示されることを特徴とする化合物、およびその生理的
   に許容可能な塩。
2. （２）ｍ＝０、かつｎ＝０である請求項（１）記載の化
   合物。
3. （３）Ｘ＾１、およびＸ＾２が直鎖の形態をなす請求項
   （１）記載の化合物。
4. （４）Ｘ＾１、およびＸ＾２のアミノ酸残基の合計した
   総数が約４０未満である請求項（１）記載の化合物。
5. （５）Ｘ＾１、およびＸ＾２のアミノ酸残基の合計した
   総数が約２５未満である請求項（１）記載の化合物。
6. （６）Ｘ＾１、およびＸ＾２のアミノ酸残基の合計した
   総数が約１０未満である請求項（１）記載の化合物。
7. （７）Ｘ＾２が【遺伝子配列があります】で示され、Ｘ
   ＾２が【遺伝子配列があります】で示され、ｍ＝１、か
   つｎ＝１である請求項（１）記載の化合物。
8. （８）Ｘ＾２が【遺伝子配列があります】 で示され、ｍ＝１、かつｎ＝１である請求項（１）記載
   の化合物。
9. （９）一般式 Ｒ＾１−（Ｘ＾１）＿ｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−（
   Ｙ）＿ｏ−（Ｘ＾２）＿ｍ−Ｒ＾２（式中、Ｘ＾１、お
   よびＸ＾２は、独立に１あるいはそれ以上のアミノ酸残
   基を意味し、Ｙは、セリンあるいはアラニン残基を含ま
   ない１あるいはそれ以上のアミノ酸残基を意味し、ｍ、
   ｎ、およびｏは、独立に０または１、ただしｍ＝１のと
   きは必ずｏ＝１であるものとし、Ｒ＾１は、保護され、
   または保護されていない末端アミノ基を意味し、Ｒ＾２
   は、保護され、または保護されていない末端カルボキシ
   ル基を意味する）で示されることを特徴とする、フィブ
   リノーゲンの結合、血小板凝集、血栓症、癌の転移、ま
   たは糖蛋白質第IIｂ−IIIａ複合体の結合を阻害する化
   合物、およびその生理的に許容可能な塩。
10. （１０）有効量の請求項（１）記載の化合物と、生理的
    に許容可能な担体あるいは希釈剤とから成る、フィブリ
    ノーゲンの結合を阻害するための組成物。
11. （１１）有効量の請求項（１）記載の化合物と、生理的
    に許容可能な担体あるいは希釈剤とから成る、血小板凝
    集を阻害するための組成物。
12. （１２）有効量の請求項（１）記載の化合物と、生理的
    に許容可能な担体あるいは希釈剤とから成る、血栓症を
    阻害するための組成物。
13. （１３）有効量の請求項（１）記載の化合物と、生理的
    に許容可能な担体あるいは希釈剤とから成る、癌の転移
    を阻害するための組成物。
14. （１４）有効量の請求項（１）記載の化合物と、生理的
    に許容可能な担体あるいは希釈剤とから成る、血小板の
    膜糖蛋白質第IIｂ−IIIａ複合体に対する物質の結合を
    阻害するための組成物。
15. （１５）有効量の請求項（１）記載の化合物を血小板に
    投与する段階から成るフィブリノーゲンの結合を阻害す
    る方法。
16. （１６）有効量の請求項（１）記載の化合物を血小板に
    投与する段階から成る血小板凝集を阻害する方法。
17. （１７）有効量の請求項（１）記載の化合物を哺乳類に
    投与する段階から成る該哺乳類における血栓症を阻害す
    る方法。
18. （１８）有効量の請求項（１）記載の化合物を哺乳類に
    投与する段階から成る該哺乳類における癌の転移を阻害
    する方法。
19. （１９）有効量の請求項（１）記載の化合物を血小板の
    膜糖蛋白質第IIｂ−IIIａ複合体に作用させる段階から
    成る該複合体との物質の結合を阻害する方法。
20. （２０）請求項（１）記載の化合物に対する抗体。
21. （２１）請求項（１）記載の化合物を暗号化したヌクレ
    オチド配列から成る核酸フラグメント。
22. （２２）第２図に示されるアミノ酸配列に対応するアミ
    ノ酸配列から成ることを特徴とするペプチド。
23. （２３）第１図に示されるアミノ酸配列に対応するアミ
    ノ酸配列をも含む請求項（２２）記載のペプチド。
24. （２４）第２図に示されるアミノ酸配列に対応するアミ
    ノ酸配列から成ることを特徴とするモノクローナル抗体
    。
25. （２５）第１図に示されるアミノ酸配列に対応するアミ
    ノ酸配列をも含む請求項（２４）記載のモノクローナル
    抗体。