JPH02234677A - 酸性ｄ―アミノ酸に作用するｄ―アミノアシラーゼ及びその製造法 - Google Patents
酸性ｄ―アミノ酸に作用するｄ―アミノアシラーゼ及びその製造法Info
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- JPH02234677A JPH02234677A JP1052830A JP5283089A JPH02234677A JP H02234677 A JPH02234677 A JP H02234677A JP 1052830 A JP1052830 A JP 1052830A JP 5283089 A JP5283089 A JP 5283089A JP H02234677 A JPH02234677 A JP H02234677A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、アルカリゲネス属に属する細菌をＮアセチル
ーＤ−グルタミン酸を含有する培地で培養して産出され
るＤ−アミノアシラーゼ及びその製造方法に関するもの
である。
ーＤ−グルタミン酸を含有する培地で培養して産出され
るＤ−アミノアシラーゼ及びその製造方法に関するもの
である。
Ｄ−アミノ酸の製造方法としては、ＤＬ−アミノ酸をア
セチル化してＮ−アセチルーＤＬ−アミノ酸としたのち
、これに微生物の生産するＤ−アミノアシラーゼを反応
させ酵素的加水分解反応によりＤ−アミノ酸を生成させ
て、これを常法により分離する方法が知られている。ま
たＤ−アミノアシラーゼに関してはシュードモナス属に
属するファカルタテイブメタノール資化性細菌類が生産
するＤ−アミノアシラーゼ（特開昭５５− ４２５３４
号、特公昭６０−３１４７７号）、ストレブトミセス属
放線菌の生産するＤ−アミノ了シラーゼ（特開昭５３５
９０９２号、特公昭５ ３−３ ６ ０ ３ ５号）が
知られている。また最近アルカリゲネス属に属するアル
カリゲネス・デニトリフイカンス・サブスピーシーズ・
キシロースオキシダンスＭＩ−４の生産するＤ−アミノ
アシラーゼが報告されている（特開昭６ ４，−５ ４
８ ８号）。
セチル化してＮ−アセチルーＤＬ−アミノ酸としたのち
、これに微生物の生産するＤ−アミノアシラーゼを反応
させ酵素的加水分解反応によりＤ−アミノ酸を生成させ
て、これを常法により分離する方法が知られている。ま
たＤ−アミノアシラーゼに関してはシュードモナス属に
属するファカルタテイブメタノール資化性細菌類が生産
するＤ−アミノアシラーゼ（特開昭５５− ４２５３４
号、特公昭６０−３１４７７号）、ストレブトミセス属
放線菌の生産するＤ−アミノ了シラーゼ（特開昭５３５
９０９２号、特公昭５ ３−３ ６ ０ ３ ５号）が
知られている。また最近アルカリゲネス属に属するアル
カリゲネス・デニトリフイカンス・サブスピーシーズ・
キシロースオキシダンスＭＩ−４の生産するＤ−アミノ
アシラーゼが報告されている（特開昭６ ４，−５ ４
８ ８号）。
一般にＤ−アミノアシラーゼは基質特異性が高く、Ｎ−
アセチルーＤ−アミノ酸の種類によってアシラーゼ活性
が種々異なるが、これ等公知のＤアミノアシラーゼはＮ
−アセチルーＤ−メチオニン、Ｎ−アセチルーＤ−アラ
ニン、Ｎ−アセチルーＤ−フエニルアラニン、Ｎ−アセ
チルーＤ一バリン等の中性アミノ酸に対しては活性を示
すが、Ｎ−アセチルーＤ−グルタミン酸の如き酸性アミ
ノ酸に対しては殆んど活性を示さないものである。
アセチルーＤ−アミノ酸の種類によってアシラーゼ活性
が種々異なるが、これ等公知のＤアミノアシラーゼはＮ
−アセチルーＤ−メチオニン、Ｎ−アセチルーＤ−アラ
ニン、Ｎ−アセチルーＤ−フエニルアラニン、Ｎ−アセ
チルーＤ一バリン等の中性アミノ酸に対しては活性を示
すが、Ｎ−アセチルーＤ−グルタミン酸の如き酸性アミ
ノ酸に対しては殆んど活性を示さないものである。
Ｄ−グルタミン酸は、生理活性ペプチドの構成アミノ酸
、合成抗生物質の側鎖成分、脳機能改善剤の合成原料等
の用途を有する重要なＤ−アミノ酸であるが、公知のＤ
−アミノアシラーゼを用いて製造することが出来なかっ
た。
、合成抗生物質の側鎖成分、脳機能改善剤の合成原料等
の用途を有する重要なＤ−アミノ酸であるが、公知のＤ
−アミノアシラーゼを用いて製造することが出来なかっ
た。
斯かる実状のおいて、本発明者は鋭意研究の結果、Ｎ−
アセチルーＤ−グルタミン酸に特異的に作用してＤ−グ
ルタミン酸を生成するＤ−アミノアシラーゼを発見し、
このＤ−アミノアシラーゼの理化学的性質および酵素化
学的性質を明らかにして本発明を完成した。
アセチルーＤ−グルタミン酸に特異的に作用してＤ−グ
ルタミン酸を生成するＤ−アミノアシラーゼを発見し、
このＤ−アミノアシラーゼの理化学的性質および酵素化
学的性質を明らかにして本発明を完成した。
すなわち、本発明は、Ｎ−アセチルーＤ−グルタミン酸
に対し特異的に作用する新規なＤ−アミノアシラーゼ及
びその製造法を提供するものである。
に対し特異的に作用する新規なＤ−アミノアシラーゼ及
びその製造法を提供するものである。
本発明者はＮ−アセチルーＤ−アラニンを炭素源、窒素
源とする培地で、土壌中の微生物を検索し、Ｎ−アセチ
ルーＤ−グルタミン酸を誘導剤として添加した培地で培
養した結果、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルタミン酸に特異的
に作用するＤ−アミノアシラーゼ生産菌を単離すること
に成功した。
源とする培地で、土壌中の微生物を検索し、Ｎ−アセチ
ルーＤ−グルタミン酸を誘導剤として添加した培地で培
養した結果、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルタミン酸に特異的
に作用するＤ−アミノアシラーゼ生産菌を単離すること
に成功した。
本菌株の菌学的性質は次のとおりである。
形態
■．細胞の形：かん状
２．細胞の多形性：なし
３，運動性の有無：あり
４．胞子の有無：なし
５．グラム染色性：陰性
６．抗酸性：なし
生育状況
１．ブイヨン寒天平板培養：
円形、僅かに盛上り、白色、平滑、光たくあり、半透明
生理学的性質
１．硝酸塩の還元：＋
２．亜硝酸塩の還元：＋
３．インドールの生）Ｉｉ．：
４．クエン酸の利用：＋
５．ゼラチンの加水分解：
６．ウレアーゼ：
７．オキシターゼ：十
８，カタラーゼ：＋
９．０−Ｆテスト
弱酸化性
グルコース：
キシロース：酸生成
１０．了ルギニンの分解：
１１ 生育温度．４１℃では生育するが、４５℃では
生育しない １２ エスタリンの分解 １３．β−ガラクトシダーゼ： １４ チ１−クロームオキシダーゼ：」一炭素源の資
化性 １，グルコース：十 ２．アラビノース： ３，マンノース：十 ４．マンニトール； ５．Ｎ−アヤチルクルコザミン： ６ マルトース： ７．グルコン酸 」一 ８．カフ゜ロン酸一 ９，アジピン酸：十 １０．リンゴ酸：＋ １１．フエニル酢酸一十 １２．キシロース：」ー 糖からの酸及びガスの生成：ブドウ糖より酸を生成しな
い 以」二の菌学的諸性質をバージーズ・マニュアル・オブ
・システマテック・バクテリオロジ（Ｂｅｒ巳ｅｙ
ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第１巻にて検索すると
、 本菌株はダラム陰性かん菌で、運動性あり、好気性、カ
タラーゼ陽性、オキシターゼ陽性、ペプトン含有培地で
ブドウ糖より酸を生成しない等の性質よりアルカリゲネ
ス属に属する細菌である。
生育しない １２ エスタリンの分解 １３．β−ガラクトシダーゼ： １４ チ１−クロームオキシダーゼ：」一炭素源の資
化性 １，グルコース：十 ２．アラビノース： ３，マンノース：十 ４．マンニトール； ５．Ｎ−アヤチルクルコザミン： ６ マルトース： ７．グルコン酸 」一 ８．カフ゜ロン酸一 ９，アジピン酸：十 １０．リンゴ酸：＋ １１．フエニル酢酸一十 １２．キシロース：」ー 糖からの酸及びガスの生成：ブドウ糖より酸を生成しな
い 以」二の菌学的諸性質をバージーズ・マニュアル・オブ
・システマテック・バクテリオロジ（Ｂｅｒ巳ｅｙ
ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第１巻にて検索すると
、 本菌株はダラム陰性かん菌で、運動性あり、好気性、カ
タラーゼ陽性、オキシターゼ陽性、ペプトン含有培地で
ブドウ糖より酸を生成しない等の性質よりアルカリゲネ
ス属に属する細菌である。
また硝酸塩の還元反応、亜硝酸塩の還元反応、Ｄグルコ
ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−グルコン
酸、了ジピン酸の資化性を有し、ＯＦ培地でＤ−キシロ
ースから酸を生成することから、本菌株はアルカリゲネ
ス・キシロースオキシダンス・ザブスピーシーズ・キシ
ロースオキシダンス （八ｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ Ｘｙ
ｌｏｓｏｘｙｄａｎｓ ＳｕｂｓｐＸｙｌｏｓｏｘｙｄ
ａｎｓ）に属すると考えられ、アルカリゲネス・キシロ
ース才キシダンス・サブスピーシーズ・キシロースオキ
シダンスＡ−６と命名し（以下単に八−６株と呼ぶ）、
工業技術院微生物工業技術研究所に微工研閑寄第１０５
／Ｉ９号（ＦεＲＭＰ−１．０５４９）として寄託した
。
ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−グルコン
酸、了ジピン酸の資化性を有し、ＯＦ培地でＤ−キシロ
ースから酸を生成することから、本菌株はアルカリゲネ
ス・キシロースオキシダンス・ザブスピーシーズ・キシ
ロースオキシダンス （八ｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ Ｘｙ
ｌｏｓｏｘｙｄａｎｓ ＳｕｂｓｐＸｙｌｏｓｏｘｙｄ
ａｎｓ）に属すると考えられ、アルカリゲネス・キシロ
ース才キシダンス・サブスピーシーズ・キシロースオキ
シダンスＡ−６と命名し（以下単に八−６株と呼ぶ）、
工業技術院微生物工業技術研究所に微工研閑寄第１０５
／Ｉ９号（ＦεＲＭＰ−１．０５４９）として寄託した
。
本発明のＤ−アミノアシラーゼは、アルカリゲネス属に
属するＤ−アミノアシラーゼ生産菌をＮアセチルーＤ−
クルタミン酸を含む培地中で培養し、培養物よりＤ一了
ミノアシラーゼを採取することにより製造される。
属するＤ−アミノアシラーゼ生産菌をＮアセチルーＤ−
クルタミン酸を含む培地中で培養し、培養物よりＤ一了
ミノアシラーゼを採取することにより製造される。
Ａ−６株の培養には炭累源としてクエン酸、クルコン酸
が、窒素源としてペプトン、酵母エキス、ｒ−−グルタ
ミン酸が良好であるが、炭、窒素源としてベプ１−ンを
用いると最も高い活性が得られる。
が、窒素源としてペプトン、酵母エキス、ｒ−−グルタ
ミン酸が良好であるが、炭、窒素源としてベプ１−ンを
用いると最も高い活性が得られる。
誘導剤としてはＮ−アセチルーＤ−グルタミン酸の代り
に安価なＸ一了セチル−０Ｌ−グルタミン酸を用いるこ
とができ、これの培地中の濃度は約０． ２％が好まし
い。また培地ρ１１は７付近が好ましい。約１日間の培
養で菌体中にＤ一了ミノ了シラーセが生産される。
に安価なＸ一了セチル−０Ｌ−グルタミン酸を用いるこ
とができ、これの培地中の濃度は約０． ２％が好まし
い。また培地ρ１１は７付近が好ましい。約１日間の培
養で菌体中にＤ一了ミノ了シラーセが生産される。
生産されたＤ−アミノアシラーゼは、培養物を遠心分朗
１して菌体を染め、超音波破砕により無細胞抽出液とし
て得ることが出来るので、これより硫安分画、ＤＢＡＢ
−セルロース力ラムクロマトクラフィー、セファデック
ス０１５０カラムクロマトグラフィー等の公知手段を適
宜組合せてＤ−アミノアシラーゼを単離精製することが
できる。
１して菌体を染め、超音波破砕により無細胞抽出液とし
て得ることが出来るので、これより硫安分画、ＤＢＡＢ
−セルロース力ラムクロマトクラフィー、セファデック
ス０１５０カラムクロマトグラフィー等の公知手段を適
宜組合せてＤ−アミノアシラーゼを単離精製することが
できる。
このようにして得られる本発明のＤ−アミノアシラーゼ
の理化学的性質は次のとおりである。
の理化学的性質は次のとおりである。
■ 作用及び特異性
Ｎ−アセチルーＤ−グルタミン酸に作用してＤ−グルタ
ミン酸および酢酸を生成し、Ｎ−アセチルーＤ−アスパ
ラギン酸、Ｎ−アセチルーＤ−アラニン、Ｎ−アセチル
ーＤ一ロイシン、Ｎ−アセチルーＤ−メチオニン、Ｎ−
アセチルＤ−フェニル了ラニン、Ｎ−アセチルーＤ−ト
リプトファン、Ｎ−アセチルーＤ−バリンに対しては活
性を示さない。
ミン酸および酢酸を生成し、Ｎ−アセチルーＤ−アスパ
ラギン酸、Ｎ−アセチルーＤ−アラニン、Ｎ−アセチル
ーＤ一ロイシン、Ｎ−アセチルーＤ−メチオニン、Ｎ−
アセチルＤ−フェニル了ラニン、Ｎ−アセチルーＤ−ト
リプトファン、Ｎ−アセチルーＤ−バリンに対しては活
性を示さない。
■ 至適ｐ１１：
ｐＨ６．８〜７．２（リン酸カリウム緩衝液）である。
■ 最適温度：
活性発現の最適温度は４５〜５０ｔである。
■ 熱安定性：
６０℃１０分間の加熱処理後、約４０％の活性が残存し
ている。
ている。
■ 金属イオンの作用：
金属イオンにより活性化されず、ｐｅ２＋ ［：，２
＋１１ｇ”， Ｃｏ”， Ｎｉ２＋により活性阻害され
る。
＋１１ｇ”， Ｃｏ”， Ｎｉ２＋により活性阻害され
る。
■ 分子量：
約４２，０００ （ゲル濾過法による）。
本発明のＤ−アミノアシラーゼはＮ−アセチルＤＬ−グ
ルタミン酸よりＤ−グルタミン酸を製造する方法に利用
できる。
ルタミン酸よりＤ−グルタミン酸を製造する方法に利用
できる。
次に実施例を挙げて説明する。
実施例１
（ｉ＞Ｄ−アミノアシラーゼの産生
Ｎ−アセチルーＤＬ−グルタミン酸０．１％、グルコー
ス１％、ペプトン１％、ＫＨ．ＰＯ． ０．１％、Ｋ２
ＨＰ０． ０．１％、ＭｇＳ０ ４・７Ｈ２００．０１
％、酵母エキス０．０１％を含むｐＨ１．０の培地１０
０ｎｕ中でＡ−６株を２２時間培養し、その無細胞抽出
液中のＤ−アミノアシラーゼ活性を測定した。
ス１％、ペプトン１％、ＫＨ．ＰＯ． ０．１％、Ｋ２
ＨＰ０． ０．１％、ＭｇＳ０ ４・７Ｈ２００．０１
％、酵母エキス０．０１％を含むｐＨ１．０の培地１０
０ｎｕ中でＡ−６株を２２時間培養し、その無細胞抽出
液中のＤ−アミノアシラーゼ活性を測定した。
活性の測定はリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．０５ Ｑ
）ｔｍｏｌｌ， Ｎ−アセチルアミノ酸５，ｌｊｍｏｊ
！及びＤ−アミノアシラーゼを含む０．５ｍｌの抽出液
を３０分間反応させた後、５０％トリクロロ酢酸０．０
５＋＋＋Ｉｌを加えて反応を停止させ、残存するトリク
ロ口酢酸をエーテルで抽出除去したのちｌ−ＩＰＬＣで
Ｄ−アミノ酸或いはＬアミノ酸を定量した。
）ｔｍｏｌｌ， Ｎ−アセチルアミノ酸５，ｌｊｍｏｊ
！及びＤ−アミノアシラーゼを含む０．５ｍｌの抽出液
を３０分間反応させた後、５０％トリクロロ酢酸０．０
５＋＋＋Ｉｌを加えて反応を停止させ、残存するトリク
ロ口酢酸をエーテルで抽出除去したのちｌ−ＩＰＬＣで
Ｄ−アミノ酸或いはＬアミノ酸を定量した。
（ｉｉ）Ｄ−アミノアシラーゼ活性とＬ−アミノアシラ
ーゼ活性の分離 上記無細胞抽出液をＤＢＡＢセルロースに吸着させ、食
塩水のグラジエント溶離を行い、Ｌアミノアシラーゼ活
性部分とＤ−アミノアシラーゼ活性部分を分離した。そ
の溶出パターンは第１図のとおりである。
ーゼ活性の分離 上記無細胞抽出液をＤＢＡＢセルロースに吸着させ、食
塩水のグラジエント溶離を行い、Ｌアミノアシラーゼ活
性部分とＤ−アミノアシラーゼ活性部分を分離した。そ
の溶出パターンは第１図のとおりである。
（ｉｉｉ）Ｄ−アミノアシラーゼ活性及びＬ−アミノア
シラーゼ活性に対する誘導剤の効果 Ｉ２ Ａ，−６株の培養培地に添加する誘導剤Ｎ−アセチルー
ＤＬ−グルタミン酸の濃度を変えて培養し、その無細胞
抽出液中のＤ−アミノアシラーゼ活性とＬ−アミノアシ
ラーゼ活性を分離定量し、第２図に示す結果を得た。即
ちＮ−アセチルーＤＬ−グルタミン酸の添加によりＤ−
アミノアシラーゼ活性の産生は顕著に上昇し、その最適
添加濃度は０． ２％であった。これに対しＬ−アミノ
アシラーゼ活性は全く変化を受けず、且つその活性は極
めて僅かなものであった。
シラーゼ活性に対する誘導剤の効果 Ｉ２ Ａ，−６株の培養培地に添加する誘導剤Ｎ−アセチルー
ＤＬ−グルタミン酸の濃度を変えて培養し、その無細胞
抽出液中のＤ−アミノアシラーゼ活性とＬ−アミノアシ
ラーゼ活性を分離定量し、第２図に示す結果を得た。即
ちＮ−アセチルーＤＬ−グルタミン酸の添加によりＤ−
アミノアシラーゼ活性の産生は顕著に上昇し、その最適
添加濃度は０． ２％であった。これに対しＬ−アミノ
アシラーゼ活性は全く変化を受けず、且つその活性は極
めて僅かなものであった。
実施例２
Ａ−６株の培養における培地成分の検討（炭素源の検討
）： 実施例に記載した培養条件において、窒素源として硫安
１％を用い、炭素源として種々の化合物を実験した。培
養菌体の無細胞抽出液中のＤ−アミノアシラーゼ活性を
Ｎ−アセチルーＤ−グルタミン酸を用いて測定し、表−
１の結果を得た。酵素単位および比活性は実施例１の活
性測定法により下式に従って算出した。
）： 実施例に記載した培養条件において、窒素源として硫安
１％を用い、炭素源として種々の化合物を実験した。培
養菌体の無細胞抽出液中のＤ−アミノアシラーゼ活性を
Ｎ−アセチルーＤ−グルタミン酸を用いて測定し、表−
１の結果を得た。酵素単位および比活性は実施例１の活
性測定法により下式に従って算出した。
表−１
Δ−６株の培養における培地成分の検討（窒素源の検討
）： 実施例１に記載した培養条件において、炭素源としてグ
ルコース１％を用い、窒素源として種々の化合物を実験
し、実施例２と同様にＤ一丁ミノアシラーゼ生成量を測
定し、表−２の結果を得た。
）： 実施例１に記載した培養条件において、炭素源としてグ
ルコース１％を用い、窒素源として種々の化合物を実験
し、実施例２と同様にＤ一丁ミノアシラーゼ生成量を測
定し、表−２の結果を得た。
表−２
以下余白
実施例４
Ａ−６株培養液よりＤ−アミノアシラーゼの分離精製：
Ａ−６株をペブトンを炭素、窒素源、０、２％Ｎ−アセ
ヂルーＤＬ−グルタミン酸を誘導剤として実施例１に従
って３０℃で１８時間振盪培養し、その培養液４ｐを遠
心分離し菌体を分離する。得られた閑体２１．６ｇ（湿
重量）を１０ｍＭＩＪン酸カリウム緩衝液ｐｌ１７．０
に懸濁し、超音波により菌体を破砕した。この様にして
得た無細胞抽出液を硫安分画（２０〜６０％）し、１０
ｍＭリン酸カリウム緩衡液ｐｌ＋７．０で透析したのち
、この緩衝液で平衡化したＤＢ八Ｂ−セルロースに吸着
させた。カラムを０． １ Ｍ − ＮａＣｊ７で洗浄
後、０． １ ５ Ｍ − ＮａＣ．ｉ！でＤ−アミノ
アシラーゼ活性を溶離した。この活性画分を濃縮後セフ
ァデックスＧ−１５０カラムクロマトグラフィーによっ
て精製して精製Ｄ一了ミノアシラーゼを得た。各精製段
階の収率および活性の」二昇は表−３に示すとおりであ
る。
ヂルーＤＬ−グルタミン酸を誘導剤として実施例１に従
って３０℃で１８時間振盪培養し、その培養液４ｐを遠
心分離し菌体を分離する。得られた閑体２１．６ｇ（湿
重量）を１０ｍＭＩＪン酸カリウム緩衝液ｐｌ１７．０
に懸濁し、超音波により菌体を破砕した。この様にして
得た無細胞抽出液を硫安分画（２０〜６０％）し、１０
ｍＭリン酸カリウム緩衡液ｐｌ＋７．０で透析したのち
、この緩衝液で平衡化したＤＢ八Ｂ−セルロースに吸着
させた。カラムを０． １ Ｍ − ＮａＣｊ７で洗浄
後、０． １ ５ Ｍ − ＮａＣ．ｉ！でＤ−アミノ
アシラーゼ活性を溶離した。この活性画分を濃縮後セフ
ァデックスＧ−１５０カラムクロマトグラフィーによっ
て精製して精製Ｄ一了ミノアシラーゼを得た。各精製段
階の収率および活性の」二昇は表−３に示すとおりであ
る。
以下余白
実施例５
Ｄ−アミノアシラーゼの基質特異性：
実施例４により得た精製酵素を用いて各種Ｎアセチルー
Ｄ−アミノ酸に対するＤ−アミノアシラーゼ活性を実施
例１に従って測定した。活性はＮ−アセチルーＤ−グル
タミン酸に対するＤ−アミノアシラーゼ活性を１００と
して計算し、表４に示す結果を得た。
Ｄ−アミノ酸に対するＤ−アミノアシラーゼ活性を実施
例１に従って測定した。活性はＮ−アセチルーＤ−グル
タミン酸に対するＤ−アミノアシラーゼ活性を１００と
して計算し、表４に示す結果を得た。
表−４
実施例６
Ｄ−アミノアシラーゼ活性に及ぼす金属イオンの影曹：
実施例４に従って精製したＤ−アミノアシラーゼを用い
て、Ｄ−アミノアシラーゼ活性に及ぼす金属イオンの影
蕾を実験した。活性の測定は実施例１に記載する方法に
従って行ない、金属イオン１ ｍＭを添加して、無添加
の場合を１００とした相対活性により金属イオンの影曹
を求め、表−５に示す結果を得た。
て、Ｄ−アミノアシラーゼ活性に及ぼす金属イオンの影
蕾を実験した。活性の測定は実施例１に記載する方法に
従って行ない、金属イオン１ ｍＭを添加して、無添加
の場合を１００とした相対活性により金属イオンの影曹
を求め、表−５に示す結果を得た。
以下余白
表−５
実施例７
Ｄ−アミノアシラーゼ活性に及ぼすｒｏｌｌの影響：実
施例４に従って精製したＤ−アミノアシラーゼを用いて
、実施例１に記載する活性測定に用いるリン酸緩衝液の
ｐＨを変えて、Ｎ−アセチルーＤ一グルタミン酸に対す
るＤ−アミノアシラーゼ活性を測定した。結果は第３図
のとおりである。
施例４に従って精製したＤ−アミノアシラーゼを用いて
、実施例１に記載する活性測定に用いるリン酸緩衝液の
ｐＨを変えて、Ｎ−アセチルーＤ一グルタミン酸に対す
るＤ−アミノアシラーゼ活性を測定した。結果は第３図
のとおりである。
実施例８
Ｄ−アミノアシラーゼ活性の熱安定性：実施例４に従っ
て精製したＤ−アミノアシラーゼをリン酸カリウム緩衝
液ｐＨ７．０に溶解して３０〜７０℃で１０分間加熱処
理したのち残存するＤアミノアシラーゼ活性を実施例１
に従って測定した。その結果は第４図のとおりである。
て精製したＤ−アミノアシラーゼをリン酸カリウム緩衝
液ｐＨ７．０に溶解して３０〜７０℃で１０分間加熱処
理したのち残存するＤアミノアシラーゼ活性を実施例１
に従って測定した。その結果は第４図のとおりである。
第１図はＡ−６株の培養物の無細胞抽出液をＤＢＡＢセ
ノレロース力ラムク口マトグラフィ−１こイ寸シたとき
の溶出パターンを示す図である。第２図はＤ一及びＬ−
アミノアシラーゼ活性とＮ−アセチルーＤＬ−グルタミ
ン酸添加濃度との関係を示す図である。第３図はＤ−ア
ミノアシラーゼ活性と培地ｐａｌとの関係を示す図であ
る。第４図はＤ−アミノアシラーゼ活性の熱安定性を示
す図である。 以 上
ノレロース力ラムク口マトグラフィ−１こイ寸シたとき
の溶出パターンを示す図である。第２図はＤ一及びＬ−
アミノアシラーゼ活性とＮ−アセチルーＤＬ−グルタミ
ン酸添加濃度との関係を示す図である。第３図はＤ−ア
ミノアシラーゼ活性と培地ｐａｌとの関係を示す図であ
る。第４図はＤ−アミノアシラーゼ活性の熱安定性を示
す図である。 以 上
Claims (3)
- （１）次の理化学的性質を有するＤ−アミノアシラーゼ ［１］作用及び特異性 Ｎ−アセチル−Ｄ−グルタミン酸に作用し てＤ−グルタミン酸および酢酸を生成し、 Ｎ−アセチル−Ｄ−アスパラギン酸、Ｎ− アセチル−Ｄ−アラニン、Ｎ−アセチル− Ｄ−ロイシン、Ｎ−アセチル−Ｄ−メチオ ニン、Ｎ−アセチル−Ｄ−フェニルアラニ ン、Ｎ−アセチル−Ｄ−トリプトファン、 Ｎ−アセチル−Ｄ−バリンに対しては活性 を示さない。 ［２］至適ｐＨ： ｐＨ６．８〜７．２（リン酸カリウム緩衝液）である。 ［３］最適温度： 活性発現の最適温度は４５〜５０℃である。 ［４］熱安定性： ６０℃１０分間の加熱処理後、約４０％の 活性が残存している。 ［５］金属イオンの作用： 金属イオンにより活性化されず、Ｆｅ＾２＾＋、Ｃｕ＾
２＾＋、Ｈｇ＾２＾＋、Ｃｏ＾２＾＋、Ｎｉ＾２＾＋に
より活性阻害される。 ［６］分子量： 約４２，０００（ゲル濾過法による）。 - （２）アルカリゲネス属に属するＤ−アミノアシラーゼ
生産菌をＮ−アセチル−Ｄ−グルタミン酸を含む培地中
で培養し、培養物よりＤ−アミノアシラーゼを採取する
ことを特徴とするＤ−アミノアシラーゼの製造方法。 - （３）アルカリゲネス属に属するＤ−アミノアシラーゼ
生産菌がアルカリゲネス・キシロースオキシタンス・サ
ブスピーシーズ・キシロースオキシタンス（Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｓ ＸｙｌｏｓｏｘｙｄａｎｓＳｕｂｓｐ．
Ｘｙｌｏｓｏｘｙｄａｎｓ）Ａ−６である請求項２記載
のＤ−アミノアシラーゼの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1052830A JP2869793B2 (ja) | 1989-03-07 | 1989-03-07 | 酸性ｄ―アミノ酸に作用するｄ―アミノアシラーゼ及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1052830A JP2869793B2 (ja) | 1989-03-07 | 1989-03-07 | 酸性ｄ―アミノ酸に作用するｄ―アミノアシラーゼ及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02234677A true JPH02234677A (ja) | 1990-09-17 |
| JP2869793B2 JP2869793B2 (ja) | 1999-03-10 |
Family
ID=12925762
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1052830A Expired - Fee Related JP2869793B2 (ja) | 1989-03-07 | 1989-03-07 | 酸性ｄ―アミノ酸に作用するｄ―アミノアシラーゼ及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2869793B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994001577A1 (fr) * | 1992-07-03 | 1994-01-20 | Research Association For Biotechnology Of Agricultural Chemicals | Procede de production d'un d-aminoacide optiquement actif |
| WO2000023598A1 (en) * | 1998-10-20 | 2000-04-27 | Chirotech Technology Limited | Aminoacylase and its use in the production of d-aminoacids |
| JP2008061642A (ja) * | 2006-08-10 | 2008-03-21 | Toyobo Co Ltd | Ｄ−アミノ酸の製造方法 |
-
1989
- 1989-03-07 JP JP1052830A patent/JP2869793B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994001577A1 (fr) * | 1992-07-03 | 1994-01-20 | Research Association For Biotechnology Of Agricultural Chemicals | Procede de production d'un d-aminoacide optiquement actif |
| WO2000023598A1 (en) * | 1998-10-20 | 2000-04-27 | Chirotech Technology Limited | Aminoacylase and its use in the production of d-aminoacids |
| JP2008061642A (ja) * | 2006-08-10 | 2008-03-21 | Toyobo Co Ltd | Ｄ−アミノ酸の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2869793B2 (ja) | 1999-03-10 |
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