JPH0227982A - 香料植物の組織培養法 - Google Patents
香料植物の組織培養法Info
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- JPH0227982A JPH0227982A JP63175539A JP17553988A JPH0227982A JP H0227982 A JPH0227982 A JP H0227982A JP 63175539 A JP63175539 A JP 63175539A JP 17553988 A JP17553988 A JP 17553988A JP H0227982 A JPH0227982 A JP H0227982A
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- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、香料植物体より得られた植物Ｍｉ織を培養す
るに際し、光を生産培養期間照射することにより、効果
的に香料成分を生産させることを可能とした植物の組ｍ
埼養法に関する。
るに際し、光を生産培養期間照射することにより、効果
的に香料成分を生産させることを可能とした植物の組ｍ
埼養法に関する。
ヴィオラ属に属する植物の組織を培養し、培養物から組
織塊を分化誘導せしめ、該組織塊中に産生蓄積された精
油成分を取得する方法が知られている。（特開昭６ｌ−
７８３９３）Ｌかし、外植え植物よりも精油成分高含量
の培養物を得ることは非常に困難であった。
織塊を分化誘導せしめ、該組織塊中に産生蓄積された精
油成分を取得する方法が知られている。（特開昭６ｌ−
７８３９３）Ｌかし、外植え植物よりも精油成分高含量
の培養物を得ることは非常に困難であった。
本発明は、香料植物体より得られた植物組織を培養する
に際し、光を生産培養期間照射することにより、効果的
に高精油含量培養物を取得することを目的としている。
に際し、光を生産培養期間照射することにより、効果的
に高精油含量培養物を取得することを目的としている。
本発明は、ヴィオラ属に属する香料植物体を培養し、培
養物からカルスまたは不定芽を分化誘導せしめ、ついで
該カルスまたは不定芽を増殖培養するに際し、Ｉ Ｏ０
００〜３００００ Ｌ ｕ ｘの光を生産培養期間照射
して香料成分を生産させることを特徴とした香料植物の
組織培養法である。
養物からカルスまたは不定芽を分化誘導せしめ、ついで
該カルスまたは不定芽を増殖培養するに際し、Ｉ Ｏ０
００〜３００００ Ｌ ｕ ｘの光を生産培養期間照射
して香料成分を生産させることを特徴とした香料植物の
組織培養法である。
かかる本発明が適用される植物としては、ヴィオラ グ
リボセラス（Ｖｉｏｌａ ｇｒｙｐｏｃｅｒａｓ） ＋
ヴィオラ オリエンタルス（Ｖ、 ｏｒｉｅｎｔａ
ｌｉｓ ） 、 ヴィオラ プランデフオルミス（Ｖ
、 ｂｌａｎｄａｅｆｏｒｍｉｓ） 。
リボセラス（Ｖｉｏｌａ ｇｒｙｐｏｃｅｒａｓ） ＋
ヴィオラ オリエンタルス（Ｖ、 ｏｒｉｅｎｔａ
ｌｉｓ ） 、 ヴィオラ プランデフオルミス（Ｖ
、 ｂｌａｎｄａｅｆｏｒｍｉｓ） 。
ヴィオラ オプツーサ（Ｖ、 ｏｂｔｕｓａ ） 、ヴ
ィオラヴィオラセラ（Ｖ、 ｖｉｏｌａｃｅａ ） ＋
ヴィオラ ミノール（Ｖ、 ｍ１ｎｏｒ） 、ヴィオ
ラ ジャポニカ（Ｖ。
ィオラヴィオラセラ（Ｖ、 ｖｉｏｌａｃｅａ ） ＋
ヴィオラ ミノール（Ｖ、 ｍ１ｎｏｒ） 、ヴィオ
ラ ジャポニカ（Ｖ。
ｊａｐａｎｉｃａ） ＊ ヴィオラ オヴ１トーオブロ
ンガ（Ｖ、 ｏｖａｔｏ −ｏｂｌｏＢａ ） 、ヴィ
オラ ロツシー力（Ｖ、 ｒｏｓｓｉｃａ） 、ヴィオ
ラ トリコロール（Ｖ。
ンガ（Ｖ、 ｏｖａｔｏ −ｏｂｌｏＢａ ） 、ヴィ
オラ ロツシー力（Ｖ、 ｒｏｓｓｉｃａ） 、ヴィオ
ラ トリコロール（Ｖ。
ｔｒｉｃｏｌｏｒ） 、ヴィオラ オドソーダ（Ｖ、
ｏｄｏｒａｔａ）等のヴィオラ属に属する香料植物が挙
げられる。
ｏｄｏｒａｔａ）等のヴィオラ属に属する香料植物が挙
げられる。
本発明で取り扱う光源は、波長３００〜７００ｎｍの光
を含んだものであればよく、例えば市販の蛍光灯、白色
灯、メタルハライド灯、ナトリウム灯等が用いられる。
を含んだものであればよく、例えば市販の蛍光灯、白色
灯、メタルハライド灯、ナトリウム灯等が用いられる。
以下に本発明の方法につき説明する。
ヴィオラ属に属する香料植物を流水下でよく水洗後、葉
、茎、根部に切り分け、エタノールまたは塩化ベンザル
コニウムに瞬時浸した後、水洗いし、次亜塩素酸ソーダ
に浸して殺菌し、引き続いてｗｔｉ！Ｉ水で洗浄し、培
地を入れた試験管または三角フラスコ中に載置する。使
用する培地は植物組織培養において通常使用されるもの
であれば適用可能であり、特に限定されるものではなく
、例えばリンスマイヤー スクーグ、ムラシゲ スクー
グ９ Ｂ５．ニンチ＆ニッチ、ホワイト等の培地が挙げ
られる。そして実際に培養するに際しては、これらの基
本培地に糖類、ビタミン類および必要に応じて生長調節
物質等を配合したものを用いる。
、茎、根部に切り分け、エタノールまたは塩化ベンザル
コニウムに瞬時浸した後、水洗いし、次亜塩素酸ソーダ
に浸して殺菌し、引き続いてｗｔｉ！Ｉ水で洗浄し、培
地を入れた試験管または三角フラスコ中に載置する。使
用する培地は植物組織培養において通常使用されるもの
であれば適用可能であり、特に限定されるものではなく
、例えばリンスマイヤー スクーグ、ムラシゲ スクー
グ９ Ｂ５．ニンチ＆ニッチ、ホワイト等の培地が挙げ
られる。そして実際に培養するに際しては、これらの基
本培地に糖類、ビタミン類および必要に応じて生長調節
物質等を配合したものを用いる。
生長調節物質としては例えばインドール−３−酢Ｈ（Ｉ
ＡＡ） 、 イア Ｆ−ルー ３−＠酸（ＩＢＡ）。
ＡＡ） 、 イア Ｆ−ルー ３−＠酸（ＩＢＡ）。
α−ナフタレン酢＃Ｉ （ＮＡＡ）、２．４−ジクロロ
フェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）等のオーキシン類、カイ
ネチン（Ｋｎ）、ベンジルアデニン（ＢＡ）等のサイト
カイニン類等が挙げられ、これらは単独で、または適宜
組合わせて使用される。かかる培地中、３０００Ｌｕｘ
程度の光照射下大略２２〜３０℃で培養を続けると、約
１週間から８週間程度で培養物からカルスおよび不定芽
が発生する。
フェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）等のオーキシン類、カイ
ネチン（Ｋｎ）、ベンジルアデニン（ＢＡ）等のサイト
カイニン類等が挙げられ、これらは単独で、または適宜
組合わせて使用される。かかる培地中、３０００Ｌｕｘ
程度の光照射下大略２２〜３０℃で培養を続けると、約
１週間から８週間程度で培養物からカルスおよび不定芽
が発生する。
この際、カルスおよび不定芽の質（色、形態）や量は生
長調節物質であるオーキ、シン履とサイトカイニン類と
の配合量、＆Ｉｌ＄１培養に供した植物組織に主として
依存するが、ヴィオラ属に属する植物についてこれらの
条件を示すと、１０−’〜１０″８Ｍのオーキシン類と
１０−’〜１０−”Ｍのサイトカイニン類とを含有する
培地中で葉または根からの培養を開始するとカルスおよ
び不定芽を得やすい、とりわけ、オーキシンレベルを１
０−？〜１０−”Ｍとした場合は緑色カルスを生じ、こ
れらは生育も早く、以下に述べる選抜によっても望まし
い成分を含む良いにおいのカルスを得やすい。
長調節物質であるオーキ、シン履とサイトカイニン類と
の配合量、＆Ｉｌ＄１培養に供した植物組織に主として
依存するが、ヴィオラ属に属する植物についてこれらの
条件を示すと、１０−’〜１０″８Ｍのオーキシン類と
１０−’〜１０−”Ｍのサイトカイニン類とを含有する
培地中で葉または根からの培養を開始するとカルスおよ
び不定芽を得やすい、とりわけ、オーキシンレベルを１
０−？〜１０−”Ｍとした場合は緑色カルスを生じ、こ
れらは生育も早く、以下に述べる選抜によっても望まし
い成分を含む良いにおいのカルスを得やすい。
誘導されたカルスは、小さな塊に分けて、寒天培地また
は液体培地にて、１５００Ｌｕｘ程度の光照射下でさら
に培養を続ける。（寒天培地での墳養カルス塊を株と呼
ぶ、液体培養では、フラスコなどの１つの容量中のカル
スを１株とする。）各株のカルスについて、においを官
能的に評価し、もとの植物に含まれている主成分の１つ
またはそれ以上の成分のにおいが惑しられる株を選びだ
して、さらに培養を重ね、選抜を操り返す０機器分析に
より成分評価したところ、上記選抜株の中に原植物のに
おい主成分が複数以上認められる株を得ることができた
。なお、選抜株を液体継代培養するに際しては、ホルモ
ン無添加培地においてもホルモン添加培地と同様の増殖
と香料成分を含む株が出現するため、ホルモンは培地に
添加してもしなくてもよい。
は液体培地にて、１５００Ｌｕｘ程度の光照射下でさら
に培養を続ける。（寒天培地での墳養カルス塊を株と呼
ぶ、液体培養では、フラスコなどの１つの容量中のカル
スを１株とする。）各株のカルスについて、においを官
能的に評価し、もとの植物に含まれている主成分の１つ
またはそれ以上の成分のにおいが惑しられる株を選びだ
して、さらに培養を重ね、選抜を操り返す０機器分析に
より成分評価したところ、上記選抜株の中に原植物のに
おい主成分が複数以上認められる株を得ることができた
。なお、選抜株を液体継代培養するに際しては、ホルモ
ン無添加培地においてもホルモン添加培地と同様の増殖
と香料成分を含む株が出現するため、ホルモンは培地に
添加してもしなくてもよい。
また、誘導された不定芽は、寒天培地上で株分けまたは
切片にし、２２〜３０℃、１５００Ｌｕｘ光照射下で培
養を続けると、容易に不定芽を継代することが可能とな
る。この不定芽も機器分析により成分評価したところ、
原植物のにおい主成分が複数以上認められた。
切片にし、２２〜３０℃、１５００Ｌｕｘ光照射下で培
養を続けると、容易に不定芽を継代することが可能とな
る。この不定芽も機器分析により成分評価したところ、
原植物のにおい主成分が複数以上認められた。
上述の方法で得られたカルス、不定芽を、エアーリフト
培養槽または大型ジャーファメンターで、１０日間〜１
ケ月間、好ましくは２週間の生産培養（スケールアップ
培養）を行なうに際し、１００００〜３００００ Ｌ
ｕ ｘの光を照射する。
培養槽または大型ジャーファメンターで、１０日間〜１
ケ月間、好ましくは２週間の生産培養（スケールアップ
培養）を行なうに際し、１００００〜３００００ Ｌ
ｕ ｘの光を照射する。
この光照射は、連続照射が好ましいが、断続的な照射に
よっても本発明の効果は一１＝４得られる。
よっても本発明の効果は一１＝４得られる。
その後、これらのカルス、不定芽から、例えば石油エー
テル等の溶媒を用いて抽出する方法や水蒸気蒸留法など
通常使用される公知の方法により精油成分を取得する。
テル等の溶媒を用いて抽出する方法や水蒸気蒸留法など
通常使用される公知の方法により精油成分を取得する。
この光照射により得られたアブソリエートには、ヴィオ
ラ属特有の香気成分であるノエジエナール、ノエジエノ
ールが、市販品のアブソリエートに対して１．５〜３倍
の高含量存在していた。なお、本明細書中の「市販品の
アブソリュート」とは、上記香料成分の含量が高いシャ
ラボ−社製アブソリュートである。
ラ属特有の香気成分であるノエジエナール、ノエジエノ
ールが、市販品のアブソリエートに対して１．５〜３倍
の高含量存在していた。なお、本明細書中の「市販品の
アブソリュート」とは、上記香料成分の含量が高いシャ
ラボ−社製アブソリュートである。
従来、数千Ｌｕｘ光照射下での生産培養は実施されてい
るが、本発明のように強照度での光照射生産培養は今ま
で行なわれておらず、これにより高精油含量培養物を取
得可能としたことは非常に重要な点である。
るが、本発明のように強照度での光照射生産培養は今ま
で行なわれておらず、これにより高精油含量培養物を取
得可能としたことは非常に重要な点である。
以下実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、こ
れは本発明を限定するものではない。
れは本発明を限定するものではない。
実施例−１ヴィオラ オドラータ組織塊ヴィオラ オド
ソーダを流水で水洗後、葉をエタノールに瞬時浸した後
、水洗いし、次亜塩素酸ソーダに浸して殺菌し、引き続
いて滅菌水で洗浄し、ＭＳ培地（ホルモン濃度：２．４
−Ｄｌｏ−・Ｍ、ＢＡ １０−’Ｍ）を入れた三角フラ
スコ中にａ置した。かかる培地中、３０００Ｌｕｘ光照
射下２８℃で培養を続けて、２ケ月はどでカルスを得た
。このカルスをＭＳ培地、（ホルモン濃度下にて２ケ月
はど液体培養して馴化させ、ホルモ月はどで安定なカル
スが得られた。このカルスはブドウの房状の形態をして
おり、継代時に房状のものを１つ１つ分離することによ
り、安定で均一なカルスを得ることができた。また、生
産培養（スケールアップ培養）の際においても、房状の
ものを分離することにより増殖率が従来に比べ改善され
た。
ソーダを流水で水洗後、葉をエタノールに瞬時浸した後
、水洗いし、次亜塩素酸ソーダに浸して殺菌し、引き続
いて滅菌水で洗浄し、ＭＳ培地（ホルモン濃度：２．４
−Ｄｌｏ−・Ｍ、ＢＡ １０−’Ｍ）を入れた三角フラ
スコ中にａ置した。かかる培地中、３０００Ｌｕｘ光照
射下２８℃で培養を続けて、２ケ月はどでカルスを得た
。このカルスをＭＳ培地、（ホルモン濃度下にて２ケ月
はど液体培養して馴化させ、ホルモ月はどで安定なカル
スが得られた。このカルスはブドウの房状の形態をして
おり、継代時に房状のものを１つ１つ分離することによ
り、安定で均一なカルスを得ることができた。また、生
産培養（スケールアップ培養）の際においても、房状の
ものを分離することにより増殖率が従来に比べ改善され
た。
上記のカルスを、２１エアーリフトを用いて、１５００
〜３００００ Ｌ ｕ ｘの光を連続照射して、２週間
液体堵養した。その後、その培養物から、香料成分を、
通常行なわれている石油エーテルで抽出する方法を用い
て抽出し、アブソリエートを得て、ガスクロマトグラフ
ィー分析を行った。その結果を表１に示す。
〜３００００ Ｌ ｕ ｘの光を連続照射して、２週間
液体堵養した。その後、その培養物から、香料成分を、
通常行なわれている石油エーテルで抽出する方法を用い
て抽出し、アブソリエートを得て、ガスクロマトグラフ
ィー分析を行った。その結果を表１に示す。
なお、ガスクロマトグラフィーは下記の測定条件で行っ
た。
た。
機種：島津ＧＣ−１５Ａ
カラム： ＰＩＥ０２０Ｍキャピラリーカラム（０，２
ｍｍｘ５０ｍｍ） インジェクシッン温度＝２５０℃ オーブン温度二６０℃−２００℃ ３℃／ ｍ ｉ ｎ キャリアーガス： Ｈｅ ｌ ｍ １ ／ ｍ ｉ
ｎ検出器：ＦＩＤ ヴィオラ オドソーダの墳、獲物は、１００００〜３０
０００Ｌｕｘの光照射により、ノナジェナール、ノナジ
ェナールの含量が一市販品よりも著しく高く、効果的に
香料成分を生産することが示された。
ｍｍｘ５０ｍｍ） インジェクシッン温度＝２５０℃ オーブン温度二６０℃−２００℃ ３℃／ ｍ ｉ ｎ キャリアーガス： Ｈｅ ｌ ｍ １ ／ ｍ ｉ
ｎ検出器：ＦＩＤ ヴィオラ オドソーダの墳、獲物は、１００００〜３０
０００Ｌｕｘの光照射により、ノナジェナール、ノナジ
ェナールの含量が一市販品よりも著しく高く、効果的に
香料成分を生産することが示された。
本発明は、以上説明したように構成されているので、以
下に記載されるような効果を奏する。
下に記載されるような効果を奏する。
ヴィオラ属に属する香料植物体より得られた植物組織を
培養するに際し、１００００〜３００００Ｌｕｘの光を
生産培養期間照射することにより、効果的に香料成分を
生産させることを可能とした。
培養するに際し、１００００〜３００００Ｌｕｘの光を
生産培養期間照射することにより、効果的に香料成分を
生産させることを可能とした。
表１
手続補正書（自発）
１．事件の表示
昭和６３年特許願第１７５５３９号
２発明の名称
香料植物の組織培養法
３、補正をする者
事件との関係 特許出願人
住所 東京都墨田区墨田五丁目１７番４号〒５３４
大阪市部島区友淵町−丁目５番９０号６、補正の内容 （１） 明細書第４真第１３行目から第１４行目にか
けて’３０００Ｌｕｘ程度の光照射下１とあるを、７１
６〜２４時間の５０００Ｌｕｘ程度の光照射と８〜０時
間の明期保持とを交互に行い、１と訂正する。
大阪市部島区友淵町−丁目５番９０号６、補正の内容 （１） 明細書第４真第１３行目から第１４行目にか
けて’３０００Ｌｕｘ程度の光照射下１とあるを、７１
６〜２４時間の５０００Ｌｕｘ程度の光照射と８〜０時
間の明期保持とを交互に行い、１と訂正する。
（２）明細書第５頁第１Ｏ行目から第１１行目にかけて
ｆ１５００Ｌｕｘ程度の光照射下で１とあるを、ｒ１６
〜２４時間の１５００〜５０００Ｌｕｘ程度の光照射と
８〜０時間の明期保持とを交互に行い、大略２２〜３０
℃で１と訂正する。
ｆ１５００Ｌｕｘ程度の光照射下で１とあるを、ｒ１６
〜２４時間の１５００〜５０００Ｌｕｘ程度の光照射と
８〜０時間の明期保持とを交互に行い、大略２２〜３０
℃で１と訂正する。
（３）明細書第６頁第６行目から第７行目にかけてｒ２
２〜３０℃、１５００Ｌｕｘ光照射下テＪ トアルを、
’１６〜２４１１１１ｆｏｌ（７）１５００〜５０００
Ｌｕｘ程度の光照射と８〜０時間の明期保持とを交互に
行い、大略２２〜３０℃で１と訂正する。
２〜３０℃、１５００Ｌｕｘ光照射下テＪ トアルを、
’１６〜２４１１１１ｆｏｌ（７）１５００〜５０００
Ｌｕｘ程度の光照射と８〜０時間の明期保持とを交互に
行い、大略２２〜３０℃で１と訂正する。
（４）明細書第６頁第１２行目においてｔジ中−ファメ
ンターで、１とあるつぎに、ｒ大略２２〜３０℃で１を
挿入する。
ンターで、１とあるつぎに、ｒ大略２２〜３０℃で１を
挿入する。
（５）明細書第６頁第１３行目においてｒ２週間の１と
あるを、「２週間程度の１と訂正する。
あるを、「２週間程度の１と訂正する。
（６） 明細書第８頁第１８行目においてｒ連続照射
して、１とあるつぎにｒ２８°Ｃで１を挿入する。
して、１とあるつぎにｒ２８°Ｃで１を挿入する。
（７）明細書第９頁第８行目においてｒ５０閣１とある
を、ｒ５０ｍ１と訂正する。
を、ｒ５０ｍ１と訂正する。
以上
Claims (1)
- ヴィオラ属に属する香料植物体を培養し、培養物からカ
ルスまたは不定芽を分化誘導せしめ、ついで該カルスま
たは不定芽を増殖培養するに際し、１００００〜３００
００Ｌｕｘの光を生産培養期間照射して、香料成分を生
産させることを特徴とした香料植物の組織培養法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63175539A JPH0227982A (ja) | 1988-07-14 | 1988-07-14 | 香料植物の組織培養法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63175539A JPH0227982A (ja) | 1988-07-14 | 1988-07-14 | 香料植物の組織培養法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0227982A true JPH0227982A (ja) | 1990-01-30 |
| JPH0375156B2 JPH0375156B2 (ja) | 1991-11-29 |
Family
ID=15997846
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63175539A Granted JPH0227982A (ja) | 1988-07-14 | 1988-07-14 | 香料植物の組織培養法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0227982A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006025786A (ja) * | 2004-06-18 | 2006-02-02 | Nisshoku Corp | 薬用植物細胞培養方法 |
| CN103004611A (zh) * | 2013-01-21 | 2013-04-03 | 四川农业大学 | 早开堇菜组织培养及快速繁殖的方法 |
-
1988
- 1988-07-14 JP JP63175539A patent/JPH0227982A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006025786A (ja) * | 2004-06-18 | 2006-02-02 | Nisshoku Corp | 薬用植物細胞培養方法 |
| CN103004611A (zh) * | 2013-01-21 | 2013-04-03 | 四川农业大学 | 早开堇菜组织培养及快速繁殖的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0375156B2 (ja) | 1991-11-29 |
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