JPH02288898A - ヒトｂ細胞刺激因子２レセプター蛋白質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はヒトＢ細胞刺激因子２レセプター活性を有する
蛋白質（以下１１ＳＦ２レセ、ブタ−と略ず）および該
蛋白質をコードするＤＮＡ配列、さらには該蛋白質を遺
伝子工学的に生産するための手段および方法に関するも
のである。

〔従来の技術〕

Ｂ細胞刺激因子（以下ＦＩＳＩ？２と略ず）はＢ細胞の
抗体産生細胞への分化を誘導する因子として研究されて
いる。近年になってＩ（Ｓｌ’２をコー１−するｃ−Ｄ
ＮＡが単離され、Ｄ　Ｎ　Ａ配列に関する情報および精
製されたＢＳＦ　２の部分的なアミノ酸配列等の情報よ
り、ＢＳＦ　２は２８アミノ酸残基のシグナルペプチＩ
゛を有する、１８４アミノ酸残基から構成されているこ
とが明らかとなった。最近の知見を総合すると、ＢＳＦ
　２はＢ細胞に抗体産生を誘導し、ハイブリドーマ、）
゛ラズマザイ１−−マ、ミコニローマ等を増殖させＨＬ
ＡクラスＩ抗原の発現を誘導し、血液幹細胞にコロニー
を誘導し、肝臓細胞に急性期蛋白質を誘導し、神経細胞
に突起を誘導すると考えられる。この様に、ＢＳＦ　２
は種々の重要な生理活性を有し、広（細胞の増殖に関与
していると考えられている（平野ら、第１７回日本免疫
学会抄録、ｐ９１．１９８７年等参照）。

一方、ＢＳＦ　２の異常産生が心房内粘液腫、子宮けい
癌、ミエローマ、慢性関節リューマチ、キャンスルマン
症候群等の疾患における免疫異常の病因因子である可能
性が報告されている（平野ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａ
ｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、八、８４巻、ｐ２２８　１９
８７年等参照）。従って、ＢＳＦ　２阻害剤の開発はこ
れらの疾患の治療薬又は診断薬等の開発につながると期
待されている。

ＢＳＦ　２と特異的に結合する細胞膜」二のＢ５１１２
レセプターは、７．Ｔａｇａらにより解析され、各細胞
」二の数、ＢＳＦ　２との結合定数等が報告されている
（Ｊ、　ｔＥｘｐ、　Ｍｅｄ、　、　１９６．　ｐ９６
７、１．９８７年参照）。細胞表層より離脱しているＢ
ＳＦ　２レセプターは、前記免疫疾患等の治療薬、診断
薬等として期待され、今後の研究等の進展が注目されて
いる。

ＢＳＦ　２レセプターのさらなる研究あるいは治療薬、
診断薬等としての利用には、大量の精製品を得る必要が
あるが、該レセプターの生体内での生産量は極めて微量
である。

ＢＳＦ　２レセプターの様な生体内の存在量が極めて微
量な蛋白質を大量に生産するために、遺伝子操作と一般
に呼ばれる遺伝子工学的な手法が用いられる。この手法
は一般的には目的とする蛋白質をコードするＤＮＡ配列
の平滑末端もしくは付着末端にたいしてこのＤＮＡ配列
を発現させるための例えばプロモータ系等のＤＮＡ配列
を、翻訳時に該ＤＮＡ配列から目的蛋白質が生産される
ように読取り可能に結合させ、このＤＮＡ配列を宿主と
して選定された微生物または培養細胞を形質転換可能な
ベクターに導入し、このベクターで宿主を形質転換した
後該ＤＮＡ配列を発現させるという方法である。この様
な蛋白質の遺伝子工学的手法による生産においては、目
的とする蛋白質をコードするＤＮＡ配列を得ることが必
要である。しかしながら、ＢＳＦ　２レセプクーに関し
てはその様な知見はいまのところ報告されていない、本
発明者は、Ｂ５ｌ１２レセプターについて鋭意研究を行
った結果、ＢＳＦ　２レセプターをコードするＤＮＡ配
列を明らかにし、この知見を基に遺伝子工学的にＢＳＦ
　２レセプクー活性を有する蛋白質を生産する手段およ
び方法を完成した。

即ち本発明は、 ヒトＢＳＦ　２と特異的に結合し得るヒトＢＳＦ　２レ
セプター活性を有する蛋白質： ヒトＢＳＦ　２レセプター活性を有する蛋白質をコード
するＤＮＡ配列； （Ｉ８） 組換微生物または培養細胞中で前記１）　Ｎ　Ａ配列を
発現し得る複製可能な発現ベクター；前記発現ベクター
により形質転換された微生物または培養細胞； 前記微生物または培養細胞を培養してＢ５Ｆ２レセプタ
ー活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ配列を発現さ
せることを特徴とするｌｌ５Ｆ２レセプター活性を有す
る蛋白質の製造方法： 前記蛋白質と特異的に結合するポリクローナル抗体又は
モノクローナル抗体；及び 該モノクローナル抗体を生産するハイシリト−マ・ を提供するものであり、以下詳細に説明する。

〔発明の詳細な説明〕

１、　　　ｎ５Ｆ２レセプター 生体内で本来的に生産されるｎｓｐ　２レセプタは、細
胞膜上に存在し、Ｂ５Ｆ２と特異的に結合する蛋白質で
あり、詳しくは次の式（Ｉ）（Ｎ末端） Ｍｅｔ　Ｌｅｕ　Ａｌａ 八ｌａ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ 八ｓｐ　　Ｓｅｒ　　Ｖａｌ Ｇｌｕ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｕ Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ Ｓｅｒ　　Ｇｌｙ　　Ａｓｎ Ａｒｇ　Ｐｒｏ＾１ａ 八ｓｐ　　Ｖａｌ　　Ｐｒ。

Ｃｙｓ　　Ｐｈｅ　　Ａｒｇ Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｔｂｒ Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ Ｐｈｅ　　Ｇｉｎ　　Ｇｌｕ Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　Ｌｙｓ Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ Ｖａｌ　　Ｇｌｙ　　Ｃｙｓ　　ＡｈａＡｌａ　　Ａｌ
ａ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｙ八ｒへ　　Ｃｙｓ　　Ｐｒｏ　
　ＡｌａＶａｔ　　Ｌｅｕ　　Ｔｈｒ　　５ｅｒＴｈｒ
　　Ｌｅｕ　　Ｔｈｒ　　Ｃｙｓ八ｓへ　　Ａｓｎ　　
Ａｌａ　　ＴｈｒＬｙｓ　　ｌ’ｒｏ　　Ａｌａ　　Ａ
ｌａＴｒｐ　　Ａｌａ　　Ｇｌｙ　　ＭｅｔＡｒｇ　　
Ｓｅｒ　　Ｖａｌ　　ＧｉｎＴｙｒ　　Ｓｅｒ　　Ｃｙ
ｓ　　ＴｙｒＧｌｙ　　Ｔｈｒ　　Ｖｅｉｌ　　ｌ１ｉ
ｓｒ’ｒｏ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｕ　　Ｐｒ。

Ｌｙｓ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　ＬｅｕＴｒｐ　　Ｇｌ
ｙ　　Ｐｒｏ　　ＡｒにＴｈｒ　　Ｌｙｓ　　ＡＩａ　
　ＶａｌＧｌｎ　　Ａｓｎ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒ。

Ｐｒｏ　　Ｃｙｓ　Ｇｌｎ　　Ｔｙｒ Ｐｈｅ　　Ｓｅｒ　　Ｃｙｓ　　Ｇｌｎ八ｓへ　　Ｓｅ
ｒ　　Ｓｅｒ　　ｒ’ｈｅＬｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ ＡＩａ　／ｌｅａ　　Ｌｅｕ Ｇｌｎ　　Ｇｌｕ　　Ｖａｌ Ｌｅｕ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｙ Ｐｒｏ　　Ｇｌｙ　　Ｖａｌ Ｖａｌ　　１ｌｉｓ　　Ｔｒｐ Ｇｌｙ　　Ｓｅｒ　　１ｌｉｓ Ｇｌｙ　　Ａｒｇ　　Ａｒｇ Ｌｅｕ　　１ｌｉｓ　　Ａｓｐ 八ｒｇ　　Ａｈａ　　Ｇｌｙ Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ｖａｌ Ｇｌｎ　　Ｌｅｕ　　５ｅｒ Ｓｅｒ　　Ａｓｎ　　Ｖａｌ Ｓｅｒ　　Ｔｈｒ　　Ｐｒ。

Ｌｅｕ　　１．ｅｕ　　Ｖａｌ 八Ｉａ　　Ｇｌｕ　　Ａｓｐ Ｓｅｒ　　Ｇｌｎ　　Ｇｌｕ Ｉ、ｅｕ　　Ａｌａ　　Ｖａｔ Ｔｙｒ　　Ｉｌｅ　　Ｖａｌ Ｓｅｒ　　Ｍｅｔ　　Ｃｙｓ　　ＶａｌＬｙｓ　　Ｐｈ
ｅ　　Ｓｅｒ　　ＬｙｓＣｙｓ　　Ｇｌｙ　　Ｉｃｅ　
　ＬｅｕＡｓｎ　　ｌｌｅ　　Ｔｌ＋ｒ　　ＶａｌＰｒ
ｏ　　Ａｒｇ　　Ｔｒｐ　　ＬｅｕＰｒｏ　　ｌ１ｉｓ
　　Ｓｅｒ　　Ｔｒｐｌ、、ｅｕ　　Ａｒｇ　　Ｐｈｅ
　　Ｇｌｕ八ｒへ　　Ｓｅｒ　　１．ｙｓ　　ＴｈｒＬ
ｙｓ　　Ａｓｐ　　ｌｅｕ　　Ｇｉｎ八ｓへ　　Ａｌ、
ａ　　Ｔｒｐ　　５ｅｒＧｉｎ　　Ｉ、ｅｕ　　Ａｒｇ
　　ＡｌａＧａｙ　　Ｇｌｕ　　Ｔｒｐ　　ＳｅｒＭｅ
ｔ　　Ｇｌｙ　　Ｔｂｒ　　Ｐｒ。

Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　ＧｌｕＭｅｔ　　Ｇｉ
ｎ　　Ａｈａ　　Ｉ、Ｇｌｌ八ｓへ　　Ａｓｎ　　Ｔｉ
ｅ　　Ｌｅｕ八Ｉへ　　Ｔｈｒ　　Ｓｅｒ　　ＬｅｕＳ
ｅｒ　　ＶＩｉｌ　　Ｐｒｏ　　ＬｃｕＧａｙ　　Ｇｌ
ｙ　　Ｓｅｒ　　ＬｅｕＣｙｓ　　Ｉｃｅ　　Ａｌａ　
　Ｉｌｅ八ｌへ　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　ＶａｌＴｂｒ
　　Ｇｌｎ　　Ｔ１＋ｒ　　円１８Ｇｌｎ　　Ｐｒｏ　
　Ａｓｐ　　Ｐｒ。

Ｔｈｒ　　Ａｌａ　　Ｖａｌ　八Ｉａ Ｓｅｒ　Ｖａｌ　　Ｔｂｒ　’ｒｒｐ 八Ｓｎへ　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　ＰｈｅＬｅｕ　　Ａｒ
ｇ　　Ｔｙｒ　　ＡｒＢＰｈｅ　Ｔ１１ｒ　Ｔｌ＋ｒ　
１ゝｒｌ）１１ｉｓ　　１ｌｉｓ　　Ｃｙｓ　　Ｖａｌ
ＧＩＶ　　Ｌｅｕ　　八ｒＢｌｌｉｓ Ｇｉｎ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｕ　　ＰｈｅＧｌｕ　　Ｔｒ
ｐ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒ。

Ｔｒｐ　　Ｔｈｒ　　Ｇｌｕ　　Ｓｅｒ八ｓへ　　Ｇｌ
ｕ　　Ｖｅｉｌ　　５ｅｒＴｈｒ　　Ｔｈｒ　　Ａｓｎ
　　ＬｙｓＰｈｅ　　Ａｒｇ　　Ａｓｐ　　５ｅｒＰｒ
ｏ　　Ｖａｌ　　Ｇｌｎ　　ＡｓｐＩ’ｒｏ　　Ｔｔ＋
ｒ　　Ｔ’１１ｅ　　Ｌｅｕ八Ｉへ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌ
ｙ　　ＴｂｒＶａｌ　　Ｌｅｕ　　ＡｒＩ＋　ＰｈｃＧ
ｌｙ　　５ｅｒ Ｇｉｎ　　Ｇｌｙ Ｐｒｏ　　八ｌａ 八ｒｇ　Ａｓｎ Ｇ　Ｉ　ｎ　　Ａ　ｓ　ｐ Ｔｙｒ　　Ａｒｃ； ΔｌａＧＩｕ Ｍｅｔ　　Ｖａｔ １１ｃｌｌｉｓ Ｖンｉ１　　Ｖａｌ ＧＩｙＧｉ〕 Ｇｌｕ　　八１ｄ 八ｒＢ　　５ｅｒ Ｔｈｒ　　Ｐｒ。

Ａｓｐ　　Ａｓｐ 八１．〕　八５ｎ Ｓｅｒ　　５ｅｒ Ｖａｌ　　ＡＩ＋ｉ Ｌ　［！　＋１　　Ｌ　ｅ　ｕ Ｌｙｓ　　１．ｙｓ Ｔｈｒ　　Ｔｒｐ　　Ｌｙｓ　　Ｌｅｕ　　ＡｒＢ　　
Ａｌａ　　１−ｅｕ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　ＧｌｙＬ
ｙｓ　　１Ｎ＋ｒ　　Ｓｅｒ　　Ｍｅｔ　　１ｌｉｓ　
　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｔｙｒ　　Ｓｅｒ　　ＬｅｕＧ
ｌｙ　　Ｇｉｎ　　Ｌｅｕ　　Ｖａｌ　　Ｐｒｏ　　Ｇ
ｌｕ　　Ａｒｇ　　Ｐｒｏ　　Ａｒｇ　Ｐｒ。

Ｔｈｒ　　Ｐｒｏ　　Ｖａｌ　　Ｌｅｕ　　Ｖａｌ　　
Ｐｒｏ　　Ｌｅｕ　　ｌｉｅ　　Ｓｅｒ　　Ｉ’ｒ。

Ｐｒｏ　　Ｖａｌ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ｓｅｒ　　
Ｓｅｒ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｙ　　Ｓｅｒ　　ＡｓｐＡｓ
ｎ　　Ｔｈｒ　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｈｉｓ　　Ａｓ
ｎ　　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　　Ａｓｐ　　Ａｈａ八ｒへ　　
Ａｓｐ　　Ｐｒｏ　　Ａｒｇ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　
Ｔｙｒ　　Ａｓｐ　　ｌｉｅ　　ＳｅｒΔｓｎ　　Ｔｈ
ｒ　　Ａｓｐ　　Ｔｙｒ　　Ｐｈｅ　　Ｉ’ｈｅ　　Ｐ
ｒｏ　　Ａｒｇ（Ｃ末端） （ただし、式中Ａｌａはアラニン、Ａｒｇはアルギニン
、Ａｓｎはアスパラギン、Ａｓｐはアスパラギン酸、Ｃ
ｙｓはシスティン、Ｇｉｎはグルタミン、Ｇ　ｌ　ｕは
グルタミン酸、Ｇｌｙはグリシン、ＩＴ　ｉ　ｓはヒス
チジン、ｌｌｅはイソロイシン、Ｌ　ｅ　ｕはロイシン
、Ｌｙｓはリジン、Ｍｅｔ、はメヂオニン、Ｐｈｃはフ
ェニルアラニン、Ｐｒｏはプロリン、Ｓｅｒはセリン、
Ｔｈｒばトレオニン、Ｔｒｐはトリプトファン してＶａｌはバリン残基を示ず）で表されるアミノ酸配
列を有するものである。

（２■） 前記式（１）で示されるアミノ酸配列は４６８アミノ酸
残基から成り、Ｎ末端側から第２番目に位置するロイシ
ンから第２２番目に位置するプロリンにかけてと、第３
６２番目に位置するバリンから第３８６番目に位置する
ロイシンにかけての部分に疎水性アミノ酸残基が位置し
ている。この二つの疎水性領域は、前者がシグナルペプ
チド領域、後者が膜貫通領域であると考えられる。なお
、本発明においては該シグナルペプチド領域と膜貫通領
域との間の領域を細胞外蛋白質（領域）と称し、該膜貫
通領域よりＣ末端側の領域を細胞内蛋白質（領域）と称
する。

本発明の蛋白質は前記アミノ酸配列を有する蛋白質の他
、前記アミノ酸配列に類似するアミノ酸配列を有し、Ｂ
ＳＦ　２と特異的に結合する性質を保持している蛋白質
又はポリペプチドであれば良い。

すなわち、前記アミノ酸配列中の１個もしくは複数個の
アミノ酸残基が他のアミノ酸残基により置換されており
、そして／又は１もしくは複数個のアミノ酸が欠失して
おり、そして又は１もしくは複数個のアミノ酸が前記ア
ミノ酸配列に付加されているアミノ酸列を有し、且つヒ
トＢ細胞刺激因子２と特異的に結合する能力を保持して
いる蛋白質又はポリペプチドはすべて本発明のヒトＢ細
胞刺激因子２レセプターの範囲に含まれる。例えば、こ
のような蛋白質として、前記アミノ酸配列中のＢＳＦ　
２との結合に寄与するアミノ酸配列及び／又はアミノ酸
残基部分以外のアミノ酸配列及び／又はアミノ酸残基が
置換、欠損、挿入等により変化したもの、さらには前記
アミノ酸配列のＮ末端側及び又はＣ末端側にアミノ酸配
列及び又はアミノ酸残基等が追加された蛋白質、あるい
は例えばヒト成長ホルモン等の他の蛋白質等が融合した
ものであっても良い。

例えば、前記（Ｉ）のアミノ酸配列から複数個のアミノ
酸が欠失している活性蛋白質の例として、該アミノ酸配
列中のＮ末端の近傍が欠失している蛋白質が挙げられる
。この様な蛋白質の１例として、第２８番目のアミノ酸
から第１０９番目のアミノ酸までが欠失している、次の
アミノ酸配列（■）：（Ｎ末端） Ｍｅｔ　Ｌｅｕ　Ａｌａ 八ｌａ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ Ａｈａ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ 八ｒｇ　　Ｌｙｓ　　５ｅｒ Ｇａｙ　　Ｐｒｏ　　Ａｒｇ Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ Ｐｈｅ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　５ｅｒ Ｇｌｙ　Ａｓｐ　５ｅｒ Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ａｌａ Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ １１ｅ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　５ｅｒ Ｓｅｒ　　Ｔｒｐ　　Ａｓｎ Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ Ｖａｌ　　Ｇａｙ　　Ｃｙｓ　　Ａｌａ八Ｉへ　　Ａｌ
ａ　　Ｐｒｏ　　ｃｌｙ八ｒへ　　Ｃｙｓ　　Ｐｒｏ　
　ＡｈａＧｌｕ　　Ｐｒｏ　　Ｇｉｎ　　ＬｅｕＰｒｏ
　　Ｌｅｕ　　Ｓｅｒ　　Ａｓｎ５ｅｒ　　Ｔｈｒ　　
Ｐｒｏ　　Ｇｌｕ八ｌへ　　Ｖａｌ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅ
ｕＳｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　ＧｌｕＧｌｎ　　Ｔ
ｙｒ　　Ｓｅｒ　　ＧｉｎＣｙｓ　　Ｇｉｎ　　Ｌｅｕ
　　ＡｌａＳｅｒ　　Ｐｈｅ　　Ｔｙｒ　　ｌ１ｅＳｅ
ｒ　　Ｓｅｒ　　Ｖａｌ　　ＧｌｙＧｉｎ　　Ｔｂｒ　
　Ｐｈｅ　　ＧｌｎＰｒｏ　　Ａｓｐ　　Ｐｒｏ　　Ｐ
ｒ。

八ｌａ　　Ｖａｌ　　Ａｌａ　　ＡｒｇＶａｌ　　Ｔｈ
ｒ　　Ｔｒｐ　　Ｇ１ｎ５ｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｐｈｅ　
　Ｔｙｒ八ｒへ　　Ｔｙｒ　　Ａｒｇ　　ＡｈａＴｈｒ
　　Ｔｈｒ　　Ｔｒｐ　　ＭｅｔＬｅｕ　　Ｌｅｕ　　
Ａｌａ Ａｌａ　　Ａｌａ　　Ｌｅｕ Ｖａｌ　　八ｓｐ　　Ｖａｌ Ｓｅｒ　　Ｃｙｓ　　Ｐｈｅ Ｖａｌ　　Ｖａｌ　　Ｃｙｓ Ｔｒｐ　　Ｓｅｒ　　Ｌｅｕ Ｖａｌ　　八ｒｇ　Ｌｙｓ 八ｓｐ　　Ｐｂｅ　　Ｇｌｎ Ｇｌｕ　　Ｓｃｒ　　Ｇｌｎ Ｖａｌ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｕ Ｖａｌ　　Ｓｅｒ　　Ｍｅｔ Ｓｅｒ　　Ｌｙｓ　　Ｐｈｅ Ｇａｙ　　Ｃｙｓ　　Ｇｌｙ 八Ｉａ　　Ａｓｎ　　Ｉｌｅ へｓｎ　　Ｐｒｏ　　Ａｒｇ Ａｓｐ　　Ｐｒｏ　　ｌｌｉｓ Ａｒｇ　　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ Ｇｌｕ　　Ａｒｇ　　５ｅｒ Ｖａｌ　　ｌｙｓ　　Ａｓｐ Ｌｅｕ　　Ｇｉｎ　　ｌ１ｉｓ　　１ｌｉｓＴｒｐ　　
Ｓｅｒ　　Ｇｌｙ　　Ｌｅｕ八ｒへ　　Ａｈａ　　Ｇｉ
ｎ　　ＧｌｕＴｒｐ　Ｓｅｒ　　Ｇｌｕ　　Ｔｒｐ Ｔｈｒ　　Ｐｒｏ　　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ 八Ｉへ　　Ｇｌｕ　　Ａｓｎ　　Ｇｌｕ八］へａ　　Ｌ
　ｅ　ｕ　　Ｔ　ｈ　ｒ　　Ｔ　ｈ　ｒｌｌｅ　　Ｌｅ
ｕ　　Ｐｈｅ　　ＡｒｇＳｅｒ　　Ｌｅｕ　　Ｐｒｏ　
　ＶａｌＰｒｏ　　Ｌｅｕ　　Ｐｒｏ　　ＴｈｒＳｅｒ
　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　ＰｈｅＡｌａ　　Ｉｌｅ　　
Ｖａｌ　　ＬｅｕＬ　ｙ　ｓ　　Ｌ　ｅ　ｕ　　八ｒｇ
　　ＡｌａＳｅｒ　　Ｍｅｔ　　ｔｌｉｓ　　Ｐｒ。

Ｌｅｕ　　Ｖａｌ　　Ｐｒｏ　　ＧｌｕＶａｌ　　Ｌｅ
ｕ　　Ｖａｌ　　Ｐｒ。

Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ｓｅｒ　　５ｅｒＳｅｒ　　Ｓｅ
ｒ　　ｌ１ｉｓ　　ＡｓｎＰｒｏ　　八ｒｇ　　Ｓｅｒ
　　Ｐｒ。

Ａｓｐ　　Ｔｙｒ　　ｆ’ｔＩｅ　　ＰｈｅＣｙｓ　　
Ｖａｌ　　Ｉｃｅ　　ｌ１ｉｓ八＋４　　Ｈｉｓ　　Ｖ
ａｌ　　ＶａｌＧｌｕ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌｙ　　Ｇ１ｎ
５ｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｕ　　ＡｌａＧｌｕ　　Ｓｅ
ｒ　　Ａｒｇ　　５ｅｒＶａｌ　　Ｓｅｒ　　Ｔｈｒ　
　Ｐｒ。

八ｓｎ　　Ｌｙｓ　　Ａｓｐ　　ＡｓｐＡｓｐ　　Ｓｅ
ｒ　　Ａｌａ　　ＡｓｎＧｉｎ　　Ａｓｐ　　Ｓｅｒ　
　５ｅｒＰｈｅ　　Ｌｅｕ　　Ｖａｌ　　八１ａＧｌｙ
　　Ｔｈｒ　　Ｌｅｕ　　ＬｅｕΔｒｇ　　Ｐｈｅ　　
Ｌｙｓ　　ＬｙｓＬｅｕ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌ
ｙＰｒｏ　　Ｔｙｒ　　Ｓｅｒ　　ＬｅｕΔｒＢ　　Ｐ
ｒｏ　　Ａｒｇ　Ｐｒ。

Ｌｅｕ　　Ｉｌｅ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒ。

Ｌｅｕ　　Ｇｌｙ　　Ｓｅｒ　　Ａｓｐ八ｒへ　　Ｐｒ
ｏ　　Ａｓｐ　　ＡｌａＴｙｒ　　Ａｓｐ　　Ｉｌｅ　
　５ｅｒＰｒｏ　　Ａｒｇ （Ｃ末端） Ａｓｐ　　Δ１ａ Ｇｌｎ　　Ｌｅｕ Ｇ　Ｉ　ｙ　Ｇ　Ｉ　ｕ Ｍｅｔ　　Ｇａｙ Ｐｒｏ　　Ｐｒ。

Ｍｅｔ　　Ｇｉｎ 八ｓｐ　　Ａｓｎ Ａｌａ　　Ｔｈｒ Ｓｅｒ　　Ｖａｌ ｃｌｙ　　Ｇｌｙ Ｃｙｓ　　ｌ１ｅ Ｔｈｒ　　Ｔｒｐ Ｌｙｓ　　Ｔｈｒ Ｇｌｙ　　Ｇｌｎ Ｔｈｒ　　Ｐｒ。

Ｐｒｏ　　Ｖａｌ 八ｓｎ　　Ｔｈｒ Ａｒｇ　　Ａｓｐ Ａｓｎ　　Ｔｈｒ を有する蛋白質か挙げられる。

さらにＣ末端側の複数個のアミノ酸が欠失している蛋白
質として、前記の膜貫通領域及び細胞内蛋白質領域が欠
失している蛋白質が挙げられる。

この様な蛋白質には、例えば３２４番目から後のアミノ
酸が欠失しており、次のアミノ酸配列（Ｉｌｌ　）・（
Ｎ末端） Ｍｅｔ　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　Ｖａｌ　　Ｇｌｙ　　
Ｃｙｓ　　Ａｌａ　　１．ｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ八
Ｉへ　　Ｉ、ｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　Ａｌａ　　
Ｐｒｏ　　Ｇｌｙ　　Ａｌａ　　Ａｌａ　　Ｌｅｕ八Ｉ
へ　　Ｐｒｏ　　Ａｒｇ　　Ａｒｇ　　Ｃｙｓ　　Ｐｒ
ｏ　　Ａｌａ　Ｇｉｎ　　Ｇｌｕ　　ＶａｌＡｈａ　Ａ
ｒｇ　Ｇａｙ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅ
ｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ八ｓへ　　Ｓｅｒ　　Ｖａｌ　　Ｔ
ｈｒ　　Ｌｅｕ　　Ｔｈｒ　　Ｃｙｓ　　Ｐｒｏ　　Ｇ
ｌｙ　　ＶａｌＧｌｕ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｕ　　Ａｓｐ
　　Ａｓｎ　　Ａｌａ　　１Ｎ＋ｒ　　Ｖａｌ　　１ｌ
ｉｓ　　ＴｒｐＶａｌ　　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　
　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　Ａｌａ　　Ｇｌｙ　　Ｓｅｒ　
　１ｌｉｓＰｒｏ　　Ｓｅｒ　　Ａｒｇ　　Ｔｒｐ　　
Ａｈａ　　［、ｌｙ　　Ｍｅｔ　　Ｃ１ｙ　　八ｒｇ、
　　ＡｒＢＬｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　
Ｓｅｒ　　Ｖａｌ　　Ｇｌｎ　　Ｌｅｕ　　１ｌｉｓ　
　ＡｓｐＳｅｒ　　Ｇｌｙ　　Ａｓｎ　　Ｔｙｒ　　Ｓ
ｅｒ　　Ｃｙｓ　　Ｔｙｒ　　Ａｒに　　Ａｌａ　　Ｇ
ｌｙ八ｒへ　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　Ｇｌｙ　　Ｔｈｒ　
　Ｖａｌ　　１ｌｉｓ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ｖａｉ
Ａｓｐ　Ｖａｔ　Ｐｒｏ　Ｔ’ｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　
Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　５ｅｒＣｙｓ　　ＰＩ＋ｅ　
　Ａｒｃ　　Ｌｙｓ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ｌｅｕ　
　Ｓｅｒ　　Ａｓｎ　　ＶａｌＶａｌ　　Ｃｙｓ　　Ｇ
ｌｕ　　Ｔｒｐ　　Ｇｌｙ　　Ｐｒｏ　　八ｒｇ　　Ｓ
ｅｒ　　Ｔｂｒ　　Ｉ’ｒ。

Ｓｅｒ、１．ｅｕ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　
Ｖａｌ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　Ｖａｌ八ｒへ　　Ｌｙｓ
　　Ｐｈｅ　　Ｇｌｎ　　Ａｓｎ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ
　　八ｌａ　Ｇｌｕ　　ＡｓｐＰｈｅ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ
　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　
ＧｌｕＳｅｒ　　Ｇｌｎ　　Ｌｙｓ　　Ｐｈｅ　　Ｓｅ
ｒ　　Ｃｙｓ　　Ｇｌｎ　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　Ｖａ
ｌＰｒｏ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｙ　　／ｌｓｐ　　Ｓｅｒ
　　Ｓｅｒ　　Ｐｈｅ　　Ｔｙｒ　　ｌｉｅ　　Ｖａｌ
Ｓｅｒ　　Ｍｅｔ　　Ｃｙｓ　　Ｖａｌ　八ｌａ　　Ｓ
ｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｖａｌ　　Ｇｌｙ　　５ｅｒＬｙｓ
　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ　Ｔｈｒ　
Ｐｈｅ　Ｇｌｎ　ＧｌｙＣｙｓ　　Ｇａｙ　　Ｉｌｃ　
　Ｌｅｕ　　Ｇｌｎ　　Ｐｒｏ　　八ｓｐ　　Ｐｒｏ　
　Ｐｒｏ　　ＡｌａＡｓｎ　　Ｉｌｅ　　Ｔｈｒ　　Ｖ
ａｌ　　Ｔｈｒ　　Ａｌａ　　Ｖａｌ　　Ａｌａ　　Ａ
ｒｇ　　ＡｓｎＰｒｏ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｓｅ
ｒ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｔｒｐ　Ｇｌｎ　ＡｓｐＰｒｏ　
　１ｌｉｓ　　Ｓｅｒ　　Ｔｒｐ　　Ａｓｎ　　Ｓｅｒ
　　Ｓｅｒ　　Ｐｈｅ　　Ｔｙｒ　　ＡｒｇＬｅｕ　　
Ａｒｇ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　
Ｔｙｒ　　Ａｒｇ　　Ａｌａ　　Ｇｌｕ八ｒへ　　Ｓｅ
ｒ　　Ｌｙｓ　　Ｔｈｒ　　Ｐｈｅ　　Ｔｈｒ　　Ｔｈ
ｒ　　Ｔｒｐ　　Ｍｅｔ　　ＶａｌＬｙｓ　Ａｓｐ　Ｌ
ｅｕ　Ｇｉｎ　１ｌｉｓ　ｌ１ｉｓ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　
　Ｉｌｅ　ＨｉｓＡｓｐ　　Ａｌａ　　Ｔｒｐ　　Ｓｅ
ｒ　　Ｇｌｙ　　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　旧ｓ　　Ｖａｌ
　　ＶａｌＧｌｎ　　Ｌｅｕ　　ＡｒＨ八Ｉａ　　Ｇｉ
ｎ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｕ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌｙ　　Ｇｉ
ｎＧｌｙ　　Ｇｌｕ　　Ｔｒｐ　　Ｓｅｒ　　Ｇｌｕ　
　Ｔｒｐ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｕ　　ＡｌａＭ
ｅｔ　　Ｇｌｙ　　Ｔｈｒ　　ｐｒｏ　　Ｔｒｐ　　Ｔ
ｈｒ　　Ｇｌｕ　　Ｓｅｒ　　Ａｒｇ　　５ｅｒＰｒｏ
　Ｉ’ｒｏ　Ｖａｌが挙げられる。

さらには、３４５番目から後のアミノ酸が欠失しており
、次のアミノ酸配列（■）＝ （Ｎ末端） Ｍｅｔ　　Ｌｅｕ　　八Ｉａ　　Ｖａｌ　　Ｇｌｙ　　
Ｃｙｓ　　Ａｈａ　　Ｌｅｕ　　１．ｅｕ　　Ａｌａ八
Ｉへ　　Ｉ、ｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　Ａｈａ　　
Ｐｒｏ　　Ｇｌｙ　　Ａｌａ　　Ａｌａ　　ｌ、ｅｕＡ
ｈａ　　Ｐｒｏ　　八ｒｇ　　Ａｒｇ　　Ｃｙｓ　　Ｐ
ｒｏ　　Ａｌａ　　Ｇｉｎ　　Ｇｌｕ　　ＶａｌＡｌａ
　　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　　Ｖａｌ　　Ｌｅｕ　　Ｔｈｒ　
　Ｓｅｒ　　Ｌｅｕ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｙ八ｓへ　　Ｓ
ｅｒ　　Ｖａｌ　　Ｔｈｒ　　Ｌｅｕ　　’ＩＮ＋ｒ　
　Ｃｙｓ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｙ　　ＶａｌＧｌｕ　　Ｐ
ｒｏ　　Ｇｌｕ　　Ａｓｐ　　Ａｓｎ　　Ａｌａ　　Ｔ
ｌ＋ｒ　　Ｖａｌ　　１ｌｉｓ　　ＴｒｐＶａｌ　　Ｌ
ｅｕ　　Ａｒｇ　　Ｌｙｓ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　Ａ
ｈａ　　Ｇｌｙ　　Ｓｅｒ　　Ｉｒ１ｓＰｒｏ　　Ｓｅ
ｒ　　Ａｒｇ　　Ｔｒｐ　　Ａｌａ　　Ｇｌｙ　　Ｍｅ
ｔ　　Ｇｌｙ　　Ａｒｇ　　ＡｒｇＬｅｕ　　Ｌｅｕ　
　Ｌｅｕ　　Ａｒｚ　　Ｓｅｒ　　Ｖａｌ　　Ｇｉｎ　
　Ｌｅｕ　　１ｌｉｓ　　ＡｓｐＳｅｒ　　Ｇａｙ　　
Ａｓｎ　　Ｔｙｒ　　Ｓｅｒ　　Ｃｙｓ　　Ｔｙｒ　　
Ａｒｇ　　Ａｌａ　　Ｇｌｙ八ｒへ　Ｐｒｏ　　Ａｌａ
　　Ｇｌｙ　　Ｔｈｒ　　Ｖａｔ　　旧ｓ１、ｅｕ　　
Ｌｅｕ　　Ｖａｌ八ｓへ　　Ｖａｌ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒ
ｏ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｕ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｎ　　Ｌｅ
ｕ　　５ｅｒＣｙｓ　　Ｐｈｅ　　Ａｒｇ　　Ｌｙｓ　
　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ｌｅｕ　　Ｓｅｒ　　Ａｓｎ　
　ＶａｌＶａｌ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　Ｇａｙ　Ｐ
ｒｏ　ＡｒｇＳｅｒ　Ｔｈｒ　Ｐｒ。

Ｓｅｒ　　ｌ、ｅｕ　　Ｔｈｒ　　Ｔｈｒ　　Ｌｙｓ　
　Ａｌａ　　ＶＩｌｌ　　Ｌｅ、ｕ　　Ｌｅａ　　Ｖａ
ｌ八ｒへ　　Ｌｙｓ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌｎ　　Ａｓｎ　
　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　Ｇｌｕ　　ＡｓｐＰ
ｌ＋ｅ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｇｌｎ　１
’ｙｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　ＧｌｕＳｅｒ　　Ｇｌｎ　　
Ｌｙｓ　　Ｐｈｅ　　Ｓｅｒ　ＣｙｓＰｒｏ　　Ｇｌｕ
　　Ｇｌｙ　　Ａｓｐ　　Ｓｅｒ　　５ｅｒＳｅｒ　Ｍ
ｅｔ　Ｃｙｓ　　Ｖａｌ　　Ａｌａ　　５ｅｒＬｙｓ　
　Ｐｂｅ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　ＧｉｎＣｙｓ　Ｇ
ｌｙ　　ｌｌｅ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｐｒ。

Ａｓｎ　　Ｔｉｅ　Ｔｈｒ　　Ｖａｌ　　Ｔｈｒ　　Ａ
ｌａＰｒｏ　　八ｒｇ　　Ｔｒｐ　　Ｌｅｕ　　Ｓｅｒ
　　ＶａｌＰｒｏ　　ｔｌｉｓ　　Ｓｅｒ　Ｔｒｐ　　
Ａｓｎ　　５ｅｒＬｅｕ　　Ａｒｇ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌ
ｕ　　Ｌｅｕ　　八ｒｇＡｒｇ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈ
ｒ　Ｐｈｅ　ＴｈｒＬｙｓ　　Ａｓｐ　　Ｌｅｕ　　Ｇ
ｉｎ　　Ｈｉｓ　　１ｌｉｓ八ｓｐ　　Ａｈａ　　Ｔｒ
ｐ　　Ｓｅｒ　　Ｇａｙ　　ＬｅｕＧｌｎ　　Ｌｅｕ　
　Ａｒｇ　　Ａｌａ　　Ｇｌｎ　　ＧｌｕＧｌｙ　Ｇｌ
ｕ　Ｔｒｐ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　ＴｒｐＭｅｔ　Ｇａｙ　
Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　ＴｈｒＰｒｏ　　Ｐｒｏ　　
Ａｌａ　　Ｇｌｕ　　Ａｓｎ　　ＧｌｕＭｅｔ　　Ｇｉ
ｎ　　Ａｈａ　　Ｉ、ｅ　ｕ　　Ｔ　ｈ　ｒ　　Ｔ　ｈ
　ｒへｓｐ　　Ａｓｎ　　ｌｉｅ　　Ｌｅｕを有するも
のが挙げられる。

Ｇｉｎ　　Ｌｅｕ　　Ａｈａ　　ＶａｌＰｈｅ　Ｔｙｒ
　　Ｔｌｅ　　Ｖａｌ Ｓｅｒ　　Ｖａｌ　　Ｇｌｙ　　５ｅｒＴｈｒ　　Ｐｈ
ｅ　　Ｇｌｎ　　ＧｌｙＡｓｐ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　
　八１ａＶａｌ　　Ａｈａ　　Ａｒｇ　　ＡｓｎＴｈｒ
　　Ｔｒｐ　　Ｇｌｎ　　ＡｓｐＳｅｒ　　Ｐｈｅ　　
Ｔｙｒ　　ＡｒｇＴｙｒ　　Ａｒｇ　　Ａｌａ　　Ｇｌ
ｕＴｈｒ　Ｔｒｐ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ Ｃｙｓ　　Ｖａｌ　　ｌｉｅ　　ｌ１ｉｓ八ｒｇ　　１
ｌｉｓ　　Ｖａｌ　　ＶａｌＧｌｕ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌ
ｙ　　Ｇ１ｎ５ｅｒ　　Ｐｒｏ　　ＧＩＩ＋　へ１ａＧ
ｌｕ　　Ｓｅｒ　　Ａｒｇ　　５ｅｒＶａｌ　　Ｓｅｒ
　　Ｔｈｒ　　Ｐｒ。

八ｓｎ　　Ｌｙｓ　　Ａｓｐ　　Ａｓｐ２、　力」しく
配列− 前記の種々のアミノ酸配列をコートするＤＮＡは種々の
方法で得ることができる。例えば上記のアミノ酸配列に
基いて塩基配列を設ａｌシ、常法に従ってＤＮＡを化学
合成することができる。また、ヒトＢ細胞刺激因子２レ
セプター蛋白質を生産することができる細胞、例えばナ
チュラルキラー細胞（以下ＮＫ細胞と略す）、単球細胞
、ミニｌ′□Ｉマ細胞等のヒト細胞から常法に従ってメ
ツセンジャーＲＮＡ　（ｍＲＮＡ）を抽出し、次にこれ
に基いて常法に従ってｃＤＮＡライブラリーを作製し、
これを種々の方法によりスクリーニングして目的の蛋白
質のアミノ酸配列をコードするｃＤＮＡを選択すること
ができる。この選択は、例えば実施例において後記する
様に、ｃＤＮＡを動物細胞中で機能しｉｚするベクター
に挿入し、これを動物細胞に１ランスフエクｈし、動物
細胞表面に発現したｌｌ５Ｆ２蛋白質をＢＳＦ　２との
特異的結合により検出することにより行うことができる
。この様な方法を用いることによりアミノ酸配列が部分
的にも決定されておらず、従ってオリゴヌクレオチドプ
ローブを設計することができない場合でも、目的とする
ｃＤＮＡを選択することができる。

この様にして得られた、ヒトＢ５Ｆ２レセプターをコー
ｌするｃＤＮＡは次の塩基配列（Ｖ）：（５′） ＡＴＧ　　ＣＴＧ　　ＧＣＣＧＴＣＧＧＣＴＧＣＧＣＧ
　　ＣＴＧ　　ＣＴＧ　　ＧＣＴＧＣＣＣＴＧ　　ＣＴ
Ｇ　　ＧＣＣＧＣＧ　　ＣＣＧ　　ＧＧＡ　　ＧＣＧ　
　ＧＣＧ　　ＣＴＧＧＣＣ（、ＣＡ　　ＡＧＧ　　ＣＧ
ＣＴＧＣＣＣＴ　　ＧＣＧ　　ＣＡＧ　　ＧＡＧ　　Ｇ
ＴＧＧＣＡ　　ＡＧＡ　　ＧＧＣＧＴＧ　　ＣＴＧ　　
ＡＣＣＡＧＴ　　ＣＴＧ　　ＣＣＡ　　ＧＧＡＧＡＣＡ
ＧＣＧＴＧ　　ＡＣＴ　　ＣＴＧ　　ＡＣＣＴＧＣＣＣ
Ｇ　　ＧＧＧ　　ＧＴＡＧ／ＩＧ　　ＣＣＧ　　Ｇへへ
　ＧＡＣＡＡＴ　　ＧＣＣＡＣＴ　　ＧＴＴ　　ＣＡＣ
ＴＧＧＧＴＧ　　ＣＴＣＡＧＧ　　ＡＡＧ　　ＣＣＧ　
　ＧＣＴ　　ＧＣＡ　　ＧＧＣＴＣＣＣＡＣＣＣＣＡＧ
ＣＡＧＡ　　ＴＧＧ　　ＧＣＴ　　ＧＧＣＡＴＧ　　Ｇ
Ｇ八　＾ＧＧ　　ＡＧＧＣＴＧ　　ＣＴＧ　　ＣＴＧ　
　ＡＧＧ　　ＴＣＧ　　ＧＴＧ　　ＣＡＧ　　ＣＴＣＣ
ＡＣＧＡＣＴＣＴ　　ＧＧ八　八ΔＣＴＡＴ　　ＴＣＡ
　　ＴＧＣＴＡＣＣＧＧ　　ＧＣＣＧＧＣＣＧＣＣＣＡ
　　ＧＣＴ　　ＧＧＧ　　ＡＣＴ　　ＧＴＧ　　ＣＡＣ
ＴＴＧ　　ＣＴＧ　　ＧＴＧＧＡＴ　　ＧＴＴ　　ＣＣ
ＣＣＣＣＧＡＧ　　ＧＡＧ　　ＣＣＣＣＡＧ　　ＣＴＣ
ＴＣＣＴＧＣＴＴＣＣＧＧ　　ＡＡＧ　　バＧＣＣＣＣ
ＣＴＣＡＧＣＡＡＴ　　ＧＴＴＧＴＴ　　ＴＧＴ　　Ｇ
ＡＧ　　ＴＧＧ　　ＧＧＴ　　ＣＣＴ　　ＣＧＧ　　Ａ
ＧＣＡＣＣＣＣＡＴＣＣＣＴＧ　　ＡＣＧ　　ＡＣＡ　
　ＡＡＧ　　ＧＣＴ　　ＧＴＧ　　ＣＴＣＴＴＧ　　Ｇ
ＴＧ／ＩＧＧ　　ＡＡＧ　　ＴＴＴ　　ＣＡＧ　　ＡＡ
ＣＡＧＴ　　ＣＣＧ　　ＧＣＣＧＡＡ　　ＧＡＣＴＴＣ
ＣＩ’ｌＧ　　ＧＡＧ　　ＣＣＧ　　ＴＧＣＣＡＧ　　
ＴＡＴ　　ＴＣＣＣＡＧ　　ＧＡＧＴＣＣＣＡＧ　　Ａ
ＡＧ　　ＴＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＧ　　１’ＴＡ　　Ｇ
ＣＡ　　ＧＴＣＣＣＧ　　ＧＡＧ　　ＧＧＡ　　ＧＡＣ
ｆｌＧｃ　　ＴＣＴ　ＴＴＣＴＡＣＡＴＡ　　ＧＴＧＴ
ＣＣＡＴＧ　　ＴＧＣ［；ＴＣＧＣＣＡＧＴ　　ＡＧＴ
　　ＧＴＣＧＧＧ　　ＡＧＣｌｌＡＧ　　ＴＴＣＡＧＣ
ＡＡＡ　　ＡＣＴ　　ＣＡＡ　　ＡＣＣＴＴＴ　　ＣＡ
Ｇ　　ＧＧＴＴＧＴ　　ＧＧＡ　　ＡＴＣＴＴＧ　　Ｃ
ＡＧ　　ＣＣＴ　　ＧＡＴ　　ＣＣＧ　　ＣＣＴ　　Ｇ
ＣＣＡＡＣＡＴＣＡＣＡ　　ＧＴＣＡＣＴ　　ＧＣＣＧ
ＴＧ　　ＧＣＣＡＧ／ｌ　　ＡＡＣＣＣＣＣＧＣＴＧＧ
　　ＣＴＣＡＧＴ　　ＧＴＣＡＣＣＴＧＧ　　ＣＡＡ　
　ＣＡＣＣＣＣＣＡＣＴＣＣＴＧＧ　　ＡＡＣＴＣＡ　
　ＴＣＴ　　ＴＴＣＴＡＣＡＧＡＣＴＡ　　ＣＧＧ　　
ＴＴＴ　　ＧＡＧ　　ＣＴＣＡＧＡ　　ＴＡＴ　　ＣＧ
Ｇ　　ＧＣＴ　　ＧＡＡＣＧＧ　　ＴＣＡ　　ＡＡＣＡ
ＣＡ　　ＴＴＣＡＣＡ　　ＡＣＡ　　ＴＧＧ　　ｆｌＴ
Ｇ　　ＧＴＣＡＡＧ　　ＧＡＣＣＴＣＣＡＧ　　ＣＡＴ
　　ＣＡＣＴＧＴ　　ＧＴＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣ
ＴＧＧ　　ＡＧＣＧＧＣＣＴＧ　　ＡＧＧ　　ＣＡＣＧ
ＴＧ　　ＧＴＧＣ／ＩＧ　　ＣＴＴ　　ＣＧＴ　　ＧＣ
ＣＣＩ’ｌＧ　　ＧＡＧ　　ＧＡＧ　　ＴＴＣＧＧＧ　
　ＣＡＡＧＧＣＧ／ＩＧ　　ＴＧＧ　　ＡＧＣＧＡＧ　
　ＴＧＧ　　ＡＧＣＣＣＧ　　ＧＡＧ　　ＧＣＣＡＴＧ
　　ＧＧＣＡＣＧ　　ＣＣＴ　　ＴＧＧ　　ＡＣＡ　　
Ｇ／ＩＡ　　１’ＣＣＡＧＧ　　ＡＧＴＣＣＴ　　ＣＣ
Ａ　　ＧＣＴ　　ＧＡＧ　　ＡＡＣＧＡＧ　　ＧＴＧ　
　ＴＣＣＡＣＣＣＣＣＡＴＧ　　ＣＡＧ　　ＧＣＡ　　
ＣＴＴ　　ＡＣＴ　　ＡＣＴ　　ＡＡＴ　　ＡＡＡ　　
ＧＡＣＧＡＴＧＡＴ　　ＡＡＴ　　／ＩＴＴ　　ＣＴＣ
ＴＴＣＡＧＡ　　ＧＡＴ　　ＴＣＴ　　ＧＣＡ　　ＡＡ
ＴＧＣＧ　　ＡＣＡ　　／ＩＧｃ　　ＣＴＣＣＣＡ　　
ＧＴＧ　　ＣＡＡ　　ＧＡＴ　　ＴＣＴ　　ＴＣＴＴＣ
Ａ　　ＧＴｆｌ　　ＣＣＡ　　ＣＴＧ　　ＣＣＣＡＣＡ
　　ＴＴＣＣＴＧ　　ＧＴＴ　　ＧＣＴＧＧＡ　　ＧＧ
Ｇ　　ＡＧＣＣＴＧ　　ＧＣＣＴＴＣＧＧＡ　　ＡＣＧ
　　ＣＴＣＣＴＣＴＧＣＡＴＴ　　ＧＣＣＡＴＴ　　Ｇ
ＴＴ　　ＣＴＧ　　ＡＧＧ　　ＴＴＣＡＡＧ　　ＡＡＧ
ＡＣＣＴＧＧ　　ＡＡＧ　　ＣＴＧ　　ＣＧＧ　　ＧＣ
Ｔ　　ＣＴＧ　　ＩＩＡＧ　　ＧＡＡ　　ＧＧＣＡＡＧ
　　ＡＣＡ　　ＡＧＣＡＴＧ　　ＣＡＴ　　ＣＣＧ　　
ＣＣＧ　　ＴＡＣＴＣＴ　　ＴＴＧＧＧＧ　　ＣＡＧ　
　ＣＴＧ　　ＧＴＣＣＣＧ　　ＧＡＧ　　／ＩＧＧ　　
ＣＣＴ　　ＣＧＡ　　ＣＣＣ／Ｉｃｃ　　ＣＣＡ　　Ｇ
ＴＧ　　ＣＴＴ　　ＧＴＴ　　ＣＣＴ　　ＣＴＣＡＴＣ
ＴＣＣＣＣＡＣＣＧ　　ＧＴＧ　　ＴＣＣＣＣＣＡＧＣ
ＡＧＣＣＴＧ　　ＧＧＧ　　ＴＣＴ　　ＧＡＣＡＡＴ　
　ＡＣＣＴＣＧ　　ＡＧＣＣＡＣＡＡＣＣＧＡ　　ＣＣ
Ａ　　ＧＡＴ　　ＧＣＣＡＧＧ　　ＧＡＣＣＣＡ　　Ｃ
ＧＧ　　ＡＧＣＣＣＴ　　ＴＡＴ　　ＧＡＣＡＴＣＡＧ
ＣＡＡＴ　　ＡＣＡ　　ＧＡＣＴＡＣＴＴＣＴＴＣＣＣ
ＣＡＧＡ（３′　） を有するものである。

本発明のＤＮＡ配列は、式（Ｖ）のＤＮＡ配列の他、こ
のＤＮＡ配列中の１個もしくは複数個のヌクレオチドが
他のヌクレオチドにより置換されており、そして／又は
１個もしくは複数個のヌクレオチドが欠失しており、そ
して／又は１個もしく３３） くは複数個のヌクレオチｌ−が前記ＤＮＡ配列にイ′：
１加されているＤＮＡ配列を有し、且つヒトＢ細胞刺激
因子２と特異的に結合する能力を有する蛋白質をコード
しているＤＮＡ配列をも包含する。例えば、前記１にお
いて記載した種々のアミノ酸配列、例えば式（ＩＩ）、
（■）、又は（ＩＶ　）で表わされるアミノ酸配列を有
する蛋白質をコートするＤ　ＮＡ配列が挙げられる。

例えば、前記のごとく、短縮されたＢＳＦ　２レセプタ
ー蛋白質をコードするＤＮＡは、前記の塩基配列（Ｖ）
を有しｌｌ５Ｆ　２レセプター蛋白質の全体をコードす
るｃＤＮＡを、適当な制限酵素で切断して塩基配列の一
部分を除去した後、必要であれば適当なリンカ−を介し
て、再連結することにより得られる。

例えば、前記（Ｖ）の塩基配列を有するｃＤＮＡを含有
するベクターを実施例６に記載する方法で操作すること
により、式（１）で示されるアミノ酸配列の内のアミノ
酸配列１〜１２３とアミノ酸配列３４３〜４６８　とか
ら成る蛋白質をコードするＤＮＡを含有するベクターを
作製することができる。また、前記ベクターを実施例７
に記載する方法で操作することにより、式（１）で示さ
れるアミノ酸配列の内のアミノ酸配列１〜２７とアミノ
酸配列１１０〜４６８　とから成る蛋白質をコードする
ＤＮＡを含有するベクターを作製することができる。

また、ＤＮＡ点突然変異法により前記ベクターの任意の
塩基を他の塩基に変換することができる。

この方法を用いてＢＳＩ？　２レセプター蛋白質をコー
ドするｃＤＮＡの任意の位置に終止コドンを挿入するこ
とができる。この方法を用いることにより、例えば、弐
Ｎ）のアミノ酸配列の中のアミノ酸配列１〜３４４を有
する蛋白質をコードするＤＮＡを含有するベクターを得
ることができる。同様にして、アミノ酸配列１〜３２３
を有する蛋白質をコードするＤＮＡを含有するプラスミ
ドを得ることができる。

遺伝子工学的にＢＳＦ　２レセプター活性を有する蛋白
質を生産するには、前記した様なりＮＡ配列にこのＤＮ
Ａ配列を発現させ得るＤＮＡ配列を結合さ一已ることが
必要である。ＢＳＦ　２レセプター活性を有する蛋白質
をコードするＤＮＡ配列を組換微生物または培養細胞中
で発現さ一已得るｌ）　Ｎ　Ａ配列は選定された微生物
または培養細胞等の宿主との関係において適宜選定して
使用すれば良い。この様なりＮＡ配列として、例えばプ
ｌ：Ｊモータ系、開始コドン、終止コドン等のＤＮＡ配
列が知られている。この様なりＮＡ配列をＢ５Ｆ２レセ
プター活性を有する蛋白質をコー１′するＩ）ＮＡ配列
に結合させるには、例えば結合させようとするＤＮＡ配
列間に相補的な付着末端を形成せしめるなとして行う公
知の方法等を用いれば良い。ＤＮＡ配列を発現させ得る
ＤＮＡ配列の結合は、本発明で提供されるＢＳＦ　２レ
セブクー活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ配列に
対し、その読取りが可能な様に、即ちＤＮＡ配列が翻訳
された場合に目的とするＢＳＦ　２との結合に必要なア
ミノ酸配列あるいはアミノ酸残基を有する蛋白質が生産
される様であれば良い。

ＤＮＡ配列を発現さ−Ｕ得るＤＮＡ配列を結合させる以
外にも本発明で提供されるＢ５Ｆ２レセプター活性を有
する蛋白質をコードするＤＮＡ配列を他の、例えばヒト
成長ホルモンを生産させるために作製されたＤＮＡ配列
の下流（３′側）に読取り可能に結合させても良い。

ＤＮＡ配列を発現させるためのＤＮＡ配列の中でも、プ
ロモータ系は重要であり、しかも選定した宿主との関係
において適宜選定する必要がある。

例えば近年の遺伝子工学で良く使用される大腸菌等の細
菌菌株を用いる場合には、β−ラクタマーゼおよび乳糖
プロモーター系、トリプトファンプロモーター系等、さ
らにはこれらのハイブリッドプロモーター系等の公知の
プロモーター系を用いれば良い。また例えば宿主として
酵母を用いる場合等には、ＧＡＬ４プロモーター系等が
知られている。

なお、本発明のＤＮＡ配列を発現させ得るＤＮＡ配列と
読取り可能に結合したＢＳＦ　２レセプター活性を有す
る蛋白質をコートするＤＮＡ配列は、プロモーター系、
開始コドン、終止コドン等の他の選定した宿主での１１
ｓＦ２レセプター活性を有Ｊる蛋白質をコードするＤＮ
Ａ配列の発現のために必要な例えばりボゾーム結合部位
等を含んでいても良い。

３、溌Ｊヒ野仙右： 本発明で擢供されるＢＳＦ　２レセプター活性を有する
蛋白質をコードするＤＮＡ配列を発現、即ち生産し得る
複製可能な発現ベクターは、前記２て説明された様なり
ＮＡ配列を発現させ１：ＩるＤＮＡ配列と読取り可能に
結合しているＢ５１７２レセプター活性を有する蛋白質
をコートするＤＮＡ配列および宿主中でベクターＤＮＡ
を複製するだめの複製起点等を有し、選定した宿主を形
質転換出来るものであれば制限なく適宜選定して使用で
きる。

例えば宿主として大腸菌等の細菌菌株を用いる場合にば
、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３３７等のプラスミド等を例示
出来るが、これら以外のものであっても特別の制限はな
い。また例えば削孔’Ｊ’）Ｊ　！）！７Ｊ等の培養細
胞を宿主として用いる場合には、例えばＳＶ　４０つ・
イルス由来のＤＮＡ複製オリジン等を有するベクタ等を
用いれば良い。またこれらベクターは、これらベクター
を用いて選定された宿主を形質転換させる操作にあたり
、・ベクターが導入されなかった宿主と導入された宿主
との選別を可能にするため例えばアンピシリン等の薬剤
に対する耐性を宿主に付与するためのＤＮＡ配列を含ん
でいることが好ましい。

４、皇土 本発明では、特別の制限なしに通常の遺伝子工学的で蛋
白質を生産するために用いられる微生物または培養細胞
が使用できる。例えばに−１２ｘ　−１，７７Ｇ　、　
ｗ　−３１１０、ＭＣ１００９等の種々の大腸菌類、枯
草菌類、好熱菌属細菌類ざらにはサルモネラ・チフィリ
ウム、セラチア・マンセザンス等の種々の腸内細菌類ま
たさらにはシュードモナス等の微生物あるいは酵母等を
例示することが出来る。

哺乳動物等の培養細胞としては、例えばＣＯ８細胞（猿
の腎臓繊維芽細胞）、ＣＨＯ細胞（チアイニーズハムス
ターの卵巣細胞）等の細胞系さらにはＷｌ　３８．　Ｂ
ＩＩＭ、　３Ｔ３．　ＶｎＲＯ，１ｌｅＬａ等の種々の
細胞系を例示することか出来る。

前記３で説明した・ベクターにより形質転換された前記
４で説明された様な宿主を培養し、・ベクターＤＮＡ中
のＢＳＦ　２レセプター・活性をもする蛋白質をコード
するＩ）　Ｎ　Ａ配列を発現させることによりＢＳＦ　
２レセプター活性を有する蛋白質を生産することが出来
る。これはＢＳ＋？２レセプター活性を有する蛋白質を
コードするＤＮＡ配列と結合した該ＤＮＡ配列を発現さ
せ得るｌ）　Ｎ　Ａ配列中のプロモーター系の活性化に
より実現される。プロモーター系の活性化は、使用した
プＴＲＩモーター系により異なった条件下で起こる。通
常の遺伝子工学的な蛋白質の生産においては、形質転換
した宿主を目的蛋白質を生産しない状態、即ちプｌ′−
１モーター系を不活性化した状態で培養し、宿主当りの
ベクターＤＮＡ量および総宿主量（総画体数あるいは総
細胞数）を増加させた後、プし１モーター系を活性化し
て蛋白質生産を開始させる。このため、通常プロモータ
ー系は例えばＩＰＴＧ　、　ＩｌｌΔ等の発現誘導剤の
添カロ等の公知の操作により人為的に゛活性化可能なも
のを選定するが、本発明においても、人為的に制御可能
なプロモーター系を用いることが好ましい。

６、　　Ｂ５１ｉ２レセプターに対する抗体ＢＳｌ＋２
レセプターに対する抗体とは、前記１で説明した生体内
で生産されるＢＳＦ　２レセプターまたは前記５で説明
した遺伝子工学的に生産されるＢＳＦ　２レセプターの
少なくともいずれか一方と１−！１異的に結合する抗体
である。該抗体はモノクローナル抗体、ポリクローナル
抗体の両方を含み、生産する生物種は、ヒＩ−、マウス
、ウサギ、ヒツジ、ヤギなど種々の生物種を例示するこ
とができる。

該抗体、あるいは、該抗体がモノクローナル抗体である
場合には、これを産生ずるハイブリトーマを作成するだ
めの免疫源としては、ＢＳＦ　２レセプターを発現して
いる細胞、前記５で説明したＢＳＦ　２レセプター、前
記１で説明したアミノ酸配列Ｎ）に基づく合成ペプチド
等を例示することがてきる。

［実施例］ 以下本発明を更に詳細に説明するために実施例を示すが
本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

実遣拳−１，８ＳＦ２レセプターの　　の　初ＢＳＦ　
２レセプターは、ＢＳＦ　２と特異的に結合づる　（Ｔ
、Ｔａｇａら８．Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　、　１．６６
、　ｐ９６７、１９８７年参照）にの性質を利用してＮ
Ｋ細胞ＹＴ株、単球細胞Ｕ９３１株、ミエローマ細胞０
２６６株、Ｔ細胞ＪｕｒｋａＬ株、Ｂ細胞ＣＩｉ　Ｓ　
Ｓ株、およびＹ３細胞Ｂｌ、２９株についてＢＳＦ　２
レセプターの存否を確認した。これらの細胞株の培養は
１０％牛脂児血清（Ｆ’　ＣＳ　）を含むＤ−ＭＥＭ（
Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｌＥａｇｌ
’ｓＭｅｄｉｕｍ、　Ｄｕｌｂｅ−ｃｃｏｓ社製）を用
いて常法に従って行った。

ｎｓＦ　２をＮａｔｕｒｅ　３２４（６）　７３−７６
．１９８６に記載されている方法に従って調製した。な
お、これは特開昭６１−２４６９７に記載されている方
法によっても得ることかできる。

次に、このＢ５Ｆ２に＋２５１ラヘルをＴ、Ｔａｇａら
（Ｊ。

Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、　１６６．９６７（１９８７）に記
載されている方法により結合せしめた。この＋２５１ラ
ヘルＢＳＦ　２（以下１２Ｊ　　Ｂ５Ｆ２と略ず）を前
記の培養細胞と、前記Ｔａｇａ等の方法に従って反応せ
しめた。細胞に非特異的に結合したＩ２Ｊ　　Ｂ５Ｆ２
を洗浄により除去した後、細胞に結合している１２５１
をシンチレションカウンターを用いて分析したところ、
Ｂ細胞ＢＬ２９株及びＴ細胞Ｊｕｒｋａｔ株以外の全て
の細胞においてＢＳＦ　２レセプターの存在が検出され
た。

実１遺久　１粒■車蓋 ｍＲＮＡの単離はマニアティスらの方法（Ｍｏｌｅ−ｃ
ｕｌａｒｄｌｏｎｉｎｇ、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈ
ａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　１９８２年）を参
考に行った。

実施例１の様にして得た単球細胞Ｕ９３７（ＡＴＣＣＣ
ＲＬ−１５９３を生理食塩水で洗浄後、５０％グアニジ
ンイソチオシアネート溶液に懸濁し、この懸濁液を５．
７Ｍと２．７Ｍの塩化セシウム濃度勾配を用いた３２０
００ｒｐｍ、２０時間の遠心分離にかけ、沈澱に種々の
ｍＲＮＡを得た。これらｍＲＮＡを塩化ラウリルシリコ
ン液に懸濁し、フェノール抽出、そしてエタノール沈澱
を行って精製した。

実覇飢ｃＤＮＡライブラリーの作男 前記Ｈの様にして得た種々のｍＲＮＡを鋳型としてそれ
らｍＲＮ直こ相補的なｃＤＮＡを合成した。合成は、Ｄ
ＮＡ合成キット（アプライド・バイオシステム）を用い
て行った。

宿主にはＣＯ８細胞（ＣＯ３−７細胞）を使用した。

ＣＯ８細胞に適合するベクターとして、Ｂｒ１ａｎＳｅ
ｅｄ　（Ｎａｔｕｒｅ、３２９．ｐ８４０．１９８７年
参照）に示されたＣＤＭ　８ベクターを使用した。Ｃｔ
’ｌｌ’ｌ１３ベクターば゛す“イトメガロウィルスの
プロモーター系およびＳＶ４０の複製オリジンを有して
いる。このＣｔｌＭ　８ヘクタのサイトメガロウィルス
のプロモーター系の下流には制限酵素ＢｓｔＸ１の制限
部位が存在する。

前記実施例３において得られた種々のｃＤＮＡをＢｓｔ
Ｘｌの制限部位に挿入したＣＤＭ　１３ベクターを用い
てデアニブキストラン法によりＣＯ３細胞を形質転換し
た。なお、ＣＯ８細胞は１０％ＦＣ３を含むＤ　−ＭＥ
Ｍ培地にて培養した。形質転換したＣＯ８細胞をその後
２日間培養した。こうして得られたＣＯ３細胞にビオチ
ン化したＢＳＦ　２の入った染色緩衝液（ＲＰＭＩ　１
６４０．　２％ＦＣ３，０，１％Ｎ　ａ　Ｎ　３　）を
添加し、２時間インキユヘートした。ＣＯ３細胞を該染
色緩衝液で２回洗浄し、ＦＩＴＣ（フルオレセインイソ
シアネ−１〜）を結合させたアジピンを添加しさらに該
染色緩衝液で３回洗浄した。

死亡細胞をＰＩ（ヨウ化プロピジウム）を添加して除去
した後、蛍光ラヘルされたＣＯ３細胞をＦＡＣ３（蛍光
活性化細胞選択装置、Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏ
ｎ社製）により選択分離した。

比較のため、前記形質転換ＣＯ８細胞をビオチン化ＢＳ
Ｆ　２により、過剰のＢＳＦ２の存在下で処理した後に
前記と同様Ｉ’１ＴＣ−アビジン処理したものもＦＡＣ
３により分析した。さらにネガティブなプラスミドＤＮ
ＡによりＩ・ランスフェクトされた細胞についても同様
の処理を行った。この結果を第１図に示す。この図にお
いて横軸に蛍光強度を示し縦軸に相対細胞数を示す。図
中、Ａはネガティブなプラスミドによりトランスフエク
トシた細胞からの結果を示し、Ｂは本発明の方法による
＜：　−Ｉ）ＮＡを含有するベクターによりトランスフ
ェクトシた細胞からの結果を示し、そしてＣは前記Ｂの
細胞のビオチン化ＢＳＦ　２による処理を過剰のｒｌｓ
Ｆ　２の存在下で行った場合の結果を示す。

Ｂにおいては高い蛍光強度を有する細胞の存在が観察さ
れ、本発明の方法に従って調製したｃＤＮＡを含有する
ベクターにより１〜ランスフエクＩ〜した細胞群中にＢ
ＳＦ　２と結合する物質を産生じている細胞が有意の比
率で存在することが示された。また、Ｃに示すように、
過剰のＢＳＰ　２との親弁条件下でビオチン化＋１ｓｔ
’　２により処理した細胞群中には高い蛍光強度を有す
る細胞が観察されず、この結合はＢＳＦ　２−特異的で
あること力ｊ′■忍された。

前記の方法において高い蛍光強度を有するＣＯ８細胞の
クローンよりベクターを抽出し、大腸菌ＭＣ１００９株
（ＡＴＣＣ３３７６０）を形質転換し、そしてＢ５１ｉ
２レセプターをコードするＤＮＡ配列を含むｃＤＮＡを
有するベクターを大量に得た。このベクタプラスミドを
ｐＢＳＦ２Ｒ，２３６と称する。

このプラスミドｐＢＳＦ２Ｒ，２３６を制限酵素Ｘｈｏ
　Ｉで部分消化し、ＢＳＦ　２レヤプターをコードする
塩基配列をすべて含有するＤＮＡ断片を得、これを市販
のベクターｐｌＢＩ７６　（Ｉｎ２社）の５ａｉ１部位
に挿入してプラスミドｐｌＢＩＢｓＦ２Ｒを作製した。

このプラスミドｐＩＢＩＢｓＦ２１１を含有する大腸菌
１１ＢＬＯＩ−ｐｌＢＩＢＳＦ２Ｒは、工業技術院微生
物工業技術研究所に微工研条寄第２２３２号（ｌｉＥＲ
Ｍ　ＢＰ−２２３２）として寄託されている。

このプラスミドから、常法に従って適当な制限酵素によ
りｎｓｌ＋２レセプター蛋白質をコードするＤＮＡ断片
を切り出し、種々のプラスミドを作製することができる
。

ｆｌ　　Ｂ５Ｆ２レセブ　−をコート′するｃＤＮＡの
解祈 前記の様にして摺られたベクターＤＮＡよりＢＳＦ　２
レセプターをコードするＤＮＡ配列を抽出し、制限酵素
による制限部位地図および塩基配列をＭ１３法（Ｊ、Ｍ
ｅｓｓｉｎｇ、Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＩＥｎｚｙｍｏｌ、１
０１巻、ｐ２０．１９８３年参照）により決定した。そ
の結果を第２図及び第３図に示す。Ｂ５ｌ７２レセプタ
ーをコードするＤＮＡ配列は１４０４塩基対から成り、
５′末端には開始コドン３′末端には終止コドンが位置
していた。

前記実施例１で用いたＮＫ細胞ＹＴ株、単球細胞Ｕ９３
７株、ミエローマ細胞０２６６株、Ｔ細胞Ｊｕｒｋａ　
を株、Ｂ細胞ＣＥＳＳ株、およびＢ細胞ＢＬ２９株につ
いて前記実施例２で示した様な方法により種々のｍＲＮ
八を得た。続いてそれぞれの細胞から得た種々のｍＲＮ
Ａについて以下に示す操作を行った。

まず精製したｍＲＮ八をオリゴｄ　ｔ　＋Ａ’ｌ脂（ヘ
ーリング社製）を用いて濃縮した後、Ｉ　ｐｇずつホル
ムアミド法で変性させ、０．８％アガロースケル電気泳
動にかげ、二１−ロセルロース膜にノザンブロンテイン
グした。

続いて前記実施例４の様にして得たベクターＤＮＡより
　ＢＳＦ　２レセプターをコードするＤＮＡ配列を抽出
し、α３２Ｐ−ＣＴＰでニックトランスレーションした
後、これをプローブとしてノザンプロテイングした各種
細胞の種々のｍＲＮＡとハイブリダイスさせた。ハイブ
リダイズは、５０％ホルムアルデヒド、５倍濃度のテン
ハル１−液（１倍濃度のデンハル）・液は１　（１０ｍ
ｌ中にフィコールポリビニルピロリドン、牛血清アルブ
ミンをそれぞれ０，０２ｇ含む水溶液である）、５倍濃
度のＳＳＣ液（１倍濃度のＳＳＣは１β中にＮａＣｌ　
８．７７　ｇ、クエン酸す１−リウム４．４１　ｇを含
むｐ１１７の水溶液である）、１０ｇｇ　／　ｍｌのザ
ケ精子ＤＮＡにプローブを１×１１０１ｃｐ／ｍｌ添加
した溶液中で４２°Ｃにて２４時間反応させて行った。

ハイブリダイズ終了後、ニトロセルロース膜ヲ０．１％
ドデシル硫酸す１−リウムを含む１／１０濃度のＳＳＣ
液中で５０°Ｃにて２回、各２０分間の洗浄を行い、非
特異的にｍＲＮＡに結合したプローブを分離させ、乾燥
させたａ　Ｘ　ｔｔｆＡフィルムを用いてプローブの結
合を調べた結果を第４図に示す。他方、前記Ｔ、ＴａＢ
ａらによると各種細胞のＢＳＦ　２レセブターの数は次
の表の通りである。

その結果、前記実施例に示された様なりＳＦ　２レセプ
ターを有すると考えられる細胞１１￥から得られたｍＲ
ＮＡ中には、単球細胞ＬＪ９３７株のＢＳＰ２レセプタ
ーをコートするＤＮＡ配列と相補的なものが存在するこ
とが確認された。前記実施例１においてＢＳＦ　２レセ
プターの存在が確認、されなかったＴ細胞Ｊｕｒｋａｔ
株およびＢ細胞肛２９株から得たｍＩ州八へには単球細
胞０９３７株のＢＳＦ　２レセプターをコートするＤＮ
Ａ配列と相補的なものは検出−どきなかった。この結果
は第３回に示されたＤＮＡ配列がヒトＢ５Ｆ２レセプタ
ーをコートしているＤＮＡ配列であることを支持してい
る。

第３図に示したＤＮＡ配列が発現、即し翻訳された場合
に生産される蛋白質のアミノ酸配列は同しく第３図に示
した様な４６８アミノ酸残基からなると考えられる。Ｎ
末端には開始コドンに対応するメチオニンが位置してい
る。このアミノ酸配列は２つの疎水性アミノ酸領域を有
しているが、Ｎ末端側の領域はシグナルペプチド部分、
Ｃ末端側の領域は細胞膜貫通部分であると考えられる。

この様な領域を有することも、末端が細胞膜を貫通して
細胞内部に到達するＢＳＦ　２レセプターの特徴を支持
している。ＢＳＦ　２との特異的結合に寄与する部分は
、これら２つの疎水性アミノ酸領域に挟まれた部分に存
在すると考えられる。

実施貫旦　プラスミドΔＢＳＦ２ＲＩ　、　１の　　　
　５皿Ｙ 中央部分が欠失した１ｌｓＰ２レセプター蛋白質をコー
ドするＤＮＡを含有するプラスミドを作製するため、実
施例４において得た、ＢＳＦ　２レセプタ蛋白質の全領
域をコードするｃＤＮＡを含有するプラスミｌ＝−ｐＢ
ｓ１７２Ｒ，２３６を用いた。

プラスミＦｐＢＳＩン２Ｔ１．２３６を１ｌｉｎｄＩ［
［及びＭｒｏ　ｌにより切断し、生成した断片を旧ｅｎ
ＯＷ断片により平滑末端化し、次にＸｈｏ　Ｉにより切
断して、ＤＮＡ断片Ａを得た。またｐＨｓｔ’２＋１．
２３６をＳｓｐ　ｌ及びＰｓｔｌにより切断して８００
ｂｐのＤＮＡ断片Ｂを得た。他方、ＣＤＭ　８ベクター
をＸｈｏｌ及びＰｓｔＩにより切断し、そしてＢＡＰに
より処理することにより−・フタ−断片Ｃを得た。次に
、前記ＤＮＡ断片ＡＢ、及びＣをリガーセにより連結し
、この反混混合物を用いて大腸菌ＭＣｌ０６］／Ｐ３を
形質転換し、１２５μｇ／ｍｌアンピシリン及び７５μ
に　／　ｍ（ｌテｉ・うライクリンに対して面１性のコ
１１ニーを選択することにより目的とするクローンを選
択した後プラスミドを得、これをｐΔＢＳＩ’２１副＼
１と命名した。

このプラスミドは、式（Ｉ）のアミノ酸配列中のアミノ
酸１２４〜３４２を二１−１・するＤＮΔ部分を欠き、
アミノ酸１〜１２３　とアミノ酸３４３〜４６８　とか
ら成る蛋白質をコードするＤＮＡを含有している。

実勤１列１□　プラスミドｐΔＢＳＦ２ＲＩＩ　、５の
作製（第６しＤ＝ Ｎ−末端近傍が欠失したＢｓＦ　２レセプター蛋白質を
コードするＤＮＡを含有するプラスミドを作製するため
、実施例４において得た、ＢＳＦ　２レセプター蛋白質
の全領域をコートするｃＤＮＡを含有するプラスミドｐ
ＢｓＩ１２Ｒ，２３６を用いた。

プラスミド’ｐＢＳＦ２Ｒ，２３６をＸｈｏ　Ｉ及びＦ
ｓｐ　Ｉにより切断して４５０ｂｐのＤＮＡ断片りを単
離した。また、ｐＩｌｓＦ２Ｒ，２３６をＡｐａＬ　Ｉ
及びＸｂａ　Ｉにより切断し、１、５　ｋｂｐのＤＮＡ
断片を単離し、これをＭｕｎｇ　ｂｅａｎヌクレアーゼ
により処理し、ざらにＰｓｔｌにより切断してＤＮＡ断
片Ｅを（））だ。他方、ＣＤＭ　８ベクターをＸｈｏ　
Ｉ及びＰｓｔｌにより切断し、そしてＢＡＰで処理する
ことによってハクターＤＮＡ断片Ｆを得た。次に前記Ｄ
ＮＡ断片Ｄ　、　ＩＬ、及びＦをリガーゼにより連結し
、この反応混合物を用いて大腸菌ＭＣ１０６１／Ｐ３を
形質転換し、１２５μｇ／ｍＲアンピシリン及び７５μ
ｚ　／　ｍｌｌテトラザイライクに対して耐性のコロニ
ーを選択することにより目的とするクローンを選択した
後プラスミドを得、これをｐΔｒ（ＳＦ２ＲＩＩ　、　
５と命名した。

このプラスミドは、式（１）のアミノ酸配列中アミノ酸
２８〜１０９をコートするＤＮＡ部分を欠き、アミノ酸
１〜２７とアミノ酸１１０〜４６８　とから成る蛋白質
をコー１−するＤＮＡを含有する。

実施例４において作製したプラスミドｐ　Ｂ　Ｓ　Ｉ’
　Ｓ　Ｒ２３６、実施例６において作製したプラスミＩ
・ｐΔＢＳＦ２ＲＩ　、１、及び実施例７において作製
したプラスミドｐΔＢＳＦ２ＲＩＩ　、５を、ＤＥＡＥ
−テキストラン法（Ｓｅｃｄ、Ｂ、及び八ｒｕｆｆｏ、
Ａ、、ＰＮＡＳ　　８づ：　３３６５）によりマウス繊
維芽細胞（Ｃ，Ｔｙｎｄａｌｌ等、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａ
ｃ１ｄＲｅｓ、、　　！ｊ６２３Ｌ］９８１）に形質導
入し、これらの細胞を２０％ウシ胎児血清（Ｆｅ２）を
含有するＤＭＩＥＭ培地中で培養した。培養細胞が目的
の蛋白質を発現しているか否かを実施例４に記載したの
と同様にして蛍光染色細胞分別ｉ　（ＰＡＣ５４４０）
により調べた。この８．１）果を第７図（ｐｌｉｓｌ’
２１ン２３６）、第８図（ｐΔＢ　Ｓ　ｒｉ　２１冊、
１）、及び第９図（ｐΔＢＳＩ軸ＲＩ１．５）に示す。

これらの図から明らかなごと＜　、ｐＨ５Ｆ２Ｒ。

２３６により形質導入されたＣＯＰ細胞（第７図Ｂ）及
びｐΔＢＳＦ２ＲＩＩ　、　５により形質導入されたＣ
ＯＰ細胞（第９図Ｂ）は染色されたが、ｐΔＢＳＦ２Ｒ
Ｉ　、１により形質導入されたＣＯＰ細胞（第８図Ｂ）
は染色されなかった。また、これらの染色は過剰の組換
えＢＳＦ　２の添加により阻害された（第７図Ｃ及び第
９図Ｃ）。この結果ｐＢｓＦ２１１．２３６及びｐＨ５
Ｆ２Ｒｎ　、　５はいずれもＢＳＦ　２レセプター活性
を有する蛋白質を生産していることが確認され、Ｎ末端
近傍のアミノ酸配列が除去された蛋白質もＢＳＦ　２レ
セプター活性を有することが確認された。

可溶性ＢＳＦ　２レセプター蛋白質を製造するため、Ｂ
ＳＦ　２レセプター蛋白質のＣ−末端側の膜貫通領域と
思われる部分及び細胞内蛋白質と思われる部分が除去さ
れた蛋白質を製造した。このためプラスミドＰＵＣ９を
基本ベクターとし、ヒＩ・βアクチンブロ千−クー（Ｓ
、Ｎａｋａｊ　ｉｍｄ　ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、八６
ａｄ。

Ｓｃｉ、ｌＩＳ八、、　８２，６１３３．１９８５）　
　とこの下流に配置された可溶型ＢＳＦ　２レセプター
ｃＤＮＡ及びこの下流にイス１加された翻訳終止コドン
を含んで成る発現ユニット、を含む発現ブラスミ）’ｐ
ｔ＋βＡ　Ｂ　Ｓ　Ｉ”　２　Ｉｔを作製した。

まず、プラスミドｐＢｓＦ２Ｒ，２３６をＳｐｈ　Ｉに
より切断してＢ５Ｆ２レセプターのＮ−末端側の４０２
個アミノ酸をコードする部分を含むｃＤＮ八断へを得た
。

これをファージベクター旧３ｍｐ１８のＳｐ１百部位に
挿入した後、オリゴヌクレオチド５′−ＡＴＡＴＴＣＴ
ＣＴＡＧＡＧＡＧＡＴＴＣＴ　−３’を用いて、「オリ
ゴヌクレオチドを用いた部位特異的ｉｎνｉ　ｔｒｏ変
異体作製システム」　（アマ−ジャム）により、３４４
個のアミノ酸のコドンの後にＴＡＧの終止コドンを挿入
し、変異ファージＭｌ　３ｍｐ１８　（３４５）を得た
。このファージの複製形を旧ｎｄｌｌＩ及び５ａｉｌに
より切断し、３４５位のアミノ酸の代りに終止コ］Ｓン
ＴＡＧを含むＢＳＦ　２レセプター遺伝子の断片（Ａ）
を得た。

他方、β−グロビンｐｏｌｙＡを含有するブラスミ１ｐ
ＥＣＥ　（Ｌ、ＥｌＩｉｓ　　ら、Ｃｅ１ｌ、　４５，
７２Ｌ１９８６）を５ａｌｌ及びＢａｍＨＩで切断し、
βグロビンｐｏｌｙＡを含むＤＮＡ断片（Ｂ）を得た。

さらに、プラスミドＰＵＣ９中にヒトβアクチンプロモ
ーターを含んで成るプラスミドをｌ１ｉｎｄｌｌ及びＢ
ａｍ１ｌｌにより切断し、ヒトβアンチンプ１′：Ｊモ
ーター及びＰＬＪＣ９ヘクタ一部分からなる線状化プラ
スミドを得た。次に、これら三者をを市販のＤＮＡリガ
ーゼにより連結して発現プラスミドｐｈβＡＢＳＦ２Ｒ
を得た。このプラスミドの作製過程及び構造を第１０図
に示す。

ｐｈβＡＢＳＦ２Ｒを用いての可溶性ＢＳＦ　２レセプ
ター蛋白質の発現を以下の様にして行った。ＤＭＥ旧音
地を用いて通常の方法で培養したマウス繊維芽細胞、■
、細胞（ＡＴＣＣ，ＣＣＬＩ）に、リン酸カルシウム法
キント　（ファルマシア）を用いて、　１００ｍｍペト
リ皿あたり２０μｇのｐｈβＡ　Ｂ　Ｓ　Ｆ　２　Ｉｔ
を導入した。

翌日培地を交換し、さらに２日後に培養」二清を回収し
た。

この培養上清中の可溶性ＢＳＦ　２レセプターの検出は
、実施例１１に記載するＭＴ１８抗体と実施例１に記載
した方法に基づいて作製した””　Ｉ　−ＢＳＦ　２を
用いて行った。すなわち１μｇ　／　ｍｐ、の旧゛１８
抗体を含むＰＢＳを、９６穴のマイクＩコタイタープレ
ートに１ウエルあたり、１００μｌ加え、−晩４°Ｃて
放置した。洗浄後、１ウエルあたり　Ｉ　ＯＯｐｌの１
％ＢＳＡを加え、２時間室温で放置した。洗浄後、１０
０μｌの■、細胞の培養上清を加え、２時間室温で放置
した。洗浄後、１００μＥの１２５１−１比１？２を１
ウエルあたり２０，０００ｃｐｍ加え、２時間室温で放
置した。洗浄後、各ウェルを切断し、Ｔ−カウンターで
測定した。また、培養上清ののの添加の代りに、培養上
清と共に２００ｎｇ／ｍ、ｃのラヘルしてないＢＳＦ　
２を加えた場合についても測定を行った。

比較のため、細胞が接種されていない１０％ＦＣ３を含
有するＤＭＥＭ培地、及びプラスミドが導入されていな
いし細胞の培養上清を同様に処理し、Ｔ−カウンターで
測定した。測定の結果を第１１図に示す。１０％ＦＣ３
を含むＤＭＥＭ培地及びｐｈβＡＢＳＦ２Ｒを導入して
いないＩ４細胞の培養上清と比較して、ｐ　＋＋βＡＢ
ＳＦ２１？を導入した■、細胞の培養上清中には、ＭＴ
１８抗体と’　”　Ｉ　−ＢＳＦ　２の両方に結合する
物質が明らかに存在することが示された。また、■、細
胞の培養上・清に２００ｎｇ／ｍｌのラヘルしていない
ｌ’ｌｓＦ　２を加えると、カウントが減少することか
ら、上記物質は可溶性ＢＳＦ　２レセプターであること
が証明された。

可溶性ＢＳＦ　２レセプター蛋白質をＣｏ５−１細胞を
用いて製造するため、ＢＳＦ　２レセプター蛋白質のＣ
−末端側の膜貫通領域と思われる部分及び細胞内蛋白質
と思われる部分が除去された蛋白質の製造を試のだ。こ
のためプラスミド’ｐｓＶＬ　（ファルマシア製）を基
本プラスミドとし、ｐ　Ｓ　Ｖ　Ｌプラスミドに含まれ
るＳＶ４０後期プｒ１モーターの下流に配置されたＳＶ
４０後期遺伝子のスプライシング部位と、ＳＶ４０ポリ
アゾニレ−ジョンシグナルの間に可溶性Ｒ３Ｆ２レセプ
ター発現ユニットを挿入して、ブラスミＦｐＳＶＬ３４
５を作製した。

（５つ） まず、プラスミドｐＢＳＦ２Ｒ，２３６をＳｐｈ　Ｉに
て切断してＢＳＦ−２レセプクー〇Ｎ−末端側の４０２
個のアミノ酸をコードする部分を含むｃＤＮ八断へを得
た。

これをファージベクター旧３ｍｐ１８のＳｐｌ＋１部イ
９に挿入した後、合成オリゴヌクレオチＦ　５　’−Ａ
ＴＡＴＴＣＴＣＴＡＧＡＧＡＧＡＴＴＣＴ−３’を用い
て、［オリコ゛ヌクレオチドを用いた部位特異的ｉｎ　
ｖｉｔｒｏ変異体作製システム」　（アマジャム製）に
より、３４５位のアミノ酸のコドンの代りにｉ”ＡＣの
終止コドンを挿入し、変異ファージ旧３ｍｐ１８　（３
４５）を得た。このファージの複製形をｓｐｈ　Ｉによ
り切断し、３４５位のアミノ酸の代りに終止コドンＴＡ
Ｇを含むＢＳＦ　２レセプター遺伝子の断片を得た。こ
れをプラスミドｐＳＰ７３　（プロメガバイオチック製
）のＳｐｈ１部位に挿入した後、ＢＳＦ　２レセプター
遺伝子の５′側に制限酵素Ｘｈｏ　Ｔ部位があり、３′
側にＢａｍ１ｌ　Ｉ部位となる方向に挿入されたプラス
ミドを選んだ。

これをＸｈｏ　Ｉ及びＢａｍ１ｌ　Ｔにて切断してＮ−
東側から３４４個のアミノ酸をコードする部分を含む可
溶性ＢＳＦ　２レセプタ一遺伝子断片Ａを得た。他方、
基本プラスミＦｐＳν１、をＸｈｏｌ及びＢａｍＨＩに
て切断し、アルカリホスファターゼ処理して線状化プラ
スミドＤＮＡ断片を得た。つぎに、このＤＮＡ断片とＤ
ＮＡ断片ＡをＴ４ＤＮＡ　リガーゼにより連結して発現
プラスミドｐＳＶＬ３４５を得た。このプラスミドの作
製過程を第１２図に示す。

ブ及必逮」］酪■は賞食作製 可溶性ＢＳＦ　２レセプター蛋白質を製造するため、Ｂ
ＳＩ＋２レセプター蛋白質のＣ−末端側の膜貫通領域と
思われる部分及び細胞内蛋白質と思われる部分が除去さ
れた蛋白質の製造を試みた。このためプラスミドｐＳＶ
Ｌ　（ファルマシア製）を基本プラスミドとし、ｐＳＶ
Ｌプラスミドに含まれるＳＶ４０後期プロモーターの下
流に配置されたＳＶ４０後期遺伝子のスプライシング部
位と、ＳＶ４０ポリアゾニレ−ジョンシグナルの間に可
溶性Ｂ５Ｆ２レセプター発現ユニットを挿入して、プラ
スミドｐＳＶＬ３２４を作製した。

まず、プラスミドｐＢＳＦ２Ｒ，２３６をＳｐｈ　Ｉに
て切断してＢＳＦ−２レセプター〇Ｎ−末端側の４０２
個のアミノ酸をコードする部分を含むｃＤＮＡ断片を得
た。

ごれをファーシヘククーＭ］３ｍｐ１８のＳｐｌ＋　ｌ
　ｎｌ”位に挿入した後、合成オリゴヌクレオチ１５’
　　−ＧＴＣＣＴＣＣＡＧＴＣＴＡＧ八八ＣＧＡＧＧＴ
−３へへへいて、「オリコ゛ヌクレオチＩＳを用いた部
位特異的ｉｎνｉ　Ｌｒｏ変異体作製システム」　（ア
マジャム製）により、３２４位のアミノ酸のコドンの代
りに”Ｉ’　Ａ　Ｇの８Ｌ＋Ｉニコ１ンを挿入し、変異
ファージ旧３ｍｐ１８（３２４）を得た。このファージ
の複製形を５ｐｈＩにより切断し、３２３位のアミノ酸
がアラニンからバリンに変わり、３２４位のアミノ酸の
代りに終止コドンＴ　Ａ　Ｃを含むＢＳＦ　２レセプタ
ー遺伝子の断片を得た。これをプラスミドｐＳＰ７３　
（プロメガバイオチック製）の５ｐｈＩ部位に挿入した
後、ＢＳＩ＋２レセプター遺伝子の５′側に制限酵素Ｘ
ｈｏ　Ｉ部位があり、３′側にｌｌａｍｌｌ　１部位が
来る方向で挿入されたプラスミＩＳを選んだ。

これをＸｈｏ　Ｉ及びＢａｍ１ｌ　Ｉにて切断してＮ−
東側から３２３個のアミノ酸をコードする部分を含む可
溶性ＢＳＦ　２レセプタ一遺伝子断片Ｂを得た。他方、
基本ベクターｐ　Ｓ　Ｖ　ＬをＸｈｏｌ及びＩｌａｍｌ
ｌ　Ｉにて切断し、アルカリホスファターゼ処理して線
状化プラスミドＤＮＡ断片を得た。つぎに、このＤＮＡ
断片とＤＮＡ断片ＢをＴ４ＤＮＡ　リガーゼにより連結
して発現プラスミＦｐＳＶＬ３２４を得た。このプラス
ミドの作製過程を第１３図に示す。

可　　　ＢＳＦ　２レセプター　白　のｐ　Ｓ　Ｖ　ｌ
、３４５及びｐＳＶＬ３２４を用いての可溶性ＢＳＦ　
２レセプター蛋白質の発現を以下のようにして行った。

ＤＭＥＭｔ音地に１０％（Ｖ／Ｖ）牛胎児血清（ＧＩＢ
ＣＯ）を加えて通常の方法で培養したアフリカミドリザ
ル腎由来のＣｏ５−１細胞（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ］６５０
）に、リン酸カルシウムンカ（ＷｉＢｌａｅｒ　ｅｔ　
ａｌ、Ｃｅ１１，１４，７２５−７３１゜１９７Ｂ）を
用イテ、１）ＳＶＬ３４５もしくばｐｓＶ＋、３２４、
又は比較のために可溶性ＢＳＦ　２レセプタ一発現ユニ
ットを持っていないプラスミドｐＳＶＬ　（Ｍｏｃｋ）
を導入した。それぞれのプラスミドについて１００ｍｍ
ベトリ皿あたり１×１０６の細胞を入れて１０ｍ１の培
地で１晩培養後、１　ｍｌのリン酸カルシウム溶液（Ｃ
ｈｕ、Ｇ、　＆　５ｈａｒｐ、ｒ’、Ａ、、Ｇｅｎｅ、
１３，１９７−２０２．１９８１）に入った２０μｇの
プラスミドを導入した。翌日培地を交換し、１０ｍ１の
培地を加えてさらに３日間培養後に培養上清を回収した
。

」二　中の可　　ＢＳＦ　２レセプクー　白　の側基 まず、ＭＴ１８抗体を用いる酵素抗体法による検出を行
った。すなわち、上述のようにして得られた培養」二清
を適宜希釈し、９６穴のマイクロプレートの各ウェルに
２００　／Ｊ１宛、注入した。４°Ｃで一夜放置後、洗
浄用緩衝液ですずいだ。次に１％ＢＳＡ溶液を添加し、
室温で９０分間放置して各ウェルのブロンキングを行っ
た。さらにブレートを洗浄後、実施例１１に記載する旧
゛１８抗体を添加し、室温で９０分間放置した。再びプ
レー１−を洗浄し、抗マウスｆＧ２６家兎抗体を添加し
、室温で６０分間放置した。プレー１へを洗浄後、酵素
標識した抗家兎１８Ｇヤギ抗体を加え、室温で６０分間
放置した。洗浄後、Ｐ−ｎｉｔｒｏｐｂｅｎｙｌ、　ｐ
ｈｏｓｐｈａｔｅを基質として添加して３０分間酵素反
応を行った。反応終了後、吸光度（０，Ｄ、４０５−６
００ｎｍ）をマイクロプレー１〜リーダー（東ソー社製
）を用いて測定した。

測定の結果を第１４図に示す。Ｂ５１１２レセプタ一発
現ユニットを持っていないプラスミドｐＳν１．を導入
したＣｏ５−１細胞の培養」二清と比較してｐＳＶＬ３
４５又はｐｓＶ＋、３２４を導入した培養上清中にはＭ
７１８抗体と結合する物質が存在することが明らかにさ
れた。

次に実施例９で述べたＭＴ１Ｂ抗体及び’　”　１−Ｂ
ＳＴｉ　２を用いる方法により、Ｃｏ５−１細胞の培養
上清中の可溶性レセプターの検出を試みた。測定結果を
第１５図に示す。ｐＳ　Ｖ　Ｌを導入したＣｏ５−１細
胞の培養」二清と比較してｐＳＶＬ３４５又はｐＳＶＬ
３２４を導入シタ培養上清中にはＭＴ１８抗体と’　２
５１−ＢＳＩ’　２の両方に結合する物質が存在するこ
とが判明した。

またこれらの培養上清にラベルしていないＢＳＦ　２を
添加すると、添加量に依存してカウントが減少すること
から、上記物質は可溶性のＢＳＦ　２レセプターである
ことが証明された（第１６図）。

さらに上記の実験事実を確認する目的で、別法として、
ＭＴ１８抗体、Ｂ５Ｆ２、及び抗ＢＳＦ　２家兎抗体を
用いる方法を試みた。すなわち、５μｇ　／　ｍｌ、の
ＭＴ１８抗体をマイクロタイタープレー１・の各ウェル
に２００μｌづつ添加し、４°Ｃで一夜放置した。洗浄
後、１％ＢＳＡ溶液でプレートをブロックした（室温で
９０分間）。洗浄後、適宜希釈した培養」二清を添加し
、室温で６０分間放置した。洗浄後、１０％ＦＣ３を含
むＢＳＦ　２　？容ン夜（１００ｎｇ／　ｍｐ、）をＪ
川え、室温で６０分間放置した。洗浄後、抗１（ＳＦ２
家兎ｒｇｃ抗体を５００ｎｇ／ｍＲの濃度で添加し、室
温で６０分間放置した。洗浄後、酵素標識した抗家兎Ｉ
ｇＧヤギＴｇＧ抗体を加え、室温で６０分間放置した。

以後実施例１０．と同様に行った。結果を第１７図に示
す。ｐ　Ｓ　Ｖ　Ｌを導入したＣｏ５−１細胞の培養上
清と比較して、ｐＳＶＬ３４５　、及びｐｓＶ＋、３２
４を導入したＣｏ５−１細胞の培養」二清中には、ＭＴ
１８抗体とＢＳＦ　２の両方に結合する物質が存在する
ことが確認された。

さらに培養上清を５Ｏ５−ＰＡＧＥ電気泳動にかりてか
らｎ１ｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ膜にｔｒａｎｓｂｌｏ
ｔＬｉｎＨシた後、ＭＴ１８抗体を添加して結合させた
。次いてヒオチン化した抗マウス■ｇＧ抗体を反応ざ廿
た後に、５ｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ａｌｋａ日ｎｅ　
ｐｔ＋ｏｓｐｈａｓｅ結合物を力Ｉ）えた。最後に基質
としてＮＢＴ／ＢＣＩＰを添加し、酵素反応により発色
させた。結果を第１８図に示したが、ｐＳＶＬ３２４を
導入したＣｏ５−１細胞の上清中には４２にの所に、又
、ｐＳＶＬ３４５を導入したＣｏ５−１細胞の上清中に
は５０にの所にハンドが出現し、それぞれ可溶性レセプ
ターの存在が証明された。

実施例８，９及び１０において発現された蛋白質の予想
構造を第１９図に示す。図中ＢＳＦ２Ｒ，２３６はプラ
スミドｐＢｓＩ’２Ｒ，２３６により発現される蛋白質
であり、天然ＢＳＦ　２レセプターに相当する。

ΔＢ５Ｆ２＋１１．１はプラスミドｐΔＲ３Ｆ２ＲＩ　
、１に発現される蛋白質を意味し、ΔＢＳＦ２ＲＩＩ　
、　５はプラスミドｐΔＢＳＦ２Ｒ，Ｈ，５により発現
される蛋白質を意味し、ＤＲＮＩはプラスミドｐＨｌ？
Ｎ１により発現される蛋白質を意味し、そしてｈβＡＢ
ＳＦ２ＲはプラスミドｐｈβＡＢＳＦ２Ｒにより発現さ
れる蛋白質を意味する。

ＢＳＦ２Ｒ，２３６ノみならずΔＢＳＦ２Ｒ，ＩＩ　、
５．５ＶＬ−３２３、ｈβＡＢＳＦ２Ｒ３及びＳＶＩ、
−３４４もＢＳＰＲレセプター活性を示すことから、全
長型Ｒ５Ｆ　２レセプター蛋白質のＮ末端近傍のアミノ
酸配列が除去された短縮型蛋白質、並びに膜貫通領域及
び細胞内蛋白質を含むＣ−末端側のアミノ酸配列が除去
された短縮型蛋白質はなおりＳＦ　２レセプター活性を
維持するごとが確認された。

ＢＳＦ　２レセプターに対するマウスモノクロー−ノー
ル抗体を作製する目的で、免疫源として、ヒ１〜ＢＳＦ
　２レセプターを膜面に発現しているマウス１゛細胞株
を以下の方法で作製した。すなわち、実施例４に記載し
たｐＴｈｓｒ１２Ｒ，２３６及びｐＳＶ２ｎｅｏをマウ
スＴ細胞株ＣＴＬＬ−２（ＡＴＣＣ，ＴｌＢ２１４）に
常法で導入し、Ｇ−４１８を用いる通常の方法てスクリ
ーニングをし、最終的にｌ１ＳＦ２レセプターを細胞あ
たり約３０．０００個発現している株を樹立し、これを
ＣＴＢＣ３と名づけだ。

免疫は以下の様に行った。ＲＰＭ１１６４０を用いる通
常の方法で培養後、ＰＢＳハソファーで４回洗浄したＣ
ＴＢＣ３を、Ｃ５７ＢＬ６−”）　ス１匹あたり１×１
０７細胞個、１週間に１回で計６回、腹腔内に免疫した
。

前記免疫されたマウスからの肺細胞を、親株としてのミ
エローマ細胞系Ｐ３Ｕ１と、ポリエチレングリコールを
用いる通常の方法に従って融合せしめた。

スクリーニングは以下の様に行った。ＢＳＦ　２レセプ
ター陰性のヒトＴ細胞株Ｊｕｌ？ＫＡＴ　（ＡＴＣＣＣ
Ｉ？Ｌ８］６３）に、ｐＢｓＦ２Ｒ，２３６とｐＳＶ２
ｎｅｏを常法で導入し、スクリーニングの結果、ＢＳＦ
　２レセプターを細胞あたり約１００，０００個発現し
ている株を樹立し、これをＮＪＢＣ８と名づけた。ＮＰ
４０で可溶化したＮＪＢＣ８を認識し、ＮＰ４０で可溶
化したＪＵＲＫ訂を認識しない抗体を産生じているハイ
ブリドーマが１クローン単因１され、これをＭＴｌＢと
名づけだ。また、このハイブリドーマによって生産され
るモノクローナル抗体をＭＴ１８抗体と称する。第２０
図のデーターはＭＴ１８抗体がＢＳＦ　２レセプターを
特異的に認識することを示している。この図中Ａは、フ
ルオレッセインイソシアネートで標識されたＭ７１８抗
体によりＪＵＲＫＡＴ細胞を染色した場合に蛍光染色さ
れた細胞の分布を示し、Ｂは前記ＮＪＢＣ８細胞を同様
に処理した場合の結果を示す。

〔発明の効果〕

本発明て提供されるＢＳＦ　２レセプター活性を有する
蛋白質をコートするＤＮＡ配列、さらには該蛋白質を遺
伝子工学的に生産するための手段、および方法により、
自然状態では極めて微量にしか生産されないＢＳＦ　２
レセプターを含めて１ｌｓｌ＋２レセプター活性を有す
る種々の蛋白質を大量に生産することが可能である。ま
た本発明で提供されるＢＳＦ　２レセプターのアミノ酸
配列により、該蛋白質の諸性質等を推測するなとの行為
も可能となる。

このことはｌ’ＬＳＩ１２レセプターさらには生体の免
疫機構等の研究、またはそれらを用いた免疫疾［有］に
対する治療薬診断薬等の開発等に大きな意義をもつもの
である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明のｃ　ｌ）Ｎ　Ａ含有ヘククーにより
ｌ−ランスフエフ１−された細胞（Ｂ）、ネガティツー
、フタ−によりトランスフェクト 及びｃ　Ｄ　Ｎ　Ａ含有ベクターにより１〜ランスフェ
クトされた細胞のビオチン化ＢＳＦ　２による処理を過
剰の１（Ｓ］ン２の存在下で行った場合（Ｃ）の、ＩＩ
ＳＦ２ビオチン−アヒシンを介して蛍光染色された細胞
における蛍光染色強度に対する細胞の分布を示す。 第２１２Ｉは、本実施例でＮＫ細胞ＹＴ株から得られた
ＢＳＩ７２レセプターをコードするｌ）　Ｎ　Ａ配列を
含むｃＤＮＡの制限酵素地図を示し、ｃ．Ｄ　Ｎ　Ａ中
の開始コｌン（　Ａ　ＴＧ　）から終止フトン（ＡＧＡ
）までの範囲を示す。 第３−１図〜第３−５図は、本実施例でＮＫ細胞ＹＴ株
から得られたＢＳＦ　２レセプターをコートするＩ）　
Ｎ　Ａ配列についてその塩基配列を解析した結果、及び
ごのＤＮＡ配列が発現された場合に生産される蛋白質即
ちＢＳＦ２レセプターの推定されるアミノ酸配列を示す
。下線部分はＮ末端側の疎水性アミノ酸領域を示し、二
重下線部分はＣ末端側の疎水性アミノ酸部分領域を示す
。 第４図は、１″’　Ｉ−１（Ｓｔ？２の結合実験の結果
を示す。各種細胞のＢＳＦ２レセプターの有無とハイフ
リダイセーシリンのシフナルの有無が一致している。 第５図は、シラスミｔ”　ｐ△Ｉｔ　Ｓ　ｌｉ　２１？
１．１０）（”ｌ製過稈を示す。 第６図は、シラスミ［ｐΔＩＩ　Ｓ　Ｉ＋　２１冊［５
の作製過程を示す。 第７図は、プラスミドｐＨＳＦ２１１．２３６により形
質転換された細胞ＣＯＰの蛍光染色におＬＪる、、＋ｉ
′！光染色光度色強度る細胞の分布を示し、図中△，Ｂ
及びＣは第１図の場合と同し意味をイｊする。 第８図は、シラスミｔ”　ｐΔＢＳＴｉ２１？　ｌ　、
　１　により形質転換された細胞Ｃ　Ｏ　Ｐの蛍光染色
におｉＪる、蛍光染色強度に対する細胞の分′！ｌｊを
示し、図中Ａ　、　Ｂ及びＣは第１図の場合と同し意味
を有する。 第９回は、シラスミｌ’　ｐ△１３Ｓ１ン２１ン１１．
５により形質転換された細胞ＣＯＰの蛍光染色におｉす
る、＞３＋を先染色強度に対する細胞の分布を示し、し
１中Δ，Ｂ及びＣｌｔ第１図の場合と同し意味を有する
。 第１０図Ａ及び第１２図Ｆ３は、シラスミｌｐｈβＡＢ
ＳＦ２Ｒの作製過程及びその構造を示す。 第１１図は、シラスミＩ’　ｐ　ｈβＡＢＳＦ２Ｒによ
り生産される蛋白質がＩ！ＳＦ　２に特異的に結合する
ことを示すグラフである。 第１２圓はシラスミｌＳ’ｐｓＶＬ３４５の作製過程を
示す。 第１３図番」シラスミｌ”ｐｓＶｌ、３２４の作製過程
を示ず。 第１４図は、シラスミドｐｓＶＬ３４５又はｐｓＶｌ、
３２４によりトランスフＬりＩ・されたＣｏｓ−］細胞
の培養上清の酵素イムノアッセイによる可溶性Ｂｓ＋＋
　２レセプクー蛋白質の検出結果を示す。 第１５図は、シラスミｌ”ｐｓＶＬ３４５又はｐＳＶＬ
３２４によりトランスフェクト 斗清中の仕成物かＢＳＦ２に結果的に結合することを示
すグラフである。 第］　６　１Ｅ＞！　４；ｔ：、フラ；２．　ミＦ’　
ｐＳＶＬ３４５又はｐ　Ｓ　Ｖ　＋．．３　２　４によ
り１−ランスフエフ１〜されたＣｏｓｌ細胞の培養」１
清中の生成物の１２ゝＩ−ＢＳＦ２への結合がＢＳＦ２
により阻害されることを示すグラフである。 第１７同は、シラスミＦｐＳＶＬ３４５又はｐＳＶＬ３
２４により１〜ランスフエク１されたＣｏ５−Ｉ　Ｋ、
Ｉ１１胞の培養−Ｆ清中の生成物力＜ＭＴ１８抗体及ｏ
　Ｉ＋ｓｐ２の両者と結合することを示すグラフである
。 第１８図は、プラスミＦｐＳνＬ３４５又はｐｓＶＬ３
２４によりトランスフｌりＩ・されたＣｏ５−１細胞の
」清中の生成物を５ＤＳ−面ＧＩｉにより分則しＭＴＩ
ｏｂ’ｃ体により検出した電気泳動図であり、比較のた
めｌｌ５Ｆ２レセプター生産細胞Ｕ２６６の細胞熔解物
の結果を併わせで示す。 第１９図は、Ｂ５Ｆ２レセプクー蛋白質及びその短縮型
蛋白質の構造を模式的に示す。 第２０図は、ＭＴ１Ｂ抗体かｌｌ５Ｆ　２レセプター産
生細胞のみに結合することを示す細胞分布図である。 螢光強度 Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ａ
ｌａ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｇ］、ｙ　Ｔ
ｈｒ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ａｓ
ｐ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　ＧｌｕＡＡＣＴＡＴ　Ｔ
ＣＡ　ＴＧＣＴＡＣＣＧＧ　ＧＣＣＧＧＣＣＧＣＣＣＡ
　ＧＣＴ　ＧＧＧ　ＡＣＴ　ＧＴＧ　ＣＡＣＴＴＧ　Ｃ
ＴＧ　　ＧＴＧ　ＧＡＴ　ＧＴＴ　ＣＣＣＣＣＣＧＡＧ
Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｐ
ｈｅ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｓｅ
ｒ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　ＣｙＳＧｌｕ　Ｔｒｐ　
Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　５ｅｒＧＡＧ　　ＣＣＣＣＡ
Ｇ　　ＣＴＣＴＣＣＴＧＣＴＴＣＣＧＧ　　ＭＧ　ＡＧ
ＣＣＣＣＣＴＣＡＧＣＡ、ＡＴ　ＧＴＴ　　ＧＴＴ　　
ＴＧＴ　　ＧＡＧ　　ＴＧＧ　　ＧＧＴ　　ＣＣＴ　　
ＣＧＧ　　ＡＧＣＴｈｒ　Ｐｒｏ　　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　
Ｔｈｒ　　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　
　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌ
ｎ　Ａｓｎ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　Ａｌａ　　Ｇｌｕ　
Ａｓｐ　ＰｈｅＡＣＣＣＣＡ　　ＴＣＣＣＴＧ　　ＡＣ
Ｇ　　ＡＣＡ　　ＭＧ　　ＧＣＴ　　ＧＴＧ　　ＣＴＣ
ＴＴＧ　　ＧＴＧ　　ＡＧＧ　　ＡＡＧ　　ＴＴＴ　　
ＣＡＧ　　ＡＡＣＡＧＴ　　ＣＣＧ　　ＧＣＣＧＡＡ　
　ＧＡＣＴＴＣＧｌｎ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｇｌ
ｎ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ
　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　
Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　ＡＳｐＣＡ
Ｇ　ＧＡＧ　　ＣＣＧ　　ＴＧＣＣＡＧ　　ＴＡＴ　　
ＴＣＣＣＡＧ　　ＧＡＧ　　ＴＣＣＣＡＧ　ＡＡＧ　　
ＴＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＧ　　ＴＴＡ　　ＧＣＡ　　Ｇ
ＴＣＣＣＧ　　ＧＡＧ　　ＧＧＡ　　ＧＡＣ３ｅｒ　Ｓ
ｅｒ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｍｅ
ｔ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ
　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　
Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　ＴｈｒＡＧＣＴＣＴ　　ＴＴＣＴＡＣ
ＡＴＡ　　ＧＴＧ　　ＴＣＣＡＴＧ　　ＴＧＣＧＴＣＧ
ＣＣＡＧ’Ｊ’　　ＡＧＴ　　ＧＴＣＧＧＧ　　ＡＧＣ
ＭＧ　　ＴＴＣＡＧＣＡＡＡ　　ＡＣＴ　　ＣＡＡ　　
ＡＣＣ第３−２し Ｐｈｅ　Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ工１ｅ　Ｌｅ
ｕ　Ｇｌｎ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ａｌａ
　Ａｓｎ工］−ｅ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　
Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｒｇ　ＡｓｎＴＴＴ　　ＣＡＧ　　
ＧＧＴ　　ＴＧＴ　　ＧＧＡ　　ＡＴＣＴＴＧ　　ＣＡ
Ｇ　　ＣＣＴ　　ＧＡＴ　　ＣＣＧ　　ＣＣＴ　　ＧＣ
ＣＡＡＣＡＴＣＡＣＡ　　ＧＴＣＡＣＴ　　ＧＣＣＧＴ
Ｇ　　ＧＣＣＡＧＡ　　ＡＡＣＰｒｏ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ
　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｔｒｐ　Ｇｌｎ　
Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ｔｒｐ　Ａｓｎ　Ｓ
ｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ａｒ
ｇ　ＰｈｅＣＣＣＣＧＣＴＧＧ　　ＣＴＣＡＧＴ　　Ｇ
ＴＣＡＣＣＴＧＧ　　ＣＡＡ　　ＧＡＣＣＣＣＣＡＣＴ
ＣＣＴＧＧ　　ＡＡＣＴＣＡ　　ＴＣＴ　　ＴＴＣＴＡ
ＣＡＧＡ　　ＣＴＡ　　ＣＧＧ　　ＴＴＴＧｌｕ　Ｌｅ
ｕ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ
　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　
Ｔｒｐ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｇ
ｌｎ　Ｈｌｓ　ＨｌｓＧＡＧ　ＣＴＣＡＧＡ　ＴＡＴ　
ＣＧＧ　ＧＣＴ　ＧＡＡ　ＣＧＧ　ＴＣＡ　ＡＡＧ　Ａ
ＣＡ　ＴＴＣＡＣＡ　ＡＣＡ　ＴＧＧ　ＡＴＧ　ＧＴＣ
ＡＡＧ　ＧＡＣＣＴＣＣＡＧ　ＣＡＴ　ＣＡＣＣｙｓ　
Ｖａｌエエｅ　Ｈｉｓ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｓｅ
ｒ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｈｉｓ　Ｖａｌ　Ｖａｌ
　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　
Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　ＧｌｙＴＧＴ　　ＧＴＣＡＴＣＣＡＣ
ＧＡＣＧＣＣＴＧＧ　　ＡＧＣＧＧＣＣＴＧ　　ＡＧＧ
　　ＣＡＣＧＴＧ　　ＧＴＧ　　ＣＡＧ　　ＣＴＴ　　
ＣＧＴ　　ＧＣＣＣＡＧ　　ＧＡＧ　　ＧＡＧ　　ＴＴ
ＣＧＧＧＧｌｎ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　Ｓｅｒ　Ｇ
ｌｕ　Ｔｒｐ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｍｅ
ｔ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ
　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｐｒ。 ＣＡＡ　　ＧＧＣＧＡＧ　　ＴＧＧ　　ＡＧＣＧＡＧ　
　ＴＧＧ　　ＡＧＣＣＣＧ　　ＧＡＧ　　ＧＣＣＡＴＧ
　　ＧＧＣＡＣＧ　　ＣＣＴ　　ＴＧＧ　　ＡＣＡ　　
ＧＡＡ　　ＴＣＣＡＧＧ　　ＡＧＴ　　ＣＣＴ　　ＣＣ
Ａく ｍ 早 積 里 尼 姪 ｄ 口袴 耘 球 第 同 ｏｃｋ 第 図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒトＢ細胞刺激因子２と特異的に結合し得るヒトＢ
   細胞刺激因子２レセプター活性を有する蛋白質。 ２、下記の式（ I ）： （Ｎ末端） 【遺伝子配列があります。】 （Ｃ末端） （ただし、式中Ａｌａはアラニン、Ａｒｇはアルギニン
   、Ａｓｎはアスパラギン、Ａｓｐはアスパラギン酸、Ｃ
   ｙｓはシステイン、Ｇｌｎはグルタミン、Ｇｌｕはグル
   タミン酸、Ｇｌｙはグリシン、Ｈｉｓはヒスチジン、Ｉ
   ｌｅはイソロイシン、Ｌｅｕはロイシン、Ｌｙｓはリジ
   ン、Ｍｅｔはメチオニン、Ｐｈｅはフェニルアラニン、
   Ｐｒｏはプロリン、Ｓｅｒはセリン、Ｔｈｒはトレオニ
   ン、Ｔｒｐはトリプトファン、Ｔｙｒはチロシン、そし
   てＶａｌはバリン残基を示す）で表されるアミノ酸配列
   を有するか、あるいはこのアミノ酸配列中の１個もしく
   は複数個のアミノ酸残基が他のアミノ酸基により置換さ
   れており、そして／又は１個もしくは複数個のアミノ酸
   が欠失しており、そして／又は１個もしくは複数個のア
   ミノ酸が上記アミノ酸配列に付加されているアミノ酸列
   を有し、且つヒトＢ細胞刺激因子２と特異的に結合する
   能力を保持していることを特徴とする請求項１に記載の
   蛋白質。 ３、請求項２に記載のアミノ酸配列の内、Ｎ−末端の近
   傍が欠けているアミノ酸配列を有する請求項２に記載の
   蛋白質。 ４、下記の式（II）： （Ｎ末端） 【遺伝子配列があります。】 （Ｃ末端） で表されるアミノ酸配列を有する請求項３に記載の蛋白
   質。 ５、請求項２に記載のアミノ酸配列の内、Ｃ−末端部分
   が欠けているアミノ酸配列を有する請求項２に記載の蛋
   白質。 ６、下記の式（III）： （Ｎ末端） 【遺伝子配列があります。】 で表わされるアミノ酸配列を有する請求項５に記載の蛋
   白質。 ７、下記の式（IV）： （Ｎ末端） 【遺伝子配列があります。】 で表わされるアミノ酸配列を有する請求項５に記載の蛋
   白質。 ８、請求項１に記載の蛋白質をコードするＤＮＡ配列。 ９、請求項２に記載のいずれかのアミノ酸配列を有する
   蛋白質をコードするＤＮＡ配列。 １０、下記の式（Ｖ）： 【遺伝子配列があります。】 （ただしＡはアデニン、Ｇはグアニン、Ｃはシトシン、
   Ｔはチミンを有するヌクレオチドを示す）で表されるＤ
   ＮＡ配列を有するか、あるいはこのＤＮＡ配列中の１個
   もしくは複数個のヌクレオチドが他のヌクレオチドによ
   り置換されており、そして／又は１個もしくは複数個の
   ヌクレオチドが欠失しており、そして／又は１個もしく
   は複数個のヌクレオチドが上記ＤＮＡ配列に付加されて
   いるＤＮＡ配列を有することを特徴とする請求項９に記
   載のＤＮＡ配列。 １１、請求項３〜７のいずれか１項に記載の蛋白質をコ
   ードするＤＮＡ配列。 １２、ＤＮＡ配列を発現させ得るＤＮＡ配列と読取り可
   能に結合していることを特徴とする請求項８に記載のＤ
   ＮＡ配列。 １３、組換微生物または培養細胞中で請求項８に記載の
   ＤＮＡ配列を発現し得る複製可能な発現ベクター。 １４、請求項１３のベクターにより形質転換された微生
   物又は培養細胞。 １５、請求項１３に記載の発現ベクターにより形質転換
   された微生物または培養細胞を培養してＢ細胞刺激因子
   ２レセプター蛋白質をコードするＤＮＡ配列を発現させ
   該蛋白質を生成させ、これを採取することを特徴とする
   Ｂ細胞刺激因子２レセプター活性を有する蛋白質の生産
   方法。 １６、請求項１〜７のいずれか１項に記載の蛋白質の少
   なくともいずれか１つと特異的に結合する抗体。 １７、請求項１６に記載の性質を有するモノクローナル
   抗体を生産するハイブリドーマ。