JPH0236185A - 新規抗生物質アラノロシン - Google Patents
新規抗生物質アラノロシンInfo
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- JPH0236185A JPH0236185A JP1117650A JP11765089A JPH0236185A JP H0236185 A JPH0236185 A JP H0236185A JP 1117650 A JP1117650 A JP 1117650A JP 11765089 A JP11765089 A JP 11765089A JP H0236185 A JPH0236185 A JP H0236185A
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- culture
- compound
- chloroform
- methanol
- cultured
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/12—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D493/20—Spiro-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規抗生物質、アラノロシン（ａｒａｎｏ−ｒ
ｏｓＩＩ］）および培養真菌（ｆｕｎｇｕｓ ｃｕｌｔ
ｕｒｅ ） Ａ Ｙ −３０４９９からのその製造方法
に関する。
ｏｓＩＩ］）および培養真菌（ｆｕｎｇｕｓ ｃｕｌｔ
ｕｒｅ ） Ａ Ｙ −３０４９９からのその製造方法
に関する。
アラノロシン製造用の培養真菌Ｙ−３０４９９は土壌か
ら単離されそしてプソイドアラキニオタスロゼウス（Ｐ
ｓｅｕｄｏａｒａｃｈｉｎｉｏｔｕｓ ｒｏｓｅｕｓ
）、Ｋｕｅｈｎ （Ｍｙｃｏ−１ｏｇｉａ ６９ ：
１２６〜１６３．１９７７参闇）として同定された。該
ｍはユーミコタ（Ｅｕｍｙｃｏｔａ ）門およびアスコ
ミコチナ（Ａｓｃｏｍｙｃ ｏ ｔ ｉｎ ａ亜門、プ
レクトミセテス（Ｐｌｅｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ ）網、
ユーロチアレス（Ｅｕ丁ｏｔ、１ａｌｅｓ ）目、ジム
ノアスカセ（Ｇｙｍｎｏ−ａｓｃａｃｅａｅ ）科に属
する（ ｏ、ｃ、 Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ氏等編、１９７
３年、＠Ｔｈｅ Ｆｕｎｇｉ、 Ａｎ Ａｄｖａｎｃｅ
ｄ Ｔｒｐａｉｉｓｅ”第１’ｌｌ’Ａおよび第１ＶＢ
巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、 ＮｅｗＹｏｒｋ
参皿〕。この培養Ａ、菌によって生産される抗生物５Ｑ
′は今まで文献中に全く記款されたことがない。
ら単離されそしてプソイドアラキニオタスロゼウス（Ｐ
ｓｅｕｄｏａｒａｃｈｉｎｉｏｔｕｓ ｒｏｓｅｕｓ
）、Ｋｕｅｈｎ （Ｍｙｃｏ−１ｏｇｉａ ６９ ：
１２６〜１６３．１９７７参闇）として同定された。該
ｍはユーミコタ（Ｅｕｍｙｃｏｔａ ）門およびアスコ
ミコチナ（Ａｓｃｏｍｙｃ ｏ ｔ ｉｎ ａ亜門、プ
レクトミセテス（Ｐｌｅｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ ）網、
ユーロチアレス（Ｅｕ丁ｏｔ、１ａｌｅｓ ）目、ジム
ノアスカセ（Ｇｙｍｎｏ−ａｓｃａｃｅａｅ ）科に属
する（ ｏ、ｃ、 Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ氏等編、１９７
３年、＠Ｔｈｅ Ｆｕｎｇｉ、 Ａｎ Ａｄｖａｎｃｅ
ｄ Ｔｒｐａｉｉｓｅ”第１’ｌｌ’Ａおよび第１ＶＢ
巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、 ＮｅｗＹｏｒｋ
参皿〕。この培養Ａ、菌によって生産される抗生物５Ｑ
′は今まで文献中に全く記款されたことがない。
該培養菌Ｙ−３０４９９は１９８７年６月２３日付で西
独微生物収集所（ｔｈｅ Ｇｅｒｍａｎ Ｍｉｃｒｏｏ
ｒｇａｎｉｓｍｃｏｌｌｅｃｔｔｏｎ ）に受託ＡＤＳ
Ｍ４１５１として寄託された。
独微生物収集所（ｔｈｅ Ｇｅｒｍａｎ Ｍｉｃｒｏｏ
ｒｇａｎｉｓｍｃｏｌｌｅｃｔｔｏｎ ）に受託ＡＤＳ
Ｍ４１５１として寄託された。
アラノロシンは下記の構造式を有する。
本発明はまた該培養Ｘ菌Ａ Ｙ−３０４９９からの新規
抗生物質アラノロシンの製造方法に関する。
抗生物質アラノロシンの製造方法に関する。
その方法は該培養真鉛を炭素源、窒素源、無機栄養塩お
よび微量元素を含有する栄養培地上で好気性条件下にお
いて２４〜３０℃の温度および６．０〜８．０の−で６
６〜９０時間発酵により培養し、次にその抗生物質を培
養プロスから慣用法で単離しそして精製することからな
る。
よび微量元素を含有する栄養培地上で好気性条件下にお
いて２４〜３０℃の温度および６．０〜８．０の−で６
６〜９０時間発酵により培養し、次にその抗生物質を培
養プロスから慣用法で単離しそして精製することからな
る。
適当な炭素源はグルコース、スクロース、デンプンまた
はデキストリンである。デンプンが炭素源としてはよシ
好ましい。適当な窒素源は大豆ミール、トリプトン、酵
母エキス、ビーフエキスｌｔ？エキス、コーンステイー
フリカーペプトンまたは無機物質例えばアンモニウム塩
である。より好ましい窒素源は大豆ミールである。無機
栄養塩は塩化ナトリウム、りん酸水素カリウムおよび９
ん酸二水素カリウムまたは炭酸カルシウムであることが
できる。存在し５る微量元素は鉄、マンガン、銅、亜鉛
またはコバルトの塩である。
はデキストリンである。デンプンが炭素源としてはよシ
好ましい。適当な窒素源は大豆ミール、トリプトン、酵
母エキス、ビーフエキスｌｔ？エキス、コーンステイー
フリカーペプトンまたは無機物質例えばアンモニウム塩
である。より好ましい窒素源は大豆ミールである。無機
栄養塩は塩化ナトリウム、りん酸水素カリウムおよび９
ん酸二水素カリウムまたは炭酸カルシウムであることが
できる。存在し５る微量元素は鉄、マンガン、銅、亜鉛
またはコバルトの塩である。
該培養菌扁Ｙ−３０４９９Ｆｉ２５℃（±１℃）および
μ４６．５で培養するのが好都合である。培養は撮と５
フラスコおよび発酵槽の両方において行うことができる
。この培養は７２時間行うのが好ましい。本発明の抗生
物質の最大収率が上記時間の後に得られることは明らか
である。液内培養が可能でありしかも好ましい。この培
養真餉が発酵槽中で培養される場合、それは挑発泡剤例
えばプロピレンオキシドを基本としそして平均分子量が
２．０００±１００である線状ポリエーテル（Ｂａｙｅ
ｒ社製のＤｅｓｍｏｐｈｅｎ＠）の存在下で行うことが
できる。
μ４６．５で培養するのが好都合である。培養は撮と５
フラスコおよび発酵槽の両方において行うことができる
。この培養は７２時間行うのが好ましい。本発明の抗生
物質の最大収率が上記時間の後に得られることは明らか
である。液内培養が可能でありしかも好ましい。この培
養真餉が発酵槽中で培養される場合、それは挑発泡剤例
えばプロピレンオキシドを基本としそして平均分子量が
２．０００±１００である線状ポリエーテル（Ｂａｙｅ
ｒ社製のＤｅｓｍｏｐｈｅｎ＠）の存在下で行うことが
できる。
本発明によるアラノロシンの生成過程は、知られた寒天
子機培地拡散測定法によってバチルスズブチリス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ ）およびアスペルギ
ルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ Ｉ］１ｇｅｒ
）に対する該培養ブロスの生物活性を測定することによ
って検出することができる。
子機培地拡散測定法によってバチルスズブチリス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ ）およびアスペルギ
ルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ Ｉ］１ｇｅｒ
）に対する該培養ブロスの生物活性を測定することによ
って検出することができる。
本発明によるアラノロシンは知られた標草の実験室的手
法によって単離および精製される。
法によって単離および精製される。
例えば該培養を遠心分離機にかけて培養炉液から菌糸体
を分離させる。アラノロシンは培養炉液の−を７．ＯＫ
調整後に水と非混和性の溶媒例えば酢酸エチル、クロロ
ホルムまたはブタノール（酢酸エチルがよシ好ましい）
を用いて抽出することによって該炉液から得ることがで
きる。
を分離させる。アラノロシンは培養炉液の−を７．ＯＫ
調整後に水と非混和性の溶媒例えば酢酸エチル、クロロ
ホルムまたはブタノール（酢酸エチルがよシ好ましい）
を用いて抽出することによって該炉液から得ることがで
きる。
菌糸体中のアラノロシンは、該菌糸体を溶媒例えば酢酸
エチル、クロロホルム、メタノール、エタノール、アセ
トンまたけブタノール（アセトンがより好ましい）で抽
出することにより得られる。抽出後に溶媒を真窒中での
蒸発により除去しそして水性層を水で希釈しついで再び
前記のような溶媒で抽出する。培養炉液と菌糸体の両方
からの溶媒抽出物を合一し、蒸発乾固しついで例えばカ
ラムクロマトグラフィーを用いて精製する。
エチル、クロロホルム、メタノール、エタノール、アセ
トンまたけブタノール（アセトンがより好ましい）で抽
出することにより得られる。抽出後に溶媒を真窒中での
蒸発により除去しそして水性層を水で希釈しついで再び
前記のような溶媒で抽出する。培養炉液と菌糸体の両方
からの溶媒抽出物を合一し、蒸発乾固しついで例えばカ
ラムクロマトグラフィーを用いて精製する。
実施例 １
基準培養画人Ｙ−５０４９９の保存
培養菌扁Ｙ−３０４９９は下記の組成
グルコース ４０２
ペプトン １０２
Ｎａ２ＨＰＯ４１を
寒 天 １５ｆ蒸留水
１１ ｐｉ−１６，５ からなるサブローのグルコース／寒天培地上に保存され
る。上記各成分を加熱して完全に溶解した後に、その培
地を各試験管に分配し次に１２１℃で２０分間滅菌する
。オートクレーブに入れる前ＯｐＨは６．５である。各
試験管を傾斜した位置で冷却して寒天斜面をガ製する。
１１ ｐｉ−１６，５ からなるサブローのグルコース／寒天培地上に保存され
る。上記各成分を加熱して完全に溶解した後に、その培
地を各試験管に分配し次に１２１℃で２０分間滅菌する
。オートクレーブに入れる前ＯｐＨは６．５である。各
試験管を傾斜した位置で冷却して寒天斜面をガ製する。
これらの寒天斜面に土壌から単離した培養菌ＡＹ−３０
４９９の胞子を接ろしついで十分な胞子形成が観察され
るまで２６℃（±１℃）で培養する。
４９９の胞子を接ろしついで十分な胞子形成が観察され
るまで２６℃（±１℃）で培養する。
十分な胞子形成を有した培養菌を冷蔵庫中に貯蔵する。
発酵による新規抗生物質アラノロシンの製造における娠
と５フラスコ中での培養菌Ａ Ｙ−３０４９９の培養 釉培地の組成： 可溶性デンプン １５２大豆ミール
１５Ｐグルコース
５ｆＣａ００ｓ ２
ｆＮａＣ！ｌ ５ ｆ酵
母エキス ２ｆコーンステイープ
リカー １ｆ蒸留水 １１ 上記の種培地１００ａずつの各試料を広口の５０ＯＮエ
ルレンマイヤーフラスコの各々に分配しついで１２１℃
で２０分間滅菌する。オートクレーブに入れる前のｐＨ
１ｄ６．５に調整されそしてその後では６．０である。
と５フラスコ中での培養菌Ａ Ｙ−３０４９９の培養 釉培地の組成： 可溶性デンプン １５２大豆ミール
１５Ｐグルコース
５ｆＣａ００ｓ ２
ｆＮａＣ！ｌ ５ ｆ酵
母エキス ２ｆコーンステイープ
リカー １ｆ蒸留水 １１ 上記の種培地１００ａずつの各試料を広口の５０ＯＮエ
ルレンマイヤーフラスコの各々に分配しついで１２１℃
で２０分間滅菌する。オートクレーブに入れる前のｐＨ
１ｄ６．５に調整されそしてその後では６．０である。
各フラスコを冷却し、次に十分に胞子形成された前記培
養菌で満ちた白金耳数個を用いて接種しそして２４ Ｏ
ｒｐｍおよび２６℃（±１℃）で６０時間振とうし、そ
の間に十分な増殖を観察する。このようにして得た種培
養菌を用いて下記組成の生産培地に接種する。
養菌で満ちた白金耳数個を用いて接種しそして２４ Ｏ
ｒｐｍおよび２６℃（±１℃）で６０時間振とうし、そ
の間に十分な増殖を観察する。このようにして得た種培
養菌を用いて下記組成の生産培地に接種する。
生産培地の組成：
大豆ミール
グルコース
ａＣＯｇ
ａｃｔ
ＮＨａＯｌ。
Ｈ２ＰＯ４
ｚｎｓｏａ・７Ｈ２０
ＣｏＣ１２
ＭｎＣ４２・４Ｈ２０
ＦｅＳ０４・７Ｈ２０
ＣｕＳ０４・５Ｈ２０
ＣｏＣ１２・６Ｈ２０
蒸 留 水
２０ ？
３０ タ
６ ？
１．５２
０．２２■
０．５５■
０．５ ■
０．５ ■
０．１６■
０．１６■
上記の生産培地２００！／ずつの各試料を１！エルレン
マイヤーフラスコの各々に分配しついで１２１℃で２０
分間滅菌する。この培地の…はオートクレーブに入れる
前には６．５に調整されそしてその後には６．０である
。各フラスコを冷却し、次に前記の種培地（１％ ｖ／
ｖ ）を接種する。発酵は回転振と５器中において２６
℃（±１℃）で７２時間行われる。アラノロシンの生産
はバチルスズゾチリスおよびアスペルギルスニガーに対
する活性のプロフィルによって試験する。収穫後この培
養ブロスを遠心分離機にかけ、ついでアラノロシンを下
記のようにして菌糸体と培養炉液との両方から単離しそ
して精製する。
マイヤーフラスコの各々に分配しついで１２１℃で２０
分間滅菌する。この培地の…はオートクレーブに入れる
前には６．５に調整されそしてその後には６．０である
。各フラスコを冷却し、次に前記の種培地（１％ ｖ／
ｖ ）を接種する。発酵は回転振と５器中において２６
℃（±１℃）で７２時間行われる。アラノロシンの生産
はバチルスズゾチリスおよびアスペルギルスニガーに対
する活性のプロフィルによって試験する。収穫後この培
養ブロスを遠心分離機にかけ、ついでアラノロシンを下
記のようにして菌糸体と培養炉液との両方から単離しそ
して精製する。
アラノロシンの単離および精製
培養炉液（１４１：培養ブロス約１５０！の遠心分離に
よって得られた）をＰＩ−１６，７において酢酸エチル
５０！で抽出する。この抽出を再び繰り返し、合一した
抽出物から酢酸エチルを除去し次にそれを減圧下３５℃
で濃縮する。菌糸体（１１，３ｋｆ、培養約１５０！を
遠心分離機にかけることによって得られた）のケーキを
それぞれ３０７ずつのアセトンで２回同様にして抽出す
る。合一した抽出物からアセトンの大部分を減圧下に６
５℃で除去し、残留する水性相をそれぞれ３Ｊずつの酢
酸エチルで２回抽出する。
よって得られた）をＰＩ−１６，７において酢酸エチル
５０！で抽出する。この抽出を再び繰り返し、合一した
抽出物から酢酸エチルを除去し次にそれを減圧下３５℃
で濃縮する。菌糸体（１１，３ｋｆ、培養約１５０！を
遠心分離機にかけることによって得られた）のケーキを
それぞれ３０７ずつのアセトンで２回同様にして抽出す
る。合一した抽出物からアセトンの大部分を減圧下に６
５℃で除去し、残留する水性相をそれぞれ３Ｊずつの酢
酸エチルで２回抽出する。
酢酸エチル抽出物を減圧下に３５℃で濃縮しそして培養
炉液抽出物の濃縮物と合一する。
炉液抽出物の濃縮物と合一する。
赤味がかった茶色の粗製抗生物質アラノロシン（１９６
Ｆ）をシリカゲル（２神、１インチ当たり１００〜２０
０個の孔を有する）上でクロマトグラフィーにかけ、ク
ロロホルム中におけるメタノール濃度が５俤に達するま
でメタノール含量を増加させながらクロロホルム／メタ
ノール混合物で溶離させる。アラノロシンはクロロホル
ム中における２〜４チメタノールで溶離される。
Ｆ）をシリカゲル（２神、１インチ当たり１００〜２０
０個の孔を有する）上でクロマトグラフィーにかけ、ク
ロロホルム中におけるメタノール濃度が５俤に達するま
でメタノール含量を増加させながらクロロホルム／メタ
ノール混合物で溶離させる。アラノロシンはクロロホル
ム中における２〜４チメタノールで溶離される。
上記の半精裂アラノロシン（６８９）を再Ｕシリカゲル
（１，３ｋｆ、１イアｆ当たり２ｏｏ〜３ｏ。
（１，３ｋｆ、１イアｆ当たり２ｏｏ〜３ｏ。
個の孔を有する）上でクロマトグラフィーにかけ、そし
て最初のカラムクロマトグラフィーで前述したクロロホ
ルム／メタノール混合物で溶離させてさらに精製したア
ラノロシン（１３ｔ）を得る。
て最初のカラムクロマトグラフィーで前述したクロロホ
ルム／メタノール混合物で溶離させてさらに精製したア
ラノロシン（１３ｔ）を得る。
この生成物を次に溶離剤としてベンゼン／アセトニトリ
ル混合物（７：３）を用いてシリカゲル（６５０Ｆ、１
インチ当たり２００〜３００個の孔を有する）上でクロ
マトグラフィーにかける。
ル混合物（７：３）を用いてシリカゲル（６５０Ｆ、１
インチ当たり２００〜３００個の孔を有する）上でクロ
マトグラフィーにかける。
これより純粋なアラノロシン（４，１Ｆ）が白色の固形
物として単離される。これを酢酸エチル中に溶解し、ヘ
キサンで沈殿させて痕跡量の色素を除去する。
物として単離される。これを酢酸エチル中に溶解し、ヘ
キサンで沈殿させて痕跡量の色素を除去する。
実施例 ２
発酵による新規抗生物質アラノロシンの製造における発
酵槽中での培養菌ＡＹ−３０４９９の培養第■段階二種
培地の調製 ａ）振と５フラスコ中において： 実施例１からの種培地（１ｏｏｍｇ）をあらかじめ６．
５に調整したーにおいてあらかじめ滅菌した広口の５０
０Ｍエルレンマインマイヤーフラスコ中、次にオートク
レーブ中において１２１℃で２０分間滅菌し、冷却しそ
して十分に胞子形成された実施例１からの培養菌で満ち
た白金耳数個を用いて接種する。滅菌後のＰ）１は６．
０である。各フラスコを回転振とう話中において２４０
ｒｐｍおよび２６℃（±１℃）で７２時間インキュベ
ートする。
酵槽中での培養菌ＡＹ−３０４９９の培養第■段階二種
培地の調製 ａ）振と５フラスコ中において： 実施例１からの種培地（１ｏｏｍｇ）をあらかじめ６．
５に調整したーにおいてあらかじめ滅菌した広口の５０
０Ｍエルレンマインマイヤーフラスコ中、次にオートク
レーブ中において１２１℃で２０分間滅菌し、冷却しそ
して十分に胞子形成された実施例１からの培養菌で満ち
た白金耳数個を用いて接種する。滅菌後のＰ）１は６．
０である。各フラスコを回転振とう話中において２４０
ｒｐｍおよび２６℃（±１℃）で７２時間インキュベ
ートする。
ｂ）吸引フラスコ中において：
実施例１からの種培地１！を５ｊ吸引フラスコ中に入れ
、オートクレーブ中において１２１℃で３０分間滅菌し
、冷却しそして十分に胞子形成された実施例１からの培
養菌で満たされた白金耳数個を用いて接揮する。この培
地のｐＨは滅菌前にｉｊ ６．５であシそしてその後に
は６．０である。各フラスコを回転振とう話中に入れ、
２６℃（±１℃）および２４０ｒｐｍで７２時間インキ
ュベートする。
、オートクレーブ中において１２１℃で３０分間滅菌し
、冷却しそして十分に胞子形成された実施例１からの培
養菌で満たされた白金耳数個を用いて接揮する。この培
地のｐＨは滅菌前にｉｊ ６．５であシそしてその後に
は６．０である。各フラスコを回転振とう話中に入れ、
２６℃（±１℃）および２４０ｒｐｍで７２時間インキ
ュベートする。
第ｎ段階：発酵
ａ）小規模において：
実施例１からの生産培地１０！を１５！ステンレス鋼発
酵格中において０．０４ ％デスモフエン（Ｄｅｓｍｏ
ｐｈｅｎ＠）とともに１２１〜１２２℃で３６分間オー
トクレーブ処理する。滅菌前の−は６．５でありそして
その後でＦｉ６．０である。０．０４ ％デスモフエン
を含有する実施例１からの生産培地２０！を６０！ステ
ンレス鋼発醇槽中に入れ、その中で１．２ ｋｐ／ｍ２
の蒸気圧の下１２２℃で５２分間滅菌する。−は滅菌前
には６．５１Ｃ調整されそしてその後では６．０である
。冷却後、発酵槽に無菌条件の下において種培養１〜３
チ（ｖ／ｖ）を接種し、その増殖および発泡によって１
２０〜１８０ ｒｐｍで攪拌しながらかつ毎分６〜１０
！の通気をしなから核種を２６℃（±１℃）で操作する
。
酵格中において０．０４ ％デスモフエン（Ｄｅｓｍｏ
ｐｈｅｎ＠）とともに１２１〜１２２℃で３６分間オー
トクレーブ処理する。滅菌前の−は６．５でありそして
その後でＦｉ６．０である。０．０４ ％デスモフエン
を含有する実施例１からの生産培地２０！を６０！ステ
ンレス鋼発醇槽中に入れ、その中で１．２ ｋｐ／ｍ２
の蒸気圧の下１２２℃で５２分間滅菌する。−は滅菌前
には６．５１Ｃ調整されそしてその後では６．０である
。冷却後、発酵槽に無菌条件の下において種培養１〜３
チ（ｖ／ｖ）を接種し、その増殖および発泡によって１
２０〜１８０ ｒｐｍで攪拌しながらかつ毎分６〜１０
！の通気をしなから核種を２６℃（±１℃）で操作する
。
ｂ）大規模において：
６．５に調整された−を有する実施例１からの生産培地
１００！および０．０４ ％デスモフエンを、あらかじ
め滅菌した１５０！発酵槽中に入れる。この中で生産培
地を１．２ Ｌｃｔｙ／ｃｍ２の蒸気圧の下で１２１〜
１２２℃において６２分間滅菌する。その後ＰＩ−ＩＦ
ｉ６．０である。発酵槽を２６℃に冷却した後にそれに
無菌条件下で種培養１チ（Ｖ／Ｖ）を接種しついで１０
０ ｒｐｍで攪拌しかつ毎分６０！で通気しながら２６
℃（±１℃）の温度において操作する。
１００！および０．０４ ％デスモフエンを、あらかじ
め滅菌した１５０！発酵槽中に入れる。この中で生産培
地を１．２ Ｌｃｔｙ／ｃｍ２の蒸気圧の下で１２１〜
１２２℃において６２分間滅菌する。その後ＰＩ−ＩＦ
ｉ６．０である。発酵槽を２６℃に冷却した後にそれに
無菌条件下で種培養１チ（Ｖ／Ｖ）を接種しついで１０
０ ｒｐｍで攪拌しかつ毎分６０！で通気しながら２６
℃（±１℃）の温度において操作する。
アラノロシンの生産はバチルスズブチリスおよびアスペ
ルギルスニが−に対する活性のプロフィルによって試験
される。７２時間後に発酵槽から収穫する。培養ブロス
を遠心分離機にかけて培養炉液から菌糸体を除去し、次
に該菌糸体および該培養炉液の両方を実施例１に記載の
ように後処理する。
ルギルスニが−に対する活性のプロフィルによって試験
される。７２時間後に発酵槽から収穫する。培養ブロス
を遠心分離機にかけて培養炉液から菌糸体を除去し、次
に該菌糸体および該培養炉液の両方を実施例１に記載の
ように後処理する。
このアラノロシンは化学分析および分光学的手法によっ
て調べられた。それは下記の性質を有する。
て調べられた。それは下記の性質を有する。
抗生物質アラノロシンの物理的性質
１、 外観二白色固形物
２、分子式： ０２ｓＨｓＮ０６
３、分子量：４１９
４゜
６゜
融点：１５０℃（分解）
２５ 。
〔α〕、−２，４２°（Ｃ＝２．５８、クロロホルム中
）Ｒｆ（あらかじめ被覆したシリカゲルプレート上での
薄層クロマトグラフィー）： ０．４２（８５：１５
クロロホルム：メタノール）、０．３９（６：４ベンゼ
ン：アセトニトリル）、０．４９（酢酸エチル）７、
元素分析値： ｆ：！６４．７５ ：Ｎ７．８３ ：Ｎ
３．１６チ８、 溶解性：石油エーテルおよび水に不溶
性；ベンゼンにほとんど不溶性；ジエチルエーテル、ク
ロロホルム、アセトン、酢酸エチル、ジメチルスルホキ
シドおよびメタノールに可溶性。
）Ｒｆ（あらかじめ被覆したシリカゲルプレート上での
薄層クロマトグラフィー）： ０．４２（８５：１５
クロロホルム：メタノール）、０．３９（６：４ベンゼ
ン：アセトニトリル）、０．４９（酢酸エチル）７、
元素分析値： ｆ：！６４．７５ ：Ｎ７．８３ ：Ｎ
３．１６チ８、 溶解性：石油エーテルおよび水に不溶
性；ベンゼンにほとんど不溶性；ジエチルエーテル、ク
ロロホルム、アセトン、酢酸エチル、ジメチルスルホキ
シドおよびメタノールに可溶性。
新規抗生物質アラノロシンのスペクトルデータＵＶ （
メタノール）：λｌｌｒｌａＸ２６４ｎｍＩＲ（ＫＢｒ
） ：主要な’Ｂａｘ（ｃｎＬ−”） ： ３４４８
（−ＯＨお：び−ＮＨ）、１７１０（６員環のケトン）
、１６５３（第２アミドカル？ニル、バンドり、１５６
８（第２アミドカルデニル、バンド１１）、１２４２ｊ
Ｈ １Ｓｃ （エポキシド）、９８００ランスーゾ置換アルケン）お
よび８４４（トリ置換アルケン）ｗＲ： （２７０ＭＨ
ｚ 、 ｃｖａｔｓ、δ（ｐｐｍ） 、基準としてＴＭ
Ｓを使用）： ０．８６（ｔ、Ｊ−６Ｈｚ、−ＣＦ（３
）、０．９５ （ｄ 、Ｊ＝７Ｈｚ 、−ＣＨ５）、１
．２４（ｓ幅広、５Ｘ−ＣＨ２）、１．７５（ｄ、Ｊ＝
０．５融、富ＣＨＣＨ３）、２．０３（ｄｄ 、Ｊ ＝
１２．５ 、１０．５Ｈｚ 、 ｃｏｃＨＨ）、２．４
８（ｍ。
メタノール）：λｌｌｒｌａＸ２６４ｎｍＩＲ（ＫＢｒ
） ：主要な’Ｂａｘ（ｃｎＬ−”） ： ３４４８
（−ＯＨお：び−ＮＨ）、１７１０（６員環のケトン）
、１６５３（第２アミドカル？ニル、バンドり、１５６
８（第２アミドカルデニル、バンド１１）、１２４２ｊ
Ｈ １Ｓｃ （エポキシド）、９８００ランスーゾ置換アルケン）お
よび８４４（トリ置換アルケン）ｗＲ： （２７０ＭＨ
ｚ 、 ｃｖａｔｓ、δ（ｐｐｍ） 、基準としてＴＭ
Ｓを使用）： ０．８６（ｔ、Ｊ−６Ｈｚ、−ＣＦ（３
）、０．９５ （ｄ 、Ｊ＝７Ｈｚ 、−ＣＨ５）、１
．２４（ｓ幅広、５Ｘ−ＣＨ２）、１．７５（ｄ、Ｊ＝
０．５融、富ＣＨＣＨ３）、２．０３（ｄｄ 、Ｊ ＝
１２．５ 、１０．５Ｈｚ 、 ｃｏｃＨＨ）、２．４
８（ｍ。
＝ＣＨＣＨ，）、２．６０ （ｄｄ 、 Ｊ＝１２．５
、８．５Ｈｚ 、 ｃｏｃＨＨ）、５．４３ （ｍ
、 ０Ｈ−０−ＣＨ）、３．５５ （ｄｄ 、 、Ｔ
＝３．５ 、５．５Ｈｚ 、 ０−ＯＨ）、５．６６
（ｄｄ 、 Ｊ＝３．５Ｈｚ 、 Ｏ−１：ｊＨ）、４
．２６（ｓ幅広、 ｊＨ，Ｄ２０ 、交換可能な）、４
．７７（ｍ 、 ＮＨＣ！Ｈ）、５．６１ （ｄ 、
Ｊ ＝４．５ Ｈｚ 、 ＣＨＯＨ）、５．６５（ｄｄ
、Ｊ＝１０．０．５Ｈｚ、＝ＣＨ）、５．７４（ｄ。
、８．５Ｈｚ 、 ｃｏｃＨＨ）、５．４３ （ｍ
、 ０Ｈ−０−ＣＨ）、３．５５ （ｄｄ 、 、Ｔ
＝３．５ 、５．５Ｈｚ 、 ０−ＯＨ）、５．６６
（ｄｄ 、 Ｊ＝３．５Ｈｚ 、 Ｏ−１：ｊＨ）、４
．２６（ｓ幅広、 ｊＨ，Ｄ２０ 、交換可能な）、４
．７７（ｍ 、 ＮＨＣ！Ｈ）、５．６１ （ｄ 、
Ｊ ＝４．５ Ｈｚ 、 ＣＨＯＨ）、５．６５（ｄｄ
、Ｊ＝１０．０．５Ｈｚ、＝ＣＨ）、５．７４（ｄ。
Ｊ＝１５Ｈｚ 、＝ＣＨ）、６．０６（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ
、−ＮＨ）および７．２３ （ｄ 、Ｊ＝１５Ｈｚ 、
＝ＣＨ）。
、−ＮＨ）および７．２３ （ｄ 、Ｊ＝１５Ｈｚ 、
＝ＣＨ）。
ＮＭＲ： （６７，８ＭＨｚ 、 ０ＤＣ１３，δ（ｐ
ｐｍ）、基準としてＴＭＳを使用） 新規抗生物質アラノロシンのスペクトルデータ１５０−
ＮＭＲ： １１４７（ｑ）、１４．０５（ｑｌ、２０．
４９（ｑ）、２２．６０（ｔ）、２７、４４ｆｔ＋、２
９．３８（ｔ）、３１．８１（ｔｌ、３３．２０（ｄ）
、３５、９６（ｔ）、３７．２３（ｔ）、５２．００（
ｄｌ、５５．５４（ｄｌ、５５．７８（ｄｌ、６２．８
５（ｄ）、６４．２１（ｄｌ、７８．９２（ｓ）、９６
、５３（ｄ）、 １１６．８５（ｄ）、１３０．７２（
ｓ）、１４７．３３（ｄｉ、１４８．４０（ｄ）、１６
６．６７（ｓ）および１９８．１９（ｓｌ。
ｐｍ）、基準としてＴＭＳを使用） 新規抗生物質アラノロシンのスペクトルデータ１５０−
ＮＭＲ： １１４７（ｑ）、１４．０５（ｑｌ、２０．
４９（ｑ）、２２．６０（ｔ）、２７、４４ｆｔ＋、２
９．３８（ｔ）、３１．８１（ｔｌ、３３．２０（ｄ）
、３５、９６（ｔ）、３７．２３（ｔ）、５２．００（
ｄｌ、５５．５４（ｄｌ、５５．７８（ｄｌ、６２．８
５（ｄ）、６４．２１（ｄｌ、７８．９２（ｓ）、９６
、５３（ｄ）、 １１６．８５（ｄ）、１３０．７２（
ｓ）、１４７．３３（ｄｉ、１４８．４０（ｄ）、１６
６．６７（ｓ）および１９８．１９（ｓｌ。
新規化合物アラノロシンは殺菌剤および殺真菌剤の性質
を有する。細菌および真菌の種々の菌株を阻害するのに
必要とされる該新規抗生物質アラノロシンの最小阻止濃
度は下記の第１表に示すとおりである。
を有する。細菌および真菌の種々の菌株を阻害するのに
必要とされる該新規抗生物質アラノロシンの最小阻止濃
度は下記の第１表に示すとおりである。
に） 国
国 へ
すなわち、アラノロシンはグラム陽性菌およびダラム陰
性菌並びに酵母および線状真菌に対して有効でありそし
て細菌および真菌感染の治療用抗生物質として使用され
うる。
性菌並びに酵母および線状真菌に対して有効でありそし
て細菌および真菌感染の治療用抗生物質として使用され
うる。
アラノロシンはまた静細胞性質を有しており、従って例
えば悪性腫瘍および白血病を抑制するような腫瘍症治療
製剤として適当である。
えば悪性腫瘍および白血病を抑制するような腫瘍症治療
製剤として適当である。
特許出願人 ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）下記の式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される化合物。 ２）培養真菌Ｎｏ．Ｙ−３０４９９（ＤＳＭ４１５１）
を炭素源、窒素源、無機栄養塩および微量元素を含有す
る栄養培地上で好気性条件下において２４〜３０℃の温
度および６．０〜８．０のｐＨで６６〜９０時間培養し
、次に得られた化合物をその培養ブロスから慣用法で単
離しそして精製することからなる請求項１記載の化合物
の製造方法。 ３）培養を２６℃（±１℃）およびｐＨ６．５において
行う請求項２記載の方法。 ４）培養を７２時間行う請求項２または３記載の方法。 ５）発酵を液内発酵として行う請求項２〜４のうちのい
ずれかに記載の方法。 ６）慣用の補助剤および（または）ビヒクルに加えて請
求項１記載の化合物を含有する医薬。 ７）抗生作用を有する医薬の製造のための請求項１記載
の化合物の使用。 ８）悪性腫瘍に対する作用を有する医薬の製造のための
請求項１記載の化合物の使用。 ９）プソイドアラクエオタスロゼウスＹ−３０４９９（
ＤＳＭ４１５１）。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3816411 | 1988-05-13 | ||
| DE3816411.6 | 1988-05-13 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0236185A true JPH0236185A (ja) | 1990-02-06 |
Family
ID=6354342
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1117650A Pending JPH0236185A (ja) | 1988-05-13 | 1989-05-12 | 新規抗生物質アラノロシン |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5112858A (ja) |
| EP (1) | EP0341649A1 (ja) |
| JP (1) | JPH0236185A (ja) |
| KR (1) | KR900018384A (ja) |
| AU (1) | AU615546B2 (ja) |
| DK (1) | DK234989A (ja) |
| HU (1) | HU202286B (ja) |
| IL (1) | IL90250A0 (ja) |
| PT (1) | PT90544A (ja) |
| ZA (1) | ZA893556B (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0366189A3 (en) * | 1988-10-24 | 1992-01-02 | Norwich Eaton Pharmaceuticals, Inc. | Novel antimicrobial lactam-quinolones |
| TW209866B (ja) * | 1991-03-20 | 1993-07-21 | Hoechst Ag |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4174327A (en) * | 1974-02-04 | 1979-11-13 | Firmenich Sa | Spirane derivatives |
| US4190591A (en) * | 1977-01-21 | 1980-02-26 | Givaudan Corporation | Odorant and flavorant |
| US4588591A (en) * | 1984-05-25 | 1986-05-13 | The Upjohn Company | Analgesic 2-oxa-spirocyclic compounds |
-
1989
- 1989-05-09 EP EP89108292A patent/EP0341649A1/de not_active Withdrawn
- 1989-05-09 IL IL90250A patent/IL90250A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1989-05-11 US US07/350,288 patent/US5112858A/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-05-11 KR KR1019890006307A patent/KR900018384A/ko not_active Withdrawn
- 1989-05-12 DK DK234989A patent/DK234989A/da unknown
- 1989-05-12 PT PT90544A patent/PT90544A/pt not_active Application Discontinuation
- 1989-05-12 JP JP1117650A patent/JPH0236185A/ja active Pending
- 1989-05-12 HU HU892392A patent/HU202286B/hu not_active IP Right Cessation
- 1989-05-12 ZA ZA893556A patent/ZA893556B/xx unknown
- 1989-05-12 AU AU34716/89A patent/AU615546B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK234989D0 (da) | 1989-05-12 |
| DK234989A (da) | 1989-11-14 |
| US5112858A (en) | 1992-05-12 |
| PT90544A (pt) | 1989-11-30 |
| AU615546B2 (en) | 1991-10-03 |
| ZA893556B (en) | 1989-12-27 |
| KR900018384A (ko) | 1990-12-21 |
| HU202286B (en) | 1991-02-28 |
| AU3471689A (en) | 1989-11-16 |
| IL90250A0 (en) | 1989-12-15 |
| EP0341649A1 (de) | 1989-11-15 |
| HUT50217A (en) | 1989-12-28 |
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