JPH0237336B2 - Horipureniruaseteetonobunriseiseihoho - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はポリプレニルアセテートの分離精製方
法に関する。さらに詳しくは、本発明は下記一般
式（） （式中、【式】はトランス型 イソプレン単位を表わし、
【式】はシス型イソプレン単 位を表わし、ｎは10〜19の整数を表わす。）で示
されるポリプレニルアセテートまたはそれらの混
合物を分離精製する方法に関する。 一般式（）で示されるポリプレニルアセテー
トおよびそれらの混合物は医薬、化粧料などの原
料として有用な物質であり、とくに哺乳類ドリコ
ール類の合成中間体として有用である。 ドリコール類は1960年にJ.F.Pennockらによつ
てブタの肝臓からはじめて単離され〔Nature
（London）、186、470（1960）参照〕、のちにこの
ものは一般式(A) （式中、【式】はトランス型 イソプレン単位を表わし、
【式】はシス型イソプレン単 位を表わす。本明細書中において以下同様。〕で
示される構造を有するポリプレノール同族体の混
合物であつて、式(A)中のシス型イソプレン単位の
数を表わすｊは一般に12から18まで分布し、ｊ＝
14、15および16の３種の同族体が主体となつてい
ることが明らかにされた〔R.W.Keenan et al.、
Biochemical Journal、165、505（1977）参照〕。
ドリコール類はブタの肝臓のみならず、哺乳動物
体内に広く分布しており、生体の生命維持の上で
極めて重要な機能を果していることが知られてい
る。例えば、J.B.Harfordらは子牛やブタの脳内
白髄質を用いるin vitro試験により、外因性ドリ
コールがマンノースなどの糖成分の脂質への取り
込みを促進し、その結果、生体の生命維持のうえ
で重要な糖蛋白質の形成を増大させる作用を持つ
ことを明らかにしている〔Biochemical and
Biophysical Research Communication、76、
1036（1977）参照〕。ドリコール類によるかかる脂
質への糖成分の取り込み促進効果は成長期の生体
におけるよりも既に成熟している動物において顕
著であることから、老化防止の点でのドリコール
類の働きが注目されている。また、R.W.Keenan
らは幼年期などの急速に成長を続けている生体に
とつては外からドリコールを摂取し、自己の体内
で生合成して得られるドリコールを補うことが重
要であると述べている〔Archives of
Biochemistry and Biophysics、179、634（1977）
参照〕。さらに、赤松らはラツトの再生肝中のド
リコールリン酸エステルを定量し、その量が正常
な肝中よりも著しく減少しており、肝組織での糖
蛋白の合成機能が大巾に低下していることおよび
外からドリコールリン酸エステルを加えると該機
能が改善されることを見出した〔第54回日本生化
学会大会（1981年）において発表〕。 上記のようにドリコール類は生体にとつて極め
て重要な機能を司る物質であり、医薬品またはそ
の中間体として有用であるが、従来その入手は容
易でなく、例えばブタの肝臓10Kgから複雑な分離
操作を経てやつと0.6ｇのドリコールが得られる
に過ぎない〔F.W.Burgos et al.、Biochemical
Journal、88、470（1963）参照〕。ドリコール類を
全合成することは、それらの複雑で特異な分子構
造から明らかなように現在の有機合成の技術では
至難のことである。合成中間体を天然物に依存
し、これに簡単な合成化学的処理を加えるのみで
ドリコール類を得ることができるならば有利であ
るが、従来そのような好都合な物質は見出されて
いない。従来、下記の一般式(B) 〔但し、ｋ＝４〜６〕で示されるポリプレノール
類（これらはペツラプレノール類と呼ばれてい
る）がシラカンバ（Betula verrucola）から採
取し得ることは知られているが、これらからシス
型イソプレン単位の数が14、15および16のものを
主体とするドリコール類を合成することは現在の
有機合成技術ではほとんど不可能である。また
K.Hannusらはヨーロツパ赤松（Pinus
sylvestris）の葉から乾燥重量基準で１％の収率
でポリプレニル成分を単離し、この成分がイソプ
レン単位10〜19個を主としてシス配置で有するポ
リプレニルアセテート混合物であることを報告し
ているが〔Phytochemistry、13、2563（1974）参
照〕、彼らの報告には該ポリプレニルアセテート
中のトランスおよびシス配置についての詳細まで
は解明されていない。さらに、D.F.Zinckelらは
ストローブ松（Pinus strobus）の葉の抽出物中
にイソプレン単位数18個またはイソプレン単位数
の平均値が18であるC₉₀のポリプレノールが存在
することを報告しているが〔Phytochemistry、
11、3387（1972）参照〕、この報告では該ポリプレ
ノールのトランス、シス配置について詳細な解析
を行なつていない。 本発明者らは、先に、イチヨウ（Ginkgo
biloba）およびヒマラヤ杉（Cedrus deodara）
の葉から有機溶媒で抽出される抽出物を適当な分
離法によつて処理することにより一般式（）に
おいてｎが11から19まで分布しているポリプレニ
ルアセテート同族体混合物からなるポリプレニル
画分が得られること、該ポリプレニル画分は哺乳
類ドリコール類に比べてα−末端の飽和イソプレ
ン単位が存在しないだけで哺乳類ドリコール類に
おけるポリプレニル同族体の分布に非常によく似
たポリプレニル同族体の分布を示すこと、該ポリ
プレニル画分は所望によりその構成成分である
個々の（イソプレン単位数が一様な）ポリプレニ
ル同族体に比較的容易に分離しうること、従つて
該ポリプレニル画分およびそれから分離された各
ポリプレニル同族体はいずれも哺乳類ドリコール
類の合成中間体として非常に適していることを見
出した。また本発明者らの一部とその共同研究者
らは、ヒマラヤ杉と同様にマツ科に属するクロマ
ツ（Pinus thunbergii）、アカマツ（Pinus
densiflora）などの葉からも一般式（）で示さ
れるポリプレニルアセテートが得られることを見
出した。ただし、クロマツおよびアカマツから
は、通常、一般式（）においてｎが10から18ま
で分布しているポリプレニルアセテート同族体混
合物が得られる。 しかしながらこれらの植物から有機溶媒で抽出
される抽出物中には通常一般にクロロフイル、カ
ロチノイド、ステロイド、グリセリド、スフイン
ゴリピド、フラボノイドなど上記ポリプレニルア
セテート同族体混合物との分離が必ずしも容易で
ない成分が含まれており、該抽出物を分離、精製
して得られるポリプレニルアセテート同族体混合
物にはしばしばそれらの不純物が数パーセント混
入してくる。 本発明者らは上記の問題点を解決し、一般式
（）で示されるポリプレニルアセテートを含有
する植物の抽出物から該ポリプレニルアセテート
を高純度に得るために鋭意研究を重ねた結果、上
記抽出物をまずケン化処理してポリプレニルアセ
テートをポリプレノールに転化し、これを分離し
たのち再びポリプレニルアセテートに戻して精製
することにより所期の目的が達成されることを見
出し、本発明を完成するに至つた。 すなわち、本発明によれば、一般式（）で示
されるポリプレニルアセテートの少なくとも１種
を含有する植物を脂溶性の有機溶媒で抽出して得
られる抽出物から該ポリプレニルアセテートを分
離精製するに際し、該抽出物をケン化処理して該
ポリプレニルアセテートを一般式（） （式中、ｎは前記定義のとおりである。）で示さ
れるポリプレノールに転化したのち該ポリプレノ
ールを主成分とする画分を分離取得し、該ポリプ
レノールを一般式（）で示されるポリプレニル
アセテートに戻して精製することにより、該ポリ
プレニルアセテートを高純度で得ることができ
る。 上記抽出物が一般式（）で示されるポリプレ
ニルアセテートとともにこれに対応する遊離のア
ルコールである一般式（）で示されるポリプレ
ノールを含有する場合、該ポリプレノールは本発
明方法において一般式（）で示されるポリプレ
ニルアセテートに転化される結果、目的とする該
ポリプレニルアセテートの収量の向上に寄与す
る。 一般式（）で示されるポリプレニルアセテー
トの少なくとも一種以上または該ポリプレニルア
セテートとその遊離のアルコールを含有する植物
から該ポリプレニル成分を抽出するために使用さ
れる脂溶性の有機溶媒としては、一般に誘電定数
（ε）が32.7以下、好ましくは25.0以下、さらに
好ましくは20.7以下のものが好適であり、具体的
には下記に例示する溶媒がそれぞれ単独でまたは
２種もしくはそれ以上の混合溶媒として使用でき
る。 (a) 炭化水素類：例えば、石油エーテル、ペンタ
ン、ヘキサン、ヘプタン、ベンゼン、トルエ
ン、キシレンなど。 (b) ハロゲン化炭化水素類：例えば、クロロホル
ム、塩化メチレン、四塩化炭素、四塩化エタ
ン、パークロルエチレン、トリクロルエチレン
など。 (c) エステル類：例えば、酢酸メチル、酢酸エチ
ル、プロピオン酸エチルなど。 (d) エーテル類：例えば、ジエチルエーテル、ジ
イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、
ジオキサンなど。 (e) ケトン類：例えば、アセトン、メチルエチル
ケトン、ジエチルケトン、ジイソプロピルケト
ンなど。 (f) アルコール類：例えば、メチルアルコール、
エチルアルコール、プロピルアルコール、ブチ
ルアルコールなど。 使用する溶媒の選択にあたつては、一般式
（）のポリプレニルアセテートまたはこれと一
般式（）のポリプレノールを選択的に高効率で
抽出し、それ以外の物質はできるだけ抽出しない
ものが望ましく、かかる観点からすれば、上記溶
媒中、炭化水素類、ハロゲン化炭化水素類、エス
テル類、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエー
テルの如き極性の低いエーテル類およびケトン類
が特に好適である。 抽出溶媒の使用量は臨界的なものではなく、用
いる溶媒の種類、抽出すべき植物の種類、部位、
状態等に応じて広範に変えることができるが、一
般には抽出に供する植物体１重量部（乾燥重量基
準）当り約１〜約100重量部、好ましくは５〜50
重量部、さらに好ましくは10〜30重量部の範囲内
で用いることが有利である。 抽出は上記の溶媒中に植物体を浸漬し、必要に
応じて連続的または間欠的に撹拌することにより
行なうことができる。抽出時の温度も臨界的なも
のではなく、用いた溶媒の種類や量等の条件に応
じて広範に変えることができるが、一般には約０
℃から溶媒の還流温度までの温度を用いることが
でき、通常は室温で充分である。かかる条件下に
抽出は普通１〜10日間行なうのが有利である。 抽出処理後の浸漬液は植物体その他の固形分を
除去したのち必要に応じて溶媒を除去して濃縮液
とする。かくして得られる抽出物をそのままケン
化処理に供することができるが、所望により該抽
出物を適宜前処理によりある程度精製したのちケ
ン化処理に供することもできる。この前精製には
後述する分別溶解法および／またはクロマトグラ
フイーがとくに好適に用いられる。この前精製に
よつて炭化水素溶媒（たとえばｎ−ヘキサン）に
不溶な夾雑物および／またはタール分を除去して
おくと後の精製が容易となる。ケン化処理は、自
体公知の方法および条件を用いて行うことが可能
であり、たとえば含水率約１〜20重量％程度の含
水メタノールまたは含水エタノール中に水酸化ナ
トリウムまたは水酸化カリウムを溶解させた溶液
（アルカリ金属水酸化物濃度は好ましくは約0.1〜
30重量％とすることができる）100重量部に対し
て上記の抽出物を約５〜50重量部の割合で加えて
約25〜90℃で約0.5〜５時間反応させればよい。 ケン化処理後、ケン化反応混合物から一般式
（）で示されるポリプレノールを主成分とする
画分（ポリプレノール画分）を分離取得する。こ
のポリプレノール画分の取得は通常好ましくは次
の方法により行われる。すなわち、まずケン化反
応混合物を水の存在下、実質的に水と混和しない
有機溶媒で抽出し、有機層と水性層とに分離す
る。ここで用いうる有機溶媒としては、例えば石
油エーテル、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、ベ
ンゼン、トルエン、キシレンなどの炭化水素類、
クロロホルム、塩化メチレン、四塩化水素、四塩
化エタン、パークロルエチレン、トリクロルエチ
レンなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸イソプロ
ピル、酢酸ブチル、プロピオン酸エチル、プロピ
オン酸ブチル、ジエチルエーテル、ジイソプロピ
ルエーテル、ジｎ−ブチルエーテル、メチルイソ
ブチルケトン、ジイソブチルケトンなどを挙げる
ことができる。これら抽出溶媒の使用量は臨界的
ではないが、一般にケン化反応混合物に対して５
倍（重量）から100倍（重量）が好適である。こ
の抽出に際し、水は有機層と水性層とが層分離を
生じるに必要な量少量以上存在すればよいが、通
常有機層と水性層との容量比が１：10〜10：１と
なるような割合で用いることが好ましい。こうし
て得られる有機層を必要に応じ溶媒を留去して濃
縮後、クロマトグラフイー、分別溶解法、分子蒸
留法またはこれらの方法の２種もしくはそれ以上
の組合わせからなる分離工程に付してポリプレノ
ール画分を分離取得することができる。 上記分離工程におけるポリプレノールが含有さ
れている画分の確認は、メルク社製薄層クロマト
用プレート（シリカゲル60F₂₅₄被覆；層の厚さ
0.25mm）を用いかつｎ−ヘキサンと酢酸エチルと
の容量比で９：１の混合溶媒と展開溶媒とする薄
層クロマトグラフイー（10cm展開）において標準
物質としてのソラネシルアセテートのRf値が0.40
〜0.45となる条件下に0.18〜0.25の範囲のRf値の
ところにスポツトが存在するか否かによつて行な
うことができる。しかして、以下の説明において
薄層クロマトグラフイーのRf値を言及する場合
には、特にことわらない限り、上記条件下に測定
した値を意味することを了解すべきである。 上記分離工程において使用しうるクロマトグラ
フイー、分別溶解法、分別冷凍沈殿法および分子
蒸留法の各方法の操作はそれ自体公知のものであ
り、本発明においても公知の方法に準じて行なう
ことができるので、各方法の詳細については文献
の引用を以つて説明に代え、ここには特に注意す
べき点のみを記載する。 (A) クロマトグラフイー〔例えば、H.Heftman、
“Chromatography”、Reinhold Publish Co.、
New York（1961）参照〕 抽出物が少量の場合には薄層クロマトグラフ
イーおよび液体クロマトグラフイーが適当であ
るが、大量の抽出物の処理にはカラムクロマト
グラフイーが好適である。使用しうるクロマト
グラフイー用担体としては、シリカゲル、アル
ミナ、フロリジル、セライト、活性炭、セルロ
ースなどが挙げられ、中でもシリカゲルが好適
である。 シリカゲルカラムを使用して分離操作を行な
う場合の展開溶媒としては、例えば、ヘキサ
ン／酢酸エチル（容量比95：５〜80：20）、ヘ
キサン／ジイソプロピルエーテル（容量比95：
５〜80：20）、石油エーテル／酢酸メチル（容
量比95：５〜80：20）、石油エーテル／イソプ
ロピルアルコール（容量比99：１〜90：10）、
ベンゼン／ジエチルエーテル（容量比95：５〜
80：20）、ベンゼン／酢酸エチル（容量比98：
２〜80：20）などの混合溶媒系あるいはクロロ
ホルム、メチレンクロリドなどが挙げられる。 (B) 分別溶解法〔例えば、L.C.Craig、
“Technique of Organic Chemistry”、
Vol.13、Interscience、（1951）参照〕 前記一般式（）のポリプレノールはペンタ
ン、ヘキサンのような非極性溶媒に易溶であ
り、一方、メタノールや水などの極性溶媒には
難溶であるので、前記抽出液濃縮物を上記非極
性溶媒に溶解し、ついで該非極性溶媒と非混和
性の極性溶媒で洗浄することによつて、極性溶
媒に易溶な不純物を大幅に除去することができ
る。本方法で好適に使用される非極性溶媒とし
ては、例えば、石油エーテル、ペンタン、ヘキ
サン、ヘプタン、ベンゼン、トルエンなどの炭
化水素系溶媒およびメチレンクロリド、クロロ
ホルムなどのハロゲン化炭化水素系溶媒が好適
である。また、かかる非極性溶媒と非混和性の
極性溶媒としては例えば水あるいはメタノール
が好適である。 (C) 分別冷凍沈殿法〔例えば、E.W.Berg、
“Physical and Chemical Methods of
Separation”Chapter 14、15、McGraw−
Hill、New York（1963）参照〕 前記一般式（）のポリプレノールは約−10
℃以下で固化する。従つて、抽出物を−10℃以
下、好ましくは約−15〜約−30℃に冷却下に放
置し、目的物を固化させたのち固−液分離する
ことによつて、かかる温度で固化しない不純物
から精製することができる。しかしながら、該
ポリプレノールはあまり優れた結晶性を有さ
ず、ワツクス状固体となるため、本方法により
完全に精製することは難しい。なお、逆にポリ
プレノール中に存在する結晶性の不純物を優先
的に析出させて除去することも可能である。 (D) 分子蒸留法〔例えば、G.Durrows、
“Molecular Distillation”、Clarendon Press、
Oxford（1960）参照〕 前記一般式（）のポリプレノールは分子量
が大きいため、分子蒸留法を用いることによつ
て低分子量の不純物を除去することができる。
例えば10^-3〜10^-5mmHgの真空度において100〜
200℃の加熱条件下に分子蒸留して、低分子留
分と高分子留分とに分割される。このとき、高
分子留分に目的物質は保持され、低分子量不純
物を大幅に除去することができる。 これら分離法の２種もしくはそれ以上の組合わ
せを用いることもできる。例えば、クロマトグラ
フイーと分別溶解法；クロマトグラフイーと分別
冷凍沈殿法と分別溶解法；クロマトグラフイーと
分別冷凍沈殿法と分別溶解法と分子蒸留法；クロ
マトグラフイーと分子蒸留法と分別溶解法；クロ
マトグラフイーと分子蒸留法；分子蒸留法と分別
溶解法；分子蒸留法と分別溶解法と分別冷凍沈殿
法などの組合わせを用いることができる。 本発明の好ましい実施態様の１つにおいては、
前記ケン化処理後有機溶媒で抽出された抽出物を
カラムクロマトグラフイーを主体とした分離精製
法によつて処理することにより、前記薄層クロマ
トグラフイーにおいてRf値が0.18〜0.25となる画
分（ポリプレノール画分）を分離取得する。かく
して得られるポリプレノール画分をポリプレニル
アセテートに転化し、この段階で再度精製すると
簡単な操作で容易に高純度に精製できる。 ポリプレノールをポリプレニルアセテートに転
化するためには、ポリプレノールを酢酸またはそ
の反応性誘導体、たとえば無水酢酸、塩化アセチ
ルなどとエステル化反応させればよい。これらエ
ステル化反応は自体公知の方法および条件を用い
て行うことができる。たとえばポリプレノール画
分とこれに含まれるポリプレノール１モルあたり
約0.8〜10モル、好ましくは１〜５モルの前記酸
無水物または酸ハライドとを好ましくはペンタ
ン、ヘキサン、ベンゼン、トルエン、ジエチルエ
ーテル、ジイソプロピルエーテルなどの適当な溶
媒の存在下、ピリジン、トリエチルアミンなどの
適当な塩基の存在下に約−30〜＋80℃、好ましく
は０〜30℃で反応させればよい。 上記のようにして生成させたポリプレニルアセ
テートを精製することにより植物体から抽出した
ままのポリプレニルアセテートあるいは前記ポリ
プレノール画分からは容易には除去し難い夾雑物
とくにクロロフイル、カロチノイド、ステロイ
ド、グリセリド、スフインゴリピド、フラボノイ
ドなどを容易に除去することができる。この精製
には先に述べたクロマトグラフイー、分別溶解
法、分別冷凍沈殿法、分子蒸留法などを単独でま
たは２種以上組合わせて用いることができるが、
クロマトグラフイーの使用がとくに好適である。
クロマトグラフイーの好ましい実施態様はポリプ
レノール画分を得るために用いる分離方法に関し
て前記したものと同様である。大量のポリプレニ
ルアセテートを精製するには、たとえばシリカゲ
ルカラムを用い、展開溶媒としてたとえばヘキサ
ン／酢酸エチル（容量比99：１〜90：10）、ヘキ
サン／ジイソプロピルエーテル（容量比99：１〜
90：10）などを用いてカラムクロマトグラフイー
により精製するのが簡便であり、とくに好まし
い。なお、ポリプレニルアセテート画分は前記薄
層クロマトグラフイーにおいて0.50〜0.55のRf値
を示す。 このようにして得られるポリプレニルアセテー
トまたはそれらの混合物はクロロフイル、カロチ
ノイド、ステロイド、グリセリド、スフインゴリ
ピド、フラボノイドなどの着色性不純物をほとん
ど含有せず、たとえば哺乳類ドリコール類の合成
中間体として使用するのに好適である。得られた
ポリプレニルアセテート混合物は所望ならばたと
えば高速液体クロマトグラフイーにより各単一の
ポリプレニルアセテートに分離することができ
る。 以下、本発明を実施例によりさらに詳しく説明
する。なお、実施例中のIR分析は液膜で測定し、
NMR分析はTMSを内部標準として測定した。
FD−MASS分析（電解電離法質量分析）の値は
¹H、 ¹²C、 ¹⁶Oとして補正した値である。 実施例 １ 11月初旬に倉敷市内で採取したイチヨウの葉10
Kg（未乾燥重量）を約50℃で５時間熱風乾燥した
のち室温（約15℃）でｎ−ヘキサン／アセトン＝
４／１（容量比）の混合溶媒80中に浸漬して１
週間抽出した。この抽出液から溶媒を留去し黒か
つ色の液状物を得た。このものをメタノール400
ml、水40mlおよび水酸化ナトリウム25ｇと共に２
時間65℃に加熱撹拌したのち、室温に冷却し、ヘ
キサン（500ml）を加えて抽出し、ヘキサン層を
約100mlの飽和食塩水で５回水洗したのち無水硫
酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去して黒かつ
色の液状物を得た。ついでこの液状物を約１Kgの
シリカゲルを用いたシリカゲルカラムによりｎ−
ヘキサン／酢酸エチル＝95／５（容量比）の混合
溶媒を用いて処理することにより、ｎ−ヘキサ
ン／酢酸エチル＝９／１（容量比）の混合溶媒を
用いたシリカゲル薄層クロマトグラフイー〔メル
ク社製TLC plate（silica gel 60F₂₅₄ precoated
層厚0.25mm）を使用して10cm展開〕においてRf
＝0.21となる画分を分離して23ｇの赤かつ色の液
状物を得た。この薄層クロマトグラフイーにおい
てソラネシルアセテートは0.41のRf値を示した。 次いでこの液状物をピリジン20ｇ、ｎ−ヘキサ
ン300ml中に溶解し、室温で撹拌しながら無水酢
酸25ｇを滴下し、滴下完了後、一夜室温で撹拌し
た。得られた反応混合物を飽和食塩水約100mlで
３回洗浄したのち無水硫酸マグネシウムで乾燥
し、ｎ−ヘキサンを留去して赤かつ色の液状物を
得た。この液状物を約１Kgのシリカゲルを用いた
シリカゲルカラムによりｎ−ヘキサン／酢酸エチ
ル＝97／３（容量比）の混合溶媒を用いて処理す
ることにより、前記と同様のシリカゲル薄層クロ
マトグラフイーにおいてRf＝0.53となる画分を分
離して淡黄色液状物17.9ｇを得た。 この淡黄色液状物をシリカゲルμ−Porasylを
充填剤としｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝97／３
（容量比）の混合溶媒を展開液として用いた吸着
型高速液体クロマトグラフイーおよびシリカゲル
μ−Bondapak−C₁₈を充填剤としアセトン／メ
タノール＝70／30（容量比）の混合溶媒を展開液
として用いた分配型高速液体クロマトグラフイー
による分析を行なつた結果、目的とする一般式
（）で示されるポリプレニルアセテート以外の
ピークは殆んど検出されず、99％以上の純度を有
することが確認された。 また、メルク社製セミ分取用高速液体クロマト
カラムLiChrosorb RP 18−10を用いアセトン／
メタノール＝90／10（容量比）の混合溶媒を展開
液とし、示差屈折計を検出器として用いた高速液
体クロマトグラフイー分析を行い、得られたクロ
マトグラムにおける各ピークの面積比率を求めた
結果は下記のどおりであつた。 【表】 この高速液体クロマトグラフイーを用いて上記
の油状物から各成分を分取し、質量分析、赤外線
吸収スペクトル、 ¹H−NMRスペクトルおよび
¹³C−NMRスペクトルによりそれらの成分が一
般式（）で示される構造を有するポリプレニル
アセテートであることを確認した。一般式（）
においてｎ＝14であるポリプレニルアセテートに
ついて得られた赤外線吸収スペクトル、 ¹H−
NMRスペクトルおよび ¹³C−NMRスペクトル
をそれぞれ第１図、第２図および第３図に示し
た。一般式（）においてｎが14以外であるポリ
プレニルアセテートについて得られた赤外線吸収
スペクトルおよびNMRスペクトルもｎ＝14のも
のについて得られたそれらと特性吸収、特性シグ
ナルの位置において実質的に同じであつた。また
FD／MASS分析の結果は次のとおりであつた。 【表】 参考例 １ 実施例１と同じ方法でイチヨウの葉10Kgから抽
出した抽出物を約１Kgのシリカゲルを用いたシリ
カゲルカラムによりｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝
97／３（容量比）の混合溶媒でカラムクロマトグ
ラフイー処理して前記シリカゲル薄層クロマトグ
ラフイーにおいてRf＝0.51近辺のポリプレニルア
セテート画分を分離した。これは黒かつ色の液状
物であり、純度が低かつたので同じシリカゲルカ
ラム条件を用いてさらに２回クロマトグラフイー
による精製を行なつて赤橙色の液状物19.2ｇを得
た。このものについて実施例１と同じく高速液体
クロマトグラフイーにより分析を行なつた結果92
％の純度であることが確認された。以上のことに
よつて、実施例１のごとく植物体から抽出したポ
リプレニルアセテートをケン化してポリプレノー
ルで精製したのち再度ポリプレニルアセテートに
戻して精製する方法が着色成分を含む不純物の除
去に有効であることが確認された。 実施例 ２ ５月下旬に採取したヒマラヤ杉の葉10Kg（未乾
燥重量）を約50℃で８時間熱風乾燥したのち室温
（約20℃）でクロロホルム100中に浸漬して１週
間抽出した。この抽出液から溶媒を留去し、黒か
つ色の液状物を得た。このものを約１Kgのシリカ
ゲルを用いたシリカゲルカラムによりｎ−ヘキサ
ン／酢酸エチル＝95／５（容量比）の混合溶媒を
用いて処理することにより、ｎ−ヘキサン／酢酸
エチル＝９／１（容量比）の混合溶媒を用いたシ
リカゲル薄層クロマトグラフイー〔メルク社製
TLC plate（silica gel 60F₂₅₄ precoated、層厚
0.25mm）を使用して10cm展開〕においてRf＝0.5
付近およびRf＝0.2付近の画分を集めて黒かつ色
の液状物58ｇを得た。この薄層クロマトグラフイ
ーにおいてソラネシルアセテートは0.41のRf値を
示した。 次いでこの黒かつ色の液状物をメタノール400
ml、水40mlおよび水酸化カリウム15ｇと共に４時
間65℃に加熱撹拌したのち室温に冷却し、ヘキサ
ン約800mlを加えて抽出し、ヘキサン層を約200ml
の飽和食塩水で５回洗浄し、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥し、溶媒を留去して黒かつ色の液状物49
ｇを得た。この液状物を約１Kgのシリカゲルを用
いたシリカゲルカラムによりｎ−ヘキサン／酢酸
エチル＝97／３（容量比）の混合溶媒を用いて処
理することにより、前記シリカゲル薄層クロマト
グラフイーにおいてRf＝0.21となる画分を分離し
て赤かつ色液状物23.2ｇを得た。 次いでこの液状物をピリジン20ｇ、ｎ−ヘキサ
ン300ml中に溶解し、室温で撹拌しながら塩化ア
セチル25ｇを滴下し、滴下完了後、一夜撹拌を継
続した。得られた反応液を飽和食塩水約100mlで
５回洗浄したのち無水硫酸マグネシウムで乾燥
し、ｎ−ヘキサンを留去して赤かつ色の液状物を
得た。この液状物を約１Kgのシリカゲルを用いた
シリカゲルカラムによりｎ−ヘキサン／酢酸エチ
ル＝97／３（容量比）の混合溶媒を用いて処理す
ることにより、前記シリカゲル薄層クロマトグラ
フイーにおいてRf＝0.51となる画分を分離して淡
黄色液状物20.8ｇを得た。この液状物について実
施例１と同様に高速液体クロマトグラフイーによ
る分析を行なつたところ、一般式（）で示され
るポリプレニルアセテート以外のピークは殆んど
検出されず、99％以上の純度を有することが確認
された。また、このポリプレニルアセテートにつ
いて実施例１と同じ方法で測定した分子量分布は
下記のとおりであつた。 【表】 なお、実施例１と同様に高速液体クロマトグラ
フイーを用いて各成分を分取し、質量分析、赤外
線吸収スペクトル、 ¹H−NMRスペクトルおよ
び ¹³C−NMRスペクトルによりそれらの成分が
実施例１で得た各成分と実質的に同一の化合物で
あることを確認した。 比較例 ２ 実施例２と同様にしてヒマラヤ杉の葉から抽出
した抽出物から約１Kgのシリカゲルを用いたシリ
カゲルカラムによりｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝
97／３（容量比）の混合溶媒を用いて前記シリカ
ゲル薄層クロマトグラフイーにおいてRf＝0.51を
示す画分を分離して濃かつ色の液状物を得た。同
じクロマト条件によりさらに３回精製を繰り返し
て赤橙色液状物22.3ｇを得た。この液状物を実施
例１と同じく高速液体クロマトグラフイーにより
分析したところ不純物が検出され、面積比率から
計算した純度は92％であつた。 実施例 ３ 12月上旬に倉敷市内で採取したアカマツの葉10
Kg（未乾燥重量）を約60℃で24時間熱風乾燥した
のち室温（約10℃）で酢酸エチル80中に浸漬し
て１週間抽出した。この抽出液から酢酸エチルを
留去して得た濃縮物中にヘキサン５を加えて不
溶性成分を別し、液を濃縮し黒かつ色の液状
物を得た。このものをメタノール400ml、水40ml
および水酸化ナトリウム25ｇと共に２時間65℃に
加熱、撹拌したのち、室温に冷却し、ヘキサン
（500ml）を加えて抽出し、ヘキサン層を約100ml
の飽和食塩水で５回水洗したのち無水硫酸マグネ
シウムで乾燥し、溶媒を留去して黒かつ色液状物
を得た。ついでこの液状物を約500ｇのシリカゲ
ルを用いたシリカゲルカラムによりｎ−ヘキサ
ン／酢酸エチル＝95／５（容量比）の混合溶媒を
用いて処理することによりｎ−ヘキサン／酢酸エ
チル＝９／１（容量比）の混合溶媒を用いたシリ
カゲル薄層クロマトグラフイーにおいてRf＝0.21
となる画分を分離して6.7ｇの赤かつ色液状物を
得た。 次いでこの液状物をピリジン５ｇ、ｎ−ヘキサ
ン100ml中に溶解し、室温で撹拌しながら無水酢
酸５ｇを滴下し、滴下完了後、一夜室温で撹拌し
た。得られた反応混合物を飽和食塩水約20mlで４
回洗浄したのち無水硫酸マグネシウムで乾燥し、
ｎ−ヘキサンを留去して赤かつ色の液状物を得
た。この液状物を約300ｇのシリカゲルを用いた
シリカゲルカラムによりｎ−ヘキサン／酢酸エチ
ル＝97／３（容量比）の混合溶媒を用いて処理す
ることにより、前記と同様のシリカゲル薄層クロ
マトグラフイーにおいてRf＝0.53となる画分を分
離して淡黄色液状物4.95ｇを得た。この液状物に
ついて実施例１と同様に高速液体クロマトグラフ
イーによる分析を行なつたところ、一般式（）
で示されるポリプレニルアセテート以外のピーク
は殆んど検出されず99％以上の純度を有すること
が確認された。また、このポリプレニルアセテー
トについて実施例１と同じ方法で測定した分子量
分布は下記のとおりであつた。 【表】 比較例 ３ 実施例３と同様にアカマツから抽出された抽出
物から約500ｇのシリカゲルを用いたシリカゲル
カラムによりｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝97／３
（容量比）を用いて前記シリカゲル薄層クロマト
グラフイーにおいてRf＝0.51を示す画分を得、こ
れを同じクロマト条件によりさらに３回精製し
5.21ｇの赤橙色液状物を得た。この液状物を実施
例１と同じく高速液体クロマトグラフイーにより
分析したところ不純物が検出され、面積比率から
計算した純度は94％であつた。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図および第３図は実施例１におい
て単離されたイソプレン単位数17のポリプレニル
アセテートについて測定された赤外線吸収スペク
トル（第１図）、 ¹H−NMRスペクトル（第２
図）および ¹³C−NMRスペクトル（第３図）で
ある。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式（） （式中、【式】はトランス型 イソプレン単位を表わし、
   【式】はシス型イソプレン単 位を表わし、ｎは10〜19の整数を表わす。） で示されるポリプレニルアセテートの少なくとも
   １種を含有する植物を脂溶性の有機溶媒で抽出し
   て得られる抽出物から該ポリプレニルアセテート
   を分離精製するに際し、該抽出物をケン化処理し
   て該ポリプレニルアセテートをポリプレノールに
   転化したのち該ポリプレノールを主成分とする画
   分を分離取得し、該ポリプレノールをポリプレニ
   ルアセテートに戻して精製することを特徴とする
   ポリプレニルアセテートの分離精製方法。 ２ 植物がイチヨウ（Ginkgo biloba）である特
   許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 植物がマツ科植物である特許請求の範囲第１
   項記載の方法。 ４ マツ科植物がヒマラヤ杉（Cedrus deodara）
   である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５ 脂溶性有機溶媒が炭化水素類、ハロゲン化炭
   化水素類、エステル類、エーテル類、ケトン類お
   よびそれらの混合物から選ばれる特許請求の範囲
   第１項記載の方法。 ６ 植物から抽出された抽出物をケン化処理し、
   ケン化反応混合物を水の存在下に実質的に水に混
   和しない有機溶媒で抽出し、得られる有機層を濃
   縮後カラムクロマトグラフイーによりポリプレノ
   ール画分を分離取得し、該ポリプレノールをポリ
   プレニルアセテートに戻し、これをカラムクロマ
   トグラフイーにより精製する特許請求の範囲第１
   項記載の方法。