JPH02488A - 抗ヒトｂｃｄｆモノクローナル抗体 - Google Patents
抗ヒトｂｃｄｆモノクローナル抗体Info
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- JPH02488A JPH02488A JP63053828A JP5382888A JPH02488A JP H02488 A JPH02488 A JP H02488A JP 63053828 A JP63053828 A JP 63053828A JP 5382888 A JP5382888 A JP 5382888A JP H02488 A JPH02488 A JP H02488A
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- C07K—PEPTIDES
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- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
- C07K16/248—IL-6
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ハイプリドーマに由来するヒトＢＣＤＦに特
異的なモノクローナル抗体に関する。
異的なモノクローナル抗体に関する。
ヒトＢＣＤＦはヒトＢ細胞刺激因子２ （ＢＳＦ−２）
またはインターロイキン６（ＩＬ−６）とも呼ばれてい
る免疫系細胞が産生ずる液性因子いわゆるサイトカイン
である。また下記に示すように本物質の全アミノ酸配列
は既に決定されている（ Ｎａｔｕｒｅ。
またはインターロイキン６（ＩＬ−６）とも呼ばれてい
る免疫系細胞が産生ずる液性因子いわゆるサイトカイン
である。また下記に示すように本物質の全アミノ酸配列
は既に決定されている（ Ｎａｔｕｒｅ。
３２４．７３．１９８６）即ち
アミノ酸配列
ＰＲＯＶＡＬ ＰＲＯＰＲＯＧＬＹ ＧＬＵ ＡＳＰ
ＳＥＲＴ、ＹＳ ＡＳＰ ＶＡＬＡＬＡ ＡＬＡ ＰＲ
ＯＨＩＳ ＡＲＧ ＧＬＮ ＰＲＯＬＥＵ ＴＨＲＳＥ
Ｒ５ＥＲＧＬＵ ＡＲＧ ＩＬＥ ＡＳＰ Ｌ
ＹＳ ＧＬＮ ＩＬＥ ＡＲＧ ＴＹＲＩＬＥ
ＬＥＵＡＳＰ ＧＬＹ ＩＬｇ ＳＥＲＡＬ
Ａ ＩＪＵ ＡＲＧ ＬＹＳ ＧＬＵ ＴＨ
ＲＣＹＳＡＳＮ ＬＹＳ ＳＥＲＡＳＮ ＭＥＴ
ＣＹＳ ＧＬＵ ＳＥＲＳＥＲＬＹＥ ＧＬＵ
ＡＬＡ ＬＥＵ ＡＬＡ ＧＬＵ ＡＳＮ ＡＳ
Ｎ ＬＥＵ ＡＳＮ ＩＪＵ ＰＲＯＬＹＳＭ
ＥＴ ＡＬＡ ＧＬＵ ＬＹＳ ＡＳＰ ＧＬ
Ｙ ＣＹＳ ＰＩ（Ｅ ＧＬＮ ＳＥＲＧＬＹ
ＰＨＥ ＡＳＮ ＧＩ、Ｕ ＧＬＵ ＴＨＲＣＹＳ
ＬＥＵ ＶＡＬ ＬＹＳ ＩＩＪ ＩＩＪＴＨ
ＲＧＬＹ ＬＥＵ ＬＥＵ ＧＬＵ ＰＨＥ
ＧＬＵ ＶＡＬ ＴＹＲＬＥＵ ＧＬＵＴＹＲＬＥＵ
ＧＬＮ ＡＳＮ ＡＲＧ ＰＨＥ ＧＬＵ ５Ｅ
ＡＲＳＥＲＧＬＵ ＧＬＵＧＬＮ ＡＬＡ ＡＲＧ
ＡＬＡ ＶＡＬ ＧＬＮ ＭＥＴ ＩＲＴＨＲＬ
ＹＳ ＶＡＬＬＥＵ ＩＬＥ ＧＬＮ ＰＩ（Ｅ
ＬＥＵ ＧＬＮ ＬＹＳ ＬＹＳ ＡＬＡ ＬＹ
Ｓ ＡＳＮＬＥＵ ＡＳＰ ＡＬＡ ＩＩＪ
ＴＨＲＴＨＲＰＲＯＡＳＰ ＰＲＯＴＨＲＴＨＲＡＳ
Ｎ ＬＥＵ ＡＳＰ ＡＬＡ ＩＬＥ ＴＨＲＴＨ
ＲＰＲＯＡＳＰ ＰＲＯＴＨＲＴＨＲＡＳＮ ＡＬＡ
ＳＥＲＬＦＪＵ ＩＪＵ ＴＨＲＬＹＳ Ｉ
ＪＵ ＧＬＮ ＡＬＡＧＬＮ ＡＳＮ ＧＬＮ ＴＲ
Ｐ ＩＪＵ ＧＬＮ ＡＳＰ ＭＥＴ Ｔ）ＩＲ
ＴＨＲＨＩＳＬｌｉ：Ｕ ＩＬＦＪ ［Ｕ ＡＲＧ
ＳＥＲｐｉ−ｔｇ Ｉ、ＹＳ ＧＬＵ Ｐ）！Ｅ
ＩＪＵ ＧＬＮＳＥＲＳｇＲＬｇＵ ＡＲＧ Ａ
ＬＡ ＬｇＵ ＡＲＧ ＧＬＮ ＭＥＴテイル
。例工ばヒトＴ細胞株ＶＴ−１（ｒＦｏ ５００９６
）を培養してヒトＢＣＤＰＩ生産させる方法、ヒトＢＣ
ＤＦの遺伝子を発現ベクタープラスミド釦挿入し宿主大
腸菌に形質転換させた後に該形質転換体を培養してとト
ＢＣＤＦ ｉ生産させる方法が知られている。また最近
、以下の様な生産法も開発されている。即ち、ヒトイン
ターロイキン２１ｒＬ２と略する）遺伝子の一部全ヒト
ＢＣＤＦの遺伝子に結合した後、発現ベクタープラス
ミドに挿入し、大腸菌に導入する。この様にして得られ
次形質転換株全培養するとＩＬ２分子の一部（ＩＬ２の
１−２１番目のアミノ酸配列に対応）とヒト ＢＣＤＦ
がｐｈ・−Ａｒｇ−Ａｉｍを仲介に接合した融合蛋白即
ちヒトΔＩＬ−２−ＢＣＤＦが大葉に生産される。この
融合蛋白をプロテアーゼ（カリクレイン、場合によって
はアミノペプチダーゼＰも併用）で処理し、逆相ＨＰＬ
Ｃで＃製すれはヒト ＢＣＤＦは工業的に大量に得られ
る訳である（特願昭６１−３０２６９９ ）。
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）を培養してヒトＢＣＤＰＩ生産させる方法、ヒトＢＣ
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腸菌に形質転換させた後に該形質転換体を培養してとト
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、以下の様な生産法も開発されている。即ち、ヒトイン
ターロイキン２１ｒＬ２と略する）遺伝子の一部全ヒト
ＢＣＤＦの遺伝子に結合した後、発現ベクタープラス
ミドに挿入し、大腸菌に導入する。この様にして得られ
次形質転換株全培養するとＩＬ２分子の一部（ＩＬ２の
１−２１番目のアミノ酸配列に対応）とヒト ＢＣＤＦ
がｐｈ・−Ａｒｇ−Ａｉｍを仲介に接合した融合蛋白即
ちヒトΔＩＬ−２−ＢＣＤＦが大葉に生産される。この
融合蛋白をプロテアーゼ（カリクレイン、場合によって
はアミノペプチダーゼＰも併用）で処理し、逆相ＨＰＬ
Ｃで＃製すれはヒト ＢＣＤＦは工業的に大量に得られ
る訳である（特願昭６１−３０２６９９ ）。
さて、ヒト ＢＣＤＦは、活性化Ｂ細胞からの抗体産生
を誘導する等、種々の生理的作用を示すことが知られて
いる。また一方、心房内粘液腫患者やりウマチ性関節炎
患者では、ヒトＢＣＤＦの異常産生が見出されている（
実験医学、５巻、８１６頁、１９８７）。これらの知見
より、ヒト ＢＣＤＦは免疫応答の調節物質として重要
な位置を占めていることは確実と考えられる。従って、
自己免疫疾患、癌、免疫不全症などの患者の血中・果中
及び体液中のヒトＲＣＤＦの濃度を測定することは、そ
の患者の免疫機能の異常を知る上での極めて有用な免疫
・？ラメータとなると推定される。
を誘導する等、種々の生理的作用を示すことが知られて
いる。また一方、心房内粘液腫患者やりウマチ性関節炎
患者では、ヒトＢＣＤＦの異常産生が見出されている（
実験医学、５巻、８１６頁、１９８７）。これらの知見
より、ヒト ＢＣＤＦは免疫応答の調節物質として重要
な位置を占めていることは確実と考えられる。従って、
自己免疫疾患、癌、免疫不全症などの患者の血中・果中
及び体液中のヒトＲＣＤＦの濃度を測定することは、そ
の患者の免疫機能の異常を知る上での極めて有用な免疫
・？ラメータとなると推定される。
しかし、これまでに患者の血中・尿中あるいは体液中の
ヒト ＢＣＤＦ 濃度を直接定量的に測定する方法は知
られていない。これは、ヒト ＢＣＤＦが微量にしか存
在しない上、血中・尿中・体液中には種々の夾雑物がら
り、これらがヒトＢＣＤＦの生物活性検定系を賦活ある
いは阻害するためである。
ヒト ＢＣＤＦ 濃度を直接定量的に測定する方法は知
られていない。これは、ヒト ＢＣＤＦが微量にしか存
在しない上、血中・尿中・体液中には種々の夾雑物がら
り、これらがヒトＢＣＤＦの生物活性検定系を賦活ある
いは阻害するためである。
一方、牌細胞やリンパ節細胞と骨髄腫細胞のノ・イブリ
ドーマは文献中に記載されている。例えば、Ｋｏｅｈｌ
ｓｒ ａｔ ｍｌ、、 Ｎａｔｕｒａ＋ ２５６．４９
５ （１９７５）およびＥｕｒ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ ６５１１ （１９７６）： Ｍｉｌｓｔｓｉｎｅｔ
ａｌ、、 Ｎａｔｕｒｅ ２６６、５５０ （１９７
７） ： Ｗｍｌｍｂ。
ドーマは文献中に記載されている。例えば、Ｋｏｅｈｌ
ｓｒ ａｔ ｍｌ、、 Ｎａｔｕｒａ＋ ２５６．４９
５ （１９７５）およびＥｕｒ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ ６５１１ （１９７６）： Ｍｉｌｓｔｓｉｎｅｔ
ａｌ、、 Ｎａｔｕｒｅ ２６６、５５０ （１９７
７） ： Ｗｍｌｍｂ。
Ｎａｔｕｒ＠２６６．４９５．（１９７７）参照。そこ
で、ハイプリドーマを用いてヒトＢＣＤＦに対するモノ
クローナル抗体、即ち、抗ヒトＢＣＤＦモノクローナル
抗体を作成し、これを用いたラジオイムノアッセイ（Ｒ
ＩＡ ） 、りるいは工ンザイムイムノアッセイ（ＩＩ
Ａ ）を行なえば、微量で夾雑物を含むような試料中の
ヒト ＢＣＤＦ Ｑ度を測定することができると考えら
れる。
で、ハイプリドーマを用いてヒトＢＣＤＦに対するモノ
クローナル抗体、即ち、抗ヒトＢＣＤＦモノクローナル
抗体を作成し、これを用いたラジオイムノアッセイ（Ｒ
ＩＡ ） 、りるいは工ンザイムイムノアッセイ（ＩＩ
Ａ ）を行なえば、微量で夾雑物を含むような試料中の
ヒト ＢＣＤＦ Ｑ度を測定することができると考えら
れる。
さらＫ ＩＪウマチ患者由来の滑脱組織においては、細
胞がヒトＢＣＤＦを産生じ、このヒトＢＣＤＦが自己抗
体の産生を誘導する事が示唆されている。このように滑
脱組織中の細胞内にはヒトＢＣＤ２分子が存在する。よ
って抗ヒト ＢＣＤＦモノクローナル抗体を用いれば、
このような組織切片や組織液等の生検試料を免疫組織化
学染色する事ができる。
胞がヒトＢＣＤＦを産生じ、このヒトＢＣＤＦが自己抗
体の産生を誘導する事が示唆されている。このように滑
脱組織中の細胞内にはヒトＢＣＤ２分子が存在する。よ
って抗ヒト ＢＣＤＦモノクローナル抗体を用いれば、
このような組織切片や組織液等の生検試料を免疫組織化
学染色する事ができる。
また抗ヒトＢＣＤＦモノクローナル抗体はヒトＢＣＤＦ
の精製にも用いる事ができる。
の精製にも用いる事ができる。
さらにヒトＢＣＤＦ活性を中和する抗ヒトモノクローナ
ル抗体！得られれば、上述のようなヒトＲＣＤＦが過剰
生産されている患者への治療薬として用いる事もできる
。
ル抗体！得られれば、上述のようなヒトＲＣＤＦが過剰
生産されている患者への治療薬として用いる事もできる
。
しかし、本発明以前には、ヒト ＢＣＤＦ ｆ抗原とし
て作用させて得られる抗ヒト ＢＣＤＦ抗体産生細胞の
ハイプリドーマ全作成し、これからヒトＢＣＤＦに対す
るモノクローナル抗体、即ち、抗ヒトＢＣＤＦモノクロ
ーナル抗体を得ることに関しては全く知られていない。
て作用させて得られる抗ヒト ＢＣＤＦ抗体産生細胞の
ハイプリドーマ全作成し、これからヒトＢＣＤＦに対す
るモノクローナル抗体、即ち、抗ヒトＢＣＤＦモノクロ
ーナル抗体を得ることに関しては全く知られていない。
そこで本発明の目的は、ヒト ＢＣＤＦに対して特異性
を示すモノクローナル抗体の提供である。
を示すモノクローナル抗体の提供である。
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究ヲ重ね
た結果、ヒト ＢＣＤＦ ’ｉ抗原として用いる事によ
り、抗ヒト ＢＣＤＦモノクローナル抗体を取得するこ
とができ、本発明を完成するに至らしめた。
た結果、ヒト ＢＣＤＦ ’ｉ抗原として用いる事によ
り、抗ヒト ＢＣＤＦモノクローナル抗体を取得するこ
とができ、本発明を完成するに至らしめた。
本発明に従えば、ヒト ＢＣＤＦに対して特異性を示す
モノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマクローン
および該クローンが産生ずる性状の均一な抗ヒト ＢＣ
ＤＦモノクローナル抗体が提供される。
モノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマクローン
および該クローンが産生ずる性状の均一な抗ヒト ＢＣ
ＤＦモノクローナル抗体が提供される。
本発明のハイプリドーマクローンは、（ａ）骨髄腫細胞
すなわち骨髄の初期腫瘍からの悪性化細胞と（ｂ）ヒト
ＢＣＤＦで免疫された動物の肺臓またはリン・９節の
細胞中に存在する抗体産生細胞とのハイプリドーマヲ作
成し、このハイプリドーマヲ培養およびクローン化して
ヒト ＢＣＤＦ ｌ／！：特異性を示す抗体全産生する
クローンとして選択されるものである。
すなわち骨髄の初期腫瘍からの悪性化細胞と（ｂ）ヒト
ＢＣＤＦで免疫された動物の肺臓またはリン・９節の
細胞中に存在する抗体産生細胞とのハイプリドーマヲ作
成し、このハイプリドーマヲ培養およびクローン化して
ヒト ＢＣＤＦ ｌ／！：特異性を示す抗体全産生する
クローンとして選択されるものである。
目的とするモノクローナル抗体はこのようなりローンを
培養した培養上清から塩析、イオン交換クロマトグラフ
ィー等の梢製忰作により回収できるが、必要に応じて全
培養上清を用いることもできる。寸た大量に取得する場
合には、抗ヒトＢＣＤＦ抗体産生ハイブリドーマ全組織
適合性動物、胸腺欠損ヌードマウス等の腹腔内に移植し
、増殖させ、該動物の腹水中に産生された該モノクロー
ナル抗体を精製、回収すれば良い。
培養した培養上清から塩析、イオン交換クロマトグラフ
ィー等の梢製忰作により回収できるが、必要に応じて全
培養上清を用いることもできる。寸た大量に取得する場
合には、抗ヒトＢＣＤＦ抗体産生ハイブリドーマ全組織
適合性動物、胸腺欠損ヌードマウス等の腹腔内に移植し
、増殖させ、該動物の腹水中に産生された該モノクロー
ナル抗体を精製、回収すれば良い。
本発明により提供される抗ヒト ＢＣＤＦモノクローナ
ル抗体を用いることにより、従来微量にしか存在しない
ために困帷ときれてい対血液中・尿中あるいは滑液等体
液中のヒト ＢＣＤＦ ｉｌの測定が可能となった。す
なわち、血液中・尿中あるいは体液中のヒトＢＣＤＦは
抗ヒト ＢＣＤＦ抗体金用いたう・２オイムノアクセイ
あるいはエンデイムイムノアッセイにより容易に定置す
ることができるわけである。
ル抗体を用いることにより、従来微量にしか存在しない
ために困帷ときれてい対血液中・尿中あるいは滑液等体
液中のヒト ＢＣＤＦ ｉｌの測定が可能となった。す
なわち、血液中・尿中あるいは体液中のヒトＢＣＤＦは
抗ヒト ＢＣＤＦ抗体金用いたう・２オイムノアクセイ
あるいはエンデイムイムノアッセイにより容易に定置す
ることができるわけである。
すなわち本発明によって製造された抗ヒトＢＣＤＦモノ
クローナル抗体を用いてラジオイムノアッセイまたはエ
ンザイムイムノアッセイを行うことにより血液中・尿中
あるいは体液中の微量のヒト ＢＣＤＦを感度良く定置
する方法が開けたわけである。
クローナル抗体を用いてラジオイムノアッセイまたはエ
ンザイムイムノアッセイを行うことにより血液中・尿中
あるいは体液中の微量のヒト ＢＣＤＦを感度良く定置
する方法が開けたわけである。
さて、本発明の抗ヒトＢＣＤＦモノクローナル抗体を用
いるラジオイムノアッセイ法・エンザイムイムノアッセ
イ法ｌ′ｉ通常の二抗体法を用いれば良い。
いるラジオイムノアッセイ法・エンザイムイムノアッセ
イ法ｌ′ｉ通常の二抗体法を用いれば良い。
この場合二種類のモノクローナル抗体を用いて一次抗体
と二次抗体を異なる種類で行なうのが良いが、二次抗体
としてポリクローナル抗体を用いても良い。
と二次抗体を異なる種類で行なうのが良いが、二次抗体
としてポリクローナル抗体を用いても良い。
また本発明により製造された抗ヒト ＢＣＤＦモノクロ
ーナル抗体を免疫組織化学染色に用いるには例えば、下
記のような酵素抗体間接法を用いれば良い。
ーナル抗体を免疫組織化学染色に用いるには例えば、下
記のような酵素抗体間接法を用いれば良い。
炎症局所組織切片あるいは細胞診スメア標本全アルコー
ル固定後、非特異吸着を血清アルブミン等でブロッキン
グし、抗ヒト ＢＣＤＦＣＤ上添加し反応させる。洗浄
後イルオキシダーゼ標識ウサゼ抗マウスＩｇ ｋ二次抗
体として反応させる。洗浄後、３．３ノアミノペンチデ
ンと過酸化水素による発色反応を行なえげヒト ＢＣＤ
Ｆを細胞内に持つ細胞は褐色に染色される。
ル固定後、非特異吸着を血清アルブミン等でブロッキン
グし、抗ヒト ＢＣＤＦＣＤ上添加し反応させる。洗浄
後イルオキシダーゼ標識ウサゼ抗マウスＩｇ ｋ二次抗
体として反応させる。洗浄後、３．３ノアミノペンチデ
ンと過酸化水素による発色反応を行なえげヒト ＢＣＤ
Ｆを細胞内に持つ細胞は褐色に染色される。
また、本発明によって製造された抗と） ＢＣＤＦモノ
クローナル抗体を担体樹脂などの適当な支持体に結合さ
せ親和クロマトグラフィーを行うこと釦よって細胞また
は菌体を培養した培地中に含まれるヒト ＢＣＤＦ ′
ｔ−％異的に精製して極めて純度の高いヒト ＢＣＤＦ
を容易に得る事もできる。例えば、抗ヒト ＢＣＤＦモ
ノクロ−アル抗体ハ、プロムシアンチ活性化したセファ
ロース（ファルマシア社、Ｍ ）等の支持体に結合させ
ることができるが、このモノクローナル抗体結合支持体
でカラムを作成し、アフィニティークロマトグラフィー
を行うことにより容易にヒトＢＣＤＦ ’に精製するこ
とができる。
クローナル抗体を担体樹脂などの適当な支持体に結合さ
せ親和クロマトグラフィーを行うこと釦よって細胞また
は菌体を培養した培地中に含まれるヒト ＢＣＤＦ ′
ｔ−％異的に精製して極めて純度の高いヒト ＢＣＤＦ
を容易に得る事もできる。例えば、抗ヒト ＢＣＤＦモ
ノクロ−アル抗体ハ、プロムシアンチ活性化したセファ
ロース（ファルマシア社、Ｍ ）等の支持体に結合させ
ることができるが、このモノクローナル抗体結合支持体
でカラムを作成し、アフィニティークロマトグラフィー
を行うことにより容易にヒトＢＣＤＦ ’に精製するこ
とができる。
また、本発明によりて製造されたＭＨ１６６株あるいは
αＢ５Ｆ２−７７株由来の抗ヒトＢＣＤＦモノクローナ
ル抗体は実施例に示すようにヒ’ ＢＣＤＦＣＤ上中和
する。
αＢ５Ｆ２−７７株由来の抗ヒトＢＣＤＦモノクローナ
ル抗体は実施例に示すようにヒ’ ＢＣＤＦＣＤ上中和
する。
よりて本ヒト ＢＣＤＦＣＤ上患者に投与すれば過剰産
生されているヒトＢＣＤＦ 全中和する事ができる。
生されているヒトＢＣＤＦ 全中和する事ができる。
またヒトＢＣＤＦによりミエローマやプラズマサイトー
マのような癌細胞が増殖する事が知られており、よって
本ヒトＢＣＤＦ抗体を上記のような癌細胞に対する治療
薬として用いる事もできる。
マのような癌細胞が増殖する事が知られており、よって
本ヒトＢＣＤＦ抗体を上記のような癌細胞に対する治療
薬として用いる事もできる。
用いる抗体は本モノクローナル抗体そのものでも良くま
たＦｅ部分を酵素により除去したＦ（ａｂ’）２フラグ
メントでも良い。またＦｃ部分をヒト Ｆｅに組み換え
たキメラ抗体でも良い。
たＦｅ部分を酵素により除去したＦ（ａｂ’）２フラグ
メントでも良い。またＦｃ部分をヒト Ｆｅに組み換え
たキメラ抗体でも良い。
このように本発明の抗ヒトＢＣＤＦモノクローナル抗体
には広範囲な用途が期待されるが、以下にこの抗ヒト
ＢＣＤＦモノクローナル抗体の調製法金記す。
には広範囲な用途が期待されるが、以下にこの抗ヒト
ＢＣＤＦモノクローナル抗体の調製法金記す。
ハイプリドーマは、骨髄腫細胞と抗体産生細胞全融合さ
せることによって製造される。抗体産生細胞としては、
ヒト ＢＣＤＦで免疫されたマウス、ラットなどの動物
からの牌８またはリン／４’節細胞を用いるとよい。骨
髄腫細胞と抗体産生細胞の由来する動物の稲は、両細胞
が融合可能な限りにおいて異なりてもよいが、通常量−
棟の細胞音用いた方がよい結果が得られる。
せることによって製造される。抗体産生細胞としては、
ヒト ＢＣＤＦで免疫されたマウス、ラットなどの動物
からの牌８またはリン／４’節細胞を用いるとよい。骨
髄腫細胞と抗体産生細胞の由来する動物の稲は、両細胞
が融合可能な限りにおいて異なりてもよいが、通常量−
棟の細胞音用いた方がよい結果が得られる。
本発明実施のための一つの好ましいノ・イブリドーマは
、ヒトＢＣＤＦで免疫したマウスリン／Ｆ節細胞又はＮ
腫細胞とマウス骨髄腫細胞の間のノ１イブリドーマであ
る。
、ヒトＢＣＤＦで免疫したマウスリン／Ｆ節細胞又はＮ
腫細胞とマウス骨髄腫細胞の間のノ１イブリドーマであ
る。
例、ｔ Ｈフロイント・コンブリードリー・アジュバン
トで乳化したヒト ＢＣＤＦで免疫したＢＡＬＢ／Ｃマ
ウスの抗体産生リンパ節細胞とＲＡＬＢ／Ｃマウスの骨
髄肺細胞Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８−Ｕｌの間のハイプリド
ーマで後記の実施例でも示すように、優れた結果が得ら
れた。
トで乳化したヒト ＢＣＤＦで免疫したＢＡＬＢ／Ｃマ
ウスの抗体産生リンパ節細胞とＲＡＬＢ／Ｃマウスの骨
髄肺細胞Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８−Ｕｌの間のハイプリド
ーマで後記の実施例でも示すように、優れた結果が得ら
れた。
骨髄腫細胞としては、Ｆ３−Ｘ６３−ＡＫ８−Ｕｌの他
、Ｆ３−Ｘ６３−Ａｇ８、Ｆ３−ＮＳＩ／１−Ａｇ４−
１、ＭＰＣＩＩ−４５，６゜ＴＧ、１．７、ＳＰ２／Ｖ
−Ａｇ １４、Ｘ６３−Ａｇ８−６．５．３ （以上
、マウス）、２１０．ＲＣＹ、Ａｇ１．２．３ （ラッ
ト）、５ＫＯ００７、ＧＨ１５００６ＴＧ−Ａ１２ （
以上、ヒト）等の８アザグアニン耐性の細胞株を用いて
もよい。
、Ｆ３−Ｘ６３−Ａｇ８、Ｆ３−ＮＳＩ／１−Ａｇ４−
１、ＭＰＣＩＩ−４５，６゜ＴＧ、１．７、ＳＰ２／Ｖ
−Ａｇ １４、Ｘ６３−Ａｇ８−６．５．３ （以上
、マウス）、２１０．ＲＣＹ、Ａｇ１．２．３ （ラッ
ト）、５ＫＯ００７、ＧＨ１５００６ＴＧ−Ａ１２ （
以上、ヒト）等の８アザグアニン耐性の細胞株を用いて
もよい。
また、抗体産生細胞は、例えば、次のようにして得ると
よｈ６まず、マウス、ラットなどの動物金ヒトＢＣＤＦ
で免疫する。ここで用いるヒト ＢＣＤＦは、大腸菌等
で生産したりコンビナンド体のほか、ヒト扁桃腺単核球
、ヒト末梢血単核球、またはヒトＴリンホープなどのヒ
ト腫瘍細胞または人工的に作られたノ・イブリドーマに
由来するものを用いてもさしつかえない。
よｈ６まず、マウス、ラットなどの動物金ヒトＢＣＤＦ
で免疫する。ここで用いるヒト ＢＣＤＦは、大腸菌等
で生産したりコンビナンド体のほか、ヒト扁桃腺単核球
、ヒト末梢血単核球、またはヒトＴリンホープなどのヒ
ト腫瘍細胞または人工的に作られたノ・イブリドーマに
由来するものを用いてもさしつかえない。
次に、免疫した動物からリンパ節細胞全調製する。その
調へ方法は、この技術分野においてよく知られた方法、
例えば、「免疫実験操作法」Ａ４４７頁（日本免疫学金
繰、昭和５０年）等全参照して行なえばよい。
調へ方法は、この技術分野においてよく知られた方法、
例えば、「免疫実験操作法」Ａ４４７頁（日本免疫学金
繰、昭和５０年）等全参照して行なえばよい。
ハイプリドーマの作成とそれからの抗ヒトＢＣＤＦ抗体
産生クローンの選択は、例えば、次のようにして行える
。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ ）またはセンダイ
ウィルス（Ｉ（ＶＪ ） ｉ用いて抗体産生細胞と骨髄
腫細胞と全融合させる。生じたハイプリドーマはヒＩキ
サンチン、アミノプテリン、チミゾンを含む培地（以下
、ＨＡＴ培地と略する。）中で生育する。融合しなかっ
た抗体産生細胞と骨髄腫細胞は、該培地中では共に死滅
し、ハイプリドーマだけが個々のクローンから増殖して
くる。生育したハイプリドーマから抗ヒトＢＣＤＦ Ｍ
体を産生ずるクローンが選択される。全てのハイプリド
ーマクローンが抗体全産生するわけではない。また、個
々のクローンによって産生される抗体は特異性が異なり
、全てのクローンが抗ヒト ＢＣＤＦ抗体を産生ずるの
ではない。従りて、ヒト ＢＣＤＦに対して特異性を示
す抗体を産生ずるクローンを選択しなければならない。
産生クローンの選択は、例えば、次のようにして行える
。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ ）またはセンダイ
ウィルス（Ｉ（ＶＪ ） ｉ用いて抗体産生細胞と骨髄
腫細胞と全融合させる。生じたハイプリドーマはヒＩキ
サンチン、アミノプテリン、チミゾンを含む培地（以下
、ＨＡＴ培地と略する。）中で生育する。融合しなかっ
た抗体産生細胞と骨髄腫細胞は、該培地中では共に死滅
し、ハイプリドーマだけが個々のクローンから増殖して
くる。生育したハイプリドーマから抗ヒトＢＣＤＦ Ｍ
体を産生ずるクローンが選択される。全てのハイプリド
ーマクローンが抗体全産生するわけではない。また、個
々のクローンによって産生される抗体は特異性が異なり
、全てのクローンが抗ヒト ＢＣＤＦ抗体を産生ずるの
ではない。従りて、ヒト ＢＣＤＦに対して特異性を示
す抗体を産生ずるクローンを選択しなければならない。
抗ヒト ＢＣＤＦ抗体産生クローンの】選択は例えば次
のようにして行なえる。す麿わちポルトン・ノ・フタ−
法またはラクトバーオキシダーゼ法により１２５Ｉ−ヒ
トＢＣＤＦ ｉ作成し、ハイブリドーマクローン培養上
清中の１２５Ｉ−ヒト ＢＣＤＦＣＤ症を測定する。上
清の結合能の高いノ・イブリドーマが抗ヒ例えば朋６０
（ＦＥＲＭ Ｐ−９６５５＞と呼ばれる細胞、及びＭＨ
１６６（ＦＥＲＭ Ｐ−９６５６）と呼ばれる細胞、α
Ｂ５Ｆ２−６（ＦＥＲＭ Ｐ−９ｇ’ｌ？ ） 、と呼
ばれる細胞、αＢＢ５Ｆ２−３９（ＦＥＲＰ−’？？？
’？ ）、と呼ばれる細胞、αＢＳＦ’２２−７７（Ｆ
ＥＲＰ−’？ｑｏｂ ）と呼ばれる細胞がある。
のようにして行なえる。す麿わちポルトン・ノ・フタ−
法またはラクトバーオキシダーゼ法により１２５Ｉ−ヒ
トＢＣＤＦ ｉ作成し、ハイブリドーマクローン培養上
清中の１２５Ｉ−ヒト ＢＣＤＦＣＤ症を測定する。上
清の結合能の高いノ・イブリドーマが抗ヒ例えば朋６０
（ＦＥＲＭ Ｐ−９６５５＞と呼ばれる細胞、及びＭＨ
１６６（ＦＥＲＭ Ｐ−９６５６）と呼ばれる細胞、α
Ｂ５Ｆ２−６（ＦＥＲＭ Ｐ−９ｇ’ｌ？ ） 、と呼
ばれる細胞、αＢＢ５Ｆ２−３９（ＦＥＲＰ−’？？？
’？ ）、と呼ばれる細胞、αＢＳＦ’２２−７７（Ｆ
ＥＲＰ−’？ｑｏｂ ）と呼ばれる細胞がある。
次にモノクローナル抗体の犬を調製法であるが、ＭＩ（
６０（ＦＥＲＭ Ｐ−９６５５）、ＭＨ１６６（ＦｇＲ
Ｍ Ｐ−９６５６）、αＢ５Ｆ２−６ （ＦＥＲＭ Ｐ
−ｑ？９ｇ）、αＢ５Ｆ２−３９ （ＦＥＲＭ −Ｐｑ
ｇｑｑ ）及びαＢ５Ｆ２−７７ （ＦＥＲＭ Ｐ−’
？９０ｏ）をインビトロで長期連続継代培養または組織
適合性動物もしくは胸腺欠如ヌードマウス中において生
育させたのち、常法に従って回収すればよい。
６０（ＦＥＲＭ Ｐ−９６５５）、ＭＨ１６６（ＦｇＲ
Ｍ Ｐ−９６５６）、αＢ５Ｆ２−６ （ＦＥＲＭ Ｐ
−ｑ？９ｇ）、αＢ５Ｆ２−３９ （ＦＥＲＭ −Ｐｑ
ｇｑｑ ）及びαＢ５Ｆ２−７７ （ＦＥＲＭ Ｐ−’
？９０ｏ）をインビトロで長期連続継代培養または組織
適合性動物もしくは胸腺欠如ヌードマウス中において生
育させたのち、常法に従って回収すればよい。
さて、このようにして得られたモノクローナル抗体は以
下のような性質を有するものである。
下のような性質を有するものである。
（１） ｋｌ）１６０ （ＦＥＲＭ Ｐ−９６５５）
が産生する抗ヒトＢＣＤＦ’モノ・クローナル抗体 （ａ） 免疫グロブリンの種類：ＩｇＭ（ｂ＞ 分
子景：９００．ＯＯＯダルトン（ｃ）分子吸光係数：
Ｅ２８０ｎｍ ＝ １４．０（ｄ） ヒト ＢＣＤＦ
と特異的に結合する。
が産生する抗ヒトＢＣＤＦ’モノ・クローナル抗体 （ａ） 免疫グロブリンの種類：ＩｇＭ（ｂ＞ 分
子景：９００．ＯＯＯダルトン（ｃ）分子吸光係数：
Ｅ２８０ｎｍ ＝ １４．０（ｄ） ヒト ＢＣＤＦ
と特異的に結合する。
（２１ＭＨ１６６（ＦＥ個Ｐ−９６５６）が産生ずる抗
ヒトＢＣＤＦモノ・クローナル抗体 （８）免疫グロブリンの種類： ｒｇｃ（ｂ） 分子
祉：１５０．ＯＯＯダルトン（ｃ）分子吸光係数： Ｅ
２８０ｎｍ ＝ １４．０（ｄ） ヒト ＢＣＤＦと
特異的に結合する。
ヒトＢＣＤＦモノ・クローナル抗体 （８）免疫グロブリンの種類： ｒｇｃ（ｂ） 分子
祉：１５０．ＯＯＯダルトン（ｃ）分子吸光係数： Ｅ
２８０ｎｍ ＝ １４．０（ｄ） ヒト ＢＣＤＦと
特異的に結合する。
（、） ヒトＢＣＤＦ活性を中和する。
（３） αＢ５Ｆ２−６ （ＦＥＲＭ Ｐ４Ｆ９ｇ
）が産生ずる抗ヒトＢＣＤＦモノクロナ−１し才丸七ト （、） 免疫グロブリンの檻類： ＩｇＭ（ｂ）
分子ｉ：９００．ｏｏＯダルトン（ｃ）分子吸光係数：
Ｅ２８０ｎｍ ＝ １４．０（ｄ） ヒト ＢＣＤ
Ｆと特異的に結合する。
）が産生ずる抗ヒトＢＣＤＦモノクロナ−１し才丸七ト （、） 免疫グロブリンの檻類： ＩｇＭ（ｂ）
分子ｉ：９００．ｏｏＯダルトン（ｃ）分子吸光係数：
Ｅ２８０ｎｍ ＝ １４．０（ｄ） ヒト ＢＣＤ
Ｆと特異的に結合する。
（４） αＢ５Ｆ２−３９ （ＦＥＲＭ ｐ−（Ｉｇ
Ｑ’／ ）が産生ずる抗ヒトＢＣＤＦモノクロナールオ
屯イト （−） 免疫グロブリンの種類： ＩｇＭ（ｂ）
分子量：９００．ＯＯＯダルトン（Ｃ） 分子吸光係
数： Ｅ２８０ｎｍ＝１４．０（ｄ） ヒト ＢＣＤ
Ｆと特異的に結合する。
Ｑ’／ ）が産生ずる抗ヒトＢＣＤＦモノクロナールオ
屯イト （−） 免疫グロブリンの種類： ＩｇＭ（ｂ）
分子量：９００．ＯＯＯダルトン（Ｃ） 分子吸光係
数： Ｅ２８０ｎｍ＝１４．０（ｄ） ヒト ＢＣＤ
Ｆと特異的に結合する。
（５） αＢ５Ｆ２−７７ （ＦＥＲＭ Ｐ−’ｆ’
１００ ）が産生ずる抗ヒト−力 ＢＣＤＦ七ツク＼コヘルオ九体 （、） 免疫グロブリンの種類： ＩｇＧ（ｂ）
分子量：１５０，０００ダルトン（ｃ） 分子吸光係
数： ｇ２８０ｎｍ＝１４．０（ｄ） ヒト ＢＣＤ
Ｆと特異的に結合する。
１００ ）が産生ずる抗ヒト−力 ＢＣＤＦ七ツク＼コヘルオ九体 （、） 免疫グロブリンの種類： ＩｇＧ（ｂ）
分子量：１５０，０００ダルトン（ｃ） 分子吸光係
数： ｇ２８０ｎｍ＝１４．０（ｄ） ヒト ＢＣＤ
Ｆと特異的に結合する。
（、） ヒトＢＣＤＦ活性を中和する。
本発明の抗ヒト ＢＣＤＦモノクローナル抗体は微量あ
るいは生物活性阻害物を含むような血液、尿、体液等試
料のヒト ＢＣＤＦ濃度をラジオイムノアッセイマフｔ
はエンザイムイムノアッセイで測定する事を可能にする
。
るいは生物活性阻害物を含むような血液、尿、体液等試
料のヒト ＢＣＤＦ濃度をラジオイムノアッセイマフｔ
はエンザイムイムノアッセイで測定する事を可能にする
。
ま〜た免疫組織化学染色に用いる事が可能である。
また担体樹脂に結合させればアフィニティークロマトグ
ラフィーにてヒト ＢＣＤＦ ｉ特異的に精製する事が
可能である。
ラフィーにてヒト ＢＣＤＦ ｉ特異的に精製する事が
可能である。
さらに本発明のＭＨ１６６（Ｆ’ＥＲＭ Ｐ−９６５６
）及びαＢ５Ｆ２−７７ （ＦＦＲＭ Ｐ−ｑ’？６０
）由来抗ヒトＢＣＤＦモノクローナル抗体（ＩｇＧ
） を用いれば、ＢＣＤＦが過剰産生されている患者へ
の治療薬ともなる。
）及びαＢ５Ｆ２−７７ （ＦＦＲＭ Ｐ−ｑ’？６０
）由来抗ヒトＢＣＤＦモノクローナル抗体（ＩｇＧ
） を用いれば、ＢＣＤＦが過剰産生されている患者へ
の治療薬ともなる。
以下実施例に従い更に詳細に説明する。
実施例・１ 抗ヒトＢＣＤＦ抗体産生ハイブリドーマの
作成 り Ａ Ｌ Ｂ／Ｃマウス（雌性・６週令）に大腸菌で
学童、精製されたヒト ＢＣＤＦ １０μｇを等容の７
０インド・コンプリードリー・アジュバントとともに腹
腔的注射し免疫した。以後４〜６回の頻回免疫を行なっ
た後リンΔ節を摘出し細胞浮遊液とし、融合のための抗
体産生細胞とした。一方骨髄腫細胞としてＦ３−Ｘ６３
−Ａｇ８−Ｕｌ （Ｐ３Ｕ１ ） ′！ｉ７用い両者を
ポリエチレングリコール法にて融合した。
作成 り Ａ Ｌ Ｂ／Ｃマウス（雌性・６週令）に大腸菌で
学童、精製されたヒト ＢＣＤＦ １０μｇを等容の７
０インド・コンプリードリー・アジュバントとともに腹
腔的注射し免疫した。以後４〜６回の頻回免疫を行なっ
た後リンΔ節を摘出し細胞浮遊液とし、融合のための抗
体産生細胞とした。一方骨髄腫細胞としてＦ３−Ｘ６３
−Ａｇ８−Ｕｌ （Ｐ３Ｕ１ ） ′！ｉ７用い両者を
ポリエチレングリコール法にて融合した。
融合細胞ｉ ）ＥＡＴ培地（５ｃｌｅｎｅｅ、 １４５
．７０９ （１９６４）に懸濁し、ヒトＢＣＤＦ Ｏ〜
１０ ｎｇ／ＩＭ （ｃ−添加し、９６穴プレートにて
培養した。
．７０９ （１９６４）に懸濁し、ヒトＢＣＤＦ Ｏ〜
１０ ｎｇ／ＩＭ （ｃ−添加し、９６穴プレートにて
培養した。
ハイプリドーマの生育してきたウェルについては培養上
清の抗ヒト ＢＣＤＦ抗体量を実施例・２の方法にて検
定した。
清の抗ヒト ＢＣＤＦ抗体量を実施例・２の方法にて検
定した。
なおハイプリドーマのクローニング効率を第１表に示し
た。
た。
第１表・ハイブリドーマクローニング効率の検定
Ｉ（ＡＴ培地中に生育してきたハイプリドーマを１０４
Ｆｅ２ ｆｃ含むＲＰＭＩ １６４０培地に移し、そ
の培養土清金抗ヒト ＢＣＤＦ抗体の検定標品としてそ
のまま用いた。
Ｆｅ２ ｆｃ含むＲＰＭＩ １６４０培地に移し、そ
の培養土清金抗ヒト ＢＣＤＦ抗体の検定標品としてそ
のまま用いた。
検定方法は次のようにして行なった。すなわちヤギ抗マ
ウスＩｇ抗体（タボ社製）を９６穴フレキシブルカルチ
ヤープレートに分注し、４℃−夜装置にて固定させた。
ウスＩｇ抗体（タボ社製）を９６穴フレキシブルカルチ
ヤープレートに分注し、４℃−夜装置にて固定させた。
非結合のヤギ抗マウスＩｇ抗体全除去し、０．５ ％
ＢＳＡ含有ＰＢＳ ｉ分注し、１時間室温に放置した。
ＢＳＡ含有ＰＢＳ ｉ分注し、１時間室温に放置した。
次に非結合ＢＳＡ ’ｉ除去しハイブリドーマ培養上清
を各ウェルに分注し、２時間静置した。洗浄後、デルト
ン・ハンター法にてヨウ素化した１２５Ｉ−ヒト ＢＣ
ＤＦ （ｒ−添加し、１時間静置した。最後にＰＢＳで
洗浄し、乾燥後カッターにてプレートのウェル金切り出
し、γ−カウンター第２表・ハイプリドーマ上清のヒト
ＢＣＤＦ結合能ｔ／、Ｄ奉文党 ９６５６）、 αＢ５Ｆ２−６ （ＦＥＲＭ Ｐ−９
Ｆ？９ｇ ）、 αＢＢ５Ｆ２−３９（ＦＥＢ Ｐ−Ｃ
Ｉと９９）、及びαＢ５Ｆ２−７７ （Ｆ）ＪＭ Ｐ４
９０ｏ）の５株について、培養上清がヒト ＢＣＤＦと
特異的に結合能を有する事全第２表に示した。
を各ウェルに分注し、２時間静置した。洗浄後、デルト
ン・ハンター法にてヨウ素化した１２５Ｉ−ヒト ＢＣ
ＤＦ （ｒ−添加し、１時間静置した。最後にＰＢＳで
洗浄し、乾燥後カッターにてプレートのウェル金切り出
し、γ−カウンター第２表・ハイプリドーマ上清のヒト
ＢＣＤＦ結合能ｔ／、Ｄ奉文党 ９６５６）、 αＢ５Ｆ２−６ （ＦＥＲＭ Ｐ−９
Ｆ？９ｇ ）、 αＢＢ５Ｆ２−３９（ＦＥＢ Ｐ−Ｃ
Ｉと９９）、及びαＢ５Ｆ２−７７ （Ｆ）ＪＭ Ｐ４
９０ｏ）の５株について、培養上清がヒト ＢＣＤＦと
特異的に結合能を有する事全第２表に示した。
金１００μｊずつ分注し４℃で一夜放置し次。この内過
剰量の非結合抗ヒトＢＣＤＦ抗体を除去し、０．５チＢ
ＳＡ含有ＰＢＳを分注し、１時間Ｎ＠に放置し友。次に
非結合ＢＳＡ ｉ除去しヒト ＢＣＤＦを含有する被験
資料及びスタンダードヒトＢＣＤＦを各ウェルに分注し
、２時間静置し友。洗浄後アフィニティ精裂つサギ抗Ｂ
ＣＤＦポリクローナル抗体０．１μｇ ／ｍｌ ｆ １
００ ｐｉ添加、２時間１［ＩＬ７’ｃ。コレを洗浄し
た後、ｓ、ｏｏｏ倍希釈アルカリホスファターゼ結合ヤ
ギ抗ウサつＩｇ（りが社製）を添加２時間静置した。最
後に、これを洗浄し、アルカリホスファターゼ基質（シ
グマ社ｆｆ）’に添加、３７℃で３０分加温し、各ウェ
ルの４０５ ｎｍの吸光度を測定した。
剰量の非結合抗ヒトＢＣＤＦ抗体を除去し、０．５チＢ
ＳＡ含有ＰＢＳを分注し、１時間Ｎ＠に放置し友。次に
非結合ＢＳＡ ｉ除去しヒト ＢＣＤＦを含有する被験
資料及びスタンダードヒトＢＣＤＦを各ウェルに分注し
、２時間静置し友。洗浄後アフィニティ精裂つサギ抗Ｂ
ＣＤＦポリクローナル抗体０．１μｇ ／ｍｌ ｆ １
００ ｐｉ添加、２時間１［ＩＬ７’ｃ。コレを洗浄し
た後、ｓ、ｏｏｏ倍希釈アルカリホスファターゼ結合ヤ
ギ抗ウサつＩｇ（りが社製）を添加２時間静置した。最
後に、これを洗浄し、アルカリホスファターゼ基質（シ
グマ社ｆｆ）’に添加、３７℃で３０分加温し、各ウェ
ルの４０５ ｎｍの吸光度を測定した。
濃度既知のと） ＢＣＤＦを用いて試み次結果、第１図
及び２図のようにＭＨ６０由来１ｇＭで１／′ｉ３〜５
０ｎｇ ／ｍｌ 、 ＭＨ１６６由来ｒｇＧでは０．０
１〜１０ ｎｇ／ｍｌの範囲のヒト ＢＣＤＦが測定可
能であった。
及び２図のようにＭＨ６０由来１ｇＭで１／′ｉ３〜５
０ｎｇ ／ｍｌ 、 ＭＨ１６６由来ｒｇＧでは０．０
１〜１０ ｎｇ／ｍｌの範囲のヒト ＢＣＤＦが測定可
能であった。
−ナル抗体をそれぞれ別々に添加し、３７℃で２時間反
応させた。
応させた。
各抗ヒト ＢＣＤＦモノクローナル抗体の中和活性を検
討する為に各反応液にヒト ＢＣＤＦ＋二依存して生育
するハイブリドーマＭＨ６０を５×１０ 個／ ｍｌの
細胞密度で添加し、９６穴平底プレート（ファルコン３
０７２ ）にて４２時間培養した。
討する為に各反応液にヒト ＢＣＤＦ＋二依存して生育
するハイブリドーマＭＨ６０を５×１０ 個／ ｍｌの
細胞密度で添加し、９６穴平底プレート（ファルコン３
０７２ ）にて４２時間培養した。
１μｃｌ／ウエルの３Ｈ−チミジンを添加し、さらに６
時間培養後細胞全ハーベ゛ストし、 Ｈ−チミジンの増
シ込みでヒト ＢＣＤＦ活性の抑制を測定した。
時間培養後細胞全ハーベ゛ストし、 Ｈ−チミジンの増
シ込みでヒト ＢＣＤＦ活性の抑制を測定した。
即ちＭＨ６０細胞の Ｈ−チミジンの取りこみはヒトＢ
ＣＤＦ １１度に依存する。
ＣＤＦ １１度に依存する。
第３図のようにＭＨ１６６由来のモノクローナル抗体は
特異的にと） ＢＣＤＦ活性を中和抑制した。
特異的にと） ＢＣＤＦ活性を中和抑制した。
（２）ヒトＢｃＤＦ ２０ ｐｇ／１１１１に２５〜Ｏ
μｇ／ｒｎｌのαＢ５Ｆ２−７７ （ＦＥＲＭ Ｐ−’
？’／ρθ）株由来の抗ヒトＢＣＤＦモノクローナル抗
体を添加し、３７℃で２時間反応させた。
μｇ／ｒｎｌのαＢ５Ｆ２−７７ （ＦＥＲＭ Ｐ−’
？’／ρθ）株由来の抗ヒトＢＣＤＦモノクローナル抗
体を添加し、３７℃で２時間反応させた。
この抗ヒトＢＣＤＦモノクローナル抗体の中和性を検討
する為に、前述の（１）と同様にこの反応液にヒトＢＣ
ＤＦＩ；依存して生育するバイブリド°−マＭＨ６０を
５×１０ 個／ｍｅの細胞密度で添加し、９６穴平底グ
レート（ファルコン３０７２）にて４２時間培養した。
する為に、前述の（１）と同様にこの反応液にヒトＢＣ
ＤＦＩ；依存して生育するバイブリド°−マＭＨ６０を
５×１０ 個／ｍｅの細胞密度で添加し、９６穴平底グ
レート（ファルコン３０７２）にて４２時間培養した。
１μｃｉ／ウエルのＨ−チミジンを添加し、さらに６時
間培養後細胞をハーベストし、３Ｈ−チミジンの取り込
みでヒト ＢＣＤＦ活性の抑制を測定した。
間培養後細胞をハーベストし、３Ｈ−チミジンの取り込
みでヒト ＢＣＤＦ活性の抑制を測定した。
第４図に示したように、ＭＨ６０細胞の３Ｈ−チミジン
の取りこみはヒト ＢＣＤＦ ｉ度に依存していた。
の取りこみはヒト ＢＣＤＦ ｉ度に依存していた。
即ち、この結果から明らかなように、αＢ５Ｆ２−７７
由来のモノクローナル抗体は極めて強くヒトＢＣＤＦ活
性を中和抑制した。
由来のモノクローナル抗体は極めて強くヒトＢＣＤＦ活
性を中和抑制した。
本実施例（１）及び（２）の結果よりαＢ５Ｆ２−７７
（Ｆ’ＥＲＭる患者への治療薬としても十分使用でき
ることが示された。
（Ｆ’ＥＲＭる患者への治療薬としても十分使用でき
ることが示された。
第１図はＭＨ１６６由来抗ヒト ＢＣＤＦモノクローナ
ル抗体を用いてヒト ＢＣＤＦ Ｊ度ｉ ＥＬＩＳＡで
求めうる事を示す図面である。 第２図は■Ｉ６０由来抗ヒト ＢＣＤＦモノクローナル
抗体を用いてヒト ＢＣＤＦ ′Ｉ５度ｉ ＥＬＩＳＡ
で求めうる＄を示す図面である。 ） ＢＣＤＦの活性を中和する事を示す図面である。 第４図はαＢ５Ｆ２−７７由来抗ヒトＢＣＤＦモノクロ
一ナル抗体がヒト ＢＣＤＦの活性中和する事を示す図
面である。 特許出願人 岸 本 忠 三 イ欠 埋入 ４Ｆ−ｆ￥士 ノー イ呆 １）
ｉｌｌ シフ３’” 。 第１図 第２図 ヒトＢＣＤＦａ度（ｎ９／ｍ１） １０ １００ （ｎｇ／ｍＯ ヒトＢＣＤＦａ度（ｎ９／ｍ〕） 第 図 抗体濃度（、ｕ９／ｍＬ）
ル抗体を用いてヒト ＢＣＤＦ Ｊ度ｉ ＥＬＩＳＡで
求めうる事を示す図面である。 第２図は■Ｉ６０由来抗ヒト ＢＣＤＦモノクローナル
抗体を用いてヒト ＢＣＤＦ ′Ｉ５度ｉ ＥＬＩＳＡ
で求めうる＄を示す図面である。 ） ＢＣＤＦの活性を中和する事を示す図面である。 第４図はαＢ５Ｆ２−７７由来抗ヒトＢＣＤＦモノクロ
一ナル抗体がヒト ＢＣＤＦの活性中和する事を示す図
面である。 特許出願人 岸 本 忠 三 イ欠 埋入 ４Ｆ−ｆ￥士 ノー イ呆 １）
ｉｌｌ シフ３’” 。 第１図 第２図 ヒトＢＣＤＦａ度（ｎ９／ｍ１） １０ １００ （ｎｇ／ｍＯ ヒトＢＣＤＦａ度（ｎ９／ｍ〕） 第 図 抗体濃度（、ｕ９／ｍＬ）
Claims (1)
- （１）ヒトＢ細胞分化因子（以下、ＢＣＤＦと略する）
に対するモノクローナル抗体。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63053828A JP2598666B2 (ja) | 1987-10-19 | 1988-03-09 | 抗ヒトｂｃｄｆモノクローナル抗体 |
| DE19883889062 DE3889062T2 (de) | 1987-10-19 | 1988-10-18 | Monoklonaler Antikörper gegen humanen BCDF. |
| EP88117349A EP0312996B1 (en) | 1987-10-19 | 1988-10-18 | Anti-human bcdf monoclonal antibody |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26363187 | 1987-10-19 | ||
| JP62-263631 | 1987-10-19 | ||
| JP63053828A JP2598666B2 (ja) | 1987-10-19 | 1988-03-09 | 抗ヒトｂｃｄｆモノクローナル抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02488A true JPH02488A (ja) | 1990-01-05 |
| JP2598666B2 JP2598666B2 (ja) | 1997-04-09 |
Family
ID=26394550
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63053828A Expired - Lifetime JP2598666B2 (ja) | 1987-10-19 | 1988-03-09 | 抗ヒトｂｃｄｆモノクローナル抗体 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0312996B1 (ja) |
| JP (1) | JP2598666B2 (ja) |
| DE (1) | DE3889062T2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06201700A (ja) * | 1992-10-16 | 1994-07-22 | Noda Wax:Kk | 癌抑制遺伝子ｍｃｃの産物に対する抗体 |
| JP2009545319A (ja) * | 2006-08-03 | 2009-12-24 | バクシネックス，インコーポレーテッド | 抗ｉｌ−６モノクローナル抗体およびその使用 |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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