JPH03219894A - ｇｐ１３０蛋白質に対する抗体 - Google Patents
ｇｐ１３０蛋白質に対する抗体Info
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- JPH03219894A JPH03219894A JP9015090A JP1509090A JPH03219894A JP H03219894 A JPH03219894 A JP H03219894A JP 9015090 A JP9015090 A JP 9015090A JP 1509090 A JP1509090 A JP 1509090A JP H03219894 A JPH03219894 A JP H03219894A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はヒトインターロイキン−６（以下１１Ｌ−６」
と略す）のシグナル伝達に関与する蛋白質であるｇｐ１
３０蛋白質と特異的に結合する抗体及びその製造方法に
関するものである。
と略す）のシグナル伝達に関与する蛋白質であるｇｐ１
３０蛋白質と特異的に結合する抗体及びその製造方法に
関するものである。
ＩＬ−６は、種々の重要な生理活性を有し、広く細胞の
増殖分化に関与している蛋白質である。さらにＩＬ−６
の異常産生が種々の自己免疫疾患の病因因子である可能
性が報告されている（岸本、平野、Ａｎｎ、Ｒｅｖ、ｌ
５ｓｕｎｏ１．＋ ６＋ ｐ４８５．１９８８年参照）
。
増殖分化に関与している蛋白質である。さらにＩＬ−６
の異常産生が種々の自己免疫疾患の病因因子である可能
性が報告されている（岸本、平野、Ａｎｎ、Ｒｅｖ、ｌ
５ｓｕｎｏ１．＋ ６＋ ｐ４８５．１９８８年参照）
。
ＩＬ−６と特異的に結合する細胞膜上のＩＬ−６レセプ
ターは、田賀らにより解析され、各細胞上の数、ＩＬ−
６との結合定数等が報告されている（Ｊ。
ターは、田賀らにより解析され、各細胞上の数、ＩＬ−
６との結合定数等が報告されている（Ｊ。
ＥｘｐｏＭｅｄ、、１９６．ｐ９６７．１９８７年参照
）。さらにヒトＩＬ−６レセプターのｃＤＮＡが山崎ら
により単離され、−次構造が報告されている（Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ、２４１，８２５゜１９８８年参照）、最近にな
り、ＩＬ−６レセプターの細胞外部分（可溶性レセプタ
ー）が、遺伝子工学的に作製され（特願平１−９７７４
号明細書参照）、各種免疫疾患の治療薬、診断薬として
期待されている。
）。さらにヒトＩＬ−６レセプターのｃＤＮＡが山崎ら
により単離され、−次構造が報告されている（Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ、２４１，８２５゜１９８８年参照）、最近にな
り、ＩＬ−６レセプターの細胞外部分（可溶性レセプタ
ー）が、遺伝子工学的に作製され（特願平１−９７７４
号明細書参照）、各種免疫疾患の治療薬、診断薬として
期待されている。
さらに本発明者は、ＩＬ−６のシグナル伝達に関与する
ｇｐｔ３ｏ蛋白質と呼称される蛋白質を細胞膜上に見出
している（特願平１−２００２３０号明細書参照）。即
ち、このｇｐ１３０蛋白質は、ＩＬ−６の存在下でＩＬ
−６レセプターと結合するが、Ｉｔ、−６の非存在下で
はＩＬ−６レセプターと結合せず、ＳＤＳ／ＰＡＧＥに
おいて１３０ｋ［ｌａの見かけの分子量を有する蛋白質
である。そしてＩＬ−６がＩＬ−６レセプターに結合後
、細胞内にその情報を伝達するためには、ＩＬ−６がＩ
Ｌ−６レセプターに結合しただけでは足りず、さらに細
胞膜上の蛋白質であるｇｐ１３０ｉ白質と会合しなけれ
ばならないこと、さらにＩＬ−６レセプターの細胞内領
域はＩＬ−６のシグナル伝達には関与しないことを明ら
かにした。
ｇｐｔ３ｏ蛋白質と呼称される蛋白質を細胞膜上に見出
している（特願平１−２００２３０号明細書参照）。即
ち、このｇｐ１３０蛋白質は、ＩＬ−６の存在下でＩＬ
−６レセプターと結合するが、Ｉｔ、−６の非存在下で
はＩＬ−６レセプターと結合せず、ＳＤＳ／ＰＡＧＥに
おいて１３０ｋ［ｌａの見かけの分子量を有する蛋白質
である。そしてＩＬ−６がＩＬ−６レセプターに結合後
、細胞内にその情報を伝達するためには、ＩＬ−６がＩ
Ｌ−６レセプターに結合しただけでは足りず、さらに細
胞膜上の蛋白質であるｇｐ１３０ｉ白質と会合しなけれ
ばならないこと、さらにＩＬ−６レセプターの細胞内領
域はＩＬ−６のシグナル伝達には関与しないことを明ら
かにした。
ＩＬ−６の生理的役割をさらに深く解析するためには、
細胞内への情報伝達の経路に関する知見が重要である。
細胞内への情報伝達の経路に関する知見が重要である。
そしてこのような知見は、ＩＬ−６作用を調節する物質
を治療薬として開発するためにも重要である。しかしな
がら、ｇｐ１３０蛋白質の生体内での存在量は極めて微
量であるので、大量の精製品を得るためには遺伝子工学
的手法を用いる必要がある。この様な遺伝子のグローニ
ングの為にはｇｐ１３０蛋白質を迅速に同定できる抗ｇ
ｐ１３０蛋白質抗体の開発が望まれる。また、ＩＬ−６
レセプターとｇｐ１３０蛋白質の会合を競合的に阻止す
るモノクローナル抗体が開発されれば、ＩＬ−６の生物
活性を抑制する治療薬としての応用が可能である。
を治療薬として開発するためにも重要である。しかしな
がら、ｇｐ１３０蛋白質の生体内での存在量は極めて微
量であるので、大量の精製品を得るためには遺伝子工学
的手法を用いる必要がある。この様な遺伝子のグローニ
ングの為にはｇｐ１３０蛋白質を迅速に同定できる抗ｇ
ｐ１３０蛋白質抗体の開発が望まれる。また、ＩＬ−６
レセプターとｇｐ１３０蛋白質の会合を競合的に阻止す
るモノクローナル抗体が開発されれば、ＩＬ−６の生物
活性を抑制する治療薬としての応用が可能である。
しかしながら、これまでにこのｇｐｔ３ｏ蛋白質を認識
するモノクローナル抗体は知られていない。
するモノクローナル抗体は知られていない。
従って、本発明はｇｐ１３０蛋白質に対する種々のタイ
プの抗体を提供しようとするものである。
プの抗体を提供しようとするものである。
上記の課題は、ヒトインターロイキン−６シグナル伝達
に関与する次の性質を有するｇｐ１３０蛋白質： （１）ＩＬ−６の存在下でＩＬ−６レセプターと結合す
るがＩＬ−６の非存在下ではＩＬ−６レセプターと結合
しない；及び （２）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動におい
て１３０ｋＤａの見かけの分子量を示す；と特異的に結
合し得る抗−ｇｐ１３０蛋白質抗体；該抗体を生産する
ハイブリドーマ；該ハイブリドーマの製造方法；並びに
該ハイブリドーマを用いる前記抗体の製造方法を提供す
ることにより解決される。
に関与する次の性質を有するｇｐ１３０蛋白質： （１）ＩＬ−６の存在下でＩＬ−６レセプターと結合す
るがＩＬ−６の非存在下ではＩＬ−６レセプターと結合
しない；及び （２）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動におい
て１３０ｋＤａの見かけの分子量を示す；と特異的に結
合し得る抗−ｇｐ１３０蛋白質抗体；該抗体を生産する
ハイブリドーマ；該ハイブリドーマの製造方法；並びに
該ハイブリドーマを用いる前記抗体の製造方法を提供す
ることにより解決される。
本発明の抗体は、ヒトＩＬ−６のシグナル伝達に関与す
るｇｐ１３０蛋白質を特異的に認識するものであり、こ
れにはモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体が含
まれる。モノクローナル抗体には、ヒトＩＬ−６レセプ
ターとｇｐ１３０蛋白質との結合を競合的に阻害するも
のと、これを競合的に阻害しないものとが含まれる。前
者の例としては、本発明のハイプリドーマへＭ６４によ
り産生されるＡＭ６４モノクローナル抗体が挙げられ、
後者の側としてはハイブリドーマＡＭ２７７により産生
されるＡｌ’１２７７モノクローナル抗体が挙げられる
。
るｇｐ１３０蛋白質を特異的に認識するものであり、こ
れにはモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体が含
まれる。モノクローナル抗体には、ヒトＩＬ−６レセプ
ターとｇｐ１３０蛋白質との結合を競合的に阻害するも
のと、これを競合的に阻害しないものとが含まれる。前
者の例としては、本発明のハイプリドーマへＭ６４によ
り産生されるＡＭ６４モノクローナル抗体が挙げられ、
後者の側としてはハイブリドーマＡＭ２７７により産生
されるＡｌ’１２７７モノクローナル抗体が挙げられる
。
本発明の抗体の製造のために用いられる免疫原としては
、ｇｐ１３０蛋白質を細胞表面に発現している動物細胞
を用いることができる。この様な細胞としてはヒトＩＬ
−６レセプター及びｇｐ１３０蛋白質の両者を産生ずる
ヒト由来細胞株、例えばヒトミエローマ細胞株Ｕ２６６
、又はｇｐ１３０蛋白質をコードするＤＮＡにより形質
転換された宿主細胞、例えばそのような動物細胞株が挙
げられ、その例としてｇｐ１３０蛋白質をコードするｃ
ＤＮＡを含有するプラスミドにより形質転換されたマウ
スＴ細胞が挙げられる。しかしながら、この様な細胞株
は、細胞表面に発現しているｇｐ１３０蛋白質の蓋が少
ない等のため効率的な免疫原とは言い難い。
、ｇｐ１３０蛋白質を細胞表面に発現している動物細胞
を用いることができる。この様な細胞としてはヒトＩＬ
−６レセプター及びｇｐ１３０蛋白質の両者を産生ずる
ヒト由来細胞株、例えばヒトミエローマ細胞株Ｕ２６６
、又はｇｐ１３０蛋白質をコードするＤＮＡにより形質
転換された宿主細胞、例えばそのような動物細胞株が挙
げられ、その例としてｇｐ１３０蛋白質をコードするｃ
ＤＮＡを含有するプラスミドにより形質転換されたマウ
スＴ細胞が挙げられる。しかしながら、この様な細胞株
は、細胞表面に発現しているｇｐ１３０蛋白質の蓋が少
ない等のため効率的な免疫原とは言い難い。
しかしながら、この様な免疫原を使用してであっても、
−旦ｇｐ１３０蛋白質に対する抗体を手にすれば、これ
を用いてより効率的な免疫原を調製し、これを用いてさ
らに多様な抗体を製造することができる。例えば、ｇｐ
１３０蛋白質に対する抗体を適当な固体担体に結合させ
、他方、ｇｐ１３０蛋白質を産生ずる細胞、例えば前記
の細胞を培養して細胞溶解し、この細胞溶解物を、前記
の抗−ｇｐ１３０蛋白質抗体を結合した固体担体と接触
せしめることにより細胞溶解物中のｇｐ１３０蛋白質を
担体上に吸着・濃縮して、これを免疫原として使用する
ことができる。固体担体については抗体を結合できるも
ので、免疫する動物の生育に重大な影響を及ぼさないも
のであれば特別の制限はない。例えば、本発明の詳細な
説明される様なセファロース等を基材とした固体担体は
、簡便な操作で抗体を結合でき、かつ、動物の生育に影
響を与えない、等、本発明における固体担体として好適
である。
−旦ｇｐ１３０蛋白質に対する抗体を手にすれば、これ
を用いてより効率的な免疫原を調製し、これを用いてさ
らに多様な抗体を製造することができる。例えば、ｇｐ
１３０蛋白質に対する抗体を適当な固体担体に結合させ
、他方、ｇｐ１３０蛋白質を産生ずる細胞、例えば前記
の細胞を培養して細胞溶解し、この細胞溶解物を、前記
の抗−ｇｐ１３０蛋白質抗体を結合した固体担体と接触
せしめることにより細胞溶解物中のｇｐ１３０蛋白質を
担体上に吸着・濃縮して、これを免疫原として使用する
ことができる。固体担体については抗体を結合できるも
ので、免疫する動物の生育に重大な影響を及ぼさないも
のであれば特別の制限はない。例えば、本発明の詳細な
説明される様なセファロース等を基材とした固体担体は
、簡便な操作で抗体を結合でき、かつ、動物の生育に影
響を与えない、等、本発明における固体担体として好適
である。
また、ｇｐ１３０蛋白質の一部分を構成するペプチドを
調製し、これを適当な高分子キャリヤー、例えばオバル
ブミンに結合して免疫原として使用することもできる。
調製し、これを適当な高分子キャリヤー、例えばオバル
ブミンに結合して免疫原として使用することもできる。
さらには、感染後にｇｐ１３０蛋白質が発現するように
されたワクチニアウィルスを使用することもできる。こ
れらの免疫原はいずれも、ポリクローナル抗体を製造す
るための免疫原として、及びハイブリドーマを調製する
ための免疫原として使用することができる。
されたワクチニアウィルスを使用することもできる。こ
れらの免疫原はいずれも、ポリクローナル抗体を製造す
るための免疫原として、及びハイブリドーマを調製する
ための免疫原として使用することができる。
ポリクローナル抗体の製造は、常法に従って、例えば上
記のいずれかの免疫原によりマウス、ウサギ、ヒツジ、
ヤギ等を免疫感作することによって行うことができる。
記のいずれかの免疫原によりマウス、ウサギ、ヒツジ、
ヤギ等を免疫感作することによって行うことができる。
ハイブリドーマの作製も常法に従って行うことができる
。例えば前記の免疫原のいずれかによりマウス等の哺乳
類を免疫し、この動物から肺臓細胞を得、これを樹立さ
れたミエローマ細胞と融合せしめる。次に、目的とする
反応性を有するモノクローナル抗体を産生ずるハイブリ
ドーマをクロニングする。
。例えば前記の免疫原のいずれかによりマウス等の哺乳
類を免疫し、この動物から肺臓細胞を得、これを樹立さ
れたミエローマ細胞と融合せしめる。次に、目的とする
反応性を有するモノクローナル抗体を産生ずるハイブリ
ドーマをクロニングする。
モノクローナル抗体を製造するには、前記のようにして
グローニングされたハイブリドーマを培養し、培養上清
からモノクローナル抗体を採取する。あるいは、前記ハ
イブリドーマを動物の腹腔内に接種し、腹水を得、これ
からモノクローナル抗体を単離することもできる。ハイ
ブリドーマ細胞上清中の抗体又は腹水中の抗体は、常法
に従って、例えば硫酸アンモニウム塩析により濃縮する
ことができ、さらにアフィニティークロマトグラフィー
、例えばｇｐ１３０蛋白質を固定化した担体を用いるア
フィニティークロマトグラフィーにより精製することが
できる。
グローニングされたハイブリドーマを培養し、培養上清
からモノクローナル抗体を採取する。あるいは、前記ハ
イブリドーマを動物の腹腔内に接種し、腹水を得、これ
からモノクローナル抗体を単離することもできる。ハイ
ブリドーマ細胞上清中の抗体又は腹水中の抗体は、常法
に従って、例えば硫酸アンモニウム塩析により濃縮する
ことができ、さらにアフィニティークロマトグラフィー
、例えばｇｐ１３０蛋白質を固定化した担体を用いるア
フィニティークロマトグラフィーにより精製することが
できる。
上記のポリクローナル抗体の製造方法、ハイフリドーマ
の作製方法、モノクローナル抗体の調製方法、抗体の回
収・精製方法は、いずれもそれ自体当業界によりよく知
られている方法により行うことができる。
の作製方法、モノクローナル抗体の調製方法、抗体の回
収・精製方法は、いずれもそれ自体当業界によりよく知
られている方法により行うことができる。
以下本発明をさらに詳細に説明するために実施例を示す
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
ｇｐ１３０蛋白質に対するマウスモノクローナル抗体を
作製する目的で、免疫原として、ヒトｇｐ１３０蛋白質
を以下の方法で抽出した。
作製する目的で、免疫原として、ヒトｇｐ１３０蛋白質
を以下の方法で抽出した。
ヒトミエローマ細胞株Ｕ２６６の細胞３Ｘ１０’個を１
ｎ ／ ｉｄｌのＩＬ−６と３７°Ｃで３０分間反応
させて、該細胞上に存在するＩＬ−６レセプターとｇｐ
１３０蛋白質とを会合せしめた後、こうして形成された
ｒｌＬ−６レセプター／ ｇｐ１３０蛋白質」複合体を
１１ｄの１％ジギトニン（和光純薬製）、１０ＩＩＩＭ
トリエタノールアミンバッフｙ −（ｐＨ７，４） 、
０．１５Ｍ ＮａＣ１゜１ ａ＋Ｍ ｐＡＰＭｓＦ（和
光純薬製）で可溶化した。一方、ブロムシアンで活性化
したセファロース４Ｂに、抗ＩＬ−６レセプター抗体で
あるＭＴ１Ｂ抗体（参考例；特願平１−１８６０１６号
明細書参照）を常法に従って結合させた。これと前述の
可溶化した細胞の上清を混合し、可溶化したＩＬ−６レ
セプターを樹脂上の？ｔ７１８抗体に、結合させること
により該ＩＬ−６を介してｇｐ１３０蛋白質を結合させ
た。非特異的結合物を前述の１％ジギトニン溶液で洗い
流したのち、この樹脂を免疫原として用いた。
ｎ ／ ｉｄｌのＩＬ−６と３７°Ｃで３０分間反応
させて、該細胞上に存在するＩＬ−６レセプターとｇｐ
１３０蛋白質とを会合せしめた後、こうして形成された
ｒｌＬ−６レセプター／ ｇｐ１３０蛋白質」複合体を
１１ｄの１％ジギトニン（和光純薬製）、１０ＩＩＩＭ
トリエタノールアミンバッフｙ −（ｐＨ７，４） 、
０．１５Ｍ ＮａＣ１゜１ ａ＋Ｍ ｐＡＰＭｓＦ（和
光純薬製）で可溶化した。一方、ブロムシアンで活性化
したセファロース４Ｂに、抗ＩＬ−６レセプター抗体で
あるＭＴ１Ｂ抗体（参考例；特願平１−１８６０１６号
明細書参照）を常法に従って結合させた。これと前述の
可溶化した細胞の上清を混合し、可溶化したＩＬ−６レ
セプターを樹脂上の？ｔ７１８抗体に、結合させること
により該ＩＬ−６を介してｇｐ１３０蛋白質を結合させ
た。非特異的結合物を前述の１％ジギトニン溶液で洗い
流したのち、この樹脂を免疫原として用いた。
免疫およびハイブリドーマの作製は以下の様に行った。
前述した免疫原を１週間に１回、計４回、ＢＡＬＢ／
Ｃマウスの腹空内に免疫した。次にマウスからの肺細胞
と、親株としてのミエローマ細胞株Ｐ３Ｕ１とを、ポリ
エチレングリコールを用いた通常の方法に従って融合さ
せた。
Ｃマウスの腹空内に免疫した。次にマウスからの肺細胞
と、親株としてのミエローマ細胞株Ｐ３Ｕ１とを、ポリ
エチレングリコールを用いた通常の方法に従って融合さ
せた。
スクリーニングは以下の様に行った。まず、バイプリド
ーマの上滑と０．０１ｄのプロティンＧセファロース（
ファルマシア社製）を混合し、上清中のイムノグロブリ
ンを樹脂に吸着させた。一方、３５３メチオニンで内部
標識したＵ２６６細胞ｌ細胞３Ｘ１０’■／ｄのＩＬ−
６を３７℃で３０分間反応させた後、前述のＭ７１Ｂ抗
体結合セファロース４Ｂで３ＳＳ標識ＩＬ−６レセプタ
ー／ ｇｐ１３０蛋白質複合体をアフィニティー精製し
た。これを前述のプロティンＧセファロースで通常の方
法で免疫沈降させ、ＳＤＳ／ＰＡＧＥとオートラジオグ
ラフィーで解析した。
ーマの上滑と０．０１ｄのプロティンＧセファロース（
ファルマシア社製）を混合し、上清中のイムノグロブリ
ンを樹脂に吸着させた。一方、３５３メチオニンで内部
標識したＵ２６６細胞ｌ細胞３Ｘ１０’■／ｄのＩＬ−
６を３７℃で３０分間反応させた後、前述のＭ７１Ｂ抗
体結合セファロース４Ｂで３ＳＳ標識ＩＬ−６レセプタ
ー／ ｇｐ１３０蛋白質複合体をアフィニティー精製し
た。これを前述のプロティンＧセファロースで通常の方
法で免疫沈降させ、ＳＤＳ／ＰＡＧＥとオートラジオグ
ラフィーで解析した。
この結果、ｇｐ１３０と特異的に結合する抗体を産生じ
ているハイブリドーマが１クローン単離された。
ているハイブリドーマが１クローン単離された。
これをＡＭ２７７と命名した。また、このハイブリドー
マによって産生されるモノクロナール抗体をＡＭ２７７
抗体と呼ぶこととする。
マによって産生されるモノクロナール抗体をＡＭ２７７
抗体と呼ぶこととする。
このＡＭ２７７抗体を用いてさらなるｇｐ１３０蛋白質
に対するモノクロナール抗体を次のように作製した。
に対するモノクロナール抗体を次のように作製した。
Ｕ２６６細胞３Ｘ１０’個を前述の１％ジギトニン溶液
で可溶化した。一方、ブロムシアンで活性化しタセファ
ロース４ＢにＡＭ２７７抗体を常法に従って結合させた
。これと前述の可溶化した細胞の超遠心上清を混合し、
可溶化したｇｐ１３０蛋白質を樹脂上のＡＭ２７７抗体
に結合させた。非特異的結合物を前述の１％ジギトニン
溶液で洗い流した。そして、この樹脂を免疫原として、
前述の八Ｍ２７７と同様にして、ハイブリドーマの作製
を行った。
で可溶化した。一方、ブロムシアンで活性化しタセファ
ロース４ＢにＡＭ２７７抗体を常法に従って結合させた
。これと前述の可溶化した細胞の超遠心上清を混合し、
可溶化したｇｐ１３０蛋白質を樹脂上のＡＭ２７７抗体
に結合させた。非特異的結合物を前述の１％ジギトニン
溶液で洗い流した。そして、この樹脂を免疫原として、
前述の八Ｍ２７７と同様にして、ハイブリドーマの作製
を行った。
スクリーニングは次のように行った。まず、ＡＭ２７７
の場合と同様にハイブリドーマの上滑中のイムノグロブ
リンをプロティンＧセファロースに吸着させた。一方、
３５３メチオニンで内部標識したＵ２６６細胞ｌ細胞３
Ｘ１０’ｔｒｇ／ｄｌのｒＬ−６を３７℃で３０分間反
応させた後、前述のＡＭ２７７抗体結合セファロース４
Ｂで、３５３標識ｇｐ１３０蛋白質を精製した。これを
前述のプロティンＧセファロースで通常の方法で免疫沈
降させ、ＳＤＳ／ＰＡＧＥとオートラジオグラフィーで
解析した。この結果、ｇｐ１３０蛋白質と特異的に結合
する抗体を産生じているバイプリドーマが１クローン単
離された。これをＡＭ６４と命名した。また、このハイ
ブリドーマによって産生されるモノクロナール抗体をＡ
Ｍ６４抗体と呼ぶこととする。これらのハイブリドーマ
ＡＭ６４及びＡＭ２７７は、工業技術院微生物工業技術
研究所にそれぞれ微工研菌寄第１１１９４号（ＦＥＲＭ
Ｐ−１１１９４）及び微工研菌寄第１１１９５号（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１１１９５）として寄託されている。
の場合と同様にハイブリドーマの上滑中のイムノグロブ
リンをプロティンＧセファロースに吸着させた。一方、
３５３メチオニンで内部標識したＵ２６６細胞ｌ細胞３
Ｘ１０’ｔｒｇ／ｄｌのｒＬ−６を３７℃で３０分間反
応させた後、前述のＡＭ２７７抗体結合セファロース４
Ｂで、３５３標識ｇｐ１３０蛋白質を精製した。これを
前述のプロティンＧセファロースで通常の方法で免疫沈
降させ、ＳＤＳ／ＰＡＧＥとオートラジオグラフィーで
解析した。この結果、ｇｐ１３０蛋白質と特異的に結合
する抗体を産生じているバイプリドーマが１クローン単
離された。これをＡＭ６４と命名した。また、このハイ
ブリドーマによって産生されるモノクロナール抗体をＡ
Ｍ６４抗体と呼ぶこととする。これらのハイブリドーマ
ＡＭ６４及びＡＭ２７７は、工業技術院微生物工業技術
研究所にそれぞれ微工研菌寄第１１１９４号（ＦＥＲＭ
Ｐ−１１１９４）及び微工研菌寄第１１１９５号（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１１１９５）として寄託されている。
ＡＭ６４抗体及びへ１１１２７７抗体がｇｐ１３０蛋白
質を特異的に認識して免疫沈降させることを確認するた
め、内部標識されたＵ２６６細胞をディタージェントで
可溶化後、ＡＭ６４抗体又は計２７７抗体で免疫沈降し
、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ、オートラジオグラフィーを行った
。
質を特異的に認識して免疫沈降させることを確認するた
め、内部標識されたＵ２６６細胞をディタージェントで
可溶化後、ＡＭ６４抗体又は計２７７抗体で免疫沈降し
、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ、オートラジオグラフィーを行った
。
その結果を第１図に示す。
この結果、Ａ１６４抗体及びＡｌ’＋２７７抗体がｇｐ
１３０蛋白質を特異的に認識することが確認された。
１３０蛋白質を特異的に認識することが確認された。
細胞膜上に表出している抗原を蛍光染色する方法を用い
て、ＡＭ６４抗体がｇｐ１３０蛋白質の細胞外部分を認
識するか否か確認した。
て、ＡＭ６４抗体がｇｐ１３０蛋白質の細胞外部分を認
識するか否か確認した。
前述のｕ２６６細胞と＾Ｍ６４抗体を混合し、細胞膜上
のｇｐ１３０蛋白質に結合したＡＭ６４抗体を蛍光（Ｆ
ＩＴＣ）標識された抗マウスイムノグロブリン抗体（Ｆ
ＩＴＣａｎｔｉ−ｍＩｇ）で蛍光染色した。
のｇｐ１３０蛋白質に結合したＡＭ６４抗体を蛍光（Ｆ
ＩＴＣ）標識された抗マウスイムノグロブリン抗体（Ｆ
ＩＴＣａｎｔｉ−ｍＩｇ）で蛍光染色した。
第２図は、ＡＩ’＋６４抗体が０２６６細胞に表現され
ているｇｐ１３０蛋白質の細胞外部分に結合することを
示す。即ち、第２図において、■はＵ２２６細胞にＡＭ
６４抗体を反応させた後、細胞膜上に結合したＡＭ６４
抗体を前述のＦＩＴＣａｎｔｉ−＋ｗ１ｇで蛍光染色し
た時の細胞の蛍光強度分布を示す。培地のみの対照を表
すＩと比較すると蛍光強度が強い方にシフトしており、
この結果、ＡＭ６４抗体がｇｐ１３０蛋白質の細胞外部
分を認識していることが確認された。
ているｇｐ１３０蛋白質の細胞外部分に結合することを
示す。即ち、第２図において、■はＵ２２６細胞にＡＭ
６４抗体を反応させた後、細胞膜上に結合したＡＭ６４
抗体を前述のＦＩＴＣａｎｔｉ−＋ｗ１ｇで蛍光染色し
た時の細胞の蛍光強度分布を示す。培地のみの対照を表
すＩと比較すると蛍光強度が強い方にシフトしており、
この結果、ＡＭ６４抗体がｇｐ１３０蛋白質の細胞外部
分を認識していることが確認された。
実施例２と同様の方法を用いて、へＭ６４抗体の認識部
位がｇｐ１３０蛋白質のルー６レセプターとの会合部分
であることを確認した。
位がｇｐ１３０蛋白質のルー６レセプターとの会合部分
であることを確認した。
即ち、Ｕ２６６細胞をＩＬ−６で刺激して、該細胞上の
ＩＬ−６レセプターとｇｐ１３０蛋白質とを会合させた
後、ＡＭ６４抗体をさらに混合し、前述のＦＩＴＣａｎ
ｔｉ−ＩＩｌｉｇで蛍光染色した。その時の細胞の蛍光
強度を第２図に■として示す。この■を■と比較すると
、ＡＭ６４抗体のｇｐ１３０蛋白質への結合がＩＬ−６
の刺激により、即ちＩＬ−６レセプターとｇｐ１３０蛋
白質との会合により阻害されることが確認できる。
ＩＬ−６レセプターとｇｐ１３０蛋白質とを会合させた
後、ＡＭ６４抗体をさらに混合し、前述のＦＩＴＣａｎ
ｔｉ−ＩＩｌｉｇで蛍光染色した。その時の細胞の蛍光
強度を第２図に■として示す。この■を■と比較すると
、ＡＭ６４抗体のｇｐ１３０蛋白質への結合がＩＬ−６
の刺激により、即ちＩＬ−６レセプターとｇｐ１３０蛋
白質との会合により阻害されることが確認できる。
次に、へＭ６４抗体がＩＬ−６により誘導されるＩＬ−
６レセプターとｇｐ１３０蛋白質との会合を阻害しうる
か否かを次の様に確認した。ＩｔＪで細胞表面標識した
Ｕ２６６細胞浮遊液にＡＭ６４抗体とＩＬ−６を同時に
加えることにより、ＩＬ−６の存在下でυ２６６細胞上
のｇｐ１３０蛋白質への結合についてＭＡ６４抗体と該
細胞上のＩＬ−６レセプターとを競争せしめた。
６レセプターとｇｐ１３０蛋白質との会合を阻害しうる
か否かを次の様に確認した。ＩｔＪで細胞表面標識した
Ｕ２６６細胞浮遊液にＡＭ６４抗体とＩＬ−６を同時に
加えることにより、ＩＬ−６の存在下でυ２６６細胞上
のｇｐ１３０蛋白質への結合についてＭＡ６４抗体と該
細胞上のＩＬ−６レセプターとを競争せしめた。
この［１２６６細胞を１％ジギトニン溶液で可溶化して
、その上清を実施例１と同様にＭＴ１８抗体で免疫沈降
させ、ＳＯ５／ＰＡＧＥで解析した。その結果を第３図
にレーン２として示す。同様の実験をＡＭ６４抗体の非
存在下で行った結果を第３図レーン１に示す。
、その上清を実施例１と同様にＭＴ１８抗体で免疫沈降
させ、ＳＯ５／ＰＡＧＥで解析した。その結果を第３図
にレーン２として示す。同様の実験をＡＭ６４抗体の非
存在下で行った結果を第３図レーン１に示す。
レーンｌにおいては１３０ｋＤａ及び８０ｋＤａの位置
の両方にバンドが検出され、このことはｇｐ１３０蛋白
質（分子量１３０ｋＤａ ）と会合したＩＬ−６レセプ
ター（分子量８０ｋＤａ） （いずれもＩｔＪにより標
識されている）力＜Ｍ７１Ｂ抗体により沈降したことを
示している。これに対して、レーン２においては１３０
ｋＤａの位置のバンドの濃さが顕著に減少しており、こ
のことはＩＬ−６レセプター（分子量８０ｋＤａ）はＭ
Ｔ１８抗体により沈降するが、ＡＭ６４抗体の存在によ
りｇｐ１３０蛋白質とＩＬ−６レセプターとの会合が阻
害されたことを意味する。
の両方にバンドが検出され、このことはｇｐ１３０蛋白
質（分子量１３０ｋＤａ ）と会合したＩＬ−６レセプ
ター（分子量８０ｋＤａ） （いずれもＩｔＪにより標
識されている）力＜Ｍ７１Ｂ抗体により沈降したことを
示している。これに対して、レーン２においては１３０
ｋＤａの位置のバンドの濃さが顕著に減少しており、こ
のことはＩＬ−６レセプター（分子量８０ｋＤａ）はＭ
Ｔ１８抗体により沈降するが、ＡＭ６４抗体の存在によ
りｇｐ１３０蛋白質とＩＬ−６レセプターとの会合が阻
害されたことを意味する。
同様の操作をＡＭ２７７抗体について行なった。その結
果は第３図にレーン３として示す。この結果、ＡＭ２７
７抗体はＩＬ−６レセプターと、ｇｐ１３０蛋白質との
会合を阻害しないことを示している。
果は第３図にレーン３として示す。この結果、ＡＭ２７
７抗体はＩＬ−６レセプターと、ｇｐ１３０蛋白質との
会合を阻害しないことを示している。
Ｓ、 Ｓｈｉｍｉｚｕ らの方法に従うＩＬ−６依存性
のヒトＴ細胞白血病株ＫＴ−３の増殖試験（Ｂｌｏｏｄ
、 ７２（５）ｐ１８２６．１９８８年）によって、Ａ
Ｍ６４抗体がＩＬ−６の機能を阻害するか否か確認した
。即ち、１×１０４個のＫＴ−３細胞をＩＬ−６（５０
ρｇ ／ ｄ ）存在下で、５×１０４細胞／−にて７
２時間培養した。この時ＡＭ６４抗体を４０ｎ／ｄの濃
度で添加した。培養の最後２４時間に３Ｈ−チミジン（
０，５μＣｉ）を添加し、培養後ＫＴ−３細胞に取り込
まれた放射能を測定した。
のヒトＴ細胞白血病株ＫＴ−３の増殖試験（Ｂｌｏｏｄ
、 ７２（５）ｐ１８２６．１９８８年）によって、Ａ
Ｍ６４抗体がＩＬ−６の機能を阻害するか否か確認した
。即ち、１×１０４個のＫＴ−３細胞をＩＬ−６（５０
ρｇ ／ ｄ ）存在下で、５×１０４細胞／−にて７
２時間培養した。この時ＡＭ６４抗体を４０ｎ／ｄの濃
度で添加した。培養の最後２４時間に３Ｈ−チミジン（
０，５μＣｉ）を添加し、培養後ＫＴ−３細胞に取り込
まれた放射能を測定した。
また、ＡＭ６４抗体にかえてへＭ２７７抗体を添加し、
同様にして増殖試験を行った。
同様にして増殖試験を行った。
これらの結果は、第４図に示す通りである。この結果、
へＭ２７７抗体がＩＬ−６によるＫＴ−３細胞の増殖を
阻害しないのに対し、ＡＭ６４抗体はその増殖を阻害す
ることが確認された。
へＭ２７７抗体がＩＬ−６によるＫＴ−３細胞の増殖を
阻害しないのに対し、ＡＭ６４抗体はその増殖を阻害す
ることが確認された。
更に、Ｔ、Ｈｉｒａｎｏらの方法に従う５ＫＷ６−ＣＬ
４細胞株のＩＬ−６依存性ＩｇＭ抗体産生増強を見る方
法（Ｐｒｏｃ、Ｎａ ｔｌ 、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ
、 ＵＳＡ、 ８２． ｐ５４９０．１９８５年）によ
って、ＡＭ６４抗体がＩＬ−６の機能を阻害するか否か
確認した。即ち、１×１０４個の５ＫＷ６〜ＣＬ４細胞
をＩＬ −６（２００ｐｇ／ ｄ ）存在下で、５Ｘ１
０’細胞／ｄにて７２時間培養した。この時、ＡＭ６４
抗体または＾ｈ２７７抗体を５■／ｄの濃度で培養液に
添加した。
４細胞株のＩＬ−６依存性ＩｇＭ抗体産生増強を見る方
法（Ｐｒｏｃ、Ｎａ ｔｌ 、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ
、 ＵＳＡ、 ８２． ｐ５４９０．１９８５年）によ
って、ＡＭ６４抗体がＩＬ−６の機能を阻害するか否か
確認した。即ち、１×１０４個の５ＫＷ６〜ＣＬ４細胞
をＩＬ −６（２００ｐｇ／ ｄ ）存在下で、５Ｘ１
０’細胞／ｄにて７２時間培養した。この時、ＡＭ６４
抗体または＾ｈ２７７抗体を５■／ｄの濃度で培養液に
添加した。
培養後、上清中に含まれるＩｇＭ抗体を酵素抗体法によ
って測定した。
って測定した。
結果は第５図に示す通りである。この結果、ＡＭ２７７
抗体がＩＬ−６による５ＫＷ６−ＣＬ４細胞株からのＩ
ｇＭ抗体産生を阻害しないのに対し、ＡＭ６４抗体はそ
の産生を阻害することが確認された。
抗体がＩＬ−６による５ＫＷ６−ＣＬ４細胞株からのＩ
ｇＭ抗体産生を阻害しないのに対し、ＡＭ６４抗体はそ
の産生を阻害することが確認された。
ヒトＩＬ−６レセプターに対するマウスモノクローナル
抗体を作製する目的で、免疫原として、ヒ）ＩＬ−６レ
セプターを膜面に発現しているマウスＴ細胞株を以下の
方法で作製した。すなわち、特願平１−９７７４号明細
書に記載されているｐＢＳＦ２Ｒ。
抗体を作製する目的で、免疫原として、ヒ）ＩＬ−６レ
セプターを膜面に発現しているマウスＴ細胞株を以下の
方法で作製した。すなわち、特願平１−９７７４号明細
書に記載されているｐＢＳＦ２Ｒ。
２３６及びｐＳＶ２ｎｅｏをマウスＴ細胞株ＣＴＬＬ−
２（ＡＴＣＣ。
２（ＡＴＣＣ。
ＴｌＢ２１４）に常法で導入し、Ｇ−４１８を用いる通
常の方法でスクリーニングをし、最終的にＩＬ−６レセ
プターを細胞あたり約３０，０００個発現している株を
樹立し、これをＣｒ３Ｃ２と名づけだ。
常の方法でスクリーニングをし、最終的にＩＬ−６レセ
プターを細胞あたり約３０，０００個発現している株を
樹立し、これをＣｒ３Ｃ２と名づけだ。
免疫は以下の様に行った。ＲＰＭ１１６４０を用いる通
常の方法で培養後、ＰＢＳバッファーで４回洗浄したＣ
ｒ３Ｃ２を、Ｃ５７ＢＬ６マウス１匹あたりｌＸｌ０’
細胞個、１週間に１回で計６回、腹腔内に免疫した。
常の方法で培養後、ＰＢＳバッファーで４回洗浄したＣ
ｒ３Ｃ２を、Ｃ５７ＢＬ６マウス１匹あたりｌＸｌ０’
細胞個、１週間に１回で計６回、腹腔内に免疫した。
前記免疫されたマウスからの肺細胞を、親株としてのミ
エローマ細胞系Ｐ３０１と、ポリエチレングリコールを
用いる通常の方法に従って融合せしめた。
エローマ細胞系Ｐ３０１と、ポリエチレングリコールを
用いる通常の方法に従って融合せしめた。
スクリーニングは以下の様に行った。ＩＬ−６レセプタ
ー陰性のヒトＴ細胞株ＪＵＲＫＡＴ（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ
８１６３）に、ｐＢｓＦ２Ｒ，２３６とｐＳＶ２ｎｅｏ
を常法で導入し、スクリーニングの結果、ＩＬ−６レセ
プターを細胞あたり約１００．０００個発現している株
を樹立し、これをＮＪＢＣ８と名づけだ。ＮＰ４０で可
溶化したＮＪＢＣ８を認識し、ＮＰ４０で可溶化したＪ
ｕｌ？ＫＡＴを認識しない抗体を産生じているハイブリ
ドーマが１クローン単離され、これをＭ７１Ｂと名づけ
た。また、このハイブリドーマによって産生されるモノ
クローナル抗体をＭＴ１８抗体と称する。前記のバイプ
リドーマＭＴ１Ｂは、工業技術院微生物工業技術研究所
に微工研菌寄第１０８４０号（ＦＥＲＭ Ｐ−１０８４
０）として寄託されている。
ー陰性のヒトＴ細胞株ＪＵＲＫＡＴ（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ
８１６３）に、ｐＢｓＦ２Ｒ，２３６とｐＳＶ２ｎｅｏ
を常法で導入し、スクリーニングの結果、ＩＬ−６レセ
プターを細胞あたり約１００．０００個発現している株
を樹立し、これをＮＪＢＣ８と名づけだ。ＮＰ４０で可
溶化したＮＪＢＣ８を認識し、ＮＰ４０で可溶化したＪ
ｕｌ？ＫＡＴを認識しない抗体を産生じているハイブリ
ドーマが１クローン単離され、これをＭ７１Ｂと名づけ
た。また、このハイブリドーマによって産生されるモノ
クローナル抗体をＭＴ１８抗体と称する。前記のバイプ
リドーマＭＴ１Ｂは、工業技術院微生物工業技術研究所
に微工研菌寄第１０８４０号（ＦＥＲＭ Ｐ−１０８４
０）として寄託されている。
本発明で提供されるｇｐ１３０蛋白質を特異的に認識す
るモノクローナル抗体は、診断薬、治療薬としての利用
が期待されるＩＬ−６のシグナル伝達に関与するｇｐ１
３０蛋白質を、大量に生産し、精製するために有益であ
る。
るモノクローナル抗体は、診断薬、治療薬としての利用
が期待されるＩＬ−６のシグナル伝達に関与するｇｐ１
３０蛋白質を、大量に生産し、精製するために有益であ
る。
また、本発明によって提供される抗体を用いることによ
り、これまでに知られていない種々の細胞が有するであ
ろうｇｐ１３ｏ蛋白質の諸性質を解析することが可能に
なる。このことは、個体発生、免疫機構の研究、さらに
はこれらの成果に基づく治療薬、診断薬等の開発等に大
きな意義をもつ。
り、これまでに知られていない種々の細胞が有するであ
ろうｇｐ１３ｏ蛋白質の諸性質を解析することが可能に
なる。このことは、個体発生、免疫機構の研究、さらに
はこれらの成果に基づく治療薬、診断薬等の開発等に大
きな意義をもつ。
第１図は、内部標識されたＵ２６６細胞をディタージェ
ントで可溶化後、へＭ６４抗体又はＡＭ２７７抗体で免
疫沈降し、ＳＯ５／ＰＡＧＥ及びオートラジオグラフィ
ーそれぞれを行った結果を示す。 第２図は、Ｕ２６６細胞膜上に結合したＡＭ６４抗体を
ＦＩＴＣ標識抗マウスイムノグロブリン抗体で蛍光染色
した時の蛍光強度分布を示す。図中、ＩはＡＭ６４抗体
を含まない培地のみの対照、■はＡＭ６４を反応させた
とき、及び■はＩＬ−６をあらかじめ反応さ甘さらにＡ
Ｍ６４抗体を反応させたときの蛍光強度分布をそれぞれ
示す。 第３図は、内部標識されたＵ２６６細胞を、ＩＬ−６で
刺激しくレーンｌ ） 、ＡＭ６４抗体存在下にＩＬ−
６で刺激しくレーン２）、またはへＭ２７７抗体存在下
にＩＬ−６で刺激しくレーン３）、その後細胞をジギト
ニンで可溶化し、ＭＴ１Ｂ抗体で免疫沈降し、ＳＯＳ／
ＰＡＧＥ及びオートラジオグラフィーを行った結果を示
す。 第４図は、ＩＬ−６によるＫＴ−３細胞の増殖に対する
ＡＭ６４抗体及びＡＭ２７７抗体の阻害効果を示す。 第５図は、ＩＬ−６による５ＫＷ６−ＣＬ４細胞からの
１ｇＭ産生に対するＡＭ６４抗体及びＡＭ２７７抗体の
抑制効果を示す。
ントで可溶化後、へＭ６４抗体又はＡＭ２７７抗体で免
疫沈降し、ＳＯ５／ＰＡＧＥ及びオートラジオグラフィ
ーそれぞれを行った結果を示す。 第２図は、Ｕ２６６細胞膜上に結合したＡＭ６４抗体を
ＦＩＴＣ標識抗マウスイムノグロブリン抗体で蛍光染色
した時の蛍光強度分布を示す。図中、ＩはＡＭ６４抗体
を含まない培地のみの対照、■はＡＭ６４を反応させた
とき、及び■はＩＬ−６をあらかじめ反応さ甘さらにＡ
Ｍ６４抗体を反応させたときの蛍光強度分布をそれぞれ
示す。 第３図は、内部標識されたＵ２６６細胞を、ＩＬ−６で
刺激しくレーンｌ ） 、ＡＭ６４抗体存在下にＩＬ−
６で刺激しくレーン２）、またはへＭ２７７抗体存在下
にＩＬ−６で刺激しくレーン３）、その後細胞をジギト
ニンで可溶化し、ＭＴ１Ｂ抗体で免疫沈降し、ＳＯＳ／
ＰＡＧＥ及びオートラジオグラフィーを行った結果を示
す。 第４図は、ＩＬ−６によるＫＴ−３細胞の増殖に対する
ＡＭ６４抗体及びＡＭ２７７抗体の阻害効果を示す。 第５図は、ＩＬ−６による５ＫＷ６−ＣＬ４細胞からの
１ｇＭ産生に対するＡＭ６４抗体及びＡＭ２７７抗体の
抑制効果を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ヒトインターロイキン−６のシグナル伝達に関与す
る次の性質を有するｇｐ１３０蛋白質：（１）ＩＬ−６
の存在下でＩＬ−６レセプターと結合するがＩＬ−６の
非存在下ではＩＬ−６レセプターと結合せず；そして （２）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動におい
て１３０ｋＤａの見かけの分子量を示す；と特異的に結
合し得る抗−ｇｐ１３０蛋白質抗体。 ２、モノクローナル抗体である請求項１に記載の抗体。 ３、ヒトインターロイキン−６のシグナル伝達に関与す
るｇｐ１３０蛋白質との結合においてヒトインターロイ
キン−６レセプターと競合する、請求項２に記載の抗体
。 ４、ＡＭ６４抗体である、請求項３に記載の抗体。 ５、ヒトインターロイキン−６のシグナル伝達に関与す
るｇｐ１３０蛋白質との結合においてヒトインターロイ
キン−６レセプターと競合しない、請求項２に記載の抗
体。 ６、ＡＭ２７７抗体である、請求項５に記載の抗体。 ７、ポリクローナル抗体である請求項１に記載の抗体。 ８、請求項２に記載のモノクローナル抗体を生産するハ
イブリドーマ。 ９、ヒトインターロイキン−６のシグナル伝達に関与す
るｇｐ１３０蛋白質抗原により哺乳類を感作し、該哺乳
類から免疫細胞を採取し、該免疫細胞をミエローマ細胞
株と融合させ、そして該融合株から該ｇｐ１３０蛋白質
を認識する株をグローニングすることを特徴とするハイ
ブリドーマの製造方法。 １０、ヒトインターロイキン−６のシグナル伝達に関与
するｇｐ１３０蛋白質抗原が、固体キャリアーに結合さ
れたｇｐ１３０蛋白質である、請求項９に記載の方法。 １１、請求項８に記載のハイブリドーマ、又は請求項９
若しくは１０に記載の方法により製造されたハイブリド
ーマを培養し、該培養物からヒトインターロイキン−６
のシグナル伝達に関与するｇｐ１３０蛋白質を認識する
モノクローナル抗体を採取することを特徴とする、抗−
ｇｐ１３０蛋白質抗体の製造方法。 １２、ヒトインターロイキン−６のシグナル伝達に関与
するｇｐ１３０蛋白質抗原により哺乳類動物を免疫感作
し、該動物から該ｇｐ１３０蛋白質を認識するポリクロ
ーナル抗体を採取することを特徴とする、抗−ｇｐ１３
０蛋白質ポリクローナル抗体の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015090A JP2898040B2 (ja) | 1990-01-26 | 1990-01-26 | ｇｐ１３０蛋白質に対する抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015090A JP2898040B2 (ja) | 1990-01-26 | 1990-01-26 | ｇｐ１３０蛋白質に対する抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03219894A true JPH03219894A (ja) | 1991-09-27 |
| JP2898040B2 JP2898040B2 (ja) | 1999-05-31 |
Family
ID=11879149
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2015090A Expired - Lifetime JP2898040B2 (ja) | 1990-01-26 | 1990-01-26 | ｇｐ１３０蛋白質に対する抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2898040B2 (ja) |
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| WO2005037315A1 (ja) | 2003-10-17 | 2005-04-28 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 中皮腫治療剤 |
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| WO2011149051A1 (ja) | 2010-05-28 | 2011-12-01 | 中外製薬株式会社 | 抗腫瘍t細胞応答増強剤 |
| WO2012067150A1 (ja) * | 2010-11-16 | 2012-05-24 | 三菱化学株式会社 | Interleukin-6 receptor subunit beta蛋白質による脳梗塞の検査方法 |
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| WO2019151418A1 (ja) | 2018-01-31 | 2019-08-08 | 元一 加藤 | Ｉｌ－６阻害剤を含有する喘息の治療剤 |
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