JPH0260596A - 新規物質ｂｑ１８０ｂ、その使用および製造 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の背景〕 技術分野 本発明は新規物質に、さらに詳しくは抗腫瘍性を有する
化合物ＢＱ１８０Ｂに関する。

先行技術 抗腫瘍物質に関してはすでに多数のものが医薬として実
用化されている。一般に化学物質の生理活性はその化学
構造に依存するところが大きいため、抗腫瘍性を有する
新規な化合物に対しては不断の希求があると言えよう。

〔発明の概要〕

要旨 本発明は上記の希求に応えるものである。

すなわち、本発明による新規物質ＢＱ１８０Ｂは次の一
般式（１）で示されるものである。

本発明は、また、この物質の使用に関する。

すなわち、本発明による抗腫瘍剤は、次式（１）で示さ
れる化合物ＢＱ１８０Ｂを有効成分とするものである。

本発明は、さらにまた、この物質の製造法に関する。

すなわち、本発明による次式（１）で示されるＢＱ１８
０Ｂの製造法は、ストレプトミセス属に属し、ＢＱ１８
０Ｂの生産能を有する菌株を適当な培地で好気的に培養
し、その培養物よりＢＱ１８０Ｂを得ることを特徴とす
るものである。

〔発明の詳細な説明〕

新規物質ＢＱ１８０Ｂ 化学構造 本発明による新規物質ＢＱ１８０Ｂは、前記の式（Ｉ）
で示される化学構造を有する。

これらの化学構造は、次のようにして決定されたもので
ある。

ＢＱ１８０Ｂのプロトン核磁気共鳴スペクトル（第３図
）および炭素１３核磁気共鳴スペクトル（第４図）から
推定される化学構造はβ−ルブロマイシン（β−ｒｕｂ
ｒｏＢｃｉｎ）　　（Ｉｌ、Ｂｒｏｃｋｍａｎｎ　ａｎ
ｄＡ、Ｚｅｅｃｋ：Ｃｈｅｍ、Ｂｅｒ、、１０３．１７
０９−１７２１３（１９７０））にきわめて類似してい
る。両者の物理化学的性質を比較したところ、ＢＱ１８
０ＢのＦＤマススペクトルから得られた分子量５５２が
β−ルブロマイシンより酸素原子１個分多いことと、Ｎ
ＭＲスペクトルにおいて新たな水酸基に結合したメチン
のシグナルが観測されることより、ＢＱ１８０Ｂはβ−
ルブロマイシンのヒドロキシ体と判明した。さらに、水
酸基の置換位置をＮＭＲデータの詳細な解析により決定
し、ＢＱ１８０Ｂの化学構造を前記の式（１）のように
決定した。

物理化学的性状 （１）外　観　　赤紫色粉末 （２）融点　２１８−２２３℃（２０２−２０８℃で黒
く変色） （３）溶解性　　ジメチルスルホキシド、クロロホルム
に可溶、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチ
ルに微溶、ヘキサン、水に不溶。

（４）Ｒｆ値（メルク社製「シリカゲル６０Ｆ２５４」
使用） クロロホルム−メタノール（２０：１）０、２９ トルエン−メタノール（１０：１） ０、０８ （５）ＦＤマススペクトル（ｍ／ｚ） ５５２（Ｍ） 第１図に示す。

２３０　（８２４）　、３１２　（４０３）　、３４８
（２Ｂ２）　、３６２　（２０８）　、５１２（１１８
）（メタノール中） （７）赤外吸収スペクトル（ＫＢｒディスク法）第２図
に示す。

（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル（５００メガヘル
ツ、重クロロホルム中）　第３図に示す。

（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル（１２５メガヘル
ツ、重ジメチルスルホキシド中）　第４図に示す。

ＢＱ１８０Ｂの製造 概要 化合物ＢＱ１８０Ｂは現在のところ微生物の培養によっ
てのみ得られているが、類縁化合物の合成化学的修飾に
よって製造することも、あるいは全合成化学的に製造す
ることもできよう。また、遺伝子工学的手法によること
もできよう。即ち、化合物ＢＱ１８０Ｂ産生遺伝子を適
当な微生物に組み込み、この様な形質転換微生物を培養
し、この培養物から得ることも可能であろう。

微生物の培養による場合の菌株としては、例えばストレ
プトミセス属に属するＢＱ１８０Ｂ生産能を有するもの
が使用される。具体的には、本発明者らの分離したスト
レプトミセス・フルビシニス８０１８０８株がＢＱ１８
０Ｂを生産することが本発明者らによって明らかにされ
ているが、その他の菌株については、抗生物質生産菌単
離の常法によって適当なものを自然界より分離すること
が可能である。また、ストレプトミセス・フルビシニス
８０１８０８株を含めてＢＱ１８０Ｂの生産菌を放射線
照射その他の変異処理に付して、ＢＱ１８０Ｂの生産能
を高める余地も残されている。遺伝子工学的手法もまた
可能であることは前記したところである。

８０１８０株 Ｂ　Ｑ　１．８０　Ｂ生産能を有するストレプトミセス
属の菌株として本発明者らの見出している８０１８０株
は、下記の内容のものである。

■）由来および寄託番号 ８０１８０株はタイ国で採取した土壌から分離されたも
のであり、昭和６３年７月４日に工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託されて〔微工研条寄第１９３４号）（
ＦＥＲＭ　　ＢＰ−１９３４）の番号を得ている。

２）菌学的性状 ８０１８０株の菌学的性状は、以下のとおりである。

（１）形態 ８０１８０株はグルコース・アスパラギン寒天培地での
生育は貧弱であるが、その他の培地では良好に生育する
。気菌糸は、グルコース・アスパラギン寒天培地、シュ
ークロース硝酸寒天培地上では貧弱、オートミール寒天
培地上では中程度ないしやや貧弱であるが、その他の培
地では総じてよく着生する。基土菌糸より生じた気菌糸
は、単純分岐をなして伸長するが、胞子は比較的形成さ
れにくく、胞子の連鎖は５〜１０個程度で、胞子鎖は直
鎖状、かぎ状が多いが、ループ状のものも見られる。ま
た、胞子の形は円筒形ないし卵形を呈し、大きさは０．
６〜０．８μｍＸＱ、９〜１．２μｍであり、その表面
は平滑である。

胞子嚢、鞭毛胞子、菌核などの特殊形態は認められない
。

（２）各種培地上の生育状態 ８０１８０株を各種培地にて２７℃、３週間培養した結
果は、第１表に示すとおりである。

（３）生理的性質 ８０１８０株の生理的性質は第２表に示すとおりである
。

（４）炭素源の利用性 ８０１８０株の炭素源の利用性（プリドハム・ゴツトリ
ーブ寒天培地上）は第３表に示すとおりである。

（５）ジアミノピメリン酸の分析 ＢＱ１８０にの細胞壁構成アミノ酸の一つであるジアミ
ノピメリン酸を分析した結果、ＬＬ−ジアミノピメリン
酸が検出された。

以上の菌学的性状から、８０１８０株はストレプトミセ
ス属に属すると判断され、以下のような特徴を有する。

（ｉ）胞子鎖は比較的形成されにくいが、主として直鎖
状、かぎ状、ループ状を呈し、胞子の表面は平滑である
。

（ｉｆ）気菌糸は、黄味白色〜黄茶色〜薄ピンク色〜明
るいオリーブ灰色であり、裏面の色は黄茶色〜黄味赤色
〜にぶ橙色〜薄橙色〜茶色などの色を示す。

（ｌｌｊ）ペプトン・イースト・鉄寒天培地およびトリ
プトン・イースト液体培地でメラニン様色素を生成する
が、チロシン寒天培地では色素を生成しない。

上記性状よりｌ５Ｐ（インターナショナル・ストレプト
ミセス・プロジェクト）の記載（Ｅ、Ｂ。

Ｓｈｉｒｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｄ、Ｇｏｔｔｌｌｅｂ：Ｉ
ｎｔ、Ｊ、５ｙｓｔ、Ｂａｃｔ、、１ｇ。

ｆ３９−１８９，２７９−３９２（１９６８）＋　１９
．３９１−５１２（１９０９）；　２２２８５−３９４
（１９７２））およびバーシーズ・マニュアル・オブ・
デターミナティブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’
ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｒｏｅｔｅｒｍ＋ｎａｔｉｖｃ　
ＢａｅｔｅｒｉＯ−１ｏｇｙ）第８版（１９７４）を参
考に近縁な既知菌種を検索すると、ストレプトミセス・
フルビシムス（ＳｔｒｅｐＬｏｍｙｃｅｓ　　ｒｕｌｖ
：ｓｓｉｍｕｓ　＞が最も類似している。

そこで、８０１８０株とストレプトミセス０フルビシム
スとを比較すると、直鎖状の胞子鎖と平滑な表面を有す
る胞子を形成する形態的特徴、ペプトン・イースト・鉄
寒天培地でメラニン様色素を生成する点、ならびに気菌
糸の色調、糖の資化性およびオートミール培地上で胞子
鎖が形成されにくい点などで、両者はよく一致する。相
違する点としては、８０１８０株が、フラクトースを資
化しない点が挙げられる。

以上のように８０１８０株は、若干の相違はあるものの
、基本的性状においてストレプトミセス・フルビシムス
とよく一致することから、ストレプトミセス・フルビシ
ムスと同定するのが妥当である。したがって、８０１８
０株をストレプトミセス０フルビシムス（Ｓｔｒｃｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ　　ｆｕｌｖｉｓｓｉｍ−第　　１ 表 第　　２ 表 第３表 ＋：利用する　　−二利用しない 培養／ＢＱ１８０Ｂの生産 化合物ＢＱ１８０Ｂは、ストレプトミセス属に属するＢ
Ｑ１８０Ｂ生産菌を適当な培地で好気的に培養し、その
培養物から目的物を採取することによって製造すること
ができる。

培地は、ＢＱ１８０Ｂ生産菌が利用しうる任意の栄養源
を含有するものでありうる。具体的には、例えば、炭素
源としてグルコース、シュークロース、マルトース、ス
ターチおよび浦脂類などが使用でき、窒素源として大豆
粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母エキスおよびコーンステイ
ープリカーなどの有機物ならびにアンモニウム塩または
硝酸塩、たとえば硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムお
よび塩化アンモニウムなどの無機物が利用できる。また
、必要に応じて、塩化ナトリウム、塩化カリウム、燐酸
塩、重金属塩など無機塩類を添加することができる。発
酵中の発泡を抑制するために、常法に従って適当な消泡
剤、例えばシリコーン油を添加することもできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
方法と同じく、好気的液体培養法が最も適している。培
養温度は２０〜３７℃が適当であるが、２５〜３０℃が
好ましい。この方法でＢＱｌｇＯＢの生産量は、振盪培
養、通気攪拌培養ともに培養５日間で最高に達する。

このようにしてＢＱｌｇＯＢの蓄積された培養物が得ら
れる。この培養物中では、ＢＱｌｇＯＢはその一部は培
養ン戸液中に存在するが、その大部分は菌体中に存在す
る。

このような培養物からＢＱｌｇＯＢを採取するには、合
目的的な任意の方法が利用可能である。

そのひとつの方法は抽出の原理に基づくものであって、
具体的には、培養ン戸液中のＢＱｌｇＯＢについてはこ
れを水不混和性のＢＱ１８０Ｂ用溶媒（前記ＢＱ１８０
Ｂの物理化学的性状の項参照）、例えばクロロホルムな
どで抽出する方法、あるいは菌体内のＢＱｌｇＯＢにつ
いては濾過、遠心分離などで得た菌体集体をメタノール
、エタノール、アセトンなどで処理して回収する方法な
どがある。

菌体を分離せずに培養物そのままを上記の抽出操作に付
すこともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出
の範鴫に入れることができる。

培養物からＢＱｌｇＯＢを採取する他のひとつの方法は
吸着の原理に基づくものであって、既に液状となってい
るＢＱ１８０Ｂ含有物、たとえば培養炉液あるいは上記
のようにして抽出操作を行うことによって得られる抽出
液を対象として、適当な吸着剤、たとえばシリカゲル、
活性炭、「ダイヤイオンＨＰ−２０Ｊ　　（三菱化成社
製）などを用いて目的のＢＱｌｇＯＢを吸着させ、その
後、適当な溶媒にて溶離させることによってＢＱｌｇＯ
Ｂを得ることかできる。このようにして得られたＢＱ１
８０Ｂ溶液を減圧濃縮乾固すれば、ＢＱ１８０Ｂ粗標品
が得られる。

このようにして得られるＢＱｌｇＯＢの粗標品をさらに
精製するためには、上記の抽出法および吸着法にゲル濾
過法、高速液体クロマトグラフィーなどを必要に応じて
組合せて必要回数行えばよい。たとえば、シリカゲルな
どの吸着剤、「セファデックスＬＨ−２０Ｊ　　（ファ
ルマシア社製）などのゲル濾過剤を用いたカラムクロマ
トグラフィｒＹＭＣバック」　（山村科学社製）などを
用いた高速液体クロマトグラフィーおよび向流分配法を
適宜組合せて実施することができる。具体的には、たと
えば、ＢＱ１８０Ｂ粗標品を「セファデックスＬＨ−２
ＯＪカラムに付し、クロロホルム−メタノール（１：　
１）混合液で活性画分を溶出させ、濃縮乾固するとＢＱ
ｌｇＯＢの純品が得られる。

ＢＱｌｇＯＢの用途 本発明による化合物ＢＱ１８０Ｂは、抗腫瘍活性を有す
るという点で有用である。

生物活性 ＢＱｌｇＯＢは腫瘍細胞に対して細胞増殖抑制活性を示
した。たとえばマウスＢ１６メラノーマ細胞を５×１０
４個／ｍｌとなるように１０％熱非働化仔牛血清を含む
ＲＰＭ１１６４０培地に浮遊させ、種々の濃度のＢＱｌ
ｇＯＢとともに３７℃で２日間培養した後の５０％増殖
阻害濃度（ＩＣ５ｏ値）は、６．４μｇ／ｒａｌであっ
た。

また、ＢＱｌｇＯＢは腫瘍細胞を接種したマウスに対し
て延命効果を示した。たとえば、マウスＢ１６メラノー
マ細胞８Ｘ１０”個を腹腔内に接種したＢＤＦ１マウス
の腹腔内にＢＱｌｇＯＢを１．５．９白目に３０１１１
ｇ／　Ｋｇずつ投与すると、対照群に対して１２７％の
延命が認められた。

上記のように、本発明のＢＱｌｇＯＢは抗腫瘍性を示す
ことが明らかにされた。したがって、本発明のＢＱｌｇ
ＯＢは抗腫瘍剤として使用することができる。

抗腫瘍剤 このように、本発明のＢＱｌｇＯＢは、動物の腫瘍、特
に悪性腫瘍、に対して抗腫瘍性を示すことが明らかにさ
れた。

したがって、本発明化合物は抗腫瘍剤もしくは腫瘍治療
剤として使用することができる。

抗腫瘍剤としての本発明化合物は合目的的な任意の投与
経路で、また採用投与経路によって決る剤型で、投与す
ることができる。薬剤としては、製薬上許容される担体
あるいは希釈剤で希釈された形態が普通である。

抗腫瘍剤として本発明化合物を実際に投与する場合には
、これらを注射用蒸留水または生理食塩水に溶解して注
射する方法が代表的なもののひとつとして挙げられる。

具体的には、動物の場合には腹腔内注射、皮下注射、静
脈または動脈への血管内注射および局所投与などの注射
による方法が、ヒトの場合は静脈または動脈への血管内
注射または注射による局所投与などの方法がある。

本発明化合物の投与量は、動物試験の結果および種々の
状況を勘案して、連続的または間欠的に投与したときに
総投与量が一定量を越えないように定められる。具体的
な投与量は、投与方法、患者または被処理動物の状況、
たとえば年齢、体重、性別、感受性、食餌、投与時間、
併用する薬剤、患者またはその病気の程度に応じて変化
することは言うまでもなく、また一定の条件のもとにお
ける適量と投与回数は、上記指針をちととして専門医の
適量決定試験によって決定されなければならない。具体
的には、成人１日あたり０．１〜１ｇ程度である。

実験例 種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解してｐＨ７，２に調整したものである。

グルコース 麦芽エキス 酵母エキス ｇ ０ｇ ｇ 上記培地１００１を５００ｍ１のイボ付三角フラスコへ
分注し、殺菌後、これにストレプトミセス・フルビシム
スＢＱ１８０株（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−１９３４）をスラ
ントより１白金耳摺種し、これを２７℃にて３日間振盪
培養したものを種母とした。

培養 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解して、ｐＨ７，０に調整したものである。

グルコース　　　　　　２５　ｇ 大豆粉　　　１５ｇ 乾燥酵母　　　　　２ｇ 炭酸カルシウム　　　　　４ｇ 上記培地を２５リツトルずつ５０リツトル容ジャーファ
ーメンタ−に分注殺菌したものへ、上記種母３００ｍ１
を添加し、２７℃にて５日間、２０Ｏｒｐｍ　、０．４
ＶＶＭの通気攪拌培養を行った。

ＢＱ１８０Ｂの採取 上記の条件で培養後、培養液（５０リツトル）を泪過し
、菌体を２５リツトルのアセトンで抽出し、抽出液を５
リツトルに濃縮後、等量のクロロホルム−メタノール（
１０：１）混液で抽出する。

この抽出液を、さきのアセトン抽出残渣をさらに２５リ
ツトルのクロロホルム−メタノール（１０：１）混液で
抽出したものと合わせ、１５リツトルの水で洗浄後、こ
れに２倍量のへキサンを添加する。生じた沈澱を２リツ
トルのクロロホルムに溶解し、不溶物を除いた後、シリ
カゲル（和光純薬製「ワコーゲル　Ｃ−２００ｊ）のカ
ラム（５ｃＩＩφＸ５０ｃｍ）に吸着させ、クロロホル
ム−エタノール（１００：１）で洗浄後、クロロホルム
−エタノール（５０：　１）で溶出する。活性フラクシ
ョンを濃縮乾固するとＢＱ１８０Ｂの粗粉末を得る。

この粗粉末を、再度シリカゲル・カラム（３ｃ＋＋＋φ
Ｘ２０ｃｍ）に吸着させ、クロロホルム−メタノール（
５０：１）で展開する。活性フラクションを濃縮乾固し
、１０Ｉｆｉｌのメタノールで４回洗浄する。残渣を少
量のクロロホルム−メタノール（１０：１）混液に溶解
し、濃縮乾固するとＢＱ１８０Ｂの純品が得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、メタノール中でのＢＱ１８０Ｂの紫外吸収ス
ペクトルを模写したものである。 第２図は、ＢＱ１８０ＢのＫＢｒディスク法による赤外
吸収スペクトルを模写したものである。 第３図は、ＢＱ１８０Ｂの重クロロホルム中における５
００．メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写
したものである。 第４図は、ＢＱ１８０Ｂの重ジメチルスルホキシド中に
おける１２５メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトル
を模写したものである。 出願人代理人　　佐　　藤　　−雄

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式（ I ）で示される化合物 ＢＱ１８０Ｂ。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ２、次式（ I ）で示される化合物 ＢＱ１８０Ｂを有効成分とする抗腫瘍剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ３、ストレプトミセス属に属し、 ＢＱ１８０Ｂの生産能を有する菌株を適当な培地で好気
   的に培養し、その培養物より化合物 ＢＱ１８０Ｂを得ることを特徴とする、次式（ I ）で
   示されるＢＱ１８０Ｂの製造法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）