JPH04300849A - 新規物質ｃｅ３３、その使用および製造 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】〔発明の背景〕 【産業上の利用分野】本発明は腫瘍細胞の多剤耐性克服
作用を有する新規物質ＣＥ３３（ＣＥ３３Ａ，Ｂ，Ｃお
よびＤ）、それを含む抗腫瘍剤およびその製造法に関す
る。 【０００２】 【従来の技術】抗腫瘍物質に関してはすでに多数のもの
が医薬として実用化されている。しかし、Ｐ−糖タンパ
クが過剰発現した多剤耐性腫瘍細胞には多くの制癌剤が
無効となることが知られており、癌化学療法の大きな障
害となっている。従来、この多剤耐性を克服する作用を
有する化合物として、例えばカルシウム拮抗剤であるベ
ラパミル（ｖｅｒａｐａｍｉｌ；Ｔ．Ｔｓｕｒｕｏ　ｅ
ｔ　ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．４１，１９６７−
１９７２，１９８１）が知られているが、血圧降下など
の副作用が問題となっている。 【０００３】〔発明の概要〕 【発明が解決しようとする課題】本発明は、毒性が少な
く、多剤耐性を克服する作用を有する新規化合物を提供
することを目的とするものである。 【０００４】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、土壌から
分離したストレプトミセス・エスピー２２３８−ＳＶＴ
４　株の培養物から、多剤耐性克服作用を有する新規物
質ＣＥ３３が生産されることを見出し、この知見をもと
に本発明を完成させた。すなわち、本発明による新規化
合物は次式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示されるＣＥ３３Ａ，Ｂ
，ＣおよびＤである。 【０００５】 【化５】 【０００６】 【化６】 【０００７】 【化７】 【０００８】 【化８】 本発明は、上記式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物Ｃ
Ｅ３３の塩基付加塩にも関する。本発明は、また、これ
らの化合物の使用に関する。すなわち本発明による抗腫
瘍剤は、上記式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物の少
なくとも一種を有効成分として含むものである。本発明
は、更にまた、これらの化合物の製造法に関する。すな
わち本発明による上記式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化
合物ＣＥ３３の製造法は、ストレプトミセス属に属する
ＣＥ３３生産菌を培養して上記式（Ｉ）〜（ＩＶ）に記
載の化合物ＣＥ３３の少なくとも一種を該菌に産生させ
、その培養物より、産生された化合物ＣＥ３３の少なく
とも一種を採取すること、を特徴とするものである。 【０００９】〔発明の具体的説明〕 新規物質ＣＥ３３ １）化学構造 本発明による新規物質ＣＥ３３は、前記したように式（
Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化学構造を有している。 ２）物理化学的性状 本発明による化合物は、下記のような物理化学的性状を
有する。 （１）外観 Ａ：黄色粉末、Ｂ：橙色粉末、Ｃ：橙色粉末、Ｄ：橙色
粉末 （２）融点 Ａ：２３６〜２３８℃、Ｂ：２５２〜２５４℃（分解）
、Ｃ：１７４〜１７６℃、Ｄ：２８６〜２８８℃（分解
）。 （３）比旋光度（２２℃） Ａ：＋９５°（ｃ０．１）、Ｂ：＋１４６°（ｃ０．１
）、Ｃ：＋５１４°（ｃ０．６４）、Ｄ：＋７３４°（
ｃ０．１７） （４）Ｒｆ値（メルク社製「シリカゲル６０Ｆ２５４　
」使用）クロロホルム−メタノール（１００：１）Ａ：
０．２１、Ｂ：０．２５、Ｃ：０．１９、Ｄ：０．１５
。 （５）高分解能マススペクトル（ｍ／ｚ）Ａ：３３７．
１０９７（Ｍ＋Ｈ）＋　（計算値３３７．１０７６Ｃ２
０Ｈ１７Ｏ５　） Ｂ：３３７．１１０５（Ｍ＋Ｈ）＋　（計算値３３７．
１０７６Ｃ２０Ｈ１７Ｏ５　） Ｃ：３３９．１２９３（Ｍ＋Ｈ）＋　（計算値３３９．
１２３３Ｃ２０Ｈ１９Ｏ５　） Ｄ：６８９．２４５１（Ｍ＋Ｈ）＋　（計算値６８９．
２３８７Ｃ４１Ｈ３７Ｏ１０） （６）溶解性 Ａ：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
、ベンゼンに可溶、メタノール、エタノールに微溶、ヘ
キサン、水に不溶。 Ｂ：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
、ベンゼンに可溶、メタノール、エタノールに微溶、ヘ
キサン、水に不溶。 Ｃ：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
、ベンゼンに可溶、メタノール、エタノールに微溶、ヘ
キサン、水に不溶。 Ｄ：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
、ベンゼンに可溶、メタノール、エタノールに微溶、ヘ
キサン、水に不溶。 （７）紫外吸収スペクトル　　λｍａｘ　ｎｍ（ε）Ａ
：２２４（２１，９００）、２６０（２４，４００）、
４１３（７，０００）、メタノール中。図１に示す。 Ｂ：２１３（２５，８００）、２６４（３４，１００）
、４５８（６，３００）、メタノール中。図２に示す。 Ｃ：２２４（２７，２００）、２５９（２４，２００）
、４５９（６，６００）、メタノール中。図３に示す。 Ｄ：２６０（４２，８００）、２９２（１３，１００）
、３４２（５，８００）、４７３（１１，５００）、テ
トラヒドロフラン中。図４に示す。 （８）赤外吸収スペクトル（ＫＢｒディスク法）Ａ：図
５に示す。Ｂ：図６に示す。Ｃ：図７に示す。 Ｄ：図８に示す。 （９）プロトン核磁気共鳴スペクトル（５００メガヘル
ツ、重クロロホルム中）Ａ：図９に示す。Ｂ：図１０に
示す。Ｃ：図１１に示す。Ｄ：図１２に示す。 （１０）炭素１３核磁気共鳴スペクトル（１２５メガヘ
ルツ、重クロロホルム中）　　Ａ：図１３に示す。Ｂ：
図１４に示す。Ｃ：図１５に示す。Ｄ：図１６に示す。 式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物は、ＯＨ基の位置
において塩基付加塩があり得る。本発明による化合物は
この塩基付加塩も包含するものである。塩基付加塩とし
ては、例えばアルカリ金属化合物（例えば水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウムなど）との塩、アルカリ土類金属
化合物（例えば水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム
など）との塩、アンモニウム塩、有機塩基（例えばトリ
エチルアミン、エタノールアミンなど）との塩をあげる
ことができる。塩基付加塩を医薬として使用する場合に
は、塩基は薬学上許容されるものでなければならないこ
とは言うまでもない。 【００１０】ＣＥ３３の製造 １）概要 化合物ＣＥ３３は現在のところ微生物の培養によっての
み得られているが、類縁化合物の合成化学的修飾によっ
て製造することも、あるいは全合成化学的に製造するこ
ともできよう。また、遺伝子工学的手法によることもで
きよう。すなわち、化合物ＣＥ３３の産生に関与する遺
伝子を適当な微生物に導入し、この様な形質転換微生物
を培養し、この培養物から得ることも可能であろう。微
生物の培養による場合の菌株としては、例えば、ストレ
プトミセス属に属するＣＥ３３生産能を有するものが使
用される。具体的には、本発明者らの分離したストレプ
トミセス・エスピー２２３８−ＳＶＴ４　株がＣＥ３３
を生産することが本発明者らによって明らかにされてい
るが、その他の菌株については、抗生物質生産菌単離の
常法によって適当なものを自然界より分離することが可
能である。 また、ストレプトミセス・エスピー２２３８−ＳＶＴ４
　株を含めてＣＥ３３の生産菌を放射線照射その他の変
異処理に付して、ＣＥ３３の生産能を高める余地も残さ
れている。 遺伝子工学的手法もまた可能であることは前記したとこ
ろである。得られる化合物ＣＥ３３は、常法によって前
記したような塩基付加塩の形にすることができる。 ２）２２３８−ＳＶＴ４　株 ＣＥ３３生成能を有するストレプトミセス属の菌株とし
て本発明者らの見出している２２３８−ＳＶＴ４　株は
、下記の内容のものである。 （１）由来および寄託番号 ２２３８−ＳＶＴ４　株は沖縄県竹富町鳩間島で採取し
た土壌から分離されたものであり、平成３年３月１９日
に工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて「微工
研条寄第３３２６号」（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−３３２６）
の番号を得ている。 （２）菌学的性状 ２２３８−ＳＶＴ４　株の菌学的性状は以下のとおりで
ある。 ＜放線菌　　２２３８−ＳＶＴ４　株（ＣＥ３３）の分
類学的位置＞本菌株の“特徴づけ”は“特許庁産業別審
査基準”記載の方法によった。本菌株の基生菌糸は分断
しない。気菌糸は主軸を形成しそれより単軸分枝し、分
枝先端に、１０〜５０個またはそれ以上からなる螺旋状
胞子鎖を形成する。胞子は非運動性で、円柱形、幅０．
７〜１．０，長さ１．０〜１．２μｍで両端に突起があ
る。胞子表面は未知の特殊構造を示し、透過型電子顕微
鏡で観察すると、フリル様のしわ状構造があり、走査型
電子顕微鏡で観察すると、ひだ状の縦じまが、５〜７本
走っている。 菌核、胞子のう、その他の特殊形態は観察されない。細
胞壁化学型はＩ型である。培養性状は表１に示す。集落
表面の菌叢色は灰色系列で裏面色は不鮮明色または明茶
色から暗茶色で、ＰＨ非感受性、拡散性色素はグリセリ
ン・アスパラギン寒天でのみわずかに淡橙色が認められ
た。生理的性状は、表２に示す。本菌株は、中温性で炭
素源の同化能は診断糖を全て利用する。本菌株の形態的
性状と細胞壁化学型から本菌株はストレプトミセス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏ−ｍｙｃｅｓ　）属に位置する。本菌株の
胞子表面構造は独特で既知のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
属の種について検索してもこのような胞子表面を持つ種
は見出されない。従って、本菌株をＳｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓｓｐ，２２３８−ＳＶＴ４株と呼称する。 表１　　　　培養性状 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　培
地　　　　　　　　　　　　集落表面の菌叢色　　　　
　　集落の裏面色　　　　　　拡散性色素　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　シュクロース・　　　　
　　　　　　気菌糸なし　　　　　　　　象牙色（２ｄ
ｂ）　　　　　　　　　　　なし硝酸塩寒天 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　グルコース
・アス　　　　　　灰色系列（５ｆｅ）　　　　　　　
淡黄色（２ｃａ　）　　　　　　　　なしパラギン寒天
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　から明茶色　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　（４１ｇ　）　　　　　　　
　　　　　　　　　　　グリセリン・アス　　　　　　
灰色系列（３ｆｅ）　　　　　　　明茶色（４１ｅ　）
　　　　　　淡橙色パラギン寒天　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　（４ｅａ　）　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　無機塩・スターチ寒
天　　灰色系列（５ｆｅ）　　　　　　　明茶味灰色（
２ｅ　〜３ｉｃ）　　なし　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　チロシン寒天　　　　　　　　　　灰色
系列（５ｆｅ）　　　　　　　灰味黄茶色　　　　　　
　　　　　　なし　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（３
ｌｇ　〜３ｎｉ　）　　　　　　　　　　　　　　栄養
寒天　　　　　　　　　　　　　　気菌糸なし　　　　
　　　　　　象牙色（２ｄｂ　）　　　　　　　　なし
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　イースト・
麦芽寒天　　　　灰色系列（ｂ〜ｇ）　　　　　　暗黄
橙色（３ｎｃ）　から　　　　なし　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　黄味茶色（３ｎｇ）　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　オートミール寒天　　　　
　　灰色系列（５ｆｅ）　　　　　　　茶味灰色（３ｉ
ｇ）　から　　　　　　なし　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　灰味黄茶色（３ｌｇ）　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　・（　　）内はカラー・ハーモ
ニー・マニュアル（コンテナー・コポレーション・　　
オブ・アメリカ、１９５０）の色標コード。 表２　　　　生理的性状 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　生
育温度範囲　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　２０〜４５℃　　　　　　　
　最適温度　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　２７〜３７℃　　　　メラニ
ン様色素 　　　　　　　　チロシン寒天　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　
　　　　　ペプトン・イースト鉄寒天　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　＋　　　　　　　　トリプト
ン・イースト・ブロス　　　　　　　　　　　　　　　
　＋　　　　スターチの加水分解　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　　
ゼラチンの液化　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　−　　　　脱脂粉乳
のペプトン化　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　＋　　　　脱脂粉乳の凝固　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　＋　　　　硝酸塩の還元　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　−　　　　炭素源の同化 　　　　　　Ｄ−グルコース　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　　
　　Ｌ−アラビノース　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　　　　Ｄ−キ
シロース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　＋　　　　　　Ｄ−フラクトー
ス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　＋　　　　　　シュクロース　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　＋　　　　　　Ｌ−ラムノース　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋
　　　　　　ラフィノース　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　
　　　ｉ−イノシトール　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　　　　Ｄ−
マンニット　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　＋　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　【００１１】培養／ＣＥ３３の生産 　　化合物ＣＥ３３は、ストレプトミセス属に属するＣ
Ｅ３３生産菌を適当な培地で好気的に培養して式（Ｉ）
〜（ＩＶ）で示される化合物ＣＥ３３の少なくとも一種
を該菌に産生させ、その培養物から、産生された化合物
ＣＥ３３の少なくとも一種を採取することによって（す
なわち、産生されたＣＥ３３が一種であればこの化合物
一種を、また産生されたＣＥ３３が複数種であればこれ
らの化合物のうちの少なくとも一種を採取することによ
って）、製造することができる。培地は、ＣＥ３３生産
菌が利用しうる任意の栄養源を含有するものでありうる
。 具体的には、例えば、炭素源としてグルコース、シュー
クロース、マルトース、スターチおよび油脂類などが使
用でき、窒素源として大豆粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母
エキスおよびコーンスティープリカーなどの有機物なら
びにアンモニウム塩または硝酸塩、たとえば硫酸アンモ
ニウム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの
無機物が利用できる。また、必要に応じて、塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム、燐酸塩、重金属塩など無機塩類を
添加することができる。発酵中の発泡を抑制するために
、常法に従って適当な消泡剤、例えばシリコーン油を添
加することもできる。培養方法としては、一般に行われ
ている抗生物質の生産方法と同じく、好気的液体培養法
が最も適している。培養温度は２０〜３７℃が適当であ
るが、２５〜３０℃が好ましい。この方法でＣＥ３３の
生産量は、振盪培養、通気攪拌培養ともに培養３日間で
最高に達する。このようにしてＣＥ３３の蓄積された培
養物が得られる。培養物中では、ＣＥ３３はその一部は
培養濾液中に存在するが、その大部分は菌体中に存在す
る。このような培養物からＣＥ３３を採取するには、合
目的的な任意の方法が利用可能である。そのひとつの方
法は抽出の原理に基くものであって、具体的には、培養
濾液中のＣＥ３３についてはこれを水不混和性のＣＥ３
３用溶媒（前記ＣＥ３３の物理化学的性状の項参照）例
えば酢酸エチルなどで抽出する方法、あるいは菌体内の
ＣＥ３３については濾過、遠心分離などで得た菌体集体
をメタノール、エタノール、アセトンなどで処理して回
収する方法などがある。菌体を分離せずに培養物そのま
まを上記の抽出操作に付すこともできる。適当な溶媒を
用いた向流分配法も抽出の範疇に入れることができる。 培養物からＣＥ３３を採取する他のひとつの方法は吸着
の原理に基づくものであって、既に液状となっているＣ
Ｅ３３含有物、たとえば培養濾液あるいは上記のように
して抽出操作を行うことによって得られる抽出液を対象
として、適当な吸着剤、たとえばシリカゲル、活性炭、
「ダイヤイオンＨＰ−２０」（三菱化成社製）などを用
いて目的のＣＥ３３を吸着させ、その後、適当な溶媒に
て溶離させることによってＣＥ３３を得ることができる
。ＣＥ３３の各化合物Ａ，Ｂ，ＣおよびＤは、各種溶媒
に対する溶解性の違いあるいは吸着剤に対する吸着性の
違いなどによってそれぞれに分離することができる。こ
の具体的な一例が後記実験例に示されている。このよう
して得られたＣＥ３３溶液を減圧濃縮乾固すれば、ＣＥ
３３粗標品がえられる。このようにして得られるＣＥ３
３の粗標品をさらに精製するためには、上記の抽出法お
よび吸着法にゲル濾過法、高速液体クロマトグラフィー
などを必要に応じて組合せて必要回数行えばよい。たと
えば、シリカゲルなどの吸着剤、「セファデックスＬＨ
−２０」（ファルマシア社製）などのゲル濾過剤を用い
たカラムクロマトグラフィー、「ＹＭＣパック」（山村
科学社製）などを用いた高速液体クロマトグラフィーお
よび向流分配法を適宜組合せて実施することができる。 具体的には、たとえば、ＣＥ３３粗標品を「セファデッ
クスＬＨ−２０」カラムに付し、クロロホルム−メタノ
ール（１：１）混合液で活性画分を溶出させ、濃縮乾固
するとＣＥ３３の純品が得られる。 【００１２】ＣＥ３３の用途 本発明による化合物ＣＥ３３は、腫瘍細胞の多剤耐性克
服活性を有するという点で有用である。 （１）生物活性 ＣＥ３３Ａ〜Ｄは多剤耐性腫瘍細胞に対して耐性克服作
用を示した。たとえばコルヒチン耐性ヒト扁平上皮癌Ｋ
Ｂ細胞１ｘ１０５　個／ｍｌを、１０％熱非働化牛胎児
血清および０．１％バクトペプトンを含むイーグルＭＥ
Ｍ培地中、種々の濃度のＣＥ３３Ａ〜Ｄ単独および１．
５μｇ／ｍｌのコルヒチン共存下で３７℃、２４時間培
養した後のＩＣ５０値は、表３に示される通りであった
。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　表　　３　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＩＣ５０（μ
ｇ／ｍｌ）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　コルヒチン（１．５μｇ　／ｍｌ）　　　　　
コルヒチン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　共存下　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　非共存下　　　　　　　　　　　　　
　　　ＣＥ３３Ａ　　　　　　　　　　　　　　０．９
　　　　　　　　　　　　　　　　８．５　　　　　　
　　　　　　　　　　ＣＥ３３Ｂ　　　　　　　　　　
　　１０．１　　　　　　　　　　　　　　１６．０　
　　　　　　　　　　　　　　　ＣＥ３３Ｃ　　　　　
　　　　　　　１０．０　　　　　　　　　　　　＞５
０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＣＥ３３
Ｄ　　　　　　　　　　　　１０．１　　　　　　　　
　　　　＞５０　　　　　　　　　　　　　　　　　　 上記のように、本発明によるＣＥ３３は腫瘍細胞の多剤
耐性克服作用を示すことが明らかにされた。したがって
、本発明によるＣＥ３３は抗腫瘍剤として使用すること
ができ、必要があれば既存の制癌剤と併用して抗腫瘍剤
として使用することもできる。 （２）抗腫瘍剤 このように、本発明による化合物ＣＥ３３は、動物の腫
瘍、特に多剤耐性腫瘍に対して耐性克服作用を示すこと
が明らかにされた。したがって、本発明化合物は抗腫瘍
剤として使用することができる。抗腫瘍剤としての本発
明化合物は合目的的な任意の投与経路で、また採用投与
経路によって決る剤型で投与することができる。薬剤と
しては、製薬上許容される担体あるいは希釈剤で希釈さ
れた形態が普通である。抗腫瘍剤として本発明化合物を
実際に投与する場合には、これらを注射用蒸留水または
生理食塩水に溶解して注射する方法が代表的なもののひ
とつとして挙げられる。具体的には、腹腔内注射、皮下
注射、静脈または動脈への血管内注射および注射による
局所投与などの方法がある。本発明化合物の投与量は、
動物試験の結果および種々の状況を勘案して、連続的ま
たは間欠的に投与したときに総投与量が一定量を越えな
いように定められる。具体的な投与量は、投与方法、患
者または被処理動物の状況、たとえば年齢、体重、性別
、感受性、食餌、投与時間、併用する薬剤、患者または
その病気の程度に応じて変化することは言うまでもなく
、また一定の条件のもとにおける適量と投与回数は、上
記指針をもととして専門医の適量決定試験によって決定
されなければならない。具体的には、成人１日あたり０
．１〜１０ｇ程度である。 【００１３】 【発明の効果】本発明による新規化合物ＣＥ３３は、優
れた抗腫瘍作用、特に、多剤耐性腫瘍に対する耐性克服
作用を有している。本発明化合物がこのような生理的作
用を有しているという特性は当業者にとって思いがけな
かったことと解される。 【００１４】〔実験例〕 【実施例】以下の実験例は、本発明を更に詳しく説明す
るためのものであり、これによって本発明は限定される
ものではない。 １）培養 使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水に
溶解して、ｐＨ７．０に調整したものである。 スターチ　　　　　　　　　　２５ｇ 大豆粉　　　　　　　　　　　　１５ｇ乾燥酵母　　　
　　　　　　　　　２ｇ炭酸カルシウム　　　　　　４
ｇ 上記培地を１００ｍｌずつ５００ｍｌ容イボ付三角フラ
スコに分注殺菌したものへ、ストレプトミセス・エスピ
ー２２３８−ＳＶＴ４　株を接種し、２７℃にて３日間
、２００ｒｐｍ　の回転培養を行った。 ２）ＣＥ３３の採取 上記の条件で培養後、培養液（５リットル）を遠心分離
し、菌体を１リットルのアセトンで抽出する。抽出液を
濃縮後、２００ｍｌの酢酸エチルで３回抽出し、濃縮す
る。これをシリカゲル（和光純薬社製「ワコーゲルＣ２
００」）カラム（４ｃｍφ×２０ｃｍ）に吸着させ、ク
ロロホルム−メタノール（１００：１）で溶出する。活
性フラクションを濃縮し、調製用シリカゲルＴＬＣ（メ
ルク社製「シリカゲル６０Ｆ２５４　」０．５ｍｍ厚）
に供し、クロロホルム−メタノール（２００：１）で展
開する。３本の橙色のバンドをかきとり、それぞれ展開
溶媒で溶出する。Ｒｆ値の低い２本のバンドはそれぞれ
セファデックスＬＨ−２０カラム（２ｃｍφ×５０ｃｍ
）に付し、クロロホルム−メタノール（１：１）で溶出
し、濃縮乾固することによりＣＥ３３Ｃ（１００ｍｇ）
、ＣＥ３３Ｄ（２ｍｇ）の純品を得た。Ｒｆ値の最も高
いバンドは再度調製用シリカゲルＴＬＣに供し、ヘキサ
ン−クロロホルム−トリエチルアミン（６：３：１）で
展開する。黄色と橙色のバンドをかきとり、それぞれク
ロロホルム−メタノール（１００：１）で溶出する。こ
れをそれぞれセファデックスＬＨ−２０カラム（２ｃｍ
φ×５０ｃｍ）に付し、クロロホルム−メタノール（１
：１）で溶出し、濃縮乾固することによりＣＥ３３Ａ（
１ｍｇ）、ＣＥ３３Ｂ（３ｍｇ）の純品を得た。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＣＥ３３Ａのメタノール中での紫外吸収スペク
トルを模写したものである。

【図２】ＣＥ３３Ｂのメタノール中での紫外吸収スペク
トルを模写したものである。

【図３】ＣＥ３３Ｃのメタノール中での紫外吸収スペク
トルを模写したものである。

【図４】ＣＥ３３Ｄのテトラヒドロフラン中での紫外吸
収スペクトルを模写したものである。

【図５】ＣＥ３３ＡのＫＢｒディスク法による赤外吸収
スペクトルを模写したものである。

【図６】ＣＥ３３ＢのＫＢｒディスク法による赤外吸収
スペクトルを模写したものである。

【図７】ＣＥ３３ＣのＫＢｒディスク法による赤外吸収
スペクトルを模写したものである。

【図８】ＣＥ３３ＤのＫＢｒディスク法による赤外吸収
スペクトルを模写したものである。

【図９】ＣＥ３３Ａの重クロロホルム中における５００
メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写したも
のである。

【図１０】ＣＥ３３Ｂの重クロロホルム中における５０
０メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写した
ものである。

【図１１】ＣＥ３３Ｃの重クロロホルム中における５０
０メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写した
ものである。

【図１２】ＣＥ３３Ｄの重クロロホルム中における５０
０メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写した
ものである。

【図１３】ＣＥ３３Ａの重クロロホルム中における１２
５メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写した
ものである。

【図１４】ＣＥ３３Ｂの重クロロホルム中における１２
５メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写した
ものである。

【図１５】ＣＥ３３Ｃの重クロロホルム中における１２
５メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写した
ものである。

【図１６】ＣＥ３３Ｄの重クロロホルム中における１２
５メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写した
ものである。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】次式（Ｉ）で示される化合物ＣＥ３３Ａま
   たはその塩基付加塩。 【化１】
2. 【請求項２】次式（ＩＩ）で示される化合物ＣＥ３３Ｂ
   またはその塩基付加塩。 【化２】
3. 【請求項３】次式（ＩＩＩ　）で示される化合物ＣＥ３
   ３Ｃまたはその塩基付加塩。 【化３】
4. 【請求項４】次式（ＩＶ）で示される化合物ＣＥ３３Ｄ
   またはその塩基付加塩。 【化４】
5. 【請求項５】請求項１〜４に記載の化合物の少なくとも
   一種を有効成分として含む抗腫瘍剤。
6. 【請求項６】ストレプトミセス属に属するＣＥ３３生産
   菌を培養して請求項１〜４に記載の化合物ＣＥ３３の少
   なくとも一種を該菌に産生させ、その培養物より、産生
   された化合物ＣＥ３３の少なくとも一種を採取すること
   を特徴とする化合物ＣＥ３３の製造法。
7. 【請求項７】ストレプトミセス属に属するＣＥ３３生産
   菌がストレプトミセス・エスピー２２３８−ＳＶＴ４　
   株（微工研条寄第３３２６号、ＦＥＲＭ　　ＢＰ−３３
   ２６）である請求項６に記載の製造法。