JPH0262559B2 - - Google Patents

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請求の範囲 １ 構造式： Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Tyr−NH₂ 又は Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Phe−NH₂ で示されるペプチツドまたはそれらの薬学的に容
認できる塩。 ２ 構造式： Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Tyr−NH₂ 又は Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Phe−NH₂ で示されるペプチツド又はそれらの薬学的に容認
しうる塩１種以上を有効成分として有効量で含有
することを特徴とする、鎮けい剤。 明細書 西ドイツ特許公開（DT−OS）第2936099号明
細書から、西ドイツ特許公開（DT−OS）第
2921216号明細書に記載のペプチツドに比べてよ
り強力なアヘン様作用を有し、（例えばラツト血
漿中の）プロテイン分解酵素に対して安定性のよ
り高い、殊にアヘン活性の薬理活性ペプチツドが
公知である。このDT−OS 2936099のペプチツド
は次の基本構造を有している。 Ｌ−Tyr¹−X²−Ｌ−Phe³−Ｌ−Pro⁴…… ［式中、Ｌ−TyrはＬ−チロシン、ＸはＤ−アミ
ノ酸、Ｌ−PheはＬ−フエニルアラニン、そして
Ｌ−ProはＬ−プロリンを意味する］。そこには、
既に、４・アミノ酸はDT−OS 2936099によると
Ｌ−型で存在していることが記載されており、Ｄ
−型には言及していない。そして、このペプチツ
ドは、一定の、殊にアヘン様の最高作用強度しか
有しないことが判つた（14頁の表１参照）。 DT−OS 2936099と酷似した、DT−OS
3034897は、次記基本構造 Ｌ−Tyr−Ａ−Ｌ−Phe−Ｂ−…… ［式中、Ｌ−TyrはＬ−チロシン、ＡはＤ−アミ
ノ酸、Ｌ−PheはＬ−フエニルアラニン、そして
Ｂは中性のＬ−アミノ酸残基（例えばグリシン）
を意味する］で示される薬理活性ペプチツドを説
明している。ここにも、Ｌ−型の４・アミノ酸残
基が存在するべきことが記されている。 なお、ここに欧州特許（EP）出願No.
81305519.1号（公開番号0053029）のペプチツド
は本質的に上記DT−OS 2921216のものと同じで
ある旨が注記されている。このEP出願No.
81305519.1では、なるほど、そのペプチツドの４
アミノ酸残基の位置にＤ−アミノ酸（Ｄ−Pro）
を有しているが、その２の位置のＤ−アラニン残
基をその４の位置のＤ−プロリン残基と組合せる
ことにより、特に強いアヘン様作用が得られるこ
とは確認されなかつた。このEP出願No.
81305519.1のペプチツドは血中で極めて急速に分
解され、生体中では極めて短時間しか持続しない
薬理作用しか示さない、という欠点を有している
（その分解は２の位置にＤ−アラニン残基を導入
することにより阻げられる）。この点は、殊にそ
の正確なデータをDT−OS 2921216とDT−OS
2936099に見ることができる。 本発明の課題は、ペプチツド分解酵素に対し高
い酵素安定性を有し且つまた／或は、殊にアヘン
様に作用する強力な薬理作用を有し、アヘン様に
作用する新規薬理活性ペプチツドを創製するに存
する。 この課題は、本発明により、ペプチツドが次記
構造を有することにより解決される。 Ｌ−Tyr−Ｘ−Ｌ−Phe−Ｘ−Ａ−Ｔ その際、Ｌ−TyrはＮ−末端Ｌ−チロシンを、
ＸはＤ−構造のアラニンを、Ｌ−PheはＬ−フエ
ニルアラニンを意味する。また、Ａはチロシン又
はフエニルアラニンである。ＴはNH₂である。
そして、それらペプチツドは薬学的に認容できる
塩であつてもよい。 本発明のペプチツドは技術水準に説明されたペ
プチツドと異なり強力なアヘン様作用を有する。
そして、或はそうでなくてもペプチツド分解酵素
に対して安定性が高い（実施例参照）。 この発明の別の構成によると、それらペプチツ
ドはそのアミノ酸残基Ｘがアミノ酸Ｄ−アラニン
により置換されているか又はそのものであり、ま
たＡはアミノ酸残基、チロシン又はフエニルアラ
ニンであることを特徴としている。 この発明のペプチツドの特別の性質は、恐らく
全面的に又は部分的にそれらＤ−アミノ酸残基の
特別の配置に基づくものである。殊に（チロシン
から見て）第２の位置及び第４の位置のＤ−アミ
ノ酸残基によつている。そしてそれらのものは高
い酵素安定性及び高いアヘン様作用の原因となつ
ている（実施例参照）。 この発明のペプチツドは中枢神経系に強い作用
を示す。それは、殊にカタレプチツク
（kataleptische）な作用の様な強いアヘン様（鎮
痛）作用でありうる。更に神経抑制薬的とも名付
けることのできる作用も観察できる。 この発明のペプチツドは心臓脈管系に対する作
用も有している。それは特に血圧降下作用であり
うる。 この発明のペプチツドは各種の剤型で投与でき
る（例えば錠剤、又は溶液として）；投与の仕方
は経口的、非経口的（例えば静脈、筋肉注射等）、
経皮的、経鼻腔、腟坐剤又は肛門座剤でありう
る。それら各種投与形態には吸収を助ける助剤を
含んでいることができる。 薬物製剤の活性成分の用量は投与の各種の仕方
により著しく相違する。治療効果例えば鎮痛効果
を達成するためには、普通体重１Kg当たり0.001
ないし100mgなる有効物質のほ乳動物の体内に入
れられなければならない用量範囲が記載されう
る。 本発明の特に有利な構成によると、本発明のペ
プチツドは次記の式を有している： Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Tyr−NH₂ Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Phe−NH₂ 実施例 先ず、本発明による２つのペプチツドの合成を
説明し、次いでそれらペプチツドの薬理効果を述
べる。 本発明のペプチツドの合成 ２つのペプチツド Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Tyr−NH₂ Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Pye−NH₂ の合成をホツプゼイラース物理化学雑誌361、
1835−1839（1980）のロツトスパイヒその他によ
り、またDT−OS 2936099に説明されている様に
実施した。その詳細は合成工程で述べる。 個々のアミノ酸構成分子若しくはジペプチド
は、スイス国、ブーベンドルフのバツフエムAG
社、又はスイス国ブツクスのフルカ社製のもので
ある。 第１工程 ａ Ｚ−Ｄ−Alaの混合無水物の生成 335mgのＺ−Ｄ−Ala（1.5mmol）（Ｚはベンゾ
イルカルボニル保護基を意味する）を15mlのジメ
チルホルムアミド（DMF）中でＮ−メチルモル
ホリンを加えて溶解し、180μｇ（1.4mmol）のク
ロル蟻酸イソブチルエステルと−15℃で、15分間
反応させる。 ｂ アミノ成分の調製 195mg（1.0mmol）のチロシンメチルエステル
又は178mgのフエニルアラニンメチルエステルを、
20mlのDMF中で110μ（1.0mmol）のＮ−メチ
ルモルホリンを加えて、−15℃で溶解する。アミ
ノ成分を調製した後、これを1aに加え、12時間
上記温度に保つ。 この後処理に先んじて、50％過剰の混合無水物
を分解する：即ち０℃で反応生成物のPHを
KHCO₃の飽和水溶液でPH８に調節し、30分０℃
で攪拌する。 次いで、このジペプチドを50−100mlの酢酸エ
チルで抽出しその酢酸エチル／ペプチツド混合物
を20mlの飽和食塩水で５回洗う。10mlの水で２
回、更に洗浄したのち酢酸エチル層を濃縮する。 水素化法により、保護基の離脱を行う。そのた
め、30mlのメタノールにそのジペプチツドを溶か
し、100mgの活性炭上パラジウム（メルク、ダル
ムシユタツト）を加える。窒素で空気を追い出し
たのち、反応容器に水素をいれる。水素化は25−
30℃で行われる。この水素化は、水酸化バリウム
の水溶液中で、もはや沈澱が生成しないときに終
了している。この溶液をろ過し、水で洗い、回転
蒸発器に入れて回転する。残留する中間生成物
は、次いで更にアミノ成分とし、次のカツプリン
グ工程で使用する。 第２工程 ａ Ｚ−Ｄ−Ala−Pheの混合無水物の生成 600mg（1.6mmol）のＺ−Ｄ−Ala−Pheを第1a
工程に説明した様に処理する。 ｂ アミノ成分の調製 第１工程で得られたジペプチツドＤ−Ala−
Tyr−OMet、若しくは同様にして得られたＤ−
Ala−Phe−OMetを、第1b・工程で説明した様
に溶かし、第2a・工程の混合無水物と反応させ
る（−15℃で12時間）。 あと処理、抽出、そして水素化を第１工程に説
明した様に行う。 この工程の最終生成物としては、テトラペプチ
ツド、Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Tyr−OMet、
若しくはＤ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−OMetが得ら
れる。 第３工程 ａ Ｚ−Tyrの混合無水物の生成 629mg（1.4mmol）のＺ−Tyr160μ
（1.4mmol）及び170μ（1.3mmol）のクロルぎ
酸イソブチルエステルを15mlのDMFに前記の様
に溶かす。 ｂ アミノ成分の準備 第２工程（上記を見よ）のテトラペプチツドを
15mlのDMFに溶かし、第3a・工程の混合無水物
と反応させる。その後の操作及びあと処理は、上
に詳述したとおりに行う。 第４工程 保護基を離脱した後、ペプチツドメチルエステ
ルを、常法でアンモニア分解に付して、対応する
アミドに変える。 第５工程 アンモニア分解の後、ペプチツドをホツプゼイ
ラースの物理化学、361、1836（1980）中のロツト
スパイヒその他により説明されている様に、精製
する。この合成最終目的物は、その場合、ゲル−
クロマトグラフイーにより精製し、次いでアミノ
酸分析にかける。 そのアミノ酸分析の結果は、下記本発明のペプ
チツドの組成に対応した。 Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Tyr−NH₂ Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Phe−NH₂ 以下、それら本発明の２つの例示ペプチツドの
薬理的性質について報告する。 上記の方法と同様にして本発明の、例えば次式
のペプチツドが得られた。 Ａ Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Tyr−NH₂ Ｂ Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Phe−NH₂ 実施した分析、即ちアミノ酸分析、エドマン分
解および電気泳動法によれば、これらの合成ペプ
チツドは、理論的に期待すべき分析値（次表）に
一致し、ペプチツド含量は94％以上であつた。 分析アミノ酸（分析ペプチツド当たりのモル数）

【表】 本発明の２例のペプチツドの生理学的な効果 表１は本発明のペプチツドの薬理学的性質を技
術水準のペプチツドと比較して示すものである。 アヘン様作用を説明するための生物学的なテス
ト法としては、モルモツト回腸製品が使用される
（DT−OS 2921216の24頁の詳細な説明参照）。こ
のテストでは、その器官の電気刺激収縮の50％抑
制を起こす様な物質濃度（nM）を調査した（所
謂IC₅₀−値）。その他、IC₅₀−値をよりよく理解
するために、アヘン薬、ノルモルフイン及びデル
モルフイン（DT−OS 3034897）を等しく100％
とし、ノルモルフインやデルモルフインに比較し
た、それぞれの物質の相対活性を記載する。この
相対効果の強さに就いての記載には、そのテスト
システムの感受性の、場合によつて有りうる変動
が中和されるという利点が有る。 表１中（＋）なる記号を以て示された値は、
デ・カステイグリオン等により説明されるもの
（ペプチツド、２、266頁 表１物質１及び３：欄
GPI＝ギニア豚回腸、モルモツト回腸製品
1981）と一致している。

【表】 摘出モルモツト回腸で測定した技術水準（デル
モルフイン、，）のIC₂₀−値（nM）と比較
した本発明の２つの例示ペプチツド（及び）
のそれらのIC₅₀値は７つの別々の測定値の平均で
ある。それぞれの測定値の平均値からの標準偏差
は±14％より低かつた。物質，，及びの
抑制値は特異アヘン薬拮抗体ナロキソン
（Naloxon）を添加することによつて抹消された
（器官浴中の最終濃度は900nM）。器官浴に物質
〜を更に添加する場合は（Naloxonの存在
する場合）それ以上の抑制は観察されなかつた。
物質〜の抑制は、かくてアヘン特異的である
と見做すことができる。 表１は本発明によるそれら２つのペプチツド
及びが、技術水準のペプチツド（DT−OS
2936099）に比較して、本物質に強いアヘン様の
作用を有すること、即ち、それらはより小さい
IC₅₀−値を有していることを示している。本発明
のペプチツドは技術水準（DT−OS 3034897）
のペプチツドに比較して同様により強いアヘン
様作用を有している。本発明のペプチツドはな
るほど技術水準のペプチツドよりも活性は高く
はないけれども、実施例に説明した様にペプチツ
ド分解酵素に対して、ペプチツドに対比して、
より安定であり、従つて薬理学的な効果を達成す
るために、生体投与においてより適当である。 本発明のペプチツドは試験管内だけでなく、生
体内でも強いアヘン様（痛覚麻痺）作用を示す。
テストシステムとしては電気的に刺激したラツト
の尾を用いた。この方法はブラントル等により
1981年に説明されたとうり用いられた（ライフサ
イエンス、28 1903−1909頁）。これら物質は脳
室内（intra−cerebroventrikulaer）に投与され
た。 （比較物質デルモルフインを有する）表１の物
質の生体内での相対効果（痛覚麻痺）は、摘出モ
ルモツト回腸を用いて測定した相対効力に大体に
おいて対応していた。 本発明のペプチツドの酵素安定性 ペプチツド、デルモルフイン、，，及び
（表１）のそれぞれ１mgを１mlの新たに調整し
たクレープス−リンゲル液に溶かし、それぞれ
50μｇのα−キモトリプシン（セルバ、ハイデル
ベルグ；50μのクレープス−リンゲル液に溶
解）と混合する。混合の後直ちにそれぞれ、
100μをとり、直ちに95℃に加熱し15分その温
度に保つ（この加熱は酵素の不活性化に役立つ）。
インキユベーシヨンの開始に当たつて採取したプ
ローベを最初の値（Ｏ−値）とする。次いでペプ
ケツド／酵素混合物の残余950μlを、次いで５時
間37℃でインキユベートする。このインキユベー
トの進行は次いで95℃に加熱することにより、終
結させた。遠心分離の後、それぞれの上澄み液の
一部分量（Aliquots）をそれらのアヘン様作用に
つき、Ｏ−値と比較して、定量的に調べた。その
アヘン様作用の証明方法として、またもやモルモ
ツトの回腸（上記同様）を用いた。デルモルフイ
ン及びペプチツドを用いたインキユベート仕込
物の、Ｏ−値と比較したアヘン様作用は、５時間
のインキユベーシヨン期間後には完全に消滅して
いたが、一方、ペプチツドととは完全なアヘ
ン活性を保持していることが、判つた。即ち、Ｏ
−値の一部分量（Aliquots）により達成されたの
と同じモルモツト回腸製品の抑制は、５時間のイ
ンキユベーシヨン仕込物の同容量の一部分量によ
り生じた同一抑制に対応していた。物質は物質
よりも安定性が高かつたが、本発明のペプチツ
ド及びよりも本質的にアヘン様の作用が低か
つた。 以上要するに、公知のペプチツド及びの４
位にＤ−アミノ酸の導入することは、特に強いア
ヘン様作用を達成するため特に有利である。或は
また、ペプチツド分解性酵素に対し特に高い安定
性を有するペプチツドを得るため、特に有利であ
ることが明らかになつた。 薬理的な効力を得るため投与されるペプチツド
が、薬物としてのそのものの使用を著しく限定す
る如き、ペプチツド分解酵素による急速な新陳代
謝を受けることは、よく知られているところであ
る。例えば、 Tyr−Ｄ−Ala−Phe−Ｄ−Ala−Tyr−NH₂
は、 ａ 300mg／Kg（p.o.）の経口投与で何等の中毒
現象を示さず、 ｂ 同様に203mg／Kg（i.p.）の腹腔内投与でも毒
性は観察されなかつた。 LD₅₀ 300mg／Kg（p.o.）以上 LD₅₀ 200mg／Kg（i.p.）以上 マウスでの毒性 LD₅₀ 300mg／Kg（p.o.）以上 LD₅₀ 100mg／Kg（i.p.）以上 製剤の例（錠剤） 物質（表１） 140mg ラクトース 480mg とうもろこし澱粉 20mg ポリビニルピロリドン（PVP） 10mg ステアリン酸マグネシウム 10mg 有効物質を乳糖及びとうもろこし澱粉と混合
し、PVP溶液（水性エタノール50％）を用いて
夥粒化する。この夥粒を乾燥し、ステアリン酸マ
グネシウムを添加したのち、その混合物を常法で
錠剤にプレスする。