JPH0269183A - β‐１，３‐グルカナーゼおよびその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野〕 本発明は新規なβ−１，３−グルカナーゼ並びにその製
造法に関する。更に詳しくは、バチルス属に属し、生育
の至適ｐＨをアルカリ側に有する好アルカリ性の新規微
生物を培養して得られ、酵素反応の至適ｐＨをアルカリ
側に有するβ−１゜３−グルカナーゼおよびその製造法
並びに上記新規微生物りこ関する。

〔従来の技術〕

β−１，３−グルカナーゼは分子内にβ−１，３−Ｄグ
ルコシド結合を持つラミナリン、パキマンなどの主要骨
格であるβ−Ｌ　３−Ｄ−グルコシド結合を任意に加水
分解し、グルコース、ラミナリビオース、ラミナリトリ
オースなどのラミナリオリゴ糖を生成する酵素である。

まず、β−１，３−グルカンを含むものとして、褐藻類
ことにコンブ属にある貯蔵性多糖がよく知られている。

その他β−１，３−グルカン含をの物としてサルノコシ
カケ目の萩苓、パン酵母やかびの細胞壁の構成多糖等が
知られている。従来、これらの多糖は工業的には利用が
困難であまり利用されていなかった。

これらβ−１，３−グルカンを任意に加水分解する酵素
として知られているβ−１，３−グルカナーゼは、従来
から多数の研究者の研究対象とされており、動物、植物
、微生物由来の物が検討されてきた。例えば、節足動物
〔コンポバイオケムフィジイオル（Ｃｏｍｐ、　Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、）。

１９８７、５８．１０５〜１１０］特に、糸状菌〔エン
ザイム　マイクロブ　チクノル（Ｅｎｚｙｍｅ　Ｍｉｃ
ｒｏｂ。

Ｔｅｃｈｎｏｌ、）１９８７．９　、８９〜９３）　、
放線菌〔アップル　マイクロパイオル　バイオチクノル
（Ａｐｐｌ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、）１９８
４．　２０．　２０７〜２１２　］、細菌〔アグリ　パ
イオル　ケエム（Ａｇｒ、　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、）１９７３．３７．１４４９〜１４５６）等
の酵素が良く研究されている。

しかしながら、これらの酵素はいずれも温度安定性に劣
る場合や、培養に長時間必要なものが多く１、該酵素を
工業的に安価に使用する場合に難点を残していた。

〔発明が解決しようとする課題〕

天然界に再生可能な資源として大量に存在するβ−１，
３−グルカンの有効利用、特に該物質の酵素的加水分解
によるグルコース５、ラミナリビオース、ラミナリトリ
オースなどの糖類を効率良く回収利用するためには耐熱
性に優れ、かつβ−１，３−グルカンの各種植物からの
抽出操作が主にアルカリ性で行われていることから、中
和操作を簡略化し、かつ分解工程を単純化するためにも
、アルカリ側に酵素反応の至適ｐＨを有することが好ま
しい。

さらに、高温度下で酵素反応を行うことにより腐敗を防
止したり、酵素反応速度を増大し、生成物の利用産生を
高めるなどが回持できることから、至Ａ温度も高温であ
ることが望ましい。

しかしながら、既に述べたように、従来のβ１．３−グ
ルカナーゼはいずれも温度安定性の点で不十分であった
り、該酵素の生成のためには長い培養時間が必要である
等の欠点を有しており、従ってこれら酵素を工業的規模
で、β−１゜３−グルカンの加水分解生成物を得るため
に利用することは困難であるか、コストの点で不満であ
った。

そこで、本発明の目的は上記のような酵素反応における
各種用件を満足し、β−１，３−グルカンの加水分解を
経済的かつ工業的規模で実施することを可能にする新規
なβ−１，３−グルカナーゼを提供することにある。本
発明のもう一つの目的は、上記の新規なβ−１，３−グ
ルカナーゼの製造方法を提供することにある。さらに、
本発明のもう一つの目的は、新規な微生物を提供するこ
とにある。

〔課題を解決するだめの手段〕

本発明者らは、工業的に使用するためのβ−１３−グル
カナーゼが具備すべきこれらの諸性質を有する酵素を生
産する能力を持つ微生物を得るべく広く天然界を検索し
た結果、アルカリ側に生育の至適ｐＨを有し、バチルス
属に属する細菌が上記要件を備えた酵素を産生じ、また
これを量産性良く産生ずることを見出し、本発明を完成
したものである。

即ち、本発明は、新規β−１，３−グルカナーゼを提供
するものであり、これは以下のような理化学的緒特性を
有する。

（イ）作用： β−１，３−グルカンのβ−１，３−グルコシド結合を
分解し、グルコース、ラミナリビオース、ラミナリトリ
オースを生成する。

（ロ）基質特異性： ラミナリテトラオース以上のβ−１，３−グルカンに作
用する。

（ハ）全豹ｐＨおよび安定ｐＨ範囲： 至適ｐＨは８．５〜１０．５であり、４０℃１３０分間
の加熱条件下ではｐＨ４〜１２の範囲内で安定である。

（ニ）温度に対する安定性： ｐＨ７，１００℃ｌ２Ｏ分間の加熱では安定である。

（ホ）作用適温の範囲： ６５℃近傍に至適作用温度を有する。

（へ）失活条件： ｐＨ７，１００℃の処理条件では５０分間で完全に失活
する。

（ト）ゲル濾過法による分子量： ３２、０００〜３８，０００ （チ）等電点： ３．７〜３．９ （す）阻害および活性化： 塩化第二水銀、硝酸銀により阻害を受ける。

また、本発明は上記の新規β−１，３−グルカナーゼの
製法にも関わり、この方法によれば該β−１，３−グル
カナーゼは好アルカリ性バチルス（Ａｌｋａｌｏｐｈｉ
ｌｉｃ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属し、上記β−１，３
−グルカナーゼを生産する微生物を培地に培養し、培地
液中に該酵素を生成・蓄積せしめ、これを分離・精製す
ることにより上記β−１，３グルカナーゼを製造する方
法である。

更に、本発明は、生育のｐＨが６．５〜１１．０である
好アルカリ性バチルス属ＡＧ４３０自体も含むものであ
る。

本発明の方法において使用する新規β−１，３グル力ナ
ーゼ生産菌株ＡＧ　４３０は本発明者等により新たに天
然界から検索・単離されたものであって、上記β−１，
３−グルカナーゼを菌体外に生産する菌株である。この
菌株をバージニーズ　マニュアル　オブ　システマティ
ク　バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍｓｎｕａ
ｌ　ｏｆ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙ）第２巻およびザ・ジーナス・バチルス（Ｔｈｅ　
Ｇｅｎｕｓ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ、米国、デパートメント
　オブ　アグリカルチャー（Ｄｅｐｔ、　ｏｆＡｇｒｔ
ｃａｌ　ｔｕｒｅ）版〕に従って同定すると好気性有胞
子桿菌であり、運動性があり、周ペン毛を有し、ダラム
染色陽性、カタラーゼテスト陽性であることから、バチ
ルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属することは明らかであ
ったが、ｐＨ６，５〜１１．０のアルカリ側で良く生育
することから、既知のバチルス属菌とは分類学上置なる
新菌株と認定し、好アルカリ性バチルス属ＡＧ　４３０
とした。

以下の第１表に単離したβ−１，３−グルカナーゼ生産
菌ＡＧ　４３０の菌学的諸性質を示す。

第１表　菌体外β−１゜ 菌学的性質 １、形態学的性質 形状 サイズ 運動性 ダラム染色 胞子嚢 ２、各種培地での生育 肉汁液体培地 肉汁寒天平板 肉汁ゼラチン穿刺培養 ３−グルカナーゼ生産菌の 桿菌 ０．４〜０．５Ｘ２．Ｏ〜３，０μ！ 有り（周鞭毛） 陽性 膨らんでいる もろい菌環をつくり白濁 周辺金縁、凸円状、色は白濁 ５．０％食塩肉汁液体培地 ７．５％食塩肉汁液体培地 ；３　生化学的性質※ ゼラチンとカゼインの加水分解 デンプンの加水分解 クエン酸の利用 硝酸塩の還元 ＶＰ−テスト インドールの生成 硫化水素 無機窒素源の利用 色素の生成 ウレアーゼ オキシダーゼ カタラーゼ 酵素に対する態度（嫌気） ※　十：生育する　　−二生育しない ＋ ＋ ↑ ＋ 十 ＋ 又は陽性　　　　又は陰性 ４、生育のｐＨと温度 生育ｐＨ６，５〜１１．０ 生育温度　　　　　　　　〜５０℃ ５、糖の資化 Ｉ７−アラビノース、Ｌ−キシロース、Ｄ−グルコース
、Ｄ−マンノース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガラクトー
ス、マルトース、ショ糖、乳糖、トレハロース、ラフィ
ノース、デンプン、イノシトール、Ｄ−ソルビット、Ｄ
−マンニット、セルロースを資化する。又、Ｌ−アラビ
ノース、Ｌ−キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラク
トース、マルトース、シヨ本唐、乳糖、トレハロース、
デンプン、Ｄ−ソルビット、Ｄ−マンニットから酸を生
成し、ガスは生成しない。

尚、上記菌好アルカリ性バチルス属ＡＧ　４３０は工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託番号ＦＥＲＭＰ−１
０２５６として寄託している。

本発明の新規な菌体外β−Ｌ　３−グルカナーゼの製造
法につき更に詳しく説明する。上記のようなβ−１，３
−グルカナーゼ生産菌を適当な培地に接種し、菌体の生
育温度の観点から３０〜４０℃にて、４８〜７２時間、
好気的に培養するが、培地は炭素源、窒素源の他、必要
に応じて無機塩、微量栄養素等を含むものである。

まず１、炭素源としては従来公知の各＋ｉ　＋ｘ料を使
用することができ、例えばバキマン、ラミナランあるい
はこれを含有する植物などを典型例として例示できる。

また、窒素源としても特に制限はなく、酵母エキス、ペ
プトン、肉エキス、コーンステイブリカ、アミノ酸液、
大豆粕などの有機態窒素、あるいは硫安、硝酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウムなどの無機態窒素などが安価か
つ入手容易なものとして例示できる。

尚、有機態窒素源は炭素源ともなることはいうまでもな
い。更に、このような炭素源、窒素源の他、一般に使用
されている各種の塩、例えばマグネシウム塩、カリウム
塩、リン酸塩、鉄塩等の無機塩、ビタミンなどを添加す
ることも可能である。

本発明の方法において使用するのに適した培地は、例え
ば１％のパキマン、０．５％のポリペプトン、０．５％
の酵母エキス、０．１％のＫＨ□ｐｏ、および０．００
５％のＶＩｇＳＯａ・７Ｈ２０を含有する液体培地であ
り得る。

また、本発明の方法で使用する微生物の生育ｐＨは塩基
性の範囲内であるので、適当なアルカリを用いて上記培
地のｐＨ値を調整する必要がある。

そのために１％炭酸水素ナトリウムを典型例として挙げ
ることができるが、これに限定されず水酸化ナトリウム
、炭酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、水酸化カルシウ
ムなどのアルカリ試薬も使用できる。

本発明の方法において使用する新規微生物の好アルカリ
性バチルス属ＡＧ４３０はβ−１，３−グルカナーゼを
菌体外に生産するので、生産されるβ−１３−グルカナ
ーゼは培養液中に放出され、そこに蓄積される。この菌
の培養はハツチ式、連続式のいずれによって行うことも
でき、生成される酵素の分離精製は例えば以下のように
して実施することができる。

即ち、まず培養液中の菌体を遠心分離、濾過などで除去
した後、得られる上澄液（粗酵素液）をそのままβ−１
，３−グルカンの加水分解反応に適用ｊ−ることも可能
であり、これは経済的に有利であう。また、これを更に
精製して使用することもできる。そのためには、例えば
硫安等による塩析、エタノール、アセトン、イソプロパ
ツール等による溶媒沈澱法、限界濾過法、ゲル濾過法、
イオン交換樹脂等による一般的な酵素精製法により精製
することができる。

以下に、本発明のβ−１，３−グルカナーゼの好ましい
精製法の１例につき説明する。

好アルカリ性バチルス属に属するＡＧ−４３０株を、例
えば上記のような培地に植菌し、３５℃にて７２時間好
気的に培養して得られる培養液を、８０００ｒｐｍ、４
℃にて２０分間遠心分離して菌体を除き、１．！１の上
澄液を得る。次いで、該上澄液に一２０℃のアセトン６
！を加え、−２０℃で一夜放置する。上澄６２を捨て残
りの液と生じた沈澱を遠心分離する。

回収した沈澱を乾燥しアセトンを連敗後、５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ８，０）に溶解させ、４℃で同緩衝液に
対して２時間、２回透析をする。

生じた沈澱を遠心分離して除いた上澄液を同上緩衝液で
平衡化したＤＥＡＥ−３ｅｐｈａｒｏｓｅ　ＣＬ−６Ｂ
に吸着させ、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５，６）で不
用の蛋白を溶出後０．１〜０．５ＭのＮａＣ１を含む５
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５，６）の濃度勾配法によっ
て酵素を溶出する。

溶出した活性画分を集め、平均分画分子量１０．０００
の限外濾過膜を用いて濃縮する。濃縮酵素は５ｅｐｈａ
ｄｅｘ　Ｇ’−７５に充填し、１０ｍＭリン酸緩衝液（
ｐＨ７，０）を用いて溶出する。溶出した活性画分を集
め、同上緩衝液で平衡化したハイドロキシアパタイトで
不用の蛋白を吸着させ、活性画分を集めて、平均分画分
子量１０，０００の限外濾過膜を用いて濃縮する。

濃縮酵素は、５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−７５に充填し、１
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）を用いて溶出する。

かくして得られた活性画分を濃縮し、ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動法（ゲル濃度１４．０％）において均一
な酵素標品６０ｍｇを得られ、活性収率は４６％であっ
た。

なお、β−１，３−グルカナーゼ活性の測定法並びに活
性表示法は以下の通りである。即ち、５０ｍ１’ＩＴｒ
ｉｓ−ＨＣＩｌｌ衝液（ｐＨ９，０）に溶解させた１％
（Ｗ／Ｖ）ラミナラン溶液０．２　ｄに適当に希釈した
酵素液０．０１成を混合し、４０℃″ｒｌｏ分間反応さ
せた後、ＤＮＳ試液〔ジェイ、アール、サマー　ジー、
イー、ソマーズ　「ラボラトリ−イクスペリメンツ　イ
ン　バイオロジカル　ケミストリー」、アカデミツクプ
レス、ニューヨーク（Ｊ、Ｒ，Ｓｕｖｗｅｒ、　Ｇ’、
Ｅ。

ＳＯＭＥＲＳ、”Ｌａｂｏａｒａｔｏｒｙ　Ｅｘｐｅｒ
ｉｍｅｎｔｓ　ｉｎ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ、’　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅ
ｗ　Ｙｏｒｋ）　、３４３５頁、１９４４）　１．０　
ｄを添加して酵素反応を停止させる。沸騰水浴中で５分
間加熱した後急冷し、４　ｍｌｌの水を加え十分に攪拌
する。同様に処理した、０．２ｍｇ／ｍグルコース溶液
を標準とし、着色度を分光光度計（波長５１０ｎｍ）を
用いて測定する。酵素活性の単位は前述の条件下で１分
間に１ｍｇのグルコースに相当する還元糖を生成するの
に要する酵素量を１単位として表示する。

本発明の方法によって得られるβ−１，３−グルカナー
ゼおよび従来公知の微生物由来のβ−１，３−グルカナ
ーゼの理化学的性質および酵素化学的性質を比較して第
２表に示す。

（本頁以下余白） 〔作　用〕 天然界に再生可能な資源として大量に存在するβ−１，
３−グルカンはあまり有効利用されていない。

このβ−１，３−グルカンを有効利用するためには、こ
れを効率よく加水分解し得る酵素（β−１，３−グルカ
ナーゼ）の開発が必要となる。即ち、β−１゜３−グル
カンを高効率で加水分解し得る酵素を得ることは、これ
を分解して有用なグルコース、ラミナリビオース、ラミ
ナリトリオースなとのＩＪＨ！とし、これを回収、利用
したり、あるいβ−１，３−グルカン自体として使用し
た後にこれを分解・除去するなどの目的のために重要で
ある。

このような用途において、β−１，３−グルカナーゼは
高温安定性を有し、しかもアルカリ側に酵素反応の至適
ｐＨを有するものであることが、工業的応用という観点
から極めて望ましい。

このような目的で、従来から様々な起源のβ−１゜３−
グルカン加水分解酵素が見出されてきたが、いずれも工
業的観点から十分満足し得るものではなかった。即ち、
従来研究されていた酵素はいずれも高温安定性に劣るも
のであったり、酵素産生微生物の培養時間が著しく長い
ものであった。

そこで、本発明者等は種々検索し、好アルカリ性バチル
ス属に属する細菌が有効なβ−１，３−グルカナーゼを
高い生産率で生産することを見出した。

この酵素は、上記β−１，３−グルカンの加水分解反応
における諸要件をいずれも満足するものであり、従来知
られていた酵素の諸問題点をいずれも解決した。

即ち、まず本発明のβ−１，３−グルカナーゼ酵素は上
記微生物により菌体外生産されるので、分離・精製方が
掻めて簡単であり、労力、製造コストの点で大幅な改善
が期待できる。

更に、高温安定性に優れ、しかもアルカリ側に酵素反応
の至適ｐＨを有するので、アルカリ条件下で行われる各
種植物等からのβ−１，３−グルカンの抽出操作後、中
和操作等を施すことなしに、そのまま酵素分解反応に付
することが可能であるので、作業が著しく簡略化される
と共に、余分な試薬の使用が不用となるので、分解生成
物の製造コストも節減できる。

かくして、本発明の新規な酵素によれば、工業的規模で
のβ−１，３−グルカンの分解利用が可能となる。また
、コストパフォーマンスの点でも極めて有利である。

〔実施例〕

以下、本発明を実施例によりさらに詳しく説明する。

実施例１ 好アルカリ性バチルス属ＡＧ−４３０株（ＦＥＲＭ　Ｐ
１０２５６）を５００　ｄの三角フラスコ中の、バキマ
ン２％ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．５％、Ｋ
ｚＨＰＯａｏ、　１％Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２００，００５
％、および炭酸水素ナトリウム１％を含む培養液１００
ｍ１ｐＨ９）に接種し、３３℃で４８時間、２０Ｏｒｐ
ｍで振盪培養した。ついで、該培養液上澄中のβ−１，
３−グルカナーゼ活性を上記のように測定した結果、１
６単位／ｄであった。

実施例２ 好アルカリ性バチルス属ＡＧ−４３０株（ＦＥＲＭ　Ｐ
１０２５６）　ヲ２　Ａ容の三角フラスコ中のバキマン
１％、ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．５％、Ｋ
ｌＬＰｏ、　０．１％、Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２００，００
５％、および炭酸ナトリウム１％を含む培養液６００　
ｒｎｌ　（ｐ　Ｈ１０）に接種し、３７℃にて７２時間
好気的に培呑して得られる培養液を８０００ｒｐｍ　、
４　”Ｃにて２０分間遠心分湘して菌体を除き、５００
ｄの上澄液を得る。

該培養液上澄中のβ−１，３−グルカナーゼ活性を上記
のように測定した結果、６単位／　ｍｌであった。

次いで、該上澄液に一２０℃のアセトン２１を加え、−
２０℃で一夜放置し、沈澱を遠心分離する。

回収した沈澱を乾燥しアセトンを連敗後、５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ８，０）に溶解させ、４℃で同緩衝液に
対して２時間、２回透析をする。生じた沈澱を遠心分離
して除いた上澄液を同上緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−
Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＧＬ−５Ｂに吸着させ、５０ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ５，６）で不用の蛋白を溶出後０．
１〜０．５ＭのＮａＣ＋を含む５０　ｍ　Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ５，６）の濃度勾配法によって酵素を溶出する
。溶出した活性画分を集め、平均分画分子量１０，００
０の限外濾過膜を用いて濃縮する。濃縮酵素は、５ｅｐ
ｈｄｅｘ　Ｇ−７５に充填し、１０ｍＭリン酸緩衝液（
ｐＨ７，０）を用いて溶出する。溶出した活性画分を集
め、同上緩衝液で平衡化したハイドロキシアパタイトで
不用の蛋白を吸着させ、素通りした活性画分を集める。

かくして得られた活性画分を濃縮し、酵素標品２０ｍｇ
を得た。活性収率は５２％、β−１，３−グルカナーゼ
活性は７Ｏ単位／ｄであった。

〔発明の効果］ 以上詳しく述べたように、本発明の新規なβ−１゜３−
グルカナーゼはアルカリ側に酵素反応の至ａｐＨを有し
、かつ高温安定性にも優れている。従って、β−１，３
−グルカンの酵素分解反応をアルカリ側で実施でき、こ
のことはβ−１，３−グルカン抽出工程後ただちに酵素
分解反応を行うことを可能とする。

更に、高温度下で酵素反応を実施しえることがら反応速
度を大幅に高めることが出来る。

かくして、本発明のβ−１，３−グルカナーゼにょれば
、工業的に有利に、β−１，３−グルカンの分解生成物
の製造を行うことができ、高い分解効率、分解生成物の
生産性を達成でき、しかも製造コストの節減を図ること
が可能となる。

また、本発明のβ−１，３−グルカナーゼはこれを菌体
外生産する好アルカリ性バチルス属に属する微生物から
得ることが出来るので、分離・精製が容易であり、従っ
て安価に量産できるものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）以下の理化学的性質を有する新規β−１，３−グ
   ルカナーゼ （イ）作用： β−１，３−グルカンのβ−１，３−グルコシド結合を
   分解し、グルコース、ラミナリビオース、ラミナリトリ
   オースを生成する。 （ロ）基質特異性： ラミナリテトラオース以上のβ−１，３−グルカンに作
   用する。 （ハ）至適ｐＨおよび安定ｐＨ範囲： 至適ｐＨは８．５〜１０．５であり、４０℃、３０分間
   の加熱条件下ではｐＨ４〜１２の範囲内で安定である。 （ニ）温度に対する安定性： ｐＨ７、１００℃、２０分間の加熱では安定である。 （ホ）作用適温の範囲： ６５℃近傍に至適作用温度を有する。 （ヘ）失活条件： ｐＨ７、１００℃の処理条件では５０分間で完全に失活
   する。 （ト）ゲル濾過法による分子量： ３２，０００〜３８，０００ （チ）等電点： ３．７〜３．９ （リ）阻害および活性化： 塩化第二水銀、硝酸銀により阻害を受ける。 （２）以下の理化学的性質： （イ）作用： β−１，３−グルカンのβ−１，３−グルコシド結合を
   分解し、グルコース、ラミナリビオース、ラミナリトリ
   オースを生成する。 （ロ）基質特異性： ラミナリテトラオース以上のβ−１，３−グルカンに作
   用する。 （ハ）至適ｐＨおよび安定ｐＨ範囲： 至適ｐＨは８．５〜１０．５であり、４０℃、３０分間
   の加熱条件下ではｐＨ４〜１２の範囲内で安定である。 （ニ）温度に対する安定性： ｐＨ７、１００℃、２０分間の加熱では安定である。 （ホ）作用適温の範囲： ６５℃近傍に至適作用温度を有する。 （ヘ）失活条件： ｐＨ７、１００℃の処理条件では５０分間で完全に失活
   する。 （ト）ゲル濾過法による分子量： ３２，０００〜３８，０００ （チ）等電点： ３．７〜３．９ （リ）阻害および活性化： 塩化第二水銀、硝酸銀により阻害を受ける、 を有するβ−１，３−グルカナーゼ生産能を有し、生育
   のｐＨをアルカリ側に有する好アルカリ性バチルス属に
   属する微生物を培地に培養し、該β−１，３−グルカナ
   ーゼを培地中に生成・蓄積させ、これを採取することを
   特徴とする上記β−１，３−グルカナーゼの製造方法。 （３）上記培養を２５〜５０℃の範囲内の温度下で好気
   的に行うことを特徴とする請求項２記載のβ−１，３−
   グルカナーゼの製造方法。 （４）上記培養液のｐＨが５〜１０の範囲内にあること
   を特徴とする請求項２または３記載のβ−１，３−グル
   カナーゼの製造方法。 （５）生育のｐＨが６．５〜１１．０である好アルカリ
   性バチルス属ＡＧ４３０