JPH0286784A - 抗性物質ｒｓ−１０、その製造法並びに農園芸用殺菌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔技術分野〕 本発明は、新規抗生物質ＲＳ−１０並びにその製造法と
、ＲＳ−１０を有効成分とする農園芸用殺菌剤に関する
。

〔発明の背景〕

従来、農園芸用殺菌剤として銅剤、水銀剤、砒素剤の如
き重金属化合物や有機塩素系薬剤、有機リン酸系薬剤等
が用いられてきたが、これらはいずれも動物や人体に有
害で、土壌に対する汚染があったり、自然界に残留して
長時開動・植物に作用し、これら薬剤による環境汚染が
重大な社会問題となり、その使用が禁止ないしは制限さ
れている現状にある。しかしながら、稲の主要病害をは
じめとする各種植物病害は、対象薬剤の減少や耐性菌の
出現に伴って増加の傾向を示しており、その対策として
対象病害に著効を示し、且つ安全性の高い新たな農薬の
開発が強く望まれている。

〔発明の目的〕 本発明の目的は、各種植物病害に有効な新規抗生物質と
その製造法を提供することにある。更に、本発明の目的
は、上記抗生物質を有効成分とする農園芸用殺菌剤を提
供することにある。

〔発明の構成〕

本発明の抗生物質ＲＳ−１０は、後述の理化学的性質を
有する文献未載の新規な抗生物質であり、キュウリ灰色
かび病、キュウリ炭痕病等の各種植物病害に対して優れ
た防除効果を奏し、且つ植物体に何ら薬害を及ぼさず、
その施用にあたり人体に何らの影響を与えない優れた農
園芸用殺菌剤である。

以下に、本発明の詳細な説明する。

〈抗生物質ＲＳ−１０の製造〉 （使用する微生物） 本発明の抗生物質ＲＳ−１０を生産する微生物はストレ
プトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）属に属する
抗生物質ＲＳ−１０の生産能を有する菌種である。

その−例として、ストレプトミセス・エスビー・ＲＳ　
−Ｉ　Ｑ　　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、　　
ＲＳ　−１０）（以下“ＲＳ−１０株”と称する。）を
挙げることができ、該微生物は、上記の特性を有し、本
発明の抗生物質ＲＳ−１０を有利に生産するものであり
、本発明の製造法に有効に利用し得るものである。

また、上記ＲＳ−１０株の自然的及び人工的変異株は勿
論、ストレプトミセス属ｊこ属する菌種で後述の抗生物
質ＲＳ−１０の生産能を有する微生物はすべて本発明方
法において使用することができる。

上記ＲＳ−１０株は、中Ｉ広西省で採取された土壌中よ
り分離された土壌放線菌であり、工業技術院微生物工業
技術研究所に昭和６３年８月２Ｏ日付寄託され、その微
生物受託番号は、微工研菌寄第１０．２１９号（ＦＥＲ
？ｖｆ　　Ｐ−１０，２１９）である。

ＲＳ−１０株は、次の菌学的性質を有する。

１、形態的特徴 本菌株、ＲＳ−１０株を１％イーストエキストラクト、
１％グルコースを含む液体培地で培養し、この菌体を６
Ｎ塩酸、１１０℃、１８時間加水分解したものの薄層ク
ロマトグラフィーでは、Ｌ、Ｌ−ジアミノピメリン酸を
検出したが、メソ−ジアミノピメリン酸は検出されなか
った。寒天平板上に発育したものの電子顕微鏡観察では
、気菌糸は螺旋状を呈し、胞子表面は平滑で卵型である
。胞子鎖は気菌糸先端に多数連なって形成される。

２、各種培地上における生育状態（２７℃、２Ｏ日間培
養、色調はディスクリブチイブ・カラー・ネームズ・ｆ
　イブ’／　−１＋　！７　（Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅ
　（”ｏｌｏｒＮａｍｅｓ　Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ）に
よる）Ｉ）スターチ・イースト寒天培地 発　　育：良好 気菌糸：豊富 気菌糸色調：２ｆｅ　　（コバートゲレイ）表面色調　
：２ｇｃ　　（バンブー） 可溶性色Ｓ：な　し ２）イーストエキス・モルトエキス寒天培地発　　育：
良好 気菌糸：豊富 気菌糸色調：　３ｃｂ＋）ｆｅ　　（サンド＋アッシュ
）表面色調　：２１ｃ（ハニーゴールド）可溶性色素：
な　し ３）オートミール寒天地 発　　　　育：′良　好 気菌糸：少量 気菌糸色調：ｃ（ライトグレー） 表面色調　：ｂ（オイスターホワイト）可溶性色素：な
　し ４）スターチ・無機塩寒天培地 発　　育：不良 気菌糸：少量 気菌糸色調：２ｅｃ　　（オートミール）表面色調　：
２ｇｃ　　（バンブー） 可溶性色素：な　し ５）チロシン寒天培地 発　　育：良好 気菌糸：豊富 気菌糸色ａ：３ｄｃ　　（ナチュラル）表面色調　：３
ｇｃ　　（ライト・ダン）可溶性色素：な　し ６）蔗糖硝酸塩寒天培地 発　　育：普通 気菌糸：普通 気菌糸色調：３ｃｂ　　（サンド） 表面色調　：３ｄｃ　　（ナチュラル）可溶性色素：な
　し ７）グルコース・アスパラギン寒天培地発　　育：不良 気菌糸：少量 気菌糸色調：２ｃｂ（アイポリ−・ティント）表面色調
　：２ｄｃ　　（ナチュラル）可溶性色Ｓ：な　し ８）グリセロール・アスパラギン寒天培地発　　育：不
良 気菌糸：少量 気菌糸色調：２ｃｂ（アイポリ−・ティント）表面色調
　：２ｄｃ　　（ナチュラル）可溶性色素：な　し ９）栄養寒天培地 発　　育：不良 気菌糸：少量 気菌糸色調：２ｃｂ　　（アイポリ−・ティント〉表面
色調　：２ｄｃ　　（ナチュラル）可溶性色Ｓ：な　し １０）ペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地発　　育
：良好 気菌糸：なし 気菌糸色調 表面色調　：２８Ｃ（バンブー） 可溶性色素：な　し ３、　糖の利用 Ｄ−グルコース　　　発育良好 イノシトール　　　　発育良好 Ｄ−マンニトール　　発育良好 Ｄ−ガラクトース　　発育良好 マルトース　　　　　発育良好 Ｄ−フラクトース　　発育普通 ソルビトール　　　　発育普通 Ｄ−キシロース　　　発育 Ｌ−アラビノース　　発育せず 蔗糖　　　　　　　　発育せず Ｌ−ラムノース　　　発育せず ラフィノース　　　　発育せず ラクトース　　　　　発育せず メリビオース　　　　発育せず ソルボース　　　　　発育せず ４、　その他の生理的性質 本菌株は澱粉の加水分解、脱脂乳の凝固化と液化、キサ
ンチンの利用反応は陽性であり、ゼラチンの液化、硝酸
塩の還元、セルロースの加水分解、メラニン様色素の形
成の反応は陰性である。

以上のことから、本菌はストレプトミセスに属すること
は明らかであり、これらの性質をバージイズ・マニュア
ル・オブ・デターミネイティブ・バクテリオロジイ　（
Ｂｅｒｇｅｙ’　ｓ　！、Ｉａｎｕａｌ　ｏｆＤｅｔｅ
ｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｒｏｇｙ）及び
インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマテイ
ック・バタテリオロジイ　（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｌｃ　Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）言己載のもので検索すると、
最も近縁のものは、ストレプトミセス・リビダンス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｌ１ｖｉｄａｎｓ）であり、
本菌はこの種と同定する。

（培養法及び精製法） 本発明の抗生物質ＲＳ−１０を得るに当っては、ストレ
プトミセス属に属する上記抗生物質生産菌を、抗生物質
を生産する通常の方法で培養することができる。培養の
形態は、液体培養でも固体培養でもよく、工業的に有利
に培養するためには、前記生産菌の胞子懸濁液又は培養
液を培地に接種し、通気撹拌培養を行えばよい。

培地の栄養源としては特に限定されることはなく、微生
物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源その他を培地
中に含有させることができる。炭素源としては、澱粉、
デキストリン、グリセリン、グルコース、シュークロー
ス、カラクトース、イノシトール、マンニトールなどが
、また窒素源としては、ペプトン、大豆粉、肉エキス、
米ぬか、麩、尿Ｌコーンステイープリカー、アンモニウ
ム塩、硝酸塩、その他の有機または無機の窒素化合物が
用いられる。その他、無機塩類、たとえば食塩、燐酸塩
類、カリウム、カルシウム、亜鉛、マンガン、鉄等の金
属塩類等を適宜に添加してもよ（、必要に応じて消泡剤
として、劾、植、鉱物油等を添加してもよい。培養温度
、培養時間等の培養条件は使用菌の発育に適し、しかも
ＲＳ−１０の生産が最高となるような条件が選ばれる。

たとえば、培地のｐＨは４〜９、特に中性付近がよく、
培養の適温は２５〜３５℃程度がよい。しかし、これら
の培養組成物、培地の水素イオン濃度、培養温度、撹拌
条件などの培養条件は使用する菌株の種類や、外部の条
件などに応じて好ましい結果が得られるように適宜調節
されるべきであることはいうまでもない。このようにし
て得られる培養物から、ＲＳ−１０を得るには、代謝産
物を採取するのに通常用いられる手段を適宜に利用して
採取し得る。たとえば、ＲＳ−１０と不純物との溶解度
差を利用する手段、イオン結合力の差を利用する手段、
吸着親和力の差を利用する手段、分子量の差を利用する
手段のいずれも、それぞれ単独、又は、適宜組合せて、
あるいは反復して使用される。具体的には、ＲＳ−１０
は、培養濾液にその大部分が存在する。その培養液を各
種のイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマト
グラフィー、吸着クロマトグラフィー、液体クロマトグ
ラフィー、セルロース分配クロマトグラフィー等を組合
せて精製すると、ＲＳ−１０及びその他の活性成分を含
む画分が得られる。この両分を凍結乾燥して得られた粉
末を更に高速液体クロマトグラフィー　（たとえば、旧
ｇｈ−Ｃａｒｂｏｎ　　ＯＤ　Ｓ　。

０．０２％ギ酸−水の系で展開）により精製し、ＲＳ−
１０の精製白色粉末を得る。

こうして得られたＲＳ−１０の理化学的性質及び生物学
的性質は次のとおりである。

く抗生物質ＲＳ−１０の理化学的性質及び生物学的性質
〉 分解点＝２３０〜２３２℃ 元累分析：炭素４０．４３％　水素５．４５％窒：ｉ１
２．８２％　硫黄３．３２％ 比旋光度：　〔α〕Ｄ−十９．２°　（Ｃ＝０．５％Ｈ
２Ｏ） 赤外線吸収スペクトル：３３５０．２９００．１６５０
．１５７０．１５３０．１３８０．１２１０．１１３０
．１０７０．７６０．５４０　ｃｍ−’ 溶解性：水に易溶、メタノール、アセトンに難溶、クロ
ロホルム、ベンゼン、酢酸エ チルに不溶 分子Ｍ　：　８２２　　（Ｓ　１ＭＳマススペクトルに
よる） （分子式：　Ｃ２９Ｈ４２Ｎ８０１１１５）呈色反応：
ニンヒドリン、レミュー、ライドン−スミス、過ヨウ素
酸−ベンジディ ン反応に陽性、アンスロン、ＦｅＣβ３反応に陰性 物質の色：白色粉末 薄層クロマトグラフィー： 米国メルク社製薄層板０．２５　ｍ＋＋ｎシリカゲル 溶媒　ブタノール：ピリジン：酢酸：水＝１０：１０：
３＋１２ Ｒｆ値　０．２９ 溶媒　ブタノール：メタノール：水 ＝２＋１：２ Ｒｆ値　０．２３ 抗菌スペクトル：適音の寒天平板上のディスク検定法で
示した。

ボトリチス・シネレア　　　　　４０ｍ＋ｎ（Ｂｏｔｒ
ｙｔｉｓ　ｃｉｎｅｒｅａ）コレトトリカム・ラゲナリ
ウム　２Ｏ市（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ　Ｉａｇ
ｅｎａｒｉｕｍ）ピリキュラリア・オリゼー　　　　０ （Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ　ｏｒｙｚａｅ　）アラタナ
リア・マリ　　　　　　　０ （、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｍａｌｉ）キサントモリス
・オリゼー　　　　０ （Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ　ｏｒｖｚａｅ）エシェリヒ
ア・コリ　　　　　　　　０（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
　ｃｏｌｉ）スタフィロコッカス・アウレウス　０ （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）カン
ジダ・アルビカンス　　　　　０ （Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）酸加水分解：５
．７ＮＨＣｊ！、１１０℃、２Ｏ時間の酸加水分解後の
アミノ酸分析で セリンとシスタチオニンが検出さ れた。

く他物質との比較〉 ＵＶスペクトルにおいて、中、酸性で２６２１ｍ、アル
カリ性で２８５ｎｍに吸収をもつ抗生物質としては、ウ
ラシル核を有するヌクレオシド抗生物質がある。特に、
ニジマイシンＢ、Ｃ，ＤとＲＳ１０のＵＶ吸収は一致す
る。しかし、ＲＳ−１０とニジマイシンＢ＋　、Ｂ２　
、Ｃ＋　、Ｃ２、Ｄ＋　、Ｄ２とをＨＰＬＣで直接比較
したが、ＲＳ−１０は、これらのニジマイシンと一致し
なかった。また、ニジマイシンはアミノ酸としてシスタ
チオニンのみ含むが、ＲＳ−１０はシスタチオニンとセ
リンを有し、この２つのアミノ酸を有する既知のヌクレ
オシド抗生物質は無い。従って、ＲＳ−１０を新規抗生
物質と結論した。

（ＲＳ−１０を有効成分とする農園芸用殺菌剤）本発明
の有効成分を農園芸用殺菌剤として使用する場合には、
通常、当該技術分野において知られている農薬製剤と同
様に適当な固体担体、液体担体、乳化分散剤等を用いて
粒剤、粉剤、乳剤、水和剤、錠剤、油剤、噴霧剤、煙霧
剤等の任意の剤型に製剤化して適用することができる。

これらの担体としては、クレー、カオリン、ベントナイ
ト、酸性白土、珪藻土、炭酸カルシウム、固体担体とし
て、ニトロセルロース、デンプン、アラビアゴム等々が
、また液体担体として水、メタノール、エタノーノペア
セトン、ジメチルホルムアミド、エチレングリコール等
が挙げられる。また、製剤上、一般に使用される補助剤
、例えば、高級アルコールの硫酸エステノペポリオキシ
エチレン・アルキル・アリルエーテノペアルキル・アリ
ル・ポリエチレン・グリコールエーテル、アルキル・ア
リル・ソルビタン・干ノラウレート、アルキル・アリル
・スルホネート、第４級アンモニウム塩、ポリアルキレ
ンオキサイド等を適宜配合することができる。

有効成分の配合割合は、乳剤、水和剤としては、１０〜
９０％程度が適当であり、粉剤、油剤等としては、０．
１〜１０％程度が適当であるが、使用目的によってこれ
らの濃度を適宜増減してもよい。

また、本発明の薬剤は、他の殺菌剤や除草剤、殺虫剤、
肥料物質、土壌改良剤と適宜混合して使用することがで
きる。

以下に、本発明を製造例、実施例及び試験例によって具
体的に説明するが、本発明はこれに何ら限定されるもの
ではない。

なお、「％」、「部」はそれぞれ重量％、重量部を表わ
す。

製造例 グルコース２％、可溶性デンプン１％、肉エキス０．１
％、乾燥酵母０．４％、大豆粉２．５％、食塩０．２％
、リン酸第２カリウム０．　ＯＯ５％の組成からなる３
６βの培地に前記ＲＳ−１０株を接種して、２７℃で６
６時間振とう培養した。この培養液を濾過し得られた濾
液２７βをＤＯ〜ｒｅｘ　−１カラム（７，５Ｘ　７０
ｃｍ）に通して活性物質を吸着させた。次に、１５１の
水で水洗後、６βのｌＮ酢酸で活性物質を溶出させた。

溶出液をピリジンで中和後濃縮し、ＩＲＣ−５０カラム
（５，７ｘ　３０ｃｍ）の上部に付加し水で溶出した。

溶出液を分画し、活性画分を集めて濃縮後、ダイヤイオ
ンＨＰ２Ｏカラム（７，５Ｘ　３５ｃｍ）の上部に付加
し、水で溶出した。溶出液を分画し、活性区分を集めて
濃縮後、凍結乾燥して本物質の粗粉末１４ｇを得た。

この１４ｇのうち５ｇを少量の溶液（ブタノール：メタ
ノール：水＝２：１：２の組成）に溶かし、セルロース
カラム（３，８Ｘ　８０ｃｍ）の上部に付加し、同じ組
成の溶液で溶出し分画した。分画量は１８＋ｒ＋ｊ！で
、分画Ｎｏ、８８−１４０に活性物質が現れ、これを濃
縮後、凍結乾燥して４１５ｍｇの粉末を得た。この粉末
を用いて、高速液体クロマトグラフィーを行うことによ
り、本物質をさらに精製した。カラムはヌクレオジルＨ
ｉｇｈ　−Ｃａｒｂｏｎ○ＤＳ　（径長２Ｏｍｍ、長さ
２５ｃｍ）を用い、溶剤は０．０２％ギ酸−水の系で、
流速９．Ｏｍβ／ｍｉｎ。

圧力１８０　ｋｇ／ｃ＋＋！で行うと、展開時間１６〜
１８分に活性物質が現れる。この活性画分を繰り返し分
取し、濃縮後、凍結乾燥することにより本物質の純粋な
白色粉末６０ｍｇを得た。

実施例１ （水和剤） ＲＳ−１０，１０部、ラウリル硫酸ナトリウム５部、ジ
ナフチルメタンジスルホン酸ソーダホルマリン縮合物２
部及びクレー８３部を混合粉砕して水和剤１００部を得
る。

実施例２ （乳　剤） ＲＳ−１０，８部、エチレングリコール１０部、ジメチ
ルホルムアミド２Ｏ部、アルキル・ジメチルベンジル・
アンモニウムクロライド１０部及びメタノール５２部を
混合溶解して乳剤１００部を得る。

実施例３ （粉　剤） ＲＳ−１０，０，２部、ステアリン酸カルシウム０．５
部、クル２５０部及びクレー４９．３部を混合粉砕して
粉剤１００部を得る。

実施例４ （粒　剤） ＲＳ−１０，１０部、デンプン１５部、ベントナイト７
２部及びラウリルアルコール硫酸エステルのす）　ＩＪ
ウム塩３部を混合粉砕して粒剤１００部を得る。

試験例１ （キュウリ灰色かび病に対する防除試験）キュウリ　（
品種：相撲半白）の播種後、１５日間生育した幼苗に、
実施例１に準じて調製した水和剤を所定濃度に希釈して
散布した後、風乾した。

キュウリ灰色かび病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ｃｉｎｅｒ
ｅａ）をジャガイモ・グルコース寒天平板培地で培養し
、ＢＬＢ光線を照射して誘発した胞子を、グルコース１
０％酵母抽出液１％溶液に懸濁した。

薬液が乾いた後、キュウリを接種箱に移して、前記懸濁
液をスプレーガンにより、キュウリ幼苗１０本につき１
０ｃｃ噴霧接種した。

接種後のキュウリ幼苗は恒温多湿の条件下に放置し、４
日後に発病の程度を調べた。

なお、防除価は次の方法により算出した。

（発病指数）　　　　（発　病　程　度）０　　　　発
病なし １　　　　病斑がわずかに認められる。

２　　　１０％以下の発病面積が認められる。

１０％以上２Ｏ％以下の発病面積が認 められる。

２Ｏ％以上３０％以下の発病面積が認 められる。

３０％以上４０％以下の発病面積が認 められる。

４０％以上の発病面積が認めちれる。

この結果を下表に示す。

＊１−（７”チルカルバモイル）−２−ベンズイミダゾ
ールカルバミド酸メチル （発明の効果） 上記の試験結果より、本発明の農園芸用殺菌剤は、上記
植物病害に対して、低濃度においても極めて高い防除価
を示し、且つ薬害が全く認められず、安全性の高い農薬
を提供しうろことが明らかにされた。

なお、本願の抗生物質ＲＳ−１０は、本願に対応する中
国特許出願において、“′抗生物質５Ｒ−１０″と称呼
される物質と同一である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の抗生物質ＲＳ−１０の紫外線吸収ス
ペクトルを示す図であり、第２図は、抗−生物質ＲＳ−
１０の赤外線吸収スペクトルを示す図である。 第１図 波長（ｎｍ）

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性質を有する抗生物質ＲＳ−１０
   。 分解点：２３０〜２３２℃ 元素分析：炭素４０．４３％水素５．４５％窒素１２．
   ８２％硫黄３．３２％ 比旋光度：〔α〕＿Ｄ＝＋９．２°（Ｃ＝０．５％Ｈ＿
   ２Ｏ） 紫外線吸収スペクトル： ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ 赤外線吸収スペクトル：３３５０、２９００、１６５０
   、１５７０、１５３０、１３８０、１２１０、１１３０
   、１０７０、７６０、５４０ｃｍ＾−＾１ 溶解性：水に易溶、メタノール、アセトンに難溶、クロ
   ロホルム、ベンゼン、酢酸エチルに不溶 分子量：８２２（ＳＩＭＳマススペクトルによる） （分子式：Ｃ＿２＿９Ｈ＿４＿２Ｎ＿８Ｏ＿１＿８Ｓ） 呈色反応：ニンヒドリン、レミュー、ライドン−スミス
   、過ヨウ素酸−ベンジディン反応に陽性、アンスロン、
   ＦｅＣｌ＿３反応に陰性 物質の色：白色粉末
2. （２）ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
   属に属する抗生物質ＲＳ−１０生産菌を培養し、その培
   養物から抗生物質ＲＳ−１０を分離採取することを特徴
   とする抗生物質ＲＳ−１０の製造法。
3. （３）抗生物質ＲＳ−１０生産菌がストレプトミセス・
   エスビー・ＲＳ−１０（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ
   ．ＲＳ−１０）である請求項（２）に記載の製造法。
4. （４）抗生物質ＲＳ−１０を有効成分として含有するこ
   とを特徴とする農園芸用殺菌剤。