JPH0276594A - 新規抗生物質ｙ−９，ｙ−１０及びその製造法並びにこれを有効成分とする植物病害防除剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の目的］ （産業上の利用分野） 本発明は、新規抗生物質Ｙ−９、￥−１０及びその製造
法並びにこれを有効成分とする植物病害防除剤に関する
ものである。

更に詳しくは、本発明の新規抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０
はバチルス属に属する抗生物質Ｙ−９、￥−１０生産菌
を培養して、その培養液がら分離−採取することにより
得られるものである。

（従来の技術及び発明が解決しようとする課題）従来、
バチルス属に属する微生物により生産される抗生物質と
して、多くのペプチド系抗生物質が知られているが、本
発明の抗生物質Ｙ−９、￥−１０は、その理化学的性質
において、いずれの既知抗生物質とも異なり、その既知
文献は無い。

［発明の構成］ （課題を解決するための手段及び作用）以下に、本発明
の新規抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０及びその製造法につい
て詳述する。

本発明において用いる微生物は抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１
，０の生産能を有するものであり、バチルス（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ）属に属する菌種である。その一例として挙げ
られるバチルス・ズブチリスＴＭ−１０５（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｌｉｓＴＭ　−１０５）菌は、本
発明の抗生物質Ｙ−９、ｙ−ｉｏを有利に生産する特性
を有し、本発明方法に有効に利用し得るものである。

前記バチルス・ズブチリスＴＭ−１０５菌（以下ｒＴＭ
−１０５菌」という）は工業技術院微生物工業技術研究
所へ昭和６３年５月２日付、微生物受託番号、機工研菌
寄第１００１３号として寄託されている。

ＴＭ−１０５菌は、次の菌学的性質を有する。

ａ）形態 （１）細菌の形：桿状 （２）細胞の大きさ ０．５〜０．８μ×１．５〜３．０μ （３）多形性：なし く４）運動性：あり　側鞭毛を有する （５）胞子：あり、楕円ないし円柱芽胞であって、中立
芽胞である。

（６）ダラム染色性：陽性 ｂ）生育状態 ３０℃で培養し７日間にわたって観察した。

＋１）肉汁寒天平板培養： ３０°Ｃ３日後、粗造で４＋ｎ＋＋不規則円形である。

半球状で白色、不透明の粘稠を呈する。

（２）肉汁寒天斜面培養： 表面に生育し、不透明、乳白色後やや黄味。

（３）肉汁液体培養： 多量生育し、濁り後沈殿する。

（４）リドマス・ミルク： ペプトン化しｐＨはややアルカリ性を示す。

Ｃ）生理学的性質 （１）硝酸塩の還元：陽性 （２１ＶＰテスト：陽性 （３）インドールの生成：陽性 （４）デンプンの加水分解：陽性 （５）クエン酸の利用（Ｋｏｓｅｒ培地〕　培地性（６
）プロピオン酸の利用：陰性 （７）７％ＮａＣｌ２培地：生育 （８）色素の生産（肉汁寒天培地に１％のブドウ糖及び
チロシンを加え色素の生産を調べた）：陰性 （９）カゼイン分解：分解する。

（１０）カタラーゼ：陽性 （１１）嫌気培養：陽性 （１２）卵黄反応：陰性 （１３）チロシンの分解：陰性 （１４）馬尿酸塩の分解：陰性 （１５）オキシダーゼ：陽性 （１６）炭素源より酸の生成 グリセロール：陽性 Ｌ−アラビノース：陽性 Ｄ−キシロース：陽性 ガラクトース：陰性 Ｄ−グルコース：陽性 Ｄ−フラクトース：陽性 Ｄ−マンノース：陽性 イノシトール・陽性 マンニトール：陽性 ソルビトール、陽性 サリシン：陽性 マルトース・陽性 ラクトース：陽性 スクロース：陽性 トレハロース、陽性 デンプン：陽性 （１７）生育の範囲： ｐＨ：　５．０〜１０．　　Ｏ１最適ｐＨ＋７．２〜７
．５ 温度・１５〜５５°Ｃ（６０℃では生育せず）最適温度
＝２０〜２５℃ ｄ）サバロウド・デキストロース培地（デイフコ製）、
生育 以上の諸性質をバーシーズ・マニュアル・才ブ・デター
ミネイティブ・バタテリオロジー（Ｂｅｒｇｙ’ｓ　Ｍ
ａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｎｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌ−ｏｇｙｌ第８版、１９７４年の記載と
比較すると本菌株は好気性のグラム陽性桿菌で側鞭毛に
よる運動性を有することからバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ）属に属するものと判断される。バチルス属の中でも
馬尿酸塩の分解、生育温度、炭素源の利用性などの特徴
からバチルス・ズブチリスの一菌株と同定された。

本発明における使用微生物としては、ＴＭ−１０５菌は
、その−例であり、その自然的及び人工的変異株は勿論
、バチルス属に属する菌種で、後述の抗生物質Ｙ−９、
Ｙ−１０の生産能を有する微生物は、すべて本発明にお
いて使用することができる。

本発明を実施するに当っては、バチルス属に属する抗生
物質Ｙ−９、Ｙ−１０生産菌を、抗生物質を生産する通
常の方法で培養することができる。工業的に有利に生産
するには、抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０生産菌を好気的条
件下で各種栄養物質を含む培地で通気撹拌培養を行えば
よい。

培養条件及び培地の組成は、一般の抗生物質の製造に用
いられるものに準して選択すればよい。

即ち、培地は原則として炭素源、窒素源、無機塩を含み
、必要に応じて、ビタミン頚、先駆物質などを加えても
よい。炭素源としては、例えば、グルコース、アラビノ
ース、キシロース、澱粉、デキストリン、グリセリン、
マンニトール、有機酸、糖蜜、馬鈴薯などが、単独又は
、混合物として使用され、窒素源としては、例えばペプ
トン、大豆粉、コーンスチーブリカー、麦芽抽出物、ア
ミノ糖、米糖、麦芽、尿素、アンモニウム塩など又はこ
れらの混合物が用いられる。また必要に応じて、シリコ
ーン油、大豆油、界面活性剤等の消泡剤を加えてもよい
。

培地は液体培地が好ましく、培地のｐＨは約６．０〜約
８．０がよく、培養温度は約２０〜約３５°Ｃに調節す
るのがよい。

培養終了後、培養物から抗生物質￥−９、Ｙ−１０を分
離、採取する方法は、通常の発酵生産物を培養物から分
離採取する方法に準じて行えばよい。即ち、各種有機溶
媒による抽出法、各種活性吸着剤によるクロマトグラフ
ィーなどを適宜絡み合せて、抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０
を採取する。

（発明の実施例） 以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、こ
れらの実施例は本発明の範囲を何ら制限するものではな
い。

実施例Ｉ ＴＭ−１，０５菌を種培地（グルコース１％、ペプトン
０．５％、リン酸−カリウム０．０１％、硫酸マグネシ
ウム０．００５％、ｐＨ６，８）に３０°Ｃで２４時間
培養し、得られた培養液を発酵培地（組成は種培地と同
一）に植菌し、３０°Ｃで５日間培養した。

得られた培養液５℃より、遠心分離により菌体を除いた
後、ｐＨ２，０に調整し、生じた沈殿を遠心分離によっ
て集めた。これをメタノールで抽出し、メタノール抽出
区分を得た。メタノール抽出区分をシリカゲルＴＬＣに
付しく溶媒系：１−ブタノール：酢酸：水＝６５：１０
：２５（Ｖ／Ｖ／Ｖ））、活性画分をかきとりメタノー
ル溶出後、減圧上濃縮乾固し、粉末を得た。

得られた粉末をメタノールに溶解し、５ｈｅｎｓｈｕＰ
ａｋ　（センシュー科学製）ＯＤＳ−１（−４２５１を
充填した高圧カラムクロマトグラフィーにイ」シ、メタ
ノール、水：１０％ジエチルアミン一端酸緩衝液（ｐＨ
７，５）　／８　：　１　：　１　（Ｖ／Ｖ／Ｖ）　テ
溶出することにより、抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０がこの
順に溶出された。Ｙ−９、Ｙ−１０はそれぞれ更にセフ
ァデックスＬ　Ｈ−２０のカラムに付し、１００％メタ
ノールで溶出した。Ｙ−９２１ｍｇ及びＹ−１０１２ｍ
ｇが得られた。

かくして得られた抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０は以下に述
べるとおりの理化学的性質及び生物学的性質を有する新
規な抗生物質である。

（１）分子量及び分子式 ％式％） （２）紫外線吸収スペクトル λ：：ｇ”　　２２４．ｎｍ　（ＩＩＬ＋　１０５．４
）】２ ２７６ｒ＋ａ＋　（ＥｊＬ　　８．８）￥−１０ λｍ：：’　　２２４ｎｍ（Ｅｉｒ−９９，３）２７６
ｎｍ　（Ｅｊｃｎ、　　８．　７）（第１図参照） （３）赤外線吸収スペクトル ん’ＬＲ：　１７５０．１６５８．１５４０ｃｍ−’ん
’Ａ”Ａ；　　１７６０．１６６０．１５５０ｃｍ−’
（第２図参照） （４）溶剤に対する溶解性 メタノール、ジメチルホルムアミドに可溶、塩化メチレ
ン、エーテルに不溶 （５）呈色反応 ライドン−スミス、ニンヒドリン呈色反応陽性、モーリ
ツシコー反応陰性。

（６）水溶性アミノ酸組成（加水分解物のアミノ酸アナ
ライザーによる分析） Ｙ−９１２１１１，［１１１１１ Ｙ−１０１２１１０１１１１１ 加水分解は６Ｎ−ＨＣＩ２．１１０″Ｃ１８時間の条件
で行った。

（７）脂肪酸 Ｙ−９４−ヒドロキシヘキサデカン酸 分子量２７２　（ＴＭＳ化後ＥＩ分 析） Ｙ−１０４−ヒドロキシヘキサデカン酸分子量２７２　
（ＴＭＳ化後Ｅ１ 分析） 加水分解（３Ｎ　−ＨＣ、ｅ、１１０℃１８時間）物の
クロロホルム抽出物の分析 （８）核磁気共鳴スペクトル （第３図参照） 日本電子■製のＦＸ−９０で測定した。溶媒二重メタノ
ール。

上記の理化学的性質を有する抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０
は、類似の既知ペプチド抗生物質とは、その構成成分で
あるアミノ酸と脂肪酸の構造において異なる。即ち、抗
生物質Ｙ−９、Ｙ−１０をＦｅｎｇｙｃｉｎ類と比較す
ると、その水溶性アミノ酸組成はＦｅｎｇｙｃｉｎが３
Ｇ１ｕ、０Ｇ１ｎであると推定しているのに対し、Ｙ−
９、￥−１０は２ＧＬｕ、１Ｇ１ｎである点で異なり、
脂肪酸の構造においてＦｅｎｇｙｃｉｎがＣ１５からＣ
］、　８までの飽和又は不飽和脂肪酸であるのに対しＹ
−９、Ｙ−１０は４−ヒドロキシヘキザデカン酸が構成
脂肪酸である点で異なっている。既知抗生物質との差異
の詳細は、下記の第１表に示す通りである。

次に抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０の生物学的活性について
説明する。抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０はダラム陽性菌、
陰性菌、酵母、緑藻類には抗菌活性が無いが、糸状菌に
対して生育阻止作用を示す。その代表的な菌株に対する
抗菌活性は第２表の通りである。第２表の抗菌力テスト
はＹ−９２５０ｐｐｍ：Ｙ−１０１１５ｐｐｍを浸した
濾紙を用いる拡散法により行った。

抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０は、上記の如く、各種植物病
原糸状菌に対して優れた作用を示すことから、農業用殺
菌剤として使用することができる。本化合物を農業用殺
菌剤として使用する場合は、通常当該技術分野において
知られている農薬製剤と同様に適当な固体担体、液体担
体、乳化分散剤等を用いて粒剤、粉剤、乳剤、水和剤、
錠剤、油剤、噴霧剤、煙霧剤等の任意の剤型に製剤化し
て適用することができる。これらの担体としては、クレ
ー、カオリン、ベントナイト、酸性白土、珪藻土、炭酸
カルシウム、固体担体として、ニトロセルロース、デン
プン、アラビアゴム等が、また液体担体として水、メタ
ノール、エタノール、アセトン、ジメチルホルムアミド
、エチレングリコール等が挙げられる。また、製剤上、
一般に使用される補助剤、例えば、高級アルコールの硫
酸エステル、ポリオキシエチレン・アルキル・アリルエ
ーテル、アルキル・アリル・ソルビタン・モノラウレー
ト、アルキル・アリル・スルホン酸塩、第４級アンモニ
ウム塩、ポリアルキレンオキシド等を適宜配合すること
ができる。

有効成分の配合割合は、乳剤、水和剤としては１０〜９
０％程度が適当であり、粉剤、油剤等としては、０．１
〜１０％程度が適当であるが、使用目的によってこれら
の濃度を適宜増減してもよい。

また、本発明の薬剤は、他の殺菌剤や除草剤、殺虫剤、
肥料物質、土壌改良剤と適宜混合して用することができ
る・ 以下に、本発明を製剤例によって具体的に説明するが、
本発明はこれに何ら限定されるものではない。

なお、製剤例中「部」は重量部を表わす。

製剤例１ （水和剤） 抗生物質Ｙ−１０１０部、ラウリル硫酸ナトリウム５部
、ジナフチルメタンジスルホン酸ソーダホルマリン縮合
物２部及びクレー８３部を混合粉砕して水和剤１００部
を得た。

製剤例２ （乳剤） 抗生物質Ｙ−１０８部、エチレングリコール１０部、ジ
メチルホルムアミド２０部、アルキル・ジメチルベンジ
ル・アンモニウムクロリド１０部及びメタノール５２部
を混合溶解して乳剤１００部を得た。

次に、試験例により、本発明の農園芸用殺菌剤による各
種植物病害に対する防除効果を具体的に説明する。

試験例１ （イネいもち病に対する防除試験） 水稲籾（品種：愛知旭）を栽培用鉢に直播しく１０基／
鉢）、４葉期において製剤例１に準じて調製した水和剤
を所定濃度に希釈したものを１鉢当り５０ｍ１をスプレ
ーガンで補体に散布した。散布液が乾燥した後、オート
ミール培地（オートミール１ｇ、シヨ糖０．４ｇ、寒天
０．３ｇ、水２０ｍ１）で２８℃、１４日間培養したイ
ネいもち病菌（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ　ｏｒｙｚａｅ
）の胞子を懸濁液にして、接種箱内で補体に噴霧接種し
２ま た。

接種後、２４時間、２５°Ｃ１相対湿度９０％の接種箱
中に放置した後、接種箱外に出して放置したところ、接
種後５〜７日で発病した。

なお、防除価は、下記の計算方法に準じた。

この結果を第３表に示す。

鼠１１ 佐成化沿〕　腹鼓１麿介どＬ　阪匣匝〕Ｌ　薬室抗生物
質 Ｙ−９２００８５なし Ｙ−１０２００８７／／ １００　　　　　８１　　　　／／ 試験例２ 〔イネごま葉枯病に対する防除試験） 水稲籾（品種：愛知旭）を栽培用鉢に直播しく１０基／
鉢）、５葉期において製剤例１に準じて調製した水和剤
を所定濃度に希釈したものを１鉢当り５０ｍ１をスプレ
ーガンで補体に散布した。散布液が乾燥した後、ＰＳＡ
培地（ポテト煮汁２０ｍ１、シヨ糖０．４ｇ、寒天０．
３ｇ）で２８°Ｃ１１４日間培養したイネごま葉枯病菌
（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ　ｍ１ｙａｂｅａｎｕｓ）
の胞子を懸濁して、接種箱内で補体に噴霧接種した。

接種後、２４時間、２５°Ｃ１相対湿度９０％の接種箱
中に放置した後、接種箱外に出して放置したところ、接
種後３〜４日で発病した。

なお、防除価は下記の計算方法に準じた。

この結果を第４表に示す。

×１００ 夏Ａス 抗生物質 Ｙ−９２００８６なし １００　　　　　３　Ｑ　　　　／／ Ｙ−１０２００９０１／ １００　　　　　８２　　　　／／ トリアジン　　　５００　　　　　９９　　　　／／上
記の結果より、本発明の抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０又は
これらの混合物を有効成分として含有する薬剤は、各種
植物病害に対して、極めて高い防除価を示し且つ薬害が
認められないなど、農薬用殺菌剤として有効であること
が明らかにされた。

［発明の効果］ 本発明によれば、各種植物病原糸状菌に対して優れた作
用を示す新規抗生物質Ｙ−９及び￥−１０を提供するこ
とができる。

【図面の簡単な説明】

第１図（１）、（２）はそれぞれ抗生物質Ｙ−９、Ｙ−
１０の紫外線吸収スペクトルを示腰第２図（１）、（２
）はそれぞれ抗生物質Ｙ−９、￥−１０の赤外線吸収ス
ペクトルを示し、第３図（１）、（２）はそれぞれ抗生
物質Ｙ−９、Ｙ−１０の１３ｃ核６Ｒ気共鳴スペクトル
を示す。 第１図（１） 第１図（２） 区 の Σ−−− ト 区 の

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的及び生物学的性質を有することを特
   徴とする新規抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０物質 （１）分子量及び分子式 Ｙ−９　１４６２（ＦＡＢ−ＭＳ） Ｃ＿７＿２Ｈ＿１＿１＿０Ｎ＿１＿２Ｏ＿２＿０Ｙ−１
   ０　１４９０（ＦＡＢ−ＭＳ） Ｃ＿７＿４Ｈ＿１＿１＿４Ｎ＿１＿２Ｏ＿２＿０ （２）紫外線吸収スペクトル λ＾Ｍ＾ｅ＾Ｏ＾Ｈ＿ｍ＿ａ＿ｘ２２４ｎｍ（Ｅ＾１＾
   ％＿１＿ｃ＿ｍ１０５．４）２７６ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿
   １＿ｃ＿ｍ８．８）λ＾Ｍ＾ｅ＾Ｏ＾Ｈ＿ｍ＿ａ＿ｘ２
   ２４ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ９９．３）２７６ｎ
   ｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ８．７） （３）赤外線吸収スペクトル Ｙ−９ λ＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘ１７５０．１６５８．１５
   ４０ｃｍ＾−＾Ｙ−１０ λ＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘ１７６０、１６６０、１５
   ５０ｃｍ＾−＾１ （４）溶剤に対する溶解性 メタノール、ジメチルホルムアミドに可溶、塩化メチレ
   ン、エーテルに不溶 （５）呈色反応 ライドンースミス、ニンヒドリン呈色反応陽性、モーリ
   ッシュ反応陰性。 （６）水溶性アミノ酸組成 【アミノ酸配列があります】 （７）脂肪酸 Ｙ−９４−ヒドロキシヘキサデカン酸 分子量２７２（ＴＭＳ化後ＥＩ分析） Ｙ−１０４−ヒドロキシヘキサデカン酸 分子量２７２（ＴＭＳ化後ＥＩ分析） ２、バチルス属に属する抗生物質Ｙ−９、Ｙ−１０生産
   菌を培養し、その培養物から新規抗生物質Ｙ−９、Ｙ−
   １０を分離、採取することを特徴とする新規抗生物質Ｙ
   −９、Ｙ−１０の製造法。 ３、バチルス・ズブチリスＴＭ−１０５ （ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＴＭ−１０５、微
   工研菌寄第１００１３号）を、同化可能な炭素源及び窒
   素源含有栄養培地中、好気的条件下で培養する請求項２
   記載の方法。 ４、新規抗生物質Ｙ−９又はＹ−１０を有効成分として
   含有する植物病害防除剤。