JPH03112490A - Ｌ―ホモフェニルアラニンの製造方法 - Google Patents
Ｌ―ホモフェニルアラニンの製造方法Info
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- JPH03112490A JPH03112490A JP24883689A JP24883689A JPH03112490A JP H03112490 A JPH03112490 A JP H03112490A JP 24883689 A JP24883689 A JP 24883689A JP 24883689 A JP24883689 A JP 24883689A JP H03112490 A JPH03112490 A JP H03112490A
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- homophenylalanine
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- acid
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
本発明は、Ｌ−ホモフェニルアラニンの製造方法に間す
る。Ｌ−ホモフェニルアラニンは、たとえばＡＣＥイン
ヒビターの前駆体として有用な下記式（＾） で示される化合物の原料として極めて有用である。
る。Ｌ−ホモフェニルアラニンは、たとえばＡＣＥイン
ヒビターの前駆体として有用な下記式（＾） で示される化合物の原料として極めて有用である。
〈従来の技術〉
従来、Ｌ−ホモフェニルアラニンの製造方法としては、
光学活性なマンデル酸とＤＬ−ホモフェニルアラニンか
らＤＬ−ホモフェニルアラニン・光学活性マンデル酸複
合体を光学分割し、析出したＬ−ホモフェニルアラニン
・Ｄ（−）−マンデル酸複合体からＬ−ホモフェニルア
ラニンを採取する方法（特開昭６３−１４５２５６号公
報）およびアシラーゼを用いたＮ−アセチル−ＤＬ−ホ
モフェニルアラニンの不斉加水分解法（Ｍｅｎ、 Ｆａ
ｃ、 Ｓｅｔ、、 Ｋ７ｕｓｂ＋＋ Ｕ！１１．、 Ｓ
ｅｔ、 Ｃ。
光学活性なマンデル酸とＤＬ−ホモフェニルアラニンか
らＤＬ−ホモフェニルアラニン・光学活性マンデル酸複
合体を光学分割し、析出したＬ−ホモフェニルアラニン
・Ｄ（−）−マンデル酸複合体からＬ−ホモフェニルア
ラニンを採取する方法（特開昭６３−１４５２５６号公
報）およびアシラーゼを用いたＮ−アセチル−ＤＬ−ホ
モフェニルアラニンの不斉加水分解法（Ｍｅｎ、 Ｆａ
ｃ、 Ｓｅｔ、、 Ｋ７ｕｓｂ＋＋ Ｕ！１１．、 Ｓ
ｅｔ、 Ｃ。
１３．８９ （１９８１））などが知られている。
〈発明が解決しようとする課題〉
しかし、酵素を用いるＬ−ホモフェニルアラニンの製造
方法では、反応基質の濃度が０．４〜０．５％と低いこ
とに難点があり、また、光学分割剤を用いた分割法では
、分割剤が天然物で高価であること、さらに光学純度の
高いＬ−ホモフェニルアラニンが高収率で得られないこ
とに難点がある。
方法では、反応基質の濃度が０．４〜０．５％と低いこ
とに難点があり、また、光学分割剤を用いた分割法では
、分割剤が天然物で高価であること、さらに光学純度の
高いＬ−ホモフェニルアラニンが高収率で得られないこ
とに難点がある。
本発明の目的は、光学純度の高いＬ−ホモフェニルアラ
ニンを効率よくかつ安価に製造する方法を提供すること
にある。
ニンを効率よくかつ安価に製造する方法を提供すること
にある。
く課題を解決するための手段〉
上記目的は、以下の本発明により達成される。
すなわち、本発明は、ベンジルピルビン酸をＬ−ホモフ
ェニルアラニンに変換する能力を有しかつコリネバクテ
リウム（Ｃｏｒｙｌｅｂａｃｔｅｒｉｗｍｌ属、ブレビ
バクテリウム（Ｂｒｅｖｌｂａｃｔｃｒｉｔｍｌ属、バ
シラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ミクロバクテリウム（
菖１ｃｒ。
ェニルアラニンに変換する能力を有しかつコリネバクテ
リウム（Ｃｏｒｙｌｅｂａｃｔｅｒｉｗｍｌ属、ブレビ
バクテリウム（Ｂｒｅｖｌｂａｃｔｃｒｉｔｍｌ属、バ
シラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ミクロバクテリウム（
菖１ｃｒ。
ｂｓｃｔｅｒｌ＋ｍｌ属、シトロバクタ−（Ｃ１ｔｒｏ
ｂｉｃｔｃｒｌ属、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂ
ｘｃｔｅｒｌ属またはエシェリヒア（Ｅ＠ｃｈｅｒｌｃ
ｈｉａｌ属に属する微生物より選ばれた少なくとも１種
の微生物の培養物、菌体またはその処理物を、ベンジル
ピルビン酸に作用させてＬ−ホモフェニルアラニンを生
成蓄積せしめ、反応液からＬ−ホモフェニルアラニンを
単離採取することを特徴とするＬ−ホモフェニルアラニ
ンの製造方法である。
ｂｉｃｔｃｒｌ属、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂ
ｘｃｔｅｒｌ属またはエシェリヒア（Ｅ＠ｃｈｅｒｌｃ
ｈｉａｌ属に属する微生物より選ばれた少なくとも１種
の微生物の培養物、菌体またはその処理物を、ベンジル
ピルビン酸に作用させてＬ−ホモフェニルアラニンを生
成蓄積せしめ、反応液からＬ−ホモフェニルアラニンを
単離採取することを特徴とするＬ−ホモフェニルアラニ
ンの製造方法である。
以下、本発明の構成を詳細に説明する。
本発明においてはベンジルピルビン酸をＬ−ホモフェニ
ルアラニンに変換する能力を有しかツコリネバクテリウ
ム（Ｃｏｒ７ｎｅｂａｃｔｃｒｌ＋＋ｍｌ属、ブレビバ
クテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉ＋＋ｍｌ属、バ
シラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌ属、ミクロバクテリウム（
Ｍｉｃｒ。
ルアラニンに変換する能力を有しかツコリネバクテリウ
ム（Ｃｏｒ７ｎｅｂａｃｔｃｒｌ＋＋ｍｌ属、ブレビバ
クテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉ＋＋ｍｌ属、バ
シラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌ属、ミクロバクテリウム（
Ｍｉｃｒ。
ｂａｃｔｅｒｉｕｍｌ属、シトロバクタ−（Ｃｉｔｒｏ
ｂａｃｔｅｒｌ属、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂ
ａｃｔｅｒｌ属またはエシェリヒア（Ｅｓｃｈｃｒｉｃ
ｂｌａｌ属に属する微生物より選ばれた少なくとも１種
の微生物を用いる。
ｂａｃｔｅｒｌ属、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂ
ａｃｔｅｒｌ属またはエシェリヒア（Ｅｓｃｈｃｒｉｃ
ｂｌａｌ属に属する微生物より選ばれた少なくとも１種
の微生物を用いる。
かかる微生物であればいずれでも使用できる。
その代表的なものを例示すれば、たとえば、コリネバク
テリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０３２、コリネバ
クテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ２１６５１、コリネ
バクテリウム・アセトアシドフィルムＡＴＣＣ１３８７
０、コリネバクテリウム・アセトアシドフィルムＡＴＣ
Ｃ２１２７０、ブレビバクテリウム・ラクトファーメン
タムＡＴＣＣ１３８６９、ブレビバクテリウム・フラブ
ムＡＴＣＣ１４０６７、ブレビバクテリウム・ディバリ
カタムＡＴＣＣ１４０２０、アースロバクター・シトレ
ウスＡＴＣＣ１１６２４、シクロバクテリウム・アンモ
ニアフィルムＡＴＣＣ１５３５４、バシラス・サティリ
スＡＴＣＣ６０５１、エシェリヒア・コリーＡＴＣＣ１
０７９８、などが挙げられる。
テリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０３２、コリネバ
クテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ２１６５１、コリネ
バクテリウム・アセトアシドフィルムＡＴＣＣ１３８７
０、コリネバクテリウム・アセトアシドフィルムＡＴＣ
Ｃ２１２７０、ブレビバクテリウム・ラクトファーメン
タムＡＴＣＣ１３８６９、ブレビバクテリウム・フラブ
ムＡＴＣＣ１４０６７、ブレビバクテリウム・ディバリ
カタムＡＴＣＣ１４０２０、アースロバクター・シトレ
ウスＡＴＣＣ１１６２４、シクロバクテリウム・アンモ
ニアフィルムＡＴＣＣ１５３５４、バシラス・サティリ
スＡＴＣＣ６０５１、エシェリヒア・コリーＡＴＣＣ１
０７９８、などが挙げられる。
上記微生物の培養は通常の条件下で行うことができる。
これらの微生物の培養には、通常これらの菌が責化しう
る有機および無機の炭素源、窒素源およびビタミン、ミ
ネラルなどを適宜配合した培地を用いる。
る有機および無機の炭素源、窒素源およびビタミン、ミ
ネラルなどを適宜配合した培地を用いる。
すなわち、栄養培地の炭素源としては、たとえばグルコ
ース、フルクトース、シュクロース、水溶性デンプンな
どの糖類、グリセロール、ソルビトール、マンニトール
などの糖アルコール類、フマール酸、乳酸などの有機酸
を使用することができる。炭素源の添加量は通常、培地
に対して０．１〜２０％程度が好ましい、窒素源として
は、たとえば硫酸アンモニウム、塩化アンモニウムなど
の無機酸のアンモニウム塩、フマル酸アンモニウム塩な
どの有機酸のアンモニウム塩、コーンスチープリカー、
酵母エキス、カゼイン加水分解物などの天然有機窒素源
などを使用することができる。窒素源の添加量は、通常
、培地に対して０．１〜１０％程度が好ましい。
ース、フルクトース、シュクロース、水溶性デンプンな
どの糖類、グリセロール、ソルビトール、マンニトール
などの糖アルコール類、フマール酸、乳酸などの有機酸
を使用することができる。炭素源の添加量は通常、培地
に対して０．１〜２０％程度が好ましい、窒素源として
は、たとえば硫酸アンモニウム、塩化アンモニウムなど
の無機酸のアンモニウム塩、フマル酸アンモニウム塩な
どの有機酸のアンモニウム塩、コーンスチープリカー、
酵母エキス、カゼイン加水分解物などの天然有機窒素源
などを使用することができる。窒素源の添加量は、通常
、培地に対して０．１〜１０％程度が好ましい。
また無機塩類としては、たとえばリン酸カリウム、リン
酸ナトリウムなどのリン酸アルカリ金属、塩化カリウム
、塩化ナトリウムなどの塩化アルカリ金属、硫酸マグネ
シウム、硫酸第１鉄などの金属硫酸塩などを使用するの
が好ましい。
酸ナトリウムなどのリン酸アルカリ金属、塩化カリウム
、塩化ナトリウムなどの塩化アルカリ金属、硫酸マグネ
シウム、硫酸第１鉄などの金属硫酸塩などを使用するの
が好ましい。
無機塩類の添加量は、通常、培地に対して０．００１〜
１％程度が好適である。微生物の培養条件は菌の種類に
よるが、ＰＨを通常５．０〜９．０、好ましくは７．０
〜８．０とし温度を通常、２０〜４０℃、好ましくは３
０〜３７℃として好気的に２０〜７２時間培養するのが
通常である。
１％程度が好適である。微生物の培養条件は菌の種類に
よるが、ＰＨを通常５．０〜９．０、好ましくは７．０
〜８．０とし温度を通常、２０〜４０℃、好ましくは３
０〜３７℃として好気的に２０〜７２時間培養するのが
通常である。
本発明の反応においては、これらの微生物の培養物、菌
体まなはその処理物を用いる。好ましくは菌体懸濁液ま
たは菌体処理物を用いる。
体まなはその処理物を用いる。好ましくは菌体懸濁液ま
たは菌体処理物を用いる。
ここでいう菌体懸濁液とは、培養して得られた菌体を遠
心分離または濾過などにより取得したもので、菌体処理
物とは、培養して得られた菌体を超音波処理したものや
、たとえば公知の方法によりアクリルアミドゲル担体な
どに固定化したもの、洗浄菌体、凍結乾燥菌体、菌体抽
出物などが挙げられる。
心分離または濾過などにより取得したもので、菌体処理
物とは、培養して得られた菌体を超音波処理したものや
、たとえば公知の方法によりアクリルアミドゲル担体な
どに固定化したもの、洗浄菌体、凍結乾燥菌体、菌体抽
出物などが挙げられる。
反応基質であるベンジルピルビン酸の反応液中での濃度
は、通常０．１〜５％程度用いることができる。添加方
法に関しては、−括あるいは分割添加のどちらでもよい
。
は、通常０．１〜５％程度用いることができる。添加方
法に関しては、−括あるいは分割添加のどちらでもよい
。
反応温度は、通常２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５
℃である０反応液のＰＨは、通常５〜１１．０、好まし
くは７．５〜９．０に保たれる。
℃である０反応液のＰＨは、通常５〜１１．０、好まし
くは７．５〜９．０に保たれる。
反応時間は反応温度によって異なるが、通常３０℃で３
０〜９０時間である。
０〜９０時間である。
反応方式としては、培養終了液に基質を添加し、好気的
に振とうする方法と、菌体懸濁液あるいは菌体処理物に
基質を添加し、好気的に振とうする方法があり、どちら
も採用可能であるが後者の方が良好な結果を与える。
に振とうする方法と、菌体懸濁液あるいは菌体処理物に
基質を添加し、好気的に振とうする方法があり、どちら
も採用可能であるが後者の方が良好な結果を与える。
また、反応時間の短縮あるいはＬ−ホモフェニルアラニ
ンの蓄積量の増加をはかるために界面活性剤および補酵
素などの存在下に実施するのが好ましい、ここで界面活
性剤としては、たとえば、ポリエチレングリコール・Ｐ
−イソオクチルフェニルエーテル、臭化セチルトリメチ
ルアンモニウムなどを用いることができ、その使用量は
、反応液に対しｏ、ｏｏｏｉ〜１％程度とするのが好ま
しい、また、補酵素としては、たとえば、ピリドキサー
ルリン酸を挙げることができ、その使用量は反応液に対
して１〜１．０００μＭ程度の濃度で用いるのが好まし
い。
ンの蓄積量の増加をはかるために界面活性剤および補酵
素などの存在下に実施するのが好ましい、ここで界面活
性剤としては、たとえば、ポリエチレングリコール・Ｐ
−イソオクチルフェニルエーテル、臭化セチルトリメチ
ルアンモニウムなどを用いることができ、その使用量は
、反応液に対しｏ、ｏｏｏｉ〜１％程度とするのが好ま
しい、また、補酵素としては、たとえば、ピリドキサー
ルリン酸を挙げることができ、その使用量は反応液に対
して１〜１．０００μＭ程度の濃度で用いるのが好まし
い。
本発明の反応はアミノ基供与体としてＬ−グルタミン酸
存在下で行うことにより、さらに効率よく反応が進行す
る。Ｌ−グルタミン酸を添加する場合の添加量は、培地
に対して０．１〜２０％が好ましい。
存在下で行うことにより、さらに効率よく反応が進行す
る。Ｌ−グルタミン酸を添加する場合の添加量は、培地
に対して０．１〜２０％が好ましい。
かくして、本発明の反応により、ベンジルピルビン酸か
らＬ−ホモフェニルアラニンが生成する。
らＬ−ホモフェニルアラニンが生成する。
かくして生成したＬ−ホモフェニルアラニンを反応液か
ら単離するには、一般的な分離精製方法を用いればよい
、たとえば、分収用液クロカラムを用いて分取する方法
、またはフェニルヒドラゾン化して、単離する方法など
で目的物を単離採取できる。
ら単離するには、一般的な分離精製方法を用いればよい
、たとえば、分収用液クロカラムを用いて分取する方法
、またはフェニルヒドラゾン化して、単離する方法など
で目的物を単離採取できる。
〈実施例〉
以下、実施例を挙げて、本発明をさらに具体的に説明す
る。
る。
なお、実施例中、Ｌ−ホモフェニルアラニンの生成量お
よび光・学純度は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）を用い下記の条件で分析した（光学純度分析はＪ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＣｂｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈＦ、
２０２ （１９８０）３７５ ３７９゜記載の方法
による）。
よび光・学純度は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）を用い下記の条件で分析した（光学純度分析はＪ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＣｂｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈＦ、
２０２ （１９８０）３７５ ３７９゜記載の方法
による）。
Ｌ−ホモフェニルアラミンの生成量
カラム ： カプセルバックＣｌ５（資生堂）液出液
：０．０１％Ｈ３ＰＯ４／アセトニトリル＝８３／１７ 流量： １．５ ｍｌ ／１ｌｉｎ 検 出 ： ＵＶ２１４ｎｎ Ｌ−ホモフェニルアラミンの光学純度 カラム ： Ａ−３０２０ＤＳ（ＹＭＣ）液出液 ：
０．０５％Ｈ３ＰＯ４／アセトニトリル＝６５／３５ 流量： １，０ｍｌ／１ｌｉｎ 誘導化試薬： ２，３，４．６−ｔｃｔｒａ−０−ａｃ
ｅｔ７１−β−ｇｌ＋＋ｃｏｐ７ｒａｎｏｓ７１１ｓｏ
ｔｈｌｏｃ７ａｍａｔｃ（ＧＩＴＣ） 検 出 ： ＵＶ２５４ｎＩＭまた、実施例中
、収率は反応基質に対する生成したＬ−ホモフェニルア
ラニンのモル％で表わす。
：０．０１％Ｈ３ＰＯ４／アセトニトリル＝８３／１７ 流量： １．５ ｍｌ ／１ｌｉｎ 検 出 ： ＵＶ２１４ｎｎ Ｌ−ホモフェニルアラミンの光学純度 カラム ： Ａ−３０２０ＤＳ（ＹＭＣ）液出液 ：
０．０５％Ｈ３ＰＯ４／アセトニトリル＝６５／３５ 流量： １，０ｍｌ／１ｌｉｎ 誘導化試薬： ２，３，４．６−ｔｃｔｒａ−０−ａｃ
ｅｔ７１−β−ｇｌ＋＋ｃｏｐ７ｒａｎｏｓ７１１ｓｏ
ｔｈｌｏｃ７ａｍａｔｃ（ＧＩＴＣ） 検 出 ： ＵＶ２５４ｎＩＭまた、実施例中
、収率は反応基質に対する生成したＬ−ホモフェニルア
ラニンのモル％で表わす。
実施例１
グルコース２％、ポリペプトン１％、ポリペプトン８１
．５％、イーストエキス０．１５％、リン酸二水素カリ
ウム０．４％からなる培地５０ｍ１＜ ｐ Ｈ７，５）
を５００ｍ１の振とうフラスコに入れ、１２０℃で１０
分間減菌した。この培地にコリネバクテリウム・グルタ
ミカムＡＴＣＣ１３０３２、Ａ’Ｉ’ＣＣ２１６５１、
コリネバクテリウム・アセトアシドフィルムＡＴＣＣ１
３８７０、ＡＴＣＣ２１２７０、ブレビバクテリウム・
ラクトファーメンタムＡＴＣＣ１３８６９、ブレビバク
テリウム・フラブムＡＴＣＣ１４０６７、ブレビバクテ
リウム・ディバリカタムＡＴＣＣ１４０２０、アースロ
バクター・シトレウスＡＴＣＣ１１６２４、ミクロバク
テリウム・アンモニアフィムＡＴＣＣ１５３５４，バシ
ラス・サティリスＡＴＣＣ６０５１、エシェリヒア・コ
リーＡＴＣＣ１０７９８を各々１白金耳接種後、３０℃
で７２時時間上う培養した。
．５％、イーストエキス０．１５％、リン酸二水素カリ
ウム０．４％からなる培地５０ｍ１＜ ｐ Ｈ７，５）
を５００ｍ１の振とうフラスコに入れ、１２０℃で１０
分間減菌した。この培地にコリネバクテリウム・グルタ
ミカムＡＴＣＣ１３０３２、Ａ’Ｉ’ＣＣ２１６５１、
コリネバクテリウム・アセトアシドフィルムＡＴＣＣ１
３８７０、ＡＴＣＣ２１２７０、ブレビバクテリウム・
ラクトファーメンタムＡＴＣＣ１３８６９、ブレビバク
テリウム・フラブムＡＴＣＣ１４０６７、ブレビバクテ
リウム・ディバリカタムＡＴＣＣ１４０２０、アースロ
バクター・シトレウスＡＴＣＣ１１６２４、ミクロバク
テリウム・アンモニアフィムＡＴＣＣ１５３５４，バシ
ラス・サティリスＡＴＣＣ６０５１、エシェリヒア・コ
リーＡＴＣＣ１０７９８を各々１白金耳接種後、３０℃
で７２時時間上う培養した。
培養後、培養液から遠心分離により集菌した菌体をイオ
ン交換水で１回洗浄後、凍結保存した。
ン交換水で１回洗浄後、凍結保存した。
ベンジルピルビン酸１％、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム
２％、ピリドキサールリン酸５０μＭ、ポリエチレング
リコール−ｐ−イソオクチルフェニルエーテルｌ ｖ
／ ｖ％の０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，５）溶
液５０ｍ１に、得られた凍結保存菌体を十分に懸濁した
。この懸濁液を３０℃で７２時間反応させたのちのＬ−
ホモフェニルアラニンの生成量は表１のとおりであった
。 なお、生成したＬ〜ホモフェニルアラニンの光学純
度は、全ての場合においてほぼ１００％であった。
２％、ピリドキサールリン酸５０μＭ、ポリエチレング
リコール−ｐ−イソオクチルフェニルエーテルｌ ｖ
／ ｖ％の０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，５）溶
液５０ｍ１に、得られた凍結保存菌体を十分に懸濁した
。この懸濁液を３０℃で７２時間反応させたのちのＬ−
ホモフェニルアラニンの生成量は表１のとおりであった
。 なお、生成したＬ〜ホモフェニルアラニンの光学純
度は、全ての場合においてほぼ１００％であった。
表
実施例２
グルコース４０ｇ、
硫酸アンモニウム２０ｇ、
リン酸二水素カリウム２Ｉｒ、塩化ナトリウム１ｇ、尿
素５ｇ、硫酸第１鉄７水和物を２０■、硫酸マンガン２
０Ｉｌｆ、ビオチン５０ｄｌを含有する２１の液体培地
を５１ジャーファーメンタ−に入れ、１１５℃で２０分
間減菌した。この５１のジャーファーメンタ−にあらか
じめ同培地１００ｍ１中、３０℃で７２時時間上う培養
したコリネバクテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０
３２を接種し、３０℃で２５時間通気撹拌培養を行った
。培養後、培養液から遠心分離によって集菌した菌体を
イオン交換水で１回洗浄し、凍結保存した。
素５ｇ、硫酸第１鉄７水和物を２０■、硫酸マンガン２
０Ｉｌｆ、ビオチン５０ｄｌを含有する２１の液体培地
を５１ジャーファーメンタ−に入れ、１１５℃で２０分
間減菌した。この５１のジャーファーメンタ−にあらか
じめ同培地１００ｍ１中、３０℃で７２時時間上う培養
したコリネバクテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０
３２を接種し、３０℃で２５時間通気撹拌培養を行った
。培養後、培養液から遠心分離によって集菌した菌体を
イオン交換水で１回洗浄し、凍結保存した。
ベンジルピルビン酸１０ｇ、Ｌ−グルタミン酸ナトリウ
ム２０ｇ、ピリドキサールリン酸５０μＭ、ポリエチレ
ングリコール−ｐ−イソオクチルフェニルエーテルＩＶ
／Ｖ％を０．２Ｍのリン酸バッファー５０ｍ１（ｐＨ７
，５）に溶解し、水酸化ナトリウム水溶液でＰ Ｈ７，
５に調整した。
ム２０ｇ、ピリドキサールリン酸５０μＭ、ポリエチレ
ングリコール−ｐ−イソオクチルフェニルエーテルＩＶ
／Ｖ％を０．２Ｍのリン酸バッファー５０ｍ１（ｐＨ７
，５）に溶解し、水酸化ナトリウム水溶液でＰ Ｈ７，
５に調整した。
全体を１ｊ！に希釈後、この基質溶液に得られた凍結保
存菌体を十分に懸濁後、３０℃で５０時間、１１のジャ
ーファーメンタ−中で撹拌した。
存菌体を十分に懸濁後、３０℃で５０時間、１１のジャ
ーファーメンタ−中で撹拌した。
反応後、遠心分能により、固型物を分離後、得られた固
型物を０． Ｉ Ｎ塩酸１℃で十分に洗浄した。さらに
遠心分離により菌体を分離後、溶液側を全濃縮し、過剰
の塩酸を留去した。残渣を５００ｍ１の水に溶解し、水
酸化ナトリウム水溶液でｐＨ５〜６に調整した。析出物
をｒ過後、水洗して４０℃で減圧乾燥することによりＬ
−ホモフェニルアラニン８．３ｇを得た（単離収率８３
％、光学純度９９％）。
型物を０． Ｉ Ｎ塩酸１℃で十分に洗浄した。さらに
遠心分離により菌体を分離後、溶液側を全濃縮し、過剰
の塩酸を留去した。残渣を５００ｍ１の水に溶解し、水
酸化ナトリウム水溶液でｐＨ５〜６に調整した。析出物
をｒ過後、水洗して４０℃で減圧乾燥することによりＬ
−ホモフェニルアラニン８．３ｇを得た（単離収率８３
％、光学純度９９％）。
〈発明の効果〉
本発明によれば、ベンジルピルビン酸からＬ−ホモフェ
ニルアラニンを高収率かつ高純度で効率よく得ることが
できる。また、反応基質濃度を高くすることができるの
で、反応時間を短縮できかつ収率も向上できる。さらに
、高価な光学分離剤が不要であり、安価に製造すること
ができる。
ニルアラニンを高収率かつ高純度で効率よく得ることが
できる。また、反応基質濃度を高くすることができるの
で、反応時間を短縮できかつ収率も向上できる。さらに
、高価な光学分離剤が不要であり、安価に製造すること
ができる。
Claims (1)
- ベンジルピルビン酸をＬ−ホモフェニルアラニンに変
換する能力を有しかつコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎ
ｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒ
ｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、バシラス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ）属、ミクロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ）属、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔ
ｅｒ）属、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ）属またはエシエリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）
属に属する微生物より選ばれた少なくとも１種の微生物
の培養物、菌体またはその処理物を、ベンジルピルビン
酸に作用させてＬ−ホモフェニルアラニンを生成蓄積せ
しめ、反応液からＬ−ホモフェニルアラニンを単離採取
することを特徴とするＬ−ホモフェニルアラニンの製造
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24883689A JPH03112490A (ja) | 1989-09-25 | 1989-09-25 | Ｌ―ホモフェニルアラニンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24883689A JPH03112490A (ja) | 1989-09-25 | 1989-09-25 | Ｌ―ホモフェニルアラニンの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03112490A true JPH03112490A (ja) | 1991-05-14 |
Family
ID=17184146
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24883689A Pending JPH03112490A (ja) | 1989-09-25 | 1989-09-25 | Ｌ―ホモフェニルアラニンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03112490A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000037631A1 (en) * | 1998-12-22 | 2000-06-29 | University College Dublin, National University Of Ireland, Dublin | Process for the production of enzymes with altered catalytic activity relative to an amino acid substrate and enzymes so produced |
| US6146859A (en) * | 1999-08-27 | 2000-11-14 | Academia Sinica | Facile synthesis of L-homophenylalanine by equilibrium shift enzymatic reaction using engineered tyrosine aminotransferase |
| JP2010132049A (ja) * | 2008-12-02 | 2010-06-17 | Ichiro Nishizaki | コンクリート浮体の製造方法 |
-
1989
- 1989-09-25 JP JP24883689A patent/JPH03112490A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000037631A1 (en) * | 1998-12-22 | 2000-06-29 | University College Dublin, National University Of Ireland, Dublin | Process for the production of enzymes with altered catalytic activity relative to an amino acid substrate and enzymes so produced |
| US6146859A (en) * | 1999-08-27 | 2000-11-14 | Academia Sinica | Facile synthesis of L-homophenylalanine by equilibrium shift enzymatic reaction using engineered tyrosine aminotransferase |
| JP2010132049A (ja) * | 2008-12-02 | 2010-06-17 | Ichiro Nishizaki | コンクリート浮体の製造方法 |
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