JPH03112491A - Ｌ―ホモフェニルアラニンの製法 - Google Patents
Ｌ―ホモフェニルアラニンの製法Info
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- JPH03112491A JPH03112491A JP24883789A JP24883789A JPH03112491A JP H03112491 A JPH03112491 A JP H03112491A JP 24883789 A JP24883789 A JP 24883789A JP 24883789 A JP24883789 A JP 24883789A JP H03112491 A JPH03112491 A JP H03112491A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
本発明は、Ｌ−ホモフェニルアラニンの製造方法の関す
る。Ｌ−ホモフェニルアラニンは、たとえばＡＣＥイン
ヒビターの前駆体として、有用な下記式（Ａ） で示される化合物の原料として極めて有用である。
る。Ｌ−ホモフェニルアラニンは、たとえばＡＣＥイン
ヒビターの前駆体として、有用な下記式（Ａ） で示される化合物の原料として極めて有用である。
〈従来の技術〉
従来、Ｌ−ホモフェニルアラニンの製造方法としては、
光学活性なマンデル酸とＤＬ−ホモフェニルアラニンか
らＤＬ−ホモフェニルアラニン・光学活性マンデル酸複
合体を光学分割し、析出したＬ−ホモフェニルアラニン
・Ｄ （−）−マンデル酸複合体からＬ−ホモフェニル
アラニンを採取する方法（特開昭６３−１４５２５６号
公報）およびアシラーゼを用いたＮ−アセチル−ＤＬ−
ホモフェニルアラニンの不斉加水分解法（ｌ１ｃｍ、
Ｆａｃ、 Ｓｅｔ、、 Ｋｙｓｓｂ＊ Ｕｎｉ、、 Ｓ
ｅｒ、仁１３．８９ ＜１９８１））などが知られてい
る。
光学活性なマンデル酸とＤＬ−ホモフェニルアラニンか
らＤＬ−ホモフェニルアラニン・光学活性マンデル酸複
合体を光学分割し、析出したＬ−ホモフェニルアラニン
・Ｄ （−）−マンデル酸複合体からＬ−ホモフェニル
アラニンを採取する方法（特開昭６３−１４５２５６号
公報）およびアシラーゼを用いたＮ−アセチル−ＤＬ−
ホモフェニルアラニンの不斉加水分解法（ｌ１ｃｍ、
Ｆａｃ、 Ｓｅｔ、、 Ｋｙｓｓｂ＊ Ｕｎｉ、、 Ｓ
ｅｒ、仁１３．８９ ＜１９８１））などが知られてい
る。
〈発明が解決しようとする課題〉
しかし、酵素を用いるＬ−ホモフェニルアラニンの製造
では、反応基質の濃度が０．４〜０．５％と低いことに
難点があり、また、光学分割剤を用いた分割法では分割
剤が天然物で高価であること、さらに光学純度の高いＬ
−ホモフェニルアラニンが高収率で得られないことに難
点がある。
では、反応基質の濃度が０．４〜０．５％と低いことに
難点があり、また、光学分割剤を用いた分割法では分割
剤が天然物で高価であること、さらに光学純度の高いＬ
−ホモフェニルアラニンが高収率で得られないことに難
点がある。
本発明の目的は、光学純度の高いＬ−ホモフェニルアラ
ニンを効率よくかつ安価に製造する方法を提供すること
にある。
ニンを効率よくかつ安価に製造する方法を提供すること
にある。
く課題を解決するための手段〉
上記目的は、以下の本発明により達成される。
すなわち、本発明は、ベンジル乳酸をＬ−ホモフェニル
アラニンに変換する能力を有しかつコリネバクテリウム
（Ｃｏｒｙ＋＋ｅｂａｃｔｅｒｉｗｍｌ属、ブレビバク
テリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｌａｍｌ属、バシラ
ス（Ｂａｃｉｌ１ｍｓｌ属、ミクロバクテリウム（璽ｉ
ｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌ属またはアースロバフタ−
（Ａｒｔｋｒｏｂａｃｔｅｒｌ属に属する微生物より選
ばれた少なくとも１種の微生物の培養物、菌体またはそ
の処理物をベンジル乳酸に作用させてＬ−ホモフェニル
アラニンを生成蓄積せしめ、反応液からＬ−ホモフェニ
ルアラニンを単離採取することを特徴とするＬ−ホモフ
ェニルアラニンの製法である。
アラニンに変換する能力を有しかつコリネバクテリウム
（Ｃｏｒｙ＋＋ｅｂａｃｔｅｒｉｗｍｌ属、ブレビバク
テリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｌａｍｌ属、バシラ
ス（Ｂａｃｉｌ１ｍｓｌ属、ミクロバクテリウム（璽ｉ
ｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌ属またはアースロバフタ−
（Ａｒｔｋｒｏｂａｃｔｅｒｌ属に属する微生物より選
ばれた少なくとも１種の微生物の培養物、菌体またはそ
の処理物をベンジル乳酸に作用させてＬ−ホモフェニル
アラニンを生成蓄積せしめ、反応液からＬ−ホモフェニ
ルアラニンを単離採取することを特徴とするＬ−ホモフ
ェニルアラニンの製法である。
以下、本発明の構成を詳細に説明する。
本発明で原料として使用するベンジル乳酸は８体、ラセ
ミ体のいずれでもよい０通常は工業的に有利なラセミ体
を用いる。
ミ体のいずれでもよい０通常は工業的に有利なラセミ体
を用いる。
本発明においてはベンジル乳酸をＬ−ホモフェニルアラ
ニンに変換する能力を有しかつコリネバクテリウム（Ｃ
ｏｒｙ＋＋ｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ブレビバクテリ
ウム［ＢｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｌＪ［、バシラス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌ属、ミクロバクテリウム（Ｍｉｃ
ｒｏｂａｃｔｃｒ１ｗ＋ａｌ属またはアースロバフタ−
（Ａｒｔｂｒｏｂａｃｔｃｒｌ属に属する微生物より選
ばれた少なくとも１種の微生物を用いる。
ニンに変換する能力を有しかつコリネバクテリウム（Ｃ
ｏｒｙ＋＋ｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ブレビバクテリ
ウム［ＢｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｌＪ［、バシラス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌ属、ミクロバクテリウム（Ｍｉｃ
ｒｏｂａｃｔｃｒ１ｗ＋ａｌ属またはアースロバフタ−
（Ａｒｔｂｒｏｂａｃｔｃｒｌ属に属する微生物より選
ばれた少なくとも１種の微生物を用いる。
かかる微生物であればいずれでも使用できる。
たとえば、その代表的なものを例示すれば、コリネバク
テリウムリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０３２、コ
リネバクテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ２１６５１、
コリネバクテリウム・アセトアシドフィルムＡＴＣ０１
３８７０、コリネバクテリウム・アセトアシドフィルム
ＡＴＣＣ２１２７０、ブレビバクテリウム・ラクトファ
ーメンタムＡＴＣＣ１３８６９、ブレビバクテリウム・
フラブムＡＴＣＣ１４０６７、ブレビバクテリウム・フ
ラブムＡＴＣＣ１３８２６、アースロバフタ−・シトレ
ウスＡＴＣＣ１１６２４、シクロバクテリウム・アンモ
ニアフィルムＡＴＣＣ１５３５４、バシラス・サティリ
スＡＴＣＣ６０５１などが挙げられる。
テリウムリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０３２、コ
リネバクテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ２１６５１、
コリネバクテリウム・アセトアシドフィルムＡＴＣ０１
３８７０、コリネバクテリウム・アセトアシドフィルム
ＡＴＣＣ２１２７０、ブレビバクテリウム・ラクトファ
ーメンタムＡＴＣＣ１３８６９、ブレビバクテリウム・
フラブムＡＴＣＣ１４０６７、ブレビバクテリウム・フ
ラブムＡＴＣＣ１３８２６、アースロバフタ−・シトレ
ウスＡＴＣＣ１１６２４、シクロバクテリウム・アンモ
ニアフィルムＡＴＣＣ１５３５４、バシラス・サティリ
スＡＴＣＣ６０５１などが挙げられる。
上記微生物の培養は通常の条件下で行うことができる。
これらの微生物の培養には、通常これらの菌が資化しう
る有機および無機の炭素源、窒素源およびビタミン、ミ
ネラルなどを適宜配合した培地を用いる。すなわち、栄
養培地の炭素源としては、たとえばグルコース、フルク
トース、シュクロース、水溶性デンプンなどの糖類、グ
リセロール、ソルビトール、マンニトールなどの糖アル
コール類、フマール酸、乳酸などの有機酸を使用するこ
とができる。炭素源の添加量は通常、培地に対して０．
１〜２０％程度が好ましい、窒素源としては、たとえば
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウムなどの無機酸のア
ンモニウム塩、フマル酸アンモニウム塩などの有機酸の
アンモニウム塩、コーンスチープリカー、酵母エキス、
カゼイン加水分解物などの天然有機窒素源などを使用す
ることができる。
る有機および無機の炭素源、窒素源およびビタミン、ミ
ネラルなどを適宜配合した培地を用いる。すなわち、栄
養培地の炭素源としては、たとえばグルコース、フルク
トース、シュクロース、水溶性デンプンなどの糖類、グ
リセロール、ソルビトール、マンニトールなどの糖アル
コール類、フマール酸、乳酸などの有機酸を使用するこ
とができる。炭素源の添加量は通常、培地に対して０．
１〜２０％程度が好ましい、窒素源としては、たとえば
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウムなどの無機酸のア
ンモニウム塩、フマル酸アンモニウム塩などの有機酸の
アンモニウム塩、コーンスチープリカー、酵母エキス、
カゼイン加水分解物などの天然有機窒素源などを使用す
ることができる。
窒素源の添加量は通常、培地に対して０．１〜１０％程
度が好ましい、また無機塩類としては、たとえばリン酸
カリウム、リン酸ナトリウムなどのリン酸アルカリ金属
、塩化カリウム、塩化ナトリウムなどの塩化アルカリ金
属、硫酸マグネシウム、硫酸第１鉄などの金属硫酸塩な
どを使用するのが好ましい、無機塩類の添加量は、通常
、培地に対して０．００１〜１％程度が好適である。微
生物の培養条件は、菌の種類によるがＰＨを通常５．０
〜９．０、好ましくは７．０〜８゜０とし、温度を通常
、２０〜４０℃、好ましくは３０〜３７℃として好気的
に２０〜７２時間培養するのが通常である。
度が好ましい、また無機塩類としては、たとえばリン酸
カリウム、リン酸ナトリウムなどのリン酸アルカリ金属
、塩化カリウム、塩化ナトリウムなどの塩化アルカリ金
属、硫酸マグネシウム、硫酸第１鉄などの金属硫酸塩な
どを使用するのが好ましい、無機塩類の添加量は、通常
、培地に対して０．００１〜１％程度が好適である。微
生物の培養条件は、菌の種類によるがＰＨを通常５．０
〜９．０、好ましくは７．０〜８゜０とし、温度を通常
、２０〜４０℃、好ましくは３０〜３７℃として好気的
に２０〜７２時間培養するのが通常である。
本発明の反応においては、これらの微生物の培養物、菌
体またはその処理物を用いる。好ましくは菌体懸濁液ま
たは菌体処理物を用いる。
体またはその処理物を用いる。好ましくは菌体懸濁液ま
たは菌体処理物を用いる。
ここでいう菌体懸濁液とは、培養して得られた菌体を遠
心分離または濾過などにより取得したもので、菌体処理
物とは、培養して得られた菌体を超音波処理したものや
、たとえば公知の方法によりアクリルアミドゲル担体な
どに固定化したもの、洗浄菌体、凍結乾燥菌体、菌体抽
出物などが挙げられる。
心分離または濾過などにより取得したもので、菌体処理
物とは、培養して得られた菌体を超音波処理したものや
、たとえば公知の方法によりアクリルアミドゲル担体な
どに固定化したもの、洗浄菌体、凍結乾燥菌体、菌体抽
出物などが挙げられる。
反応基質であるベンジル乳酸の反応液中での濃度は、通
常０．１〜５％程度用いることができる。添加方法に関
しては一括あるいは分割添加のどちらでもよい。
常０．１〜５％程度用いることができる。添加方法に関
しては一括あるいは分割添加のどちらでもよい。
反応温度は、通常２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５
℃である０反応液のＰＨは、通常５〜１１．０、好まし
くは７．５〜９．０に保たれる。
℃である０反応液のＰＨは、通常５〜１１．０、好まし
くは７．５〜９．０に保たれる。
反応時間は反応温度によって異なるが、通常３０℃で３
０〜９０時間である。
０〜９０時間である。
反応方式としては、培養終了液に基質を添加し、好気的
に振とうする方法と、菌体懸濁液あるいは菌体処理物に
基質を添加し、好気的に振とうする方法があり、どちら
も採用可能であるが後者の方が良好な結果を与える。
に振とうする方法と、菌体懸濁液あるいは菌体処理物に
基質を添加し、好気的に振とうする方法があり、どちら
も採用可能であるが後者の方が良好な結果を与える。
また、反応時間の短縮あるいはＬ−ホモフェニルアラニ
ンの蓄積量の増加をはかるために界面活性剤および補酵
素などの存在下に実施するのが好ましい、ここで界面活
性剤としては、たとえば、ポリエチレングリコール・ｐ
−イソオクチルフェニルエーテル、臭化セチルトリメチ
ルアンモニウムなどを用いることができ、その使用量は
、反応液に対して０．０００１〜１％程度とするのが好
ましい、また、補酵素としては、たとえば、ピリドキサ
ールリン酸を挙げることができ、その使用量は反応液に
対して１〜１，０００μＭ程度の濃度で用いるのが好ま
しい。
ンの蓄積量の増加をはかるために界面活性剤および補酵
素などの存在下に実施するのが好ましい、ここで界面活
性剤としては、たとえば、ポリエチレングリコール・ｐ
−イソオクチルフェニルエーテル、臭化セチルトリメチ
ルアンモニウムなどを用いることができ、その使用量は
、反応液に対して０．０００１〜１％程度とするのが好
ましい、また、補酵素としては、たとえば、ピリドキサ
ールリン酸を挙げることができ、その使用量は反応液に
対して１〜１，０００μＭ程度の濃度で用いるのが好ま
しい。
本発明の反応はアミノ基供与体としてＬ−グルタミン酸
存在下で行うことにより、さらに効率よく反応が進行す
る。Ｌ−グルタミン酸を添加する場合の添加量は、培地
に対して０．１〜２０％が好・ましい。
存在下で行うことにより、さらに効率よく反応が進行す
る。Ｌ−グルタミン酸を添加する場合の添加量は、培地
に対して０．１〜２０％が好・ましい。
かくして、本発明の反応により、ベンジル乳酸からＬ−
ホモフェニルアラニンが生成する。
ホモフェニルアラニンが生成する。
かくして生成したＬ−ホモフェニルアラニンを反応液か
ら単離するには、一般的な分離精製方法を用いればよい
、たとえば、Ｌ−ホモフェニルアラニンはそれ自体水に
対してほとんど不溶であるため、酸またはアルカリを加
えＬ−ホモフェニルアラニンを溶解させ、不純物を濾過
、遠心分離などの常法で反応液から取り除いたのち、枦
液を中和してＬ−ホモフェニルアラニンを単離採取する
ことができる。
ら単離するには、一般的な分離精製方法を用いればよい
、たとえば、Ｌ−ホモフェニルアラニンはそれ自体水に
対してほとんど不溶であるため、酸またはアルカリを加
えＬ−ホモフェニルアラニンを溶解させ、不純物を濾過
、遠心分離などの常法で反応液から取り除いたのち、枦
液を中和してＬ−ホモフェニルアラニンを単離採取する
ことができる。
また、本発明において（Ｒ８）−ベンジル乳酸を原料と
して使用する場合、基質となるベンジル乳酸の８体のみ
が、Ｌ−ホモフェニルアラニンに変換されるため、反応
液中にＬ−ホモフェニルアラニンが蓄積すると同時に（
Ｒ）−ベンジル乳酸も得ることができる。
して使用する場合、基質となるベンジル乳酸の８体のみ
が、Ｌ−ホモフェニルアラニンに変換されるため、反応
液中にＬ−ホモフェニルアラニンが蓄積すると同時に（
Ｒ）−ベンジル乳酸も得ることができる。
〈実施例〉
以下、実施例を挙げて、本発明をさらに具体的に説明す
る。
る。
なお、実施例中、Ｌ−ホモフェニルアラニンの生成量お
よび光学純度は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）を用い下記の条件で分析した（光学純度分析はＪｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｂｙ、
２０２ （１９８０）３７５−３７９゜記載の方法に
よる）。
よび光学純度は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）を用い下記の条件で分析した（光学純度分析はＪｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｂｙ、
２０２ （１９８０）３７５−３７９゜記載の方法に
よる）。
Ｌ−ホモフェニルアラミンの生成量
カラム 二 カプセルパックＣｐｓ（資生堂）液出液
：０．０１％Ｈ３ＰＯ４／アセトニトリル＝８３／１７ 流量： 検 出 ： １、５ ｍｌ ／ ｌｌｉｎ ＵＶ２１４ｎｍ Ｌ−ホモフェニルアラミンの光学純度 カラム ： Ａ−３０２０ＤＳ （ＭＭＣ）液出液
：０．０５％Ｈ３ＰＯ４／アセトニトリル＝６５／３５ 流量： １．Ｏｍｌ ／ｌ１ｌｉｎ 誘導化試薬： ２．３．４．６− ｔｅｔｒａ−０−ａ
ｃｃｔ７１−β−ｇｌ＋ｃｏｐ７ｒａｎｏｓ７１１ｓｏ
ｔｈｉｏｃ７ａ＋＋ａｔｅ（ＧＩＴＣ’） 検 出 ： ＵＶ２５４ｎｎ＋また、実施例中
、収率は反応基質に対する生成したＬ−ホモフェニルア
ラニンのモル％で表わす。
：０．０１％Ｈ３ＰＯ４／アセトニトリル＝８３／１７ 流量： 検 出 ： １、５ ｍｌ ／ ｌｌｉｎ ＵＶ２１４ｎｍ Ｌ−ホモフェニルアラミンの光学純度 カラム ： Ａ−３０２０ＤＳ （ＭＭＣ）液出液
：０．０５％Ｈ３ＰＯ４／アセトニトリル＝６５／３５ 流量： １．Ｏｍｌ ／ｌ１ｌｉｎ 誘導化試薬： ２．３．４．６− ｔｅｔｒａ−０−ａ
ｃｃｔ７１−β−ｇｌ＋ｃｏｐ７ｒａｎｏｓ７１１ｓｏ
ｔｈｉｏｃ７ａ＋＋ａｔｅ（ＧＩＴＣ’） 検 出 ： ＵＶ２５４ｎｎ＋また、実施例中
、収率は反応基質に対する生成したＬ−ホモフェニルア
ラニンのモル％で表わす。
実施例１
グルコース２％、ポリペプトン１％、ポリペプトン８１
．５％、イーストエキス０．１５％、リン酸二水素カリ
ウム０．４％からなる培地５０ｍ１（ｐＨ７，５）を５
０ｍ１の振とうフラスコに入れ１２０℃で１０分間滅菌
した。この培地にコリネバクテリウム・グルタミカムＡ
ＴＣＣ１３０３２、ＡＴＣＣ２１６５１、コリネバクテ
リウム・アセトアシドフィルムＡＴＣＣ１３８７０、Ａ
ＴＣＣ２１２７０、ブレビバクテリウム・ラクトファー
メンタムＡＴＣＣ１３８６９、ブレビバクテリウム・デ
ィバアリカタムＡＴＣＣ１４０２０、アースロバフタ−
・シトレウムＡＴＣＣ１１６２４、シクロバクテリウム
・アンモニアフィルミＡＴＣＣ１５３５４、バシラス・
サティリスＡＴＣＣ６０５１を各々１白金耳後種後、３
０℃で７２時間振盪培養しな、培養後、培養液から遠心
分離により集菌した菌体をイオン交換水で１回洗浄後、
凍結保存しな。
．５％、イーストエキス０．１５％、リン酸二水素カリ
ウム０．４％からなる培地５０ｍ１（ｐＨ７，５）を５
０ｍ１の振とうフラスコに入れ１２０℃で１０分間滅菌
した。この培地にコリネバクテリウム・グルタミカムＡ
ＴＣＣ１３０３２、ＡＴＣＣ２１６５１、コリネバクテ
リウム・アセトアシドフィルムＡＴＣＣ１３８７０、Ａ
ＴＣＣ２１２７０、ブレビバクテリウム・ラクトファー
メンタムＡＴＣＣ１３８６９、ブレビバクテリウム・デ
ィバアリカタムＡＴＣＣ１４０２０、アースロバフタ−
・シトレウムＡＴＣＣ１１６２４、シクロバクテリウム
・アンモニアフィルミＡＴＣＣ１５３５４、バシラス・
サティリスＡＴＣＣ６０５１を各々１白金耳後種後、３
０℃で７２時間振盪培養しな、培養後、培養液から遠心
分離により集菌した菌体をイオン交換水で１回洗浄後、
凍結保存しな。
（Ｒ３）−ベンジル乳酸１．５％、Ｌ−グルタミン酸ナ
トリウム３％、ピリドキサールリン酸５０μＭ、ポリエ
チレングリコール・ｐ−インオクチルフェニルエーテル
１ ｖ ／ ｖ％の０．１ Ｍリン酸バッフｙ−（ｐＨ
７，５）溶液５０ｍ１に得られた凍結保存菌体を十分に
懸濁した。この懸濁液を３０℃で１００時間反応させた
のちのし−ホモフェニルアラニンの生成量は表１のとお
りであった。
トリウム３％、ピリドキサールリン酸５０μＭ、ポリエ
チレングリコール・ｐ−インオクチルフェニルエーテル
１ ｖ ／ ｖ％の０．１ Ｍリン酸バッフｙ−（ｐＨ
７，５）溶液５０ｍ１に得られた凍結保存菌体を十分に
懸濁した。この懸濁液を３０℃で１００時間反応させた
のちのし−ホモフェニルアラニンの生成量は表１のとお
りであった。
なお、生成したＬ−ホモフェニルアラニンの光学純度は
、全ての場合においてほぼ１００％であった。
、全ての場合においてほぼ１００％であった。
表
実地例２
グルコース４０ ｔ 、 Ｄ Ｌ−乳酸２０．ｇ、！酸
アンモニウム２０ｇ、リン酸二水素カリウム２ぎ、塩化
ナトリウムＩｇ、尿素５ｇ、硫酸第１鉄７水和物を２０
■、硫酸マンガン２０■、ビオチン５０ａ含有する２Ｉ
ｌの液体培地を５１ジャーファーメンタ−に入れ、１１
５℃で２０分間減菌した。この５Ｊ！のジャーファーメ
ンタ−にあらかじめ同培地１００ ｍｌ中、３０℃で７
２時間振どう培養したコリネバクテリウム・グルタミカ
ムＡＴＣＣ１３０３２を接種し、３０℃で４８時間通気
撹拌培養を行った。培養後、培養液から遠心分離によっ
て集菌した菌体をイオン交換水で１回洗浄し、２等分し
て凍結保存した。
アンモニウム２０ｇ、リン酸二水素カリウム２ぎ、塩化
ナトリウムＩｇ、尿素５ｇ、硫酸第１鉄７水和物を２０
■、硫酸マンガン２０■、ビオチン５０ａ含有する２Ｉ
ｌの液体培地を５１ジャーファーメンタ−に入れ、１１
５℃で２０分間減菌した。この５Ｊ！のジャーファーメ
ンタ−にあらかじめ同培地１００ ｍｌ中、３０℃で７
２時間振どう培養したコリネバクテリウム・グルタミカ
ムＡＴＣＣ１３０３２を接種し、３０℃で４８時間通気
撹拌培養を行った。培養後、培養液から遠心分離によっ
て集菌した菌体をイオン交換水で１回洗浄し、２等分し
て凍結保存した。
（Ｒ８）−ベンジル乳酸２０Ｋを５０μＭのリン酸バッ
フザー（ｐＨ９，０）１４１に溶解し、水酸化ナトリウ
ム水溶液でｐ Ｈ９，０にＦｌｆｉした。
フザー（ｐＨ９，０）１４１に溶解し、水酸化ナトリウ
ム水溶液でｐ Ｈ９，０にＦｌｆｉした。
この基質溶液に得られた凍結保存菌体の半分を十分に懸
濁後、３０℃で２４時間、５１のジャ−ファメンター中
で撹拌したのち、この反応液にＬ−グルタミン酸ナトリ
ウム２０ｇ、ピリドキサールリン酸５０μＭ、ポリエチ
レングリコール・ｐ−イソオクチルフェニルエーテル１
ｖ／■％の水溶液１１を加えた。塩酸でｐＨを７゜５に
調整し、さらに実施例２で得られた菌体の残り半分を十
分に懸濁後、３０℃で７２時間撹拌した０反応後、遠心
分離により固型物を分離後、得られた固型物を０． Ｉ
Ｎ塩酸２１で十分に洗浄した。さらに、遠心分離によ
り菌体を分離後、溶液側を全濃縮し、過剰の塩酸を留去
した。
濁後、３０℃で２４時間、５１のジャ−ファメンター中
で撹拌したのち、この反応液にＬ−グルタミン酸ナトリ
ウム２０ｇ、ピリドキサールリン酸５０μＭ、ポリエチ
レングリコール・ｐ−イソオクチルフェニルエーテル１
ｖ／■％の水溶液１１を加えた。塩酸でｐＨを７゜５に
調整し、さらに実施例２で得られた菌体の残り半分を十
分に懸濁後、３０℃で７２時間撹拌した０反応後、遠心
分離により固型物を分離後、得られた固型物を０． Ｉ
Ｎ塩酸２１で十分に洗浄した。さらに、遠心分離によ
り菌体を分離後、溶液側を全濃縮し、過剰の塩酸を留去
した。
残渣を１ｊの水に溶解し、水酸化ナトリウム水溶液でｐ
Ｈ５〜６に調整した。析出物を濾過後、水洗して、４０
℃で減圧乾燥することによりＬ−ホモフェニルアラニン
７．８ｇを得た（単離収率７８％、光学純度９９％）。
Ｈ５〜６に調整した。析出物を濾過後、水洗して、４０
℃で減圧乾燥することによりＬ−ホモフェニルアラニン
７．８ｇを得た（単離収率７８％、光学純度９９％）。
〈発明の効果〉
本発明によれば、ベンジル乳酸からＬ−ホモフェニルア
ラニンを高収率かつ高純度で効率よく得ることができる
。また、反応基質濃度を高くすることができるので、反
応時間を短縮できかつ収率も向上できる。さらに、高価
な光学分割剤が不要であり、安価に製造することができ
る。
ラニンを高収率かつ高純度で効率よく得ることができる
。また、反応基質濃度を高くすることができるので、反
応時間を短縮できかつ収率も向上できる。さらに、高価
な光学分割剤が不要であり、安価に製造することができ
る。
特許出願大東し株式会社
Claims (1)
- ベンジル乳酸をＬ−ホモフェニルアラニンに変換する能
力を有しかつコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ）属、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）
属、ミクロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ）属またはアースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔ
ｅｒ）属に属する微生物より選ばれた少なくとも１種の
微生物の培養物、菌体またはその処理物をベンジル乳酸
に作用させてＬ−ホモフェニルアラニンを生成蓄積せし
め、反応液からＬ−ホモフェニルアラニンを単離採取す
ることを特徴とするＬ−ホモフェニルアラニンの製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24883789A JPH03112491A (ja) | 1989-09-25 | 1989-09-25 | Ｌ―ホモフェニルアラニンの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24883789A JPH03112491A (ja) | 1989-09-25 | 1989-09-25 | Ｌ―ホモフェニルアラニンの製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03112491A true JPH03112491A (ja) | 1991-05-14 |
Family
ID=17184158
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24883789A Pending JPH03112491A (ja) | 1989-09-25 | 1989-09-25 | Ｌ―ホモフェニルアラニンの製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03112491A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6146859A (en) * | 1999-08-27 | 2000-11-14 | Academia Sinica | Facile synthesis of L-homophenylalanine by equilibrium shift enzymatic reaction using engineered tyrosine aminotransferase |
-
1989
- 1989-09-25 JP JP24883789A patent/JPH03112491A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6146859A (en) * | 1999-08-27 | 2000-11-14 | Academia Sinica | Facile synthesis of L-homophenylalanine by equilibrium shift enzymatic reaction using engineered tyrosine aminotransferase |
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