JPH0329080B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、新水溶性ペプチド抗生物質、その製
造及び単離法、それを含有する医薬用組成物及び
抗菌剤として該抗生物質の使用法に関する。 本発明の新抗生物質は、Ｄ−プロリン、Ｄ−セ
リン、Ｌ−プロリン、Ｌ−アルギニン、Ｄ−スレ
オ−β−ヒドロキシアスパラギン酸、Ｄ−セリ
ン、Ｌ−トランス−３−ヒドロキシプロリン及び
Ｌ−スレオ−β−ヒドロキシアスパラギン酸及び
３−ヒドロキシテトラデカン酸のC₁₄脂肪酸残基
を含有する水溶性環状アシルオクタペプチドであ
る。この新抗生物質は、エムペドバクター
（Empedobacter）属の菌株G393−B445
（ATCC31962）の醗酵によつて製造される。 本出願人のために実施された文献検索によつて
本発明の抗生物質（発明者によりBu−2517命名
された）と同じ構成アミノ酸及び脂肪酸残基を含
有するポリペプチド抗生物質は見出されなかつ
た。然し、Bu−2517は、文献に報知されている
ポリペプチド抗生物質のうち、その両性がアムホ
マイシン（Antibiot・Chemother.3：1239〜
1242，1953；J.Am.Chem.Soc.95：2352，1973；
米国特許3126317）に、産生菌及び構成アミノ酸
のいくつかが抗生物質BA−843（日本公開130，
601／53）に、環状デプシペプチド構造がパーメ
チンＡ（J.Antibiotics32：115〜120，1979；J.
Antibiotics32：121〜135，1979）に若干の類似
性を有している。Bu−2517の１アミノ酸成分、
トランス−Ｌ−３−ヒドロキシプロリンは、テロ
マイシン（AntibioticsAnn.1957／1958，852〜
855；米国特許3016516）の構造成分の一である。
然し、上に挙げた抗生物質はすべて、それらの化
学的及び生物学的性質がBu−2517と明らかに区
別することができる。 本発明によつて、同化可能な炭素及び窒素源を
含有する水性栄養培地中で深部好気性条件下にエ
ムペドパクター属の菌株G393−B445
（ATCC31962）と命名されたエムペドバクターの
新株、或いはその変株又は変異株を、該培地中該
中物によつて実質的な量のBu−2517と命名され
た新水溶性ペプチド抗生物質が産生されるまで培
養し、次に、培地からBu−2517抗生物質を回収
することによつて製造される、Bu−2517抗生物
質が提供される。Bu−2517は両性化合物であり、
両性イオンの形態又は医薬として使用可能な酸又
は塩基付加塩として得ることができる。 本発明は、本明細書中Bu−2517と命名される
新水溶性ペプチド抗生物質及びエムペドバクター
属の菌株G393−B445と命名されるエムペドバク
ターの新菌株の醗酵によるその製造に関する。こ
の産生生物は普通でない細菌株であり、修飾花粉
誘引技術〔J.Elisha MitchellSci.Soc.79：53〜70
（1963）参照〕を用い、東京山手通で集めた土壌
試料から分離された。この生物は、土壌−水懸濁
液の表面に浮遊するマツ花粉の粒に付着し、その
上で生育する。この生物の培養物は、ワシント
ン、DCのアメリカン・タイプ・カルチヤー・コ
レクシヨンに寄託され、ATCC31962としてその
微生物永久コレクシヨンに加えられている。 産生生物の分類学 菌株G393−B445は、グラム陰性、無胞子性杆
菌である。細胞は、形が球桿状から細長い桿状ま
で変り、運動性で菌体から突出する鞭毛をもつ。
菌株G393−B445の形態学を下の表１に要約す
る。

【表】 グラム染色 ：陰性
菌株G393−B445は、栄養寒天及びYP培地
（イースト抽出液0.03％、ペプトン0.1％、
NaCl0.01％、pH6.6〜6.8）上はげしく生育し、
２種の型の集落、Ｒ（ラフ）及びＳ（スムーズ）を
生じる。中温性、酸化性、アルカリ感受性及びハ
ロゲン塩類嫌忌性である。菌株G393−B445の培
養及び生理学的に下の表２に示す。

【表】

【表】 溶血、ウサギ血
溶 きわめて弱い
＊ YP培地を使用した。

【表】 ・ミルク する。

【表】 ス ース
D〓ガラクト ＋ − トレハロー ＋ −
ース ス
D〓ソルビト − − D〓マンニト ＋ −
ール ール
イノシトー − − グリセリン ＋ −
ル
ペンジツチの方法（Methods in Enzymology.
巻，715〜723頁，s.p.コロウイツチ及びN.O.カ
プラン編，アカデミツク・プレス，ニユーヨー
ク，1957）によつて分析した細胞DNAのグアニ
ン及びシトシン含量は66.5±1.5モル％であつた。
菌株G393−B445の抗生物質感受性を紙円板−寒
天拡散法によつて定量した。 結果を表３に示す。

【表】 Bergey′s Manual（1974）中の記載によれば、
菌株G393−B445は、フラボバクテリウム
（Flavobacterium）属の節に記載されているも
のに以ているものであるが、そのフラボバクテリ
ウム属は異なつた種類の種を含むものである。幾
人かの究者は、フラボバクテリウム属を再度作り
直すことを勧告しており、低いGC含量（40％）
を持つグラム陰性で、非運動性で、非すべり性で
且つ非拡散性の菌株は、フラボバクテリウム属に
属するようにすべきだが、高いGC含量（60〜70
％）を持ち、グラム陰性で、非運動性または運動
性であり菌体から鞭毛が突出したものは、エムペ
ドバクター属に移されるべきであるとされてい
る。 菌株G393−B445の形態学的及び生理学的特性
及び上述した新しい分類学的基準から見ると、菌
株G393−B445は、〔 〕エムペドバクター属に
属すると考えられる。 菌株G393−B445は、次の理由でエムペドバク
ター属の新種であると信じられる： １ 菌株G393−B445は、その生理学的及び生化
学的性質がBargey′sMannnalに記載されてい
るフラボバクテリウムの６種から明らかに区別
することできる。 ２ 菌株G393−B445は、その非運動性、37℃で
生育しないこと、シユクロースの加水分解陰性
その他の生化学的反応がペプチド抗生物質BA
−843の産生生物であるフラボバクテリウム・
アンチビオチクム（Flavobacterium
antibioticum）IFO−13715（日本公開130601／
53；Farmdoc92052A／51）から区別すること
ができる。 ３ 既知のエムペドバクターの共通の特性の一
は、ハロゲン塩類耐容（５％NaCl中生育陽性）
である。菌株G393−B445は、対照的に明らか
なハロゲン塩類禁忌性を有し、１％又はそれ以
下のNaCl濃度においてのみ生育する。 他の生物の場合と同じく、菌株G393−B445の
特性は変動を受ける。例えば、G393−B445の人
工変株及び変異株は、紫外線、Ｘ線、高周波、放
射線及び化学物質のような種々の既知の変異誘発
要因で処理することによつて得ることができる。
Bu−2517抗生物質を生じるエムペドバクター属
の菌株のすべての天然及び人工変株及び変異株
（本明細書中以下変異株という）は、本発明の範
囲に包含されるものである。 抗生物質産生 抗生物質Bu−2517は、水性栄養培養中深部好
気性条件下でATCC31962の同定特性を有するエ
ムペドバクター属のBu−2517産生株、最も好適
には菌株エムペドバクター属の菌株G393−B445
を培養することによつて産生される。この生物
は、同化可能な炭素源、例えば、同化可能な炭水
化物を含有する栄養培地中で生育させる。適当な
炭素源の例は、グリコース、リボース、ガラクト
ース、フラクトース、マンノース、シユクロー
ス、ラクトース、可溶性デンプン及びグリセロー
ルを包含する。栄養培地は又、魚肉、大豆ミー
ル、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキ
ス、落花生粉、イーストエキス又はアンモニウム
塩のような同化可能な窒素源を含有する。塩化ナ
トリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭
素カルシシウム、燐酸塩等のような無機塩が、所
要の場合には添加される。銅、マンガン、鉄、亜
鉛等が、所望の場合に培地に添加されるか、又は
培地の他の成分の不純物として供給されてよい。
温置温度は、Bu−2517産生株が生育することが
できる任意の温度、例えば７℃〜42℃であつてよ
いが、25〜35℃、特に27〜32℃で醗酵を実施する
ことが好適である。媒地中中性又は中性に近い初
期pHを用いるのが好適であり、抗生物質の産生
は、一般に約２〜７日間実施される。通常、至適
の産生は約２〜３日（振とう培養）で達成され
る。比較的少量の生産のためには、振とうフラス
コ及び表面培養を用いることができるが、比較的
大量の生産のためには、無菌タンク中深部通気培
養が好適である。タンク醗酵が実施されるべき時
には、ブロス培養にこの生物の斜面又は土壌培養
又は凍結乾燥培養を接種することによつて栄養ブ
ロス中に増殖接種物を生産することが望ましい。
このようにして活性接種物を得て後、醗酵タンク
培地に無菌的に移される。タンク及びびんの中の
通気は、醗酵培地を通してか又はその上に無菌空
気を強制的に送ることによつて得ることができ
る。機械インペラーによつて更に撹拌を得ること
ができる。必要な場合にはラード油のような消泡
剤も添加することができる。 醗酵培地中のBu−2517の産生は、試験菌とし
てバシラス・サブチリス（Bacillus sutilis）
PCI219を使用する紙円板−寒天拡散定量によつ
て醗酵の過程で容易に追跡することができる。 Bu−2517の単離及び精製 至適のブロス力価が得られて後、得られたブロ
スをpH約３まで酸性にし、次にｎ−ブタノール
のような水非混和性有機溶媒と撹拌する。抗生物
質活性を含有する有機溶媒層を次に分離し、真空
蒸発乾固する。次に残留物を適当な有機溶媒、例
えばメタノールに溶解し、溶液を適当な抗溶媒、
例えばアセトンで希釈して粗製の固体としてBu
−2517抗生物質を析出させる。 上述したとおり得られたBu−2517抗生物質は、
ダウエツクス１−X2のような陰イオン交換樹脂
を用いるイオン交換クロマトグラフイーによつて
精製することができる。１例として、粗Bu−
2517をダウエツクス１−X2（CH₃COO^-形）のカ
ラムに施用し、水、0.5M酢酸アンモニウム及び
１：１（ν／ν）酢酸アンモニウム−メタノール
混合物で順次展開することができる。精製Bu−
2517をメタノール性酢酸アンモニウム溶液を溶離
し、ダイアイオンHP−20のような非イオン系マ
クロ網状重合体上にカラムクロマトグラフイーに
よつて更に精製することができる。 Bu−2517の特性 Bu−2517は、上述した精製処理において白色
無定形固体として単離される。この抗生物質は、
中性及びアルカリ性pHで水溶性（溶解度：＞10
％）である。その水溶液は、2.4〜4.2のpH範囲で
沈殿を生成する。Bu−2517は、メタノール、エ
タノール、水性ジオキサン、ジメチルホルムアミ
ド及びジメチルスルホキシドに可溶性である。ｎ
−プロパノール、ｎ−ブタノール及びジオキサン
に溶解性は小さく、他の有機溶媒に実際上不溶性
である。Bu−2517は、坂口試薬に陽性反応を示
すが、ニンヒドリン及びアンスロン反応陰性であ
る。下に示されるシリカゲル（キーゼルゲル
60F₂₅₄、メルク）薄層クロマトグラフイー
（TLC）系中Bu−2517について次のRf値が得ら
れた： Rf0.55 10％酢酸アンモニウム：メタノール （１：１ ν／ν） Rf0.23 ｎ−プロパノール：H₂O：酢酸（70：
30：1ν／ν） Bu−2517の分析標品はmp224〜227℃（分解）
を有する。浸透圧法によつて分子量1270を示し、
C₄₉H₇₉O₁₉・5H₂O分析される。計算値：C48.38，
H7.38，N12.67。実験値：C48.51，H6.90，
N12.53。Bu−2517は両性物質であり、水中
pKa3.0、4.1及び＞11.0を有し、滴定当量1250を
示す。光学活性：〔α〕²⁶ _D＋9゜（c1.0，CH₃OH）で
ある。Bu−2517は、UVスペクトルにおいて
210nmより上に吸収極大を示さない。Bu−2517
の赤外スペクトルは、3350cm^-1付近にポリヒドロ
キシル吸収、1735cm^-1にエステルカルボニル、
1630及び1540cm^-1にアミドカルボニル吸収帯を示
す。Bu−2517のプロトンNMRスペクトルは、３
重線メチル基及び数個のメチレン及びメチンプロ
トンを示す。芳香族又は二重結合プロトンは観察
されない。 Bu−2517の構造 Bu−2517は、封管中105℃で16時間6NHClに
よつて加水分解された。得られた溶液をジエチル
エーテルと振とうして酸性親油性物質を抽出し
た。アミノ酸断片の混合物を含有する水層をダウ
エツクス50W−X4のカラム上クロマトグラフ処
理して５種のアミノ酸−セリン、プロリン、アル
ギニン及び及びと命名された２種の普通でな
いアミノ酸を分離した。アミノ酸の構造は、ア
ルスリニウム・フエオスペルムム
（Arthriniumphaeospermum）及びストレプトミ
セス（Strepto−myces）種により産生される微
生物の代謝産物として報告されている（J.
Antibiotics28：821〜823、1975）スレオ−β−
ヒドロキシアスパラギン酸であると決定された。
アミノ酸は、テロマイシンの構造成分の一とし
て知られている（J.Am.Chem.Soc.85：2867〜
2868、1963及びAntibioticsAm.1957／1958、852
〜855）トランス−Ｌ−３−ヒドロキシプロリン
と同定された。 次のBu−2517のアミノ酸成分のモル比及び偏
光力が、定量アミノ酸分析及び単離されたアミノ
酸の各々について旋光値の測定の結果確立され
た。

【表】 Bu−2517の酸加水分解物から抽出された酸性
親油性物質をそのメチルエステルに変換し、
NMR及び質量分析法によつて分析した。この酸
性化合物の構造は、式 を有する３−ヒドロキシテトラデカン酸と決定さ
れた。 上述したように、Bu−2517の構造成分として
３種のβ−ヒドロキシ基を有するアミノ酸部分が
存在する。β−ヒドロキシアミノ酸を含むアミド
結合は、Ｎ→Ｏ移動によつて酸加水分解を受けや
すいことが知られている。かくして、温和な酸性
条件下にBu−2517のコントロールされた加水分
解によつて一連の小ペプチド断片が得られた。常
法によるペプチド断片の各々についてアミノ酸配
列の解明によつて下に示されるようなBu−2517
の全構造が確立された： Pro＝プロリン Ser＝セリン Arg＝アルギニン β−OH−Asp＝スレオ−β−ヒドロキシアス
パラギン酸 ３−OH−Pro＝トランス−３−ヒドロキシプ
ロリン 塩生成 上に示したとおりBu−2517は両性物質であり、
酸及び塩基により共に塩を生成する。医薬として
使用可能な酸及び塩基とのBu−2517の塩は、両
性イオンの形態のBu−2517に抗生物質の性質が
実質的に均等であるので、本発明の範囲内に包含
されるものである。有機又は無機酸、金属（例え
ば、アルカリ土類金属、アルカリ金属、アルミニ
ウム等）、アンモニア及び有機塩基を用いる常用
の塩生成操作によつて適当な塩を生成させること
ができる。適当な塩は、ナトリウム、カリウム、
カルシウム、マグネシウム及びアルミニウムとの
金属塩、アンモニウム塩、トリエチルアミン、ｎ
−プロピルアミン、トリ−ｎ−ブチルアミン、ピ
ペリジン、エタノールアミン、ジエタノールアミ
ン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、
Ｎ，N′−ジベンジルエチレンジアミン、ベンジ
ルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タン及びピロリジンのようなアミンとの塩、並び
に塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸、酢酸、プロピ
オン酸、オレイン酸、パルミチン酸、クエン酸、
コハク酸、硝酸、乳酸、酒石酸、マレイン酸等の
ような有機又は無機酸との塩を包含する。塩生成
の１例として、Bu−2517を水に溶解し、適当な
酸を添加して所望の酸付加塩を得ることができ
る。同様に、Bu−2517の任意の水溶液に塩基性
pHを得るのに十分な塩基を添加し、次に凍結乾
燥して固体形態の塩を回収することによつて塩基
付加塩を製造することができる。 生物学的性質 Bu−2517は、試験管内及び生体内共に種々の
好気性及び嫌気性グラム陽性菌の生育を阻止す
る。 Bu−2517の最小阻止濃度（MIC）を、多重接
種装置を使用する系列２培希釈法によつて種々の
好気性及び嫌気性菌について測定した。好気性菌
に対してはミユラー−ヒントン寒天を一般に、連
鎖状球菌、ナイセリア（Neisseria）及びヘモフ
ライス（Haemophilus）菌のような培養しにく
い好気性菌に対してはGC培地（栄研）、並びに嫌
気性菌に対してはGAM寒天培地（日水）を使用
した。接種材料サイズは、連鎖状球菌、ナイセリ
ア及びヘモフイラス菌については10⁶CFU／ml、
他の好気性菌については10⁴そしてすべての嫌気
性菌については10⁷〜10⁸に調節した。アンホマイ
シン、アンピシリン、クロラムフエコール、クリ
ンダマイシン、エリスロマイシン、カナマイシン
及びバンコマイシンを参照抗生物質として使用し
た。 Bu−2517の試験管内抗菌スペクトルを、好気
性菌について下の表４、嫌気性菌について表５に
示す。試験した好気性グラム陽性菌（多くの抗生
物質耐性連鎖状球菌を含む）はすべて、1.6mc
ｇ／ml又はそれ以下でBu−2517によつて阻止さ
れた。Bu−2517は、一般にブドウ状球菌に対し
てアンホマイシン（両性ペプチド抗生物質）より
２〜４培、連鎖状球菌に対して８〜32倍活性が高
かつた。Bu−2517は、好気性グラム陰性菌に対
して活性を示さなかつた。嫌気性菌に対しては、
種々のクロストリジウム（Clostridium）及びペ
プトストレプトコツカス（Peptostreptococcus）
の属及びプロピオニバクテリウム・アクネス
（Propionibacteriumacnes）の菌株を含む試験し
たグラム陽性桿菌及び球菌のすべてを阻止した。
C.ジフイシル（difficile）及びC.パーフリンゲン
ス（Perfringens）のクリンダマイシン−エリス
ロマイシン抵抗株は、1.6〜3.1mcｇ／mlのBu−
2517に感受性であつた。バクテロイデス
（Bacteroides）及びフソバクテリウム（Fusobac
−terium）菌のような嫌気性グラム陰性桿菌は
一般にBu−2517に対して抵抗性であり、一方ヴ
エイロネラ（Veillonella）菌（グラム陰性球菌）
の２株はBu−2517低濃度において阻止された。
Bu−2517の抗嫌気性菌活性は、アンホマイシン
より２〜16倍高かつた。

【表】

【表】

【表】

【表】

【表】

【表】 Bu−2517の生体内有効性を、好気性及び嫌気
性グラム陽性病原菌、S.オーレウス（aureus）ス
ミス、S.オーレウスBX−1633、S.ピオゲネス
A20201、S.ニユーモニエ（Pneumoniae）
A20759及びC.パーフリンゲンスによつて生じた
マウスの実験感染で評価した。マウスをブタ胃ム
チン（アメリカンラボラトリー、オマハ、ネブラ
スカ州）の５％懸濁液中病原菌の〔 〕致死量の
数倍量で攻撃した。Bu−2517は、細菌攻撃の直
前に筋肉内投与された。マウスを５日間観して中
央防御量（PD₅₀）を決定した。対照抗生物質と
してアンホマイシンを比較して試験した。表６中
下に示すように、Bu−2517の生体内活性は、ア
ンホマイシンの力価と同等ないし３倍の範囲であ
つた。

【表】 マウスにおける血中濃度をBu−2517の静脉内
又は筋肉内投与に引続いて測定した。血液試料を
眼窩洞から集め、試験菌としてS.ルテア（lutea）
PCI1001を使用する紙円板−寒天拡散法によつて
定量した。表７に示されるように、Bu−2517は、
非経口的によく吸収され、高い持続性の血中濃度
が得られた。30mg／Kgの筋肉内投与の際、７時間
後測定可能な血中濃度が観察された。Bu−2517
は、経口投与した時吸収されなかつた。

【表】 ＊ 曲線下面積
Bu−2517の急性毒性を、静脉内及び筋肉内径
路によつて測定した。400mg／Kg（iν）又は1600
mg／Kg（im）の用量まで死亡はなかつた。マウ
スは、800mg／Kgの静脉内用量で死亡し、静脉内
LD₅₀は560ｍ／Kgと計算された。 上に論じた試験管内及び生体内データによつて
て示されるように、Bu−2517は抗菌剤として有
用であり、単独又は他の抗菌剤と組合せて使用し
てグラム陽性好気性及び嫌気性細菌の生育を防止
するか、或いはその数を減少させることができ
る。Bu−2517に感受性である細菌によつておこ
される感染性疾病の処置のために、家禽及び動物
（ヒトを含む）において治療剤として特に有用で
ある。又、Bu−2517は、動物飼料中の栄養補充
剤として又痙瘡の処置剤として価値がある。 本発明は、不活性医薬用担体又は希釈剤と組合
せた有効抗菌量のBu−2517（その医薬として使用
可能な塩を含む）を含有する医薬用組成物をその
範囲内に包含する。このような組成物は、問題の
投与径路に適当な任意の医薬用形態で調合するこ
とができる。非経口投与のためのこのような組成
物の例は、無菌の溶液、懸濁液及び乳濁液を包含
する。非経口投薬形態は又、使用直前に無菌水、
生理食塩水又はいくつかの無菌注射用媒質に溶解
することができる無菌固形組成物の形態で製造す
ることができる。Bu−2517は又、軟膏、クリー
ム、ローシヨン、乳液、サーブ、皮膚軟化剤及び
噴霧剤のような局所用製剤中に配合することがで
きる。 本発明のBu−2517抗生物質（その医薬として
使用可能な塩を含む）は、抗生物質の濃度が処置
される特定の菌について最小阻止濃度より大きく
なるように投与される。 本発明のBu−2517抗生物質は、それを医薬と
して用いる場合、好ましくは0.01mg／Kg〜500
mg／Kgの範囲で好ましい用量を選らび投与されて
用いられうる。 勿論使用される抗生物質の実際の用量は、年
令、体重、性、食事、投与径路、排泄速度、患者
の条件、薬の組合せ及び処置される特定の位置及
び疾病のような因子を考慮して後医師又は獣医師
によつて決定されることが認められる。 本発明は又、グラム陽性好気性又は嫌気性細菌
に侵入された動物宿主に有効抗菌用量のBu−
2517又はその医薬として使用可能な塩を投与する
ことにより該宿主（特に家禽及びヒトを含む動
物）を治療処置する方法を提供する。 次に実施例は、例示としてのみ示され、本発明
の範囲を限定するものではない。ダイアイオン
HP−20（三菱化成工業の商標）は、非イオン系
マクロ網状（マクロ孔性）重合体樹脂である。ダ
ウエツクス１−X2（米国ミシガン州ミドランド在
ダウ・ケミカル・カンパニーの商標）は、ポリス
チレン型の強塩基性陰イオン交換樹脂である。ダ
ウエツクス50W−X4（ダウ・ケミカル・カンパニ
ーの商標）は、ポリスチレン型の強酸性陽イオン
交換樹脂である。 例 １ Bu−2517の醗酵 エムペドバクター属の菌株G393−B445の生物
学的純粋培養のよく生育した斜面培養物を使用し
て２％の可溶性デンプン、１％のグルコース、
0.2％の肉エキス、0.2％のイーストエキス、0.5％
のNZケース及び0.2％のCaCO₃を含有する種培地
（減菌前にpH7.0に調節）に接種した。この種培
養を回転式振とう器（250rpm）上28℃で24時間
温置し、生育物５mlを、３％のシユクロース、２
％のアマニ油、0.3％の（NH₄）₂SO₄及び0.5％の
CaCO₃よりなる醗酵培地100mlを含有する500ml
の三角フラスコに移した。培地のpHを滅菌の前
に7.0に調節した。28℃において回転式振とう器
上醗酵を実施し、醗酵ブロス中の抗生物質活性を
試験菌としてバシラス・ズブチリス（Bacillus
subtilis）PCI219を使用する紙円板−寒天拡散定
量によつて追跡した。振とう培養中の抗生物質生
産は、一般に48〜70時間後最大に達した。 又、上述したのと同じ組成を有する生産培地10
リツトルを含有する20リツトルジヤー醗酵器
〔 〕において醗酵研究を行なつた。醗酵は、28
℃において250rpmの撹拌に20〜23時間行なわれ
た。 例 ２ Bu−2517抗生物質の回収 収得したBu−2517のブロス（37リツトル）を
6NHClの添加によつてpH3.0まで酸性にし、１等
量のｎ−ブタノールと共に１時間撹拌した。抗生
物質活性を含有するｎ−ブタノール層を分離し、
乾固するまで真空蒸発させた。残留物をメタノー
ル（100ml）に溶解し、溶液をアセトン１リツト
ルで希釈してBu−2517抗生物質の粗製の固体
（21ｇ）を沈殿させた。この固体をダウエツクス
１−X2（CH₃COO^-形、800ml）に施用し、これを
水（５リツトル）、0.5M酢酸アンモニウム（５リ
ツトル）及び１：１（ν／ν）1.0M酢酸アンモニ
ウム：メタノール混合物（５リツトル）で順次展
開した。メタノール性酢酸アンモニウム溶液で溶
離した生物活性画分をプールし、小容（約80ml）
になるまで真空濃縮した。この溶液をダイアイオ
ンHP−20（800ml）のカラムに通し、これを水
（６リツトル）、50％水性メタノール（３リツト
ル）及び80％水性メタノール（５リツトル）で順
次展開した。80％水性メタノール溶離液から得ら
れた生物活性画分を蒸発して純Bu−2517標品
（3.80ｇ）を白色固体として得た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 のペプチド抗生物質化合物Bu−2517又はその医
   薬として使用可能な塩（ただし式中Proはプロリ
   ンを表わし、Serはセリンを表わし、Argはアル
   ギニンを表わし、β−OH−Aspはスレオ−β−
   ヒドロキシアスパラギン酸を表わし、３−OH−
   Proはトランス−３−ヒドロキシプロリ、を表わ
   す）。 ２ その両性イオンの形態の特許請求の範囲第１
   項記載のペプチド抗生物質Bu−2517。 ３ 同化可能な炭素及び窒素源を含有する水性栄
   養培地中で深部好気性条件下にエムペドバクター
   層のBu−2517産生株を、該培地中に該生物によ
   つて実質的な量のBu−2517が産生されるまで培
   養し、次に培地からBu−2517抗生物質を回収す
   ることを特徴とするペプチド抗生物質Bu−2517
   の製法。 ４ Bu−2517産生株がATCC31962の同定特性を
   有する特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５ Bu−2517抗生物質をその医薬として使用可
   能な塩に変換する追加工程を包含する特許請求の
   範囲第３項又は第４項に記載の方法。 ６ 不活性の医薬として使用可能な担体又は希釈
   剤と組合せた有効抗菌量のBu−2517又はその医
   薬として使用可能な塩よりなる抗菌用組成物。