JPH0348169B2 - - Google Patents
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- JPH0348169B2 JPH0348169B2 JP56027448A JP2744881A JPH0348169B2 JP H0348169 B2 JPH0348169 B2 JP H0348169B2 JP 56027448 A JP56027448 A JP 56027448A JP 2744881 A JP2744881 A JP 2744881A JP H0348169 B2 JPH0348169 B2 JP H0348169B2
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
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- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
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- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
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- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、寒冷不溶性グロブリン含有水溶液の
加熱処理方法に関する。 寒冷不溶性グロブリン（cold insoluble
globulin：以下CIGと称す）は、これまでから大
外面トリプシン感受性蛋白（large external
trypsin sensitive protein：LETS）、細胞表面蛋
白（cell surface protein：CSP）、細胞粘着因
子）cell adhesion factor：CAF）あるいはオプ
ソニツクα2表面結合糖蛋白（０−α2SBG）など
として呼ばれてきたが、最近では概ねCIGあるい
は線維芽細胞膜蛋白（fibronectin）と呼ばれて
おり、血漿の他線維芽細胞などの間葉系細胞や表
皮などの基底膜に存在する分子量440000の糖蛋白
である。CIGにつき他に知られている物理化学的
性状としては、易動度がα2グロブリンであり、等
電点は5.0、分子吸光係数Ａ１％ 1cm280nｍが12.9〜
13.0、S20、wが11〜14S、糖含量が５％などがあ
げられる。 血液凝固に際しては、血液凝固第因子のト
ランスグルタミネーシヨンの作用によりフイブリ
ンのγ鎖間結合が促進され、フイブリンの架橋が
形成される。この際、同じ因子の触媒作用に
より、CIGを通じてフイブリンのα鎖間の架橋が
形成され、これにより血液凝固はより完全なもの
となる。CIGはまた細胞間、細胞支持組織間を粘
着あるいは結合させる作用があり、創傷治癒促進
の薬理効果がある。CIGの薬理効果としてこれま
でに報告されているものには、敗血病性シヨツク
の治療、食細胞のオプソニン作用を高めることに
基づく感染症の治療などがあげられる他、細胞間
の粘着性を高め、癌細胞を壊死に至らしめること
による抗癌、抗白血病作用のあることが知られて
おり、CIGの薬剤としての臨床効果に期待がかけ
られるところは広大なものである。 ところで、CIGは線維芽細胞、その培養液、血
漿蛋白の分画などから分離することによつて得ら
れるものであるが、これらから分離するとウイル
ス等の混入してくる危険性がある。特に血漿蛋白
の分画から得る場合には、肝炎ウイルスの混在が
懸念され、これが大きな問題の一つとなつてい
る。中でもＢ型肝炎については、血漿材料をラジ
オインムノアツセイや逆受身赤血球凝集試験など
の高い検出感度を有する方法で試験して、ウイル
ス（hepatitis Ｂ virus：HBV）の陰性の血漿
のみを分画に供用することにより血漿分画製剤に
よるＢ型肝炎感染の防止に大いに寄与したが、そ
れでも完全防止はとうていおぼつかない。すなわ
ち、これらの方法で検定してＢ型肝炎表面抗原
（HBsAg）陰性の場合でも、尚且つその血漿１ml
中に108個のHBsAgが存在している可能性があ
り、これはHBVとしては105個に相当する。 この様に肝炎発症の危険性を否定し得ない血漿
分画製剤において、肝炎ウイルスの不活性化には
じめて成功したのが、アルブミン製剤に対する60
℃、10時間の加熱処理である。この処理は肝炎ウ
イルスの感染性を1/10000に低下せしめ得ること
が最近になつて明らかとされている。 CIGも臨床に用いる製剤の場合、肝炎感染防止
のための60℃、10時間の加熱処理が施されている
ことが極めて重要であるが、通常の生理的食塩溶
液等の水溶液中でこれを行うと、大部分が活性を
失うかまたは蛋白分子が変性してしまう。 たとえば、CIGを生理食塩溶液、2.1Mグリシ
ン含有0.2Mトリスーリン酸緩衝液（PH7.0）、
0.05Mリン酸緩衝液（PH6.0）など各種の溶液で
溶解した溶液につき60℃、10時間の加熱処理を施
したが、いずれの場合も回収率12％を超えるもの
はなかつた。 そこで本発明者らは種々検討を重ね、CIGを含
有する水溶液を肝炎ウイルスを不活化するための
加熱処理に付すに際して中性アミノ酸、単糖類、
二糖類および／または糖アルコール（これらを主
安定化剤と総称する）を添加すれば加熱処理に対
するCIGの熱安定性が著しく高まることを見出す
と共に、上記主安定化剤に加えて、さらに特定の
有機カルボン酸塩（補助安定化剤と略記する）を
共存させることによつてCIGの熱安定性がより一
層高められることを見出し、本発明を完成した。 即ち本発明は、寒冷不溶性グロブリン含有水溶
液に対して、中性アミノ酸、単糖類、二等類、糖
アルコール類から選ばれた少なくとも一種の主安
定化剤の存在下に肝炎ウイルスを不活化するため
の加熱処理をすることによる寒冷不溶性グロブリ
ン含有水溶液の加熱処理方法である。さらに本発
明は、上記主安定化剤に加えて、炭素数３〜10の
有機カルボン酸塩から選ばれた少なくとも一種の
補助安定化剤の存在下に加熱処理をすることによ
る、上記加熱処理方法である。 本発明におけるCIG含有水溶液としては、一般
に血漿蛋白の分画、線維芽細胞、その培養液由来
のCIGを含む水溶液が用いられる。CIGを含む水
溶液は未精製な水溶液から精製された水溶液ま
で、いかなる段階のCIG水溶液であつてもよい
が、有利には部分精製または精製段階の水溶液が
加熱処理の対象とされ、その蛋白質（CIGを含
む）の含量が0.1〜10％Ｗ／Ｖのものが好ましい。 また、当該水溶液のPHは一般にPH５〜10であ
り、低塩濃度の緩衝液でPH6.5〜8.5に調整されて
いることがより好ましい。 CIG含有水溶液に加えられる主安定化剤に関し
て、中性アミノ酸（即ち、モノアミノモノカルボ
ン酸）としては、グリシン、アラニン、バリン、
ロイシン、イソロイシンなどが、単糖類として
は、グルコース、マンノース、ガラクトース、果
糖などが、二糖類としては、シヨ糖、麦芽糖、乳
糖などが、糖アルコールとしては、マンニツト、
ソルビツト、キシリツトなどが例示されるが、こ
れらに限定されるものではない。当該主安定化剤
の添加量は、10〜50％Ｗ／Ｖである。 本発明で使用される補助安定剤としての炭素数
３〜10の有機カルボン酸は、炭化水素残基にカル
ボキシ基が置換したものをいい、炭化水素残基は
飽和されていても不飽和であつてもよい。当該炭
化水素残基としては、たとえばアルキル基、アリ
ール基（たとえばフエニル基）、アラルキル基な
どがあげられる。当該有機カルボン酸におけるカ
ルボキシル基は複数個であつてもよいが、好まし
いものは１および２個である。また、当該有機カ
ルボン酸は水酸基で置換されていてもよい。有機
カルボン酸塩における塩としては、生理的に許容
されるものであれば、特に制限はなく、好ましい
ものとして、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カ
リウム塩など）、アルカリ土類金属塩（カルシウ
ム塩など）、特に好ましいものとしてはナトリウ
ム塩、カリウム塩があげられる。 上記有機カルボン酸塩の具体例としては、たと
えばプロパン酸、ブタン酸、ベンタン酸、カプリ
ル酸、カプロン酸、マロン酸、コハク酸、グルタ
ル酸、アジピン酸、クエン酸、マンデル酸などの
生理的に許容される塩、特にアルカリ金属塩（ナ
トリウム塩、カリウム塩）があげられる。 有機カルボン酸塩の添加量は、10〜30％Ｗ／
Ｖ、である。 加熱処理は、肝炎ウイルスを不活化するに十分
な温度及び時間行えばよく、たとえば約50゜〜70
℃、好ましくは約60℃にて約５〜20時間、好まし
くは約10時間行われる。 肝炎ウイルスの不活化加熱処理を行つた水溶液
中に残存する安定剤は透析、特に濃縮を伴う減圧
透析により、又は硫安沈殿処理による上清として
除去することができる。 以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
るが本発明はこれらにより何ら限定されるもので
はない。 参考例 プールした正常成人血漿よりエタノール分画し
て得られる画分−１より適当な方法でCIGを精製
する。たとえば松田ら（Ann.N.Y.Acad.Sci.、
312、74、1978年）の方法に従い画分−Ｉを
0.055Mクエン酸ナトリウム緩衝液、PH6.0に溶解
し、これにプラスミンによるCIGの分解を防ぐた
めに0.01MのEACA（イプシロン・アミノカプロ
ン酸）およびアプロチニン10単位／mlを加え、更
に臭化シアンで活性化させたセフアロースにリジ
ンをカツプルさせたリジン−セフアロースにより
プラスミンおよびプラスミノゲンを除去したの
ち、ヘパリン10単位／mlを加えて0゜〜２℃に48時
間静置して沈澱を集める。沈澱は0.05Mリン酸緩
衝液、PH6.0と1Mグリシンおよび6.5％エタノー
ルを含む0.055Mクエン酸緩衝液とでそれぞれ洗
浄して可溶性蛋白を除去したのち、0.055Mクエ
ン酸緩衝液、PH6.35を加えて室温にもたらし、沈
澱を溶解させる。これを初めと同様0゜〜２℃に放
置後沈澱を分けとり洗浄する操作を３回繰り返し
行い、最後に沈澱としてCIGを含有する画分クラ
イオフイブリノゲンを得る。 クライオフイブリノゲン（沈澱）を、クライオ
フイブリノゲンを集めるのに用いた原料画分−Ｉ
の重量の２倍量の0.05Mトリス−リン酸緩衝液、
PH7.0に溶解し、これを0.05Mトリス−リン酸緩
衝液、PH7.0で平衡化したDEAE−セフアデツク
スに吸着させ、同一緩衝液および0.09Mトリス−
リン酸緩衝液、PH7.0で洗浄して夾雑蛋白を除去
したのち、0.2Mトリス−リン酸緩衝液、PH7.0で
CIGの溶出を行なう。 実施例 １ 0.05Mトリス−リン酸緩衝液、PH8.0に溶解し
た30mg／mlのCIGを含有する水溶液１にシヨ糖
１Kgを添加した。これをよく撹拌した後、60℃で
10時間加熱した。冷却後、0.9％塩化ナトリウム
溶液に対して透析し、遠心分離して澄明な液を得
た。 このようにして得られたCIGにつき一元免疫拡
散法でCIGを定量したところ、CIGの回収率は83
％であつた。 実施例 ２ 実施例１で得たCIGを含有する水溶液１にシ
ヨ糖１Kg、クエン酸ナトリウム190ｇを添加した。
これをよく撹拌した後、60℃で10時間加熱した。
冷却後、0.9％塩化ナトリウム溶液に対して透析
し、遠心分離して透明な液を得た。 このようにして得られたCIGにつき一元免疫拡
散法でCIGを定量したところ、CIGの回収率は
100％であつた。 実験例 １ 実施例１および２で得た加熱処理CIGは0.05M
トリス−リン酸緩衝液、PH7.0でセフアデツクス
Ｇ−200によるゲルろ過を行い、CIGを含有する
分画を集め40％硫安飽和となし、生じた沈澱を集
め0.05Mトリス−リン酸緩衝液、PH7.0で透析し
て蛋白濃度１％の精製CIG溶液を得た。 この溶液につき抗ヒト全血清（ウサギ）を用い
て免疫電気泳動を行つたが、CIG以外の沈降線は
認められなかつた。 実験例 ２ 実験例１で得られた精製CIGを用いて、これを
ウサギに免疫し抗ヒトCIG（加熱処理）抗血清
（anti−CIG）を得た。別に加熱処理を施すこ
となく常法に従つて精製したCIGをウサギに免疫
して抗血清（anti−CIG）を得た。これら両抗
血清を用いて二元免疫拡散法を行つた。その結
果、加熱処理精製CIGおよび非加熱精製CIGの２
種のCIG抗原は、anti−CIGに対してもanti−
CIに対しても、いずれにおいても沈降線は２
者相互間に完全に融合し、交叉および部分交叉は
全く認められなかつた。 このことから加熱処理を受けたCIGに抗原性の
加不足を来すような変性は認められなかつた。 実験例 ３ 本発明による安定化効果を確認するための実験
を行つた。実験には30mg／mlのCIGを含有する水
溶液１を調製し、各種安定化剤を添加後（添加
量は表中に明記）、60℃、10時間の処理をなし、
加熱処理前に対する総CIG値の残存率を表１およ
び表２に示した。 この結果、各種安定化剤を添加することによつ
てCIGの加熱安定性は増大している（表１）。ま
た主安定化剤に補助安定化剤を添加することで
CIGの加熱安定性はより一層増大している（表
２）。 【表】 【表】 【表】
加熱処理方法に関する。 寒冷不溶性グロブリン（cold insoluble
globulin：以下CIGと称す）は、これまでから大
外面トリプシン感受性蛋白（large external
trypsin sensitive protein：LETS）、細胞表面蛋
白（cell surface protein：CSP）、細胞粘着因
子）cell adhesion factor：CAF）あるいはオプ
ソニツクα2表面結合糖蛋白（０−α2SBG）など
として呼ばれてきたが、最近では概ねCIGあるい
は線維芽細胞膜蛋白（fibronectin）と呼ばれて
おり、血漿の他線維芽細胞などの間葉系細胞や表
皮などの基底膜に存在する分子量440000の糖蛋白
である。CIGにつき他に知られている物理化学的
性状としては、易動度がα2グロブリンであり、等
電点は5.0、分子吸光係数Ａ１％ 1cm280nｍが12.9〜
13.0、S20、wが11〜14S、糖含量が５％などがあ
げられる。 血液凝固に際しては、血液凝固第因子のト
ランスグルタミネーシヨンの作用によりフイブリ
ンのγ鎖間結合が促進され、フイブリンの架橋が
形成される。この際、同じ因子の触媒作用に
より、CIGを通じてフイブリンのα鎖間の架橋が
形成され、これにより血液凝固はより完全なもの
となる。CIGはまた細胞間、細胞支持組織間を粘
着あるいは結合させる作用があり、創傷治癒促進
の薬理効果がある。CIGの薬理効果としてこれま
でに報告されているものには、敗血病性シヨツク
の治療、食細胞のオプソニン作用を高めることに
基づく感染症の治療などがあげられる他、細胞間
の粘着性を高め、癌細胞を壊死に至らしめること
による抗癌、抗白血病作用のあることが知られて
おり、CIGの薬剤としての臨床効果に期待がかけ
られるところは広大なものである。 ところで、CIGは線維芽細胞、その培養液、血
漿蛋白の分画などから分離することによつて得ら
れるものであるが、これらから分離するとウイル
ス等の混入してくる危険性がある。特に血漿蛋白
の分画から得る場合には、肝炎ウイルスの混在が
懸念され、これが大きな問題の一つとなつてい
る。中でもＢ型肝炎については、血漿材料をラジ
オインムノアツセイや逆受身赤血球凝集試験など
の高い検出感度を有する方法で試験して、ウイル
ス（hepatitis Ｂ virus：HBV）の陰性の血漿
のみを分画に供用することにより血漿分画製剤に
よるＢ型肝炎感染の防止に大いに寄与したが、そ
れでも完全防止はとうていおぼつかない。すなわ
ち、これらの方法で検定してＢ型肝炎表面抗原
（HBsAg）陰性の場合でも、尚且つその血漿１ml
中に108個のHBsAgが存在している可能性があ
り、これはHBVとしては105個に相当する。 この様に肝炎発症の危険性を否定し得ない血漿
分画製剤において、肝炎ウイルスの不活性化には
じめて成功したのが、アルブミン製剤に対する60
℃、10時間の加熱処理である。この処理は肝炎ウ
イルスの感染性を1/10000に低下せしめ得ること
が最近になつて明らかとされている。 CIGも臨床に用いる製剤の場合、肝炎感染防止
のための60℃、10時間の加熱処理が施されている
ことが極めて重要であるが、通常の生理的食塩溶
液等の水溶液中でこれを行うと、大部分が活性を
失うかまたは蛋白分子が変性してしまう。 たとえば、CIGを生理食塩溶液、2.1Mグリシ
ン含有0.2Mトリスーリン酸緩衝液（PH7.0）、
0.05Mリン酸緩衝液（PH6.0）など各種の溶液で
溶解した溶液につき60℃、10時間の加熱処理を施
したが、いずれの場合も回収率12％を超えるもの
はなかつた。 そこで本発明者らは種々検討を重ね、CIGを含
有する水溶液を肝炎ウイルスを不活化するための
加熱処理に付すに際して中性アミノ酸、単糖類、
二糖類および／または糖アルコール（これらを主
安定化剤と総称する）を添加すれば加熱処理に対
するCIGの熱安定性が著しく高まることを見出す
と共に、上記主安定化剤に加えて、さらに特定の
有機カルボン酸塩（補助安定化剤と略記する）を
共存させることによつてCIGの熱安定性がより一
層高められることを見出し、本発明を完成した。 即ち本発明は、寒冷不溶性グロブリン含有水溶
液に対して、中性アミノ酸、単糖類、二等類、糖
アルコール類から選ばれた少なくとも一種の主安
定化剤の存在下に肝炎ウイルスを不活化するため
の加熱処理をすることによる寒冷不溶性グロブリ
ン含有水溶液の加熱処理方法である。さらに本発
明は、上記主安定化剤に加えて、炭素数３〜10の
有機カルボン酸塩から選ばれた少なくとも一種の
補助安定化剤の存在下に加熱処理をすることによ
る、上記加熱処理方法である。 本発明におけるCIG含有水溶液としては、一般
に血漿蛋白の分画、線維芽細胞、その培養液由来
のCIGを含む水溶液が用いられる。CIGを含む水
溶液は未精製な水溶液から精製された水溶液ま
で、いかなる段階のCIG水溶液であつてもよい
が、有利には部分精製または精製段階の水溶液が
加熱処理の対象とされ、その蛋白質（CIGを含
む）の含量が0.1〜10％Ｗ／Ｖのものが好ましい。 また、当該水溶液のPHは一般にPH５〜10であ
り、低塩濃度の緩衝液でPH6.5〜8.5に調整されて
いることがより好ましい。 CIG含有水溶液に加えられる主安定化剤に関し
て、中性アミノ酸（即ち、モノアミノモノカルボ
ン酸）としては、グリシン、アラニン、バリン、
ロイシン、イソロイシンなどが、単糖類として
は、グルコース、マンノース、ガラクトース、果
糖などが、二糖類としては、シヨ糖、麦芽糖、乳
糖などが、糖アルコールとしては、マンニツト、
ソルビツト、キシリツトなどが例示されるが、こ
れらに限定されるものではない。当該主安定化剤
の添加量は、10〜50％Ｗ／Ｖである。 本発明で使用される補助安定剤としての炭素数
３〜10の有機カルボン酸は、炭化水素残基にカル
ボキシ基が置換したものをいい、炭化水素残基は
飽和されていても不飽和であつてもよい。当該炭
化水素残基としては、たとえばアルキル基、アリ
ール基（たとえばフエニル基）、アラルキル基な
どがあげられる。当該有機カルボン酸におけるカ
ルボキシル基は複数個であつてもよいが、好まし
いものは１および２個である。また、当該有機カ
ルボン酸は水酸基で置換されていてもよい。有機
カルボン酸塩における塩としては、生理的に許容
されるものであれば、特に制限はなく、好ましい
ものとして、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カ
リウム塩など）、アルカリ土類金属塩（カルシウ
ム塩など）、特に好ましいものとしてはナトリウ
ム塩、カリウム塩があげられる。 上記有機カルボン酸塩の具体例としては、たと
えばプロパン酸、ブタン酸、ベンタン酸、カプリ
ル酸、カプロン酸、マロン酸、コハク酸、グルタ
ル酸、アジピン酸、クエン酸、マンデル酸などの
生理的に許容される塩、特にアルカリ金属塩（ナ
トリウム塩、カリウム塩）があげられる。 有機カルボン酸塩の添加量は、10〜30％Ｗ／
Ｖ、である。 加熱処理は、肝炎ウイルスを不活化するに十分
な温度及び時間行えばよく、たとえば約50゜〜70
℃、好ましくは約60℃にて約５〜20時間、好まし
くは約10時間行われる。 肝炎ウイルスの不活化加熱処理を行つた水溶液
中に残存する安定剤は透析、特に濃縮を伴う減圧
透析により、又は硫安沈殿処理による上清として
除去することができる。 以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
るが本発明はこれらにより何ら限定されるもので
はない。 参考例 プールした正常成人血漿よりエタノール分画し
て得られる画分−１より適当な方法でCIGを精製
する。たとえば松田ら（Ann.N.Y.Acad.Sci.、
312、74、1978年）の方法に従い画分−Ｉを
0.055Mクエン酸ナトリウム緩衝液、PH6.0に溶解
し、これにプラスミンによるCIGの分解を防ぐた
めに0.01MのEACA（イプシロン・アミノカプロ
ン酸）およびアプロチニン10単位／mlを加え、更
に臭化シアンで活性化させたセフアロースにリジ
ンをカツプルさせたリジン−セフアロースにより
プラスミンおよびプラスミノゲンを除去したの
ち、ヘパリン10単位／mlを加えて0゜〜２℃に48時
間静置して沈澱を集める。沈澱は0.05Mリン酸緩
衝液、PH6.0と1Mグリシンおよび6.5％エタノー
ルを含む0.055Mクエン酸緩衝液とでそれぞれ洗
浄して可溶性蛋白を除去したのち、0.055Mクエ
ン酸緩衝液、PH6.35を加えて室温にもたらし、沈
澱を溶解させる。これを初めと同様0゜〜２℃に放
置後沈澱を分けとり洗浄する操作を３回繰り返し
行い、最後に沈澱としてCIGを含有する画分クラ
イオフイブリノゲンを得る。 クライオフイブリノゲン（沈澱）を、クライオ
フイブリノゲンを集めるのに用いた原料画分−Ｉ
の重量の２倍量の0.05Mトリス−リン酸緩衝液、
PH7.0に溶解し、これを0.05Mトリス−リン酸緩
衝液、PH7.0で平衡化したDEAE−セフアデツク
スに吸着させ、同一緩衝液および0.09Mトリス−
リン酸緩衝液、PH7.0で洗浄して夾雑蛋白を除去
したのち、0.2Mトリス−リン酸緩衝液、PH7.0で
CIGの溶出を行なう。 実施例 １ 0.05Mトリス−リン酸緩衝液、PH8.0に溶解し
た30mg／mlのCIGを含有する水溶液１にシヨ糖
１Kgを添加した。これをよく撹拌した後、60℃で
10時間加熱した。冷却後、0.9％塩化ナトリウム
溶液に対して透析し、遠心分離して澄明な液を得
た。 このようにして得られたCIGにつき一元免疫拡
散法でCIGを定量したところ、CIGの回収率は83
％であつた。 実施例 ２ 実施例１で得たCIGを含有する水溶液１にシ
ヨ糖１Kg、クエン酸ナトリウム190ｇを添加した。
これをよく撹拌した後、60℃で10時間加熱した。
冷却後、0.9％塩化ナトリウム溶液に対して透析
し、遠心分離して透明な液を得た。 このようにして得られたCIGにつき一元免疫拡
散法でCIGを定量したところ、CIGの回収率は
100％であつた。 実験例 １ 実施例１および２で得た加熱処理CIGは0.05M
トリス−リン酸緩衝液、PH7.0でセフアデツクス
Ｇ−200によるゲルろ過を行い、CIGを含有する
分画を集め40％硫安飽和となし、生じた沈澱を集
め0.05Mトリス−リン酸緩衝液、PH7.0で透析し
て蛋白濃度１％の精製CIG溶液を得た。 この溶液につき抗ヒト全血清（ウサギ）を用い
て免疫電気泳動を行つたが、CIG以外の沈降線は
認められなかつた。 実験例 ２ 実験例１で得られた精製CIGを用いて、これを
ウサギに免疫し抗ヒトCIG（加熱処理）抗血清
（anti−CIG）を得た。別に加熱処理を施すこ
となく常法に従つて精製したCIGをウサギに免疫
して抗血清（anti−CIG）を得た。これら両抗
血清を用いて二元免疫拡散法を行つた。その結
果、加熱処理精製CIGおよび非加熱精製CIGの２
種のCIG抗原は、anti−CIGに対してもanti−
CIに対しても、いずれにおいても沈降線は２
者相互間に完全に融合し、交叉および部分交叉は
全く認められなかつた。 このことから加熱処理を受けたCIGに抗原性の
加不足を来すような変性は認められなかつた。 実験例 ３ 本発明による安定化効果を確認するための実験
を行つた。実験には30mg／mlのCIGを含有する水
溶液１を調製し、各種安定化剤を添加後（添加
量は表中に明記）、60℃、10時間の処理をなし、
加熱処理前に対する総CIG値の残存率を表１およ
び表２に示した。 この結果、各種安定化剤を添加することによつ
てCIGの加熱安定性は増大している（表１）。ま
た主安定化剤に補助安定化剤を添加することで
CIGの加熱安定性はより一層増大している（表
２）。 【表】 【表】 【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 寒冷不溶性グロブリン含有水溶液に対して中
性アミノ酸、単糖類、二糖類、糖アルコール類か
ら選ばれた少なくとも一種の主安定化剤の存在下
に肝炎ウイルスを不活化するための加熱処理をす
ることを特徴とする寒冷不溶性グロブリン含有水
溶液の加熱処理方法。 ２ 主安定化剤に加えて炭素原子数３〜10の有機
カルボン酸塩から選ばれた少なくとも一種の補助
安定化剤の存在下に肝炎ウイルスを不活化するた
めの加熱処理をすることを特徴とする特許請求の
範囲第１項記載の加熱処理方法。
Priority Applications (6)
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|---|---|---|---|
| JP56027448A JPS57140724A (en) | 1981-02-25 | 1981-02-25 | Heat-treatment of aqueous solution containing cold insoluble globulin |
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|---|---|---|---|
| JP56027448A JPS57140724A (en) | 1981-02-25 | 1981-02-25 | Heat-treatment of aqueous solution containing cold insoluble globulin |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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ID=12221394
Family Applications (1)
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