JPH0349670A - 生残性ビフィズス菌組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ビフィズス閏とイヌロオリゴ糖を混合した、
ビフィズス菌の生菌数を長叶間高水鵡に維持できる生残
性ビフィズス菌組成物に関する。

〔従来の技術〕

従来、ビフィズス菌は有用腸内細閑として、また腸内腐
敗閑による腐敗の抑制作用や、下痢をはじめとする様々
な腸疾患の改善のため、各種ビフィズス菌製剤として、
家畜用を含めて市販されている。しかしながら一般にビ
フィズス菌は保存中に死滅しやすいという問題があり、
この問題を改善するために脱脂粉乳や澱粉などを保護剤
として製剤化されているが、それでも生残性は低く、そ
の効果は十分とは言えない。

そのため、特開昭５２−１５１７８７号公報のようにラ
クチュロースをビフィズス菌粉末に混合したり、特公昭
６３−３５８５号公報のようにビタミンＥを配合したり
、特公昭６３−１２５９４号公報のように生澱粉を混合
してビフィズス閑の生残性を高めようとする試みについ
ての開示もなされている。

一方、ビフィズス閑の１曽殖活性を持つ拡類として、バ
ラチノース（特開昭５７−９１１９３号公報）、フラク
１・オリゴｌｌｉ（特公明５つ−５３８３４号公報）、
分岐，ｔ−　ＩＪゴ糖（特１５Ｆｌ　ｌｒ７１６　１−
２２７７７７号公報）及びキシロオリゴｖ！！（特開昭
６３−１１２９７９号公報）などが開示されている。

〔発明が解決しようとするｆｉｌｌ題〕前記のように種
々の穂がビフィズス菌の増埴活性に役立つものとされて
いるが、ラクチュロースはビフィズス菌のみならず、大
腸閑やクロス１・リジウムなどの腸内細胞にも非選択的
に資化されるという欠点を有している。

またパラチノース、フラク１・オリゴ穂、分一！ζオリ
ゴ糖及びキシロオリゴ粘については各々ビフィズス菌に
より選択的に資化され、かつ腸内でのビフィズス閑の選
択的増殖因子となるとされているが、いずれもビフィズ
ス菌の保在中および生体内における生残性については明
らかではなく、かつ免疫増強活性は全く示されていない
。

本発明の目的は、保存中ならびに生体内におけるビフィ
ズス菌の生残性を高めたビフィズス菌組成物を提供する
ことであり、更にビフィズス菌の選択的増殖因子であり
、なおかつマクロファージ賦活活性による免疫増強活性
をも有する保護剤を、ビフィズス閑に配合したビフィズ
ス菌活性保持製剤を提供することである。

〔課題を解決するための手段〕 木発叩者らは、前記の課題を解決するため、鋭意研究を
行なった粘果、ビフィズス菌粉末にイメロオリゴ塘を混
合すればビフィズス菌の生残件が著しく向上し、この組
成物の摂取により腸内でのビフィズス菌の増殖が促進さ
れ、腸疾患が改善されるばかりでなく、更に免疫増強活
性が極めて高められることを見い出して、本発明を完成
するに到った。

すなわち本発明はイヌロオリゴ糖を固形分を話準として
２０〜６０ｆｆｌＥ１％含有し、かつ全体組成物１ｇ当
りビフィズス菌を生菌数として少なくとも１０８含んで
なる生残性ビフィズス菌組成物である。

以下、本発明について詳細に説明する。

本発明で保護剤として使用するイヌロオリゴ糖とはフラ
クトースにフラクトースがβ−２．１粘合で２〜５分子
桔合したオリゴ糖で、イヌロトリオース（Ｆ３），イヌ
口テトラオース（Ｆ４），イヌロペンタオース（Ｆ５）
，イヌ口ヘキサオース（Ｆ６）を言い、末端にグルコー
ス残是を有するフラクトオリゴ糖を１０％程度含む。

イヌロオリゴ糖はイヌリンを希酸又は酵素で分角乍して
得られるが、高純度のイヌロオリゴ糖を効串良く得るに
は、例えばペニシリウム属カビのエンド型イヌリナーゼ
を用いてイヌリンを加水分解する方法等がある。

また家畜用などで高純度のイヌロオリゴ帖を必要としな
い場合には、キクイモ、チコリーなどのイヌリン含有植
物を直接エンド型イヌリナーゼにより酵素分角？する方
法によって効率良く得ることができる。これらの方法に
よって、固形分中のイヌロオリゴ糖含有量が少なくとも
３０％であるようなイヌロオリゴ粘含有物を得ることが
できる。

次に本発明に用いるビフィズス閑は、ビフィドバクテリ
ウムに属する公知の菌株であれば、どの菌株を用いてて
もよいが、イヌロオリゴ糖との組成物を投与する宿主の
腸内に定着しやすいもの、例えば人間の場合にはビフィ
ドバクテリウム●アドレッセンティス（　Ｂｌｌ’ｌｄ
ｏｂａｃＬｃｒｌｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）　、
ビフィドバクテリウム◆ビフィダム（Ｂ．ｂｉｆｌｄｏ
ｓ　）　、ビフィドバクテリウム・ロンガム（［１．　
Ｉｏｎｇｕｍ　）　、また家畜の場合には、ビフィドバ
クテリウム●シュードロンガム（ｎ．　ｐｓｏｕｄｏｌ
ｏｎｇｕＩ１）　．．　ビフィドバクテリウム●サーモ
フィラム（１１．　ｔｈｏｒｌ０１）ｈｌｒｕｌ　）な
どを用いることか望ましい。

ビフィズス菌を通常用いられている培地及び培養方法で
培捜した後、遠心分離して集菌、洗浄を９ 経て、１ｇ当り約１０　〜１０ｌ１のビフィズス閑を含
有する６ｉ閑体を得る。分散媒約２０％を含む滅菌水１
ｇに、この湿菌体を約１００ｇ添加混合して、凍桔乾燥
、粉砕してビフィズス菌粉末とする。ここで用いる分散
媒としては、例えば、シヨ糖５％、脱脂乳４％を主体と
する一般的なものを使用できる。従って分散媒及び割含
については全く限定されるものではない。

このようにして得たビフィズス菌粉末の水分含量は５％
以下であり、１ｇ当り少なくとも１０９の生菌数のビフ
ィズス菌を含んでいる。

このビフィズス菌粉末を前記のイヌロオリゴ粧含有物に
添加混合して、凍結乾燥すると、イヌロオリゴ穂含量が
２０〜６０重量％であり、かつ、これら組成物の１ｇ当
りビフィズス閑を生閑数として少なくとも１０８含むイ
ヌロオリゴ塘含有ビフィズス菌組成物を得ることができ
る。

このようにして得た本発明の組成物を直ちに密封包装し
て、そのままビフィズス菌製剤として用いてもよく、ま
た家畜に投与する場合には、飼料に０．１〜５重量％添
加混合して用いればよい。

なお、本発明において、イヌロオリゴ糖を２０〜６０重
量９６とした理山は、２０重量％未満では、ビフィズス
閑の生残効果及び腸内での１曽殖効果を十分達成するこ
とができず、６０重量％を超えると効果は飽和し、それ
以上の効果は認められず経済的でない。

また組戊物１ｇ当りの生菌数を１０８以上としたのは、
ビフィズス菌の生残性を高めると共に、腸内での腸疾患
の改善を十分達成するためである。

本発明のイヌロオリゴ糖含有ビフィズス菌組成物は、イ
ヌロオリゴ鈷によってビフィズス菌が保護されるために
、ビフィズス菌の生残性が極めて高く、室温で６ケ月間
保Ｈ後の生残率が市販のビフィズス菌製剤では２０％以
下であるのに対して、本発明組成物の場合は６０〜８５
％となる。

更に該組成物が投与されて体内に入ってからち、イヌロ
オリゴ糖はビフィズス閑により選択的に資化され、その
結果腸内菌叢はビフィズス菌が優勢となり、大腸菌やク
ロストリジウムなどの腐敗菌の生育が抑制されて、下痢
などの腸疾患が改善される。

また、この組成物の投りにより、イヌロオリゴ糖の持つ
マクロファージ賦活活性や、ビフィズス菌細胞壁由来の
免疫１曽強効果が作用して、生体の感染防御能をも高め
ることができる。

〔実施例〕

以下に実施例によって、本発明を更に具体的に説明する
が、本発明は、この実施例によって限定されるものでな
いことはいうまでもない。

（イヌロオリゴ箇含有物の製造） イヌリン（チコリー根より分離精製したもの）　０６　
５重量％マルトース　　　　　　　　　　　　　　　　
　０．５重量％ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４　　　　　　　　　　
　　０．２７重量％Ｋ２ＨＰＯ４　　　　　　　　　　
　　　　０．１重量％ＭｇＳＯ４●７Ｈ，，Ｏ　　　　
　　　　　　　Ｏ．０５重瓜％ツィーン８０　　　　　
　　　　　　　　　　　　　０．０２重量％これらをさ
らに水道水で調製してｐＨ７，Ｏとした後、５　０　０
　ｍｌ坂口フラスコに１００ｍｌ取り、滅菌したものに
ＦＥＲＭ　　Ｐ−８７０５（Ｐｏｎｌｃｌｌｌｌｕｓ　
ｐｕｒｐｕｒｏｇｏｎｕｍ　ｗａｒ　ｒｕｂｒｌ−ｓｃ
ｌｅｒｏｔｌｕｓ）を１白金耳接種して、２８℃で４８
時間前培養する。別に’ｌ　ミニジャーに３．５１の同
じ培地を入れ滅菌後、前培養液を接種して２８℃で９６
晴間通気培養した。培養液を炉過して菌体を分離した培
養；戸液（３．’ｌイヌリナーゼ活性６　ｕ　／　ｍｌ
　）に硫安を添加して、４０〜８０％飽和沈澱画分を遠
心分離により集め、Ｍ／１００酢酸バッファ一液（ｐＨ
５．０）により透析した。

得られた粗酵素液１　０　０　ｍｌの活性は２　１　０
　ｕ　／　ｍｌであった。この粗酵素液を２０％イヌリ
ン溶液にイヌリン１ｇ当り３ｕ添加して、ｐＨ５、０、
６０℃で４８時間酵素分解した。この反応生成物がイヌ
ロオリゴ糖含有物である。

（ビフィズス菌粉末の製造） グリコース　　　　　　　　　　　５．Ｏｇバクトリバ
ー浸出液　　　　　　ＩＪ７プロテオースペプトン　　
　　１０１ｌトリプチケース　　　　　　　　５．０ｇ
酵母エキス　　　　　　　　　　３．０ｇツィーン８０
　　　　　　　　　　　１．０．Ｌ−システィン塩酸塩
　　　　　２．Ｏｆこれらの培地にＤＳＭ２０２１３　
（旧ｒｌｄｏ−ｂａｃｔｅｒｌｕｓ　ｂｒｅｖｅ　）を
接種して、３７℃で３日間静置培養した。

得られた培養液を遠心分離して集菌し、閑体を生理食塩
水でδ（浄して再び遠心分離後、カゼイン１２重量％、
ラクトース２０重量％、グルタミン酸ナトリウム２重量
％を含む分散媒に懸濁して凍結乾燥した。

こうして水分含量２．１重量％、ビフィズス菌の生菌数
が１ｇ当り２Ｘ１０”であるビフィズス菌粉末を得た。

（実施例１） 前記ビフィズス閑粉末１００ｇを固形分７５重量％のイ
ヌロオリゴ糖含有物１３０ｇに懸濁した後、常法により
凍結乾燥して、本発明に言う生残性ビフィズス菌組成物
約１９０ｇを得た。この粉末の水分含量は１．−８重量
％であり、イヌロオリゴ糖を固形分中の約４５重量％含
有し、かつビフィズス菌数は１０１０／ｇであった。

このようにして得た本発明の組成物と市販されている２
種類のビフィズス菌製剤Ａ及びＢの菌生残性について拭
験した。

各サンプル３０ｇを密封して、２５℃で６ケ月間保存し
、経時的に生菌数を測定して試験開始ｎｒ７の生菌数に
対する割合から、生残率を求めた。その結果を第１表に
示す。

第１表から明らかなように本発明に係る組成物の生残性
は市販品のものに比べて極めて高いことがわかる。

（実施例２） 実施例１で製造した本発明組成物を川いて、老人による
｛パ食試験を行った。老人６人に苅して１人１日当り５
ｇの本組成物を摂取させて摂取前と机取中の糞便中ビフ
ィズス菌数を測定した桔果は第２表に示す通りである。

本発明組或物と比較するため、市販のビフィズス菌製剤
を摂取した場合について同様に試験した。なお、ビフィ
ズス菌数のハ１定は通常使用される選択培地（ＢＳ培地
）によって行った。

第２表 老人における摂取試験 第２表から明らかなように、市販品を打｛取してもビフ
ィズス菌数は６．１倍までしか堆加しないのに対して、
本発明組成物を摂取した場合は８日後で３２倍にまで増
加した。糞便中の総菌数は殆んど増えていないので、本
発明組戊物の供取により、ビフィズス菌が腸内で優勢に
なっていることが明確にわかる。

（実施例３） イヌリン含有植物であるチコリーの地下部を磨砕してス
ラリーとする。一方実施例１で製逍したｉｎ　Ｉ’ｌ？
素液を、このスラリ−３０ｋｇに対して３万ユニット添
加して５５℃で２４侍間酵素分角’４　Ｌた。

分解終了後のスラリーに、実施例１で得た本発明のビフ
ィズス菌粉末３　ｋｇ添加混合して、凍桔乾燥により本
発明に言うイヌロオリゴ拡含有ビフィズス菌組成物を約
８．５ｋｇ得た。この組成物の水分含量は２．０重量％
であり、イヌロオリゴ糖を固形分中の約３５重量％含有
しており、ビフィズス菌数は６．ＯｘｌＯ９／ｇであっ
た。この組成物と市販ビフィズス菌製剤を各３重量％添
加した家畜飼料を用いて、生後３週間目の仔豚に給餌し
て糞便中の分泌型免疫グロブリンＩｇＡを測定した。

分泌型免疫グロブリンＩｇＡはマイクロプレ−１・ＥＬ
　Ｉ　ＳＡ法（口本小児会誌、８８　　３０５．１９８
４）により測定した。各６頭ずつを２週間飼育した結果
を第３表に示す。

第３表 仔豚糞便中の分泌型ＩｇＡ値（試験開始前の値を１．０
とする） 第３表に示すように、本発明の組成物を添加することに
より、分泌型１ｇＡが市販品添加に比較して、極めて大
きくＪ曽加している。これによって、免疫増強活性が明
確に認められる。

〔発明の効果〕

以上、実施例より明らかなように、本発明の↑■成物は
一般市販品に比較して、生残性は極めて高く、かつ腸内
でのビフィズス菌の増植が促進されることにより、腸疾
患の改善効果、及び鬼疫Ｉ曽強活性が極めて高い。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. イヌロオリゴ糖を固形分を基準として２０〜６０重量％
   含有し、かつ全体組成物１ｇ当りビフィズス菌を生菌数
   として少なくとも１０°含んでなる生残性ビフィズス菌
   組成物。