JPH03501249A

JPH03501249A - 細胞生長抑制剤および癌その他の細胞増殖性疾病の治療法

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Publication number: JPH03501249A
Application number: JP63506993A
Authority: JP
Inventors: マーカヴエリッチ，バリー　エム．; クラーク，ジエイムス　エイチ．; グレゴリィ，レベッカ; アレジャンドロ、マリー; ミドルディッチ，ブリアン　エス．; ジョンソン，グレゴリー　エイ．; ヴァーマ，ラジエンダー　シン
Original assignee: Baylor College of Medicine
Current assignee: Baylor College of Medicine
Priority date: 1987-07-28
Filing date: 1988-07-20
Publication date: 1991-03-22
Also published as: DE3887151D1; EP0374184A1; AU2315288A; DE3887151T2; WO1989000849A1; CA1332742C; US5216024A; EP0374184B1; ATE99931T1; AU625313B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】細胞生長抑制剤および癌その他の細胞増殖性疾病の治療法［発明の分野］本発明は、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタート（ＭｅＨＰＬＡ）この同族体、化学誘導体、および化学的に関連する化合物を含めた、抗腫瘍剤や増殖性細胞生長抑制剤として有用である新規な化合物に関する。

［発明の背景］正常組織および悪性組織には、２型の核エストロゲン結合部位が存在する。型ｌの部位は、古典的エストロゲン・レセプタを、そして抜型■部位はエストロゲン系ホルモンに対する特殊の核反応（応答ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を媒介するように見える。エストロゲンの摂取後、型ルセプタ部位は、エストラディオールを結合し、このレセプターエストロゲン複合体は、組織生長のエストロゲン刺激に伴われる転移現象が開始する以前に、核アクセプタ部位と相互反応する。これと対照的に、型■部位は、古典的エストロゲン・レセプタと比較して、高容量の、かつ低親和力を有するエストロゲンを結合し、そして細胞質から核へ転座するようには見えない、かくして、抜型■部位のレベルはエストロゲンの摂取によって増大されるけれども、型■部位は、ホルモン摂取後も細胞質内に留まっている。抜型■ 部位はエストロゲン・ホルモンに対する特殊な核反応を媒介するように見えるが、また子宮の細胞肥大および過形成と高度の相関関係が認められる。さらに、抜型■部位は、悪性組織、例えば、マウスの乳腫瘍やヒトの乳癌において非常に刺激される。この観察は、非常に増殖性の組織が、増大した数の核１１部位を有すると云う所見と一致する。抜型■部位の刺激が子宮生長の刺激と密接に相関しているので、型■部位が子宮肥大に対する刺激を引き起こす機構の所在位置であることが仮定されている。なお、型■部位が核マトリクス上に存在することは、ＤＮＡ合成の調整に潜在的な役割を果たすことを示唆している。

抜型■部位は、多くの、全部がそうであるとは限らないが、非悪性細胞の成分である。正常な場合には、非悪性細胞における型■部位は、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタート（ＭｅＨＰＬＡまたはメチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート）によって占められている。

ＭｅＨＰＬＡが型■部位に結合する時、非悪性組織の細胞組織および増殖が遅速化され、かつ停止される。逆に、悪性細胞は、ＭｅＨＰＬＡを代謝し、かくして、抜型■部位に対する結合は不十分であり、そして細胞の生長および増殖の調整が失われる。結果として、検査された全ての腫瘍細胞母集団は結合しない非結合（ｕｎｂｏｕｎｄ）抜型■部位の非常に高いレベルを有している。これ等部位はＭｅＨＰＬＡの同族体に対する目標を意味すべきである。

本発明は、悪性細胞によって代謝されないが、抜型■部位と、高い親和力でもって結合する化合物を開示するものである。これ等化合物は、腫瘍細胞の増殖およびＤＮＡ合成に対する非常に有効な抑制剤である。抜型■部位は、種々の腫瘍細胞において認められているので、ＭｅＨＰＬＡの同族体および化学的に関係ある化合物が広範囲スペクトルの腫瘍に対する有効な抑制剤であるように見える。その結果、抜型■部位を含むいかなる腫瘍（膵臓、頚部、肝臓、脳、垂下体、前立腺、その他の器官または組織の部位を含む種々の癌のみならず、他の癌、なかんずく、例えば、白血病、リンパ腫、間質性筋腫、および平滑型を含む）も、ＭｅＨＰＬＡ、その同族体、および化学的に関係ある化合物による治療に反応する。

　ＭａＨＰＬＡはまた、正常な細胞生長、例えば、ラットの子宮におけるそれのエストロゲン刺激を阻止するので（第１表）、この化合物の同族体は、また、子宮肥大、頚部の過形成、子宮内膜症、および良性の前立腺肥大の治療にも有効である。非増殖性、非悪性の細胞は、正常な場合、ＭｅＨＰＬＡと結合したそれぞれの型■部位を有しているので、提案された化合物の、非悪性の細胞母集団に対する効果は、非存在ｔ（ｎｏｎ−ｅｘｉＮｅｎｔ）にとって最低となろう、この理由から、ＭｅＨＰＬＡは、その同族体、誘導体、および化学的に関係ある化合物はまた、癌および非悪性の細胞生長に対する抑制および防止における予防的薬剤としても有効である。

型■部位の詳細な生理学的役割は未知であるが、抜型■部位に対する抑制は、エストロゲンに対する子宮肥大反応の拮抗作用と関連がある。これは、ステロイド拮抗薬、例えば、デキサメサゾン、プロゲステロン、およびトリフェニレン誘導体、例えば、ナホキシジン、およびクロミツエンの場合もそうである。抜型■部位と結合するエストラジオールに対する少なくとも１個の内因性抑制剤があるけれども、抜型■部位に対する特殊な抑制剤は、この発明以前は、同定されていなかった。なお、本発明の抑制剤は抜型■部位に対して特殊であり、かつ細胞質または抜型１部位エストロゲン・レセプタと結合するエストラジオールを妨げない。

この抑制剤は、メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネートとして同定され、そして正常組織および悪性組織における細胞の生長および増殖に対する重要な調整剤である。この抑制剤は、また、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートまたはＭｅＨＰＬＡとしても既知である。この化合物による細胞生長に対する抑制は、正常組織および悪性組織における高親和性核結合部位と相互作用するその能力にあって、これは細胞増殖およびＤＮＡ合成の調整に関与しているかもしれないＭｅＨＰＬＡが抜型■部位と結合する時、細胞の生長および増殖が抑制される。内因性の３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオン酸の細胞生長に対する抑制効果は、きわめて小さい、この作用は、抜型■部位に対するその低い結合親和力と相関している。

本発明の他の目的は、癌を防止する手段である。　ＭｅＨＰＬＡは哺乳動物の細胞の正常成分であるが、悪性細胞によって代謝されるので、ここに挙げるようなＭｅＨＰＬＡ、構造的同族体および化学的に関係ある化合物（これ等は腫瘍によって代謝されない）は悪性疾患の防止に有効であるべきである。

これ等化合物は、たとえ副作用があるとしても、ごく僅かであるべきで、低レベルの摂取量でも、悪性細胞の増殖を抑制すべきである。

ＭｅＨＰＬＡは、このような細胞生長の潜在的な抑制剤であるので、この化合物は、その同族体および化学的に関係ある化合物とともに、潜在的抗腫瘍剤として用いられてきた。

本発明は、これ等化合物の潜在的抗腫瘍活性を開示するものである。

［発明の概要コ本発明の目的は、癌疾患の治療である。

本発明の他の目的は、型■核エストロゲン結合部位を含む増殖細胞の生長を抑制する方法を提供することである。

本発明のさらに他の目的は、エストロゲン反応性組織の生長を抑制する方法を提供することである。

本発明のさらに他の目的は、ヒトの乳癌や、非結合の抜型■部位を含む他の悪性疾患の治療法を提供することである。

本発明のさらに他の目的は、良性の前立腺肥大、頚部の過形成、子宮過形成、および子宮内膜症の治療法を提供することである。

かくして、以上の諸口的を達成するには、本発明の１視点に従って、ＭｅＨＰＬＡ、この同族体、化学的誘導体、または化学的に関係ある化合物を治療量にて投与する過程を含む癌を治療する方法が提供される。特に、これ等化合物は、下記の化学構造式を有する化合物群から選ばれる：該式において、Ｒ，はＨ原子、炭素原子を１−６個有するアルキル基およびアリル基とからなる群から選ばれ、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ原子、ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれ、そしてＲ４はＨ原子または炭素原子を１−６個有するアルキル基とからなる群から選ばれる。本発明の実施に際して用いられ得る好ましい化合物は、次の化合物群、すなわち、メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、Ｄ− プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ −ブチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ −プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、４−（４− ヒドロキシフェニル）−２−ブタノン、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３− ペンタノン、メチル（４−ヒドロキシフェノキシ）アセテート、およびメチル３ −（３，４−ジヒドロキシフェニル）プロペノエートからなる群から選ばれると良い。

本発明の他の観点によれば、ＭｅＨＰＬＡ、その同族体、化学的誘導体、または化学的に関係ある化合物の、増殖細胞に対する生物学的抑制量を投与する過程によって、型■核エストロゲン結合部位を含んだ増殖細胞の生長を抑制することに関する。

本発明の他の見地は、エストロゲン反応性組織、例えば、子宮、乳腺、子宮腫瘍、および乳房腫瘍の増殖生長に対する抑制である。特別な１見地によれば、上述の化合物は、ヒトの乳癌細胞の治療に用いられてきた。これ等化合物はヒトの乳癌細胞の生長を抑制する。

本発明の他の見地は、ＭｅＨＰＬＡ、その同族体、化学的誘導体、または化学的に関係ある化合物の、治療量を投与する過程を含む、良性前立腺肥大を治療する方法である。

本発明の他の見地は、ＭｅＨＰＬＡ、その同族体、化学的誘導体、または化学的に関係ある化合物を含有する抗腫瘍剤を提供することである。

本発明の他の見地は、癌疾患および非悪性の細胞生長を抑制防止するための予防薬剤である。これ等予防薬剤として、上述のＭｅＨＰＬＡ、その同族体、化学的誘導体、または化学的に関係ある化合物を含まれる。

本発明の他の見地は、特徴、および利点は、以下に詳述する、開示の目的のために与えられる本発明の好ましい現実施態様から明らかになるであろう。

［図面の簡単な説明コ第１図は、エストラジオール−１７β着床・卵巣摘出成ラットからの子宮核分画において結合するＣ３ＨＩエストラジオールに対する、希釈の効果を示す。

第２図は、腫瘍の細胞質ゾル調剤が抜型■部位に対し、子宮または乳腺からの細胞質ゾル調剤と比較して、低レベルの抑制剤活性を有することを示す。

第３図は、５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２５（パネルＡ、ＣおよびＤ）また）１ＬＨ −２０（パネルＢ）のカラムに、ラットの子宮細胞質ゾル抑制剤調剤を通して得られたクロマトグラムを示す。

第４図は、牛の血清抽出物をＬＨ−２０調剤カラム上でのクロマトグラムを示す。

第５図は、ＨＰＬＣによるαおよびβ型■リガンドのクロマトグラムを示す。

第６図は、胎児牛血清および標準のｐ−＜ヒドロキシフェニル）酢酸（Ｂ　：ＨＰＬＡ）から精製されたαビーク（Ａ）のトリメチルシリル誘導体の質量スペクトルを示す。

第７図は、胎児牛血清および標準のメチルｐ−（ヒドロキシフェニル）ラフタート（Ｂ　：　ＭｅＨＰＬＡ）から精製されたβビ−ク（Ａ）のトリメチルシリル誘導体の質量スペクトルを示す。

第８図は、型■リガンドαおよび３両ピーク、並びに型■部位に対する標準ＨＰＬＡおよびＭｅＨＰＬＡの競争を示す。

第９図は、抜型■部位に結合する［３Ｈ］エストラジオールに対する標準のＨＰＬＡおよびＭｅＨＰＬＡの競争を示す。

第１０図は、マウス乳腺（Ａ）およびマウス乳腺腫瘍（Ｂ）の細胞質ゾルのＬＨ −２０カラムを用いた場合のクロマトグラムを示す。

第１１図は、ヒト乳癌細胞質ゾルのＬＨ−２０カラムを用いた場合のクロマトグラムを示す。

第１２図は、ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞の生長に及ぼすＨＰＬＡおよびＭｅＨＰＬＡの効果を示す。

第１３図は、ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞の培地における生長に及ぼすＬＨ−２０β ビーク・分画の効果を示す、パネルＡは、ラット肝臓からのβビークに対する投与量反応カーブを示す。

パネルＢは、βビーク・分画を３３μｍ／ｍＱを添加した後の、抑制の時間経過を示す。

第１４図は、ＭｅＨＰＬＡ（Ａ）およびＨＰＬＡ（Ｂ　）の、子宮の生長に及ぼす効果を示す。

第１５図は、ｐ−＜ヒドロキシフェニル）ブタノン（１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ペンタノン）の、子宮の生長に対する効果を示す。

［好ましい実施態様の詳細な説明］ “メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート”は、メチルｐ−ヒドロキシフェニルアセテート、すなわち、ＭｅＨＰＬＡとしても公知である。用語“ＭｅＨＰＬＡ”は、抜型■部位レセプタと結合し、そうすることによって細胞増殖を抑制するＭｅＨＰＬＡの同族体、化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物をも含むことを意味する。

また、用語“化学的に関係ある化合物”は、Ｐ−クマリン酸の誘導体および同族体、Ｐ−ヒドロキシフェニルブタノン、（４−ヒドロキシフェノキシ）アセテート、およびアリルプロペンアルデヒド類、アルキルアリルエチニルケトン類、アリルアリルエチニルケトン類、アリルブテンアルデヒド類、アルキルアリルプロペニルケトン類（これ等化合物は、構造的にＭｅＨＰＬＡと関連しており、ここに開示される）を指すものとする。これ等化学的に関係ある化合物には、上記化合物のシス型およびトランス型の異性体、それ等のエステル類、エーテル類、ケトン類、並びにＯ原子の代わりにＳまたはＮ原子を含む誘導体が含まれる。特に、これ等構造的に関係ある同族体および誘導体としては、Ｒ，がメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、イソプロピル、タート−ブチルまたはアリルの各基を表わし、Ｒ２およびＲ３は、Ｎ原子、ＯＨまたはＯＣＨ３基を、モしてＲ４はＮ原子または炭素原子を１−６個有するアルキル基である化合物群が含まれる。ＨｅＨＰＬＡと構造的に関連を有するこれ等化合物の各クラスの特殊な同族体は、ここに定義されるような生物活性を有しく第１表）、それ故、酷似するＭｅＨＰＬＡが細胞増殖および腫瘍細胞の生長に対する有効抑制剤としてことが実証されている。

“個体”なる用語は、動物およびヒトを含めてを意味する。

増殖する細胞の生長に対し“生物的に抑制する”または“抑制”の用語は、生長を部分的に、或は完全に抑制することを意味し、さらにまた、細胞の増殖または生長の速度を低下させることを意味する０本発明の上記化合物を生物的抑制投与量は、組織培養（第１２図参照）、動物子宮の生長（第１４および１５図参照）、或は動物腫瘍の生長（Ｍａｒｋａｖｅｒｉｃｂ等：　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅ＠ｒｃｈ　４３：３２０８−３２１１（１９８３）に掲載）、或は当業者に知られたいかなる他の方法における、悪性細胞の生長に対する試験化合物の効果を評価することによって決定される。

“予防薬剤”の用語の意味には、疾病の部分的または完全な抑制或は疾病そのものの予防またはその蔓延の防止のために用いられ得る薬剤を含み、かつまた疾病に対する予防策や疾病の予防的治療のために用いられ得る薬剤が含まれる。

本発明の方法において有用な化合物は、局部、非経口、経口、鼻内、静脈内、筋内、皮下、その他のいかなる適当な手段で投与されて良い、投与される量は、年齢；体重；他の治療が行なわれていれば、その種類；悪性度の性質によって変えられる０本発明の方法において有用な効果的化合物は、経口投与の場合、カプセル、錠剤、溶液、懸濁液またはエリキシルといった形で、或は無菌液体の形、例えば、溶液、懸濁液、または乳懸液としても投与される。不活性キャリア、例えば、生理的食塩水、燐酸塩緩衝溶液が好ましいが、本発明の方法において用いられる化合物が適当な溶解度特性有するような他のいかなるキャリアも用い得る。

本発明の上記化合物は、生物的に効果的なキャリアにおいて投与される。生物的に有効なキャリアとしては、本発明の化合物と相溶であり、かつ投与された量にて治療される個体に対して非毒性であるいかなる溶媒をも含まれる。

“抗腫瘍剤”なる用語の意味には、上記腫瘍細胞が有効量にて投与される時、細胞の生長を低下させるか、或は腫瘍細胞の増殖を抑制する薬剤が含まれる。

本発明の特異的な実施態様においては、ＭｅＨＰＬＡ、その同族体、化学的誘導体、または化学的に関係ある化合物を含有する抗腫瘍剤である。　ＭｅＨＰＬＡの特殊な例は、下記の一般式で表わされる誘導体である：この種化合物の特殊な例は、メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネートで、Ｒ１はＣＨ３，Ｒ２はＯＨおよびＲ４はＨである。これは自然に発生する内因的化合物であるが、単離され、その特徴も明らかにされ、本発明のものとして同定されている。同族体の他の例として、Ｒ１基がエチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、イソプロピル、タート−ブチルまたはアリルの基によって置換えされた、Ｒ２および／またはＲ３が、Ｈ原子、ＯＨまたはＯＣＨ３の基によって置換された、モしてＲ４がＨ原子または炭素原子を１−６個有するアルキル基である化合物群が含まれる。これ等エステル群がＤおよびＬ形であり得る。

他の誘導体群として、次の一般式を有する化合物がある：これ等化合物の例は、ｐ−クマリン酸、３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−２−プロペン酸、およびそのエステル類である。

これ等物質はシス型およびトランス型異性体として存在する。クマリン酸においては、Ｒ１およびＲ２が水素であり、Ｒ３がＯＨである。他のエステル類として、Ｒ１がメチル、エチル、ｎ−プロピル、Ｄ−ブチル、イソプロピル、タート− ブチルまたはアリルであり、Ｒ２および／またはＲ３が、Ｈ原子、ＯＨまたはＯＣＨ３基である化合物が含まれる。他の同族体として、カフェー酸、３−（３，４−ヒドロキシフェニル）−２−プロペン酸（Ｒ＋はＨで、Ｒ２およびＲ３がいずれもＯＨである。さらに、メトキシ化合物が抗腫瘍剤として非常に有効である。

抗腫瘍活性を有する他の化合物類は、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブタノンの誘導体、例えば、次の一般式二ケトン誘導体類の例として、Ｒ１位置にメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、イソプロピル、タート−ブチルまたはアリルの基を有し、Ｒ２およびＲ３の位置に、Ｈ原子、ＯＨまたはＯＣＨ３基を、そして非常に好ましくはＲ２位置に水素を、Ｒ３位置にＯＨ基を有する化合物群が含まれる。なお、上式によって認められ得るように、芳香族エンチテイ（ａｒｏ−ｍａｔｉｃｅｎｔｉｔｙ）と、ケト基との間におけるＣＨ２基の数が変動され得る。この種の化合物の例は、　１−（４−ヒドロキシフェニル）−３ −ペンタノンおよび１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブタノンである。これ等化合物は、型■部位に結合し、そして子宮向性の評価において抗腫瘍増殖活性を有することが認められている。

ラット子宮における抗腫瘍増殖活性を示す他の化合物群は、次の一般式によって表わされる：これ等化合物は、（４−ヒドロキシフェノキシ）酢酸のエーテル結合同族体、例えば、メチル（４−ヒドロキシフェノキシ）アセテート、である、これ等化合物の全ては、型■結合部位と結合している。これ等エーテル化合物として、Ｒ１がＨ，Ｃ，−Ｃ６のアルキル炭素鎖またはアリル基であり、Ｒ２およびＲ３がＨｌＯＨまたはＯＣＨ３である同族体が挙げられる。これ等フェノキシ化合物の変化したものとして、さらにエーテル化合物、例えば、２−（４−ヒドロキシフェノキシ）エチルメチルエーテル（次式：においてＲ１がＨまたはＣ，−Ｃ６のアルキル炭素鎖またはアリル基であり、Ｒ２およびＲ３がＨｌＯＨまたはＯＣＨ３である同族体が挙げられる）。

さらに、有用な化合物として、次式のものが挙げられる二式中、Ｒ１はＣ，−Ｃ６のアルキル炭素鎖またはアリル基であり、Ｒ２およびＲ３はＨｌＯＨまたはＯＣＨ３である。

腫瘍抗増殖作用を示す他の化合物群は、次式によって表わされる：式中、Ｒ１はＨ，１−６個の炭素原子を有するアルキル基、および置換または非置換アリル基からなる群から、そしてＲ２およびＲ３はＨｌＯＨまたはＯＣＨ３からなる群から選ばれる。

本発明の実施に当たって用いられ得るこの群の好ましい化合物は、次式で表わされる：式中、本発明を実施するためのこの群に属するほとんどの好ましい化合物には、３−（４−ヒドロキシフェニル）−１−フェニル−２−プロペン−１−オンおよび４−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブテン−２−オン、同族体、化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物、さらに、製薬上受入れ可能なそれ等の塩が含まれる。

本発明の他の実施態様では、ＭｅＨＰＬＡ、その同族体、化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物を治療量にて投与する過程からなる癌治療法が挙げられる。この化合物は、上述の抗腫瘍化合物のいかなるものであっても良い。

癌の治療に用いられるのに加えて、これ等抗腫瘍剤は、型■核エストロゲン結合部位を含む上記細胞中における細胞の生長や増殖の抑制剤としてもまた青用である。これ等化合物は、型■核エストロゲン結合部位と結合し、そして細胞生長を調整する。これ等化合物の結合に鋭敏である特殊な増殖細胞には、エストロゲン反応性組織、例えば、子宮、乳腺、子宮の腫瘍、および乳腺腫瘍が挙げられる。

上述の化合物は、ヒトの乳癌細胞の増殖能を抑制し、かくして、これ等疾患に対する効果的な治療に役立つ。

良性の前立腺過形成は、上述の化合物が治療に成功的に用いられ得る増殖性組織疾患の他の例である。

ム　の　Ａｓ５ａホスト動物から組織を切開し、秤量し、生理食塩水ですすいで、トリス−１，５ｍＭ　ＥＤＴＡ液中にて、３０秒バーストを５ｏｒｖａｌ　Ｏｍｎｉｍｉｚｅｒ中で約５分間の間断冷却を挟んで、約４回均質化を行った。この粗ホモジネートは、Ｋｏｎｔｅの密栓ホモゲナイザに移して、さらに、間断冷却で、組織の塊状物が全く見えなくなるまで、均質化した。この場合、ホモジネートを、すべての均質化処理の間、ずっと約４℃の冷却状態に保持することが肝要である。得られたホモジネートを８００ｘｇにて約２０分間遠心分離し、粒核ペレットを得た。

これは、次いで、Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザ中に静かに再懸濁して洗浄し、さらに、ｌｌｏｏｘｇにて約７分間遠心分離した。得られた洗浄核ペレットをトリス −１，５＋ｎＭ　ＥＤＴＡ液中にて、５−５０ｍｇの新鮮組織等量／−範囲の濃度にて再懸濁した。

ここに、“新鮮組織等ｔ″なる用語は、新鮮な子宮組織における初期濃度を表わす材料の量を意味する。

完全なかつ非特異的な結合を評価するには、得られた核熱濁液のアリクウオットを３７℃にて３０分間、種々の濃度（２−４０ｎＭ）の［３Ｈ］エストラジオール（大モル過剰のジエチルスチルベストロールを伴う場合、伴わない場合がある）を用いて、保温した。濃度の範囲は、０．６−１２．０重Ｍであった。

保温後、核ペレットを洗浄核ペレットをトリス−１，５ｍＭ　ＥＤＴＡ緩衝液約１ｄ中に再懸濁し、そして８００Ｂにて約７分間遠心分離した。このベレットをエタノール１−を用い、３０℃にて約３０分間抽出し、４ｍｆｉのＬｉｑｕｉｆｌｏｕｒ中にて計数を行った。特異結合値（Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｂｉｎｄｉｎｇ）非特異結合の引算、（すなわち、［３Ｈ］エストラジオールの全量からジエチルスチルベストロールによって競合可能でない）によってめられた。結果は、ｓｐｇのＤＮＡ／ｃｅｌｌ核であり、そして核結合部位が１分子の［３Ｈコエストラジオールに結合すると仮定して、部位（数）／細胞として表わした。

「」印」艷［！≧」乎二化ｉコ種々のラット組織が、［３Ｈ］エストラジオールの抜型■エストロゲン結合部位への結合を阻止する内因的リガンドを有している。しかしながら、この化合物は、エストロゲン・レセプタに結合する［３Ｈ］エストラジオールを妨げることはない０種々の組繊細胞質ゾルおよびこれ等細胞質ゾルからのＬＨ−２０カラム・クロマトグラム・分画におけるこの抑制剤活性のレベルを評価するために、次の抑制評価法が用いられた。エストロゲンを移植され、卵巣を摘出した成ラットから子宮の核を調製した。上記の核ベレットを新鮮な子宮等ｔ／ｍＱの１０ｍｎに希釈した。この濃度にて、内因的抑制の効果は最低であり、そして抜型■部位は、［３Ｈコエストラジオールの最大量に結合した。これ等のアリクウォシトと抑制剤サンプルとを約４℃にて約６０分間、４０ｎＭ［３Ｈ］エストラジオールの存在下に１２μＭのジエチルスチルベストロールの有無において保温した。これ等の条件下に、抜型■部位は、型１部位の妨害無しに定量的に測定した。核ペレットをトリス−１，５ｍＭ　ＥＤＴＡ緩衝液約１ｄ中に再懸濁し、エタノール抽出し、そして計数を行った。結果は、緩衝液コントロールと比較して結合された［３Ｈコエストラジオールの百分率にて、或は１００％結合が０％であって、約４５０００ｃｐｍに等価である場合の抑制御００分率として表現された。結合評価における測定された抜型■部位の数は、核の希釈とともに、有意に（４−８倍）増大した。かくして、希釈された場合には、濃縮された核においてよりも、核 ■部位がより多く測定された。第１図は、エストラジオール＝１７βを移植され、卵巣を摘出した成ラットから子宮核分画における［３Ｈコ工ストラジオール結合に対する希釈の効果を示している。

子宮の核は、公知の文献（Ｍａｒｋａｖｅｒｉｃｈ、Ｂ、Ｍ、等：　Ｊ、Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、２５８：１１６６３−１１６７１（１９８３）、この開示は、ここでは参考として記述した）に準じて調製した。要約すると、調製後の子宮核は、１０ｍＭ）リス−１，５ｍＭ　ＥＤＴＡ緩衝液中に、最終容量が１０．２０または４０ｍｇの新鮮な子宮等量／−に等価になるように希釈し、かくして、エストロゲン結合部位を３７℃にて３０分間にわたる［３Ｈ］エストラジオール交換によって評価した。特異結合を非特異結合（すなわち、結合された［３Ｈコエストラジオールの全量から３００倍過剰のジエチルスチルベストロールと競争可能でない）の引算によってめられた。第１図に示す結果において、パネルＤでは、　１０．２０または４０ｍｇの核等量／ｍＱにて測定された特異結合が希釈効果（ｐモル／子宮）に対して補正したことを実証している。これ等結果は、ラットからの子宮核調製物に、［３Ｈコエストラジオールの抜型■部位への結合を阻止する因子が含有され、そしてこの因子と型■部位との相互作用が希釈によって低下することが示唆される。抑制評価法を用いて、ラット子宮細胞ゾルに、［３Ｈ］エストラジオールの抜型■部位への結合を阻止する因子の含まれることが認められた。要するに、ラット子宮から酸によって沈澱された、煮沸された細胞質ゾル、マウスの乳腺腫瘍および正常な乳腺が第２図に図示されるように希釈され、次いで、抑制活性に関して評価された。第２図は、この因子が、非常に効果的で、かつ完全に型■部位を非常に薄い細胞質濃度で完全に阻止されることを示している。第２図に示す結果は、核調製物ごとに４つの繰り返し実験において３重の定量を行い、それ等の平均値士標準誤差を表わしている。この抑制剤効果は、酸に対し安定であり、かつトリプシン、プロテナーゼに、　ＲＮＡ５ｅ。

またはＤＮＡ５ｅによっては破壊されなかった。

この活性に関与する抑制剤は、その特徴からメチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネートとされた。この同定および特性の調査は、細胞質ゾル調製物を５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２５および５ｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ −２０カラムを用いてクロマトグラフィ処理することによって行なわれた（第３図）０個々のカラム分画につき、抑制活性が、エストラジオール移植ラットからの希薄な核分画とともに保温することによって定量された。これ等条件下では、抜型■部位への最大［３Ｈコ工ストラジオール結合が、抑制剤活性の無い場合に認められた。　５ｅｐｈａｄｅｚ　Ｇ−２５を用いた場合、カラムの包含容量において溶出する抑制剤活性についての２個の主ピーク（αおよびβ）が得られる。他方、５ｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ−２０を用いた場合のクロマトグラフィで、同一の細胞質ゾル調製物も、また抑制活性について２個のピークを示した。　ＬＨ −２０で得られたピークを個々に再び５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２５上にてクロマトグラフィ処理すると、上記の５ｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ−２０のαおよび８両ピークは、先に、　５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２５を用いて認められた成分と同一の位置に溶出された。この抑制評価を有する化合物の特性を追求して、β化合物が α成分と比較して抑制効果が非常に大きく、かくして、細胞生長の調製に用いるのに好ましい化合物であることが認められた。

抜型■部位についての抑制剤分子は、牛血清から単離された。約５００ｍ１２の牛血清が等容量のＨＰＬＣ級の水で希釈され、そして田を高純度ＨＣＩで調節した。酸性化した血清を等容量ノ酢酸エチルで３回抽出し、プールされた酢酸エチル抽出液を６０℃にて真空乾燥した。蒸発に続いて、抽出物を１０Ｏｎ＋１の酢酸エチルに再溶解し、次いで、等容量の酸性化ＨＰＬＣ級水（ｐＨ１，０）で洗浄した。続いて、この酢酸エチル分画を真空乾燥し、緩衝液に再び溶解し、調製されたＬ）Ｔ−２０カラムを用い、αおよびβ両成分を分離した（第４図）。

個々のカラム分画を集め、そしてαおよび８両ピークをそれぞれプールした０次いで、■を１．０に調節し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、さらに、　ＨＰＬＣによりＵｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ−ｏｃｔｙｌ（Ｃ８）逆転相カラムで精製した（第５図）、αおよびβビーク両成分のトリメチルシリル誘導体についての構造的同定が、ガスクロマトグラフィー質量分光法によって行なわれた。αピーク成分の質量スペクトルは、ＨＰＬＡのそれと同一であった（第６図）、同定は、既知のｐ−ヒドロキシフェニル乳酸の標準試料を用いて確認された。βピーク成分の質量スペクトルは、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートであると同定された（第７図）。

一旦、ピークが同定されるや、抜型■部位との相対結合が、２個の標準化合物の既知量によって一層詳細に定量を用いた競争分析によって定量される。第８図および第９図から、ＭｅＨＰＬＡが、遊離酸（ＨＰＬＡ）と比較して、［３Ｈコエストラジオールの抜型■部位への結合抑制が、約２０倍有効であることが認められ得る。

結合値の定量によって、マウスの乳腺腫瘍およびヒトの乳ガンそれぞれの調製物が非悪性組織に比して、高レベルの遊離抜型■部位を有することが示された。第２図および第１０図は、正常ラットの乳腺が、マウス乳腺腫瘍に比して、非常に高レベルの総抑制剤活性を有することを示している。

第１１図は、ヒトの乳癌が抑制剤を低レベルにしか含まないことを示している。

かくして、悪性組織が高レベルの遊離抜型■部位を有し、かつ抑制活性に欠けていることが実証されている。抑制剤活性のこの不足は、これ等腫瘍組織母集団にて観察される高レベルの遊離抜型■部位のみならず、それ等の増殖、生長およびＤＮＡ合成に関する迅速な速度をも説明する。正常組織に認められる高い抑制剤活性の特性を、先に述べたように、ＬＨ−２０カラムを用いて調べたところ、ラットの子宮および正常マウスの乳腺がαおよびβの同成分を含むことが明らかにされた。マウスの乳腺腫瘍にて認められるαおよびβの両ピークを比較し、正常組織にて認められるものは、マウスの乳腺腫瘍組織におけるβビーク成分と、増大した非結合の抜型■部位との間で高い相関のあることが分かった０分析されたラットおよびマウスそれぞれの乳腺腫瘍組織においては、β抑制剤成分が一貫して非常に低く、検出不可能な場合がある。β抑制剤の検出不可能な低レベルが、またヒトの乳癌組織にも観察される。しかしながら、種々の正常組織、例えば、ラットの血清、膵臓、横隔膜、肝臓および子宮についての検斎で、αおよびβ両押制剤ピーク成分の存在が認められる。これ等の結果は、活性抑制剤成分が、細胞増殖の調製に関してβ抑制剤ビーク成分である。

［：ＭＣＦ−７の　コ腫瘍生長感度について定量するには、組織培養におけるＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞ラインが用いられた。当業者には、これがホルモンおよび薬剤のヒト乳癌の生長および増殖に対する効果を解析するのに優れたモデル・システムであることが認識されよう、　ＭＣＦ−７細胞が型工および抜型■の阿エストロゲン・レセプタ部位を有し、そして増殖様にエストロゲン系ホルモンに反応する。なお５周知の抗エストロゲン、例えば、Ｔａｍｏｘｉｆｓｎによって抑制される。　ＭＣＦ− ７細胞を３０ｍ１２ペトリ一皿に５ｘ１０５細胞／皿細胞種え付け、チャーコールの縞入り胎児牛血清を約１０％含有するＤｕｌｂｅｃｃｏの改良Ｅａｇｌｅｓ培地で約４８時間生長させた。この間隔中、細胞がプラスチック皿に付着し、次いで、細胞倍加時間が２４時間の指数生長を遂行した。植え付けられた細胞は、約４８時間放置された後、培地が取り替えられた（“ゼロ日”とする）、細胞を、約６日間、指数生長するに放置した。ゼロ日に、細胞を当該の化合物、例えば、ｌＯμＱエタノール中のメチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートの１−１Ｏ μｇ／ｄ範囲の投与量で処理した。培地は約２日と、４日で取り替えた。また対照および試料溶液を、培地を取り替えた時に、再添加した。６日に、細胞を収穫し、血球計数器を用いて計数し、皿当りのＤＮＡ含量をＢｕｒｔｏｎ法（Ｂｕｒｔｏｎ　ａｓｓａｙ：Ｂｕｒｔｏｎ、　Ｋ、、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、６２二３１５−３２３．１９５６）によってめた。

処理後、６日目の結果を細胞７皿またはＤＮＡ含量（μｇ／皿）として表示した。結果は第１２図に示す。

ラットの子宮または乳腺の腫瘍細胞を、αおよびβ成分を含むラットの子宮または肝臓からの細胞質ゾルとともに培養すると、約２４時間以内に細胞の生長抑制を示した。これに対して、上記細胞をα成分を含むが、β成分を含まないマウスの乳腺腫瘍からの細胞質ゾル調製物と一緒に培養すると、細胞生長に対する抑制は、試験された広範囲の濃度にわたって、実質的に認められなかった。このデータは、第８図および第９図に示される競合実験の結果と一致し、正常乳腺からの細胞質ゾル調製物が腫瘍からのそれ等と比較して、１５−２０倍多い総抑制剤活性を含有することが認められた（第２図）。正常および悪性のそれぞれの組織からの細胞質ゾル調製物間の大きな相違の１つは、悪性組織がβビーク抑制剤成分が欠如していることであった（第１０図）。

それ故、βビーク成分は、細胞増殖の潜在的調整に関して最も重要な化合物であった０本発明に記述したように、βビーク成分は、メチルドヒドロキシフェニルラクタートであると同定された。

さらに、β抑制剤成分の抗腫瘍活性の特性調査および実証は、ラット肝臓単離物を用いての実施例において認められた。単離後、β抑制剤物質が２−の組織培養基中に懸濁され、次いで、ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞ラインの培養物に添加された。　ＭＣＦ−７Ｘ細胞は、１０％のチャーコール編入り胎児牛血清を含有するＤＭＥＭの３−に植え付け、ベトリ皿の表面に付着させた。単層培養基の確立後、約２４−３６時間目に、浮遊細胞がアスビレーションによって除去され、次いで、３ｍＱの新鮮なりＭＥＡが各培養基に添加された。この時期に、プールされた βビーク分画または対照培地の７−３２μＱ／ｍＱ範囲における各量が、個々の培養基に添加された。細胞の培養を、さらに、２４時間続けた。培養期間の終了時に、浮遊細胞をアスビレーションによって除去し、次いで、付着細胞をトリプシン化に続いて、Ｄ！ＥＭに再懸濁した６次いで、細胞を血球計数器にて計数した。βビーク抑制剤物質の濃度が増大するとともに、細胞数は、約２４時間以内では、投与量に依存して、減少した（第１３Ａ図）、対照試料は、同様な減少は認められなかった。抑制活性の時間経過も検討された。対照培地またはβビーク抑制剤物質の約３２μＱを細胞に添加し、浮遊細胞を除去した。抑制剤添加の約４時間以内に、細胞生長の抑制が開始された。約１２時間口に最大抑制が認められた（第１３Ｂ図）。

抑制の効果は可逆性であった。細胞が回復するのに約２４時間かかり、またβビーク抑制剤の除去後、約７−２４日後に、十分な単層に生長し始めた。

腫瘍細胞の増殖が非常に急速であることが仮定されるが、その理由は、腫瘍細胞がβビーク抑制剤を代謝または不活性化することが仮定される。これは、ｐ−ヒドロキシフェニルラフタートが、正常細胞において型■部位に結合するのが認められるが、悪性組織においては、見いだされないと云う観察によって支持される。細胞増殖は、抜型■部位に結合するリガンドによって調整される。非結合部位の数によって、増殖の速度が決定されるが、それは腫瘍細胞が非結合抜型■部位の増大を示し、かくして、抑制されずに、従って、腫瘍細胞の増殖が劇的に加速されるからである。

これ等細胞は調整下に戻され、そして細胞増殖が、本発明に記述された抑制剤の治療量を投与することによって減少される。

精製された生物調整物の検討に加えて、標準化合物であるメチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートおよびヒドロキシフェニルラフタートが細胞培養物に添加された。第１２図に認められ得るように、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートは、ＭＣＦ−７のヒト乳癌細胞を抑制したが、しかしヒドロキシフェニル乳酸は抑制しなかった。なお、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートは、ＭＣＦ −７ヒト乳癌細胞を同様に投与量に依存して抑制することが、認められ得る。標準化合物を用いることによって得られた結果は、生物調製物を用いた場合のデータ特に、一致していた。

［子宮向性の評価］ラットの子宮は、エストロゲンに対して微妙に鋭敏であって、このホルモン類は、子宮細胞の肥大、過形成、ＤＮＡ合成に単回注射後の２４時間以内に刺激を与える。抜型■部位に対するエストラジオールの刺激は、これ等反応に対する必須要件である。この分析には、未熟の雌ラットに生理食塩水−エタノール賦形剤、エストラジオール−１７βおよび当該テスト化合物を注射することが含まれる。

対照ラットに生理食塩水−エタノール賦形剤およびエストラジオール−１７βを注射し、２４時間後に犠牲にし、子宮の湿乾両重量を測定した。湿乾面重量を測定は、エストロゲン作用の生物的目的点を良く定義するもので、細胞増殖およびＤＮＡ合成の変化についての直接指標である。

種々の化合物を用いたこれ等実験の結果は、第１表に示した。

子宮向性分析を用いた追加のインビボ測定実験では、これ等化合物の、細胞増殖の抑制に対する利用を示している。

メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートは、低投与量で、成熟ラットの子宮生長に対するエストラジオールの刺激を阻止するが、ヒドロキシフェニル乳酸は阻止しない（第１４図および第１表）、シかしながら、ヒドロキシフェニル乳酸の高投与量は、若干の部分拮抗作用を示した。この事実は、ヒドロキシフェニル乳酸が、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートと比較して、２０分の１の低い親和力でもって抜型■部位に結合することが知られるからである。

これ等結果は、抜型■部位の結合／非結合の比が、細胞生長の調整に重要であること、並びに正常細胞における−次結合抑制剤がメチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートであることを示している。データにより、腫瘍細胞は、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートを不活性化する能力を有することを実証されていることから、本発明において記述した同族体が、この発明を避けるために合成された。

かくして、第１表で認められ得るように、芳香族環に種々の置換基を有する化合物を投与した場合に、子宮の生長抑制が結果として得られる。メチル基をＣ端に有する１−（４−ビトロキシフェニル）−３−ブタノン（ｐ−ヒドロキシフェニルブタノン）の１化合物は、エステラーゼ解裂を受けないが、その理由は、メチル基がＣ−Ｃ結合によって付着されるからである。この化合物は、一層安定しており、かくして、培養の場合でも、インビボの場合でも、一層良い抑制剤である。なお、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブタノンを用いた実験では、この化合物が、成熟ラットに注射した場合、高い親和力をもって、抜型■部位と結合し、そしてエストラジオールの子宮の生長に対する刺激を阻止することが実証された。それ故、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブタノンは、腫瘍の生長に対する有効抑制剤であるとともに、細胞増殖の調整剤でもある。

（以下余白）本発明が、本来それに含まれるものは勿論のこと、上述した方法を実行し、上述した目的および利点を得るのに十分に適応している当業者には容易に理解されるであろう。

ここに説明した化合物、方法、手順および技法が、好ましい実施態様の現に代表的なもので、例示であることを意図するものである。そこにおける変化、および他の用途は、本発明の精神内に含まれるもので、添付請求の範囲によって定義されることは、当業者には予期されるであろう。

（以下余白）ＦＩＧ、／１升台質の濃度（岡／ＩＴＩ＋）＊　、！！＋　８−号ｎｃ；、　４ＶＴＬ’）Ｉ３°゛〉Ｉ′ベニｈ′↓ソ゛メ内ヒ−２亦ム木号ＦＩＧ、Ｊトゲ／チルシリル花え−と９−７のマス・又ヘリトルＦ１０．５畷光度ジーＬイｆＬ／多シ（イ１ｒＦ／Ｃｙ、８トリノナｌレジ１１ルイヒｄ−ヒ−２のマ入ヌ−Ｘ７Ｆ）しｍ／ｃｍ／ｅ＄９１１却／Ｉ：りすずろＨＰＬＡ　ｕＬ１１’Ｈｅ−Ｈｆ）ＬＡ＝）ｉ免へＦＩＧ、　９ＯんＩＮ）（ＩＢＩＴＩＯＮ両路２＾　ＭｅＨＰＬＡ　ＨＰＬＡ　＠ｐＬ＾子寓）生、＆ベク寸するＰ−ヒドロキ＞７−；−ルフ゛タノト（ＰＨＰＢンのン力果Ｃ０ＮＴＲ０Ｌ　Ｒ２Ｅ２＋Ｓｐ９　Ｅ２＋ｌ０ｐ９　Ｅ２＋；ＯｐｇＰＨＰＢ’　ＰＨＰＢ　ＰＨＰＢｆコ’１０３．　１５補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成２年１月２９１国特許庁長官　吉　１）文　毅　殿１、　国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ　８８１０２４７６２、　発明の名称３、　特許出願人住　所　アメリカ合衆国、　７７０３０　テキサス。

ヒユーストン、ベイラー　プラ゛ザ　１番地国　籍　アメリカ合衆国４、代理人東京都千代田区麹町４丁目５番地（〒１０２）５、　補正書の提出年月日請求の範囲１、　メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートおよび該化合物の薬学的に受け容れられる塩の癌治療用薬剤を調整するのに使用。

２、次　式式中、Ｒ，はＨ原子、炭素原子を１〜６個有するアルキル基およびアリル基とからなる群から選ばれ、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれ、およびＲ４はＨ原子および炭素原子を１〜６個有するアルキル基とからなる群から選ばれる化合物の癌治療用薬剤を調整するのに使用。

３、　メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−ブチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−プロペン酸、　１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−フタノン、　１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ペンタノン、メチル−（４−ヒドロキシフェノキシ）アセテート、およびメチル３−（３゜４−ヒドロキシフェニル）−２−プロペノエートからなる群から選ばれる化合物の癌治療用薬剤を調整するのに使用。

４、　メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタート、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートの同族体、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートの化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物とからなる群から選ばれる化合物の、生物的抑制投与量である、型■核エストロゲン結合部位を含んだ増殖性細胞の生長を抑制する薬剤を調整するのに使用。

５、　上記化合物が次式式中、Ｒ】はＨ原子、炭素原子を１〜６個有するアルキル基およびアリル基とからなる群から選ばれ、Ｒ２およびＲ３はＨ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれ、およびＲ４はＨＪＪＸ子および炭素原子を１〜６個有するアルキル基とからなる群から選ばれる化合物の、型■核エストロゲン結合部位を含んだ増殖性細胞の生長を抑制する薬剤を調整するのに使用。

６、　メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−ブチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−プロペン酸、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブタノン、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ペンタノン、メチル−（４−ヒドロキシフェノキシ）アセテート、およびメチル３−（３゜４−ジヒドロキシフェニール）−２−プロペノエートからなる群から選ばれる化合物の、型■核エストロゲン結合部位を含んだ増殖性細胞の生長を抑制する薬剤を調整するのに使用。

７、　上記増殖細胞が、子宮、乳腺、子宮腫瘍、および乳腺腫瘍からなる群から選ばれるエストロゲン反応性組織であることを特徴とする請求の範囲第５項に記載の使用。

８、　エストロゲン反応性組織がヒトの乳癌細胞であることを特徴とする請求の範囲第７項に記載の使用。

９、　メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタート、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートの同族体、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートの化学的誘導体、およびメチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートの化学的に関係ある化合物とからなる群から選ばれた化合物の、良性の前立腺過形成の治療薬剤の調整するのに使用。

１０、上記化合物が、次式式中、Ｒ１はＨ原子、炭素原子を１〜６個有するアルキル基、およびアリル基とからなる群から選ばれ、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれ、およびＲ４はＨｊＫ子および炭素原子を１〜６個有するアルキル基とからなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第９項に記載の使用。

１１、メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−ブチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−プロペン酸、　１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブタノン、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ペンタノン、メチル−（４−ヒドロキシフェノキシ）アセテート、およびメチル３−（３゜４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノエートとからなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１０項に記載の使用。

１２、上記化合物がメチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタート、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートの同族体、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラフタートの化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物からなる群から選ばれる化合物の抗腫瘍剤用の薬剤を調整するのに使用。

１３、上記化合物が次式式中、Ｒ１がＨ原子、炭素原子を１〜６個有するアルキル基、およびアリル基とからなる群から選ばれ、Ｒ２およびＲ３が、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれ、およびＲ４がＨ原子および炭素原子を１〜６個有するアルキル基とからなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１２項に記載の使用。

１４、上記化合物が、メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−ブチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−プロペン酸、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブタノン、　１−（４−ヒドロキシフェニル） −３−ペンタノン、メチル−（４−ヒドロキシフェノキシ）アセテート、およびメチル３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノエートとからなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１３項に記載の使用。

１５、次　式：式中、Ｒ１がＣＨ３；Ｒ２がＨ；　Ｒ３がＯＨ；およびＲ４がＣＨ３である、の化合物。

式中、Ｒ１がＨ原子、炭素原子を１〜６個有するアルキル基、および置換または非置換のアリル基とからなる群から選ばれ、およびＲ２およびＲ３が、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれる、で表わされる群から選ばれる化合物、および該化合物の薬学的に受け容れられる塩を薬剤の調整に使用。

１７、上記化合物が下記の諸式にて表わされる化合物からなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１６項に記載の使用。

１ｇ、上記化合物が、３−（４−ヒドロキシフェニル）−１−フェニル−２−プロペン−１−オンおよび４−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブテン−２−オン、同族体、化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物、さらに、上記治療の必要において個体にとって薬学的に受け容れられる上記化合物の塩からなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１６項に記載の使用。

１９、次　式式中、Ｒ１がＨ原子、炭素原子を１〜６個有するアルキル基、および置換または非置換のアリル基とからなる群から選ばれ、およびＲ２およびＲ３が、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれる化合物および該化合物の薬学的に受け容れられる塩からなる群から選ばれる化合物の、増殖性細胞の生長を阻止する薬剤を調整するのに使用。

２０、上記化合物が下記の諸式にて表わされる化合物からなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１９項に記載の使用。

２１、上記化合物が、３−（４−ヒドロキシフェニル）−１−フェニル−２−プロペン−１−オンおよび４−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブテン−２−オン、同族体、化学的誘導体、゛および化学的に関係ある化合物からなる群から、増殖性細胞にとって、選ばれることを特徴とする請求の範囲第１９項に記載の使用。

式中、Ｒ，がＨ原子、炭素原子を１〜６個有するアルキル基、および置換または非置換のアリル基とからなる群から選ばれ、およびＲ２およびＲ３が、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれる化合物および該化合物の薬学的に受け容れられる塩からなる群から選ばれる化合物の、良性前立腺過形成の治療薬剤を調整するのに使用。

にて表わされる化合物からなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第２２項に記載の使用。

２４、上記化合物が、３−（４−ヒドロキシフェニル）−１−プロペン−１−オンおよび４−（４〜ヒドロキシフエニル）−３−プデンー２−オン、およびそれらの同族体、化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物および該化合物の薬学的に関係する塩からなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第２２項に記載の使用。

国際調査報告国際調査報告国際調査報告１１１ｍＭ１１１１１１＆ｌ　Ａｍ、ｅｌ＋＋ｍ　ｈａ、ＰＣＴ／υＳ　１１８１０２４７６

Claims

【特許請求の範囲】

１．メチルｐ−ヒドロキシフェニルラクタート、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラクタートの同族体、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラクタートの化学誘導体および化学的に関係する化合物とからなる群から選ばれた化合物の治療量を上記治療の必要において個体に投与する過程からなる癌の治療方法。
２．上記化合物が次式 ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼及び▲数式、化学式、表等があります▼式中、Ｒ１はＨ原子、炭素原子を１−６個有するアルキル基およびアリル基とからなる群から選ばれ、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれ、およびＲ４はＨ原子および炭素原子を１−６個有するアルキル基とからなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の方法。
３．上記化合物が、メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−ブチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−プロベン酸、１−（４ −ヒドロキシフェ＝ル）−３−ブタノン、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３ −ペンタノン、メチル−（４−ヒドロキシフェノキシ）アセテート、およびメチル３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノエートからなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第２項に記載の方法。
４．メチルｐ−ヒドロキシフェニルラクタート、メチルｐ−ヒドロキシフェニルの同族体、メチルｐ−ヒドロキシフェニルの化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物とからなる群から選ばれる化合物の、増殖性細胞に対する生物的抑制投与量を投与する過程からなる、型ＩＩ核エストロゲン結合部位を含んだ増殖性細胞の生長を抑制する方法。
５．上記化合物が次式 ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼及び▲数式、化学式、表等があります▼式中、Ｒ１はＨ原子、炭素原子を１−６個有するアルキル基およびアリル基とからなる群から選ばれ、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれ、およびＲ４はＨ原子および炭素原子を１−６個有するアルキル基とからなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第４項に記載の方法。
６．上記化合物が、メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−ブチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−プロベン酸、１−（４ −ヒドロキシフェニル）−３−ブタノン、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３ −ベンクノン、メチル−（４−ヒドロキシフェノキシ）アセテート、およびメチル３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノエートからなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第５項に記載の方法。
７．上記増原細胞が、子宮、乳腺、子宮腫瘍、および乳腺腫瘍からなる群から選ばれるエストロゲン反応性組織であることを特徴とする請求の範囲第５項に記載の方法。
８．エストロゲン反応性組織がヒトの乳癌細胞であることを特徴とする請求の範囲第７項に記載の方法。
９．メチルｐ−ヒドロキシフェニルラクタート、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラクタートの同族体、メチル−ヒドロキシフェニルラクタートの化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物とからなる群から選ばれた化合物の治療量を投与する過程からなる、良性の前立腺過形成を治療する方法。
１０．上記化合物か次式 ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼及び▲数式、化学式、表等があります▼′式中、Ｒ１はＨ原子、炭素原子を１−６個有するアルキル基、およびアリル基とからなる群から選ばれ、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれ、およびＲ４はＨ原子および炭素原子を１−６個有するアルキル基とからなる群がら選ばれることを特徴とする請求の範囲第９項に記載の方法。
１１．上記化合物が、メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−ブチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−プロペン酸、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブタノン、１−（４−ヒドロキシフェニル）− ３−ペンタノン・メチル−（４−ヒドロキシフェノキシ）アセテート、およびメチル３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノエートからなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１０項に記載の方法。
１２．抗腫瘍剤として、メチルｐ−ヒドロキシフェニルラクタート、メチルｐ− ヒドロキシフェニルラクタートの同族体、メチルｐ−ヒドロキシフエニルラクタートの化学誘導体、および化学的に関係ある化合物。
１３．上記化合物が次式 ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼及び▲数式、化学式、表等があります▼式中、Ｒ１がＨ原子、炭素原子を１−６個有するアルキル基、およびアリル基とからなる群から選ばれ、Ｒ２およびＲ３が、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれ、およびＲ４がＨ原子および炭素原子を１−６個有するアルキル基とからなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１２項に記載の方法。
１４．上記化合物が、メチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロピオネート、ｎ−プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロビオネート、ｎ−ブチル３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシプロビオネート、３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−プロペン酸、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブタノン、１−（４−ヒドロキシフェニル）− ３−ペンタノン、メチル−（４−ヒドロキシフェノキシ）アセテート、およびメチル３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノエートからなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１３項に記載の方法。
１５．次式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ１がＣＨ３；Ｒ２がＨ；Ｒ３がＯＨ；およびＲ４がＣＨ３である、の化合物。
１６．次式 ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼及び▲ 数式、化学式、表等があります▼式中、Ｒ１がＨ原子、炭素原子を１−６個有するアルキル基、および置換または非置換のアリル基とからなる群から選ばれ、およびＲ２およびＲ３が、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれる、で表わされる群から選ばれる化合物、および該化合物の薬学的に受け容れられる塩を治療量にて投与する方法。
１７．上記化合物が下記の諸式 ▲数式、化学式、表等があります▼， ▲数式、化学式、表等があります▼， ▲数式、化学式、表等があります▼及び▲数式、化学式、表等があります▼ にて表わされる化合物からなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１６項に記載の方法。
１８．上記化合物が、３−（４−ヒドロキシフェニル）−１−フェニル−２−プロペン−１−オンおよび４−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブテン−２−オン、同族体、化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物、さらに、上記治療の必要において個体にとって薬学的に受け容れられる上記化合物の塩からなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１６項に記載の方法。
１９．次式 ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼及び▲ 数式、化学式、表等があります▼式中、ＲｌがＨ原子、炭素原子を１−６個有するアルキル基、および置換または非置換のアリル基とからなる群から選ばれ、およびＲ２およびＲ３が、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれる化合物および該化合物の薬学的に受け容れられる塩からなる群から選ばれる化合物を生物的に抑制する量にて投与することからなる、増殖性細胞の生長を阻止する方法。
２０．上記化合物が下記の諸式 ▲数式、化学式、表等があります▼， ▲数式、化学式、表等があります▼， ▲数式、化学式、表等があります▼及び▲数式、化学式、表等があります▼ にて表わされる化合物からなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第１９項に記載の方法。
２１．上記化合物が、３−（４−ヒドロキシフェニル）−１−フェニル−２−プロベン−１−オンおよび４−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブテン−２−オン、同族体、化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物からなる群から、増殖性細胞にとって、選ばれることを特徴とする請求の範囲第１９項に記載の方法。
２２．次式 ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼及び▲ 数式、化学式、表等があります▼式中、Ｒ１がＨ原子、炭素原子を１−６個有するアルキル基、および置換または非置換のアリル基とからなる群から選ばれ、およびＲ２およびＲ３が、Ｈ，ＯＨおよびＯＣＨ３の群から選ばれる化合物および該化合物の薬学的に受け容れられる塩からなる群から選ばれる化合物を治療量にて投与することからなる、良性前立腺過形成の治療方法。
２３．次式 ▲数式、化学式、表等があります▼， ▲数式、化学式、表等があります▼， ▲数式、化学式、表等があります▼及び▲数式、化学式、表等があります▼ にて表わされる化合物からなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第２２項に記載の方法。
２４．上記化合物が、３−（４−ヒドロキシフェニル）−１−フェニル−２−プロベン−１−オンおよび４−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ブテン−２−オン、同族体、化学的誘導体、および化学的に関係ある化合物および該化合物の薬学的に関係する塩からなる群から選ばれることを特徴とする請求の範囲第２２項に記載の方法。