JPH0358714B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0358714B2 JPH0358714B2 JP58176297A JP17629783A JPH0358714B2 JP H0358714 B2 JPH0358714 B2 JP H0358714B2 JP 58176297 A JP58176297 A JP 58176297A JP 17629783 A JP17629783 A JP 17629783A JP H0358714 B2 JPH0358714 B2 JP H0358714B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- methanol
- days
- medium
- growth
- hyphomicrobium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
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-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明はエタノールの製造方法に関する。
本発明者らは、メタノールを炭素源とするエタ
ノールの製造方法について種々検討した結果、ハ
イホミクロビウム属に属する微生物がメタノール
をエタノールに変換する能力を有することを見出
し、本発明に到達した。 すなわち、本発明の要旨は、ハイホミクロビウ
ム属に属し、エタノールを生産する能力を有する
微生物を、炭素源としてメタノールを使用して培
養し、培養物からエタノールを得ることを特徴と
するエタノールの製造方法にある。 以下、本発明を詳細に説明する。 本発明において使用される微生物はハイホミク
ロビウム（Hyphomicrobium）属に属し、エタ
ノールを生産する能力を有するものであり、たと
えば、 ハイホミクロビウム バリアビル42−３−１
（Hyphomicrobium variabile42−３−１）
（FERM Ｐ−7019）、が挙げられる。 上記ハイホミクロビウム バリアビル42−３−
１は、昭和56年12月オーストラリアで採取された
土壌より分離されたものであり、その細菌学的性
状は次の通りである。 (1) 顕微鏡的特徴 メタノール1.5含有寒天平板培地、30℃５日
間の培養的性質（コロニーの形態） イ） 外 形 ：円形 ロ） 大きさ ：1.0〜2.0mm ハ） 表面の隆起：凸レンズ状 ハ） 表面の形状：平滑 ホ） 光 沢 ：無 ヘ） 色 調 ：クリーム色〜淡黄色 ト） 透明度 ：半透明 チ） 周 縁 ：全縁 メタノール1.5％含有液体培地および寒天平
板培地、30℃、２〜５日間の形態的性質 イ） 細胞の形態：卵形〜ダ円形の桿菌 ロ） 細胞の大きさ：0.5〜1.0×1.0〜3.0μm ハ） 多形性 ：なし ニ） 運動性 ：あり、単一の極ベン毛 ホ） 胞子形成 ：なし ヘ） グラム染色：陰性 ト） 抗酸性 ：陰性 チ） 分裂様式 ：出芽（budding）により増
殖する。その出芽様式は、カビ
の胞子の発芽を想起させる。発
芽管様の菌糸の先端が膨潤し
て、娘細胞が形成される。 (2) 各培地における生育状態 イ） メタノール1.5％含有斜面培地、30℃、
５日間の生育状態。 旺盛な生育、接種線に一様に生育する。コ
ロニーの色調は、クリーム色〜淡黄色。表面
は平滑。周辺は全円平滑。不透明。 ロ） メタノール1.5％含有高層培地、30℃、
５日間の生育状態。 接種線に沿つてのみ生育する。表面での生
育は旺盛。 ハ） メタノール1.5％含有液体静置培養、30
℃、５日間の生育状態。 中程度の生育。混濁する。皮膜は形成され
ず。 ニ） メタノール1.5％含有ゼラチン培地、30
℃、５日間の生育状態。 中程度の生育。ゼラチンを液化せず。 ホ） 肉汁寒天斜面培地、30℃、５日間の生育
状態。 生育状態は、メタノール含有斜面培地上で
の生育状態に似る。 ヘ） 肉汁高層培地、30℃、５日間の生育状
態。 メタノール含有高層培地上での生育と同
じ。 ト） 肉汁液体静置培養、30℃、５日間の生育
状態。 メタノール含有液体培養での生育と同じ。 チ） 肉汁・ゼラチン培地、30℃、５日間の生
育状態。 メタノール含有ゼラチン培地中での生育と同
じ。ゼラチンを液化せず。 (3) 生理的性質
ノールの製造方法について種々検討した結果、ハ
イホミクロビウム属に属する微生物がメタノール
をエタノールに変換する能力を有することを見出
し、本発明に到達した。 すなわち、本発明の要旨は、ハイホミクロビウ
ム属に属し、エタノールを生産する能力を有する
微生物を、炭素源としてメタノールを使用して培
養し、培養物からエタノールを得ることを特徴と
するエタノールの製造方法にある。 以下、本発明を詳細に説明する。 本発明において使用される微生物はハイホミク
ロビウム（Hyphomicrobium）属に属し、エタ
ノールを生産する能力を有するものであり、たと
えば、 ハイホミクロビウム バリアビル42−３−１
（Hyphomicrobium variabile42−３−１）
（FERM Ｐ−7019）、が挙げられる。 上記ハイホミクロビウム バリアビル42−３−
１は、昭和56年12月オーストラリアで採取された
土壌より分離されたものであり、その細菌学的性
状は次の通りである。 (1) 顕微鏡的特徴 メタノール1.5含有寒天平板培地、30℃５日
間の培養的性質（コロニーの形態） イ） 外 形 ：円形 ロ） 大きさ ：1.0〜2.0mm ハ） 表面の隆起：凸レンズ状 ハ） 表面の形状：平滑 ホ） 光 沢 ：無 ヘ） 色 調 ：クリーム色〜淡黄色 ト） 透明度 ：半透明 チ） 周 縁 ：全縁 メタノール1.5％含有液体培地および寒天平
板培地、30℃、２〜５日間の形態的性質 イ） 細胞の形態：卵形〜ダ円形の桿菌 ロ） 細胞の大きさ：0.5〜1.0×1.0〜3.0μm ハ） 多形性 ：なし ニ） 運動性 ：あり、単一の極ベン毛 ホ） 胞子形成 ：なし ヘ） グラム染色：陰性 ト） 抗酸性 ：陰性 チ） 分裂様式 ：出芽（budding）により増
殖する。その出芽様式は、カビ
の胞子の発芽を想起させる。発
芽管様の菌糸の先端が膨潤し
て、娘細胞が形成される。 (2) 各培地における生育状態 イ） メタノール1.5％含有斜面培地、30℃、
５日間の生育状態。 旺盛な生育、接種線に一様に生育する。コ
ロニーの色調は、クリーム色〜淡黄色。表面
は平滑。周辺は全円平滑。不透明。 ロ） メタノール1.5％含有高層培地、30℃、
５日間の生育状態。 接種線に沿つてのみ生育する。表面での生
育は旺盛。 ハ） メタノール1.5％含有液体静置培養、30
℃、５日間の生育状態。 中程度の生育。混濁する。皮膜は形成され
ず。 ニ） メタノール1.5％含有ゼラチン培地、30
℃、５日間の生育状態。 中程度の生育。ゼラチンを液化せず。 ホ） 肉汁寒天斜面培地、30℃、５日間の生育
状態。 生育状態は、メタノール含有斜面培地上で
の生育状態に似る。 ヘ） 肉汁高層培地、30℃、５日間の生育状
態。 メタノール含有高層培地上での生育と同
じ。 ト） 肉汁液体静置培養、30℃、５日間の生育
状態。 メタノール含有液体培養での生育と同じ。 チ） 肉汁・ゼラチン培地、30℃、５日間の生
育状態。 メタノール含有ゼラチン培地中での生育と同
じ。ゼラチンを液化せず。 (3) 生理的性質
【表】
【表】
(4) 各種糖類から酸及びガスの生成の有無
【表】
(5) 糖類の資化性
【表】
(6) 糖類以外の炭素源の資化性
【表】
【表】
(7) 菌体の化学的組成分析
DNA中のグアニン＋シトシン含量（融解温
度測定法による）は60.2〜60.5モル％であつ
た。 属レベルの同定 本菌株、42−３−１は出芽型の分裂様式を示
すこと、運動性の極ベン毛を有することからバ
ージーズマニユアル第８版（Bargey′s
Manual of Determinative Bacteriology 8th
ed.（1974））に記載されているハイホミクロビ
ウム（Hyphomicrobium）属に帰属すること
が判明した。 バージーズマニユアル第８版によれば、出芽
型分裂細菌（Budding Bacteria）にはハイホ
ミクロビウム（Hyphomicrobium）、ハイホモ
ナス（Hyphomonas）およびペドミクロビウ
ム（Pedomicrobium）の３属が記載されてい
る。HyphomonasはC1化合物を利用しないこ
と、PedomicrobiumはC1化合物を利用しない
点および、多形性の形態を有することによつて
Hyphomicrobium属から識別されている。 種レベルの同定 ハイホミクロビウム属にはH.ネプチニウム
（H.neptinium）、H.バルガレ（H.vulgare）、
H.インジカム（H.indicum）、H.バリアビル
（H.variabile）（特開昭47−14589号）およびH.
コアグランス（H.coagulans）（Takada，
1974）の５種が知られている。これら５種のう
ち、前者３種は汽水〜海水域に生息する
Marine Bacteriaとして知られており、50〜
100％海水中で生育可能な微生物である。一方
H.バリアビルおよびH.コアグランスは土壌性
細菌として知られている。 本菌株、42−３−１をH.コアグランスの原
記載と比較したところ、ペプトン水での生育は
弱く、薄膜（Pellicle）を形成しないことおよ
び炭素源の資化性パターンにおいてH.コアグ
ランスから区別された。本菌株、42−３−１と
H.バリアビルの基準菌株（NCIB 10517）につ
いて、各種の微生物的諸性質を比較検討したと
ころ、試験項目の(3)〜(8)に示すように、炭素源
の資化性および他の生理的性質等において、両
菌株はよく類似していた。また両菌株について
DNAのＧ−Ｃ含量を測定したところ、H.バリ
アビル（NCIB 10517）は60.2〜60.7モル％、
本菌株42−３−１は、60.2〜60.5モル％の測定
値を示し、この点においても両菌はよく一致し
た。従つて、本菌株42−３−１はハイホミクロ
ビウム バリアビルと同定された。 本発明において使用される培地としては、主
炭素源としてメタノールを含むものであれば、
特に制限されない。 炭素源としては、メタノール以外に、種々の
炭水化物、有機酸等をさらに添加してもよく、
窒素源としては、有機アンモニウム塩、無機ア
ンモニウム塩、尿素等を用いることができる。 また、必要に応じ、無機物として各種リン酸
塩、硫酸塩等を使用することができ、必要に応
じ各種有機栄養物を添加することもできる。 培養は、通常12時間〜10日間程度、好気的条
件下に行なわれるが、培養の一部（後期）を嫌
気的条件下で行なうこともできる。 培地のPHは４−10、温度は20−40℃程度から
選ばれる。 エタノールの生産に際しては、増殖菌体、休
止菌体のいずれをも用いることができる。 培養物からエタノールの採取、精製に際して
は、一般に有機化合物の採取、精製に用いられ
ている方法を採用することができる。 以下、実施例により、本発明をさらに説明す
る。 なお、実施例における物質の同定はガスクロマ
トグラフー質量分析等により標品と比較して行な
つた。 実施例 １ 水１あたりメタノール（15ｇ）、NH4Cl（４
ｇ）、K2HPO4（１ｇ）、Na2HPO4（１ｇ）、
MgSO4・7H2O（0.5ｇ）、塩酸ピリドキシン（１
mg）、ビオチン（0.01mg）、塩酸チアミン（１mg）、
リボフラビン（１mg）、Ｄ−パントテン酸ナトリ
ウム（１mg）、葉酸（0.01mg）、FeSO4・7H2O（１
mg）ZnSO4・7H2O（１mg）、CuSO4・5H2O（0.1
mg）、MnCl2・4H2O（0.04mg）を溶解し、PH7.0に
調整した培地(A)50mlを500ml容肩付コルベンに分
注し、120℃で10分間殺菌した。この培地Ａに寒
天20ｇ１を添加したメタノール含有寒天斜面培
地にハイホミクロビウム バリアビル42−３−１
菌を30℃、４日間培養し、その−白金耳を上記コ
ルベンに接種し、30℃往復振とう機で112回／分
の回転数を与え培養を６日間行つた。得られた培
養液をさらに30℃で２日間静置培養することによ
りエタノール1.5mgを得た（同時に、酢酸、アセ
トン及びイソプロパノールが得られた）。 実施例 ２ ハイホミクロビウム バリアビル42−３−１菌
を使用し、実施例１と同様に培養した培養液を遠
心分離（12000rpm15分）し、菌体を集菌し、さ
らに同様の培地A10mlで懸濁し、30℃にて２日間
静置培養を行ないエタノール３mgを得た（同時に
酢酸、アセトン及びイソプロパノールが得られ
た）。
度測定法による）は60.2〜60.5モル％であつ
た。 属レベルの同定 本菌株、42−３−１は出芽型の分裂様式を示
すこと、運動性の極ベン毛を有することからバ
ージーズマニユアル第８版（Bargey′s
Manual of Determinative Bacteriology 8th
ed.（1974））に記載されているハイホミクロビ
ウム（Hyphomicrobium）属に帰属すること
が判明した。 バージーズマニユアル第８版によれば、出芽
型分裂細菌（Budding Bacteria）にはハイホ
ミクロビウム（Hyphomicrobium）、ハイホモ
ナス（Hyphomonas）およびペドミクロビウ
ム（Pedomicrobium）の３属が記載されてい
る。HyphomonasはC1化合物を利用しないこ
と、PedomicrobiumはC1化合物を利用しない
点および、多形性の形態を有することによつて
Hyphomicrobium属から識別されている。 種レベルの同定 ハイホミクロビウム属にはH.ネプチニウム
（H.neptinium）、H.バルガレ（H.vulgare）、
H.インジカム（H.indicum）、H.バリアビル
（H.variabile）（特開昭47−14589号）およびH.
コアグランス（H.coagulans）（Takada，
1974）の５種が知られている。これら５種のう
ち、前者３種は汽水〜海水域に生息する
Marine Bacteriaとして知られており、50〜
100％海水中で生育可能な微生物である。一方
H.バリアビルおよびH.コアグランスは土壌性
細菌として知られている。 本菌株、42−３−１をH.コアグランスの原
記載と比較したところ、ペプトン水での生育は
弱く、薄膜（Pellicle）を形成しないことおよ
び炭素源の資化性パターンにおいてH.コアグ
ランスから区別された。本菌株、42−３−１と
H.バリアビルの基準菌株（NCIB 10517）につ
いて、各種の微生物的諸性質を比較検討したと
ころ、試験項目の(3)〜(8)に示すように、炭素源
の資化性および他の生理的性質等において、両
菌株はよく類似していた。また両菌株について
DNAのＧ−Ｃ含量を測定したところ、H.バリ
アビル（NCIB 10517）は60.2〜60.7モル％、
本菌株42−３−１は、60.2〜60.5モル％の測定
値を示し、この点においても両菌はよく一致し
た。従つて、本菌株42−３−１はハイホミクロ
ビウム バリアビルと同定された。 本発明において使用される培地としては、主
炭素源としてメタノールを含むものであれば、
特に制限されない。 炭素源としては、メタノール以外に、種々の
炭水化物、有機酸等をさらに添加してもよく、
窒素源としては、有機アンモニウム塩、無機ア
ンモニウム塩、尿素等を用いることができる。 また、必要に応じ、無機物として各種リン酸
塩、硫酸塩等を使用することができ、必要に応
じ各種有機栄養物を添加することもできる。 培養は、通常12時間〜10日間程度、好気的条
件下に行なわれるが、培養の一部（後期）を嫌
気的条件下で行なうこともできる。 培地のPHは４−10、温度は20−40℃程度から
選ばれる。 エタノールの生産に際しては、増殖菌体、休
止菌体のいずれをも用いることができる。 培養物からエタノールの採取、精製に際して
は、一般に有機化合物の採取、精製に用いられ
ている方法を採用することができる。 以下、実施例により、本発明をさらに説明す
る。 なお、実施例における物質の同定はガスクロマ
トグラフー質量分析等により標品と比較して行な
つた。 実施例 １ 水１あたりメタノール（15ｇ）、NH4Cl（４
ｇ）、K2HPO4（１ｇ）、Na2HPO4（１ｇ）、
MgSO4・7H2O（0.5ｇ）、塩酸ピリドキシン（１
mg）、ビオチン（0.01mg）、塩酸チアミン（１mg）、
リボフラビン（１mg）、Ｄ−パントテン酸ナトリ
ウム（１mg）、葉酸（0.01mg）、FeSO4・7H2O（１
mg）ZnSO4・7H2O（１mg）、CuSO4・5H2O（0.1
mg）、MnCl2・4H2O（0.04mg）を溶解し、PH7.0に
調整した培地(A)50mlを500ml容肩付コルベンに分
注し、120℃で10分間殺菌した。この培地Ａに寒
天20ｇ１を添加したメタノール含有寒天斜面培
地にハイホミクロビウム バリアビル42−３−１
菌を30℃、４日間培養し、その−白金耳を上記コ
ルベンに接種し、30℃往復振とう機で112回／分
の回転数を与え培養を６日間行つた。得られた培
養液をさらに30℃で２日間静置培養することによ
りエタノール1.5mgを得た（同時に、酢酸、アセ
トン及びイソプロパノールが得られた）。 実施例 ２ ハイホミクロビウム バリアビル42−３−１菌
を使用し、実施例１と同様に培養した培養液を遠
心分離（12000rpm15分）し、菌体を集菌し、さ
らに同様の培地A10mlで懸濁し、30℃にて２日間
静置培養を行ないエタノール３mgを得た（同時に
酢酸、アセトン及びイソプロパノールが得られ
た）。
Claims (1)
- １ ハイホミクロビウム（Hyphomicrobium）
属に属し、エタノールを生産する能力を有する微
生物を、炭素源としてメタノールを使用して培養
し、培養物からエタノールを得ることを特徴とす
るエタノールの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58176297A JPS6070089A (ja) | 1983-09-26 | 1983-09-26 | エタノ−ルの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58176297A JPS6070089A (ja) | 1983-09-26 | 1983-09-26 | エタノ−ルの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6070089A JPS6070089A (ja) | 1985-04-20 |
| JPH0358714B2 true JPH0358714B2 (ja) | 1991-09-06 |
Family
ID=16011117
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58176297A Granted JPS6070089A (ja) | 1983-09-26 | 1983-09-26 | エタノ−ルの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6070089A (ja) |
-
1983
- 1983-09-26 JP JP58176297A patent/JPS6070089A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6070089A (ja) | 1985-04-20 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
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