JPH0358712B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はイソプロパノールの製造方法に関す
る。 本発明者らは、メタノールを炭素源とするイソ
プロパノールの製造方法について種々検討した結
果、ハイホミクロビウム属に属する微生物がメタ
ノールをイソプロパノールに変換する能力を有す
ることを見出し、本発明に到達した。 すなわち、本発明の要旨は、ハイホミクロビウ
ム属に属し、イソプロパノールを生産する能力を
有する微生物を、炭素源としてメタノールを使用
して培養し、培養物からイソプロパノールを得る
ことを特徴とするイソプロパノールの製造方法に
ある。 以下、本発明を詳細に説明する。 本発明において使用される微生物はハイホミク
ロビウム（Hyphomicrobium）属に属し、イソ
プロパノールを生産する能力を有するものであ
り、たとえば、 ハイホミクロビウム バリアビル42−３−１
（Hyphomicrobium variabile42−３−１）
（FERM Ｐ−7019）、が挙げられる。 上記ハイホミクロビウム バリアビル42−３−
１は、昭和56年12月オーストラリアで採取された
土壌より分離されたものであり、その細菌学的性
状は次の通りである。 (1) 顕微鏡的特徴 メタノール1.5％含有寒天平板培地、30℃５
日間の培養的性質（コロニーの形態） イ） 外 形 ：円形 ロ） 大きさ ：1.0〜2.0mm ハ） 表面の隆起：凸レンズ状 ハ） 表面の形状：平滑 ホ） 光 沢 ：無 ヘ） 色 調 ：クリーム色〜淡黄色 ト） 透明度 ：半透明 チ） 周 縁 ：全縁 メタノール1.5％含有液体培地および寒天平
板培地、30℃、２〜５日間の形態的性質 イ） 細胞の形態：卵形〜ダ円形の桿菌 ロ） 細胞の大きさ：0.5〜1.0×1.0〜3.0μm ハ） 多形性 ：なし ニ） 運動性 ：あり、単一の極ベン毛 ホ） 胞子形成 ：なし ヘ） グラム染色：陰性 ト） 抗酸性 ：陰性 チ） 分裂様式 ：出芽（budding）により増
殖する。その出芽様式は、カビ
の胞子の発芽を想起させる。発
芽管様の菌糸の先端が膨潤し
て、娘細胞が形成される。 (2) 各培地における生育状態 イ） メタノール1.5％含有斜面培地、30℃、
５日間の生育状態。 旺盛な生育、接種線に一様に生育する。コ
ロニーの色調は、クリーム色〜淡黄色。表面
は平滑。周辺は全円平滑。不透明。 ロ） メタノール1.5％含有高層培地、30℃、
５日間の生育状態。 接種線に沿つてのみ生育する。表面での生
育は旺盛。 ハ） メタノール1.5％含有液体静置培養、30
℃、５日間の生育状態。 中程度の生育。混濁する。皮膜は形成され
ず。 ニ） メタノール1.5％含有ゼラチン培地、30
℃、５日間の生育状態。 中程度の生育。ゼラチンを液化せず。 ホ） 肉汁寒天斜面培地、30℃、５日間の生育
状態。 生育状態は、メタノール含有斜面培地上で
の生育状態に似る。 ヘ） 肉汁高層培地、30℃、５日間の生育状
態。 メタノール含有高層培地上での生育と同
じ。 ト） 肉汁液体静置培養、30℃、５日間の生育
状態。 メタノール含有液体培養での生育と同じ。 チ） 肉汁・ゼラチン培地、30℃、５日間の生育
状態。 メタノール含有ゼラチン培地中での生育と同
じ。ゼラチンを液化せず。 (3) 生理的性質

【表】

【表】 (4) 各種糖類から酸及びガスの生成の有無

【表】 (5) 糖類の資化性

【表】 (6) 糖類以外の炭素源の資化性

【表】

【表】 (7) 菌体の化学的組成分析 DNA中のグアニン＋シトシン含量（融解温
度測定法による）は60.2〜60.5モル％であつ
た。 属レベルの同定 本菌株、42−３−１は出芽型の分裂様式を示
すこと、運動性の極ベン毛を有することからバ
ージーズマニユアル第８版（Bargey′s
Manual of Determinative Bacteriology 8th
ed.（1974））に記載されているハイホミクロビ
ウム（Hyphomicrobium）属に帰属すること
が判明した。 バージーズマニユアル第８版によれば、出芽
型分裂細菌（Budding Bacteria）にはハイホ
ミクロビウム（Hyphomicrobium）、ハイホモ
ナス（Hyphomonas）およびペドミクロビウ
ム（Pedomicrobium）の３属が記載されてい
る。HyphomonasはC₁化合物を利用しないこ
と、PedomicrodiumはC₁化合物を利用しない
点および、多形性の形態を有することによつて
Hyphomicrobium属から識別されている。 種レベルの同定 ハイホミクロビウム属にはH.ネプチニウム
（H.neptinium）、H.バルガレ（H.vulgare）、
H.インジカム（H.indicum）、H.バリアビル
（H.variabile）（特開昭47−14589号）およびH.
コアグランス（H.coagulans）（Takada，
1974）の５種が知られている。これら５種のう
ち、前者３種は汽車〜海水域に生息する
Marine Bacteriaとして知られており、50〜
100％海水中で生育可能な微生物である。一方
H.バリアビルおよびH.コアグランスは土壌性
細菌として知られている。 本菌株、42−３−１をH.コアグランスの原
記載としたところ、ペプトン水での生育は弱
く、薄膜（Pellicle）を形成しないことおよび
炭素源の資化性パターンにおいてH.コアグラ
ンスから区別された。本菌株、42−３−１と
H.バリアビルの基準菌株（NCIB 10517）につ
いて、各種の微生物的諸性質を比較検討したと
ころ、試験項目の(3)〜(8)に示すように、炭素源
の資化性および他の生理的性質等において、両
菌株はよく類似していた。また両菌株について
DNAのＧ−Ｃ含量を測定したところ、H.バリ
アビル（NCIB 10517）は60.2〜60.7モル％、
本菌株42−３−１は、60.2〜60.5モル％の測定
値を示し、この点においても両菌はよく一致し
た。従つて、本菌株42−３−１はハイホミクロ
ビウム バリアビルと同定された。 本発明において使用される培地としては、主
炭素源としてメタノールを含むものであれば、
特に制限されない。 炭素源としては、メタノール以外に、種々の
炭水化物、有機酸等をさらに添加してもよく、
窒素源としては、有機アンモニウム塩、無機ア
ンモニウム塩、尿素等を用いることができる。 また、必要に応じ、無機物として各種リン酸
塩、硫酸塩等を使用することができ、必要に応
じ各種有機栄養物を添加することもできる。 培養は、通常12時間〜10日間程度、好気的条
件下に行なわれるが、培養の一部（後期）を嫌
気的条件下で行なうこともできる。 培地のPHは４−10、温度は20−40℃程度から
選ばれる。 イソプロパノールの生産に際しては、増殖菌
体、休止菌体のいずれをも用いることができ
る。 培養物からイソプロパノールの採取、精製に
際しては、一般に有機化合物の採取、精製に用
いられている方法を採用することができる。 以下、実施例により、本発明をさらに説明す
る。 なお、実施例における物質の同定はガスクロマ
トグラフ−質量分析等により標品と比較して行な
つた。 実施例 １ 水１あたりメタノール（15ｇ）、NH₄Cl（４
ｇ）、K₂HPO₄（１ｇ）、Na₂HPO₄（１ｇ）、
MgSO₄・7H₂O（0.5ｇ）、塩酸ピリドキシン（１
mg）、ビオチン（0.01mg）、塩酸チアミン（１mg）、
リボフラビン（１mg）、Ｄ−パントテン酸ナトリ
ウム（１mg）、葉酸（0.01mg）、FeSO₄・7H₂O（１
mg）、ZnSO₄・7H₂O（１mg）、CuSO₄・5H₂O（0.1
mg）、MnCl₂・4H₂O（0.04mg）を溶解し、PH7.0に
調整した培地(A)50mlを500ml容肩付コルベンに分
注し、120℃で10分間殺菌した。この培地Ａに寒
天20ｇ１を添加したメタノール含有寒天斜面培
地にハイホミクロビウム バリアビル42−３−１
菌を30℃、４日間培養し、その−白金耳を上記コ
ルベンに接種し、30℃往復振とう機で112回／分
の回転数を与え培養を６日間行つた。得られた培
養液をさらに30℃で４日間静置培養することによ
りイソプロパノール４mgを得た（同時に、エタノ
ール、アセトン及び酢酸が得られた）。 実施例 ２ ハイホミクロビウム バリアビル42−３−１菌
を使用し、実施例１と同様に培養した培養液を遠
心分離（12000rpm15分）し、菌体を集菌し、さ
らに同様の培地A10mlで懸濁し、30℃にて３日間
静置培養を行ないイソプロパノール４mgを得た
（同時にエタノール、アセトン及び酢酸が得られ
た）。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ハイホミクロビウム（Hyphomicrobium）
   属に属し、イソプロパノールを生産する能力を有
   する微生物を、炭素源としてメタノールを使用し
   て培養し、培養物からイソプロパノールを得るこ
   とを特徴とするイソプロパノールの製造方法。