JPH0361906B2 - - Google Patents
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- JPH0361906B2 JPH0361906B2 JP19767283A JP19767283A JPH0361906B2 JP H0361906 B2 JPH0361906 B2 JP H0361906B2 JP 19767283 A JP19767283 A JP 19767283A JP 19767283 A JP19767283 A JP 19767283A JP H0361906 B2 JPH0361906 B2 JP H0361906B2
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Description
本発明は免疫活性物質吸着用担体に関するもの
であり、更に詳しくは硬化樹脂球状の微粒子であ
るベンゾグアナミン粒子（以下単にベンゾグアナ
ミン粒子と記す）又は、シリカゾルで表面改質し
たベンゾグアナミン粒子から成る免疫活性物質吸
着用担体に関する。 現在、免疫活性物質吸着用担体、特に免疫学的
な臨床検査に用いる試薬用担体としては、生物学
的不活性、比重、粒子の均一性等の点で優れてい
るポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリ−２
−ヒドロキシメタクリレート等を材質とした微粒
子が繁用されている。中でもポリスチレンラテツ
クスは多種の高分子素材から経験的に選択され、
現在の免疫学的診断試薬用担体の主流ともいえる
ものであるが、元来粒子表面が疎水性であるため
自己凝集反応（非特異凝集反応）を起こしやす
く、又そのため抗原や抗体の感作後の脱離が生ず
る等の問題を有している。一方微粒子の疎水性表
面の改質法として、in situ重合の考え方を利用
したトポケミカル法、沈澱反応利用によるコーテ
イング法、マイクロカプセル化法、メカノケミカ
ル法等が知られている。また、特開昭56−121322
「プラスチツク微粉末の表面処理方法」において
は12ナイロン微粒子の表面を直接的にチタニアゾ
ルやシリアゾルにて被覆するコロイド法が開示さ
れている。本発明者らは、後述するようにコロイ
ド法の活用を考えた。ところで合成高分子化合物
の他に免疫活性物質吸着用担体としては羊赤血球
の使用が成されているが、異好抗原を有するこ
と、保存性に乏しいこと等の問題を有している。 本発明者らは上記のような現状に鑑み、種々の
粉体材料について鋭意研究を重ねた結果、それ自
身免疫学的な活性が無く、液中で凝集反応を起こ
さず、粒子径に均一性があり、化学的に安定で保
存に耐え得る性質を兼ね備えた担体材料として、
ベンゾグアナミン粒子が適することを知り本発明
に至つたものである。 本発明による免疫活性物質吸着用担体は、ベン
ゾグアナミン・ホルムアルデヒド縮合物で、主体
は次の構造 で表わされる白色微粉体で、ピクノメーターで測
定した比重1.41を有するベンゾグアナミン粒子よ
り成る。この粒子は微来の免疫活性物質吸着用担
体であるポリスチレンラテツクス等が有する大き
な欠点、すなわち液中での非特異凝集性を持たな
い免疫活性物質吸着用担体である。特にその平均
粒径が1.22μｍであるベンゾグアナミン粒子を用
いることにより免疫学的凝集反応用の担体として
有用なものとすることができる。又本発明におけ
るシリカゾルで被覆したベンゾグアナミン粒子は
未処理のベンゾグアナミン粒子に比べ、両者を減
圧圧縮成形した錠剤について接触角を測定した場
合、より小さい値を示し親水性の増大が認められ
る。このことはシリカゾル被覆によるベンゾグア
ナミン粒子の水性媒質中での分散性の向上、タン
パク吸着能の増大をもたらす。更に、ベンゾグア
ナミン粒子は、現在免疫学的臨床検査試薬用の担
体粒子として一般に用いられているポリスチレン
ラテツクスと比べ安価であり、経済的側面からみ
ても優れた免疫活性物質吸着用担体といえる。以
下実施例により本発明を更に詳細に説明するが本
発明はこれに限定されるものではない。 実施例 １ ベンゾグアナミン粒子のシリカゾル処理による
表面改質 まず、ベンゾグアナミン粒子1.0ｇをビーカー
に取り、これにPH2.4の希塩酸で0.125 0.25 0.5お
よび1.0％（ｖ／ｖ）の濃度に希釈したシリカゾ
ル水溶液を適量加え、よく混練りしてペースト状
にしたのち、更にシリカゾル水溶液を加えて全量
を50mlとした。ここで用いたベンゾグアナミン粒
子は、硬化樹脂球状の微粒子（平均粒径1.22μｍ、
比重1.41）で、日本触媒化学工業株式会社製のも
のである。またシリカゾルは日産化学工業株式会
社製のもので、平均粒径は64nｍ、SiO2含量20
％、（SiO2／Na2O）＝165、PH2.4である。これを
15分間撹拌しよく分散させたのち、25℃で30分間
放置し分散液を過した。更にベンゾグアナミン
粒子をPH2.4の希塩酸30mlで数回洗浄し、最終的
には水洗して自然乾燥後、これをシリカゾル処理
のベンゾグアナミン粒子とした。窒素吸着による
SN2比表面積測定から、ベンゾグアナミン粒子で
15.7m2／ｇ、１％（ｖ／ｖ）シリカゾル処理ベン
ゾグアナミン粒子では20.2m2／ｇの値を得た。 実施例 ２ ベンゾグアナミン粒子へのシリカゾルの吸着量
及び未処理と処理ベンゾグアナミン粒子の水に
対する接触角の測定 未吸着シリカゾル量から算出したベンゾグアナ
ミン粒子へのシリカゾル吸着量は、第１表に示し
たとおりである。分散媒である水中のシリカゾル
量は600nｍにおける吸光度を測定することによ
り求め、吸着量の算出は、処理用のシリカゾル水
溶液中のシリカゾル量から、処理後の分散液の
液及び洗浄液中のシリカゾル量を差し引いて行な
つた。
であり、更に詳しくは硬化樹脂球状の微粒子であ
るベンゾグアナミン粒子（以下単にベンゾグアナ
ミン粒子と記す）又は、シリカゾルで表面改質し
たベンゾグアナミン粒子から成る免疫活性物質吸
着用担体に関する。 現在、免疫活性物質吸着用担体、特に免疫学的
な臨床検査に用いる試薬用担体としては、生物学
的不活性、比重、粒子の均一性等の点で優れてい
るポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリ−２
−ヒドロキシメタクリレート等を材質とした微粒
子が繁用されている。中でもポリスチレンラテツ
クスは多種の高分子素材から経験的に選択され、
現在の免疫学的診断試薬用担体の主流ともいえる
ものであるが、元来粒子表面が疎水性であるため
自己凝集反応（非特異凝集反応）を起こしやす
く、又そのため抗原や抗体の感作後の脱離が生ず
る等の問題を有している。一方微粒子の疎水性表
面の改質法として、in situ重合の考え方を利用
したトポケミカル法、沈澱反応利用によるコーテ
イング法、マイクロカプセル化法、メカノケミカ
ル法等が知られている。また、特開昭56−121322
「プラスチツク微粉末の表面処理方法」において
は12ナイロン微粒子の表面を直接的にチタニアゾ
ルやシリアゾルにて被覆するコロイド法が開示さ
れている。本発明者らは、後述するようにコロイ
ド法の活用を考えた。ところで合成高分子化合物
の他に免疫活性物質吸着用担体としては羊赤血球
の使用が成されているが、異好抗原を有するこ
と、保存性に乏しいこと等の問題を有している。 本発明者らは上記のような現状に鑑み、種々の
粉体材料について鋭意研究を重ねた結果、それ自
身免疫学的な活性が無く、液中で凝集反応を起こ
さず、粒子径に均一性があり、化学的に安定で保
存に耐え得る性質を兼ね備えた担体材料として、
ベンゾグアナミン粒子が適することを知り本発明
に至つたものである。 本発明による免疫活性物質吸着用担体は、ベン
ゾグアナミン・ホルムアルデヒド縮合物で、主体
は次の構造 で表わされる白色微粉体で、ピクノメーターで測
定した比重1.41を有するベンゾグアナミン粒子よ
り成る。この粒子は微来の免疫活性物質吸着用担
体であるポリスチレンラテツクス等が有する大き
な欠点、すなわち液中での非特異凝集性を持たな
い免疫活性物質吸着用担体である。特にその平均
粒径が1.22μｍであるベンゾグアナミン粒子を用
いることにより免疫学的凝集反応用の担体として
有用なものとすることができる。又本発明におけ
るシリカゾルで被覆したベンゾグアナミン粒子は
未処理のベンゾグアナミン粒子に比べ、両者を減
圧圧縮成形した錠剤について接触角を測定した場
合、より小さい値を示し親水性の増大が認められ
る。このことはシリカゾル被覆によるベンゾグア
ナミン粒子の水性媒質中での分散性の向上、タン
パク吸着能の増大をもたらす。更に、ベンゾグア
ナミン粒子は、現在免疫学的臨床検査試薬用の担
体粒子として一般に用いられているポリスチレン
ラテツクスと比べ安価であり、経済的側面からみ
ても優れた免疫活性物質吸着用担体といえる。以
下実施例により本発明を更に詳細に説明するが本
発明はこれに限定されるものではない。 実施例 １ ベンゾグアナミン粒子のシリカゾル処理による
表面改質 まず、ベンゾグアナミン粒子1.0ｇをビーカー
に取り、これにPH2.4の希塩酸で0.125 0.25 0.5お
よび1.0％（ｖ／ｖ）の濃度に希釈したシリカゾ
ル水溶液を適量加え、よく混練りしてペースト状
にしたのち、更にシリカゾル水溶液を加えて全量
を50mlとした。ここで用いたベンゾグアナミン粒
子は、硬化樹脂球状の微粒子（平均粒径1.22μｍ、
比重1.41）で、日本触媒化学工業株式会社製のも
のである。またシリカゾルは日産化学工業株式会
社製のもので、平均粒径は64nｍ、SiO2含量20
％、（SiO2／Na2O）＝165、PH2.4である。これを
15分間撹拌しよく分散させたのち、25℃で30分間
放置し分散液を過した。更にベンゾグアナミン
粒子をPH2.4の希塩酸30mlで数回洗浄し、最終的
には水洗して自然乾燥後、これをシリカゾル処理
のベンゾグアナミン粒子とした。窒素吸着による
SN2比表面積測定から、ベンゾグアナミン粒子で
15.7m2／ｇ、１％（ｖ／ｖ）シリカゾル処理ベン
ゾグアナミン粒子では20.2m2／ｇの値を得た。 実施例 ２ ベンゾグアナミン粒子へのシリカゾルの吸着量
及び未処理と処理ベンゾグアナミン粒子の水に
対する接触角の測定 未吸着シリカゾル量から算出したベンゾグアナ
ミン粒子へのシリカゾル吸着量は、第１表に示し
たとおりである。分散媒である水中のシリカゾル
量は600nｍにおける吸光度を測定することによ
り求め、吸着量の算出は、処理用のシリカゾル水
溶液中のシリカゾル量から、処理後の分散液の
液及び洗浄液中のシリカゾル量を差し引いて行な
つた。
【表】
接触角の測定は、未処理ベンゾグアナミン粒
子、シリカゾル処理を行つたベンゾグアナミン粒
子のそれぞれを約0.3ｇとり、デイスクプレス
（日立製作所製）を用いて200Kg／cm2の圧力下で、
20分間減圧圧縮打錠して得られた錠剤を用いて行
つた。該錠剤を、まず接触角精密測定装置（協和
化学株式会社製）の試料台に水平に静置し、マイ
クロメーター付注射器より一定量の精製水を錠剤
上に静かに滴下した。滴下後、直ちに液滴の示す
前進接触角の経時変化を適当な時間間隔で写真撮
影し、次にそのフイルムをスライドプロジエクタ
ーを用いて投影し液滴の幅、高さを求め錠剤上の
液滴の形状を球体の一部とみなし、次式より接触
角を求めた。 tanθ／２＝2h／ｒ θ：接触角 ｈ：液滴の高さ（mm） ｒ：液滴の幅（mm） 得られた接触角値の経時変化をグラフにプロツ
トし、液滴の幅が見かけ上一定になつた時間より
０秒時に外挿して、錠剤成型原料粉体の外挿接触
角を求めた。 未処理ベンゾグアナミン粒子、及び1.0％
（ｖ／ｖ）シリカゾル水溶液で処理したベンゾグ
アナミン粒子の外挿接触角値は、それぞれ43゜、
30゜であつた。この結果からベンゾグアナミン粒
子の表面はシリカゾル水溶液で処理することによ
つて、より親水性に改質されており、水系媒質中
での分散性での向上に寄与するものと考えられ
た。又、両原料粉体の錠剤上に落とした液滴は、
付着後、未処理のベンゾグアナミン粒子で12〜14
秒、1.0％（ｖ／ｖ）シリカゾル水溶液で処理し
たベンゾグアナミン粒子では６〜７秒で錠剤中に
浸透消失しており、そのぬれ特性は従来の有機高
分子材料を用いた担体粒子と比較し、大きく向上
しており、カラム充填用の担体としても有用であ
ることを示唆している。 実施例 ３ ベンゾグアナミン粒子及びシリカゾル水溶液で
処理したベンゾグアナミン粒子による免疫活性
物質の吸着 ベンゾグアナミン粒子0.2ｇを試験管にとり、
これにリン酸緩衝液（PH7.0、イオン強度Ｉ＝
0.7：以下PBSと略記する）で、4.0×10-2％
（ｗ／ｖ）に希釈した抗原（ヒトIg−Ｇ）溶液を
20ml加える。この試験管を２時間振盪後、分散液
を3000rpmで15分間遠心分離する。沈澱物は、10
倍容のPBSで２回洗浄したのち0.5〜1.0％（ｗ／
ｖ）の濃度で再分散させ、抗原吸着ベンゾグアナ
ミン粒子分散液とした。 シリカゾル水溶液で処理したベンゾグアナミン
粒子についても同様の操作を行い、抗原吸着シリ
カゾル処理ベンゾグアナミン粒子を調製した。 尚、それぞれのベンゾグアナミン粒子１ｇ当り
に換算された吸着抗原の量は反応後の分散媒中の
抗原量を280nｍにおける吸光度を測定して求め、
これを反応前の抗原量から差し引いて算出したと
ころ、ベンゾグアナミン粒子で4.4mg、シリカゾ
ル水溶液で処理したベンゾグアナミン粒子で11.0
mgとなり、シリカゾル水溶液で処理したベンゾグ
アナミン粒子は未処理ベンゾグアナミン粒子の約
３倍のヒトIg−Ｇを吸着していた。このことから
シリカゾルによるベンゾグアナミン粒子の表面改
質が、そのタンパク質吸着能を増大させることは
明らかである。 実施例 ４ ヒトIg−Ｇ感作したベンゾグアナミン粒子を用
いた凝集反応試験 第２表に示すとおりの被検液を用いて、実施例
２で得たヒトIg−Ｇ感作ベンゾグアナミン粒子及
びIg−Ｇ未感作ベンゾグアナミン粒子の特異凝集
能及び非特異凝集反応性の有無を、ガラス製凝集
反応板を用いて検定した。結果は第２表に示すと
おりである。尚判定ではベンゾグアナミン粒子分
散液：被検液：PBS＝１：１：１の容量比で混
合したのち３分後に、顕著な凝集反応が確認され
た場合を＋、凝集反応が鮮明でない場合を±、凝
集反応が見られなかつた場合を−として行つた。
非特異凝集反応の有無は0.1％（ｗ／ｖ）牛胎児
血清アルブミン（以下BSAと略記する）含有
PBSを用いて確認した。
子、シリカゾル処理を行つたベンゾグアナミン粒
子のそれぞれを約0.3ｇとり、デイスクプレス
（日立製作所製）を用いて200Kg／cm2の圧力下で、
20分間減圧圧縮打錠して得られた錠剤を用いて行
つた。該錠剤を、まず接触角精密測定装置（協和
化学株式会社製）の試料台に水平に静置し、マイ
クロメーター付注射器より一定量の精製水を錠剤
上に静かに滴下した。滴下後、直ちに液滴の示す
前進接触角の経時変化を適当な時間間隔で写真撮
影し、次にそのフイルムをスライドプロジエクタ
ーを用いて投影し液滴の幅、高さを求め錠剤上の
液滴の形状を球体の一部とみなし、次式より接触
角を求めた。 tanθ／２＝2h／ｒ θ：接触角 ｈ：液滴の高さ（mm） ｒ：液滴の幅（mm） 得られた接触角値の経時変化をグラフにプロツ
トし、液滴の幅が見かけ上一定になつた時間より
０秒時に外挿して、錠剤成型原料粉体の外挿接触
角を求めた。 未処理ベンゾグアナミン粒子、及び1.0％
（ｖ／ｖ）シリカゾル水溶液で処理したベンゾグ
アナミン粒子の外挿接触角値は、それぞれ43゜、
30゜であつた。この結果からベンゾグアナミン粒
子の表面はシリカゾル水溶液で処理することによ
つて、より親水性に改質されており、水系媒質中
での分散性での向上に寄与するものと考えられ
た。又、両原料粉体の錠剤上に落とした液滴は、
付着後、未処理のベンゾグアナミン粒子で12〜14
秒、1.0％（ｖ／ｖ）シリカゾル水溶液で処理し
たベンゾグアナミン粒子では６〜７秒で錠剤中に
浸透消失しており、そのぬれ特性は従来の有機高
分子材料を用いた担体粒子と比較し、大きく向上
しており、カラム充填用の担体としても有用であ
ることを示唆している。 実施例 ３ ベンゾグアナミン粒子及びシリカゾル水溶液で
処理したベンゾグアナミン粒子による免疫活性
物質の吸着 ベンゾグアナミン粒子0.2ｇを試験管にとり、
これにリン酸緩衝液（PH7.0、イオン強度Ｉ＝
0.7：以下PBSと略記する）で、4.0×10-2％
（ｗ／ｖ）に希釈した抗原（ヒトIg−Ｇ）溶液を
20ml加える。この試験管を２時間振盪後、分散液
を3000rpmで15分間遠心分離する。沈澱物は、10
倍容のPBSで２回洗浄したのち0.5〜1.0％（ｗ／
ｖ）の濃度で再分散させ、抗原吸着ベンゾグアナ
ミン粒子分散液とした。 シリカゾル水溶液で処理したベンゾグアナミン
粒子についても同様の操作を行い、抗原吸着シリ
カゾル処理ベンゾグアナミン粒子を調製した。 尚、それぞれのベンゾグアナミン粒子１ｇ当り
に換算された吸着抗原の量は反応後の分散媒中の
抗原量を280nｍにおける吸光度を測定して求め、
これを反応前の抗原量から差し引いて算出したと
ころ、ベンゾグアナミン粒子で4.4mg、シリカゾ
ル水溶液で処理したベンゾグアナミン粒子で11.0
mgとなり、シリカゾル水溶液で処理したベンゾグ
アナミン粒子は未処理ベンゾグアナミン粒子の約
３倍のヒトIg−Ｇを吸着していた。このことから
シリカゾルによるベンゾグアナミン粒子の表面改
質が、そのタンパク質吸着能を増大させることは
明らかである。 実施例 ４ ヒトIg−Ｇ感作したベンゾグアナミン粒子を用
いた凝集反応試験 第２表に示すとおりの被検液を用いて、実施例
２で得たヒトIg−Ｇ感作ベンゾグアナミン粒子及
びIg−Ｇ未感作ベンゾグアナミン粒子の特異凝集
能及び非特異凝集反応性の有無を、ガラス製凝集
反応板を用いて検定した。結果は第２表に示すと
おりである。尚判定ではベンゾグアナミン粒子分
散液：被検液：PBS＝１：１：１の容量比で混
合したのち３分後に、顕著な凝集反応が確認され
た場合を＋、凝集反応が鮮明でない場合を±、凝
集反応が見られなかつた場合を−として行つた。
非特異凝集反応の有無は0.1％（ｗ／ｖ）牛胎児
血清アルブミン（以下BSAと略記する）含有
PBSを用いて確認した。
【表】
【表】
＊２ 未処理のベンゾグアナミン
第２表からも明らかなようにヒトIg−Ｇ感作ベ
ンゾグアナミン粒子は、シリカゾル水溶液による
処理の有無にかかわらず、BSAに対する非特異
凝集反応を起こさなかつた。又、抗ヒトIg−Ｇウ
サギ血清に対しては、320倍の希釈血清において
もその凝集像は鮮明であり、これらのことからも
ベンゾグアナミン粒子、及びシリカゾル水溶液で
処理したベンゾグアナミン粒子の免疫活性物質吸
着用担体としての有用性が確認された。
第２表からも明らかなようにヒトIg−Ｇ感作ベ
ンゾグアナミン粒子は、シリカゾル水溶液による
処理の有無にかかわらず、BSAに対する非特異
凝集反応を起こさなかつた。又、抗ヒトIg−Ｇウ
サギ血清に対しては、320倍の希釈血清において
もその凝集像は鮮明であり、これらのことからも
ベンゾグアナミン粒子、及びシリカゾル水溶液で
処理したベンゾグアナミン粒子の免疫活性物質吸
着用担体としての有用性が確認された。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 担体粒子が硬化樹脂球状の微粒子のベンゾグ
アナミン粒子である免疫活性物質吸着用担体。 ２ 硬化樹脂球状の微粒子のベンゾグアナミン粒
子がシリカゾルで被覆されていることを特徴とす
る特許請求の範囲第１項に記載の免疫活性物質吸
着用担体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19767283A JPS6089754A (ja) | 1983-10-24 | 1983-10-24 | 免疫活性物質吸着用担体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19767283A JPS6089754A (ja) | 1983-10-24 | 1983-10-24 | 免疫活性物質吸着用担体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6089754A JPS6089754A (ja) | 1985-05-20 |
| JPH0361906B2 true JPH0361906B2 (ja) | 1991-09-24 |
Family
ID=16378411
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19767283A Granted JPS6089754A (ja) | 1983-10-24 | 1983-10-24 | 免疫活性物質吸着用担体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6089754A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0740030B2 (ja) * | 1987-09-21 | 1995-05-01 | 株式会社トクヤマ | 凝集反応用乾燥試薬 |
| TWI242580B (en) * | 2001-08-29 | 2005-11-01 | Nippon Catalytic Chem Ind | Amino resin composite particle and method of producing same |
-
1983
- 1983-10-24 JP JP19767283A patent/JPS6089754A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6089754A (ja) | 1985-05-20 |
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