JPH0380480B2 - - Google Patents
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- JPH0380480B2 JPH0380480B2 JP24790483A JP24790483A JPH0380480B2 JP H0380480 B2 JPH0380480 B2 JP H0380480B2 JP 24790483 A JP24790483 A JP 24790483A JP 24790483 A JP24790483 A JP 24790483A JP H0380480 B2 JPH0380480 B2 JP H0380480B2
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- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は酵素を用いた体液中特に血清あるいは
尿中のクレアチニン及びクレアチンの同時定量方
法並びにそのキツトに関する。 クレアチンは主として肝で合成されて血中に入
り、その大部分は筋肉に分布し、クレアチン・キ
ナーゼの作用により高エネルギー化合物であるク
レアチン・リン酸に合成されてエネルギー源とし
て重要な役割をはたしている、クレアチンは腎糸
球体から過されるが、尿細管で再吸収されるた
め、成人男子ではほとんど尿中に排泄されない。
血清クレアチン濃度は原発性筋疾患、筋萎縮、甲
状腺機能亢進症などで増加しクレアチン尿をきた
す。一方クレアチンの無水物であるクレアチニン
は筋肉ではクレアチンリン酸から不可逆的かつ非
酵素的に脱水されて生じ、代謝終産物として腎糸
球体を通過し尿細管で再吸収されることなく排泄
される。したがつて尿毒症、慢性腎炎、尿路閉塞
などの腎機能疾患の時には、クレアチニンを正常
に排泄できずに血清中にクレアチニンが増加して
くる。このように血清及び尿中のクレアチン及び
クレアチニン濃度を測定することにより、これら
の疾患の診断の重要な指標となる。その検体数は
年々増加の一途をたどつている。 従来よく用いられているクレアチニン定量法は
アルカリ性下でピクリン酸と反応させて発色する
ヤツフエ反応を用いたものである（Bonsnes and
Taussky，J.Biol.Chem.158 581（1945））。この
方法はクレアチニンに特異的な反応を示さないの
で、体液中の他の物質の影響を受けるため正確な
クレアチニン量を求め得ないし、ピクリン酸が反
応容器や分析機を汚染させ測定誤差の原因とな
る。また自動分析機に適応させた場合には他の測
定項目に影響を与えるなど、取扱い上、問題が多
かつた。 一方クレアチンは酸性で加熱してクレアチニン
に変え、生じたクレアチニンを上記のヤツフエ反
応で測定し酸性加熱前のクレアチニン量との差か
らクレアチニン量を推定する方法である、このた
めクレアチニン定量法は誤差を生じやすく操作が
繁雑な欠点がある。このような従来の欠点を克服
した、操作が簡単で正確なクレアチニン及びクレ
アチンの同時定量方法の開発が望まれていた。 このような実情を背景に迅速で高感度かつ正確
なクレアチニン及びクレアチンの同時定量方法を
確立すべく鋭意研究を重ねた結果、クレアチニ
ン・アミドヒドロラーゼ、クレアチン・アミジノ
ヒドロラーゼ、ザルコシン・オキシダーゼ、カタ
ラーゼの４酵素及び発色試薬を用いると所期の目
的が達成されることを見出し本発明に到達した。
本発明は、試料の１つのアリコートにクレアチニ
ン・アミドヒドロラーゼ、クレアチン・アミジノ
ヒドロラーゼ、ザルコシン・オキシダーゼの３酵
素を組合せて作用させて該試料中のクレアチンと
クレアチニンをホルムアルデヒド、過酸化水素及
びグリシンに変換し、上記試料の他のアリコート
にクレアチン・アミジノヒドロラーゼとザルコシ
ン・オキシダーゼの２酵素を組合せて作用させて
試料中のクレアチンをホルムアルデヒド、過酸化
水素及びグリシンに変換し、各々の場合に生じた
過酸化水素をカタラーゼの存在下にメタノールと
反応させてホルムアルデヒドに変換させることに
よりクレアチニン及びクレアチン各１分子当り２
分子のホルムアルデヒドを生成させ、各々生じた
ホルムアルデヒドに発色試薬を作用させ、生じた
発色体を測定して各々クレアチニンとクレアチン
の合計量及びクレアチンの量を定量し、該合計量
からクレアチンの量を差引くことによりクレアチ
ニンの量を算出することからなるクレアチニンと
クレアチンの同時定量方法である。本発明によれ
ば試料にクレアチニン・アミドヒドロラーゼ
〔EC3.5.2.10；以後CRNと略す〕、クレアチン・ア
ミジノヒドロラーゼ〔EC3.5.3.3；以後CRと略
す〕、ザルコシン・オキシダーゼ〔EC1.5.3.1；以
後SOXと略す〕の３酵素を組み合わせて作用さ
せ、試料中のクレアチニン及びクレアチンをホル
ムアルデヒドと過酸化水素とグリシンに変換し、
発生した過酸化水素をカタラーゼ〔EC1.11.1.6〕
の存在下メタノールと反応させてもう１分子のホ
ルムアルデヒドに変換する。これによりクレアチ
ニン及びクレアチン各１分子を各々２分子のホル
ムアルデヒドに変換させることになる。ここに生
じた２倍量のホルムアルデヒドを発色測定するこ
とになるので測定の感度及び精度は非常に高くな
り、クレアチニン及びクレアチンが迅速且つ正確
に測定し得る。 本発明の方法の測定原理を具体的に示せば下記
の通りである。 〔A〕 酵素反応 クレアチニン＋H2OCRN ―――→ クレアチン クレアチン＋H2OCR ――→ ザルコシン＋尿素 ザルコシン＋H2O＋O2SOX ―――→ ホルムアルデヒド＋グリシン＋過酸化水素 過酸化水素＋メタノールカタラーゼ ――――――→ ホルムアルデヒド＋2H2O 〔B〕 発色反応 ２ホルムアルデヒド＋発色試薬→発色体 す
なわち試料中のクレアチニンをCRNでクレア
チンに変え、生じたクレアチンをCRでザルコ
シンと尿素に変え、ザルコシンをSOXで過酸
化水素とグリシンに変え、生じた過酸化水素を
カタラーゼでの存在下メタノールと反応させて
ホルムアルデヒドと水に変える酵素反応と、酵
素反応により生じたホルムアルデヒドを発色試
薬と反応させ発色する発色反応とからなり、そ
して生じた発色体の可視部吸光度を測定して、
目的とするクレアチニンを定量することができ
る。上記酵素反応においてCRNを用いないで
酵素反応を進行させるとクレアチンの定量を行
なうことができる。また試料中に存在するクレ
アチニンの量を知りたいときには、上記酵素反
応においてCRNも用いて酵素反応を進行させ
て得たクレアチンとクレアチニンの合計量から
CRNを用いないで酵素反応を進行させて得た
クレアチンの量を差し引くことによつて得られ
る。 本発明に使用するCRNはいかなる起源のもの
でもよいがたとえばアルカリゲネス
（Alcaligenes）属、シユードモナス
（Pseudomonas）属、フラボバクテリウム
（Flavobacterium）属等に属する微生物が産生す
るCRNがある。 本発明に使用するCRはいかなる起源のもので
もよいがたとえばシユードモナス
（Pseudomonas）属、フラボバクテリウム
（Flavobacterium）属、等に属する微生物が産生
するCRがある。 本発明に使用するSOXはいかなる起源のもの
でもよいがたとえばシユードモナス
（Pseudomonas）属、コリネバクテリウム
（Corynebacterium）属、ミクロコツカス
（Micrococcus）属、等に属する微生物が産生す
るSOXがある。 本発明に使用するカタラーゼは動植物、微生物
等いかなる起源のカタラーゼでもよい。 本発明のアルデヒドを定量する発色試薬として
はアルデヒドと反応して定量的に発色するもので
あればいかなるものでもよいが１例として４−ア
ミノ−３−ヒドラジノ−1.2.4−トリアゾール
（以後AHMTと略す）なる化合物がある。この
化合物をアルカリ性下でホルムアルデヒドと反応
させた後、メタ過ヨウ素酸ナトリウムで酸化して
発色させる。 本発明の方法に従つてCRN、CR、SOX及びカ
タラーゼの４酵素を用いてクレアチニン及びクレ
アチンを定量すればヤツフエ反応を用いた方法に
比べ感度よく共存物質の影響を受けずに、特異性
高く正確に体液中のクレアチニン及びクレアチン
の定量が可能であり、臨床検査の診断分野におい
て極めて有意義である。 カタラーゼを用いて過酸化水素をホルムアルデ
ヒドに変換させているため、クレアチニン及びク
レアチン各１分子を各々２分子のホルムアルデヒ
ドに変換したことになり、ここで生じた２倍量の
ホルムアルデヒドを定量しているため、過酸化水
素を発色定量する方法に比べ高感度である。 更に本発明は液中のクレアチニン及びクレアチ
ンを同時定量するキツトを提供するものであり以
下これについて具体的に説明する。 本発明によるクレアチニン及びクレアチンの同
時定量キツトは酵素CRN、CR、SOX、カタラー
ゼの４酵素を含む試薬Ａ、CR、SOX、カタラー
ゼの３酵素を含む試薬Ｂ、及びSOX、カタラー
ゼの２酵素を含む試薬Ｃとホルムアルデヒド発色
試薬とからなる。 キツトにおける試薬Ａ、試薬Ｂ及び試薬Ｃは粉
末状及び液状のいずれの形状でもよく、粉末状の
場合には、酵素CRN、CR、SOX、カタラーゼの
４酵素の酵素作用を行なわしめるに最適なPH6.0
〜9.0を与えるメタノールを含有する緩衝液例え
ば４％メタノールを含有する50ｍＭリン酸緩衝液
（PH7.8）を酵素溶解液として用いる。 また液状の場合は酵素CRN、CR、SOX、カタ
ラーゼ等を含む試薬Ａ、試薬Ｂ、及び試薬Ｃを緩
衝液例えば４％メタノールを含有する50ｍＭリン
酸緩衝液で溶解してPH6.0〜9.0（好ましくはPH7.8）
に調整しておけばよい。 ホルムアルデヒド発色試薬はホルムアルデヒド
を定量的に発色させる試薬であればどのようなも
のでもよいが、１例として3N−水酸化カリウム
溶液、1.0％AHMT溶液、0.04％メタ過ヨウ素酸
ナトリウム溶液等調製したものを挙げることがで
きる。 なおキツトは冷暗所特に５℃以下に保存するこ
とが望ましい。 次に本発明を実施例により説明する。 実施例 試薬中のクレアチニン及びクレアチンを下記試
薬を用い下記方法により定量した。 １ 試薬 試薬Ａ CRN 280単位 CR 360単位 SOX 240単位 カタラーゼ 20000単位 メタノール 0.4ml50 ｍＭリン酸緩衝液（PH7.8） 10ml 試薬Ｂ CR 360単位 SOX 240単位 カタラーゼ 20000単位 メタノール 0.4ml 50ｍＭリン酸緩衝液（PH7.8） 10ml 試薬Ｃ SOX 240単位 カタラーゼ 20000単位 メタノール 0.4ml 50ｍＭリン酸緩衝液（PH7.8） 10ml 試薬Ｄ 3N−水酸化カリウム溶液 試薬Ｅ １％AHMT溶液 試薬Ｆ 0.04％メタ過ヨウ素酸ナトリウム溶液 ２ 測定法 試料及びクレアチニン標準液20μをとり、
以後、第１表に示すとうりに操作を行なつて、
波長550nｍで吸光後を測定し以下に示す計算
式によつて試料中のクレアチニン及びクレアチ
ン量を求める。
尿中のクレアチニン及びクレアチンの同時定量方
法並びにそのキツトに関する。 クレアチンは主として肝で合成されて血中に入
り、その大部分は筋肉に分布し、クレアチン・キ
ナーゼの作用により高エネルギー化合物であるク
レアチン・リン酸に合成されてエネルギー源とし
て重要な役割をはたしている、クレアチンは腎糸
球体から過されるが、尿細管で再吸収されるた
め、成人男子ではほとんど尿中に排泄されない。
血清クレアチン濃度は原発性筋疾患、筋萎縮、甲
状腺機能亢進症などで増加しクレアチン尿をきた
す。一方クレアチンの無水物であるクレアチニン
は筋肉ではクレアチンリン酸から不可逆的かつ非
酵素的に脱水されて生じ、代謝終産物として腎糸
球体を通過し尿細管で再吸収されることなく排泄
される。したがつて尿毒症、慢性腎炎、尿路閉塞
などの腎機能疾患の時には、クレアチニンを正常
に排泄できずに血清中にクレアチニンが増加して
くる。このように血清及び尿中のクレアチン及び
クレアチニン濃度を測定することにより、これら
の疾患の診断の重要な指標となる。その検体数は
年々増加の一途をたどつている。 従来よく用いられているクレアチニン定量法は
アルカリ性下でピクリン酸と反応させて発色する
ヤツフエ反応を用いたものである（Bonsnes and
Taussky，J.Biol.Chem.158 581（1945））。この
方法はクレアチニンに特異的な反応を示さないの
で、体液中の他の物質の影響を受けるため正確な
クレアチニン量を求め得ないし、ピクリン酸が反
応容器や分析機を汚染させ測定誤差の原因とな
る。また自動分析機に適応させた場合には他の測
定項目に影響を与えるなど、取扱い上、問題が多
かつた。 一方クレアチンは酸性で加熱してクレアチニン
に変え、生じたクレアチニンを上記のヤツフエ反
応で測定し酸性加熱前のクレアチニン量との差か
らクレアチニン量を推定する方法である、このた
めクレアチニン定量法は誤差を生じやすく操作が
繁雑な欠点がある。このような従来の欠点を克服
した、操作が簡単で正確なクレアチニン及びクレ
アチンの同時定量方法の開発が望まれていた。 このような実情を背景に迅速で高感度かつ正確
なクレアチニン及びクレアチンの同時定量方法を
確立すべく鋭意研究を重ねた結果、クレアチニ
ン・アミドヒドロラーゼ、クレアチン・アミジノ
ヒドロラーゼ、ザルコシン・オキシダーゼ、カタ
ラーゼの４酵素及び発色試薬を用いると所期の目
的が達成されることを見出し本発明に到達した。
本発明は、試料の１つのアリコートにクレアチニ
ン・アミドヒドロラーゼ、クレアチン・アミジノ
ヒドロラーゼ、ザルコシン・オキシダーゼの３酵
素を組合せて作用させて該試料中のクレアチンと
クレアチニンをホルムアルデヒド、過酸化水素及
びグリシンに変換し、上記試料の他のアリコート
にクレアチン・アミジノヒドロラーゼとザルコシ
ン・オキシダーゼの２酵素を組合せて作用させて
試料中のクレアチンをホルムアルデヒド、過酸化
水素及びグリシンに変換し、各々の場合に生じた
過酸化水素をカタラーゼの存在下にメタノールと
反応させてホルムアルデヒドに変換させることに
よりクレアチニン及びクレアチン各１分子当り２
分子のホルムアルデヒドを生成させ、各々生じた
ホルムアルデヒドに発色試薬を作用させ、生じた
発色体を測定して各々クレアチニンとクレアチン
の合計量及びクレアチンの量を定量し、該合計量
からクレアチンの量を差引くことによりクレアチ
ニンの量を算出することからなるクレアチニンと
クレアチンの同時定量方法である。本発明によれ
ば試料にクレアチニン・アミドヒドロラーゼ
〔EC3.5.2.10；以後CRNと略す〕、クレアチン・ア
ミジノヒドロラーゼ〔EC3.5.3.3；以後CRと略
す〕、ザルコシン・オキシダーゼ〔EC1.5.3.1；以
後SOXと略す〕の３酵素を組み合わせて作用さ
せ、試料中のクレアチニン及びクレアチンをホル
ムアルデヒドと過酸化水素とグリシンに変換し、
発生した過酸化水素をカタラーゼ〔EC1.11.1.6〕
の存在下メタノールと反応させてもう１分子のホ
ルムアルデヒドに変換する。これによりクレアチ
ニン及びクレアチン各１分子を各々２分子のホル
ムアルデヒドに変換させることになる。ここに生
じた２倍量のホルムアルデヒドを発色測定するこ
とになるので測定の感度及び精度は非常に高くな
り、クレアチニン及びクレアチンが迅速且つ正確
に測定し得る。 本発明の方法の測定原理を具体的に示せば下記
の通りである。 〔A〕 酵素反応 クレアチニン＋H2OCRN ―――→ クレアチン クレアチン＋H2OCR ――→ ザルコシン＋尿素 ザルコシン＋H2O＋O2SOX ―――→ ホルムアルデヒド＋グリシン＋過酸化水素 過酸化水素＋メタノールカタラーゼ ――――――→ ホルムアルデヒド＋2H2O 〔B〕 発色反応 ２ホルムアルデヒド＋発色試薬→発色体 す
なわち試料中のクレアチニンをCRNでクレア
チンに変え、生じたクレアチンをCRでザルコ
シンと尿素に変え、ザルコシンをSOXで過酸
化水素とグリシンに変え、生じた過酸化水素を
カタラーゼでの存在下メタノールと反応させて
ホルムアルデヒドと水に変える酵素反応と、酵
素反応により生じたホルムアルデヒドを発色試
薬と反応させ発色する発色反応とからなり、そ
して生じた発色体の可視部吸光度を測定して、
目的とするクレアチニンを定量することができ
る。上記酵素反応においてCRNを用いないで
酵素反応を進行させるとクレアチンの定量を行
なうことができる。また試料中に存在するクレ
アチニンの量を知りたいときには、上記酵素反
応においてCRNも用いて酵素反応を進行させ
て得たクレアチンとクレアチニンの合計量から
CRNを用いないで酵素反応を進行させて得た
クレアチンの量を差し引くことによつて得られ
る。 本発明に使用するCRNはいかなる起源のもの
でもよいがたとえばアルカリゲネス
（Alcaligenes）属、シユードモナス
（Pseudomonas）属、フラボバクテリウム
（Flavobacterium）属等に属する微生物が産生す
るCRNがある。 本発明に使用するCRはいかなる起源のもので
もよいがたとえばシユードモナス
（Pseudomonas）属、フラボバクテリウム
（Flavobacterium）属、等に属する微生物が産生
するCRがある。 本発明に使用するSOXはいかなる起源のもの
でもよいがたとえばシユードモナス
（Pseudomonas）属、コリネバクテリウム
（Corynebacterium）属、ミクロコツカス
（Micrococcus）属、等に属する微生物が産生す
るSOXがある。 本発明に使用するカタラーゼは動植物、微生物
等いかなる起源のカタラーゼでもよい。 本発明のアルデヒドを定量する発色試薬として
はアルデヒドと反応して定量的に発色するもので
あればいかなるものでもよいが１例として４−ア
ミノ−３−ヒドラジノ−1.2.4−トリアゾール
（以後AHMTと略す）なる化合物がある。この
化合物をアルカリ性下でホルムアルデヒドと反応
させた後、メタ過ヨウ素酸ナトリウムで酸化して
発色させる。 本発明の方法に従つてCRN、CR、SOX及びカ
タラーゼの４酵素を用いてクレアチニン及びクレ
アチンを定量すればヤツフエ反応を用いた方法に
比べ感度よく共存物質の影響を受けずに、特異性
高く正確に体液中のクレアチニン及びクレアチン
の定量が可能であり、臨床検査の診断分野におい
て極めて有意義である。 カタラーゼを用いて過酸化水素をホルムアルデ
ヒドに変換させているため、クレアチニン及びク
レアチン各１分子を各々２分子のホルムアルデヒ
ドに変換したことになり、ここで生じた２倍量の
ホルムアルデヒドを定量しているため、過酸化水
素を発色定量する方法に比べ高感度である。 更に本発明は液中のクレアチニン及びクレアチ
ンを同時定量するキツトを提供するものであり以
下これについて具体的に説明する。 本発明によるクレアチニン及びクレアチンの同
時定量キツトは酵素CRN、CR、SOX、カタラー
ゼの４酵素を含む試薬Ａ、CR、SOX、カタラー
ゼの３酵素を含む試薬Ｂ、及びSOX、カタラー
ゼの２酵素を含む試薬Ｃとホルムアルデヒド発色
試薬とからなる。 キツトにおける試薬Ａ、試薬Ｂ及び試薬Ｃは粉
末状及び液状のいずれの形状でもよく、粉末状の
場合には、酵素CRN、CR、SOX、カタラーゼの
４酵素の酵素作用を行なわしめるに最適なPH6.0
〜9.0を与えるメタノールを含有する緩衝液例え
ば４％メタノールを含有する50ｍＭリン酸緩衝液
（PH7.8）を酵素溶解液として用いる。 また液状の場合は酵素CRN、CR、SOX、カタ
ラーゼ等を含む試薬Ａ、試薬Ｂ、及び試薬Ｃを緩
衝液例えば４％メタノールを含有する50ｍＭリン
酸緩衝液で溶解してPH6.0〜9.0（好ましくはPH7.8）
に調整しておけばよい。 ホルムアルデヒド発色試薬はホルムアルデヒド
を定量的に発色させる試薬であればどのようなも
のでもよいが、１例として3N−水酸化カリウム
溶液、1.0％AHMT溶液、0.04％メタ過ヨウ素酸
ナトリウム溶液等調製したものを挙げることがで
きる。 なおキツトは冷暗所特に５℃以下に保存するこ
とが望ましい。 次に本発明を実施例により説明する。 実施例 試薬中のクレアチニン及びクレアチンを下記試
薬を用い下記方法により定量した。 １ 試薬 試薬Ａ CRN 280単位 CR 360単位 SOX 240単位 カタラーゼ 20000単位 メタノール 0.4ml50 ｍＭリン酸緩衝液（PH7.8） 10ml 試薬Ｂ CR 360単位 SOX 240単位 カタラーゼ 20000単位 メタノール 0.4ml 50ｍＭリン酸緩衝液（PH7.8） 10ml 試薬Ｃ SOX 240単位 カタラーゼ 20000単位 メタノール 0.4ml 50ｍＭリン酸緩衝液（PH7.8） 10ml 試薬Ｄ 3N−水酸化カリウム溶液 試薬Ｅ １％AHMT溶液 試薬Ｆ 0.04％メタ過ヨウ素酸ナトリウム溶液 ２ 測定法 試料及びクレアチニン標準液20μをとり、
以後、第１表に示すとうりに操作を行なつて、
波長550nｍで吸光後を測定し以下に示す計算
式によつて試料中のクレアチニン及びクレアチ
ン量を求める。
【表】
【表】
クレアチニンの検量線を第１図、クレアチン
の検量線を第２図に示す。 また管理血清を試料とした場合のクレアチニ
ンの測定値は第２表の通りであつた。
の検量線を第２図に示す。 また管理血清を試料とした場合のクレアチニ
ンの測定値は第２表の通りであつた。
【表】
上記試薬を用いて血清中のクレアチニン濃度
を求め従来のヤツフエ反応法と比較した。その
結果は第３表の通りであつた。
を求め従来のヤツフエ反応法と比較した。その
結果は第３表の通りであつた。
【表】
【表】
なおヤツフエ反応法は試料にピクリン酸およ
び水酸化ナトリウムの溶液を加え、活性メチレ
ンの反応により生じた紅色の化合物の吸光度を
測定する。標準液を同様にして操作して515n
ｍで比色し、試料中の濃度を求める方法であ
る。本発明方法は従来のヤツフエ法と比較して
特異的な酵素反応を用いるものであり正確な測
定を行なうことができ、また試料中のクレアチ
ニンとクレアチンを同時に定量できる。 以上詳細に説明した如く、本発明は液中のクレ
アチニン及びクレアチンを正確かつ迅速に同時定
量する方法及びそのキツトを提供するものであつ
て特に臨床医学における腎臓及び筋疾患の診断に
有効に用いることができるものである。
び水酸化ナトリウムの溶液を加え、活性メチレ
ンの反応により生じた紅色の化合物の吸光度を
測定する。標準液を同様にして操作して515n
ｍで比色し、試料中の濃度を求める方法であ
る。本発明方法は従来のヤツフエ法と比較して
特異的な酵素反応を用いるものであり正確な測
定を行なうことができ、また試料中のクレアチ
ニンとクレアチンを同時に定量できる。 以上詳細に説明した如く、本発明は液中のクレ
アチニン及びクレアチンを正確かつ迅速に同時定
量する方法及びそのキツトを提供するものであつ
て特に臨床医学における腎臓及び筋疾患の診断に
有効に用いることができるものである。
第１図はクレアチニンの検量線であり、第２図
はクレアチンの検量線である。
はクレアチンの検量線である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 試料の１つのアリコートにクレアチニン・ア
ミドヒドロラーゼ、クレアチン・アミジノヒドロ
ラーゼ、ザルコシン・オキシダーゼの３酵素を組
合せて作用させて該試料中のクレアチンとクレア
チニンをホルムアルデヒド、過酸化水素及びグリ
シンに変換し、上記試料の他のアリコートにクレ
アチン・アミジノヒドラーゼとザルコシン・オキ
シダーゼの２酵素を組合せて作用させて試料中の
クレアチンをホルムアルデヒド、過酸化水素及び
グリシンに変換し、各々の場合に生じた過酸化水
素をカタラーゼの存在下にメタノールと反応させ
てホルムアルデヒドに変換させることによりクレ
アチニン及びクレアチン各１分子当り２分子のホ
ルムアルデヒドを生成させ、各々生じたホルムア
ルデヒドに発色試薬を作用させ、生じた発色体を
測定して各々クレアチニンとクレアチンの合計量
及びクレアチンの量を定量し、該合計量からクレ
アチンの量を差引くことによりクレアチニンの量
を算出することからなるクレアチニンとクレアチ
ンの同時定量方法。 ２ 発色試薬が3N−水酸化カリウム溶液、１％
４−アミノ−３−ヒドラジノ−１，２，４−トリ
アゾール溶液および0.04％メタ過ヨウ素酸ナトリ
ウム溶液である特許請求の範囲第１項記載の方
法。 ３ クレアチニン・アミドヒドロラーゼ、クレア
チン・アミジノヒドロラーゼ、ザルコシン・オキ
シダーゼ及びカタラーゼの４酵素を含む試薬Ａ；
クレアチン・アミジノヒドロラーゼ、ザルコシ
ン・オキシダーゼ及びカタラーゼの３酵素を含む
試薬Ｂ；ザルコシン・オキシダーゼ及びカタラー
ゼの２酵素を含む試薬Ｃ及びホルムアルデヒド発
色試薬からなるクレアチニンとクレアチンの同時
定量用キツト。 ４ 発色試薬が3N−水酸化カリウム溶液、１％
４−アミノ−３−ヒドラジノ−１，２，４−トリ
アゾール溶液および0.04％メタ過ヨウ素酸ナトリ
ウム溶液である特許請求の範囲第３項記載のキツ
ト。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24790483A JPS60135865A (ja) | 1983-12-26 | 1983-12-26 | クレアチニン及びクレアチンの同時定量方法並びにそのキツト |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24790483A JPS60135865A (ja) | 1983-12-26 | 1983-12-26 | クレアチニン及びクレアチンの同時定量方法並びにそのキツト |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60135865A JPS60135865A (ja) | 1985-07-19 |
| JPH0380480B2 true JPH0380480B2 (ja) | 1991-12-25 |
Family
ID=17170285
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24790483A Granted JPS60135865A (ja) | 1983-12-26 | 1983-12-26 | クレアチニン及びクレアチンの同時定量方法並びにそのキツト |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60135865A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105555962A (zh) * | 2013-10-04 | 2016-05-04 | Csquare株式会社 | 利用肌氨酸代谢产物中的甲醛或过氧化物的前列腺癌诊断试纸，其制造方法及利用其的前列腺癌诊断方法 |
-
1983
- 1983-12-26 JP JP24790483A patent/JPS60135865A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60135865A (ja) | 1985-07-19 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |