JPH0414100B2 - - Google Patents
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- JPH0414100B2 JPH0414100B2 JP22619683A JP22619683A JPH0414100B2 JP H0414100 B2 JPH0414100 B2 JP H0414100B2 JP 22619683 A JP22619683 A JP 22619683A JP 22619683 A JP22619683 A JP 22619683A JP H0414100 B2 JPH0414100 B2 JP H0414100B2
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- Japan
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- fluoro
- threonine
- medium
- acid
- fluorine
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
本発明は新規なＬ−トレオ−２−アミノ−４−
フルオロ−３−ヒドロキシ酪酸およびその製造法
に関する。 微生物の生産する含フツ素生理活性物として従
来より知られているものは、抗生物質ヌクレオシ
デイン〔モートン（Morton）ら、、ジヤーナル・
オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエテイ（J.
Am Chem.Soc）第91巻、第1535頁（1969年）〕
のみであり、微生物によるフツ素含有アミノ酸の
生産は全く知られていなかつた。 本発明者らは、フツ素化合物含有の培地を使用
して各種の微生物の培養を試みたところ、ストレ
プトミセス属に属するストレプトミセス・カトレ
ヤが生理活性作用を有する新規なＬ−トレオ−２
−アミノ−４−フルオロ−３−ヒドロキシ酪酸
（以下γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンと呼称する）
を生産することを発明し、本発明の完成に至つ
た。 近年フツ素化合物の医薬品としての開発が活発
に進められているのは周知の通りであるが、本発
明のγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンは、代謝拮抗
作用及び抗菌作用を示し、生化学分野および化学
療法分野において有用な物質であるばかりでな
く、フツ素を含有する医薬品の合成研究において
出発原料として有用性が期待されている物質であ
る。 本発明は次の理化学的性質を有する新規なγ−
フルオロ−Ｌ−トレオニンに関する。 １ 外観：無色針状結晶（含水アルコールより晶
析） ２ 融点：181−182℃（分解） ３ 性状：両性物質（pka′8.25及び1.83） ４ 元素分析値（％）： 実測値：C35.19 H5.79 N10.08 計算値：C35.04 H5.88 N10.22 （C4H8NO3Fとして計算） ５ 分子量：137（フイールドデソープシヨンマス
スペクトロメトリー） ６ 分子式：C4H8NO3F ７ 比旋光度：〔α〕D 20−18゜（Ｃ＝0.5，H2O） ８ 溶解度：水、ジメチルホルムアミド、ジメチ
ルスルホキシドに易溶 メタノール、エタノール、酢酸エチル、酢酸
ブチル、メチルイソブチルケトン、ベンゼン、
アセトン、クロロホルム、ｎ−ヘキサン、エー
テルに不溶ないし難溶 ９ 呈色反応：シリカゲル薄層クロマトグラム上
でニンヒドリン反応陽性（橙黄色） 10 安定性：酸性及び中性で比較的安定、アルカ
リでやや不安定 11 シリカゲル薄層クロマトグラフイーのRf
値：0.49 吸着剤：メルク社製プレコーテツドシリカゲル
60F 254 展開溶媒：アセトニトリル：酢酸：水＝３：
１：１ 12 紫外線吸収スペクトル（H2O）：末端吸収の
みで特異的な紫外部吸収極大を示さない。 13 赤外線吸収スペクトル（臭化カリウム錠剤で
測定した主な極大吸収）： 3420、3090、1630、1480、1420、1350、1320、
1245、1165、1125、1075、1055、1005、985、
930、880、770、720、695（cm-1）（第１図） 14 1H−NMRスペクトル： 重水中内部基準DSSを使用して測定（90MHz） 4.72ppm（2H、dd、JH-H、４Hz、JH-F、46Hz） 4.39ppm（1H、dq、JH-H、４及び５Hz、JH-F、
25Hz） 3.9ppm（1H、ｄ、JH-H、５Hz）（第２図） 15 13C−NMRスペクトル：
フルオロ−３−ヒドロキシ酪酸およびその製造法
に関する。 微生物の生産する含フツ素生理活性物として従
来より知られているものは、抗生物質ヌクレオシ
デイン〔モートン（Morton）ら、、ジヤーナル・
オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエテイ（J.
Am Chem.Soc）第91巻、第1535頁（1969年）〕
のみであり、微生物によるフツ素含有アミノ酸の
生産は全く知られていなかつた。 本発明者らは、フツ素化合物含有の培地を使用
して各種の微生物の培養を試みたところ、ストレ
プトミセス属に属するストレプトミセス・カトレ
ヤが生理活性作用を有する新規なＬ−トレオ−２
−アミノ−４−フルオロ−３−ヒドロキシ酪酸
（以下γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンと呼称する）
を生産することを発明し、本発明の完成に至つ
た。 近年フツ素化合物の医薬品としての開発が活発
に進められているのは周知の通りであるが、本発
明のγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンは、代謝拮抗
作用及び抗菌作用を示し、生化学分野および化学
療法分野において有用な物質であるばかりでな
く、フツ素を含有する医薬品の合成研究において
出発原料として有用性が期待されている物質であ
る。 本発明は次の理化学的性質を有する新規なγ−
フルオロ−Ｌ−トレオニンに関する。 １ 外観：無色針状結晶（含水アルコールより晶
析） ２ 融点：181−182℃（分解） ３ 性状：両性物質（pka′8.25及び1.83） ４ 元素分析値（％）： 実測値：C35.19 H5.79 N10.08 計算値：C35.04 H5.88 N10.22 （C4H8NO3Fとして計算） ５ 分子量：137（フイールドデソープシヨンマス
スペクトロメトリー） ６ 分子式：C4H8NO3F ７ 比旋光度：〔α〕D 20−18゜（Ｃ＝0.5，H2O） ８ 溶解度：水、ジメチルホルムアミド、ジメチ
ルスルホキシドに易溶 メタノール、エタノール、酢酸エチル、酢酸
ブチル、メチルイソブチルケトン、ベンゼン、
アセトン、クロロホルム、ｎ−ヘキサン、エー
テルに不溶ないし難溶 ９ 呈色反応：シリカゲル薄層クロマトグラム上
でニンヒドリン反応陽性（橙黄色） 10 安定性：酸性及び中性で比較的安定、アルカ
リでやや不安定 11 シリカゲル薄層クロマトグラフイーのRf
値：0.49 吸着剤：メルク社製プレコーテツドシリカゲル
60F 254 展開溶媒：アセトニトリル：酢酸：水＝３：
１：１ 12 紫外線吸収スペクトル（H2O）：末端吸収の
みで特異的な紫外部吸収極大を示さない。 13 赤外線吸収スペクトル（臭化カリウム錠剤で
測定した主な極大吸収）： 3420、3090、1630、1480、1420、1350、1320、
1245、1165、1125、1075、1055、1005、985、
930、880、770、720、695（cm-1）（第１図） 14 1H−NMRスペクトル： 重水中内部基準DSSを使用して測定（90MHz） 4.72ppm（2H、dd、JH-H、４Hz、JH-F、46Hz） 4.39ppm（1H、dq、JH-H、４及び５Hz、JH-F、
25Hz） 3.9ppm（1H、ｄ、JH-H、５Hz）（第２図） 15 13C−NMRスペクトル：
【表】
上記の理化学的性状より本発明のＬ−トレオ−
２−アミノ−４−フルオロ−３−ヒドロキシ酪酸
の構造は次の通りである。 本発明は、ストレプトミセス属に属するγ−フ
ルオロ−Ｌ−トレオニン生産菌をフツ素含有培地
に培養し、その培養液からγ−フルオロ−Ｌ−ト
レオニンを採取し、要すればその塩類に変換する
ことを特徴とするγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン
またはその塩類の製造法に関する。 本発明に使用されるストレプトミセス属に属す
るγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン生産菌の例とし
ては、ストレプトミセス・カトレヤが挙げられ
る。ストレプトミセス・カトレヤは、新規抗生物
質チエナマイシン及びＮ−アセチルエナマイシン
を発酵時に同時に生産する。その製造法に関して
はケーハンらの特開昭51−73191及び特開昭52−
65294にそれぞれ詳しく記載されている。 土壌試料から分離されたγ−フルオロ−Ｌ−ト
レオニン生産菌は広範囲な分類学的研究によつて
ストレプトミセス・カトレヤと命名され、その標
準株はMA−4297と称され、ノーザン・ユテイラ
イゼーシヨン・リサーチ・アンド・デベロツプメ
ント・デビジヨン、ユー・エス・デパートメン
ト・オブ・アグリカルチヤ、ペオリア、イリノイ
61604ユー・エス・エー（Northern Utilization
Research and Deve−lopment Division、U.S.
Department of Agri−culture、Peoria、
Illinois 61604U.S.A.）にNRRL8057として、又
微生物工業技術研究所に微工研菌寄第3309号とし
て、それぞれ寄託されている。 同菌株の菌学的諸性状は下記のとおりである。 形態学的特性 担胞子体は気菌糸上に側分枝及び末端分枝とし
て見出されるコンパクト・スパイラルである。胞
子は楕円状ないし円筒状、サイズ0.9μ×1.2μであ
つて、10以上の鎖をなし、胞子の表面は平滑であ
る。 培養特性 トマトペースト−オートミール寒天： 栄養生長物−裏面−黄褐色、平坦、広がつてい
る。 気菌糸−白色と混つた薄紫色（10ｇｃ） 可溶性色素−なし。 ツアペツク・ドツクス寒天（シユクロ−スナイト
レート寒天）： 栄養生長物−無色、平坦、広がつている。 気菌糸−まばら、ピンク色がかつた白色。 可溶性色素−なし。 卵アルブミン寒天： 栄養生長物−灰色がかつたないし薄紫色の色相を
もつた黄褐色、平坦、広がつている。 気菌糸−より明るい色相の薄紫色及び若干の白色
と混つた薄紫色（10ｇｃ）。 可溶性色素−なし。 グリセロールアスパラギン寒天： 栄養生長物−裏面−灰色ないしピンク色の色相を
もつた黄褐色、平坦、広がつている。 気菌糸−若干の白色と混つた薄紫色（10ｇｃ） 可溶性色素−なし。 酵母エキス−グルコース＋塩寒天： 栄養生長物−灰色がかつたピンク色の色相を有す
る黄褐色。 気菌糸−ピンク色がかつた白色と混つた薄紫色
（10ｇｃ）。 可溶性色素−なし。 酵母エキス−麦芽エキス寒天： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−ピンク色がかつた白色と混つた薄紫色
（10ｇｃ）。 可溶性色素−なし。 ペプトン−鉄−酵母エキス寒天： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−培地の僅かな褐色化。 メラニン−陰性。 H2S生成−陰性。 栄養寒天： 栄養生長物−明るい黄褐色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 栄養澱粉寒天： 栄養生長物−クリーム色ないし黄褐色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 澱粉の加水分解−適度。 栄養ゼラチン寒天： 栄養生長物−クリーム色に着色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 ゼラチンの液化−適度。 ゼラチンスタブ： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 ゼラチンの液化−適度。 馬鈴薯プラグ： 栄養生長物−適度、黄褐色。 気菌糸−まばら、灰色がかつたないしピンク色が
かつた〔−〕白色。 可溶性色素−なし。 レフレル血清培地： 栄養生長物−クリーム色に着色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 液化−なし。 脱脂ミルク寒天： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−まばら、白色がかつている。 可溶性色素−培地の僅かな褐色化。 カゼインの加水分解−陽性。 リトマス・ミルク： 栄養生長物−黄褐色なしし褐色。 気菌糸−なし。 色−可溶性色素なし、リトマス指示薬は青色にな
る。 凝固及び（または）ペプトン化−部分的ペプト
化、アルカリ性となる。 脱脂ミルク： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 凝固及び（または）ペプトン化−部分的ペプトン
化、アルカリ性となる。 チロシン寒天： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−薄紫色（10ｇｃ）及び白色の混合物。 可溶性色素−なし。 チロシンの分解−陽性。 上述した判断表示は別に説明しない限り28℃で
３週間培養した後にとつたものである。これらの
研究に使用した培地のPHは、大体中性すなわちPH
6.8〜7.2である。説明に使用した色の表示は、イ
リノイス州シカゴのコンテイナー・コーポレーシ
ヨン・オブ・アメリカのカラー・ハーモニー・マ
ニユアル第４版（1958年）の定義によるものであ
る。 又、ストレプトミセス・カトレヤの種々な炭水
化物を同化するまたは利用する能力について試験
した。この目的のために微生物を炭水化物１％を
含有する基礎合成培地（プリドハム及びゴツトリ
エブ）上で28℃で３週間生長せしめた。研究に使
用した培地のPHは大体中性（6.8〜7.2）である。
第１表はストレプトミセス・カトレヤによるこれ
らの炭水化物源の利用を示す。＋は良好な生長±
は貧弱な生長そして−は特定の炭水化物上で生長
しないことを示す。
２−アミノ−４−フルオロ−３−ヒドロキシ酪酸
の構造は次の通りである。 本発明は、ストレプトミセス属に属するγ−フ
ルオロ−Ｌ−トレオニン生産菌をフツ素含有培地
に培養し、その培養液からγ−フルオロ−Ｌ−ト
レオニンを採取し、要すればその塩類に変換する
ことを特徴とするγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン
またはその塩類の製造法に関する。 本発明に使用されるストレプトミセス属に属す
るγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン生産菌の例とし
ては、ストレプトミセス・カトレヤが挙げられ
る。ストレプトミセス・カトレヤは、新規抗生物
質チエナマイシン及びＮ−アセチルエナマイシン
を発酵時に同時に生産する。その製造法に関して
はケーハンらの特開昭51−73191及び特開昭52−
65294にそれぞれ詳しく記載されている。 土壌試料から分離されたγ−フルオロ−Ｌ−ト
レオニン生産菌は広範囲な分類学的研究によつて
ストレプトミセス・カトレヤと命名され、その標
準株はMA−4297と称され、ノーザン・ユテイラ
イゼーシヨン・リサーチ・アンド・デベロツプメ
ント・デビジヨン、ユー・エス・デパートメン
ト・オブ・アグリカルチヤ、ペオリア、イリノイ
61604ユー・エス・エー（Northern Utilization
Research and Deve−lopment Division、U.S.
Department of Agri−culture、Peoria、
Illinois 61604U.S.A.）にNRRL8057として、又
微生物工業技術研究所に微工研菌寄第3309号とし
て、それぞれ寄託されている。 同菌株の菌学的諸性状は下記のとおりである。 形態学的特性 担胞子体は気菌糸上に側分枝及び末端分枝とし
て見出されるコンパクト・スパイラルである。胞
子は楕円状ないし円筒状、サイズ0.9μ×1.2μであ
つて、10以上の鎖をなし、胞子の表面は平滑であ
る。 培養特性 トマトペースト−オートミール寒天： 栄養生長物−裏面−黄褐色、平坦、広がつてい
る。 気菌糸−白色と混つた薄紫色（10ｇｃ） 可溶性色素−なし。 ツアペツク・ドツクス寒天（シユクロ−スナイト
レート寒天）： 栄養生長物−無色、平坦、広がつている。 気菌糸−まばら、ピンク色がかつた白色。 可溶性色素−なし。 卵アルブミン寒天： 栄養生長物−灰色がかつたないし薄紫色の色相を
もつた黄褐色、平坦、広がつている。 気菌糸−より明るい色相の薄紫色及び若干の白色
と混つた薄紫色（10ｇｃ）。 可溶性色素−なし。 グリセロールアスパラギン寒天： 栄養生長物−裏面−灰色ないしピンク色の色相を
もつた黄褐色、平坦、広がつている。 気菌糸−若干の白色と混つた薄紫色（10ｇｃ） 可溶性色素−なし。 酵母エキス−グルコース＋塩寒天： 栄養生長物−灰色がかつたピンク色の色相を有す
る黄褐色。 気菌糸−ピンク色がかつた白色と混つた薄紫色
（10ｇｃ）。 可溶性色素−なし。 酵母エキス−麦芽エキス寒天： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−ピンク色がかつた白色と混つた薄紫色
（10ｇｃ）。 可溶性色素−なし。 ペプトン−鉄−酵母エキス寒天： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−培地の僅かな褐色化。 メラニン−陰性。 H2S生成−陰性。 栄養寒天： 栄養生長物−明るい黄褐色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 栄養澱粉寒天： 栄養生長物−クリーム色ないし黄褐色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 澱粉の加水分解−適度。 栄養ゼラチン寒天： 栄養生長物−クリーム色に着色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 ゼラチンの液化−適度。 ゼラチンスタブ： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 ゼラチンの液化−適度。 馬鈴薯プラグ： 栄養生長物−適度、黄褐色。 気菌糸−まばら、灰色がかつたないしピンク色が
かつた〔−〕白色。 可溶性色素−なし。 レフレル血清培地： 栄養生長物−クリーム色に着色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 液化−なし。 脱脂ミルク寒天： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−まばら、白色がかつている。 可溶性色素−培地の僅かな褐色化。 カゼインの加水分解−陽性。 リトマス・ミルク： 栄養生長物−黄褐色なしし褐色。 気菌糸−なし。 色−可溶性色素なし、リトマス指示薬は青色にな
る。 凝固及び（または）ペプトン化−部分的ペプト
化、アルカリ性となる。 脱脂ミルク： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−なし。 可溶性色素−なし。 凝固及び（または）ペプトン化−部分的ペプトン
化、アルカリ性となる。 チロシン寒天： 栄養生長物−黄褐色。 気菌糸−薄紫色（10ｇｃ）及び白色の混合物。 可溶性色素−なし。 チロシンの分解−陽性。 上述した判断表示は別に説明しない限り28℃で
３週間培養した後にとつたものである。これらの
研究に使用した培地のPHは、大体中性すなわちPH
6.8〜7.2である。説明に使用した色の表示は、イ
リノイス州シカゴのコンテイナー・コーポレーシ
ヨン・オブ・アメリカのカラー・ハーモニー・マ
ニユアル第４版（1958年）の定義によるものであ
る。 又、ストレプトミセス・カトレヤの種々な炭水
化物を同化するまたは利用する能力について試験
した。この目的のために微生物を炭水化物１％を
含有する基礎合成培地（プリドハム及びゴツトリ
エブ）上で28℃で３週間生長せしめた。研究に使
用した培地のPHは大体中性（6.8〜7.2）である。
第１表はストレプトミセス・カトレヤによるこれ
らの炭水化物源の利用を示す。＋は良好な生長±
は貧弱な生長そして−は特定の炭水化物上で生長
しないことを示す。
【表】
温度の変化による生長量、酸素要求および微生
物によるナイトレートの効果は次の通りである。 温度範囲（酵母エキス−グルコーズ＋塩寒天）： 28℃−良好 37℃−適度 50℃−生長なし 酸素要求（酵母エキス−グルコーズ＋塩寒天中の
穿刺培養）：好気性 ナイトレート還元−陽性 以上γ−フルオロ−Ｌ−トレオニン生産菌につ
いて説明したが放線菌の諸性質は一定したもので
はなく、自然にあるいは通常行われる紫外線照
射、変異誘起剤（例、Ｎ−メチル−N′−ニトロ
−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホ
ネートなど）および細胞融合法などを用いる人工
的変異手段で変異することは、周知の通りであ
り、本発明で使用し得る菌株は、ストレプトミセ
ス属に属するγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンを生
産するすべての菌株を包含するものである。 本発明に使用する生産培地に含有するフツ素化
合物としては、例えばフツ化ナトリウム、フツ化
カリウム、フツ化カルシウム、フツ化マグネシウ
ム、フツ化アンモニウム、フツ化バリウムなど培
地中で溶解しフツ素イオンを与える無機フツ素化
合物または例えばモノフルオロ酢酸、ｍ−フルオ
ロ−DL−フエニルアラニン、ｐ−フルオロ−DL
−フエニールアラニン、４−フルオログルタミン
酸などの有機フツ素化合物などが挙げられ、スト
レプトミセス属に属するγ−フルオロ−Ｌ−トレ
オニン生産菌が利用し得るフツ素含有化合物であ
ればよく、これらのフツ素化合物は単独あるいは
組合せて使用される。さらに各種フツ素化合物を
含有する市販の有機窒素源（例えばキシダ化学製
大豆カゼインなども使用することが出来る。培地
中のフツ素化合物の濃度は使用微生物や、培地条
件〔−〕あるいは使用するフツ素化合物の種類を
考慮して決定すべきであるが通常0.001〜0.5％
（Ｗ／Ｖ）の濃度が適当である。添加時期はγ−
フルオロ−Ｌ−トレオニンの生産が継続している
限り有効であり、培養初発からであつても、培養
開始後の適宜の時期であつてもよい。 本発明に使用の培地には上記フツ素化合物の他
に、放線菌の栄養源として公知のものが利用さ
れ、例えば炭素源としてはグルコース、グリセリ
ン、庶糖、コハク酸、酢酸などが、窒素源として
はペプトン、肉エキス、酵母、綿実粕、コーンス
チープリカー、カゼイン、大豆粕、アミノ酸（例
えばグルタミン酸、メチオニンなど）、硝酸塩
（例えば硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウムな
ど）、アンモニウム塩（例えば塩化アンモニウム、
リン酸アンモニウムなど）などが、又無機塩とし
てはマグネシウム、コバルト、カリウム、ナトリ
ウム、カルシウム〔−〕などの硫酸塩、炭酸塩、
燐酸塩、塩化物などがそれぞれ必要に応じ適宜使
用される。 培地は通常液体培地が好ましく培養は好気条件
下で振とう培養あるいは通気撹拌培養が好まし
い。培地の液性はPH６〜８、培養温度は20〜40℃
さらに好ましくは24℃〜32℃、培養時間は２〜８
日間行うのが適当である。液体培養において発泡
があるときは、シリコーン油、植物油、界面活性
剤（例、ポリプロプレングリコールＰ−2000、ア
デカノールLG−126など）などの消泡剤が適宜使
用される。 γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンの定量は通常の
抗菌活性物質の測定に用いられる微生物検定法が
応用される。即ち検定菌としては例えばシユード
モナス・エルギノーサMB2835を用い、検定培地
としては、Ｌ−トレオニン及びＬ−セリンを含有
しない合成培地、例えばデービス最小寒天培地
〔デービスら、ジヤーナル・オブ・バクテリオロ
ジイ（J.Bacteriol）第60巻第17頁（1950年）〕を
用い、γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンを標準物質
とするカツプ法、ペーパーデイスク法などの生物
検定法が使用できる。本発明におけるγ−フルオ
ロ−Ｌ−トレオニン生産菌の一具体例としてあげ
たストレプトミセス・カトレヤは発酵によつて抗
生物質チエナマイシン及びＮ−アセチルエナマイ
シンをも同時に培地に蓄積する。これらの抗生物
質もまた上記定量法において検定菌に対して生育
阻止作用を持つている。しかしながら、チエナマ
イシン及びＮ−アセチルチエナマイシンを含有す
るγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン発酵ブロスの液
性をPH３にして50℃において30分間処理すること
によつてγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン自体は何
ら変化を受けないがチエナマイシン及びＮ−アセ
チルチエナマイシンは上記定量法に影響を示さな
い程度迄、実質的に分解されてしまうことが判明
した。この事実は上記検定培地にＬ−トレオニン
を0.1％（Ｗ／Ｖ）添加して検定を実施した場合、
何ら阻止円が観察されないことによつても証明さ
れる。上記前処理を行えばチエナマイシン及びＮ
−アセチルチエナマイシンをも含有するサンプル
であつても、上記定量法によつてγ−フルオロ−
Ｌ−トレオニンのみを測定することができる。 培養終了後培養液よりγ−フルオロ−Ｌ−トレ
オニンを採取するには、その理化学的性状を利用
することにより水溶性両性醗酵生産物を採取する
場合に通常用いられる方法に準じて行うことがで
きる。 γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンは培養液の液体
部分に主として存在する。培養終了後菌体その他
の固型部分を珪藻土を過助剤とする過操作あ
るいは遠心分離によつて除去し、その液あるい
は上澄液中に存在するγ−フルオロ−Ｌ−トレオ
ニンを抽出精製する。 γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンはその両性の性
質を利用して培養液または上澄液を陽イオン交
換樹脂あるいは陰イオン交換樹脂に吸着させた
後、適当な酸、塩基、塩〔−〕あるいはそれらの
組み合せからなる緩衝液で溶離される。又、イオ
ン交換樹脂にγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンが吸
着しないようなイオン交換樹脂の状態でγ−フル
オロ−Ｌ−トレオニンの溶液を処理することによ
り夾雑物を除去することもできる。 イオン交換樹脂の代りにイオン交換セルロー
ス、イオン交換セフアデツクス、イオン交換膜、
イオン交換液及びその他のイオン交換体も勿論使
用することができる。 また、これらイオン交換体による吸脱着処理の
前または後でγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン含有
にメタノール等の低級アルコール類またはアセト
ン等を加えることにより生ずる夾雑物の沈澱を除
去したり、またγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンを
沈澱化させ取することにより精製純度を上げる
ことができる。 更に培養液またはイオン交換体処理液または
γ−フルオロ−Ｌ−トレオニン溶液を活性炭ある
いは多孔性吸着樹脂例えばアンバーライトXAD
−２、XAD−４、XAD−７（ロームアンドハー
ス社製）またはダイヤイオンHP−10、HP−20、
HP−50（三菱化成社製）等で処理することによ
り吸着性の夾雑物を除去して精製純度を上げるこ
とができる。 またγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンは水によく
溶けるので実質的に水に混和しない有機溶媒、例
えばエーテル、クロロホルム、ベンゼン、酢酸エ
チル、酢酸ブチル、ブタノール、メチルエチルケ
トン、メチルイソブチルケトンなどに抽出されな
いことから、これらの溶媒による処理は夾雑物の
除去に必要ならば利用できる。 またγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンはその塩基
性及び酸性の性状に基いて水に難溶な塩として、
常法により沈澱させて採取するともできる。 該塩としては、アミノ酸の通常の塩を挙げるこ
とができ、例えばナトリウム、カリウム、カルシ
ウム、マグネシウム、アルミニウムなどの金属
塩、Ｎ、N′−ジベンジルエチレンジアミン、プ
ロカインなどの有機アミン塩、塩酸、硝酸、硫酸
などの無機酸塩、ギ酸、酢酸、乳酸などの有機酸
塩、メタンスルホン酸、イセチオン酸、ｐ−トル
エンスルホン酸などのスルホン酸塩、グルタミン
酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニンなどの
アミン酸塩などが挙げられる。 更に、純度の高いγ−フルオロ−Ｌ−トレオニ
ンを得る為にはシリカゲル、アルミナ、活性炭等
を担体とする吸着カラムクロマトグラフイーある
いはセフアデクツクス（フアルマシア社製）また
はバイオゲル（バイオラツド社製）等を用いるゲ
ル過が行われる。 γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンは水から結晶化
することが出来るが水に非常に良く溶け、アルコ
ールに殆んど溶けないことから小量の水に溶かし
アルコールを添加することにより収率よくγ−フ
ルオロ−Ｌ−トレオニンの結晶を得ることができ
る。 このようにして得られたγ−フルオロ−Ｌ−ト
レオニンの理化学的性状は前述の通りである。 次に、新規物質γ−フルオロ−Ｌ−トレオニン
の生物学的性状について述べる。各種検定菌に対
するin vitroでのγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン
のMICを第２表に示した。
物によるナイトレートの効果は次の通りである。 温度範囲（酵母エキス−グルコーズ＋塩寒天）： 28℃−良好 37℃−適度 50℃−生長なし 酸素要求（酵母エキス−グルコーズ＋塩寒天中の
穿刺培養）：好気性 ナイトレート還元−陽性 以上γ−フルオロ−Ｌ−トレオニン生産菌につ
いて説明したが放線菌の諸性質は一定したもので
はなく、自然にあるいは通常行われる紫外線照
射、変異誘起剤（例、Ｎ−メチル−N′−ニトロ
−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホ
ネートなど）および細胞融合法などを用いる人工
的変異手段で変異することは、周知の通りであ
り、本発明で使用し得る菌株は、ストレプトミセ
ス属に属するγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンを生
産するすべての菌株を包含するものである。 本発明に使用する生産培地に含有するフツ素化
合物としては、例えばフツ化ナトリウム、フツ化
カリウム、フツ化カルシウム、フツ化マグネシウ
ム、フツ化アンモニウム、フツ化バリウムなど培
地中で溶解しフツ素イオンを与える無機フツ素化
合物または例えばモノフルオロ酢酸、ｍ−フルオ
ロ−DL−フエニルアラニン、ｐ−フルオロ−DL
−フエニールアラニン、４−フルオログルタミン
酸などの有機フツ素化合物などが挙げられ、スト
レプトミセス属に属するγ−フルオロ−Ｌ−トレ
オニン生産菌が利用し得るフツ素含有化合物であ
ればよく、これらのフツ素化合物は単独あるいは
組合せて使用される。さらに各種フツ素化合物を
含有する市販の有機窒素源（例えばキシダ化学製
大豆カゼインなども使用することが出来る。培地
中のフツ素化合物の濃度は使用微生物や、培地条
件〔−〕あるいは使用するフツ素化合物の種類を
考慮して決定すべきであるが通常0.001〜0.5％
（Ｗ／Ｖ）の濃度が適当である。添加時期はγ−
フルオロ−Ｌ−トレオニンの生産が継続している
限り有効であり、培養初発からであつても、培養
開始後の適宜の時期であつてもよい。 本発明に使用の培地には上記フツ素化合物の他
に、放線菌の栄養源として公知のものが利用さ
れ、例えば炭素源としてはグルコース、グリセリ
ン、庶糖、コハク酸、酢酸などが、窒素源として
はペプトン、肉エキス、酵母、綿実粕、コーンス
チープリカー、カゼイン、大豆粕、アミノ酸（例
えばグルタミン酸、メチオニンなど）、硝酸塩
（例えば硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウムな
ど）、アンモニウム塩（例えば塩化アンモニウム、
リン酸アンモニウムなど）などが、又無機塩とし
てはマグネシウム、コバルト、カリウム、ナトリ
ウム、カルシウム〔−〕などの硫酸塩、炭酸塩、
燐酸塩、塩化物などがそれぞれ必要に応じ適宜使
用される。 培地は通常液体培地が好ましく培養は好気条件
下で振とう培養あるいは通気撹拌培養が好まし
い。培地の液性はPH６〜８、培養温度は20〜40℃
さらに好ましくは24℃〜32℃、培養時間は２〜８
日間行うのが適当である。液体培養において発泡
があるときは、シリコーン油、植物油、界面活性
剤（例、ポリプロプレングリコールＰ−2000、ア
デカノールLG−126など）などの消泡剤が適宜使
用される。 γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンの定量は通常の
抗菌活性物質の測定に用いられる微生物検定法が
応用される。即ち検定菌としては例えばシユード
モナス・エルギノーサMB2835を用い、検定培地
としては、Ｌ−トレオニン及びＬ−セリンを含有
しない合成培地、例えばデービス最小寒天培地
〔デービスら、ジヤーナル・オブ・バクテリオロ
ジイ（J.Bacteriol）第60巻第17頁（1950年）〕を
用い、γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンを標準物質
とするカツプ法、ペーパーデイスク法などの生物
検定法が使用できる。本発明におけるγ−フルオ
ロ−Ｌ−トレオニン生産菌の一具体例としてあげ
たストレプトミセス・カトレヤは発酵によつて抗
生物質チエナマイシン及びＮ−アセチルエナマイ
シンをも同時に培地に蓄積する。これらの抗生物
質もまた上記定量法において検定菌に対して生育
阻止作用を持つている。しかしながら、チエナマ
イシン及びＮ−アセチルチエナマイシンを含有す
るγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン発酵ブロスの液
性をPH３にして50℃において30分間処理すること
によつてγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン自体は何
ら変化を受けないがチエナマイシン及びＮ−アセ
チルチエナマイシンは上記定量法に影響を示さな
い程度迄、実質的に分解されてしまうことが判明
した。この事実は上記検定培地にＬ−トレオニン
を0.1％（Ｗ／Ｖ）添加して検定を実施した場合、
何ら阻止円が観察されないことによつても証明さ
れる。上記前処理を行えばチエナマイシン及びＮ
−アセチルチエナマイシンをも含有するサンプル
であつても、上記定量法によつてγ−フルオロ−
Ｌ−トレオニンのみを測定することができる。 培養終了後培養液よりγ−フルオロ−Ｌ−トレ
オニンを採取するには、その理化学的性状を利用
することにより水溶性両性醗酵生産物を採取する
場合に通常用いられる方法に準じて行うことがで
きる。 γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンは培養液の液体
部分に主として存在する。培養終了後菌体その他
の固型部分を珪藻土を過助剤とする過操作あ
るいは遠心分離によつて除去し、その液あるい
は上澄液中に存在するγ−フルオロ−Ｌ−トレオ
ニンを抽出精製する。 γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンはその両性の性
質を利用して培養液または上澄液を陽イオン交
換樹脂あるいは陰イオン交換樹脂に吸着させた
後、適当な酸、塩基、塩〔−〕あるいはそれらの
組み合せからなる緩衝液で溶離される。又、イオ
ン交換樹脂にγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンが吸
着しないようなイオン交換樹脂の状態でγ−フル
オロ−Ｌ−トレオニンの溶液を処理することによ
り夾雑物を除去することもできる。 イオン交換樹脂の代りにイオン交換セルロー
ス、イオン交換セフアデツクス、イオン交換膜、
イオン交換液及びその他のイオン交換体も勿論使
用することができる。 また、これらイオン交換体による吸脱着処理の
前または後でγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン含有
にメタノール等の低級アルコール類またはアセト
ン等を加えることにより生ずる夾雑物の沈澱を除
去したり、またγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンを
沈澱化させ取することにより精製純度を上げる
ことができる。 更に培養液またはイオン交換体処理液または
γ−フルオロ−Ｌ−トレオニン溶液を活性炭ある
いは多孔性吸着樹脂例えばアンバーライトXAD
−２、XAD−４、XAD−７（ロームアンドハー
ス社製）またはダイヤイオンHP−10、HP−20、
HP−50（三菱化成社製）等で処理することによ
り吸着性の夾雑物を除去して精製純度を上げるこ
とができる。 またγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンは水によく
溶けるので実質的に水に混和しない有機溶媒、例
えばエーテル、クロロホルム、ベンゼン、酢酸エ
チル、酢酸ブチル、ブタノール、メチルエチルケ
トン、メチルイソブチルケトンなどに抽出されな
いことから、これらの溶媒による処理は夾雑物の
除去に必要ならば利用できる。 またγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンはその塩基
性及び酸性の性状に基いて水に難溶な塩として、
常法により沈澱させて採取するともできる。 該塩としては、アミノ酸の通常の塩を挙げるこ
とができ、例えばナトリウム、カリウム、カルシ
ウム、マグネシウム、アルミニウムなどの金属
塩、Ｎ、N′−ジベンジルエチレンジアミン、プ
ロカインなどの有機アミン塩、塩酸、硝酸、硫酸
などの無機酸塩、ギ酸、酢酸、乳酸などの有機酸
塩、メタンスルホン酸、イセチオン酸、ｐ−トル
エンスルホン酸などのスルホン酸塩、グルタミン
酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニンなどの
アミン酸塩などが挙げられる。 更に、純度の高いγ−フルオロ−Ｌ−トレオニ
ンを得る為にはシリカゲル、アルミナ、活性炭等
を担体とする吸着カラムクロマトグラフイーある
いはセフアデクツクス（フアルマシア社製）また
はバイオゲル（バイオラツド社製）等を用いるゲ
ル過が行われる。 γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンは水から結晶化
することが出来るが水に非常に良く溶け、アルコ
ールに殆んど溶けないことから小量の水に溶かし
アルコールを添加することにより収率よくγ−フ
ルオロ−Ｌ−トレオニンの結晶を得ることができ
る。 このようにして得られたγ−フルオロ−Ｌ−ト
レオニンの理化学的性状は前述の通りである。 次に、新規物質γ−フルオロ−Ｌ−トレオニン
の生物学的性状について述べる。各種検定菌に対
するin vitroでのγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン
のMICを第２表に示した。
【表】
【表】
γ−フルオロ−Ｌ−トレオニンのMICは、ヌ
ートリエント培地では50μｇ／ml又はそれ以上で
あり、抗菌作用は極めて微弱であるが、デービス
最小培地では多くの検定菌に対して0.2μｇ／ml以
下の値を示した。 合成培地に各種アミノ酸を個々に加え、シユー
ドモナス・エルギノーサに対するγ−フルオロ−
Ｌ−トレオニンの抗菌活性を調べた結果を第３表
に示した。
ートリエント培地では50μｇ／ml又はそれ以上で
あり、抗菌作用は極めて微弱であるが、デービス
最小培地では多くの検定菌に対して0.2μｇ／ml以
下の値を示した。 合成培地に各種アミノ酸を個々に加え、シユー
ドモナス・エルギノーサに対するγ−フルオロ−
Ｌ−トレオニンの抗菌活性を調べた結果を第３表
に示した。
【表】
【表】
Ｌ−セリン及びＬ−トレオニンを添加するとγ
−フルオロ−Ｌ−トレオニンの抗菌活性が消失す
ることからγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンはＬ−
セリン及びＬ−トレオニンの代謝拮抗物質であ
る。 マウスの感染治療実験においてエシユリヒア・
コリに対してはPD5077mg／Kgであつたが、スト
レプトコツカスオーレウスに対しては無効であつ
た。 DDY系マウス（♀）に対するLD50は320mg／
Kg（iv）である。 続いて、実施例により本発明の目的化合物γ−
フルオロ−Ｌ−トレオニンの製造例を示すが、γ
−フルオロ−Ｌ−トレオニンの性状が本発明によ
り明らかにされたのでこの性状に基いてγ−フル
オロ−Ｌ−トレオニンの製造法を種々考察するこ
とが出来る。従つて本発明は実施例に限定される
ものではなく、実施例の修飾手段は勿論、本発明
によつて明らかにされたγ−フルオロ−Ｌ−トレ
オニンの性状に基いて公知の手段を施して生産・
抽出・濃縮・精製する方法を全て包括する。 実施例 １ ストレプトミセス・カトレヤNRRL8057の凍
結乾燥培養菌の管を無菌的に開封し、内容物を１
mlの無菌生理食塩水に懸濁せしめ、次いでこの全
量をＡ培地（シユークロス30ｇ／、デイステイ
ラーズ・ソルブル15ｇ／、イーストエキス５
ｇ／、コーングルテンミール５ｇ／、PH7.0）
60mlを含む300mlエーレンマイヤーフラスコに接
種する。この種のフラスコを220rpmのロータリ
ーシエーカーで28℃、72時間培養する。この培養
液を10％グリセロール液と１：１の割合で混合
し、管に小分けし、凍結栄養菌（FVM）として
−85℃のフリーザーで保存する。 このFVMを30℃で融解して1.2mlをＡ培地60ml
を含む300mlエーレンマイヤーフラスコに接種す
る。このフラスコを220rpmのロータリーシエー
カーで48時間培養し、この種培養液２ml宛をＢ培
地（グリセリン30ｇ／、デイステイラーズ・ソ
ルブ10ｇ／、コーンスチープリカー23ｇ／、
綿実粕7.5ｇ／、グリシン1.5ｇ／、
CaHPO4・2H2O0.5ｇ／、CoCl・6H2O0.002
ｇ／、MgSO4・7H2O0.01ｇ／、PH7.5）を基
礎培地として、この他に第４表に示す各成分を添
加した培地25mlを含む各フラスコに移植した。こ
のフラスコを220rpmのロータリーシエーカーで
28℃、６日間培養し、培養液を3000rpmで10分間
遠心分離器にかけブロス上澄液についてγ−フル
オロ−Ｌ−トレオニン含量を測定した。添加した
成分とγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンの生産の関
係は第４表の通りであつた。添加した成分はいず
れも実験した添加量では前述の測定法において抗
菌活性を示さなかつた。
−フルオロ−Ｌ−トレオニンの抗菌活性が消失す
ることからγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンはＬ−
セリン及びＬ−トレオニンの代謝拮抗物質であ
る。 マウスの感染治療実験においてエシユリヒア・
コリに対してはPD5077mg／Kgであつたが、スト
レプトコツカスオーレウスに対しては無効であつ
た。 DDY系マウス（♀）に対するLD50は320mg／
Kg（iv）である。 続いて、実施例により本発明の目的化合物γ−
フルオロ−Ｌ−トレオニンの製造例を示すが、γ
−フルオロ−Ｌ−トレオニンの性状が本発明によ
り明らかにされたのでこの性状に基いてγ−フル
オロ−Ｌ−トレオニンの製造法を種々考察するこ
とが出来る。従つて本発明は実施例に限定される
ものではなく、実施例の修飾手段は勿論、本発明
によつて明らかにされたγ−フルオロ−Ｌ−トレ
オニンの性状に基いて公知の手段を施して生産・
抽出・濃縮・精製する方法を全て包括する。 実施例 １ ストレプトミセス・カトレヤNRRL8057の凍
結乾燥培養菌の管を無菌的に開封し、内容物を１
mlの無菌生理食塩水に懸濁せしめ、次いでこの全
量をＡ培地（シユークロス30ｇ／、デイステイ
ラーズ・ソルブル15ｇ／、イーストエキス５
ｇ／、コーングルテンミール５ｇ／、PH7.0）
60mlを含む300mlエーレンマイヤーフラスコに接
種する。この種のフラスコを220rpmのロータリ
ーシエーカーで28℃、72時間培養する。この培養
液を10％グリセロール液と１：１の割合で混合
し、管に小分けし、凍結栄養菌（FVM）として
−85℃のフリーザーで保存する。 このFVMを30℃で融解して1.2mlをＡ培地60ml
を含む300mlエーレンマイヤーフラスコに接種す
る。このフラスコを220rpmのロータリーシエー
カーで48時間培養し、この種培養液２ml宛をＢ培
地（グリセリン30ｇ／、デイステイラーズ・ソ
ルブ10ｇ／、コーンスチープリカー23ｇ／、
綿実粕7.5ｇ／、グリシン1.5ｇ／、
CaHPO4・2H2O0.5ｇ／、CoCl・6H2O0.002
ｇ／、MgSO4・7H2O0.01ｇ／、PH7.5）を基
礎培地として、この他に第４表に示す各成分を添
加した培地25mlを含む各フラスコに移植した。こ
のフラスコを220rpmのロータリーシエーカーで
28℃、６日間培養し、培養液を3000rpmで10分間
遠心分離器にかけブロス上澄液についてγ−フル
オロ−Ｌ−トレオニン含量を測定した。添加した
成分とγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンの生産の関
係は第４表の通りであつた。添加した成分はいず
れも実験した添加量では前述の測定法において抗
菌活性を示さなかつた。
【表】
実施例 ２
ストレプトミセス・カトレヤNRRL8057の
FVM1.2mlをＡ培地60mlを含む300mlエーレンマ
イヤーフラスコに接種する。このフラスコを
220rpmのロータリーシエーカーで28℃、48時間
培養する。この第一段種培養液10mlづつをＡ培地
200mlを含む１フラスコ５本に移植し、
170strokes／minのレシプロケーテングシエーカ
ーで28℃、24時間培養し、第二段種培養液を得
る。この第二段種培養液を集めそしてＡ培地130
を含有する200ステンレスタンクへ接種する。
このタンクを160rpm、100／min、28℃、30時
間培養した。こうして得られた第三段種培養液13
をＣ培地（グリセリン20ｇ／、デイステイラ
ーズソルブル20ｇ／、コーンステイープリカー
15ｇ／、綿実粕５ｇ／、大豆カゼイン３ｇ／
、コハク酸ソーダ１ｇ／、CaHPO4・
2H2O2.5ｇ／、CoCl2・6H2O0.01ｇ／、KM
−750.5ｇ／PH7.5）130を含有する200ステ
ンレスタンクへ移植する。このタンクを160rpm、
100／min、30℃（０→100h）つづいて28℃
（100→162h）の条件で162時間培養し、γ−フル
オロ−Ｌ−トレオニン142μｇ／mlを含有する培
養液120を得た。培養液120に過助剤（ハイ
フロスーパーセル）4.8Kgを加え過して得た
液の内の20をダウエツクス１×２（HCO3）４
カラムに通液し、６の水で水洗した。活性通
過液及び洗水計10.35LにアンバーライトIR−120
(H)1.35を加え、20分撹拌後カラムに詰め、2.6
の水で水洗した後2N−アンモニア水で溶出し、
活性画分470mlを得た。濃縮後アセトン処理して、
茶灰色沈澱11.1ｇを得た。この内10.0ｇを40mlの
水に溶解し、活性炭カラム（ワコークロマト用活
性炭）500mlに通液し、つづいて水2000mlにて展
開した。活性画分を合し、濃縮乾固して2.45ｇの
固形物を得た。水10mlに溶解後アンバーライト
CG−50（NH4 +）225mlカラムに通液し水にて展
開した。活性画分88mlを濃縮乾固し、水４mlに溶
解後エタノール６mlを加え５℃１夜静置し、無色
針状結晶のγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン740mg
を得た。 実施例 ３ 実施例 ２と同様に操作して得られた第三段種
培養液13をＤ培地（グリセリン20ｇ／、デイ
ステイラーズソルブル20ｇ／、コーンステイー
プリカー15ｇ／、綿実粕５ｇ／、コハク酸ソ
ーダ１ｇ／、KF0.12ｇ／、CaHPO4・
2H2O2.5ｇ／、CoCl2・6H2O0.01ｇ／、KM
−750.5ｇ／、PH7.5）130を含有する200ス
テンレスタンクへ移植する。このタンクを
160rpm、100／min、30℃の条件で114時間培
養し、γ−フルオロ−Ｌ−トレオニン114μｇ／
mlを含有する培養液120を得た。培養液120Lに
過助剤（ハイフロスーパーセル）３Kgを加え、
過して得た液をアンバーライトIRA−401S
（OH）15Lのカラムに通液した。カラムを24Lの
水で水洗した後、Ｎ−塩酸水にて溶離して得た活
性画分をアンバーライトIR−120（H+）16Lのカ
ラムに通液した。カラムを24Lの水で洗浄した
後、2N−アンモニア水を用いて溶離し、活性画
分を約1Lまで減圧濃縮した。濃縮液を活性炭50
ｇで脱色処理した後、活性炭カラム（クロマト用
精製白鷺）3.7Lに通液し、つづいて水で展開し
た。活性画分1.17Lを集め、減圧濃縮により油状
シロツプ54ｇを得た。このシロツプを水200mlに
溶解し、アンバーライトCG−50（NH4 +）4.8Lの
カラムに通液し、カラムを水で展開した。活性画
分720mlを減圧濃縮して、シロツプ状残渣20ｇを
得た。つづいて展開溶媒としてアセトニトリル：
水（９：１：１）を用いるシリカゲルカラムクロ
マトグラフイー（ワコールゲルｗ−200、2L）に
より、分離精製を行つた。γ−フルオロ−Ｌ−ト
レオニン溶離画分を集め減圧濃縮により、淡黄色
粉末8.02ｇを得た。この粉末をエタノール−水の
系から２回繰り返し結晶化して、無色針状結晶の
γ−フルオロ−Ｌ−トレオニン3.0ｇを得た。
FVM1.2mlをＡ培地60mlを含む300mlエーレンマ
イヤーフラスコに接種する。このフラスコを
220rpmのロータリーシエーカーで28℃、48時間
培養する。この第一段種培養液10mlづつをＡ培地
200mlを含む１フラスコ５本に移植し、
170strokes／minのレシプロケーテングシエーカ
ーで28℃、24時間培養し、第二段種培養液を得
る。この第二段種培養液を集めそしてＡ培地130
を含有する200ステンレスタンクへ接種する。
このタンクを160rpm、100／min、28℃、30時
間培養した。こうして得られた第三段種培養液13
をＣ培地（グリセリン20ｇ／、デイステイラ
ーズソルブル20ｇ／、コーンステイープリカー
15ｇ／、綿実粕５ｇ／、大豆カゼイン３ｇ／
、コハク酸ソーダ１ｇ／、CaHPO4・
2H2O2.5ｇ／、CoCl2・6H2O0.01ｇ／、KM
−750.5ｇ／PH7.5）130を含有する200ステ
ンレスタンクへ移植する。このタンクを160rpm、
100／min、30℃（０→100h）つづいて28℃
（100→162h）の条件で162時間培養し、γ−フル
オロ−Ｌ−トレオニン142μｇ／mlを含有する培
養液120を得た。培養液120に過助剤（ハイ
フロスーパーセル）4.8Kgを加え過して得た
液の内の20をダウエツクス１×２（HCO3）４
カラムに通液し、６の水で水洗した。活性通
過液及び洗水計10.35LにアンバーライトIR−120
(H)1.35を加え、20分撹拌後カラムに詰め、2.6
の水で水洗した後2N−アンモニア水で溶出し、
活性画分470mlを得た。濃縮後アセトン処理して、
茶灰色沈澱11.1ｇを得た。この内10.0ｇを40mlの
水に溶解し、活性炭カラム（ワコークロマト用活
性炭）500mlに通液し、つづいて水2000mlにて展
開した。活性画分を合し、濃縮乾固して2.45ｇの
固形物を得た。水10mlに溶解後アンバーライト
CG−50（NH4 +）225mlカラムに通液し水にて展
開した。活性画分88mlを濃縮乾固し、水４mlに溶
解後エタノール６mlを加え５℃１夜静置し、無色
針状結晶のγ−フルオロ−Ｌ−トレオニン740mg
を得た。 実施例 ３ 実施例 ２と同様に操作して得られた第三段種
培養液13をＤ培地（グリセリン20ｇ／、デイ
ステイラーズソルブル20ｇ／、コーンステイー
プリカー15ｇ／、綿実粕５ｇ／、コハク酸ソ
ーダ１ｇ／、KF0.12ｇ／、CaHPO4・
2H2O2.5ｇ／、CoCl2・6H2O0.01ｇ／、KM
−750.5ｇ／、PH7.5）130を含有する200ス
テンレスタンクへ移植する。このタンクを
160rpm、100／min、30℃の条件で114時間培
養し、γ−フルオロ−Ｌ−トレオニン114μｇ／
mlを含有する培養液120を得た。培養液120Lに
過助剤（ハイフロスーパーセル）３Kgを加え、
過して得た液をアンバーライトIRA−401S
（OH）15Lのカラムに通液した。カラムを24Lの
水で水洗した後、Ｎ−塩酸水にて溶離して得た活
性画分をアンバーライトIR−120（H+）16Lのカ
ラムに通液した。カラムを24Lの水で洗浄した
後、2N−アンモニア水を用いて溶離し、活性画
分を約1Lまで減圧濃縮した。濃縮液を活性炭50
ｇで脱色処理した後、活性炭カラム（クロマト用
精製白鷺）3.7Lに通液し、つづいて水で展開し
た。活性画分1.17Lを集め、減圧濃縮により油状
シロツプ54ｇを得た。このシロツプを水200mlに
溶解し、アンバーライトCG−50（NH4 +）4.8Lの
カラムに通液し、カラムを水で展開した。活性画
分720mlを減圧濃縮して、シロツプ状残渣20ｇを
得た。つづいて展開溶媒としてアセトニトリル：
水（９：１：１）を用いるシリカゲルカラムクロ
マトグラフイー（ワコールゲルｗ−200、2L）に
より、分離精製を行つた。γ−フルオロ−Ｌ−ト
レオニン溶離画分を集め減圧濃縮により、淡黄色
粉末8.02ｇを得た。この粉末をエタノール−水の
系から２回繰り返し結晶化して、無色針状結晶の
γ−フルオロ−Ｌ−トレオニン3.0ｇを得た。
第１図は、新規γ−フルオロ−Ｌ−トレオニン
の臭化カリウム錠中で測定した赤外部吸収曲線を
示す。第２図は、重水中内部基準DSSを使用して
測定した1H−NMRスペクトルの吸収曲線を示す
（90MHz）。
の臭化カリウム錠中で測定した赤外部吸収曲線を
示す。第２図は、重水中内部基準DSSを使用して
測定した1H−NMRスペクトルの吸収曲線を示す
（90MHz）。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式： で示されるＬ−トレオ−２−アミノ−４−フルオ
ロ−３−ヒドロキシ酪酸またはその塩類。 ２ ストレプトミセス属に属するＬ−トレオ−２
−アミノ−４−フルオロ−３−ヒドロキシ酪酸生
産菌をフツ素化合物含有培地に培養し、その培養
液からＬ−トレオ−２−アミノ−４−フルオロ−
３−ヒドロキシ酪酸を分離採取することを特徴と
するＬ−トレオ−２−アミノ−４−フルオロ−３
−ヒドロキシ酪酸またはその塩類の製造法。 ３ ストレプトミセス属に属するＬ−トレオ−２
−アミノ−４−フルオロ−３−ヒドロキシ酪酸生
産菌がストレプトミセス・カトレヤである特許請
求の範囲第２項記載の製造法。 ４ 生産培地に使用するフツ素化合物が無機フツ
素化合物としてはフツ化アンモニウム、フツ素の
アルカリ金属塩、フツ素のアルカリ土類金属塩ま
たは有機フツ素化合物としてはモノフルオロ酢
酸、ｍ−フルオロ−DL−フエニールアラニン、
ｐ−フルオロ−DL−フエニールアラニン、４−
フルオログルタミン酸であり、これらを単独ある
いは組合せて使用し、その使用量が培地に対し、
0.001〜0.5％（Ｗ／Ｖ）である特許請求の範囲第
２項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22619683A JPS60116655A (ja) | 1983-11-30 | 1983-11-30 | 新規なγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンおよびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22619683A JPS60116655A (ja) | 1983-11-30 | 1983-11-30 | 新規なγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンおよびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60116655A JPS60116655A (ja) | 1985-06-24 |
| JPH0414100B2 true JPH0414100B2 (ja) | 1992-03-11 |
Family
ID=16841389
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22619683A Granted JPS60116655A (ja) | 1983-11-30 | 1983-11-30 | 新規なγ−フルオロ−Ｌ−トレオニンおよびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60116655A (ja) |
-
1983
- 1983-11-30 JP JP22619683A patent/JPS60116655A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60116655A (ja) | 1985-06-24 |
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