JPH04225962A - 新規化合物マトリスタチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はコラゲナーゼ阻害活性を
有する新規化合物マトリスタチンに関する。

【０００２】

【従来の技術】コラゲナーゼは結合組織などの主要構成
成分の１つであるコラーゲンを分解する酵素であり、こ
のうち、ＩＶ型コラゲナーゼは基底膜の主要成分である
ＩＶ型コラーゲンを分解する。そして、癌が生育する際
の血管新生、癌の浸潤及び転移においてはＩＶ型コラゲ
ナーゼ活性が上昇し、基底膜の破壊に主要な役割を果た
していることが知られている（Ｗｉｌｌｉａｍ　Ｇ．Ｓ
ｔｅｔｌｅｒ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ　　；　　　Ｃａｎ
ｃｅｒ　　ａｎｄＭｅｔａｓｔａｓｉｓ　Ｒｅｖｉｅｗ
ｓ，　ｖｏｌ．９，　２８９−３０３，（１９９０））
。従って、コラゲナーゼ阻害剤はこれら疾患の予防・治
療に有用である。

【０００３】従来、コラゲナーゼ阻害作用を示す低分子
物質としてはメルカプト基を含むペプチド性化合物（Ｒ
ｏｂｅｒｔ　Ｄ．　Ｇｒａｙ，　Ｈｏｓｓａｉｎ　Ｈ．
　Ｓａｎｅｉｉ　ａｎｄ　Ａｒｎｏ　Ｆ．　Ｓｐａｔｏ
ｌａ　；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈ
ｙｓｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａ
ｔｉｏｎｓ，　Ｖｏｌ．　１０１，　Ｎｏ．　４　，１
２５１−１２５８，　（１９８１）　／Ｃｈａｒｌｅｓ
　Ｆ．　Ｖｅｎｃｉｌｌ，　Ｄａｖｉｄ　Ｒａｓｎｉｃ
ｋ，　Ｋａｔｈｅｒｉｎｅ　Ｖ．Ｃｒｕｍｌｅｙ，　Ｎ
ｏｒｉｋａｚｕ　Ｎｉｓｈｉｎｏ　ａｎｄ　Ｊａｍｅｓ
　Ｃ．　Ｐｏｗｅｒｓ　；　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
　Ｖｏｌ．　２４，３１４９−３１５７，　（１９８５
））、カルボキシル基を含むペプチド性化合物（Ｊｅａ
ｎ−ＭａｒｉｅＤｅｌａｉｓｓｅ，　Ｙｖｅｓ　Ｅｅｃ
ｋｈｏｕｔ，　Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ　Ｓｅａｒ，　
Ａｌａｎ　Ｇａｌｌｏｗａｙ，　ＫｅｉｔｈＭｃＣｕｌ
ｌａｇｈ　ａｎｄ　Ｇｉｌｂｅｒｔ　Ｖａｅｓ　；　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ
ｌ　ＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，
　Ｖｏｌ．１３３，　４８３−４９０，（１９８５））
、ベンジルオキシカルボニル−プロリル−ロイシル−グ
リシルヒドロキサム酸（Ｗｉｌｌｉａｍ　Ｍ．　Ｍｏｏ
ｒｅ　ａｎｄ　Ｃｕｒｔｉｓ　Ａ．Ｓｐｉｌｂｕｒｇ　
；　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓ
ｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉ
ｏｎｓ，　Ｖｏｌ．１３６，３９０−３９５，（１９８
６）），　ヒドロキシルアミン誘導体（特開平第１−１
６０９９７号）などが報告されている。またＩＶ型コラ
ゲナーゼに対して比較的特異性の強いものとしてＳＣ４
４４６３　（Ｒｅｕｖｅｎ　Ｒｅｉｃｈ，Ｅｒｉｋ　Ｗ
．　Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，　Ｙｕｋｉｈｉｄｅ　Ｉｗａｍ
ｏｔｏ，　Ｇｅｏｒｇｅ　Ｒ．Ｍａｒｔｉｎ，　Ｊａｍ
ｅｓ　Ｒ．　Ｄｅａｓｏｎ，　Ｇｅｏｒｇｅ　Ｃ．　Ｆ
ｕｌｌｅｒ，　ａｎｄ　Ｒｕｔｈ　Ｍｉｓｋｉｎ　；　
ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，　Ｖｏｌ．４８，　３
３０７−３３１２，　（１９８８））が報告されている
。 このＳＣ４４４６３　は、癌転移抑制活性を示すことが
動物実験により確認されている。しかしこれらはいずれ
も合成品であり、また未だ実用に供されていない。

【０００４】一方、蛋白性のコラゲナーゼ阻害物質とし
てはＴｉｓｓｕｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆＭｅｔａ
ｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　（ＴＩＭＰ）及びその類
縁物質が知られている。ＴＩＭＰは組み換えＤＮＡ技術
により量産が可能になっているが、未だ実用に供されて
いない（Ｄｏｃｈｅｒｔｙ．　Ａ．Ｊ．　Ｐ，　Ｌｙｏ
ｎｓ　Ａ，　Ｓｍｉｔｈ　Ｂ．Ｊ，　Ｗｒｉｇｈｔ　Ｅ
．Ｍ，　Ｓｔｅｐｈｅｎｓ　Ｐ．Ｅ，　ＨａｒｒｉｓＴ
．　Ｊ．　Ｒ，　Ｍｕｒｐｈｙ　Ｇ，　ａｎｄ　Ｒｅｙ
ｎｏｌｄｓ　Ｊ．Ｊ　；　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｈ
ｕｍａｎ　ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　ｍ
ｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ
　ｉｄｅｎｔｉｔｙ　ｔｏ　ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ−ｐｏ
ｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．　Ｎａｔｕ
ｒｅ，ｖｏｌ．３１８，　６６−６９，　（１９８５）
）　。

【０００５】またヒドロキシアミノ化された２−ペンチ
ルコハク酸を有している点でマトリスタチンと類似して
いる化合物として、放線菌の培養濾液から単離されたア
クチノニン（ａｃｔｉｎｏｎｉｎ）がある。本化合物は
、アミノペプチダーゼＭを低濃度で阻害することが報告
されている（Ｕｍｅｚａｗａ，　Ｈ．，　Ａｏｙａｇｉ
，　Ｔ．，　Ｔａｎａｋａ，　Ｔ．，　Ｓｕｄａ，　Ｔ
．，Ｏｋｕｙａｍａ，　Ａ．，　Ｎａｇａｎａｗａ，　
Ｈ．，　Ｈａｍａｄａ，　Ｍ．　ａｎｄ　Ｔａｋｅｕｃ
ｈｉ，　Ｔ．　：　Ｊ．　Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，ｖｏｌ
．３８，　１６２９−３０，　（１９８５）　）　がＩ
Ｖ型コラゲナーゼを阻害するかどうかは検討されていな
い。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、土壌よ
り分離したアクチノマデュラ属に属する放線菌　ＳＡＮ
Ｋ６１４８８　株の培養物から、ＩＶ型コラゲナーゼ阻
害作用を有する新規化合物、マトリスタチン類が生産さ
れることを見出し、本発明を完成した。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明のマトリスタチン
（Ｍａｔｌｙｓｔａｔｉｎ）は下記の構造式および性状
を有する。１）　　構造式

【０００８】

【化３】

【０００９】（式中、Ｒ１は水素原子又は水酸基、Ｒ２
は水素原子又はメチル基、Ｒ３は、式

【００１０】

【化４】

【００１１】を有する基を示す。

【００１２】但し、Ｒ１が水酸基、Ｒ２がメチル基のと
きは、Ｒ３は、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ　）、（ＩＶ）又
は（Ｖ）であり、Ｒ１が水素原子、Ｒ２がメチル基のと
きは、Ｒ３は、式（ＩＩ）であり、Ｒ１が水酸基、Ｒ２
が水素原子のときは、Ｒ３は式（ＩＶ）である。）また
、本発明における化合物名を下記の表のごとく定義する
。

【００１３】 （表中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、一般式（Ｉ）におけ
るＲ１、Ｒ２およびＲ３を示し、（ＩＩ）、（ＩＩＩ　
）、（ＩＶ）及び（Ｖ）は上記と同意義を示す。） ２）物性 ■　　マトリスタチンＡ１ １）　　性　　　　　　質；白色、吸湿性粉末、メタノ
ール又はクロロホルム中では室温で不安定。 ２）　　溶　　解　　性；メタノールに易溶、水、クロ
ロホルムに難溶。

【００１４】３）　　呈色試験　　；５０％硫酸、ヨウ
素、ニンヒドリン反応に陰性。塩化第二鉄反応に陽性。

【００１５】４）　　分　　子　　式；Ｃ２７Ｈ４７Ｏ
８Ｎ５Ｓ５）　　分　　子　　量；ＦＡＢ−ＭＡＳＳ法
により決定（Ｍ＋Ｈ）＋６０２．３１９８（測定値） ６０２．３２２４（計算値） ６）　　融　　　　　　点；１１３−１１５　℃（分解
）７）　　比旋光度；［α］Ｄ２５　　−３８．９°（
ｃ，１．０６　　メタノール） ８）　　紫外線吸収スペクトル；λｍａｘ　ｎｍメタノ
ール中で末端に極大吸収を示す。

【００１６】９）　　赤外線吸収スペクトル；νｍａｘ
　（ＫＢｒ）　ｃｍ−１ ＫＢｒ　ディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは以
下の極大吸収を示す。

【００１７】１０）　　１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル；
（δ：ＰＰＭ　） 重メタノール中、内部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシ
ラン）を使用して測定 ０．８８（ｔ，３Ｈ），　０．８９（ｔ，３Ｈ），　０
．９４（ｄ，３Ｈ），１．０−１．８（ｍ，１２Ｈ），
　１．９８（ｍ，２Ｈ），２．０２（ｓ，３Ｈ），　２
．１−２．５（ｍ，３Ｈ），　２．７−３．０（ｍ，６
Ｈ），　３．０−３．１（ｍ，２Ｈ），３．９８（ｍ，
１Ｈ），　４．４０（ｄ，１Ｈ），　４．５９（ｔ，１
Ｈ），　５．１７（ｄ，１Ｈ）１１）　　１３Ｃ　−核
磁気共鳴スペクトル；（δ：ＰＰＭ　） 重メタノール中、溶媒のシグナルを基準（メタノールの
中心にあるシグナのとおりである。

【００１８】２０９．８（ｓ），　１７９．６（ｓ），
　１７４．６（ｓ），１７４．６（ｓ），　１７３．６
（ｓ），　１７１．８（ｓ），１２）　　高速液体クロ
マトグラフィー 分離カラム；ノバパック・カートリッジ８ＮＶＣ１８（
カラムサイズ，φ８×１００　ｍｍ，ウォーターズ社製
） 溶　　　　　　媒；５８％（ｖ／ｖ）メタノール／０．
２　％　（ｖ／ｖ）トリエチルアミン− リン酸（　ｐＨ　３．０　） 流　　　　　　速；１．５　ｍｌ　／分検　　　　　　
出；ＵＶ　２１０　ｎｍ保持時間　　；６．９０分 ■　　マトリスタチンＡ２ １）　　性　　　　　　質；白色、吸湿性粉末。

【００１９】２）　　溶　　解　　性；メタノールに易
溶、水、クロロホルムに難溶。

【００２０】３）　　呈色試験　　；５０％硫酸、ヨウ
素、ニンヒドリン反応に陰性。

【００２１】４）　　分　　子　　式；Ｃ２７Ｈ４７Ｏ
７Ｎ５Ｓ５）　　分　　子　　量；ＦＡＢ−ＭＡＳＳ法
により決定（Ｍ＋Ｈ）＋５８６．３２８１（測定値） ５８６．３２７６（計算値） ６）　　融　　　　　　点；７１−７４　℃７）　　比
旋光度　　；　［α］Ｄ２５　　−３７．１°（ｃ，１
．１１　　メタノール） ８）　　紫外線吸収スペクトル；λｍａｘ　ｎｍメタノ
ール中で末端に極大吸収を示す。

【００２２】９）　　赤外線吸収スペクトル；νｍａｘ
　（ＫＢｒ）　ｃｍ−１ ＫＢｒ　ディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは以
下の極大吸収を示す。

【００２３】１０）　　１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル；
（δ：ＰＰＭ　） 重メタノール中、内部基準にＴＭＳ　を使用して測定し
た１Ｈ−核磁気共鳴スペ ０．８８（ｔ，３Ｈ），　０．９０（ｔ，３Ｈ），　０
．９３（ｄ，３Ｈ），１．０−１．８（ｍ，１２Ｈ），
　１．９６（ｍ，２Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），　２
．１３（ｍ，１Ｈ），　２．２９（ｄｄ，１Ｈ），　２
．５３（ｄｄ，１Ｈ），　２．７−２．９（ｍ，６Ｈ）
，２．９−３．１（ｍ，２Ｈ），　３．９２（ｍ，１Ｈ
），　４．３９（ｄ，１Ｈ），　４．５７（ｄｄ，１Ｈ
），　５．１８（ｄ，１Ｈ）１１）　　１３Ｃ　−核磁
気共鳴スペクトル；（δ：ＰＰＭ　）重メタノール中、
溶媒のシグナルを基準（メタノールの中心にあるシグナ
ルを４９．３　ｐｐｍとする）として測定した１３Ｃ　
−核磁気共鳴スペクトル（１００　ＭＨｚ　）は、以下
に示す通りである。

【００２４】２０９．１（ｓ）　，　１７９．５（ｓ）
　，　１７７．３（ｓ）　，　１７４．３（ｓ）　，　
１７４．３（ｓ）　，　１７３．１（ｓ）　，６４．２
（ｄ）　，　５４．０（ｄ）　，　５１．９（ｄ）　，
　４７．９（ｔ）　，　４２．０（ｔ）　，　３８．７
（ｔ）　，３８．０（ｄ）　，　３６．９（ｄ）　，　
３５．２（ｔ）　，　３３．７（ｔ）　，　３３．０（
ｔ），　２７．６（ｔ）　，２７．５（ｔ）　，　２６
．９（ｔ）　，　２５．７（ｔ）　，　２３．５（ｔ）
　，　２２．６（ｑ）　，　２２．２（ｔ）　，１６．
４（ｑ）　，　１４．４（ｑ）　，　１１．７（ｑ）１
２）　　高速液体クロマトグラフィー分離カラム；ノバ
パック・カートリッジ８ＮＶＣ１８（カラムサイズ，φ
８×１００　ｍｍ，ウォーターズ社製） 溶　　　　　　媒；５８％（ｖ／ｖ）メタノール／０．
２　％（ｖ／ｖ）トリエチルアミン− リン酸（ｐＨ　３．０） 流　　　　　　速；１．５　ｍｌ／分 検　　　　　　出；ＵＶ　２１０　ｎｍ保持時間　　；
７．８２分 ■　　マトリスタチン　Ｂ１ １）　　性　　　　　　質；白色、吸湿性粉末、メタノ
ール又はクロロホルム中では室温 で不安定。

【００２５】２）　　溶　　解　　性；メタノール、ク
ロロホルムに易溶、水に難溶。

【００２６】３）　　呈色試験　　；５０％硫酸、ヨウ
素、ニンヒドリン反応に陰性。塩化第二鉄反応に陽性。

【００２７】４）　　分　　子　　式；Ｃ２２Ｈ４０Ｎ
４Ｏ５５）　　分　　子　　量；ＦＡＢ　−　ＭＡＳＳ
法により決定（Ｍ＋Ｈ）＋４４１．３０８２（測定値） ４４１．３０７８（計算値） ６）　　融　　　　　　点；５７−６１　℃（分解）７
）　　紫外線吸収スペクトル；λｍａｘ　ｎｍメタノー
ル中で末端に極大吸収を示す。

【００２８】８）　　１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル；（
δ：ＰＰＭ　） 重クロロホルム中、内部基準にＴＭＳ　　を使用して測
定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（４００　ＭＨｚ）
は、以下に示す通りである。 １．２−１．９（ｍ，１２Ｈ），　１．９８（ｍ，１Ｈ
），　２．０３（ｍ，１Ｈ），　２．３１（ｄｄ，１Ｈ
），　２．４９（ｄｄ，１Ｈ），２．５５（ｑ，１Ｈ）
，　２．８２（ｍ，１Ｈ），　３．０１（ｍ，１Ｈ），
　３．９３（ｍ，１Ｈ），　４．６３（ｄｄ，１Ｈ），
４．７１（ｄｄ，１Ｈ），　５．２８（ｄ，１Ｈ），　
７．２５（ｄ，１Ｈ）９）　　１３Ｃ−核磁気共鳴スペ
クトル（δ：ＰＰＭ　） 重クロロホルム中、溶媒のシグナルを基準（クロロホル
ムの中心のシグナルを７７．７　ｐｐｍとする）として
測定した１３Ｃ　−核磁気共鳴スペクトル（１００　Ｍ
Ｈｚ　）は、以下に示す通りである。 ２１１．３（ｓ）　，　１７７．３（ｓ）　，　１７２
．３（ｓ）　，　１６９．８（ｓ）　，　６２．２（ｄ
）　，　５０．２（ｄ）　，４７．４（ｔ）　，　３６
．９（ｄ）　，　３６．８（ｄ）　，　３４．８（ｔ）
　，　３４．６（ｔ）　，　３２．７（ｔ）　，３１．
８（ｔ）　，　２６．３（ｔ）　，　２６．３（ｔ）　
，　２４．３（ｔ）　，　２２．４（ｔ）　，　２０．
９（ｔ）　，１６．１（ｑ）　，　１４．０（ｑ）　，
　１１．５（ｑ）　，　７．６（ｑ）１０）　　高速液
体クロマトグラフィー 分離カラム：ノバパック・カートリッジ８ＮＶＣ１８（
カラムサイズ、φ８×１００　ｍｍ、ウォーターズ社製
） 溶　　　　　　媒：７０％メタノール／０．２　％トリ
エチルアミン−リン酸（ｐＨ　３．０） 流　　　　　　速：１．５　ｍｌ／分 検　　　　　　出：ＵＶ　２１０　ｎｍ保持時間　　：
７．５３分 ■　　マトリスタチン　Ｄ１ １）　　性　　　　　　質　；白色、吸湿性粉末。

【００２９】２）　　溶　　解　　性；メタノールに可
溶、水、クロロホルムに難溶。

【００３０】３）　　分　　子　　式；Ｃ２７Ｈ４５Ｎ
６Ｏ６４）　　分　　子　　量；ＦＡＢ−ＭＡＳＳ法に
より決定（Ｍ＋Ｈ）＋５４９．３３８５（　測定値） ５４９．３４００（　計算値） ５）　　融　　　　　　点；１２２−１２６℃（分解）
６）　　比旋光度　　；　［α］Ｄ２５　　−２０．２
６°（ｃ　　１．１４　　メタノ−ル） ７）　　紫外吸収スペクトル；メタノ−ル中で　　２２
８−２３０ｎｍ（ｓｈ　　ε　７６９０）に極大吸収を
示す。

【００３１】８）　　赤外吸収スペクトル；νｍａｘ　
（ＫＢｒ）　ｃｍ−１ ＫＢｒディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは以下
の極大吸収を示す。３２６１，２９６０，２９３１，２
８７３，２８６０，１６３７，１５４５，１５１５，１
４４４，１４０８，１３７６，１３５１，１２９６，１
２３８９）　　１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル 重ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中、内部基準にＴ
ＭＳ　を使用して測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル
（５００　ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。

【００３２】０．７６　（ｄ，３Ｈ），　０．８２　（
ｔ，３Ｈ），　０．８４　（ｔ，３Ｈ），　１．１７　
（ｍ，１Ｈ），　１．１８　（ｍ，２Ｈ），１．２６　
（ｍ，２Ｈ　　），　１．３０　（ｍ，１Ｈ），　１．
３４（ｍ，２Ｈ），　１．３４　（ｍ，１Ｈ），　１．
４４　（ｍ，１Ｈ），４．４９　（ｍ，１Ｈ），　４．
８１　（ｔ，１Ｈ），　４．８４　（ｔ，１Ｈ），　４
．９７　（ｂｒｄ，　１Ｈ），５．０９　（ｂｒｄ，１
Ｈ），　６．８３　（ｄ，１Ｈ），　８．３１　（ｄ，
１Ｈ），　８．５４　（ｄ，１Ｈ），１０．３１　（ｓ
，１Ｈ）１０）　　１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル重Ｄ
ＭＳＯ中、溶媒のシグナルを基準（ＤＭＳＯの中心のシ
グナルを３９．５　ｐｐｍとする）として測定した１３
Ｃ　−核磁気共鳴スペクトル（１２５　ＭＨｚ　）は、
以下に示す通りである。

【００３３】１７５．６　（ｓ），　１７０．９　（ｓ
），　１６７．９　（ｓ），　１６６．４　（ｓ），　
１４９．５　（ｓ），　１３５．３　（ｄ），１０６．
８　（ｄ），　６２．１　（ｄ），　５０．１　（ｄ）
，　４９．４　（ｄ），　４８．３　（ｔ），　４６．
５　（ｔ），３６．７　（ｄ），　３６．７　（ｄ），
　３４．６　（ｔ），　３１．６　（ｔ），　３１．３
（ｔ），　２５．７　（ｔ），２５．７　（ｔ），　２
４．５　（ｔ），　２３．３　（ｔ），　２１．８　（
ｔ），　２０．６　（ｔ），　１７．１　（ｔ），１１
）　　高速液体クロマトグラフィー分離カラム：ノバパ
ック・カートリッジ８ＮＶＣ１８（カラムサイズ、φ８
×１００　ｍｍ、ウォーターズ社製） 溶　　　　　　媒：　５５％（ｖ／ｖ）　メタノール／
０．２　％（ｖ／ｖ）　トリエチルアミン−リン酸（ｐ
Ｈ　３．３）流　　　　　　速：　２　ｍｌ／分 検　　　　　　出：　ＵＶ　２１０　ｎｍ保持時間　　
：　４．９０分 ■　　マトリスタチン　Ｅ１ １）　　性　　　　　　質；白色、吸湿性粉末。

【００３４】２）　　溶　　解　　性；メタノールに可
溶、水、クロロホルムに難溶。

【００３５】３）　　分　　子　　式；Ｃ２６Ｈ４３Ｎ
６Ｏ６４）　　分　　子　　量；ＦＡＢ−ＭＡＳＳ法に
より決定（Ｍ＋Ｈ）＋５３５．３２２９（　測定値） ５３５．３２４３（　計算値） ５）　　融　　　　　　点；８９−９４　℃６）　　比
旋光度；　［α］Ｄ２５　　−２１．９５　°（ｃ，０
．４１　　メタノ−ル） ７）　　紫外吸収スペクトル；メタノ−ル中で　　２２
８−２３０ｎｍ（ｓｈε　８７７０）に極大吸収を示す
。

【００３６】８）　　赤外吸収スペクトル；νｍａｘ　
（ＫＢｒ）　ｃｍ−１ ＫＢｒ　ディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは以
下の極大吸収を示す。３２５７，２９６０，２９３３，
２８７３，１６３８，１５４４，１５１５，１４４２，
１４０９，１３７７，１３５０，１２６９，　９）１Ｈ
−核磁気共鳴スペクトル 重ＤＭＳＯ中、内部基準にＴＭＳ　を使用して測定した
１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００　ＭＨｚ）は、以
下に示す通りである。

【００３７】０．７６　（ｄ，３Ｈ），　０．８２　（
ｔ，３Ｈ），　０．８４　（ｔ，３Ｈ），　１．１７　
（ｍ，１Ｈ），　１．１８　（ｍ，２Ｈ），１．２６　
（ｍ，２Ｈ），　１．３０　（ｍ，１Ｈ），　１．３４
　（ｍ，２Ｈ），　１．３４　（ｍ，１Ｈ），　１．４
４　（ｍ，１Ｈ），１．４８　（ｍ，１Ｈ），　１．４
９　（ｍ，１Ｈ），　１．６８　（ｍ，１Ｈ），　１．
９０　（ｍ，１Ｈ），　１．９４　（ｍ，１Ｈ），１．
９７　（ｍ，１Ｈ），　１．９９　（ｍ，１Ｈ），　２
．０２　（ｍ，１Ｈ），　２．０３（ｍ，１Ｈ），　２
．２５　（ｄｄ，１Ｈ），２．５６　（ｍ，１Ｈ），　
２．６３　（ｄｄ，１Ｈ），　２．８７　（ｄｄ，１Ｈ
），　３．６３　（ｍ，１Ｈ），　４．２３　（ｍ，１
Ｈ），４．４９　（ｍ，１Ｈ），　４．８１　（ｔ，１
Ｈ），　４．８４　（ｔ，１Ｈ），　４．９７　（ｂｒ
ｄ，　１Ｈ），５．０９　（ｂｒｄ，１Ｈ），　６．８
３　（ｄ，１Ｈ），　８．３１　（ｄ，１Ｈ），　８．
５４　（ｄ，１Ｈ），　１０．３１　（ｓ，１Ｈ）１０
）　　１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル重ＤＭＳＯ中、溶
媒のシグナルを基準（ＤＭＳＯの中心のシグナルを３９
．５　ｐｐｍとする）として測定した１３Ｃ　−核磁気
共鳴スペクトル（１２５　ＭＨｚ　）は、以下に示す通
りである。

【００３８】１７５．７　（ｓ），　１７０．９　（ｓ
），　１６８．０　（ｓ），　１６６．９　（ｓ），　
１４９．４　（ｓ），　１３５．２　（ｄ），１０６．
８　（ｄ），　６２．２　（ｄ），　５０．１　（ｄ）
，　４９．５　（ｄ），　４８．２　（ｔ），　４６．
４　（ｔ），３６．６　（ｄ），　３６．６　（ｄ），
　３４．６　（ｔ），　３１．３　（ｔ），　２８．３
　（ｔ），　２５．７　（ｔ），　２４．４　（ｔ），
　２３．３　（ｔ），　２２．１　（ｔ），　２０．６
　（ｔ），　１７．１　（ｔ），　１５．４　（ｑ），
　１３．７　（ｑ），　１０．３　（ｑ）１１）　　高
速液体クロマトグラフィー 分離カラム：ノバパック・カートリッジ溶　　　　　　
媒：　５０％（ｖ／ｖ）　メタノール／０．２　％（ｖ
／ｖ）　トリエチルアミン−リン酸（ｐＨ３．３　）■
　　マトリスタチン　Ｆ１ １）　　性　　　　　　質；白色、吸湿性粉末。

【００３９】２）　　溶　　解　　性；メタノールに可
溶、水、クロロホルムに難溶。

【００４０】３）　　分　　子　　式；Ｃ２７Ｈ４５Ｎ
６Ｏ６４）　　分　　子　　量；ＦＡＢ−ＭＡＳＳ法に
より決定（Ｍ＋Ｈ　）＋５４９．３３８８（　測定値） ５４９．３４００（　計算値） ５）　　融　　　　　　点；６９−７５　℃６）　　比
旋光度　　；　［α］Ｄ２５　　＋１．４３°（ｃ，０
．１４　　メタノ−ル） ７）　　紫外吸収スペクトル；メタノ−ル中で　　２２
８−２３０ｎｍ（ｓｈ、ε　７０３０）に極大吸収を示
す。

【００４１】８）　　赤外吸収スペクトル；νｍａｘ　
（ＫＢｒ）　ｃｍ−１ ＫＢｒ　ディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは以
下の極大吸収を示す。３２０５（ｂｒ），２９６０，２
９３３，２８７３，２８６１，１６３８，１５４３，１
５１７，１４６１，１４４３，１３７９，９）　　１Ｈ
−核磁気共鳴スペクトル 重ＤＭＳＯ中、内部基準にＴＭＳ　を使用して測定した
１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００　ＭＨｚ）は、以
下に示す通りである。

【００４２】０．７８（ｄ，３Ｈ），　０．８６（ｔ，
３Ｈ），　０．８６（ｔ，３Ｈ），　１．１２（ｍ，２
Ｈ），　１．１５（ｍ，１Ｈ），１．１６（ｍ，２Ｈ）
，　１．２０（ｍ，２Ｈ），　１．３４（ｍ，１Ｈ），
　１．３７（ｍ，１Ｈ），　１．３７（ｍ，１Ｈ），１
．３８（ｍ，１Ｈ），　１．５８（ｍ，１Ｈ），　１．
７１（ｍ，１Ｈ），　１．８８（ｍ，１Ｈ），　１．９
０（ｍ，１Ｈ），　１．９６（ｍ，１Ｈ），　１．９７
（ｍ，１Ｈ），　１．９７（ｍ，１Ｈ），　２．１６（
ｍ，１Ｈ），　２．２３（ｄｄ，１Ｈ），　２．４６（
ｍ，１Ｈ），　２．６５（ｔ，１Ｈ），　２．８７（ｍ
，１Ｈ），　３．６９（ｍ，１Ｈ），　４．１２（ｍ，
１Ｈ），　４．６１（ｍ，１Ｈ），　４．７４（ｂｒｄ
，１Ｈ），　４．８０（ｂｒｄ，１Ｈ），　４．９６（
ｂｒｄ，　１Ｈ），５．００（ｂｒｄ，１Ｈ），　６．
７５（ｄ，１Ｈ），　８．３０（ｄ，１Ｈ），　８．８
０（ｄ，１Ｈ），　１０．２８（ｓ，１Ｈ）　　　１０
）　　１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル 重ＤＭＳＯ中、溶媒のシグナルを基準（ＤＭＳＯの中心
のシグナルを３９．５ｐｐｍとする）として測定した１
３Ｃ　−核磁気共鳴スペクトル（１２５　ＭＨｚ　）は
、以下に示す通りである。

【００４３】１７５．９　（ｓ），　１７１．９　（ｓ
），　１６７．９　（ｓ），　　１６７．５　（ｓ），
　１４９．８　（ｓ），　１３８．４　（ｄ），１０４
．５　（ｄ），　６４．０　（ｄ），　４９．７　（ｄ
），　　４８．６　（ｄ），　４６．９　（ｔ），　４
６．３　（ｔ），３７．２　（ｄ），　３５．６　（ｄ
），　３４．６　（ｔ），　３１．７　（ｔ），　３１
．３　（ｔ），　２５．９　（ｔ），２５．７　（ｔ）
，　２４．５　（ｔ），　２３．０　（ｔ），　２１．
８　（ｔ），　２０．７　（ｔ），　１７．４　（ｔ）
，１４．８　（ｑ），　１３．８　（ｑ），　１０．５
　（ｑ）１１）　　高速液体クロマトグラフィー分離カ
ラム：ノバパック・カートリッジ８ＮＶＣ１８（カラム
サイズ、φ８×１００　ｍｍ、ウォーターズ社製） 溶　　　　　　媒：　５５％メタノール／０．２　％（
ｖ／ｖ）　トリエチルアミン−リン酸 （ｐＨ　３．３） 流　　　　　　速：　２　ｍｌ／分 検　　　　　　出：　ＵＶ　２１０　ｎｍ保持時間　　
：　４．３０分 本発明は、また、アクチノマデュラ属に属するマトリス
タチン生産菌、ＳＡＮＫ　６１４８８株に関するもので
ある。その菌学的性状は次の通りである。

【００４４】１．形態学的性状ＩＳＰ［ジ・インターナ
ショナル・ストレプトミセス・プロジェクト（Ｔｈｅ　
Ｉｎｔ−ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ　Ｐｒｏｊｅｃｔ　）　規定の培地上、２８℃、１
４日間培養後、顕微鏡下観察ではＳＡＮＫ　６１４８８
株の気菌糸は単純分枝である。胞子鎖は気菌糸上にのみ
着生し、菌糸に対してほぼ直角に主として２−４個の短
い連鎖を形成する。胞子の表面構造は平滑状（ｓｍｏｏ
ｔｈ）　である。車軸分枝、菌核、寄生菌糸の断裂、胞
子のうなどの特殊器官は観察されない。

【００４５】２．各種培養基上の諸性質各種培養基上で
２８℃、１４日間培養後の性状は第１表に示す通りであ
る。 色調の表示は日本色彩研究所版、“標準色表”のカラー
チップ・ナンバーを表す。 ３．生理学的性質 ＳＡＮＫ　６１４８８株の生理学的性質は第２表に示す
通りである。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　第　　　　　　２　　　　　　表　　　　　　　
　　　澱粉の水解　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　陰性　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　ゼラチンの液化
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　陰性　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　硝酸塩の還元　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　陽性　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ミルクの凝
固　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　陰性　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　ミルクのペプトン化　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　陰性　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　生育温度範
囲（培地１）＊　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１８−４１　℃　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　生育適正温度（培地１）　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　２５−３４　℃　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　食塩耐性（培地１）　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＞２％−＜
３％　　　　　　　　　　　　　　　　　　カゼインの
分解　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　陽性　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　チロシンの分解　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　陰性　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　キサンチ
ンの分解　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　陰性　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　メラニン様色素生産性（培地２）　　
　　　　　　　　　　陽性　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　（培地３）　　　　　　　　　　　　
陽性　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（培
地４）　　　　　　　　　　　　陽性　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＊：培地１
；イーストエキス・麦芽エキス寒天（ＩＳＰ２）　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　２；トリプトン・イーストエキス・ブロス（Ｉ
ＳＰ２）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　３；ペプトン・イーストエキス・鉄寒天（
ＩＳＰ６）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　４；チロシン寒天（ＩＳＰ７）　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地を使用
して、２８℃、１４日間培養後の炭素源の資化性を調べ
た。結果を第３表に示す。

【００４６】第　　　　　　３　　　　　　表４．菌体
成分について ＳＡＮＫ６１４８８　株の細胞壁は長谷川らの方法［長
谷川等、ザ・ジャーナル・オブ・ジェネラル・アプライ
ド・マイクロバイオロジー（　Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　ＧｅｎｅｒａｌＡｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ　）、２９巻　３１９−３２２頁、１９８
３年）］に従い検討した結果、メソジアミノピメリン酸
が検出された。また、ＳＡＮＫ６１４８８株の全細胞中
の糖成分をエム・ピー・レシエバリエの方法［Ｍ．Ｐ．
Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　，　ジャーナル・オブ・ラボ
ラトリー・アンド・クリニカル・メディシン（Ｊｏｕｒ
ｎａｌ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ａｎｄＣｌｉｎ
ｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、７１巻　３４−９４４
　頁、１９６８年）に従い検討した結果、グルコース、
ガラクトース、マンノース、リボースの他、微量のマジ
ュロースが検出された。

【００４７】さらにＳＡＮＫ６１４８８　株のメナキノ
ンを［放線菌の同定実験法：日本放線菌学会編、（１９
８５年）］記載の方法で調べたところ主要なメナキノン
はＭＫ−９（Ｈ６）であった。以上のことから本菌株は
放線菌の中でもアクチノマデュラ属に属することは明ら
かである。アクチノマデュラ属の中でＳＡＮＫ６１４８
８　株に最も近縁と考えられる既知菌種としてアクチノ
マデュラ・アトラメンタリア（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒ
ａ　ａｔｒａｍｅｎｔａｒｉａ）［インターナショナル
・ジャーナル・オブ・システマテイック・バクテリオロ
ジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　
ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ）、　３７　巻、３４２　−３４６　頁、１９８７年
］が考えられる。そこでＳＡＮＫ６１４８８　株とアク
チノマデュラ・アトラメンタリアＪＣＭ　６２５０株と
の比較並行培養を実施したが、種を区別する程の差異は
認められなかった。そこでＳＡＮＫ６１４８８　株はア
クチノマデュラ・アトラメンタリアに属する新菌株であ
ると同定し、アクチノマデュラ・アトラメンタリア（Ａ
ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　ａｔｒａｍｅｎｔａｒｉａ）
　ＳＡＮＫ６１４８８株と命名し、１９９０年１月１０
日に日本国微生物工業技術研究所に国内寄託をし（微工
研菌寄第１１１８５　号：ＦＰ−１１１８５）、さらに
、１９９１年３月２０日に、日本国微生物工業技術研究
所に国際寄託をした（微工研条寄第３３２７号：ＢＰ−
３３２７　）。

【００４８】周知の通り、放線菌は自然界において、ま
た人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照射、化
学薬品処理等）により、変異をおこしやすく、本発明の
ＳＡＮＫ６１４８８　株もこの点は同じである。本発明
にいうＳＡＮＫ６１４８８　株はそのすべての変異株を
包含する。また、これらの変異株の中には、遺伝学的方
法、例えば組換え、形質導入、形質転換等により得られ
たものも包含される。 すなわち、本発明ではマトリスタチンを生産し、ＳＡＮ
Ｋ６１４８８　株およびその変異株と明確に区別されな
い菌株は、すべてＳＡＮＫ６１４８８　株に包含される
ものである。本発明のＳＡＮＫ６１４８８株はオースト
ラリア国ダービー市周辺より採取した土壌をあらかじめ
用意した滅菌水で適宜希釈した。ついで、下記に示した
組成の分離用寒天培地ＨＡ培地に塗抹し、２８℃にて１
０日間培養することにより出現してくる放線菌のコロニ
ーの中から分離することができた。

【００４９】 　　　　　　　　　　　　　　ＨＡ培地　　　　　　　
　　　燐酸二水素ナトリウム　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　０．２　ｇ　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　塩化カリウム　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．
１　ｇ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　硫酸第一鉄　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　０．１　ｇ　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　硫酸
マグネシウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　０．１　ｇ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　炭酸カルシウム　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０　ｇ　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　フミン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　２．０　ｇ　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　寒天　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　２０．０　ｇ　　　　　　───────
─────────────────────　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　蒸留水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
０００　ｍｌ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｐ
Ｈ（滅菌前）　　７．４　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　本発明の新菌株を
分離するに際し使用される分離培地としては炭素源、窒
素源、無機イオンおよび有機栄養源等より選択されたも
のを適宜含有する培地であれば合成または天然培地の何
れでも使用可能である。

【００５０】本発明は、アクチノマデュラ属に属するマ
トリスタチン生産菌を培養し、その培養物よりマトリス
タチンを採取することを特徴とするマトリスタチンの製
造法に関するものであり、さらに詳しくは、該生産菌が
ＳＡＮＫ　６１４８８株である該製造法に関するもので
ある。

【００５１】マトリスタチンはＳＡＮＫ　６１４８８株
を適当な培地で培養し、それから採取することによって
得られる。 栄養源としては、従来放線菌類の菌株の培養に利用され
ている公知のものが使用できる。例えば、炭素源として
はグルコース、シュクロース、澱粉、グリセリン、水飴
、糖蜜、大豆油などが使用できる。また、窒素源として
は大豆粉、コーンスチープリカー、硫酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム等を使用しうる。このほか必要に応じて
炭酸カルシウム、リン酸塩等の無機塩類を添加するほか
、菌株の発育を助け、マトリスタチンの生産を促進する
ような有機および無機物を適当に添加することができる
。培養法としては、一般の抗生物質を生産する方法と同
じく液体培養法、特に深部培養法が最も適している。培
養は、好気的条件下で行なわれ、培養に適当な温度は２
４−３０　℃であるが、多くの場合２８℃付近で培養す
る。マトリスタチンの生産は、振盪培養で通常５−１０
日で最高値に達する。

【００５２】培養終了後、培養液中の液体部分に存在す
る菌体、その他の固形部分を、珪藻土をろ過操作助剤と
するろ過操作または遠心分離によって分別し、そのろ液
または上清中に存在するマトリスタチン類を、ＩＶ型コ
ラゲナーゼの阻害活性を測定することにより、その物理
化学的性状を利用し抽出精製することができる。

【００５３】ＩＶ型コラゲナーゼ活性は、Ｓａｌｏらの
方法（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　ｖｏｌ．２５
８，　３０５８−３０６３　（１９８３）　）の方法に
より測定することができる。

【００５４】すなわち、ＩＶ型コラゲナーゼはヒトメラ
ノーマ細胞の無血清培養液より調製したものを、また基
質としては、マウスＥＨＳ　腫瘍より調製したＩＶ型コ
ラーゲンを放射性同位元素で標識したものを用いてコラ
ーゲンの切断を計測することにより測定できる。

【００５５】ＩＶ型コラゲナーゼの阻害活性は、この酵
素反応液に検体を同時に添加し、酵素反応の阻害率を算
定することにより、測定することができる。

【００５６】ろ液または、上清中に存在するマトリスタ
チンは、中性ｐＨ条件下で水と混和しない有機溶剤、例
えばｎ−ブタノール、メチルエチルケトン、酢酸エチル
、クロロホルム、塩化エチレン、塩化メチレンなどの単
独または、それらの組み合わせにより抽出精製すること
ができる。あるいは吸着剤として、例えば活性炭または
吸着用樹脂であるアンバーライトＸＡＤ　−２、ＸＡＤ
−　４（ローム・アンド・ハース社製）等や、ダイヤイ
オンＨＰ　−１０、　ＨＰ　−　２０、ＣＨＰ　−　２
０Ｐ、ＨＰ　−　５０　（　三菱化成（株）製）等が使
用される。マトリスタチンを含む液を上記のごとき吸着
剤の層を通過させて不純物を吸着させて取り除くか、ま
たはマトリスタチンを吸着させた後、メタノール水、ア
セトン水、ｎ−ブタノール水などを用いて溶出させるこ
とにより得られる。更にシリカゲル、フロリジルのよう
な坦体を用いた吸着カラムクロマトグラフィー、セファ
デックスＬＨ　−２０（ファルマシア社製）などを用い
た分配カラムクロマトグラフィー、セファデックスＧ　
２５　（ファルマシア社製）などを用いたゲルろ過クロ
マトグラフィー、および順相、逆相カラムを用いた高速
液体クロマトグラフィー等で本発明のマトリスタチンを
精製することが出来る。

【００５７】本発明は、マトリスタチンを有効成分とす
る、血管新生抑制剤、癌浸潤抑制剤又は癌転移抑制剤に
関するものである。

【００５８】本発明のマトリスタチンを、血管新生抑制
剤、癌浸潤抑制剤又は癌転移抑制剤として用いる場合、
種々の形態で投与される。その投与形態としては例えば
錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による
経口投与または注射剤（静脈内、筋肉内、皮下）、点眼
剤、座剤等による非経口投与を挙げることができる。こ
れらの各種製剤は、常法にしたがって主薬に賦形剤、結
合剤、崩壊剤、潤沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁
剤、コーティング剤等既知の医薬製剤技術分野において
通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することが
できる。その使用量は症状、年齢、体重、投与方法およ
び剤形等によって異なるが通常は成人に対して１日５０
　ｍｇ　乃至１０００　ｍｇ　を投与することができる
。

【００５９】

【実施例】次に実施例、及び製剤例をあげて本発明を更
に具体的に説明する。

【００６０】（実施例１）ＳＡＮＫ６１４８８　株の分
離オーストラリア国ダービー市より採取した土壌１　ｇ
　を９　　ｍｌ　の菌水に懸濁し、ミキサーで充分攪拌
し、約３０分間放置した。このようにして得られた土壌
懸濁液上清１　ｍｌ　を１０００倍希釈した後、その上
清０．０５　ｍｌ　を下記に示す分離用寒天培地ＨＡ培
地に滅菌コンラージ棒を用いて塗抹し２８℃にて１０日
間培養した。 　　　　　　　　　　ＨＡ培地 　　　　　　　　　　燐酸二水素ナトリウム　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　０．２　ｇ　　　　　　
　　　　塩化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　０．１　ｇ　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　硫酸第一鉄
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　０．１　ｇ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　硫酸マグネシウム　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１　ｇ　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　炭酸カルシウム　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　５．０　ｇ　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　フミン酸　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　２．０　ｇ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　寒天　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０．０　
ｇ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　───────────────────────
───　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
イオン交換水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　１０００　ｍｌ　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｐ
Ｈ（滅菌前）　　　　７．４　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　アク
チノマデュラ・アトラメンタリアＳＡＮＫ６１４８８　
株は上記のＨＡ寒天培地上に出現したコロニーからイー
スト麦芽寒天（ＩＳＰ２）の斜面培地に接種し、２８℃
で１４日間培養して得られた。

【００６１】このようにして得られた本菌株はモノコロ
ニー処理等により単一菌株であることを確認した。この
ようにして純粋培養された菌株は、分散剤に１０％スキ
ムミルクを用いた凍結乾燥アンプルとして保存した。

【００６２】（実施例２）マトリスタチンＡ１及びＡ２
の精製 （Ａ）　　　培　　　　　　養 アクチノマデュラ・アトラメンタリアＳＡＮＫ６１４８
８　株を、無菌的に、滅菌した後述の組成の種培養培地
７００　　ｍｌ　を含む２　ｌ　の三角フラスコ（種フ
ラスコ）に接種した。次いでこれを２８℃で８日間、２
００　ｒｐｍ　のロータリー振とう機で前培養した。更
に、同培地３０ｌ　を含む６０ｌ　タンクに、この種培
養液を６００　　ｍｌ　入れ、２８℃で２日間培養した
。 　　　　　　　　　　培地組成（種培養培地）　　　　
　　　　　　グルコース　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０　ｇ　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　グリ
セロール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　１０　ｇ　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　オートミ−ル　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　５　ｇ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　シュークロース　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　１０　ｇ　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｓ．Ｂ．Ｍ
．　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　２０　ｇ　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　カザミノ酸　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
　ｇ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　生イースト　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　１０　ｇ　　　　　　
　　　　イースト・エキストラクト　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　３　ｇ　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　炭酸カルシウム　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１　ｇ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　消泡剤（ニッサンディフォームＣＢ−４４２：
　　　　　　　　　　　　　　　　　　日本油脂（株）
）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２　ｇ
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　───
─────────────────────────
　　　　　　　　　　　　　　　　　　イオン交換水　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　１０００　ｍｌ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　ｐＨ　　　　　７．
０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　本培養は
後述の組成の培地（ＭＰ培地）を６００　ｌ　タンクに
３００　ｌ　入れ、これを１２０　℃で３０分間加熱殺
菌した。次いでこれに上述の種培養液を９　ｌ　入れ、
２８℃で５日間３００　ｌ　／分の空気流量で攪拌速度
を１００　ｒｐｍ　にして攪拌培養した。 　　　　　　　　　　培地組成（ＭＰ培地）　　　　　
　　　　　グルコース　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　５　ｇ　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　マルト
ース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　１５　ｇ　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　イースト・エキストラク
ト　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３　ｇ　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　フ
ァーマメディア　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　１０　ｇ　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　塩化ナトリウム　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３
　ｇ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　リン酸二カリウム　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　２　ｇ　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　消泡剤（ニッサン
ディフォームＣＢ−４４２）　　　　　　　０．２　ｇ
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　───
─────────────────────────
　　　　　　　　　　　　　　　　　　イオン交換水　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　１０００　ｍｌ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　ｐＨ　　　　７．
２　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（Ｂ）　
　　単　　　　　　離 ＩＶ型コラゲナーゼの阻害活性を測定することにより、
マトリスタチン　Ａ１　及びＡ２を単離精製した。

【００６３】ＩＶ型コラゲナーゼ活性は、Ｓａｌｏ等の
方法（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　ｖｏｌ．２５
８，　３０５８−３０６３，　（１９８３））を改良し
て測定した。すなわち、ＩＶ型コラゲナーゼはヒトメラ
ノーマ細胞の無血清培養液より調製し、また、基質とし
てマウスＥＨＳ　腫瘍よりＩＶ型コラーゲンを調製し３
Ｈ−無水酢酸で標識した。

【００６４】この酵素液及び基質液を、０．２Ｍ　Ｎａ
Ｃｌ　，　１０　ｍＭＣａＣｌ２　，　４　ｍＭ　　Ｎ
−エチルマレイミド，４０μｇ　／　ｍｌ　アプロチニ
ン，０．０５％Ｂｒｉｊ３５を含む５０ｍＭ　トリス塩
酸緩衝液に添加し、最終液量を０．１　　ｍｌ　として
３７℃て３時間反応させた。トリクロル酢酸（ＴＣＡ）
　を終濃度２％，タンニン酸を終濃度０．１　％となる
ように加えて反応を停止させ、４℃で３０分放置し、４
℃，１０，０００　ｒｐｍ　　で２０分間遠心した。こ
の上清の一定量にＩｎｓｔａ−ｇｅｌ　（パッカード社
製）１０　ｍｌ　を加えて放射活性を測定した。

【００６５】マトリスタチンの阻害活性は、上記反応液
に測定用のマトリスタチン溶液を添加して、同様の操作
を行い、放射活性を測定し、酵素反応の阻害率より求め
た。培養ろ液６００　ｌ　を６０ｌ　のダイヤイオンＨ
Ｐ−２０　に付し、２００　ｌ　のイオン交換水、１７
５　ｌ　の２０％アセトンで洗浄後、２９０　ｌ　の５
０％アセトンにて溶出し、３３０　ｇ　の黒色粉末を得
た。このうち、１５０　ｇ　を７．５　ｌ　のイオン交
換水に溶解し、等量のｎ−ブタノールを加え３０分間攪
拌した。４−５時間静置すると２層に分かれるので、上
層・下層を分離した。下層にはさらに６．５　ｌ　のｎ
−ブタノールを加えて再び抽出した。抽出液を合わせ、
濃縮・凍結乾燥し３５．６　ｇの濃緑色の粉末を得た。 この粉末を２００　　ｍｌ　の８０％メタノール−稀ト
リフルオロ酢酸（ＴＦＡ）　水溶液（ｐＨ３．５　）に
溶かし、不溶物はろ過により除去した。この溶液をセフ
ァデックスＬＨ２０（カラムサイズ：８．５　φ×７６
ｃｍ）に供与した。同じ溶媒で溶出し、溶出開始より１
．５　ｌ　から３００　　ｍｌ　ずつ分画し、２０の画
分を得た。各画分の酵素阻害活性を測定し、阻害活性の
強い５番目の画分を濃縮，凍結乾燥し、褐色粉末２．５
２　ｇを得た。この粉末をさらに調製用のＨＰＬＣで精
製した。すなわち、上記で得られた褐色粉末のうち約２
００　ｍｇを１．０　　ｍｌ　の３４％ＣＨ３ＣＮ　−
１％（ｖ／ｖ）　トリエチルアミンリン酸バッファー（
ｐＨ　３．３）　に溶解し、同じ溶媒で平衡化したＨＰ
ＬＣカラム（Ｓｅｕｓｈｕｐａｋ　ＯＤＳ　−５３０１
Ｎ，２０φ×３００　ｍｍ，センシュー科学（株）製）
に供与し、流速　　６．０　　ｍｌ　／分で溶出した。 示差屈折計でモニターし、２５分及び３２分に現われる
ピークに相当する溶出液を分取した。残りの褐色粉末に
ついても同様の操作を行い、分取した溶出液をプールし
た。それぞれの溶出液を減圧濃縮して、アセトニトリル
を留去し、この溶液をダイヤイオンＨＰ−２０カラムに
供与した。カラムをよくイオン交換水で洗浄したのち、
５０　ｍｌ　の５０％アセトンで溶出した。溶出液を濃
縮，凍結乾燥することにより、２５分のピークに対応す
る溶出液からはマトリスチンＡ１が７６　ｍｇ　，３２
分のピークに対応する溶出液からはマトリスタチンＡ２
の　　１１２　ｍｇの白色粉末が得られた。

【００６６】（実施例３）マトリスタチンＢ１の精製実
施例２で記載した方法によりＩＶ型コラゲナーゼ阻害活
性を測定することにより、マトリスタチンＢ１を精製し
た。

【００６７】実施例２（Ａ）　で記載した方法により培
養ろ液を調製した。培養ろ液を３０ｌ　のダイヤイオン
ＨＰ−２０に付し、１００　ｌ　のイオン交換水、９０
ｌ　の２０％アセトンで洗浄後、１５０　ｌ　の５０％
アセトンにて溶出し、凍結乾燥後２９．２　ｇの黒色粉
末を得た。これを１．５　ｇ　のイオン交換水に溶解し
、等量のｎ−ブタノールで２回抽出した。２回分の抽出
液をプールし濃縮・凍結乾燥し、５．２９　ｇの濃緑色
の粉末を得た。この粉末を４０　ｍｌ　の８０％メタノ
ール−稀ＴＦＡ　水溶液（ｐＨ　３．５）に溶かし、同
じ溶媒平衡化したセファデックスＬＨ（カラムサイズ：
６φ×４３　ｃｍ　）に供与した。同じ溶媒で約４２０
　　ｍｌ　溶出すると黄色の溶出液が溶出し始める。こ
の時点より５００ｍｌ　を採取した。このものを濃縮，
凍結乾燥して濃褐色の粉末４．４　ｇ　を得た。この粉
末を３回に分けて、３０％メタノールで平衡化したロー
バー・カラム（ＲＰ−８，サイズＢ，メルク社製）に供
与し、２００　　ｍｌ　の３０％メタノール、それぞれ
　　３００　　ｍｌ　の５０％、６０％、７０％、８０
％、９０％のメタノールで溶出した。７０％のメタノー
ル画分に酵素阻害活性が見い出されたので、このものを
濃縮，凍結乾燥し、３回の操作で１．１０　ｇの褐色粉
末を得た。

【００６８】この粉末を３等分し、それぞれ５０％メタ
ノールで平衡化したセファデックスＣ−２５（カラムサ
イズ２．８　φ×７０　ｃｍ）に供与し、約１滴／５秒
の流速で溶出し、３００　滴／画分ずつ採取した。５４
−５７　番目の画分を集め濃縮，凍結乾燥し、３６０　
ｍｇの黄色粉末を得た。このものを調製用ＨＰＬＣでさ
らに精製した。すなわち、１回の操作において約５０　
ｍｇ　の黄色粉末を０．２　　ｍｌ　の３８％ＣＨ３Ｃ
Ｎ　−　０．２　％トリエチルアミンリン酸バッファー
（ｐＨ　３．３）に溶解し、同じ溶媒で平衡化した。Ｓ
ｅｎｓｈｕ　ＰＡＫＯＤＳ　−　４２５１Ｎカラム（１
０φ×２５０　ｍｍ）　に供与して、流速５．０　　ｍ
ｌ　／分で溶出した。示差屈折計でモニターし、２２分
付近に現われるピークに相当する溶出液を採取した。残
りの粉末についても同様の操作を行い、採取した溶出液
をプールした。このものを減圧濃縮してアセトニトリル
を留去し、イオン交換水で平衡化した。約１０　ｍｌ　
のダイヤイオンＨＰ−２０に供与した。カラムをイオン
交換水でよく洗浄したのち、５０　ｍｌ　の５０％アセ
トンで溶出した。溶出液を減圧下において濃縮，凍結乾
燥し、７５　ｍｇ　の白色粉末のマトリスタチンＢ１を
得た。

【００６９】（実施例４）マトリスタチン　Ｄ１，　Ｅ
１，　Ｆ１　の精製 （Ａ）　培養 アクチノマデュラ・　アトラメンタリア　ＳＡＮＫ　６
１４８８　株を、無菌的に滅菌した後述の組成の種培養
培地　７００　ｍｌ　を含む　２ｌ　　の三角フラスコ
（種フラスコ）に接種した。ついでこれを　２８　℃で
　８　　日間、２００　ｒｐｍ　のロータリー振とう機
で前培養した。更に、同培地　３０　ｌ　を含む　６０
　ｌ　タンクに、この種培養液を　６００　ｍｌ　入れ
、２８℃　　で　　２日間培養した。

【００７０】 　　　　培地組成（種培養培地） 　　　　　　グルコース　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１０　ｇ　　　　
　　　グリセロール　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　１０　ｇ　　　　　　　オ
ートミール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　５　ｇ　　　　　　　シュークロ
ース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　１０　ｇ　　　　　　　大豆粉　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　２０　ｇ　　　　　　　カザミノ酸　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　５　ｇ　　　　　　　生イースト　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０　
ｇ　　　　　　　イースト・エキストラクト　　　　　
　　　　　　　　　　　　　３　ｇ　　　　　　　炭酸
カルシウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　１　ｇ　　　　　　　消泡剤（ニッサ
ンディスフォーーム　　　　　　　　　　　　　　ＣＢ
−４２２：　日本油脂（株））　　　０．２　ｇ　　　
　────────────────────────
──　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　イ
オン交換水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　１０００　　ｍｌ　　　　　　　　　　ｐＨ
　　７．０ 本培養は後述の組成の培地（ＭＢＧ３−７改変培地）を
　６００ｌ　タンクに　３００ｌ　入れ、これを１２０
　℃で３０分間加熱殺菌した。ついでこれに上述の種培
養液を　９ｌ　入れ、２８℃　　５　日間　３００　ｌ
／　分の空気流量で攪拌速度を　１００　ｒｐｍにして
攪拌培養した。 （Ｂ）単離 上述の培養で得た培養濾液を実施例１とまったく同様に
ダイヤイオンＨＰ２０ｎ−ＢｕＯＨ　　抽出、及びセフ
ァデックス　ＬＨ　２０　　で処理した。すなわち培養
濾液を６０　ｌ　のダイアイオン　ＨＰ　２０　　に吸
着し、２００　ｌ　のイオン交換水、１７５　ｌ　の　
２０％アセトンによる洗浄の後、２９０　ｌ　の　５０
％　　アセトンで溶出し、濃縮、凍結乾燥を行うことに
より　５４０　ｇ　　の黒色粉末を得た。この粉末を　
３０　ｌ　の水に溶解し、等量の　ＢｕＯＨ　で２回抽
出した。有機相を集め、濃縮凍結乾燥することにより１
５８．５ｇの濃緑色粉末を得た。この粉末を約１８ｇ　
ずつ　８０％　　メタノールートリフルオロ酢酸水溶液
　ｐＨ　３．５　に溶解し、同じ溶媒で平衡化したセフ
ァデックス　ＬＨ　２０クロマト（カラムサイズ：８．
５　φ　Ｘ　７６　ｃｍ）で精製し、実施例１で示した
分画を集めることにより褐色の凍結乾燥品　７３ｇ　　
を得た。この粉末を　　約　２５　ｇ　ずつ６４％　メ
タノール−　２％（ｖ／ｖ）　トリチエチルアミンリン
酸緩衝液　ｐＨ３．０　　に溶解し、同じ溶媒で平衡化
した大量分取用液クロカラム（カラム：　栗田工業製，
ＯＤＳ　１５　μ−　３０　μ，１０　φＸ３０　ｃｍ
，　流速：２００　　ｍｌ　／ｍｉｎ、検出：ＵＶ　２
３０　ｎｍ　）にチャージし、同じ溶媒で溶出した。溶
出液の酵素阻害活性を測定すると、約　１７　分付近、
及び約　２５　分付近に活性ピークが認められたので、
対応する溶出液を集め、それぞれを溶出順に　Ｙ　　成
分、Ｘ　成分とした。Ｙ　成分、Ｘ　成分の溶出液を濃
縮してメタノールを除き、得られた水溶液を　１００　
ｍｌ　　　のダイアイオン　ＨＰ　２０　　にチャージ
し、よく水洗した後に　８０％　　メタノールで溶出し
た。溶出液を濃縮、凍結乾燥し、Ｙ　成分より　　３．
８ｇ，　Ｘ　成分より３．２　ｇ　の粗粉末を得た。以
下、Ｘ　成分、Ｙ　成分の順に精製法について述べる。

【００７１】Ｘ　成分Ｘ　成分粗粉末　８００　ｍｇ　
を　５５％メタノール−　２％（ｖ／ｖ）　トリエチル
アミンリン酸緩衝液ｐＨ３．０　に溶解し、同じ溶媒で
平衡化した分取用液クロカラム（カラム：Ｓｅｎｓｈｕ
ｐａｋ　ＯＤＳ−５３０１Ｎ，２０φｘ３００　ｍｍ　
、流速　６　ｍｌ／ｍｉｎ　、検出：示差屈折計）にチ
ャージし、同じ溶媒で溶出した。溶出液の酵素阻害活性
を測定すると、約　２７分付近、及び約　３０　分付近
の示差屈折計で認められるピークに酵素阻害活性が認め
られたので、対応する溶出液を集め、それぞれを溶出順
に　Ｆ　　成分、Ｄ　成分とした。Ｄ　成分、Ｆ　成分
の溶出液を濃縮してメタノールを除き、得られた水溶液
を１００　　ｍ　ｌ　のダイアイオン　ＨＰ　２０　　
にチャージし、よく水洗した後に　８０％　　メタノー
ルで溶出した。溶出液を濃縮、凍結乾燥し、Ｄ　成分よ
り　２４　ｍｇの白色粉末を単一成分として得た。この
物質をマトリスタチン　Ｄ１　とした。一方、Ｆ　成分
より２４ｍｇの粉末を得たがこれは　ＨＰＬＣ　上で単
一ではなかったので、さらに以下のように精製した。こ
の粉末を　２７％　　アセトニトリル−２％（ｖ／ｖ）
トリチエチルアミンリン酸緩衝液ｐＨ３．０　に溶解し
、同じ溶媒で平衡化した分取用液クロカラム（カラム：
Ｓｅｎｓｈｕｐａｋ　ＯＤＳ−５３０１Ｎ，２０φｘ３
００　ｍｍ　、流速　６　ｍｌ／ｍｉｎ　、検出：示差
屈折計）にチャージし、同じ溶媒で溶出した。 溶出液の酵素阻害活性を測定すると、約　３１分付近の
示差屈折計で認められるピークに酵素阻害活性が認めら
れたので、対応する溶出液を集め、濃縮してアセトニト
リルを除去した。得られた水溶液中の活性物質をＳＥＰ
ＰＡＫ（Ｃ−１８，　ＥＮＶ　　タイプ、ｍｉｌｌｉｐ
ｏｒｅ　ｃｏｒｐ．　Ｌｔｄ．）に吸着し、８０％　メ
タノールで溶出した。溶出液を濃縮、凍結乾燥を行い、
単一成分の　　マトリスタチン　　Ｆ１を白色の粉末と
して１２　ｍｇ　　得た。

【００７２】Ｙ　成分Ｙ　成分粗粉末　１ｇ　を　２０
％アセトニトリル−　２％（ｖ／ｖ）　トリチエチルア
ミンリン酸緩衝液ｐＨ３．０　に溶解し、同じ溶媒で平
衡化した分取用液クロカラム（カラム：Ｓｅｎｓｈｕｐ
ａｋ　ＯＤＳ−５３０１Ｎ，２０φｘ３００　ｍｍ　、
流速６　ｍｌ／ｍｉｎ　、検出：示差屈折計）にチャー
ジし、同じ溶媒で溶出した。溶出液の酵素阻害活性を測
定すると、約　４６　分付近の示差屈折計で認められる
ピークに酵素阻害活性が認められたので、対応する溶出
液を集め、濃縮してメタノールを除き、得られた水溶液
を　１００　ｍｌ　のダイアイオン　ＨＰ　２０　　に
チャージし、よく水洗した後に　８０％　　メタノール
で溶出した。溶出液を濃縮、凍結乾燥し、８　ｍｇの粉
末を得た。この粉末を　　さらに　５０％　　メタノー
ル−２％（ｖ／ｖ）トリチエチルアミンリン酸緩衝液ｐ
Ｈ３．０　に溶解し、同じ溶媒で平衡化した分取用液ク
ロカラム（カラム：Ｓｅｎｓｈｕｐａｋ　ＯＤＳ−５３
０１Ｎ，２０φｘ３００　ｍｍ　、流速６　　ｍｌ　／
ｍｉｎ、検出：示差屈折計）にチャージし、同じ溶媒で
溶出した。溶出液の酵素阻害活性を測定すると、約　３
０　分付近の示差屈折計で認められるピークに酵素阻害
活性が認められたので、対応する溶出液を集め、濃縮し
てメタノールを除去した。得られた水溶液中の活性物質
をＳＥＰＰＡＫ（Ｃ−１８，　ＥＮＶ　　タイプ、ｍｉ
ｌｌｉｐｏｒｅ　ｃｏｒｐ．　Ｌｔｄ．）　に吸着し、
８０％　メタノールで溶出した。溶出液を濃縮、凍結乾
燥し、６　ｍｇ　　マトリスタチンＥ１を白色粉末とし
て得た。

【００７３】 （製剤例１）経口用カプセル剤 　　　　　　　　　　処　　　　　　方　　　　　　　
　マトリスタチンＡ１　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　３０　ｍｇ　　　　　　　　　乳糖　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　１７０　　ｍｇ　　　　　　　　
　　トウモロコシ澱粉　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　１４８．８　　ｍｇ　　　　　　　　　
　ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　　　　　　
　　　１．２　ｍｇ　　　　　　　─────────
──────────────────　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　３５０　ｍｇ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　上記処方の粉末を混合し、３０メッシュのふるいを
通した後、この粉末３５０　ｍｇをゼラチンカプセルに
入れ、カプセル剤とした。

【００７４】

【発明の効果】次に試験例を挙げて本発明の効果を説明
する。

【００７５】（試験例１）マトリスタチンのＩＶ型コラ
ゲナーゼに対する阻害活性実施例２及び３で得られたマ
トリスタチンについて、ＩＶ型コラゲナーゼに対する阻
害活性を測定した。結果（Ｉ５０　値で表わす）を以下
に示す。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式（Ｉ）で表わされる新規化合物マト
   リスタチン： 【化１】 （式中、Ｒ１は水素原子又は水酸基、Ｒ２は水素原子又
   はメチル基、Ｒ３は、式 【化２】 を有する基を示す。但し、Ｒ１が水酸基、Ｒ２がメチル
   基のときは、Ｒ３は、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ　）、（Ｉ
   Ｖ）又は（Ｖ）であり、Ｒ１が水素原子、Ｒ２がメチル
   基のときは、Ｒ３は、式（ＩＩ）であり、Ｒ１が水酸基
   、Ｒ２が水素原子のときは、Ｒ３は、式（ＩＶ）である
   。）
2. 【請求項２】アクチノマデュラ属に属するマトリスタチ
   ン生産菌。
3. 【請求項３】請求項２記載のアクチノマデュラ属に属す
   るマトリスタチン生産菌が、アクチノマデュラ・アトラ
   メンタリアＳＡＮＫ６１４８８株（微工研条寄第３３２
   ７号：ＢＰ−３３２７　）である菌。
4. 【請求項４】アクチノマデュラ属に属するマトリスタチ
   ン生産菌を培養し、その培養物よりマトリスタチンを採
   取することを特徴とするマトリスタチンの製造法。
5. 【請求項５】請求項４記載のアクチノマデュラ属に属す
   るマトリスタチン生産菌が、アクチノマデュラ・アトラ
   メンタリアＳＡＮＫ６１４８８株（微工研条寄第３３２
   ７号：ＢＰ−３３２７　）であるマトリスタチンの製造
   法。