JPH04356421A - プロスタグランジン類含有脂肪小体組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、プロスタグランジン類
（以下、ＰＧ類ともいう）の放出速度の抑制等を目的と
したＰＧ類を含有してなる脂肪小体組成物に関する。

【０００２】

【従来技術】ＰＧ類は、血管拡張、末梢循環改善、降圧
、抗脂肪分解、ナトリウム利尿など種々多彩な生理作用
を有することから、医薬品への適用がなされている。 この有用なＰＧ類を医薬品として適用する際には、生体
内で容易に不活性物質へ代謝されることと、病巣選択性
が問題となる。そのため、一般にＰＧ類製剤は瀕回投与
が必要となり、患者の苦痛を増すばかりでなく、頻回投
与に基づく目的以外の組織に対する作用が副作用となる
恐れがあり、これらの問題点の解決の手段としてＰＧ類
を脂肪小体に含有させた製剤が提案されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかし、ＰＧ類含有脂
肪小体製剤においても、組成物としての安定性が悪く、
一旦、脂肪小体に含有させたＰＧ類が遊離し、ＰＧ類の
活性の持続性に劣るなどの改善すべき問題点があり、様
々な検討が行われているが、未だ満足すべきＰＧ類含有
脂肪小体組成物は提案されていないのが実情である。従
って、本発明者らは脂肪小体からのＰＧ類の遊離が抑制
された脂肪小体組成物、即ち持続性を有する脂肪小体組
成物を提供することを目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】さて、脂肪小体二分子膜
は温度によってその流動性が大きく変化することが知ら
れている（ゲル−液晶相転位）。膜の流動性を変化させ
ることのできる因子には、温度の他脂質組成などが知ら
れているが、中でも、脂肪小体の形成に用いるジアシル
グリセロリン脂質やジアシルグリセロ糖脂質の脂肪酸残
基の鎖長や不飽和度を変えることにより、脂肪小体の膜
の流動性およびそれと密接に関連する膜のバリヤー能を
調節できることは興味深い。一般に、疏水性脂肪酸残基
の鎖長の短いものや、不飽和度の高い脂質で形成された
脂肪小体は膜流動性が高く、他方飽和で鎖長の長いもの
では膜流動性が低く、比較的相転移温度も高いことが知
られている（野島庄七、砂本順三、井上圭三編集「リポ
ソーム」（南江堂、１９８８年発行）。

【０００５】かかる技術水準の下に、本発明者らは種々
研究を重ねてきた結果、脂肪小体を形成するための脂質
をジアシルグリセロリン脂質、ジアシルグリセロ糖脂質
、アルキルグリセロリン脂質、アルキルグリセロ糖脂質
、リゾリン脂質の群から選び、該脂質がジアシルグリセ
ロリン脂質又はジアシルグリセロ糖脂質の際にはそのア
シル基が飽和脂肪酸由来であり、アルキルグリセロリン
脂質又はアルキルグリセロ糖脂質の際には、ジアルキル
型の場合、その両方のアルキル基が飽和炭化水素由来で
あり、アルキルアシル型の場合、アルキル基が飽和炭化
水素由来であり且つアシル基が飽和脂肪酸由来であり、
リゾリン脂質の際にはアシル型の場合、そのアシル基は
飽和脂肪酸由来であり、アルキル型の場合、そのアルキ
ル基は飽和炭化水素由来であるものを用いることにより
、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成す
るに至った。

【０００６】即ち本発明は、脂肪小体を形成するための
脂質として、ジアシルグリセロリン脂質、ジアシルグリ
セロ糖脂質、アルキルグリセロリン脂質、アルキルグリ
セロ糖脂質、リゾリン脂質の群から選ばれた少なくとも
一種の脂質を含有し、該脂質がジアシルグリセロリン脂
質又はジアシルグリセロ糖脂質の際には、そのアシル基
が飽和脂肪酸由来であり、アルキルグリセロリン脂質又
はアルキルグリセロ糖脂質の際には、ジアルキル型の場
合、その両方のアルキル基が飽和炭化水素由来であり、
アルキルアシル型の場合、アルキル基が飽和炭化水素由
来であり且つアシル基が飽和脂肪酸由来であり、リゾリ
ン脂質の際にはアシル型の場合、そのアシル基は飽和脂
肪酸由来であり、アルキル型の場合、そのアルキル型は
飽和炭化水素由来であることを特徴とするプロスタグラ
ンジン類含有脂肪小体組成物に関するものである。

【０００７】本発明において、脂肪小体（リポソーム）
は、多重同心二重層、単一層あるいは多重層の構造をな
し、各種蛋白質その他の生理活性物質をその間隙に取り
込む能力を有するものである。当該脂肪小体を形成する
ためのジアシルグリセロリン脂質とは、グリセロリン酸
を骨格として持つリン脂質のうち、１位及び２位に飽和
脂肪酸由来のアシル基が結合したものである。ホスファ
チジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジン
酸、ホスファチジルグリセリン、ホスファチジルエタノ
ールアミン、ホスファチジルイノシートルなどが挙げら
れる。ジアシルグリセロ糖脂質とは、親水性部分が糖質
である糖脂質のうち、１位及び２位に飽和脂肪酸由来の
アシル基が結合したものである。

【０００８】アルキルグリセロリン脂質においてジアル
キル型とは、グリセロリン酸を骨格として持つリン脂質
のうち、１位及び２位に飽和炭化水素由来のアルキル基
がエーテル結合したものである。アルキルアシル型とは
、１位又は２位の一方に飽和炭化水素由来のアルキル基
がエーテル結合し、他方に飽和脂肪酸由来のアシル基が
結合したものである。アルキルグリセロ糖脂質において
ジアルキル型とは、親水性部分が糖質である糖脂質のう
ち、１位及び２位に飽和炭化水素由来のアルキル基がエ
ーテル結合したものである。アルキルアシル型とは、１
位又は２位の一方に飽和炭化水素由来のアルキル基がエ
ーテル結合し、一方に飽和脂肪酸由来のアシル基が結合
したものである。

【０００９】リゾリン脂質においてアシル型とは、グロ
セロリン酸を骨格として持つリン脂質のうち、１位又は
２位の一方に飽和脂肪酸由来のアシル基が結合し、他方
には何も結合していないものであり、リゾホスファチジ
ルコリンなどが挙げられる。アルキル型とは、１位又は
２位の一方に飽和炭化水素由来のアルキル基がエーテル
結合し、他方には何も結合していないものである。

【００１０】ジアシルグリセロリン脂質及びジアシルグ
リセロ糖脂質のアシル基、アルキルグリセロリン脂質及
びアルキルグリセロ糖脂質のアルキルアシル型のアシル
基、リゾリン脂質のアシル型のアシル基は飽和脂肪酸由
来のものであれば直鎖状、分岐鎖状のいずれであっても
よい。また、ジアシルグリセロリン脂質及びジアシルグ
リセロ糖脂質の場合、２つのアシル基は同一の飽和脂肪
酸由来のものでもよく、また異なった飽和脂肪酸由来の
ものでもよい。

【００１１】アルキルグリセロリン脂質及びアルキルグ
リセロ糖脂質のジアルキル型のアルキル基、アルキルア
シル型のアルキル基、リゾリン脂質のアルキル型のアル
キル基は飽和炭化水素由来のものであれば、直鎖状、分
岐鎖状のいずれであってもよい。また、アルキルグリセ
ロリン脂質及びアルキルグリセロ糖脂質のジアルキル型
の場合、２つのアルキル基は同一の飽和炭化水素由来の
ものでもよく、また異なった飽和炭化水素由来のもので
もよい。

【００１２】上記のアシル基としては、好ましくは炭素
数１４〜２２のアルカノイル基が、またアルキル基とし
ては、好ましくは炭素数１４〜２２のアルキル基が例示
される。これらの脂質は生理的に許容され、そして代謝
されうる無毒のものであればいずれも本発明に用いられ
、それらは天然由来の脂質であってもよいし、公知の方
法にて人工的に合成したものでもよい。また、単一の脂
質を用いてもよいし、複数の脂質を組み合わせて使用し
てもよい。

【００１３】好ましい脂質としては、ジアシルグリセロ
リン脂質が挙げられ、より好ましい脂質はホスファチジ
ルコリンである。また、その際のアシル基は炭素数１４
〜２２の飽和脂肪酸由来のもの、例えばミリスチン酸、
パルミチン酸、ステアリン酸、エイコサン酸、ドコサン
酸由来のものが好ましい。脂質はＰＧ類１重量部当たり
、通常１０〜３０００重量部、好ましくは１５０〜２０
０重量部配合される。

【００１４】当該脂質の簡単な合成法としては、例えば
不飽和脂肪酸由来のアシル基や不飽和炭化水素由来のア
ルキル基を有する脂質に、公知の方法にて水素添加反応
を行うことにより、対応する飽和脂肪酸由来のアシル基
や飽和炭化水素由来のアルキル基を有する化合物に交換
する方法が挙げられる。なお、不飽和脂肪酸由来のアシ
ル基や不飽和炭化水素由来のアルキル基を有する脂質と
、本発明に用いる脂質とを、適宜の量比で組み合わせる
とＰＧＥ１の放出速度に変化を持たせることができる。 即ち、不飽和由来のものをより多くすれば、放出速度を
早める方向の製剤が提供でき、逆に不飽和由来のものを
より少なくすれば、放出遅延させる方向の製剤が提供で
きる。

【００１５】本発明で用いられるＰＧ類は、アラキドン
酸代謝物又はそれらの構造類似化合物であればよい。ア
ラキドン酸代謝物としては、例えばプロスタグランジン
、プロスタサイクリン、トロンボキサン、ロイコトリエ
ンなどが挙げられる。また、アラキドン酸代謝産物構造
類似化合物としては、例えばアラキドン酸代謝産物を基
本骨格とし構造修飾された６−ケト−ＰＧＥ１誘導体、
カルバサイクリン誘導体、ＰＧＤ２誘導体などが挙げら
れる。

【００１６】脂肪小体の製造の概略は、次の通りである
。即ち、適当な脂質を含有する溶液（当該溶液用の溶媒
としては、脂質を変成しない溶媒、例えばクロロホルム
等の溶媒を使用した溶液が例示される）から溶媒を留去
して脂質の薄膜を作り、この薄膜にＰＧ類を含有する溶
液を加えて激しく振とうし、好ましくは超音波処理を行
い、脂質を均一分散させて脂質薄膜懸濁液を調製する。 ここで、ＰＧ類を含有する溶液に使用される溶媒として
は脂肪小体を変成、分解せず、かつ生理的に許容される
ものであればよく、例えば水、生理食塩水、ｐＨ４〜７
の緩衝液などが挙げられる。勿論、ＰＧ類は脂肪小体調
製後に加えてもよい。

【００１７】本発明の脂肪小体の粒子径３μｍ以下とす
るためには、上記方法における超音波処理は、０℃〜７
０℃、好ましくは３５℃〜４５℃で１〜６０分間程度行
えばよい。また、均一なサイズ分布（２００ｎｍ）にま
でサイズをフィルター等を用いて減少させることができ
る。なお、脂質薄膜の調製に際し、トコフェロール（ビ
タミンＥ）、コレステロール、ホスファチジン酸、ジセ
チルホスフェート、バルミチン酸などの脂肪酸等を安定
化剤として添加してもよい。特にコレステロールは脂肪
小体の安定性に寄与するばかりでなく、後述の脂肪小体
にｐＨ勾配を付与する場合、その勾配の維持を容易にす
るためにも有利であり、好ましくはコレステロールを脂
質１モル当たり０．５〜１．０モル添加するのがよく、
更に好ましくは０．８モル程度添加するのがよい。

【００１８】上記の製造方法は超音波処理法による製造
法［Ｈｕａｎｇ，Ｃ．：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　
　８，３４４（１９６９）］であるが、これに限らず、
凍結融解法［Ｐｉｃｋ，Ｕ．：Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２１２，１８６（１９８１）］
、界面活性剤除去法［Ｂｒｕｎｎｅｒ，Ｊ．ｅｔ　　ａ
ｌ：Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ・Ａｃｔａ，４５
５，３２２（１９７６）］、逆相蒸発法　　［Ｓｚｏｋ
ａ，Ｆ．ｅｔ　　ａｌ：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７５，４１９４（１９７８）］、乳
化機による方法［Ｔａｌｓｍａ，Ｈ．ｅｔ　　ａｌ．：
Ｄｒｕｇ　　Ｄｅｖ．ａｎｄＩｎｄ．Ｐｈａｒｍａｃｙ
，１５，１９７（１９８９）］でも製造可能である。

【００１９】また、本脂肪小体にはｐＨ勾配を付与して
もよい。好ましくは脂肪小体外液のｐＨを２〜６、脂肪
小体内封溶液のｐＨを７〜１１、特にｐＨ９〜１０に調
整されたものがよい。更に好ましくは、脂肪小体内封溶
液のｐＨを弱酸と強塩基の組み合わせにてｐＨを７〜１
１に調整されたものがよい。脂肪小体外液は、各種公知
の緩衝剤、例えばクエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、乳酸緩
衝液などによりｐＨ２〜６に調整する。特に好ましい外
液としてはクエン酸緩衝液が挙げられ、好ましいｐＨは
２〜６、更に好ましくはｐＨ３〜５である。緩衝液濃度
は、通常５〜５００ｍＭ、好ましくは２０〜３００ｍＭ
であり、浸透圧を調節するために庶糖等を加えてもよい
。

【００２０】脂肪小体内封溶液は、好適には弱酸と強塩
基にてｐＨ７〜１１に調整する。弱酸と強塩基の組み合
わせとしては、炭酸と炭酸ナトリウム、リン酸とリン酸
ナトリウム、ホウ酸とホウ酸ナトリウム、ピロリン酸と
ピロリン酸ナトリウムなどが挙げられる。特に好ましく
は炭酸と炭酸ナトリウムにて、ｐＨ９〜１０に調整され
たものが例示される。緩衝液濃度は、通常１００〜１０
００ｍＭ、好ましくは５００〜６００ｍＭである。

【００２１】また、本発明製剤はアルブミン、デキスト
ラン、ビニル重合体、非イオン性界面活性剤、ゼラチン
、ヒドロキシエチル澱粉から選ばれた高分子物質を安定
化剤として配合してもよい。当該高分子物質安定化剤は
、ＰＧ類と共に脂肪小体内の空隙に取り込まれていても
よいし、またＰＧ類を取り込んだ脂肪小体製剤に配合（
即ち、脂肪小体外に配合）してもよい。もちろん脂肪小
体の内外ともに配合してもよいことはいうまでもない。 当該安定化剤の添加量は脂質１重量部に対して０．５〜
１０重量部、好ましくは１〜５重量部である。

【００２２】また、糖類の添加は、浸透圧の調整および
、後述する凍結乾燥製剤を調製する際に有利である。 かかる糖類としては、単糖類（グルコース、マンノース
、ガラクトース、果糖等）、二糖類（ショ糖、麦芽糖、
乳糖等）、糖アルコール（マンニット、ソルビット、キ
シリット等）が好適なものとして例示されるが、これら
に限定されるものではない。その添加量は脂質１重量部
に対して０．５〜１０重量部、好ましくは１〜５重量部
である。

【００２３】上記製造方法により直径が約０．０２〜１
μの範囲のＰＧ類含有脂肪小体を含む粒子を提供でき、
ＰＧ類はほぼ完全に脂肪小体に取り込まれるため遊離物
の除去操作も不要である。このものは次いで、ペレット
状、懸濁状製剤として調製する。製剤化は医薬品の製法
において広く公知の方法に準ずる。かくして得られたＰ
Ｇ類含有脂肪小体組成物は、ＰＧ類の脂肪小体からの遊
離を優位に抑制し、しかもその粒子径は均一であり、極
めて微少であることから医療用製剤として好ましい。

【００２４】また本脂肪小体は、液状製剤を凍結させた
後、減圧下で乾燥させ、凍結乾燥製剤としても提供され
るが、その調製法は公知の方法に従えばよい。本発明の
脂肪小体は、一般的に経口薬又は注射薬として使用され
、その投与量は成人の場合、ＰＧ類として１〜５０μｇ
、０．０２〜１ｎｇ／１ｋｇ／１回の量において投与さ
れる。凍結乾燥製剤は、その使用時に生理的に許容され
る水性溶媒によって溶解又は希釈して用いられるのが一
般的であるが、製剤上の工夫によって錠剤化、カプセル
化、腸溶性カプセル化してもよい。

【００２５】

【実施例・実験例】以下の実施例および実験例は、特に
言及しない限り各々次の要領で行った。 １．脂肪小体の製造法（凍結乾燥融解法によるｐＨ勾配
を有する脂肪小体の製造法）：ジパルミトイルホスファ
チジルコリン（以下、ＤＰＰＣと略す：シグマ社製）７
０ｍｇとコレステロール（以下、ＣＨＯＬと略す：シグ
マ社製）３０ｍｇ（モル比５５：４５）を混合する。こ
の混合物をクロロホルム１ｍｌに溶解した後、２５ｍｌ
容の梨型フラスコに入れ、ロータリーエバポレータでク
ロロホルムを留去し、脂質薄膜を調製した。内壁に脂質
薄膜を形成したフラスコをデシケーターに入れ真空ポン
プで１時間吸引した。次に、フラスコに第１の緩衝液（
脂肪小体内封溶液と同組成）を１ｍｌ加え、ボルテクス
・ミキサーで攪拌して脂質懸濁液（ＭＬＶ）を調製した
。

【００２６】次に、ドライアイス上で凍結後、３７℃温
浴中で融解するという操作を５回繰り返し、脂肪小体（
ＬＵＶ）を調製した。

【００２７】次に、０．２μｍのＮｕｃｌｅｐｏｒｅフ
ィルター（ＣｏｓｔａｒＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用
いて１０回濾過を行い、粒子径を均一にした。次に前記
調製に用いたのと同じ緩衝液３ｍｌに脂肪小体１００μ
ｌを加えたサンプルに、第２の緩衝液〔脂肪小体外液と
同組成、８００ｍＭ蔗糖含有２０ｍＭクエン酸（ｐＨ３
．０）を使用〕を５ｍｌ加え、超遠心（５００００ｒＰ
ｍ、３０分間）を２回行い、膜透過ｐＨ勾配を有した脂
肪小体を調製した。次に、風乾したＰＧ類に上記脂肪小
体を加え６０℃、１０分間インキュベーションした。 以上の工程によりＰＧ類含有脂肪小体を調製した。なお
、ＭＬＶは多重ラメラ小胞を、ＬＵＶは粒子径の大きな
単層ラメラ小胞を示す。

【００２８】２．ＰＧ類の封入効率の測定：トリチウム
標識ＰＧ類を利用して、限外濾過法にて測定した。即ち
、限外濾過膜（Ａｍｉｃｏｎ製ＡＰ−１）上に捕捉され
たＰＧ類を脂肪小体に取り込まれたＰＧ類とし、限外濾
過膜を通過したＰＧ類をフリーのＰＧ類とした。そして
、全体のＰＧ類に対する捕捉されたＰＧ類の割合を以て
ＰＧ類の封入効率とした。即ち、ＰＧ類の封入効率は、
図１に示した如き手法を経て、限外濾過膜の放射活性お
よび濾液の放射活性を各々測定し、下式によって求めた
ものである。（限外濾過膜の放射活性）÷（限外濾過膜
の放射活性＋濾液の放射活性）×１００（放射活性の測
定）サンプリングした液１００μｌに液体シンチレータ
ー１０ｍｌを加え、良く攪拌した後、放射活性を測定し
た。

【００２９】３．リン脂質（ＰＣ）の定量：リン脂質測
定用試薬（酵素剤）（デンカ生研社製）を用いて測定し
た。

【００３０】実施例１・実験例１ 封入効率の検討：ＰＧ類として、ＰＧＥ１を使用し、前
記脂肪小体の製造法に準じて製造した脂肪小体であって
、内封溶液５００ｍＭ炭酸（ｐＨ１０．０）、外液８０
０ｍＭ庶糖含有２０ｍＭクエン酸（ｐＨ３．０）とし、
脂肪小体へのＰＧＥ１の封入効率を調べた。その結果は
図２に示した通りである。なお、ＰＧＥ１５μｇに対し
、脂肪小体をＰＣ量として０．０７５ｍｇ使用し、２５
℃でインキュベーションした。また、ＥＰＣは卵黄ホス
ファチジルコリンのことであり、ＥＰＣ／ＣＨＯＬリポ
ソームはＤＰＰＣ／ＣＨＯＬリポソームと同様の方法に
て調製した。

【００３１】図２の結果から明らかなように、ＥＰＣ／
ＣＨＯＬの組成の脂肪小体は２０分間インキュベーショ
ンするとＰＧＥ１の封入効率は６０％に達し平均値であ
る７０％にほぼ等しくなった。これに対し、ＤＰＰＣ／
ＣＨＯＬの組成の脂肪小体は６０分間インキュベーショ
ンしてもＰＧＥ１の封入効率は４０％であり、７０％の
平均値になるには４時間を要した。これは膜の流動性が
ＰＧＥ１の脂肪小体への取り込み速度に多大な影響を与
えていることを意味する。

【００３２】実施例２・実験例２ 脂肪小体へのＰＧＥ１の保持能に及ぼす希釈の影響：Ｐ
Ｇ類として、ＰＧＥ１を使用して前記脂肪小体の製造法
に準じてｐＨ勾配法にて、ＰＧＥ１５μｇに対し脂肪小
体のＰＣ量として７．５ｍｇを用いて脂肪小体を製造し
た。なお、ＥＰＣ／ＣＨＯＬは２５℃、１時間、ＤＰＰ
Ｃ／ＣＨＯＬは６０℃、１０分間のインギュベーション
で脂肪小体へＰＧＥ１を封入した。次に、この脂肪小体
を８００ｍＭ庶糖含有２０ｍＭクエン酸で１０倍および
１００倍希釈し、脂肪小体へのＰＧＥ１保持率を求めた
。かくして、脂肪小体へのＰＧＥ１の保持能に及ぼす希
釈の影響を調べ、その結果を図３に示した。なお、本測
定においては希釈後、直ちに限外濾過（２０℃）に付し
た。図３の結果から明らかなように、１００倍希釈する
と、ＥＰＣ／ＣＨＯＬに比べＤＰＰＣ／ＣＨＯＬの方が
ＰＧＥ１保持率は高かった

【００３３】実施例３・実験例３ 脂肪小体へのＰＧＥ１の保持能に及ぼす希釈の影響：Ｐ
Ｇ類として、ＰＧＥ１を使用し、前記脂肪小体の製造法
に準じてｐＨ勾配法にて構成脂質の異なる２種の脂肪小
体を製造し、これを８００ｍＭ庶糖含有２０ｍＭクエン
酸緩衝液にて２００倍希釈後、３７℃インキュベーショ
ンして脂肪小体のＰＧＥ１保持能を調べた。その結果は
図４に示した通りである。なお、ＰＧＥ１５μｇに対し
脂肪小体のＰＣ量を０．７５ｍｇとした。希釈前は両脂
肪小体のＰＧＥ１封入効率はＥＰＣ／ＣＨＯＬが９８．
９％、ＤＰＰＣ／ＣＨＯＬは９７．６％であった。この
ものを２００倍希釈するとＥＰＣ／ＣＨＯＬのＰＧＥ１
保持率は３２．８％となり、これに対しＤＰＰＣ／ＣＨ
ＯＬのＰＧＥ１保持率は５２．７％となり、３７℃で４
時間インキュベーションしても、この差は維持されてい
た。

【００３４】実施例４・実験例４ 脂肪小体からのＰＧＥ１の放出性：ＰＧ類として、ＰＧ
Ｅ１を使用し、前記脂肪小体の製造法に準じてｐＨ勾配
法にて脂肪小体を製造した。なお、ＰＧＥ１５μｇに対
して脂肪小体のＰＣ量は７．５ｍｇとした。かくして製
造された脂肪小体を、各緩衝液〔２０ｍＭクエン酸緩衝
液（ｐＨ４．５）、１００ｍＭへペス緩衝液（ｐＨ７．
４）、２０％ヒト血清アルブミン含有１００ｍＭヘペス
緩衝液（ｐＨ７．４）〕で１７倍希釈し、ヒト血清アル
ブミン（ＨＳＡ）存在下における、脂肪小体からのＰＧ
Ｅ１の放出性、即ち脂肪小体へのＰＧＥ１保持能を庶糖
密度勾配遠心法で調べた。

【００３５】実施例５・実験例５ ｐＨ勾配を持たないリポソームからのＰＧＥ１の放出性
ＰＧ類としてＰＧＥ１を用い、脂質として水素添加ホス
ファチジルコリン（以下Ｈ−ＥＰＣと略す）７００ｍｇ
を用い、前記脂肪小体（リポソーム）製造法に準じて製
造した脂肪小体であって、内封溶液、外液とも８００ｍ
Ｍ蔗糖を含有する２０ｍＭクエン酸（ｐＨ４．５）とし
、脂肪小体０．５ｍｌ中のＰＣ量７．５ｍｇに対してＰ
ＧＥ１５μｇを混合し、６０℃で１分間加熱した。この
リポソームをＨ−ＥＰＣリポソームとする。対照として
実施例２で調製したｐＨ勾配を持つＥＰＣ／ＣＨＯＬリ
ポソームを用いて、両者を８００ｍＭ蔗糖を含有する２
０ｍＭクエン酸（ｐＨ４．５）で２０００倍希釈し、３
７℃でインキュベーションして、経時的に脂肪小体中の
ＰＧＥ１保持率を調べた。その結果を図６に示した。 図６の結果から明らかなように、ｐＨ勾配を持たないＨ
−ＥＰＣリポソームの方がｐＨ勾配を持つＥＰＣ／ＣＨ
ＯＬリポソームよりＰＧＥ１の放出速度が遅かった。

【００３６】〔蔗糖密度勾配遠心法〕蔗糖で密度勾配を
設けた中にリポソームを加え、リポソームに封入された
ＰＧ類とフリーのＰＧ類を分離するものである。本法を
適用することにより、限外濾過法では分析が不可能なリ
ポソームのＰＧＥ１保持能に及ぼす蛋白質（例えばヒト
血清アルブミン（ＨＳＡ））の影響も調べることができ
る。本方法は具体的に以下の通りである。超遠心用チュ
ーブ中で０．８Ｍ蔗糖を含むバッファー８００μｌに分
析すべきリポソームサンプル５０μｌを加える。ｐＨを
変えたり、ＨＳＡを加えたりした分析すべきバッファー
８００μｌにリポソームサンプル５０μｌを加え、最終
蔗糖濃度を８００ｍＭに調整する。この液を超遠心用チ
ューブに入れ、この上から５００ｍＭ蔗糖含有２０ｍＭ
クエン酸バッファーを４．１５ｍｌ、静かに重層する。 次に２３０，０００ｇで１６時間、４℃下で超遠心処理
する。超遠心終了後、底部から１ｍｌ／フラクションで
分取する。そして全体のＰＧ類に対する上層３ｍｌのＰ
Ｇ類の割合をもってＰＧ類の封入効率とした。その結果
から明らかなように、ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液で希
釈した場合に較べ、ｐＨ７．４のへペス緩衝液で希釈す
ると２種の脂肪小体はともに多少ＰＧＥ１保持率が低下
した。２０％ＨＳＡを含有するへペス緩衝液で希釈する
と、ＥＰＣ／ＣＨＯＬ脂肪小体のＰＧＥ１保持率が３０
．２％であるのに対し、ＤＰＰＣ／ＣＨＯＬ脂肪小体の
ＰＧＥ１保持率は５２．６％と２０％以上高かった。

【００３７】

【発明の効果】本発明の脂肪小体組成物は、脂肪小体か
らのＰＧ類の遊離が抑制され、持続性を有するという特
有の効果を有するものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】分析に用いた限外濾過の原理図である。

【図２】膜流動性のＰＧＥ１の保持能への影響を示すグ
ラフである。

【図３】脂肪小体へのＰＧＥ１の保持能に及ぼす希釈の
影響を示すグラフである。

【図４】脂肪小体へのＰＧＥ１の保持能に及ぼす希釈の
影響を示すグラフである。

【図５】脂肪小体からのＰＧＥ１の放出性を示すグラフ
である。

【図６】脂肪小体からのＰＧＥ１の放出性を示すグラフ
である。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　脂肪小体を形成するための脂質として
   、ジアシルグリセロリン脂質、ジアシルグリセロ糖脂質
   、アルキルグリセロリン脂質、アルキルグリセロ糖脂質
   、リゾリン脂質の群から選ばれた少なくとも一種の脂質
   を含有し、該脂質がジアシルグリセロリン脂質又はジア
   シルグリセロ糖脂質の際には、そのアシル基が飽和脂肪
   酸由来であり、アルキルグリセロリン脂質又はアルキル
   グリセロ糖脂質の際には、ジアルキル型の場合、その両
   方のアルキル基が飽和炭化水素由来であり、アルキルア
   シル型の場合、アルキル基が飽和炭化水素由来であり且
   つアシル基が飽和脂肪酸由来であり、リゾリン脂質の際
   にはアシル型の場合、そのアシル基は飽和脂肪酸由来で
   あり、アルキル型の場合、そのアルキル型は飽和炭化水
   素由来であることを特徴とするプロスタグランジン含有
   脂肪小体組成物。
2. 【請求項２】　　脂肪小体を形成するための脂質が、ジ
   アシルグリセロリン脂質である請求項１記載の組成物。
3. 【請求項３】　　飽和脂肪酸が炭素数１４〜２２である
   請求項１又は請求項２記載の組成物。
4. 【請求項４】　　脂肪小体外液のｐＨを２〜６、脂肪小
   体内封溶液のｐＨを７〜１１に調整された請求項１〜３
   のいずれかに記載の組成物。
5. 【請求項５】　　脂質として、脂質化合物中におけるア
   シル基が不飽和脂肪酸由来の脂質化合物、アルキル基が
   不飽和炭化水素由来である脂質化合物を併用してなる請
   求項１〜４のいずれかに記載の組成物。