JPH0443912B2 - - Google Patents

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【発明の詳細な説明】

本発明は記号CL1565−Ａ、CL1565−Ｂ及び
CL1565−Ｔで示される抗腫瘍剤である新規のリ
ン含有抗生物質及び同属物質に関すると共にこれ
ら諸物質の製薬学的に許容され得る塩類、それら
の製造方法並びに該諸物質の用法にも関連する。
更に詳細には本物質の製法は本発明のCL1565複
合物製造のための単離菌株であつて寄託番号
ATCC31906を有するストレプトミセス属の菌株
（Streptmyces sp.）の使用による発酵法に関す
る。CL1565抗生成分の３種即ちCL1565−Ａ、
CL1565−Ｂ及びCL1565−Ｔの化学構造は夫々式
１、2a及び2bで示される。 １ CL1565−Ａ 2a R₁＝R₂＝Ｈ；CL1565−Ｂ2b R₁＝R₂＝OH；CL1565−Ｔ 式１、2a及び2bとしてCL1565−Ａ、CL1565−
Ｂ及びCL1565−Ｔに夫々与えられた化学構造式
は本件出願の日までに発明者に認識された該物質
の構造の最良の表現である。該構造はCL1565−
Ａ、Ｂ及びＴ並びに該誘導体の或物の物理的及び
分光学的特性の比較により得られたものである。
その他の物理測定から得られる成績例えばＸ線結
晶学にもとづく成績は式１、2a及び2bで示され
る構造を将来修正させるかも知れない。しかし将
来修正される可能性のある化学構造式のいずれの
ものも本発明の範囲内に包含される。更に本発明
は腫瘍疾患の治療における本発明の上記諸化合物
の各種の塩を単独で又は他の抗腫瘍剤と組合せて
含有する製薬学的組成物に関するものである。 本発明に従いCL1565複合物を産性するストレ
プトミセス属菌株であつて単離菌株として寄託番
号ATCC31906をもつ菌株を選択して実質量の
CL1565化合物又は化合物類（特にCL1565−Ａ、
CL1565−Ｂ及びCL1565−Ｔ）が産生されるまで
適宜の栄養培地中で人為的諸条件下にこれを培養
し１種又は複数種の該化合物を遊離酸又は塩の形
で単離することによりCL1565の諸化合物が製造
される。 本発明の目的に適するストレプトミセス属菌株
はブラジル国サンパウロで採取された土壌試料中
に発見された。該微生物は適切な寒天平面培地の
使用により該土壌試料から単離された。この培地
の一例は塩類例えばリン酸カリウム、硫酸マグネ
シウム及び硫酸第一鉄並びに炭素化合物例えばグ
リセリン及びアスパラギンを含有する培地であ
る。土壌試料を寒天培地上に置く前にこれを炭酸
石灰で予備処理し、好適温度特に24℃に恒温保持
して土壌微生物を繁殖させる。 単離されたCL1565複合物産生菌はストレプト
ミセス属の未同定の菌株であつてアメリカンタイ
プカルチユアコレクシヨン（American Type
Culture Collection、Rockville、
Maryland20852）に寄託されATCC31906として
その永久的寄託期間に保管されている。CL1565
−Ａ及びその同属物質の該産生菌はウオルナ−ラ
ンベルト培養研究所（Warner−Lambert／
Parke−Davis Culture Laboratory）で凍結管、
低温壜及び土壤管の中に休眠培養物として保管さ
れ単離菌WP−426と表示されている。 抗腫瘍性化合物CL1565−Ａ及び“CL1565−Ｂ
並びにCL−1565−Ｔを包含する近縁同属物質”
は単離近WP−426の制御された条件下の通気発
酵により産生される。発酵用培地は炭素源、チツ
素源、無機質及び成育因子から成る。炭素源の諸
例は各種の単純糖例えばセレロース（cerelose）、
マンノース、フラクトース、キシロース、リボー
ス及びグリセリン或は他の炭化水物含有物質例え
ばデキストリン、デンプン、トウモロコシ粉及び
乳清である。炭素源の常用量は0.1〜10重量％に
変化し得る。 チツ素源は有機、無機又は混合有機−無機性源
である。該化合物の諸例は綿実粉、大豆粉、トウ
モロコシ胚芽粉、トウモロコシ水浸液（corn
steep llquor）、デイスチラース ソリユブルス
（distillers solubles）、落花生粉、ペプトン化乳
及び各種アンモニウム塩である。通常の添加量は
0.1〜５％に変化し得るけれどもこれ以上の高量
も又許容される。 発酵培地中への無機物及び成育因子の添加は
CL1565−Ａ及びその同属物質の産生をも助長す
る。無機質を供給する培地成分の諸例はリン酸カ
リウム、塩化ナトリムウム、硫黄第一鉄、炭酸カ
ルシウム、塩化コバルト及び硫酸亜鉛である。成
育因子源は各種のイースト及び乳製品を包含す
る。 CL1565−Ａ及び同属物質の好適産生法は深部
培養発酵法である。本発明の一態様に従えば発酵
用諸成分を溶液としこれを加圧加熱又は蒸気加熱
により滅菌する。水性培地のPHは４〜８が好適で
ある。この発酵用培地を適温即ち16〜45℃に冷却
して適宜の培養物を接種する。通気撹拌下に発酵
させるとCL1565−Ａ及びその同属物質の最高産
生は通常２〜10日間で達成される。CL1565−Ａ
及び同属物質の産生のための固体状態の発酵をも
又使用し得る。 深部培養法においては振盪フラスコ又は静置発
酵槽の中で発酵を行う。振盪フラスコの場合には
フラスコを振盪して培地と空気とを混合すること
により通気を行う。静置発酵槽の場合にはデイス
クタービン、羽根付円盤、開放型タービン又は船
舶用プロペラーの形状の羽根車の使用下の撹拌を
行う。空気又は酸素の発酵混合物中への吹込によ
つても通気が行われる。 下記の諸例は諸製品即ちCL1565−Ａ及び同属
物質を製造する好適方法の例示である。 例 １ 種菌増殖及び振盪フラスコ発酵 休眠中の培養物をCIM−23斜面寒天培地へ移
植し28℃に７〜14日間恒温保持する。斜面培養物
の一部を５mlのARM1550種菌用培地を入れた18
×150mmの種菌用管に接種する。この種菌用管を
24℃に３〜４日間振盪する。 CIM23斜面寒天培地 アミデクス（商標名）（Amidex）トウモロコシ
デンプン 10ｇ Ｎ−Ｚアミン（Ａ型） ２ｇ 牛肉エキス〔デイフコ（Difco）〕 １ｇ イーストエキス〔デイフコ〕 １ｇ 塩化第一コバルト六水化物 0.020ｇ 寒 天 20ｇ 蒸留水 1000ml ARM1550倍地 ％ バクト（商標名）−イーストエキス〔Bacto−
Yeast Extract（Difco）〕 0.5 グルコース−水化物 0.1 可溶性デンプン〔デイフコ〕 2.4 バクト−トリプトフアン〔Bacto−Tryptone
（Difco）〕 0.5 バクト牛肉エキス〔Bacto−Beef Extract
（Difco）〕 0.3 CaCO₃ 0.2 注：CaCO₃添加前にNaOHでPHを7.5に調整する 種菌管から成育微生物の一部（１ml）をとり、
これを50mlにSM64製造用倍地を入れた300ml容
邪魔板付きエルレンマイヤ型振盪フラスコへ移
す。接種後のフラスコを180RPMにセツトされた
回転振盪機（2″throw）を用いて振盪しながら24
℃に５日間恒温保持する。５日間の発酵後の発酵
液は黄褐色を呈し、菌糸体は粒状で発酵液のPHは
約5.5である。 SM64製造用倍地 乳清〔クロゲル乳業（Kroger Dairy）〕
35.0容量％ デキストリン〔アミデクス（Amidex B411）〕ア
メリカトウモロコシ 1.5重量％ フアルマメデイア〔Pharmamedia（Traders
Protein）431307〕 1.5重量％ 蒸留水 注：NaOHでPH6.5に調整する。 CL1565−Ａ及び同属物を含有する発酵液の
１：100希釈液についてL1210マウス白血病細胞
に対しインビトロで試験する。L1210細胞対照と
比較したとき細胞の０〜50％成育は活性を有する
ことを示し、０％ならば最も活性である。２回の
実験的振盪フラスコ発酵における細胞障害性は下
表の通りであつた。

【表】 上記の発酵液について寒天円形培地使用により
数種の微生物に対して試験した。粗発酵液はナイ
セリア カタラリス（Neisseria catarrhalis
03569）、スタイロコクス アウレウス
（Staphylococcus aureus02482）、バチルス ス
ブチリス（Bacillus subtilis04555）、クレケラ
ブレビス（Kloeckera brevis M1378）、ロドト
ルラグルチニス（Rhodotorula glutinls
M1384）、サツカロミセス セレビジエ
（Saccharomyces cerevisiae01525）及びペニシ
リウム アベラウム（Penicilllum avellaneum
M2988）に対し活性であることが見出された。 例 ２ 200ガロン（757）容発酵槽による発酵 (A)種菌増殖 約１mlの培養物懸濁物を含有する低温壜を接
種源として用いる。この低温壜内容物を融解さ
せてこれを500mlのSD−05種菌用倍地を有する
２容の邪魔板付きエルレンマイヤフラスコへ
無菌的に移した。接種後のフラスコを130RPM
の速度の回転振盪機上で24℃に46〜48時間恒温
保持した。 SD−05種菌用培地 ％ アンベレクス〔Amberex×1003（Amber
Labs）〕 0.5 グルコース−水化物〔セレロース（Cerelose）〕
0.1 デキストリン−アミデクス（商標名）
〔Dextrin−Amidex B411（Corn Products）〕
2.4 Ｎ−Ｚケース〔Ｎ−ZCase（Humko
Sheffield）〕 0.5 噴霧乾燥肉溶解物〔Spray Dried Meat
Solubles（Daylln Labs）〕 0.3 CaCO₃ 0.2 蒸留水 恒温保持48時間後に種菌フラスコ内容物を16
のSD−05種菌用培地を有する30容不銹鋼
発酵器へ無菌的に移し入れる。接種後の発酵器
を300RPMの撹拌下に速度1VVMで空気を通
入しながら24℃に18〜24時間恒温保持する。こ
の成育微生物を200ガロン（757）容の製造用
発酵槽へ接種するために使用する。 (B)発酵槽による製造 SM64培地の160ガロン（606）を入れた
200ガロン（757）容の発酵槽を121℃で40分
間蒸熱殺菌する。この培地を24℃に冷却してか
ら30容種菌発酵器からの約16の成育微生物
を接種する。接種済み培地を撹拌速度
190RPM、通気1VVMで24℃に５〜７日間発
酵させる。消泡剤としてダウコーニングＣ
（Dow Corning“Ｃ”）及びポリグルコール
（polyglycol Ｐ−2000）を用いて起泡を制御す
る。 発酵サイクルの全般にわたりCL1565−Ａ及
び少くとも２種の関連抗腫瘍性抗物質即ち
CL1565−Ｂ及びCL1565−Ｔの産生状態を監視
するがそれには発酵パラメータ例えばPH及び沈
積物又は増殖物の百分率を記録し、又L1210マ
ウス白血病細胞に対する試験管内検査を行い、
そして高圧液体クロマトグラフ処理（後記参
照）を施す。200ガロン（757）容発酵槽によ
る発酵状況の一例を下表に示す。

【表】

【表】 発酵142時間後に発酵槽からの収量（容積）は
140ガロン（530）であつた。 例 ３ CL1565−Ａの単離 前記の発酵により得られた発酵済み液に34Kgの
セライト（Cerite545）（商標名）を混合して板
及び枠付きフイルタープレスを通して過した。
液（473）を120の樹脂HP−20（商標名）
〔HP−20resln（Gillies International，Inc，La
Jolla，California）〕を有する30.5cm〔O.D.〕コ
ラムを通して過（percolate）した。次にこの
樹脂を水（605）及び水：メタノール（90：10）
混液（170）で洗つた。次いで水：メタノール
（80：20）根液によりCL1565−Ａの大部分を樹脂
から溶出させた。溶出物について高圧液体クロマ
トグラフ分析（HPLC）（後記参照）を行うと下
表の溶出状態が示された。

【表】 溶出＃２及び＃３を個別に濃縮して凍結乾燥す
ると夫々90.2ｇ及び78.7ｇの暗褐色固体を与え
た。これらの生成物を一緒にして３の水にとか
し、得られた溶液を27のメタノールに対し撹拌
しながら加えた。一夜５℃に放置してからこの混
合物をして沈殿を５のメタノールで洗つた。
液と洗浄液とを合併し真空中で濃縮し凍結乾燥
すると104.5ｇの固体を生じた。この生成物の一
部（95ｇ）に水1.5を加えてこれを17の１−
プロパノールに対し徐々に撹拌下に加えた。得ら
れた混合物を１時間後に過し沈殿を２の１−
プロパノールで洗つた。液と洗液とを合して濃
縮し凍結乾燥すると57ｇの固体を与え、これを
HPLC分析にかけるとこのものは約15ｇの
CL1565−Ａを含有していた。 この生成物を約15ｇのロツトとし、7.6cm〔O.
D.〕のコラムに詰められた1.2の40μｍのC18−
シリカゲル（商標名）（Analytichem
International，Inc.，Harbor City，California）
上でクロマトグラフ処理した。使用の溶離剤はPH
4.5の0.005M酢酸アンモニウム緩衝液であり、次
に５％アセトニトリル含有のPHの0.005M酢酸ア
ンモニウムであつた。各画分を集めてHPLCによ
る試験を行つた。CL1565−Ａ含有の画分を集め、
濃縮し、凍結乾燥した。得られた生成物の一部
（570mg）をクロマトグラフ装置〔Prep LC／
System500apparatus fitted with ａ prep−
Pak−500／C₁₈column（Waters Instruments，
Inc.，Milford，Massachusetts）〕の使用下に溶
離剤として10％アセトニトリル含有のPH6.5の
0.1Mリン酸塩緩衝液を用いて再びクロマトグラ
フ処理した。約375mgのCL1565−Ａを含む主画分
を採り真空濃縮した。水溶液を200mlのHP−20
樹脂（水中充填）を有するコラムに通した。この
樹脂を1400mlの水で洗い、コラム上に残留する
CL1565−Ａを350mlの50％メタノールで溶出し
た。溶出液を真空濃縮し35mlの樹脂（商標名
Dowex−50×２）（Na⁺）を有するコラムを通過
させた。流出液（PH5.5）と樹脂の水洗液とを合
し凍結乾燥するとナトリウム塩として単離された
180mgの純化されたCL1565−Ａを生じた。 この製品を分析するとこのものは親物質として
のCL1565−Ａ遊離酸の1.0モルにつき約1.3モルの
ナトリウムを含有することを示した。遊離酸
（CL1565−Ａ、CL1565−Ｂ及びCL1565−Ｔ）は
不安定であるのでCL1565遊離酸化合物を塩例え
ばナトリウム塩の形で、好ましくは遊離酸1.0モ
ル当り約1.0〜約2.0モルのナトリウムを有する塩
として、単離することが好適である。 例 ４ 上述と同様にして製造された発酵液の過液を
30.5cm〔O.D.〕のコラムに充填された31の樹脂
（Dowex−１×２）（塩化物型）へ通した。流出
液とそれに続く水洗水とは検出し得る量の
CL1565成分（複数）を含有していなかつた。こ
こに記載の全画分について溶剤系としての0.1M
のリン酸緩衝液（Na⁺）−アセトニトリル（88：
12）の使用下にHPLC法（後記参照）により監視
した。ダウエクス−１（商標名）樹脂を1Mの塩化
ナトリウム−メタノール（１：１）混液で溶出処
理し溶出液を２個の10画分及び６個の15画分
の中に集めた。CL1565−Ａ、CL1565−Ｂ、
CL1565−Ｔの大部分及びCL1565諸成分の追加量
は第２〜６番目の溶出液中に存在していた。これ
らの諸画分を合して246のアセトンで希釈した。
得られた混合物を終液５℃に保持した。澄明上澄
液を取出して16となるまで真空下に濃縮した。
濃縮液を凍結乾燥すると800ｇの固体を与えた。
この生成物（740ｇ）を同様にして得られた生成
物の552ｇに対して加え、この合併固体を20の
水にとかした。得られた（PH6.0）を15cm〔O.D.〕
のコラムに充填された50のHP−20樹脂上でク
ロマトグラフ処理した。HP−20樹脂のコラムを
175の水で溶出処理してCL1565−Ｔの大部分と
極性をもつ少量のCL1565成分（複数）の全部と
を分離した。CL1565−Ａ成分の大部分を100の
メタノール−水（15：85）混液で溶出した；
CL1565−Ｂ及び残りの量のCL1565−Ａを83の
メタノール−水（50：50）混液で溶出した。
CL1565−Ａに富む溶出液を合併し濃縮し凍結乾
燥すると123ｇの固体を与えたがこれはHPLC分
析によると約110ｇのCL1565−Ａを含むものであ
る。 この生成物のうちの75ｇを２のPH6.8の
0.05Mリン酸塩緩衝液にとかし15cm〔O.D〕のコ
ラム中にPH6.8の0.05Mリン酸塩緩衝液（Na⁺）を
充填された52（25Kg）のシリカゲル〔100μｍ
C₁₈reverse phase silicagel（Analytlchem
International，Inc.，Harbor Clty，
California）〕上でのクロマトグラフ処理により
更に純化した。増加量（4.0〜6.5％）のアセトニ
トリルを含有する0.05Mリン酸塩緩衝液を用いて
上記のコラムを展開処理した。早期の画分（複
数）は主としてCL1565−Ｔを含有し、そして極
性をもつ少量の追加分のCL1565成分（複数）を
含有していた。CL1565−Ａ成分の大部分は後の
画分中に溶出された。CL1565−Ａ含有画分（複
数）のみがUV−吸収成分であつて、これを集め
て真空下に20となるまで濃縮した。この濃縮物
を５℃に終液保存し、沈殿する無機塩を去し
た。次に28のHP−20樹脂を有する15cm〔O.
D.〕のコラム上に液を負荷した。水（66）
で樹脂を洗つてから42のメタノール−水（50：
50）混液でCL1565−Ａを溶出した。CL1565−Ａ
の大部分を含有する溶出液（複数）を合し（26
）、濃縮して凍結乾燥すると或量の無機不純物
を含有する34ｇのCL1565−Ａを与えた。メタノ
ール中に上記生成物（50〜100mg／ml）を溶かし、
不溶物質を去し、液が真空下に濃縮されたも
のであるのでこの液に対しひんぱんに水を加え
てこの液を水溶液とすることにより上記の無機
不純物を除去し得る。得られた水性濃縮物をHP
−20樹脂上でクロマトグラフ処理することにより
最終的にCL1565−Ａを純化する。 追加量のCL1565成分（複数）の単離 CL1565含有発酵液から得られた濃縮液をシリ
カゲル（商標名C18−シリカゲル）又はHP−20
樹脂上で注意深くクロマトグラフ処理することに
よりCL1565−Ａ以外のCL1565成分（複数）を含
む諸画分が得られる。かようにして６種以上の化
合物がHPLCにより検出されるがこれらは類似の
紫外線吸収スペクトルを有することにもとづき
CL1565−Ａ関連物質である。これら諸成分のう
ちの２種即ちCL1565−Ｂ及びCL1565−Ｔを本質
的に純な化合物として単離した。CL1565諸成分
Ａ、Ｂ及びＴはアセトニトリルを各種の割合で含
む0.05M〜0.10Mリン酸塩緩衝液を流速1.5ml／分
において使用するシリカゲルコラム
〔μBondapak C₁₈−silica gel column（3.9mm I.
D.×30cm）〕上のHPLCにより容易に区別され
254nｍでの紫外吸収により検出される。上記の
HPLC諸条件を用いるCL1565−Ａ、Ｂ及びＴの
代表的保持時間（分）は下表の通りである。

【表】 使用溶媒がPH6.8の0.1Mリン酸塩緩衝液−アセ
トニトリル（88：12）混液であること以外は上文
におけると同様の方法で粗発酵液について試験す
ることができる。この場合に流速２ml／分におい
てCL1565−Ｔ、CL1565−Ａ及びCL1565−Ｂの
保持時間を夫々約2.7、5.0及び＞12分である。 HP−20樹脂から、及び逆相シリカゲル
（reverse phase silica gel）からの溶出速度は
CL1565−ＡよりもCL1565−Ｔの方が早い。HP
−20樹脂使用の例４記載のC₁₈−シリカゲルコラ
ムの初期の画分からそれを単離し得る。 HP−20樹脂から及び逆相シリカゲルからの溶
出速度はCL1565−ＡよりもCL1565−Ｂの方が遅
い。CL1565−Ｂは例４記載の粗ダウエクス−１
による生成物のHP−20クロマトグラフイの際に
50％メタノールの使用で溶出される。この成分は
既述のCL1565−Ａ純化操作と本質的に同じ操作
を使用してHP−20上の再クロマトグラフイ及び
それに続く40μｍC₁₈−シリカゲル上のクロマトラ
フイにより最も都合良く単離され得る。 CL1565−Ａナトリウム塩の諸性質： メタノール中の紫外吸収スペクトル（第１図参
照） λmax268nｍ（a¹ ₁＝805）259及び278nｍに屈
折点ありKBr中の赤外吸収スペクトル（第２図
参照） 主吸収位：3400、1710、1630、1420、1387、
1260、1155、1090、1060、975、920、820、及び
775cm^-1 旋光度 〔α〕²³ _D＋28.2°（0.1MPH７リン酸塩緩衝液中1.0％） 元素分析 計算値：（C₁₉H_27.7O₁₀Na_1.3Ｐとして） ％Ｃ ％Ｈ ％Na ％Ｐ 47.84 5.86 6.27 6.49 実験値：48.01 5.88 6.05 6.3 質量スペクトル（vla fast atom
bombardment） 計算値：〔C₁₉H₂₅Na₂O₉P＋Ｈ〕⁺としてｍ／z475 〔C₁₉H₂₆Na O₉P＋Ｈ〕⁺としてｍ／z453 実験値：ｍ／z475、453 360MHzプロトン磁気共鳴スペクトル（D₂O中） （第３図参照） 主信号： （ｓ＝単線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｍ＝多重
線）1.29s（3H）、1.58t（1H）、17.0m（1H）、2.49−
2.58m（2H）、4.13−4.18m（3H）、4.86t（1H）、
5.09m（1H）、5.53t（1H）、5.9−6.0m（4H）、6.14t
（1H）、6.32t（1H）、6.55t（1H）、6.75dd（1H）、及
び7.09m（1H）ppmダウンフイルド（DSSにもと
づく）〔parts per milion down−field from
sodium ２，２−dimethyl−２−silapentane−
５−suifonate（DSS）〕 13C−核磁気共鳴スペクトル（D₂O中）（第４図
参照） 主信号：最大値番号 最大値番号 １ 168.4 12 79.5 ２ 149.8 13 79.0 ３ 138.1 14 75.6 ４ 135.0 15 64.4 ５ 134.4 16 62.7 ６ 131.3 17 39.4 ７ 127.4 18 29.7 ８ 126.7 19 23.5 ９ 124.9 10 124.8 11 120.1 ppmダウンフイルド（TMSにもとづく）
〔parts permililon downfileld
fromtetramethylsilane（TMS）〕 31P−核磁気共鳴スペクトル（D₂O中）は二重線
〔ａ doublet（Ｊ＝10Hz）at 0.504ppm
downfield from85％ phosphoric acid〕を表わ
す。 高圧液体 クロマトグラフイ コラム：μBondapak C₁₈シリカゲル（3.9mm1.D.
×30cm） 溶媒：0.005MPH7.3リン酸ナトリウム緩衝液−ア
セトニトリル（90：10） 流速：２ml／分 検出：254nｍにおける紫外吸収 保持時間：2.8分 抗菌活性 １ml当り500μｇのCL1565−Ａを含む水溶液を
浸ませた円形紙（直径12.7mm）を下記の微生物
が接種されている寒天層上に置いた。終夜28℃に
恒温保持した後に下記の阻止円が観察された。 微生物 阻止円直径 サツカロミセス セレビジエ （Saccharomyces cerevisiae） 25mm サツカロミセス イタリクス （Saccharomyces italicus） 17mm サツカロミコイデス ルドウイギ （Saccharomycoides ludwigii） 25mm L1210白血病細胞に対するCL1565−Ａのインビ
トロでの活性 ID₅₀＝0.078μｇ／ml マウスのP388リンパ球性白血病に対するCL1565
−Ａのインビボでの抗腫瘍活性

【表】 CL1565−Ｔナトリウム塩の諸性質 メタノール中の紫外吸収スペクトル 第１図に示されるものとほとんど同じであるが
但しλmax268nｍ（a¹ ₁＝774）260及び278nｍに
屈折点あり KBr中の赤外吸収スペクトル 主吸収位：3400、1715、1630、1380、1260、
1090、970、830及び770cm^-1 質量スペクトル（via fast atom
bombardment） 計算値：〔C₁₉H₂₅Na₂O₁₀P＋Ｈ〕⁺としてｍ／z491 実験値：ｍ／z491 360MHzプロトン磁気共鳴スペクトル（D₂O中） CL1565−Ｔの¹H−NMRスペクトルはCL1565
−Ｔの¹H^-NMRスペクトルと著しく類似するけ
れども但し前者のスペクトルにおいては
4.34ppmにおいて二重線（複数）が一つの二重
線として表われる特性的な１個のプロトン信号
を示し、2.2〜3.2ppmダウンフイルド（DSSに
もとづく）において何らの信号をも示さない。 CL1565−Ｔナトリウム塩の主信号： （ｓ＝単線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｍ＝多
重線）1.30s（3H）、1.55−164m（1H）、1.73
（1H）、4.13−4.20m（1H）、4.16d（2H）、4.34dd
（1H）、4.94t（1H）、5.09dd（1H）、5.55t（1t）、
5.89−6.06m（3H）、6.16m（2H）、6.36t（1H）、
6.56t（1H）、6.76dd（1H）、7.14dd（1H）ppmダ
ウンフイルド（DSSにもとづく） 90.4MHz13c−核磁気共鳴スペクトル（D₂O中）： 最大値番号 化学シフト^* １ 24.10 ２ 41.60 ３ 64.68 ４ 64.90 ５ 66.67 ６ 78.28 ７ 79.81 ８ 84.33 ９ 124.40 10 126.21 11 126.91 12 127.18 13 128.99 14 133.36 15 136.87 16 137.23 17 142.27 18 149.46 19 169.66 注：＊ppmダウンフイルド（TMSにもとづく） マウスのP388リンパ球性白血病に対するCL1565
−Ｔのインビボでの抗腫瘍活性

【表】 CL1565−Ｂナトリウム塩の諸性質 メタノール中の紫外吸収スペクトル λmax267nｍ（a¹ ₁＝805）259及び277nｍに屈
折点あり KBr中の赤外吸収スペクトル 主吸収位：1720、1640、1385、1200、1060、970、
及び820cm^-1 360MHzプロトン磁気共鳴スペクトル（D₂O中） 主信号： （ｓ＝単線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｍ＝多
重線）1.32s（3H）、1.58t（1H）、1.75t（1H）、
1.79d（3H）、2.45−２，68m（2H）、4.15t（1H）、
4.89t（1H）、5.10m（1H）、5.49t（1H）、5.83−
6.21m（6H）、6.50−6.64m（2H）、7.06−7.13m
（1H）ppmダウンフイルド（DSSにもとづく） 90.4MHz13c−核磁気共鳴スペクトル（D₂0中） 最大値番号 化学シフト^* １ 20.70 ２ 25.06 ３ 31.91 ４ 41.85 ５ 66.85 ６ 77.87 ７ 80.87 ８ 81.64 ９ 122.41 10 124.45 11 127.24 12 129.47 13 129.90 14 134.66 15 135.94 16 136.67 17 140.42 18 152.01 19 170.56 注＊ppmダウンフイルド（TMSにもとづく）
マウスのP388リンパ球性白血病に対するCL1565
−Ｂのインビボでの抗腫瘍活性

【表】 抗生物質CL1565−Ａ及びその同属物質はその
抗微生物活性及び抗腫瘍活性にもとづき各種金属
塩例えばナトリウム、カリウム、カルシウム又は
マグネシウム塩及び類似物又はその他の塩例えば
アンモニウム塩或は適宜の有機アミンから形成さ
れる塩のいかなるものをも含有する製薬学的組成
物の形で使用され得る。該製薬学的組成物は製薬
学上許容可能な共存担体と共に使用される。この
組成物は他の活性抗微生物剤及び（又は）抗腫瘍
剤をも含有し得る。該組成物は所用の投与経路に
適するいかなる製薬学的形状に作られてもよい。
かような組成物の例は経口投与のための固体組成
物例えば錠剤、カプセル、ピル、粉剤及び顆粒
剤、及び局所的投与又は経口投与のための液状組
成物例えば溶液、懸濁液、シロツプ及びエリキシ
ル並びに非経口投与のための製品例えば滅菌溶
液、懸濁液或は乳濁液を包含する。 抗微生物剤としての使用のために対象の特定微
生物に対する最少成育阻止濃度よりも高い活性成
分濃度となるように該組成物を投与する。 下記の諸例は疾患特に新生物による疾患の治療
のための一種又は複数種の製品即ちCL1565−Ａ、
CL1565−Ｂ及びCL1565−Ｔを含有する好適な製
薬学的組成物の例示である。 例 Ａ 非経口用として各アンプル中に75mgのCL1565
−Ａナトリウム塩を含む滅菌され凍結乾燥された
製品を該化合物（注射用蒸留水中）から製造し
た。 例 Ｂ CL1565−Ａナトリウム塩 75mg アスコルビン酸ナトリウム 33mg 上記成分を滅菌壜に入れる。常法により上記混
合物を生理食塩水に溶かすことにより注射液を製
造する。必要に応じ緩衝剤を添加し得る。 例 Ｃ CL1565−Ａナトリウム塩（1000mg）とアスコ
ルビン酸ナトリウム（440mg）とを100mlの水に溶
かす。滅菌過器を通過させてこの溶液をし、
予め滅菌した壜の中へこの溶液を無菌的に充たし
て凍結乾燥する。予め滅菌した蓋でこの壜をチツ
素気中で密封し５℃又はそれ以下の温度で貯蔵す
る。 CL1565−Ａの代わりにCL1565−Ｂ及び
CL1565−Ｔを使用し例Ａ、Ｂ及びＣの記載と同
様にして他の好適処方を配合し得る。哺乳動物の
ための抗腫瘍剤としての使用の目的でCL1565−
Ａ、CL1565−Ｂ及びCL1565−Ｔの夫々について
示唆される用量は静脈注射１日１回当り１平方メ
ートルにつき1.0〜100mgである。

【図面の簡単な説明】

添付図面の第１図はCL1565−Ａナトリウム塩
のメタノール中での紫外吸収スペクトルを表わ
し；第２図はCL1565−Ａナトリウム塩のKBr中
での赤外吸収スペクトルを表わし；第３図は
CL1565−Ａナトリウム塩のD₂O中での360MHzプ
ロトン磁気共鳴スペクトルを表わし；そして第４
図はCL1565−Ａナトリウム塩のD₂O中での13C−
該磁気共鳴スペクトルを表わす。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記式 （式中、 １ R₁＝ＨでR₂＝OHのものは、CL1565−Ａで
   あり； 2a R₁＝R₂＝Ｈのものは、CL1565−Ｂであり； 2b R₁＝R₂＝OHのものはCL1565−Ｔである。） で示されるCL1565化合物類及び製薬学上許容可
   能なそれらの塩類。 ２ 請求項１において、式中、R₁がＨで、R₂が
   OHであるCL1565−Ａ及び製薬学上許容可能なそ
   の塩類。 ３ 請求項１において、式中、R₁及びR₂がそれ
   ぞれＨであるCL1565−Ｂ及び製薬学上許容可能
   なその塩類。 ４ 請求項１において、式中、R₁及びR₂がそれ
   ぞれOHであるCL1565−Ｔ及び製薬学上許容可能
   なその塩類。 ５ 下記式 （式中、 １ R₁＝ＨでR₂＝OHのものは、CL1565−Ａで
   あり； 2a R₁＝R₂＝Ｈのものは、CL1565−Ｂであり； 2b R₁＝R₂＝OHのものはCL1565−Ｔである。） で示されるCL1565化合物類の製造方法であつて、 CL1565化合物類を産生するストレプトミセス
   属の寄託番号ATCC31906で示される菌株を、
   CL1565化合物または化合物類の実質量が得られ
   るまで、適宜の培地中で培養し、該化合物または
   該化合物類を遊離酸または塩の形で単離すること
   を特徴とする製造方法。 ６ 製薬学的に受容可能な担体と、有効成分とし
   て下記式 （式中、 １ R₁＝ＨでR₂＝OHのものは、CL1565−Ａで
   あり； 2a R₁＝R₂＝Ｈのものは、CL1565−Ｂであり； 2b R₁＝R₂＝OHのものはCL1565−Ｔである。） で示されるCL1565化合物類またはその製薬学上
   許容可能なそれらの塩類とを含有することを特徴
   とする抗腫瘍剤。 ７ CL1565化合物がCL1565−Ａである請求項６
   に記載の抗腫瘍剤。 ８ CL1565化合物がCL1565−Ｂである請求項６
   に記載の抗腫瘍剤。 ９ CL1565化合物がCL1565−Ｔである請求項６
   に記載の抗腫瘍剤。