JPH0477437A - Ａｐｐ感染症に対する感染防御免疫物質およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はＡ　Ｐ　Ｐ　（Ａｃｔｌｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ
Ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｓｏｎｉａ）ｇ染症に対する感染
防御免疫物質およびその製造法に関する。

［従来の技術］ 我が国の養豚界は、より高い生産性を追及することから
、規模拡大による専業化へ、又飼養品種も生産性の低い
中型種よりも生産性の高い大型種による交雑種へと推移
して来た。しかし、このような生産性の高い能力を有す
る豚を多数飼養しても、その能力が１００％生かされな
ければならない。しかし豚の場合、他の経済動物と比較
し、疾病による損失が非常に大きいと言われている。そ
れら経済的損失の大きい豚疾病のひとつにＡＰＰ感染症
が上げられる。

豚のＡＰＰ性胸膜肺炎は、ＡＰＰ菌の感染によって起る
典型的な日和見感染症に入る疾病として知られている。

本疾病は移動や輸送直後や、飼育中良好な発育を示しな
がら何等の理由もなく急死する。又最近、正常脈の間で
、高率な保菌豚の存在も明らかにされている。

我が国における本病は、１９７５年新潟県下で最初に発
生し、現在では全国各地にみられている。

本菌は血清型により１〜ＩＯ型に分類され、２型菌およ
び５型菌が我が国における主流となっている。しかし最
近では２型、５型菌に加えて、１型菌が流行の傾向を示
している。又極めて最近では、上記の型頭以外に６．７
．８．９型菌が分離されている。

本病をワクチンで予防する試みは古くから行われている
。現在、諸外国では他種類のワクチンが市販されている
が、その効果は必ずしも明確ではない。その理由として
本感染症は日和見感染症のひとつであり、予防が困難で
あることに加え、本菌血漬型の多様さがあげられる。現
在我が国で市販されているワクチンは、血清型２又は５
のＡＰＰを液体培地で培養し、培養菌液にホルマリンを
加えて殺菌した不活性化菌液を遠心分離により集菌した
ものにリン酸アルミニウムゲルを加えたものである。

【発明が解決しようとする課題］ 本ワクチンは昭和６１年７月に製造か承認されて以来、
野外で使用されるようになったが、その後、ワクチンの
副作用即ち豚の元気消失、嘔吐、襄え、起立不能、呼吸
困難、麻痺様発作等の症状を呈し、極めて少数ながら死
亡する例も認められている。我が国においてはこれまで
２型菌による本病の発生か圧倒的に多いか、最近になり
５型菌や１型菌、その他の型のＡＰＰ菌が分離されてお
り、今後は２種以上の血清型開に効果を示す多価ワクチ
ンが必要となることが予想される。その場合、多量の菌
を混合するだけならば、前述の副作用による事故の再発
は必至であると考えられる。従って感染防御免疫に有効
な物質を含み、副作用物質のないか、又は出来るだけ少
ないワクチンの開発が望まれる所である。

そこで本発明者らは上述した問題を出来る限り、解決す
る方法を鋭意努力した結果、ＡＰＰ菌の培養方法、菌の
破砕方法および副作用をひき起す物質の除去法を工夫す
ることにより、感染防御免疫に有効な成分を含むワクチ
ンを完成させることが出来た。

［課題を解決するための手段］ すなわち、本発明は、膜表面に存在する感染防御免疫物
質を出来る限り剥離しないようにＡＰＰＩｉを培養し、
ＡＰＰ菌に熱を与えることがなく大量の処理に適してい
るガラスビーズを応用した菌体破砕装置をして破砕し、
核酸等の成分を除去し、カラムクロマト、限外濾過法、
有機溶媒抽出法、モノクローナル抗体を利用したアフィ
ニティクロマト、等電点沈殿法等により副作用物質を除
去したＡＰＰ感染症に対する感染防御免疫物質およびそ
の製造法に係るものである。

＾原料（無細胞抽出液）の製造 本発明において使用する菌はＡＰＰ菌である。

この菌の培養方法は通常の方法に従って差し支えないが
、好ましくは出来る限り膜表面物質が剥離しない方法が
望まれる。例えば、ＡＰＰ菌の適当な血清型開を鶏肉浸
出液にペプトン、鶏血清等を加えて調製した液体培地や
牛心筋浸出液に獣肉製ペプトン等を加えた液体培地を用
い、３７℃、６〜２０時間ゆるやかな振とぅ培養、静置
培養、通気攪拌培養をすることにより良好な培養物が得
られ、これを−過して菌体を得る事が出来る。これを水
、好ましくは適当な緩衝液（例えば１０５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７，０））と充分に混和し、水冷しながらガラ
スビーズを用いたフレンチプレスやダイノミル等により
菌体を破砕して懸濁液を得、次いでこれを一過又は遠心
分離して原料に適した無細胞抽出液を得ることが出来る
。

＠）精製処理 １）菌体残渣除去 この処理は、無細胞抽出液に含まれる目的外物質である
菌体残渣を取り除く目的で行う。菌体残渣は副作用の原
因となりうる危険性があり、本発明の目的達成のために
は、好ましくないので出来るだけ除去することが望まし
い。菌体残渣除去法としては、遠心分離、静置法、限外
一過、一過等より適当な方法を選定できるが、遠心分離
法が操作も簡単で、効果的であり、最も好ましい方法と
して推奨される。遠心分離はその処理条件は用いるロー
ターの大きさにより左右されるが、その目的物を除去す
る遠心加速度が決まっていると、ローターの回転数を増
減することにより常に一定条件下での処理は可能である
。例えばローターの最大半径（Ｒｍａｘ）が１３８鰭の
場合、我々の目的物を除去する条件としては７０００〜
８０００「ｐ−で２０〜３０分間処理するのが好ましい
。

処理温度は室温以下の温度が好ましく、望ましくは０〜
１０℃で、１０〜１００時間を要して、十分に沈殿物を
除去することが好ましい。

以上の各処理を行うことにより、感染防御免疫物質を含
有する溶液を得ることができる。この溶液は使用目的に
応じてさらに透析、除去濾過、濃縮凍結乾燥等の処理を
行い、使用目的に適した感染防御免疫物質を製造するこ
とができる。

２）核酸等の成分除去 この処理は無細胞抽出液に含まれる目的外物質である核
酸等の成分を除去することを目的で行う。

核酸等の除去方法としては操作が簡単な沈殿剤を用いる
方法が適当である。例えばストレプトマイシン、カナマ
イシン等の抗生物質、硫酸アルミニウム、塩化第二鉄、
塩化マンガン等の無機塩、ヒストン、プロタミン、ポリ
アルギニン等の高分子物質が使用可能である。これらの
沈殿剤の使用濃度は０．２％〜ｌＯ％好ましくは０．５
％〜３％の濃度が適当である。処理方法としては、処理
すべき液に対して０．５％〜３％の濃度になるように各
種沈殿剤を加え、十分かきまぜた後、４℃、１晩静置し
て、十分なる沈殿を形成させる。生成した沈殿物は一過
又は遠心分離等の方法で除去して上清を得る。

３）副作用物質の処理 菌体残渣の除去およびストレプトマイシン処理を行なっ
た感染防御免疫物質を含有する溶液中には発熱作用、シ
ョック作用、致死作用、骨髄出血壊死作用、白血球減少
症等を示す副作用物質が多量に含まれているのでこれを
除去する。上述の副作用物質を分別して除去する方法と
しては、タンパク質を分別する通常の方法、例えば塩析
法、有機溶媒抽出法、重金属法、等電点沈殿法等の溶解
度法のほか、モノクローナル抗体を利用したアフィニテ
ィクロマト、限外−適法、ふるい法、電気泳動法、生物
学的方法等より適当な方法を選定できるが、カラムクロ
マトにおいてゲル粒子を応用したゲルー過法が操作も簡
単で効果的であり、最も好ましい方法として推奨される
。ゲルー過法に用いられるゲル粒子は３次元的な網目構
造をもち、網目の空間は溶媒で満たされ、ゲル粒子内部
と外部の溶媒間に溶質の一定の分配が成立する。使用さ
れる粒子にはデキストラン、ポリアクリルアミド、アガ
ロース等から出来ており、水溶液中での分子ふるいクロ
マトグラフィーに比較的よく用いら上ている。分画範囲
は分子量２万〜５０万で、処理条件はｐＨ５〜ｌＯ１緩
衝液は一般的に用いられているものでよい。例えば炭酸
、リン酸、酢酸、クエン酸、フタル酸等の種類の濃度ｌ
Ｏ〜５００ｇＮ程度のものを用いると良い。処理温度は
室温以下の温度、好ましくは０〜１０℃で処理すると良
い。又最近ではカラムクロマトにおいて表面多孔性充填
剤を利用した高速液体クロマトグラフィーにより短時間
に除去する事が可能になって来た。

本発明のＡＰＰ感染症防御免疫物質は脂質、糖質および
タンパク質を含有する物質で抗体産生能活性ばかりでな
く、強い細胞性免疫を惹起する活性を有する。例えば本
物質をマウスに免疫して得られたスブリーン細胞を用い
たＹＡＣ細胞のキラー活性はほとんど１００％にも達す
る。さらにこの物質はマウス又はモルモット、豚を用い
たＡＰＰ感染症を低濃度で防御することができる。

本物質の使用方法としては好ましくはリン酸塩緩衝塩化
ナトリウム液（ＰＢＳ）を用い、濃度がタンパク質とし
て０．０５ｇｇ〜５ｇｇ／ｌとなるように調製した製剤
を動物に筋肉内投与（１〜２回）することが推奨される
。投与間隔および投与回数、投与量については動物の種
類により適宜選択することが出来る。

本物質の毒性は極めて少なく、マウス又はモルモットに
対するＬＤＳｏ値は２５００■ｇ／ｋｇ以上であり、予
防を目的とする投与量に比して十分に安全である。又感
作原性もなく連続投与しても副作用が少なく安全に使用
することが出来る。

〔実施例及び試験例コ 以下本発明を実施例及び試験例を示してさらに詳述する
。

実施例Ｉ ＡＰＰ２型菌由来ＡＰＰ感染防御免疫物質囚原料の製造 ＹＣＭ寒天培地を１２０℃、２０分オートクレーブ滅菌
後、シャーレ（直径１５０ｍｍ　）　　（３０枚）に分
注（２０ｍｌ）　シ、ＡＰＰ２型菌７２０株をシャーレ
の全表面に塗布し１０％ＣＯ２，３７℃の条件下で１２
時間培養した。培養後、シャーレ当り２０ｍ１のＰＢＳ
を入れ、ポリスマンにて寒天表面を軽くなでながら菌を
剥離し、次に２０ｍ１ＰＢＳで洗浄して前者と混合して
ＡＰＰ菌の懸濁液を作成した。菌懸濁液をＰＢＳで３回
遠心洗浄（７０ＱＯｒｐｍ　、８０分）し、ＰＢｓで１
０％（Ｗ／Ｖ）になるように懸濁液を調製した。

次にこの菌懸濁液をガラスビーズを用いた菌体破砕器で
菌体を破砕した後、デカンテーションにより上清を採取
し、４℃で１２時間攪拌しながら抽出を行い、遠心分離
（１５０００ｇ。

３０分）して固形分を除去し、無細胞抽出液を採取し、
原料（１りに供した。

＠）精製処理 ｌ）ストレプトマイシン処理 ＾の工程で得た、無細胞抽出液１１に対して１０ｇの硫
酸ジヒドロストレプトマイシン（東洋醸造社製）を加え
、十分攪拌し、４℃、１晩静置して沈殿物を形成させた
。

次に冷却遠心（７００（ｌｒｐｍ　、３０分、４℃）し
て上清を得、ＰＢＳを舞妓にし、４℃、１晩透析した。

２）凍結乾燥処理 ＠）−１）の工程で得た透析液を凍結乾燥して以下の精
製に供した。

３）副作用物質の除去 ＠１−２）の操作で調製した供試品５００ｍｇをＩＱｓ
Ｍ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｆ緩衝ＨｐＨ８，５に溶がし、同緩
衝液で２４時間透析を行い、あらがしめ、セファクリル
Ｓ−５００Ｊ（Ｒ−７００ｍ１を充填したカラム（直径
３２×長さ１０００１）にアプライし、同緩衝液で溶出
しながら分画した。溶出パターンは第１図のようになっ
た。図中のタンパク質の分析はＯＤ２８０ｍμの吸光度
で示した。

感染防御活性を示す画分Ｆ−１をタンパク質量として１
７３０■／ｍｌのものを２００ｍ１得た。この物質をＡ
ＰＰ−２−Ｉという。

実施例２ ＡＰＰ５型菌由来ＡＰＰ感染防御免疫物質ＡＰＰＳ型菌
に１７株をＹＣＭ培地５！で液体培養後（３７℃、６時
間）培養物を冷却遠心（７０ＧＯｒｐｍ　８０ｍ１ｎ　
）　してＡＰＰ湿菌体２０ｇを得た。ＰＢＳで２〜３回
洗浄し、同緩衝液で１０％（Ｗ／Ｖ）になるように懸濁
液を調製した。実施例１と同様にＤｙｎｏ−Ｍｌｌｌで
菌体を破砕し、ＰＢＳで５００ｍ１に合わせ４℃下で一
晩抽出した。抽出液を冷却遠心分離で菌体残渣を除去し
、得られた上清をＤＥ５２の陰イオン樹脂を用いたイオ
ン交換クロマトグラフィにアプライし、θ〜１．０ＭＮ
ａｃｌのリニイアグラジエントで溶出した。

溶出パターンは第２図のようになった。感染防御活性を
示す画分Ｆ−５により感染防御免疫物質（ＡＰＰ−５−
Ｉ）　　３８０１ｇを得た。

実施例３ ＡＰＰｌ型菌由来ＡＰＰ感染防御免疫物質ＡＰＰｌ型菌
Ｓ　４０７４株をＹＣＭ培地５！で液体培養しく３７℃
、６時間）、以後実施例１と同様の操作を行い、ＡＰＰ
感染防御免疫物質（ＡＰＰ−１−１）　　４００■を得
た。

実施例４　製剤 （１）ワクチンの製造（その１） 実施例１と同様にして得られたＡＰＰ−２−！物質を２
．０−ｇ／ｍｌになるようにリン酸緩衝食塩液にて調製
し、アジュバントとして同等量の水酸化アルミニュウム
ゲルを加えて混和し最終濃度が１■ｌ■ｌ　（タンパク
質として）になるように調製してワクチンを製造した。

（２）ワクチンの製造（その２） 実施例２と同様にして得られたＡＰＰ−５−■物質を２
．０ｍｇ／■１になるようにＰＢＳで調製し、アジュバ
ントとしてミネラル鉱物油を等量論え混和し、最終濃度
が１■ｌ■ｌ　（タンパク質として）になるように調製
してワクチンを製造した。

実施例５ 限外濾過法による副作用物質の除去 実施例１て調製したＡＰＰ−２−Ｉ物質１ｇを５００■
ｌリン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）に溶解し、前もって準備
した分子量１００，０００なる限外−過膜（Ｐ　Ｔ　Ｈ
Ｋ　−ＯＬ　Ｃ−Ｍ　２　）を用いた限外−過システム
（ミリボア社、ペリコンカセット）で１０℃以下の条件
下で５時間濃縮、精製を行った。最終濃縮液５０１１お
よび一過液２００ｍ１を凍結乾燥して感染防御試験及び
副作用試験に供した。

実施例６ 有機溶媒抽出法を用いた副作用物質の除去実施例１で調
製したＡＰＰ−２−１物質１００■を５０ｍ１リン酸緩
衝食塩液（ＰＢＳ）に溶解し、２００ｍ１分液ロートに
分注する。次に同量のフェノール（和光社製、特級）を
加え、振とう機（テラオカ社、ＦＴＳ−２０８）を用い
て、室温ではげしく、ｌＯ分間振とうした後、５分間静
置して、フェノール層と水層を分取し、４℃下でＰＢＳ
を外液とした透析を行い、凍結乾燥してそれぞれ、７０
■、２０■得た。それぞれのサンプルを感染防御および
副作用試験に供した。

実施例７ モノクローナル抗体を利用したアフイニテイクロマトに
よる副作用物質の除去 １）モノクローナル抗体の作製 ＹＣＭ培地を用い、静置培養、又は温和な攪拌条件の振
とう培養で得られた ＡｃｔｉｎｏｂａｃＩｌｌｕｓ　Ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕ
ｓｏｎｉａ血清型２型湿菌体１００μｇを２週間間かく
で、ＢＡＬＢ／Ｃ（♀）４ＷにＩＰ投与し、計３〜５回
免疫した。最終投与の４日後に、牌臓を摘出し、牌細胞
３Ｘ１０８個とミエローマ細胞（Ｘ６３−ＡＱ　８−６
．５．３）　３　ＸＩＯアを５０％ポリエチレングリコ
ール（Ｋｏｄａｋ社製）存在下で細胞融合を行った。こ
のハイブリドーマを９６ウエル培養プレート（ファルコ
ン社製　＃　３０７２）に分注し、ＨＡＴを含むＧＩＴ
培地中で、５％ＣＯ２，３７℃条件下で培養した。ハイ
ブリドーマの増殖が認められたウェルについてはＥＬ　
Ｉ　ＳＡ法を用いて２型菌に特異的に反応するウェルを
観察し、限界希釈法にてクローニングし、最終的に８株
の２型菌に特異的に反応するハイブリドーマを樹立した
。これらのうちでハイブリドーマＨ２２−７株を培養フ
ラスコで増殖させた後、免疫抑制剤プリスタン（Ａｌｄ
ｒｉｃｈ社）で前処理したＢＡＬＢ／Ｃｖウス（５Ｗ♀
）の腹腔内に移植した。得られた腹水５ｍｌを１．５Ｍ
グリシン３　ＭＮａｃｌ　−５ＭＮａＯＨ緩衝ｉ＃ｔ　
（ｐＨ８，９）で１０倍に希釈し、あらかじめ調製して
置いたＰｒｏｔｅｉｎ　Ａ−３ｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｃ１
−Ｃ１−４Ｂ（２０（７７１１７９７社）のアフィニテ
ィ力ラムにアプライした。次に上記同緩衝液（ｐＨＬ９
　）　テ充分、洗浄した後、１ｏｏｌＮクエン酸緩衝液
−５ＭＮａＯＨ（ｐＨ３，０）で溶出した。

溶出液をＰＢＳで４℃、−晩透析し、アフィゲルＨｚイ
ムノアフィニティキット（バイオ・ラッド社製）を使用
して、モノクローナル抗体をゲルにカップリングした。

カップリングしたゲルをカラム（１，６Ｘ　１０（ｌ關
）（アミコン社製）に充填し、ＰＢＳで充分カラムを洗
浄した。次に実施例１で調製したＦ−１画分をＰＢＳで
１０倍に希釈した液をカラムにアプライし、２００ｍ１
のＰＢＳで充分カラムを洗浄後、５Ｍグアニジン−塩酸
２００ｍ１で溶出し、溶出液をＰＢＳで、４℃、−晩透
析し、感染防御試験および副作用試験に供した。又Ｆ−
１画分をカラムにアプライし、非吸着画分およびＰＢＳ
洗浄画分を混合し、凍結乾燥して、上記吸着画分と同様
の試験に供した。

実施例８ 等電点沈殿法による副作用物質の除去 実施例１で調製したＡＰＰ−２−１物質１００■を５０
ｍ１リン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）に溶解した。次に前も
って準備した分取型等電点電気泳動装置（ロトフォア、
バイオラッド社）のフォーカシングチャンバーに上記調
製サンプルを注入した。回転を開始し、４℃、冷却水で
３０分間循環を行い、次に１２Ｗ定電力で４時間泳動し
た。

泳動後、ＰＩ３〜５まてをＡ画分、ＰＩ６〜９までをＢ
画分、Ｐ１９〜１２までをＣ画分として、それぞれをＰ
ＢＳで透析後（４℃、−晩）、凍結乾燥して１５ｍｇ、
５３ｍｇ、　２８■得られ、感染防御試験および副作用
試験に供した。

試験例１　感染防御試験（その１） 本試験は動物用生物学的製剤検定基準に従って行った。

３週令のｄｄＹマウス（♀）を用い、実施例１で調製し
たＡＰＰ−２−ＩのサンプルをＰＢＳで２０倍から倍々
希釈したものを０．５麿ｌずつマウス腹腔内に投与し、
２週間後に、３７℃、６時間、ハートインフュージョン
培地にて振とう培養したＡＰＰＺ型菌７２０株を原液、
３倍、１０倍にハートインフュージョン培地で希釈した
ものを更にムチン液で１０倍希釈して攻撃用菌液とし、
０．５麿ｌずつ１群あたりｌＯ四以上のマウスに腹腔内
投与し７日間観察した。陽性コントロールとしては市販
のワクチン（北里研究所製）を使用した。結果は第１表
に示した顕著な効果が認められた。

第１表 １）サンプルはＰＢＳで希釈され、０．５麿ｌが腹腔内
に投与された。

２）ＡＰＰ２型菌７２０株はサンプル（２Ｊ２ｘ　１０
’ＣＦＵ／■１）の免疫２週間後腹腔内に攻撃された。

３）死亡数／投与数 試験例２　感染防御試験（その２） 実施例２で調製したＡＰＰ−５−１物質のマウスにおけ
る感染防御試験を行った。試験方法は試験例１と同様、
ＡＰＰ−５−１は低濃度でＡＰＰ感染に対して第２表の
ような顕著な効果を示した。たたし、実施例２のように
、陰イオン樹脂を用いたイオン交換クロマトグラフィを
用いて得た感染防御免疫物質は、安定性に問題があって
短期間で効果が減少してしまうため、安定性を保持する
ための何等かの手段が必要であることが分った。

第２表 ＡＰＰＳ型菌に対するＡＰＰ−５−１の効力試験Ｉ）サ
ンプルはＰＢＳで希釈され、０．５ｍｌが腹腔内に投与
された。

２）ＡＰＰ５型菌に一１７株はサンプル（５Ｘ１０５Ｃ
ＦＵ／■１）の免疫２週間後腹腔内に攻撃された。

３）死亡数／投与数 試験例３　感染防御試験（その３） 実施例３で調製したＡＰＰ−１−１物質のマウスにおけ
る感染防御試験を行った。試験方法は試験例１で用いた
攻撃味７２０株（２型菌）の代りにＳ　４０７４株（１
型菌）を用い、他は全く試験例１と同様に行った、結果
は、第３表に示したが、ＡＰＰ−１−Ｉ物質はＡＰＰ感
染に対して顕著な効果を示した。

第３表 １）サンプルはＰＢＳで希釈され、０．５１が腹腔内に
投与された。

２）ＡＰＰＩ型菌Ｓ　４０７４株はサンプル（７ＸＩＱ
５ＣＦＵ／ｍｌ）の免疫２週間後腹腔内に攻撃された。

３）死亡数／投与数 試験例４　毒性試験（その１） 体重１７〜２０ｇの４週令ｄｄＹ雄性マウスの１群１０
匹を用い、実施例１のＡＰＰ−２−Ｉ物質をＩＰ投与し
、１週間後の動物の死亡数よりＬＤｓｏ値を算出した。

本物質のＬＤｓｏ値は３０００ｍｇ以上であった、又モ
ルモット１群５匹を用い、マウスと同様に行った試験で
はＬＤ５０値は３Ｂ００Ｂ以上であった。

試験例５　感染防御試験（その４） 実施例５〜実施例８で得られたサンプルについて、試験
例１と同様の方法で感染防御試験を行った。結果は第４
表に示した。

第４表 １）各サンプルは２■をＰＢＳで希釈され、０．５■ｌ
が腹腔内に投与された。

２）効力試験は試験例１と同様の方法で行われた。

試験例６　毒性試験（その２） 体重１７〜２０ｇの４週令ｄｄＹ雌性マウスの１群ｌＯ
匹を用い、実施例５〜実施例８までの各種サンプルをＩ
Ｐ投与し、１週間、毎日、体重減少、毛の逆立ち、死亡
等を観察することにより毒性試験を行った。

結果は表５に示した。

第５表 一；全く観察されなかった。

＋；観察された。

±；やや観察された。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１の溶出パターンを示す線図、第２図は
実施例２の溶出パターンを示す線図である。 特 許 出 願 人 日本全薬工業株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）静置培養又は温和なる撹拌条件下で培養したＡＰＰ
   菌の菌体を破砕、遠心分離で得られる無細胞抽出液から
   副作用物質を除去して得られるＡＰＰ感染症に対する感
   染防御免疫物質。 ２）静置培養又は温和なる攪拌条件下で培養したＡＰＰ
   菌の菌体をガラスビーズを用いて破砕し、遠心分離によ
   って得られた無細胞抽出液からカラムクロマトにより副
   作用物質を除去することを特徴とするＡＰＰ感染症に対
   する感染防御免疫物質の製造法。 ３）副作用物質を、カラムクロマトを用いて除去するこ
   とに代えて、限外濾過法により除去する方法を用いる請
   求項２記載の製造法。 ４）副作用物質を、カラムクロマトを用いて除去するこ
   とに代えて、有機溶媒抽出液により除去する方法を用い
   る請求項２記載の製造法。 ５）副作用物質を、カラムクロマトを用いて除去するこ
   とに代えて、モノクローナル抗体を利用したアフィニテ
   ィクロマトにより除去する方法を用いる請求項２記載の
   製造法。 ８）副作用物質を、カラムクロマトを用いて除去するこ
   とに代えて、等電点沈殿法により除去する方法を用いる
   請求項２記載の製造法。