JPH0480914B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

抗ウイルス性化合物としてプリン誘導体の使用
は知られている。例えば米国特許第4027025号は
抗ウイルス性化合物として９−（２−ヒドロキシ
エトキシメチル）−８−アザグアニンおよび９−
（２−ベンゾイルオキシエトキシメチル）−８−ア
ザグアニンのような８−アザプリン誘導体を開示
している。 米国特許第4146715号は２−アミド−９−（２−
アシロキシエトキシメチル）ヒポキサンテンを開
示している。 米国特許第4199574号は特定の６−および２，
６−置換プリンの９−（２−ヒドロキシエトキシ
メチル）および関連誘導体が抗ウイルス作用を有
することを開示している。 ヨーロツパ特許出願公告第0049072号は９−
〔〔２−ヒドロキシ−１−（ヒドロキシメチル）エ
トキシ〕メチル〕グアニンが抗ウイルス作用を有
することを開示している。 本発明の目的は新規な抗ウイルス性化合物を提
供するものである。本発明の他の目的は公知の抗
ウイルス性化合物に比べて増大した抗ウイルス作
用を有する新規な化合物を提供するものである。
さらに他の目的はヘルペスウイルスに対して有効
な抗ウイルス作用を有する化合物を提供するもの
である。さらにその上他の目的は抗マイコプラズ
マ作用を有する化合物を提供するものである。さ
らに本発明の目的は本発明の新規な化合物の有効
な投与のための医薬処方を提供するものである。
さらに他の目的は本発明の新規な化合物の製造方
法を提供するものである。本発明のこれらのおよ
び他の目的は次の説明から明白となる。 ９−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ
メチル）グアニンおよび９−（２，３−ジヒドロ
キシ−１−プロポキシメチル）グアニンが有効な
抗ウイルス作用を有することを見出した。これら
の化合物、それらのアシル誘導体、それらのホス
フエート誘導体およびそれらの医薬的に使用し得
る塩、これらの化合物を含有する医薬処方、これ
らの化合物でのウイルス性感染の治療、これらの
化合物の製造方法およびそれらの製造に有用な新
規な中間体をすべて開示する。さらにアシル誘導
体は抗マイコプラズマ作用を有する。 本発明の化合物は適当なアセトキシメチルエー
テルをジアセチルグアニンと反応させ、次に脱保
護することによつて製造することができる。アセ
トキシメチルエーテルは触媒の存在下グリセロル
ホルマルを酢酸無水物と反応させることによつて
得ることができる。 本発明は抗ウイルス性化合物に関するものであ
り、さらに詳細には式の９−（２，３−ジヒド
ロキシ−１−プロポキシメチル）グアニンに関す
るものである。 式ａの化合物においてヒドロキシル基の水素
原子を式

【式】（式中R₃は飽和またはモノ− またはポリ不飽和であることができる１〜20個の
炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル基、
アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、アラ
ルキル、アルコキシアルキルまたはアリールオキ
シアルキルである）を有するアシル基に置き換え
ることができるかまたはヒドロキシル基の水素原
子を式

【式】（式中R⁴およびR⁵は各々Ｈ、 医薬的に使用し得るカチオン、１〜８個の炭素原
子を有する直鎖または分枝鎖アルキル基、アリー
ル、アラルキル、ホスフエートまたはピロホスフ
エートである）を有するホスフエート基に置換す
ることができる。 好適にはアルキル基は１〜10個の炭素原子であ
り、アリール基は所望によりハロゲンまたはC_1-4
を有するアルキルで置換されたフエニルであり、
ヘテロシクリル基はピリジル、ピペリジル、フリ
ル、イミダゾリル、テトラヒドロフリルまたはチ
エニルであり、アラルキル基はC_1-4を有するアル
キルで置換されたフエニルであり、アルコキシア
ルキル基のアルコキシおよびアルキル基は両方と
も１〜４個の炭素原子を含有し、アリールオキシ
アルキル基はC_1-4を有するアルキルで置換された
フエノキシであり、医薬的に使用し得るカチオン
はナトリウム、カリウム、アンモニウム、アルキ
ル（C_1-4）置換アンモニウム、マグネシウム／
２、カルシウム／２またはアルミニウム／３であ
る。 式の化合物はグリセロルホルマル、式の化
合物が通常優勢な化合物である式 （式中ＲはＨである。）を有する１，３−ジオ
キサン−５−オールおよび式 （式中ＲはＨである。）を有する１，３−ジオ
キソラン−４−メタノールの混合物から出発して
製造することができる。グリセロルホルマル中式
およびの比はＨ、チベルト、フレセニウズ、
Z.Anal.Chem 第265巻、第328頁（1973年）に
よつて57：43であることが定量されている。しか
しながらこの比はグリセロルホルマルの異なる製
造法に対して変わることができる。種々の比の式
およびの化合物を含有する混合物が本発明に
従つて使用することができることは理解されるべ
きである。 グリセロルホルマル（式およびの化合物の
混合物）は好適には式およびの個々の化合物
を分解せずに、ピリジンの存在下酢酸無水物のよ
うなアシル化剤と反応させることによつてアシル
化してＲがアシルである対応するアシルオキシ誘
導体を生成する。この混合物は例えば高性能液体
クロマトグラフイ（HPLC）によつて分離され
る。 触媒例えばZnCl₂の存在下ＲがAc（アセチル）
である式を有する化合物を酢酸無水物で処理し
て式 を有するアセトキシメチル２，３−ジアトキシ−
１−プロピルエーテルを生成する。この反応は発
熱であり、好適には不活性雰囲気例えばN₂中包
囲温度で起る。 次に式の化合物を精製しそしてニートまたは
トリグリムのような不活性溶媒中イシド等、
Bull.Chem.Soc.日本第37巻、第1389年（1964年）
で記載されるように酸性触媒例えばエタンスルホ
ン酸の存在下、真空下上昇温度で調製した式 を有するジアセチルグアニンと反応させて粘性油
として式 を有する２−アセタアミド−９−（２，３−ジア
セトキシ−１−プロポキシメチル）ヒポキサンチ
ンを生成する。 次に式の化合物を例えば還流下好適には不活
性雰囲気例えばN₂中水性メチルアミンで加熱す
ることによつて脱アセチル化し、次いで返却して
式の化合物を含有する溶液を生成し、所望によ
り木炭で処理して過する。液を濃縮して固体
を生成し、H₂Ｏで再結晶して結晶性生成物を生
成する。 式およびの化合物の混合物をグリセロルホ
ルマルから触媒例えばZnCl₂の存在下酢酸無水物
で直接後者を処理することによつて生成すること
が可能である。生成混合物はHPLCによつてクロ
マトグラフイ処理することができる。分析HPLC
によつて式の化合物だけを示している留分を高
真空下で濃縮し、次に上記で記載したように式
のジアセチルグアニンと反応させて式の化合物
を生成し、順次上記で記載したように式の化合
物を生成する。 他方、式およびのアセチル中間体を各別々
にまたは混合物として、非極性溶媒中ハロゲン化
水素で（ジクロロメタン中塩化水素が好ましい）
処理してさらに反応性のハロゲン誘導体に転化す
ることができ、末端AcOCH₂Ｏ−作用性をXCH₂
Ｏ−〔式中Ｘはハロゲン（塩素、臭素またはヨウ
素）である〕に転換することができる。これらの
ハロゲン化合物はベンゼン、トルエン、アセトニ
トリルまたはジメチルホルムアミドのような非極
性または二極性溶媒中例えば米国特許第4199574
号の文献に記載されているようなトリエチルアミ
ンまたは粉末炭酸カルシウムの存在下または不存
下で保護グアニン〔パー（トリメチルシリル）グ
アニンまたはジアセチルグアニンが二つの好まし
い誘導体である〕とともにアルキル化反応で用い
ることができる。 前述の方法の説明はアシル基がアセチルである
化合物に特に好適であつたが、一方アシル基が同
様に飽和またはモノ−またはポリ不飽和および所
望によりアリール、置換アリール、ヘテロシクリ
ル、アラルキル、アルコキシアルキルまたはアリ
ールオキシアルキル基で置換することができる約
20個以下の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖ア
ルカノイル基であることができることは理解され
るべきである。 アシル誘導体は好適には例えばピリジン−ジメ
チルホルムアミドのような適当な併用溶媒の存在
下の化合物を適当なアシルハライド、酸無水物
または他の活性化アシル化合物と反応させること
によつて製造する。４−ジメチルアミノピリジン
が有効な触媒である。他の活性化アシル化合物は
酸を例えば１，1′−カルボニルジイミダゾール、
Ｎ，N′−ジシクロヘキシルカルボジイミドのよ
うな適当な活性化剤と反応させてあるいは公知の
方法によるＮ−ヒドロキシスクシンイミドまたは
１−ヒドロキシベンゾトリアゾールのアシル化に
よつて製造することができる。 アシクログアノシン、９−（２−ヒドロキシメ
チル〕グアニンに比べて本発明の化合物はさらに
溶解性であり、ウイルス性酵素によつてさらに容
易にホスフオリル化しそしてアシクログアノシン
より生体内で実質的に活性が高い。本発明の化合
物は抗ヘルペスウイルス作用を与えるのに有効な
用量レベルで個々にまたは組合わせて哺乳類また
は鳥類に抗ウイルス性化合物として使用すること
ができる。典型的にはかかるレベルは約0.01〜
200mg／Kg／日である。本発明の化合物は経口的
に、局所的にまたは注射による投与に対して受け
入れられた医薬実施に従つて処方することができ
る。適当な経口用量形態は錠剤、カプセル剤、エ
リキシル剤または散剤であり、一方例えばリン酸
緩衝食塩水または水中の液剤または懸濁液剤が注
射に適当である。適当な局方処方の具体例はゲ
ル、液剤または懸濁液剤である。 本発明の化合物のアシル誘導体（C_1-20）は抗
マイコプラズマ作用を有し、豚および鶏のこの疾
病の治療または予防に有用である。 次の実施例は本発明を具体的に説明するもので
あるが、それらに限定されるものではない。温度
はすべて℃で表わす。 実施例 １ ９−（２，３−ジヒドロキシ−１−プロポキシ
メチル）グアニン Ａ アセトキシメチル２，３−ジアセトキシ−１
−プロピルエーテル 式および式の化合物の混合物を含有するグ
リセロルホルマル17.1ml（20.8ｇ、200ミリモル）
の攪拌混合液に酢酸無水物60ml、氷酢酸6.7mlお
よび無水ZnCl₂2.0ｇを添加した。混合液をN₂雰
囲気下包囲温度で攪拌した。すぐにZnCl₂が溶解
し、2.3分で溶液の色が薄黄色に変化しながら強
い発熱反応があつた。１時間後発熱反応が軽減
し、薄層クロマトグラフイ（TLC）（１：１およ
び２：１ヘキサン−エチルアセテート）が明白に
完全なそしてきれいな反応を示した。4.5時間後、
溶液を高真空で濃縮した。残留油をジエチルエー
テル700mlに取り飽和NaHCO₃溶液２×100ml次
にH₂Ｏを100mlで洗浄した。エーテル溶液を
MgSO₄で乾燥し、木炭で脱色し過する。液
を高真空で濃縮して無色の残留物45.8ｇ（92％）
を生成する。分析HPLC（７：３ヘキサン−エチ
ルアセテート）は式およびの二つの生成物異
性体だけを示した。この生成物異性体の塊（44.5
ｇ）を各11〜11.5ｇの４つのバツチでHPLCに委
ねた。作業はすべてシリカゲル（二つのWaters
Prep−500パツク）、再循環（３サイクル）させ
ながら７：３ヘキサン−酢酸エチル（１分当り
250ml流動速度）および再留分指数検出を用いる
同一条件下で行なつた。留分を各作業に対して同
一場所でカツトし、種々の作業からの留分を収集
しながら混合した。ピークの澄明な分離は再留分
指数痕跡量に観察されなかつた。 式の純粋な化合物として分析HPLCによつて
同定された留分（さらに短い保持時間）を集め高
真空で濃縮してNMR（CDCl₃）がアセトキシメチ
ル２，３−ジアセトキ−１−プロピルエーテルに
一致する無色の残留油17.0ｇを生成した。 Ｂ ２−アセタシド−９−（２，３−ジアセトキ
シ−１−プロポキシメチル）ヒポキサンチン ジアセチルグアニン（）2.61ｇ（11.1ミリモ
ル）、上記段階Ａからのアセトキシ−１−プロピ
ルエーテル5.50ｇ（22.2ミリモル）およびエタン
スルホン酸55mgを低真空下油浴中155〜160°で蒸
留アダプターを備えたフラスコ中で加熱した。混
合液を漸次磁気攪拌させるのに十分に希釈して蒸
留物を収集した。混合液は約45分後均質になり75
分後冷却した。粘性油を酢酸エチル約100mlに取
り、ほとんど白色の結晶の収量1.23ｇ（29％）、
m.p.162.5〜165°で結晶化するために誘導した。薄
層クロマトグラフイ（TLC）（９：1CHCl₃−
CH₃OH）はシングルスポツトを示した。 Ｃ ９−（２，３−ジヒドロキシ−１−プロポキ
シメチル）グアニン 上記段階Ｂからの２−アセタミド−９−（２，
３−ジアセトキシ−１−プロポキシメチル）ヒポ
キサンチン（）1.14ｇ（3.0ミリモル）の溶液
をN₂下攪拌しながら40％水性メチルアミン中還
流で１時間加熱し次いで冷却した。TLC（80：
20：2CHCl₃−CH₃OH−H₂Ｏ）はタイトルの化
合物（）へ完全な軟化を示した。薄橙色溶液を
木炭で処理してスーパーセルで過した。液を
濃縮して固体を生成し、H₂Ｏ（2.3滴のCH₃
COOHで約PH６に調節した）で再結晶してクリ
ーム色の結晶、mp246〜247°分解、687mgを生成
した。 実施例 ２ ９−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ
メチル）グアニン Ａ アセトキシメチル１，３−ジアセトキ−２−
プロピルエーテル 高真空下で乾燥した後、式（さらに長い保持
時間）の含有量の高い実施例の１の段階Ａからの
留分を混合して残留油9.71ｇを生成し上記で記載
したのと同一条件下でHPLCに委ねた。分析
HPLCて定量された十分な純度の式の化合物を
含有する留分を混合し高真空下で濃縮してほとん
ど無色の残留油5.10ｇを生成した。分析HPLCは
式の化合物に対する式の化合物の比ピークの
高さに基づいて約15：１を示した。NMR
（CDCl₃）はこの異性体比と一致し、アセトキシ
メチル１，３−ジアセトキシ−２−プロピルエー
テルとしてこの化合物の固定と一致した。 Ｂ ２−アセタミド−９−（１，３−ジアセトキ
シ−２−プロポキシメチル）ヒポキサチン 蒸留アダプターを備えたフラスコ中ジアセチル
グアニン（）3.76ｇ（16ミリモル）、アセトキ
シメチル１，３−ジアセトキシ−２−プロピルエ
ーテル（）4.96ｇ（20ミリモル）、エタンスル
ホン酸40mgおよびトリグリム15mlの混合液を油浴
中低真空下155〜160°で加熱した。混合液を漸次
攪拌するのに十分希釈し、澄明な蒸留液を徐々に
収集した。反応混合液は約75分後澄明な溶液にな
つた。３時間後溶液を冷却し、生成物を結晶化に
誘導した。放置した後、濃厚な混合液を少量の
１，２−ジメトキシエタンで希釈した。固体を
過で集め少量の１，２−ジメトキシエタンで次に
酢酸エチルで洗浄してTLC（９：1CHCl₃−
MeOH）で定量された９および７−アルキル化
異性体の混合物からなるクリーム色の結晶3.27ｇ
を生成した。（９−異性体はこの系で７−異性体
よりさらに緩慢に作業する。）母液はさらに0.65
ｇの物質を生成した。混合した生成物（3.92ｇを
シリカゲルカラムで２回クロマトグラフイ処理
（97：３および次に96：4CH₂Cl₂−MeOHで溶離）
した。ほとんど純粋な９−アルキル化異性体を含
有する留分を混合し、濃縮した。最少量の１，２
−ジメトキシエタンで残渣を結晶化して第一生成
物665mg（白色結晶、mp171.5〜172.5°）および第
二生成物189mg（mp173〜173.5°）を生成した。初
期のバツチと比較してTLCで定量される純粋な
９−アルキル化生成物からなる生成物は両方とも
NMRおよび元素分析で十分に特徴付けられた。 Ｃ ９−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキ
シメチル）グアニン 40％メチルアミン（水性）8.5ml中２−アセタ
ミド−９−（１，３−ジアセトキシ−２−プロポ
キシメチル）ヒポキサンチン838mg（2.2ミリモ
ル）溶液をN₂下緩かな還流で１時間攪拌した。
次いで溶液を冷却し、濃縮乾固した。残渣の白色
固体を酢酸２滴を含有する最少量H₂Ｏで再結晶
した。冷蔵庫に放置した後、生成物を過器で集
め少量のH₂Ｏ、次にアセトンで洗浄した。材料
を高真空下75°で３時間乾燥して白色結晶529mg
（0.75H₂Ｏとの水和に基づいて90％）mp249〜
250°分解を生成した。物質はTLC（80：20：２
（CHCl₃−MeOH−H₂Ｏ）により均質であり、構
造はNMRによつて確認された。 実施例 ３ アセトキシメチル１，３−ジアセトキシ−２−
プロピルエーテル Ａ １，３−ジオキサン−５−イルアセテートお
よび１，３−ジオキソラン−４−メチルアセテー
ト グリセロルホルマル10.0ｇ（96ミリモル）、ピ
リジン8.35ｇ（105ミリモル）および酢酸無水物
20mlを湿気から保護した包囲温度で攪拌した。
２，３分から５日の後、溶液を真空下で分別蒸留
した。最初の留分は主としてピリジン、酢酸およ
び酢酸無水物からなる。生成物塊を56〜57°（1.1
mm）で蒸留した。生成物留分（10.8ｇ）を再循環
させながら３：１ヘキサン−酢酸エチル中シリカ
ゲルで分取用HPLCによつて５−および６−員環
異性体に分離した。留分を同定し、分析HPLCに
よつて純度をチエツクした。全体で１，３−ジオ
キソラン−４−酢酸メチル（より短い保持時間）
3.19ｇ（23％）および１，３−ジオキサン−５−
イルアセテート（より長い保持時間）5.23ｇ（37
％）を得た。構造はNMRで確認した。 Ｂ アセトキシメチル１，３−ジアセトキシ−２
−プロピルエーテル 酢酸無水物12mlおよび氷酢酸1.4mlの混合液中
１，３−ジオキソラン−４−メチルアセテート
6.0ｇ（41ミリモル）および塩化亜鉛0.4ｇの溶液
をN₂下包囲温度で攪拌した。発熱が起り、１時
間後TLC（２：１ヘキサン−酢酸エチル）は完全
な反応を示した。溶液を高真空下濃縮した。生成
した液体をエーテルに溶解し、NaHCO₃飽和溶
液で次にH₂Ｏで十分に洗浄した。エーテル層を
MgSO₄で乾燥し、過しそして濃縮して式の
化合物（多量の）および式の化合物（少量の）
の混合物からなる残留物8.68ｇを生成した。この
物質を同一バツチからの3.50ｇと混和した。粗生
成物12.18ｇの全部を再循環しながらヘキサン−
酢酸エチル７：３中シリカゲルで分取用HPLCに
よつて精製した。留分を分析HPLCで純度をチエ
ツクした。良好な留分を混和し濃縮して構造を
有する化合物5.84ｇ（≧90％純度）を生成した。
構造および純度をNMRで確認した。 実施例 ４ ブロモメチル１，３−ジアセトキシ−２−プロ
ピルエーテル アセトキシメチル１，３−ジアセトキシ−２−
プロピルエーテル（250mg，１ミリモル）を臭化
水素ガスで前飽和させたジクロロメタンにO°に
溶解させた。混合液を湿気から防ぎ、０℃で２時
間攪拌し次いで過剰の臭化水素を減らしながら包
囲温度に暖めておいた。３時間後溶媒をアスピレ
ーター真空下除去した。蒸発残渣をジクロロメタ
ンの２×10ml定分部で連続して処理し、アスピレ
ーター真空下蒸発させた。最後に残留油を臭化水
素の強い臭気がもはや明白でなくなるまで高真空
下で乾燥した。生成した物質を直接アルキル化反
応に用いることができた。CDCl₃溶液のプロトン
磁気共鳴スペクトルはAcOCH₂からBrCH₂Ｏま
での変化を表わす適当な低磁場（downfield）シ
フトを示した。 実施例 ５ クロロメチル１，３−ジアセトキシ−２−プロ
ピルエーテル 塩化メチレン45ml中のアセトキシメチル１，３
−ジアセトキシ−２−プロピルエーテル4.34ｇ
（17.5ミリモル）溶液を室温てHClの緩かな流れ
が通過するように攪拌した。２時間後HCl流れを
除去した。フラスコに栓をし、室温で一晩攪拌し
ておいた。次にフラスコを25〜30°で水浴中に置
き、溶液をN₂の流れでパージし、過剰のHClの
ほとんどを除去した。残存する溶液を回転蒸発に
よつて濃縮した。HClの痕跡量を除去するために
残留油をトルエンに取り、高真空下室温で濃縮し
た。この方法を３回以上繰り返した。室温で真空
乾燥後無色の残留油の収量は3.83ｇ（97％）であ
つた。NMRスペクトルは生成物に完全に転化し
たことを示した。 実施例 ６ ２−アセタミド−９−（１，３−ジアセトキシ
−２−プロポキシメチル）ピオキサンチン グアニン2.57ｇ（18ミリモル）、硫酸アンモニ
ウム1.8ｇおよびヘキサメチルジシラザン126mlの
混合液をN₂下環流で攪拌した。固体を徐々に溶
解した。２日後溶液を冷却し、高真空下で濃縮し
た。粘性の残留油を乾燥トルエン約28mlに溶解
し、N₂下で維持して乾燥トルエン12ml中クロロ
メチル−１，３−ジアセトキシ−２−プロピルエ
ーテル５ｇ（22.3ミリモル）溶液を添加した。生
成溶液をN₂下還流で1.5時間加熱した。次いで冷
却し、濃縮し、真空下で乾燥した。粘性の橙色残
留油を水30mlおよび重炭酸ナトリウム飽和溶液30
mlで処理した。混合液を蒸気浴上で５分間暖めな
がら振盪し、その間に残渣が凝固した。冷却後固
体をフイルターで収集し、少量の水で洗浄した。
このクリーム色の固体（4.6ｇ）はTLC（80：20：
2CHCl₃−MeOH−H₂Ｏ）でシングルスポツトを
示したが、NMRは７−アルキル化異性体10〜15
％さらに所望の９−異性体を含有することを示し
た。物質を他の作業からの同様の物質0.6ｇと混
和し、酢酸無水物184mlに懸濁させた。混合液を
97。°で18時間加熱し、その時間によつて固体の
ほとんどすべてが溶解し、そしてTLCが完全な
アセチル化を示した。反応を冷却し、真空下で濃
縮した。塩化メチレン200mlで残渣を処理して固
体を生成し、過によつて分離し、塩化メチレン
で１回洗浄した。塩化メチレンで再結晶して純粋
な９−異性体0.55ｇを生成した。液をシリカゲ
ル40ｇを含有するカラムを通過させた。CH₂Cl₂
−MeOHで溶離して部分精製した生成物4.5ｇを
生成した。塩化メチレン（約45ml）で再結晶させ
て純粋な９−異性体3.0ｇを得た。 実施例 ７ ９−（１，３−ジアセトキシ−２−プロポキシ
メチル）グアニン グアニン50.0ｇ（0.33モル）、硫酸アンモニウ
ム33ｇおよびヘキサメチルジシラザン2.2の混
合液をN₂下還流で３日間攪拌し、その間に固体
の全部が溶解した。次いで溶媒を減圧下蒸留で除
去した。極めて粘性の橙色の残留油をN₂下アセ
トキシメチル1.3−ジアセトキシ−２−プロピル
エーテル84ｇ（0.34モル）を添加し、フラスコの
底に第二液相を生成した。フラスコは蒸留アダプ
ターを備えており、混合液を低真空下油浴中で約
135°に加熱した。数分続く誘導期間の後沸騰が始
まり、まもなくかなり激しくなる。トリメチルシ
リルアセテート（あらゆる残渣のヘキサメチルジ
シラザンとともに）の蒸留は最初急速に進行する
が30分後におそくなつた。２時間後混合液を90％
EtOH1.3に添加した。混合液を沸騰するまで加
熱し、分離したゴム様物質が扱いやすい固体に変
形するまで維持した。固体（ほとんど独占的にグ
アニンからなる8.2ｇ）を熱しながら過によつ
て除去した。液を一晩放置し、橙褐色ゴムを分
離した。上澄をゴムから傾瀉し、過し次に少量
に濃縮した。濃縮時に分離した固体をフイルター
に集め、H₂Ｏで次にEtOHで洗浄してクリーム色
の結晶15.4ｇを生成した。TLCは部分側鎖脱アセ
チル化を示したがNMRによつてこの物質は単独
で９−アルキル化異性体であつた。物資はさらに
精製せずに脱保護に適当であつた。 母液および傾瀉によつて除去したゴムをさらに
処理してさらに９−および７−アルキル化異性体
（部分的に脱アセチル化された）の変化比からな
る生成物を生成した。これらの純度の低い生成物
はクロマトグラフイ精製（シリカゲル．CH₂Cl₂
−MeOHで溶離）に先立つて十分にアセチル誘
導体（０，0′，N²−トリアセチル）に転化する
ことが好ましい。典型的なアセチル化条件は粗グ
アニン誘導体10ｇおよび酢酸無水物400mlの混合
液を95〜100°で一晩攪拌することからなり、次に
濃縮およびクロマトグラフイ処理した。 実施例 ８ ９−（１，３−ジアセトキシ−２−プロポキシ
メチル）グアニン ９−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ
メチル）グアニン１水和物205mg（0.75ミリモル）
酢酸無水物1.5ml、乾燥ジメチルホルムアミド６
mlおよび乾燥ピリジン1.5mlの混合液を室温下乾
燥管で４日間攪拌した。次に混合液をEt₂Ｏ 15
mlで希釈した。固体をフイルターで集め、Et₂Ｏ
で洗浄した。２−メトキシエタノールで再結晶し
た後、無色＝149mg（59％）m.p.239〜240°を生成
した。物質はTLC（９：1CHCl₃−MeOH）で均
質であり、NMRは指定した構造を確認した。 分析（C₁₃H₁₇N₅O₆） 計算値：C46.01，H5.05，N20.64 測定値：C45.71，H5.04，N20.36 実施例 ９ ９−（１，３−ジプロピオニルオキシ−２−プ
ロポキシメチル）グアニン ９−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ
メチル）グアニン１水和物205mg（0.75ミリモ
ル）、プロピオン酸無水物1.5ml、乾燥ジメチルホ
ルムアミド６mlおよび乾燥ピリジン1.5mlの混合
液を室温において乾燥管で攪拌した。４日後混合
液をエーテル25mlで希釈した。固体をフイルター
で集め、エーテルで洗浄した。イソプロパノール
で再結晶して白色結晶、m.p.196〜197.5°136mg
（50％）を生成した。物質はTLC（９：1CHCl₃−
MeOH）でシングルスポツトとして進行し構造
をNMRによつて確認した。 分析（C₁₅H₂₁N₅O₆） 計算値：C49.04，H5.76，N19.07 測定値：C48.96，H5.83，N19.26 実施例 10 ９−（１−ヒドロキシ−３−オクタノイルオキ
シ−２−プロポキシメチル）グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド６mlおよび乾燥ピリ
ジン1.5ml中９−（１，３−ジヒドロキシ−２−プ
ロポキシメチル）グアニン１水和物410mg（1.5ミ
リモル）の懸濁液を氷浴中で冷却しながら乾燥管
で攪拌し、ジメチルホルムアミド1.5ml中オクタ
ノイルクロライド489mg（3.0ミリモル）溶液を約
５分にわたつて注射器で滴加した。混合液を室温
に徐々に暖めておき、24時間後高真空下で濃縮し
た。残留油を９枚の1000−μシルカゲルプレート
（CHCl₃−MeOH5：１で展開）で分取用TLCに
よつて精製した。生成物バンドを分離し、混合
し、ジメチルホルムアミドで抽出した。高真空下
で抽出液を濃縮し、ゴム様残渣を生成した。イソ
プロパノールで結晶化して物質を生成し、再びフ
イルターでゴム様にした。しかしながらエーテル
で十分研和して微薄黄色結晶105mg（18％）、m.
p.201.5〜203.5°を生成した。 実施例 11 ９−（１，３−ジオクタノイルオキシ−２−プ
ロポキシメチル）グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド2.8mlおよび乾燥ピ
リジン0.7ml中９−（１，３−ジヒドロキシ−２−
プロポキシメチル）グアニン（水和物137mg（0.5
モル）の懸濁液を室温で攪拌し、オクタノイルク
ロライド244mg（1.5ミリモル）を添加した。添加
を緩かな発熱によつて達成し、澄明溶液を得た。
オクタノイルクロライドをさらに82mg（0.5ミリ
モル）を3.5時間後添加した。最後に21時間後、
溶液を高真空下で濃縮した。残渣を塩化メチレン
５mlおよび水５mlに分配した。塩化メチレン相を
硫酸マグネシウムで乾燥し、過し、濃縮して薄
黄色の残留油を生成し、放置の際凝固した。この
物質を５枚の2000−μシリカゲルプレート
（CHCl₃−MeOH 12：１で展開）で分取用TLC
で精製した。生成物バンドを分離し、メタノール
で抽出した。抽出液を濃縮して得た残渣をエーテ
ル中に取り過した。液を蒸発して次に高真空
で乾燥して薄黄色橙色の光沢のある残渣162mg
（64％）を生成した。純度および構造をTLC
（CHCl₃−MeOH 12：１）、NMRおよび質量ス
ペクトルで確認した。 この化合物は用量レベル875μｇ／１羽で全身
に投与した場合鶏のひなのマイコプラズマ増殖を
75％阻害した。 実施例 12 ナトリウム９−（１，３−ジヒドロキシ−２−
プロポキシメチル）グアニン環状モノホスフエ
ート 無水トリエチルホスフエート60ml中オキシ塩化
リン3.6ｇ（2.2ml，23.6ミリモル）溶液中無水９
−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチ
ル）グアニン5.91ｇ（23.2ミリモル）懸濁液を室
温で５時間攪拌した。非常に清澄化した混合液を
過し、液を攪拌ヘキサン600mlに注入した。
約５分後上澄ヘキサンを沈殿生成物から傾瀉し、
残渣をヘキサンの第二600ml部と加熱した。上澄
ヘキサンを傾瀉し、残渣を真空内で乾燥した後、
固体生成物15.9ｇを得た。固体を脱イオン水800
mlに十分に溶解し、濁つた混合液を5N水酸化カ
リウム、次に1N水酸化カリウムでPH７に滴定し
た。中和した混合液を過し、液を凍結乾燥し
て生成物9.25ｇを生成した。 凍結乾燥残渣の試料を0.05MPH6.6リン酸塩緩
衝液溶離を有するホワツトマンパーテイシル^TM
PX10／25SAXイオン交換カラムを用いて高性能
液体クロマトグラフイによつて分析した。生成物
は約４分、７分および９分の保持時間で３本のピ
ークを示した。ナトリウムおよびカリウム９−
（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）
グアニン環式および非環式モノホスフエートの確
実な試料を本特許出願のこのおよび他の実施例で
開示したように分離し上記の系の高性能液体クロ
マトグラフイに委ねた後、環式モノホスフエート
を約４分の保持時間でそして非環式ホスフエート
を約７分の保持時間で結合した。 カリウム塩の凍結乾燥混合液を脱イオン水１
に溶解し、ひだ付の紙で過した。液を重炭
酸塩循環で200〜400メツシユバイオラドAG1−
X8アニオン交換樹脂460mlの４〜５cm直径カラム
に徐々に通過させた。次に0.05Mおよび0.5M重
炭酸カリウム２を含有する勾配溶離容器から
0.05〜0.5M重炭酸カリウムの勾配にカラムを通
して注入し、留分約20mlを８分間隔で収集した。
留分19で溶離剤を0.5M重炭酸カリウムに変え、
試料20〜25mlを6.8分間隔で収集した。溶離パタ
ーンを252nmにおける紫外線吸収によつて監視
し、種々の溶離ピークの特定の成分留分をさらに
0.05MPH6.6リン塩酸溶離を用いるホワツトマン
パーテイシル^TMＰ×10／25SAXイオン交換カラ
ムの高性能液体クロマトグラフイによつて特徴付
けた。これらのデータに基づいて特定の留分を混
和し、次の通り生成した。 上記の高性能液体クロマトグラフイ系において
保持時間約５分でシングルピークによつて特徴付
けられる留分450〜540（1680ml）を混和し、酸循
環で200〜400メツシユバイオラドAG50W−X8カ
チオン交換樹脂600ml（1020ミリ当量）で処理し
た。攪拌混合液を適度の真空下保持して過する
前に二酸化炭素を除去した。混合液を過し樹脂
を少量の脱イオン水で洗浄した。混和した液を
真空内で約35°で15mlに濃縮し、沈殿生成物を遊
離の酸の形で過によつて分離し、真空内で乾燥
して９−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキ
シメチル）グアニン環状モノホスフエート445mg
を生成した。生成物は偏光の顕微鏡により結晶性
であり、252nm（−10600，0.1MPH７リン酸塩中）
で最大紫外線吸収を示し、放出された構造に従つ
て十分に核磁気共鳴スペクトルを示した。母液を
濃縮して遊離酸形態の生成物をさらに46mgを生成
した。母液をPH７に滴定し次に凍結乾燥してナト
リウム９−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポ
キシメチル）グアニン環状モノホスフエート196
mgを生成した。後者の化合物は時々少量の水溶性
無機塩で汚染され、排除クロマトグラフイによつ
てまたはギ酸塩サイクルでバイオラドAG1−X8
アニオン交換樹脂のイオン交換クロマトグラフイ
によつて精製することができる。 純粋なナトリウム塩もまた次の通り結晶性遊離
酸の滴定によつて得ることができる。 結晶性９−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロ
ポキシメチル）グアニン環式モノホスフエート
213mgの懸濁液を1N水酸化ナトリウムでPH７に滴
定し、凍結乾燥してナトリウム９−（１，３−ジ
ヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グアニン環
式モノホスフエート227mgを生成した。この生成
物の乾燥した試料は252nmで（0.1MPHホスフエ
ート中11800）紫外線吸収最大を有した。 D₂Ｏ中環状生成物の200MHzNMRスペクトル
はモノホスフオリル化で低磁場へシフトした２当
量メチレンからのシグナルによつて特徴付けられ
る。スペクトルを次のケミカルシフトによつて特
徴付けられる。

【表】 さらに構造の確認はシフトの予測したパターン
が の照射でＰ−Ｏ−CH₂基に実現する時得られる。 10〜1000mM非緩衝KH₂PO₄の勾配を用いるヴ
アリアンAX−10高性能液体クロマトグラフイア
ニオン交換カラムにおいて環状生成物は保持時間
4.3分を有するが、酵素的に誘導された非環式モ
ノホスフエートは保持時間4.8分を有する。二つ
の混合物が上記の系のHPLCに委ねられる時非環
式酵素系性誘導モノホスフエートから合成環式モ
ノホスフエートをはつきりと分離することができ
る。 他方、環式モノホスフエートのナトリウムまた
はカリウム塩を結晶性遊離酸の分離をせずにバイ
オライドAG1−X8重炭酸塩溶出留分から分離す
ることができる。0.5M KHCO₃約800mlに達する
留分の組合わせを酸循環の200〜400メツシユ
AG50W−X8カチオン交換樹脂325ml（552ミリモ
ル）で処理した。攪拌混合液を適度の真空下15分
間維持して二酸化炭素を除去しそして過した。
液を約100ml容量に濃縮し、次に1N水酸化ナト
リウムでPH７に滴定した。生成容器を凍結乾燥し
て少量の水溶性無機塩で汚染された環状リン酸塩
のナトリウム塩529mgを生成した。 生成物を脱塩するためナトリウム塩200mgを脱
イオン水1.5mlに溶解し、ギ酸塩循環でバイオラ
ド200〜400メツシユAG1−X8アニオン交換樹脂
６mlの1.5cm直径カラム装填した。脱イオン水約
35mlをカラムに通過させた後2Nギ酸アンモニウ
ム溶液で溶離を開始した。3.5ml容量の留分を３
分間隔で集め、各留分の250mmにおける紫外線吸
収を測定して管番号に対してプロツトした。上記
のプロツトで得られた曲線の形に基づいて留分13
〜28を混和し、200〜400メツシユバイオライド
AG50W−X8カチオン交換樹脂120ml（204ミリ当
量）の２〜３cm直径カラムに装填した。カラムを
水で溶離し、留分13.5mlを4.5分間隔で収集した。
溶離パターンを紫外線吸収によつて252nmで監視
し、プロツトに基づいて留分22〜40を混和し、濃
縮乾固した。残渣を脱イオン水10mlに取り、
0.1N NaOHでPH７に滴定した。中和した溶液を
凍結乾燥してナトリウム９−（１，３−ジヒドロ
キシ−２−プロポキシメチル）グアニン環式モノ
ホスフエート106mgを生成した。 実施例 13 ニナトリウム９−（１，３−ジヒドロキシ−２
−プロポキシメチル）グアニン非環式モノホス
フエート 製造 １ 対応する環式モノホスフエートを生成するため
にオキシ塩化リンでの９−（１，３−ジヒドロキ
シ−２−プロポキシメチル）グアニンのホスフオ
リル化において粗縮合生成物をバイオライド
AG1−X8（CO₃ ⁼）のイオン交換クロマトグラフ
イによつて精製した。環状モノホスフエートの製
造の実施例で記載したように0.5M重炭酸カリウ
ムで溶離する過程で留分245〜248からなる別のピ
ークを分離し、対応する非環式化合物二カリウム
９−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシメ
チル）グアニン非環式モノホスフエートを含有す
ることを見出した。パーテイシル^TMPXS10／
25SAX高性能液体クロマトグラフイカラムおよ
び0.05MPH6.6リン酸塩緩衝液での溶離を用いて
このピークは保持時間約５および８分を有する物
質を含有した。確実な非環式モノホスフエートを
同一系の保持時間７〜８分と結合した。10〜
400mM非緩衝KH₂PO₄で勾配溶離を用いるヴア
リアンAx−10高性能液体クロマトグラフイアニ
オン交換カラムでのこの混和留分の分析は物質の
約40％が二カリウム９−（１，３−ジヒドロキシ
−２−プロポキシメチル）グアニン非環式モノホ
スフエートであることを示した。 製造 ２ 5N水酸化ナトリウム４ml中ナトリウム９−
（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）
グアニン環式モノホスフエート44.5mg溶液を55〜
60℃で窒素下で８時間加熱した。反応混合液を脱
イオン水で12ml容量に希釈し、スルホン酸循環の
パイオライドAG50W−X8カチオン交換樹脂の30
ml（直径２cm×長さ12cm）カラムにゆつくりと通
過させた。カラムを脱イオン水で溶離し、留分５
mlを４分間隔で収集した。留分60を収集した後、
留分12mlを４分毎に集めた。種々の留分を252nm
における紫外線吸収によつておよび0.05MPH6.6
リン酸塩緩衝溶離を用いるパーテイシヤル^TM
PXS10／25SAXアニオン交換カラムの高性能液
体クロマトグラフイによつても評価した。独占的
に約7.5分の保持時間を有する物質からなる留分
45〜64を混和し、0.1N水酸化ナトリウムでPH７
に滴定し、次に凍結乾燥してニナトリウム９−
（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）
グアニン非環式モノホスフエート30mgを生成し
た。酸化デユーテリウム中生成物の200MHz核磁
気スペクトルは非環式モノホスフエート構造と完
全に一致する。分析C₉H₁₂N₅O₇PNa₂（379.19）に
対する計算値，N18.47，C28.51，H3.19，P8.17，
Na12.13。 測定値，N18.07，C28.67，H3.36，P8.51，
Na11.90。（原子吸収による）。λmax252nm，
ε9600（0.1MPH７リン酸塩） 実施例 14 ９−〔１，３−ビス（フエノキシアセトキシ）−
２−プロポキシメチル〕グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド４mlおよび乾燥ピリ
ジン1.4ml中９−（１，３−ジヒドロキシ）−２−
プロポキシメチル）グアニン１水和物273mg（1.0
ミリモル）の懸濁液を氷浴で冷却しながら窒素下
で攪拌し、ジメチルホルムアミド1.6ml中フエノ
キシアセチルクロライド552μ（682mg，４ミリ
モル）溶液を10分間にわたつて隔膜を通して注射
器で滴加した。氷が溶解した後混合液を室温に
徐々に暖めておいた。薄黄色溶液を得た。15時間
後溶液を高真空下緩かに暖めながら濃縮した。金
色の残留油をシリカゲルカラム（勾配溶離CH₂
Cl₂−MeOH98：２〜CH₂Cl₂−MeOH92：８）で
クロマトグラフイ処理した。ほとんど純粋な生成
物を含有する留分を混和し、濃縮して油を生成
し、エーテル−アセトンで研和した際凝固した。
少量のアセトニトリルで再結晶して白色結晶114
mg，m.p.114〜116°を生成した。構造および純度
をNMRおよびTLC（CHCl₃−MeOH）によつて
確認した。第二生成物66mgを母液から得た。 分析（C₂₅H₂₅N₅O₈）C₂₅H₂₅N₅O₈・H₂O93.5％＋
無機6.5％に対する 計算値：C51.84，H4.70，N12.09 測定値：C51.94，H4.74，N11.99 実施例 15 ９−（２，３−ジベンゾイルオキシ−１−プロ
ポキシメチル）グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド４mlおよび乾燥ピリ
ジン1.4ml中水化９−（２，３−ジヒドロキシ−１
−プロポキシメチル）グアニン（１ミリモル）の
懸濁液を窒素下氷浴で攪拌し、ジメチルホルムア
ミド1.6ml中塩化ベンゾイル（４ミリモル）溶液
を滴加した。混合液を室温に徐々に暖めておい
た。一晩攪拌した後溶液を高真空で濃縮した。残
渣をシリカゲル（CH₂Cl₂−MeOHで溶離）でク
ロマトグラフイ処理して生成物を得た。構造およ
び純度をNMRおよびTLC（CHCl₃−MeOH9：
１）で確認した。 実施例 16 ９−（１，３−ジイソバレリルオキシ−２−プ
ロポキシメチル）グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド４mlおよび乾燥ピリ
ジン1.4ml中水化９−（１，３−ジヒドロキシ−２
−プロポキシメチル）グアニン（１ミリモル）の
懸濁液を氷浴で窒素下攪拌し、ジメチルホルムア
ミド1.6ml中イソパレリルクロライド（４ミリモ
ル）溶液を滴加した。室温に徐々に暖めた後混合
液を一晩攪拌した。生成溶液を緩かに暖めながら
高真空下で蒸発させた。シリカゲル（CH₂Cl₂−
MeOHで溶離）で残渣をクロマトグラフイ処理
して生成物を生成した。構造および純度をNMR
およびTLC（CHCl₃−MeOH9：１）で確認した。 実施例 17 ９−〔１，３−ビス（フエニルアセトキシ）−２
−プロポキシメチル〕グアニン ９−〔１，３−ビス（フエノキシアセトキシ）−
２−プロポキシメチル〕グアニン（実施例14）に
用いた操作に従つて９−（１，３−ジヒドロキシ
−２−プロポキシメチル）グアニン（１ミリモ
ル）をフエニルアセチルクロライド（４ミリモ
ル）と反応させて化合物を製造した。クロマトグ
ラフイ処理した後NMRおよびTLC（CHCl₃−
MeOH9：１）によつて生成物を特徴付けた。 実施例 18 ９−〔１，３−ビス（10−ウンデセノイルオキ
シ）−２−プロポキシメチル〕グアニン ９−〔１，３−ビス（フエノキシアセトキシ）−
２−プロポキシメチル〕グアニン（実施例14）に
用いた方法に従つて水化９−（１，３−ジヒドロ
キシ−２−プロポキシメチル）グアニン（１ミリ
モル）を10−ウンデセノイルクロライド（４ミリ
モル）と反応させて化合物を製造した。クロマト
グラフイ処理後生成物を得た。構造および純度を
NMRおよびTLC（CHCl₃−MeOH9：１）によつ
て確認した。 実施例 19 ９−〔１，３−ビス（メトキシアセトキシ）−２
−プロポキシメチル〕グアニン ９−〔１，３−ビス（フエノキシアセトキシ）−
２−プロポキシメチル〕グアニン（実施例14）に
用いた方法に従つて水化９−（1.3−ジヒドロキシ
−２−プロポキシメチル）グアニン（１ミリモ
ル）をメトキシアセチルクロライド（４ミリモ
ル）と反応させて、クロマトグラフイ処理後所望
の生成物を生成した。構造および純度の確認を
NMRおよびTLC（CHCl₃−MeOH9：１）によつ
て得た。 実施例 20 ９−〔１，３−ビス（イミダゾール−１−イル
カルボニルオキシ）−２−プロポキシメチル〕
グアニン ９−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ
メチル）グアニン１水和物55mg（0.2ミリモ）、
１，1′−カルボニルジイミダゾール130mg（0.8ミ
リモル）および乾燥ジメチルホルムアミド２mlを
窒素下95〜100°で1.5時間攪拌し、その時に澄明
溶液を得次に生成物を沈殿させた。冷却後沈殿を
フイルターで集め、ジメチルホルムアミドで次に
アセトンで洗浄して白色結晶、m.p.252〜253°分
解、37mgを生成した。NMRスペクトルは指定さ
れた構造と一致した。 分析（C₁₇H₁₇N₉O₆） 計算値：C46.05，H3.87，N28.43 測定値：C45.68，H3.90，N28.18 実施例 21 25℃におけるPH7.2緩衝液の比較溶解度 約0.15モルリン酸塩緩衝液（PH7.2）中に過剰
量の化合物を懸濁させ水浴に25℃で一晩振盪させ
て飽和溶液を生成することによつて溶解度を定量
した。過した溶液中の化合物濃度を分光測光測
定即ち飽和溶液に対するλmaxにおける紫外線吸
光度と公知の化合物濃度に対して観察された吸光
度値との比較に基づいて計算した。結果は次の通
り要約された。 化合物 溶解度（mg／ml） アシクログアノシン 1.3〜1.5 式の化合物 3.6 実施例 22 ヘルペスウイルス誘発チミジンキナーゼによる
式の化合物およびアシクログアノシンのホス
フオリル化 50％ジメチルスルホキサイド（DMSO）30μ
に溶解した式の化合物30μｇを50mMトリス−
HCl緩衝液、PH7.5，2.5mMアデノシントリホス
フエート、2.5mM塩化マグネシウム、7.5mMホ
スフオクレアチン、クレアチンキナーゼ２単位、
2mMジチオスレイトール、2.5mMフツ化ナトリ
ウム、牛の血清アルブミンおよびチミジンキナー
ゼ0.0014単位と最終容量150μで３時間培養し、
CHENG ＆ OSTRNDERの方法（ジヤーナル
オブパイオロジカルケミストリ，1976年、第251
巻、第2605頁）によつて感染後８時間取り入れた
重複度10（１細胞につき10ウイルス粒子）でウイ
ルス感染HeLa細胞（HSV1ウイルス）から分離
した。 アシクログアノシン30μｇを含有する50％
DMSOの類似の混合液を同様に処理した。 50％DMSO30μだけを含有し抗ウイルス化合
物のないほかは上記と類似の４番目の混合液もま
たコントロールとして同様に処理した。 ３時間の培養期間の終りに各混合液の10μ試
料をAx−10カラムおよびリン酸カリウム（KH₂
PO₄）勾配溶離（0.01〜1.0M）を用いるHPLCに
よつて分析した。各抗ウイルス化合物のモノホス
フエート誘導体の量を各クロマトグラフイピーク
の面積の総和によつて評価した。結果はアシクロ
グアノシン16％がモノホスフエート誘導体に転化
する一方式の化合物90％が同一条件下で各モノ
ホスエートに転化することを示した。 そこで培養混合液の残りにグアノシンモノホス
フエートキナーゼ0.04単位およびHSV1−感染
HeLa細胞の抽出物20μ〔細胞は重複度10でウ
イルスに感染し８時間後に取り入れた。それらを
0.35M KH₂PO₄，PH7.5，0.5mMジチオスレイト
ール、0.2％ポリオキシエチレン(9)オクチルフエ
ノール（ノニデツトＰ−40）、14％グリセロール
50mg／ml溶液に懸濁させ4°で30分後100000ｇで遠
心分離した。上澄液は粗生成物であつた。〕を添
加した。培養を30°で４時間以上続け、その後
HPLCで分析し、各化合物のトリホスフエート誘
導体量を各々クロマトグラフイピークの面積の総
和によつて定量した。結果は式の化合物55％が
トリホスフエート誘導体に転化するのに比較され
るようにアシクログアノシン30％がこれらの条件
下でトリホスフエートに転化したことを示した。 ホスフオリル化がこれらの化合物の抗ウイルス
作用に対する前要件であると推定されることから
式の化合物のモノホスフエートおよびトリホス
フエート誘導体へのホスフオリル化のより高い割
合がアシクログアノシンにまさるかなりの改良を
示す。 実施例 30 式の化合物の非環式モノホスフエートの酵素
調製 式の化合物（１mg）をPH6.5の50mMリン酸
カリウム緩衝液、牛の血清アルブミン１mg／ml、
アデノシントリホスフエート5mM、塩化マグネ
シウム5mM、ジチオスレイトール1mM、ホスフ
オクレアチン1mM、クレアチンキナーゼ12.5単
位／ml、フツ化ナトリウム2.5mMおよび精製
HSV1−誘発チミジンキナーゼを含有する全量
0.5mlの混合液中37°で培養した。反応の進行を高
性能液体クロマトグラフイ（HPLC）で監視し
た。式の化合物がモノホスフエートに転化した
時、反応が終結した。生成物を分取用アニオン交
換カラム（AX−10、ヴアリアン）のHPLCクロ
マトグラフイで精製し、溶離溶媒としてトリエチ
ルアンモニウムカーボネートPH7.6を有するジエ
チルアミノエチルセルロース（DEAE）のクロマ
トグラフイによつて脱塩した。生成物を含有する
プールした留分からの溶媒を凍結乾燥して化合物
モノホスフエート500μｇを生成し、その純度
を分析HPLCで確認した。 実施例 31 試験管内細胞培養におけるウイルス感染の処理 数種の異なるウイルス感染を防御するのに有効
な式，の化合物またはアシクログアニジンの最
小濃度を定量するために種々の細胞培養系におい
て検定を行なつた。 ａ 単純ヘルペスウイルス１および２型： ウイルスの10組織培養感染服用量（TCID₅₀）
に感染したウサギの腎臓細胞単層の50％のウイル
ス細胞変性の展開を全体に抑制するために必要と
される式またはアシクログアノシンの化合物を
添付の表に示す。３種の化合物すべてが匹敵する
活性を示した。 組織培養においてヘルペスウイルスに対して活
性な式，またはアシクログアノシンの最小濃度

【表】 実施例 32 マウスにおける単純ヘルペスウイルス感染治療 20ｇICR／Haマウスに単純ヘルペスウイルス
型（HSV−１）スクーラー菌株の保存製剤
10^-5希釈0.5mlを腹腔内（ip）に注射した。この
ウイルス攻撃を約100LD₅₀で各動物に感染させ
た。ウイルス感染後直ちに開始し毎日２回４日間
続け各動物にアシクログアノシン500μｇ、125μ
ｇまたは31μｇ、式の化合物500μｇ、125μｇ、
または31μｇ、またはプラセボー（生理食塩水、
PH11.5）を15のグループに皮下注射した。プラセ
ボーグループは45匹の動物から構成された。 化合物はすべて生理食塩水PH11.5に溶解した。 マウスを15日間毎日同じ時間に観察し、死亡の
日を各動物に対して記録した。 統計的分析（参照：リデル，F.D.K.1978年，
Evalution of Survival in Challenge
Experiments，Microbiol.Rev.第42巻，第237〜
249頁）を負の指数転換によつて転換される生存
時間によつて行なつた。 ｆ（ｔ）＝１−（0.1）^t/T 式中ｔ＝動物が生存した日数 Ｔ＝試験期間
（15日） 連続補正を毎日の観察を説明するために用い
た。 fc（ｔ）＝１／２〔ｆ（ｔ）＋ｆ（ｔ−１）〕 各グループの中で試験期間を通じて生存するマ
ウスを0.9および1.0の数値を同様に指定して試験
の停止を調節した。 １グループ当り平均生存時間を次の通り平均補
正転換生存時間〔fc（ｔ）〕から計算した。 ｔ平均＝〔Ｔ／log（0.1）〕．〔log（１−fc（ｔ）
〕 要約した結果を次の表に示す。

【表】 実施例 33 マウスにおける単純ヘルペスウイルス感染の治
療 各動物にアシクログアノシン1000μｇ、500μｇ
または125μｇ、式の化合物500μｇ、125μｇま
たは31μｇ、またはプラセボーを15のグループに
毎日２回皮下注射した以外は実施例32に記載した
実験を繰り返した。1000μｇ服用量アシクログア
ノシン治療グループは各10匹の動物で構成され
た。要約した結果を次の表に示す。

【表】 実施例32および33からの組合わせた結果を用い
て式の化合物のアシクログアノシン（95％CI）
に対する計算平均相対効力は9.2であつた。 式の化合物のホスフエート誘導体の製造方法 式の化合物のモノおよびポリホスフエートは
トリエチルホスフエートのような適当な非プロト
ン性溶媒中式の化合物をホスフオリルクロライ
ドのようなホスフオリル化剤と反応させ、生成し
た中間体を水または塩基で処理することによつて
化学的に製造することができる。この反応の多量
の生成物は式の環式ホスフエートであるが、非
環式モノおよびジホスフエートもまた製造され
る。生成物比は作用物質の量または治療の長さお
よび温度の変化によつて変えることができる。 炭化水素非極性溶媒で沈殿し、アルコールで急
冷することによつてホスフオリル化中間体を分離
することも都合がよい。この反応の生成物は塩基
性水性処理が使用されるかされないかに依存して
アルキルホスフオトリエステルまたはアルキルホ
スフオジエステルであることができる。 式の化合物のホスフオリル化誘導体〔即ちモ
ノ−線状ジ−（ピロホスフエート）または線状ト
リホスフエート〕もまた式の化合物をHSV1チ
ミジンキナーゼ（モノホスフエートを製造するた
めに）で、さらにグアノシンモノホスフエートキ
ナーゼ（ピロホスフエートを製造するために）
で、そしてさらに３−ホスフオグリセレートキナ
ーゼ（トリホスフエートを製造するために）で処
理することによつて酵素的に製造することができ
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式： （式中R〓およびR²は夫々Ｈ、【式】又は 【式】であるか又はOR¹及びOR²が一緒に なつて【式】である。 R³Ｈは、直鎖又は分枝鎖、飽和又はモノー又
   はポリ不飽和であることができる１〜20個の炭素
   原子を有するアルキル、アリール、置換アリー
   ル、ヘテロシクリル、アラルキル、アルコルキシ
   アルキル又はアリールオキシアルキルである。
   R⁴及びR⁵は各々Ｈ、医薬的に使用し得るカチオ
   ン、直鎖又は分枝鎖であることができる１〜８個
   の炭素原子を有するアルキル、アリール、アラル
   キル、ホスフエート又はピロホスフエートである
   およびR⁸はＨまたは【式】である。但し、 R¹がＨであり、かつR²が【式】であり、か つR⁶が【式】であるときを除く。） を有する化合物。 ２ R¹、R²及びR⁸の各々がＨである特許請求の
   範囲第１項記載の化合物。 ３ OR¹及びOR²が一緒になつて
   【式】である特許請求の範囲第１項記 載の化合物。 ４ 式 （式中R⁶は【式】 【式】又は【式】であ り、R⁷はＨであるおよびR⁸はＨ、【式】で ある。ただし、R⁶が【式】であり かつ【式】であるときを除く。）を有す る特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ５ 式 （式中、R⁶が【式】であり、 R⁷がＨである場合は、R⁸はＨ又は −Ｃ（Ｏ）R³であり、R³は直鎖又は分枝鎖、飽
   和又はモノー又はポリ不飽和であることができる
   １〜20個の炭素原子を有するアルキル、アリー
   ル、置換アリール、ヘテロシクリル、アラルキ
   ル、アルコルキシアルキル又はアリールオキシア
   ルキルである。）の化合物を脱アシル化すること
   を特徴とする式： （式中、R¹、R²およびR⁸は各々Ｈである。）の
   化合物の製造方法。 ６ 構造式： （式中、R¹、R²およびR⁸は各々Ｈである）の
   化合物を 式： 【式】 （式中、Ｘはカルボキシル活性化基である）のア
   シル化剤と反応させて、アシル化剤１当量が式
   の化合物と反応するまで反応させて、式中の
   R¹位、R²位及びR⁸位のうち１つがアシル化され
   たモノアシル化化合物を生成し、又はアシル化剤
   ２当量が式の化合物と反応するまで反応させ
   て、式中のR¹位、R²位およびR⁸位のうち２つ
   がアシル化されたジアシル化化合物を生成し、又
   はアシル化剤３当量が式の化合物と反応するま
   で反応させて、式中のR¹位、R²位およびR⁸位
   がアシル化されたトリアシル化化合物を生成する
   ことを特徴とする構造式： （式中、R⁶が【式】であり、 R⁷がＨである場合は、R⁸はＨ又は −Ｃ（Ｏ）R³であり、R³は直鎖又は分枝鎖、飽
   和又はモノー又はポリ不飽和であることができる
   １〜20個の炭素原子を有するアルキル、アリー
   ル、置換アリール、ヘテロシクリル、アラルキ
   ル、アルコキシアルキル又はアリールオキシアル
   キルである。）の化合物の製造方法。 ７ カルボキシル活性化基がハライド、アシロキ
   シ、１−ベンゾトリアゾリルオキシ、Ｎ−スクシ
   ンイミジルオキシまたは１，３−二置換イソウレ
   イドである特許請求の範囲第６項記載の方法。 ８ 式： （式中、R¹、R²およびR⁸は各々Ｈである）の
   化合物をホスフオリル化剤と反応させ、生成した
   中間体を水または１〜８個の炭素原子を有するア
   ルカノールで処理することを特徴とする式： （式中R¹およびR²の一方が【式】で他 方が、Ｈであるか、又はR¹およびR²が
   【式】であるかまたはOR¹およびOR²が一 緒になつて【式】であり、（R⁴および R⁵は各々Ｈ、医薬的に使用し得るカチオン、直
   鎖又は分枝鎖であることができる１〜８個の炭素
   原子を有するアルキル、アリール、アラルキル、
   ホスフエート又はピロフオスフエートである）、
   R⁸がＨである）の化合物の製造方法。 ９ ホスフオリル化剤がPOX₃（式中Ｘはハロゲ
   ンである）である特許請求の範囲第８項記載の方
   法。 １０ HSV1チミジンキナーゼおよびアデノシン
   トリホスフエートの存在下で式： （式中、R¹、R²およびR⁸は各々Ｈである）の
   化合物を培養することを特徴とする 式： （式中R¹またはR²の一つは【式】であ り他はＨであるかまたはOR¹およびOR²が一緒に
   なつて【式】であり、（R⁴およびR⁵は 各々Ｈ、医薬的に使用し得るカチオン、直鎖又は
   分枝鎖であることができる１〜８個の炭素原子を
   有するアルキル、アリール、アラルキルである）、
   R⁸がＨである）の化合物の製造方法。 １１ HSV1チミジンキナーゼ、アデノシントリ
   ホスフエートおよびグアノシンモノホスフエート
   キナーゼの存在下で式： （式中、R¹、R²およびR⁸は各々Ｈである）の
   化合物を培養することを特徴とする 式： （式中、R¹およびR²の少なくとも１つが
   【式】であり残りはＨであるかまたはOR¹ およびOR²が一緒になつて【式】であ り、（R⁴またはR⁵の一つはホスフエートであり他
   はＨ、医薬的に使用し得るカチオン、直鎖又は分
   枝鎖であることができる１〜８個の炭素原子を有
   するアルキル、アリール、アラルキルまたはホス
   フエートである）、R⁸がＨである）の化合物の製
   造方法。 １２ HSV1チミジンキナーゼ、アデノシントリ
   ホスフエート、グアノシンモノホスフエートキナ
   ーゼおよびHSV1−感染細胞の抽出液の存在下で
   式： （式中、R¹、R²およびR⁸は各々Ｈである）の
   化合物を培養することを特徴とする 式： （式中R¹またはR²の一つは【式】であ り他はＨである、またはOR¹およびOR²が一緒に
   なつて【式】であり（R⁴またはR⁵の一 つはピロホスフエートであり他方はＨ、医薬的に
   使用し得るカチオン、直鎖又は分枝鎖であること
   ができる１〜８個の炭素原子を有するアルキル、
   アリール、アラルキルである。）、R⁸がＨである）
   の化合物の製造方法。 １３ 3′ホスフオグリセレートキナーゼ、３−ホ
   スフオグリセリルアルデヒド脱水素酵素および３
   −ホスフオグリセリルアルデヒドと 式： （式中R¹またはR²の一つは【式】であ り他方はＨであり、そしてR⁴はホスフエートで
   あり、そしてR⁸はＨである（R⁵はＨ、医薬的に
   使用し得るカチオン、直鎖又は分枝鎖であること
   ができる１〜８個の炭素原子を有するアルキル、
   アリール、アラルキルである。））の化合物を培養
   することを特徴とする 式： （式中R¹またはR²の一つは【式】であ り、R⁸はＨであり、（R⁵はＨ、医薬的に使用し得
   るカチオン、直鎖又は分枝鎖であることができる
   １〜８個の炭素原子を有するアルキル、アリー
   ル、アラルキルである。）他はＨである、そして
   R⁴はピロホスフエートである）の化合物の製造
   方法。