JPH05178837A - 新規抗生物質ピエリシジンｂ５及びピエリシジンｂ５ ｎ−オキシド並びにそれらの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 既知のピエリシジン関連物質よりも、イノシ
トールリン脂質代謝回転阻害性、抗腫瘍性、抗菌活性に
於て優れており、毒性等の副作用の少い新規の抗生物質
を提供する。 【構成】 式（Ｉ）で表わされるピエリシジンＢ_５、式
（Ｉ′）で表わされるピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシ
ド、ストレプトミセス属に属するピエリシジンＢ_５生産
菌を培養してその培養物から式（Ｉ）又は式（Ｉ′）の
化合物を採取することによるそれらの化合物の製造法、
ならびに式（Ｉ）の化合物又は式（Ｉ′）の化合物を有
効成分とするイノシトールリン脂質回転阻害剤、抗腫瘍
剤ならびに抗菌剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規な抗生物質に関し、
より具体的にはイノシトールリン脂質代謝回転阻害活
性、癌細胞増殖阻害活性を有する新規な抗生物質、ピエ
リシジンＢ_５及びピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシド並び
にそれらの製造法及び用途に関する。また、本発明は抗
菌活性を有する新規抗生物質ピエリシジンＢ_５ Ｎ−オ
キシドを有効成分とする殺菌剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】微生物の産生する抗腫瘍性物質及び抗菌
性物質に関しては既に多数の有用な化合物が実用化され
ているが、これらは薬効及び副作用の点では必ずしも満
足できるものではなく、より有効な新規の抗腫瘍性及び
抗菌性物質の提供が待たれている。

【０００３】ピエリシジン関連物質は既に多くの化合物
が発見されている〔「アグリカルチュラル・バイオロジ
カル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎ
ｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」２７
巻、５７６−５８２頁（１９６３年）〕、〔「同前」４
１巻、８４９−８６２頁（１９７７年）〕が、既知のピ
エリシジン関連物質のいづれも毒性が強く、抗菌活性も
低い。また、イノシトールリン脂質代謝回転は種々のホ
ルモン、細胞増殖因子及びｒａｓ、ｓｒｃ等の癌遺伝子
によって活性化される細胞内情報伝達機構であり〔「サ
イエンス」（Ｓｃｉｅｎｃｅ）」２３１巻、４０７−４
１０頁（１９８６年）〕、この代謝回転を阻害する物質
は制癌活性を有する〔「プロシーディングズ・オブ・ザ
・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシーズ・オ
ブ・ザ・ＵＳＡ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ Ｔｈ
ｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ ＯＦ ＴＨＥ ＵＳＡ）」８２巻、９０５
７−９０６１頁（１９８８年）〕ことが期待される。

【０００４】

【発明が解決すべき課題】本発明は上記の希求に応える
ことのできる新規な抗生物質を提供することを目的とす
るものである。そして、先に、本発明者らは、ストレプ
トミセス属に属する一菌株の培養液中に抗菌活性、抗腫
瘍活性およびイノシトールリン脂質代謝回転の阻害活性
をもつ物質が産生され蓄積されていることを認め、その
物質を単離してそれの化学構造が下記の式（Ａ）：

【０００５】

【０００６】で表わされるピエリシジンＢ_１ Ｎ−オキ
シドであること、この物質が抗細菌活性、抗かび活性、
白血病Ｌ−１２１０細胞及びＰ３８８Ｄ_１細胞の増殖阻
害活性、一般に抗腫瘍活性を有すること、またイノシト
ールリン脂質代謝回転に対する阻害活性も有すること、
及び新規な化合物であることを知見した（特願平３−１
１２１２３号参照）。

【０００７】

【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは、イ
ノシトールリン脂質代謝回転阻害活性及び抗腫瘍活性を
もつ新規な化合物を見いだすべく、鋭意研究を進めた。
そして、本発明者らは、ストレプトミセス属に属する前
記の菌株の培養液中にイノシトールリン脂質代謝回転阻
害活性、抗腫瘍活性及び抗菌活性をもつ別の２つの物質
が産生され蓄積されていることを認め、それらの物質を
単離してそれらの化学構造が後記の式（Ｉ）で表わし得
るピエリシジンＢ_５及びピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシ
ドであること、これらの物質がイノシトールリン脂質代
謝回転阻害活性、ヒト扁平上皮癌のＡ４３１細胞、ＫＢ
細胞の増殖阻害活性、一般に抗腫瘍活性を有すること、
また抗菌活性も有すること及び新規な化合物であること
を知見した。これらの研究の結果に基づいて、本発明を
完成した。

【０００８】すなわち、第１の発明においては、式
（Ｉ）：

【０００９】

【００１０】で表わされる化合物であるピエリシジンＢ
_５及び下記の式（Ｉ′）：

【００１１】

【００１２】で表わされる化合物であるピエリシジンＢ
_５ Ｎ−オキシドから選ばれる新規な抗生物質、ピエリ
シジンＢ_５又はピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドが提供
される。

【００１３】また、第２の本発明では、ストレプトミセ
ス属に属するピエリシジンＢ_５又はピエリシジンＢ_５
Ｎ−オキシド生産菌を培養し、その培養物から上記の式
（Ｉ）のピエリシジンＢ_５又は式（Ｉ′）のピエリシジ
ンＢ_５ Ｎ−オキシドを採取することを特徴とする、ピ
エリシジンＢ_５又はピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドの
製造法が提供されるものである。

【００１４】本発明によるピエリシジンＢ_５は下記の理
化学的性質を有する。

【００１５】 形状外観：淡黄色油状物質 質量分析：〔ＦＡＢ−ＭＳ（positive）〕m/z 444
(Ｍ＋Ｈ）^＋ 〔ＦＡＢ−ＭＳ（negative）〕m/z 442(Ｍ−Ｈ）⁻ 分子式 ：Ｃ_２７Ｈ_４１ＮＯ_４ 比旋光度：〔α〕_Ｄ ^２４＝−１２．５°（ｃ ０．
２，メタノール） 紫外部吸収スペクトル：添付図面の図１に示す。

【００１６】〔ＭｅＯＨ中〕：λmax ，nm（ε）232(31
270)，237(31890)，267(5010) 〔０．１Ｎ ＨＣｌ−ＭｅＯＨ中〕：λmax ，nm（ε）
210(34960)，237(30970)，273(9380） 〔０．１Ｎ ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ中〕：λmax ，nm
（ε）238(37200) 赤外部吸収スペクトル（クロロホルム中) ：添付図
面の図２に示す。

【００１７】その主要吸収帯は次の通りである。

【００１８】νmax ，cm^−１ 3530, 2980, 2950, 289
0, 2840sh, 1630, 1600, 1480,1450, 1430, 1400, 139
0, 1370, 1340, 1260, 1230sh,1200, 1140, 1110, 109
0, 1060, 1010, 980, 960, 910,890, 870 ^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ｐｐｍ，多重度，重ク
ロロホルム中）：10.4q, 10.5q, 12.9q, 14.1q, 16.6q,
17.7q, 20.9t,34.4t, 35.4d, 43.1t, 53.1q, 56.1q, 6
0.6q, 92.7d,112.0s, 121.8d, 125.1d, 127.8s, 132.2
d, 132.3s,133.3d, 135.0d, 135.2s, 136.4d, 150.9s,
153.5s,154.0s ^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ｐｐｍ，多重度，重クロ
ロホルム中）：0.78(3H, d), 0.98(3H, t), 1.52(3H,
s),1.74(6H, s), 2.06(2H, m), 2.09(3H, s),2.65(1H,
m), 2.77(2H, d), 3.13(3H, s),3.16(1H, d), 3.77(2H,
d), 3.86(3H, s),3.96(3H, s), 5.29(1H, d), 5.34(1
H, t),5.39(1H, t), 5.51(1H, m), 6.08(1H, d) 溶解性：クロロホルム，酢酸エチル，メタノール等
に可溶、水に難溶である。

【００１９】また、本発明によるピエリシジンＢ_５ Ｎ
−オキシドは下記の理化学的性質を有する。

【００２０】 形状外観：淡黄色油状物質 質量分析：〔ＦＡＢ−ＭＳ（positive) 〕m/z 460
(Ｍ＋Ｈ）^＋ 〔ＦＡＢ−ＭＳ（negative）〕m/z 458(Ｍ−Ｈ）⁻ 分子式 ：Ｃ_２７Ｈ_４１ＮＯ_５ 比旋光度：〔α〕_Ｄ ^２４＝−８．０°（ｃ ０．
２，メタノール） 紫外部吸収スペクトル：添付図面の図３に示す。

【００２１】〔ＭｅＯＨ中〕：λmax ，nm（ε）227(39
760)，238sh(34250)，246sh(23850), 267(8930) 〔０．１Ｎ ＨＣｌ−ＭｅＯＨ中〕：λmax ，nm（ε）
214(36150)，238(30310)，246sh(23850), 275(6060) 〔０．１Ｎ ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ中 :λmax ，nm（ε）
230sh(44280),238sh(39480), 246sh(25840), 276(1287
0) 赤外部吸収スペクトル（クロロホルム中）：添付図
面の図４に示す。

【００２２】その主要吸収帯は次の通りである。

【００２３】νmax ，cm^−１ 3530, 2980, 2950, 289
0, 2840sh, 1610, 1510, 1470,1430, 1390, 1350, 131
0, 1240, 1190, 1160, 1140,1120, 1100, 1090, 1070,
1020, 970, 950, 920, 890,870, ^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ｐｐｍ，多重度，重ク
ロロホルム中）：10.5q, 11.3q, 12.9q, 14.1q, 16.4q,
17.6q, 20.8t,27.1t, 35.3d, 43.2t, 56.1q, 60.9q, 6
0.9q, 92.6d,117.6s, 118.7d, 124.7d, 132.2d, 132.2
s, 133.3s,135.2s, 135.2d, 136.6d, 136.9s, 145.6s,
151.8s,158.7s ^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ｐｐｍ，多重度，重クロ
ロホルム中）：0.78(3H, d), 0.97(3H, t), 1.52（3H,
s),1.71(3H, s), 1.75(3H, s), 2.07(2H, m),2.16(3H,
s), 2.64(1H, m), 2.73(2H, d),3.12(3H, s), 3.15(1H,
d), 3.67(2H, d),3.69(3H, s), 3.96(3H, s), 5.19(1
H, t),5.29(1H, d), 5.34(1H, t), 5.46(1H, m),6.06(1
H, d) 溶解性：クロロホルム，酢酸エチル，メタノール等
に可溶、水に難溶である。

【００２４】本発明による新規抗生物質ピエリシジンＢ
_５及びピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドは夫々に前述の
式（Ｉ）及び（Ｉ′）で示される化学構造を有する。

【００２５】ピエリシジンＢ_５及びピエリシジンＢ_５
Ｎ−オキシドの化学構造は紫外部吸収スペクトル、質量
分析スペクトル、^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル、^１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルを詳細に検討することによって前記の通
り決定された。

【００２６】本発明のピエリシジンＢ_５及びピエリシジ
ンＢ_５ Ｎ−オキシドは後記の生物学的性質を有する。

【００２７】本発明によるピエリシジンＢ_５及びピエリ
シジンＢ_５ Ｎ−オキシドはイノシトールリン脂質代謝
回転阻害活性並びにヒトの癌細胞増殖抑制活性を有し、
抗腫瘍剤として有効である。

【００２８】また、ピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドは
グラム陽性及び陰性細菌、並びにかびに抗して抗菌活性
を示すので、抗菌剤として有効である。

【００２９】試験例１ 抗生物質ピエリシジンＢ_５及びピエリシジンＢ_５ Ｎ−
オキシドのイノシトールリン脂質代謝回転阻害作用を次
の如く試験した。

【００３０】３×１０^５個／ｍｌのヒト扁平上皮癌Ａ４
３１細胞を３７℃で１晩培養後、トリチウムラベルされ
たイノシトールを取り込ませる。３０分後、各濃度の抗
生物質ピエリシジンＢ_５あるいはピエリシジンＢ_５ Ｎ
−オキシドと上皮性細胞増殖因子ＥＧＦ（４００ｎｇ／
ｍｌ）を加え、３７℃で９０分間放置する。その後、Ｔ
ＣＡ不溶画分であるイノシトールリン脂質の放射能活性
を測定することにより、イノシトールリン脂質代謝回転
阻害活性を評価した。

【００３１】その結果、ピエリシジンＢ_５及びピエリシ
ジンＢ_５ Ｎ−オキシドのＩＣ_５０値はそれぞれ１０μ
ｇ／ｍｌ、１．１μｇ／ｍｌであった。

【００３２】試験例２ 抗生物質ピエリシジンＢ_５及びピエリシジンＢ_５ Ｎ−
オキシドの培養腫瘍細胞に対する増殖阻害作用を次の如
く試験した。

【００３３】５×１０^４個／ｍｌのＡ４３１細胞及びＫ
Ｂ細胞を３７℃で１晩培養後、各濃度のピエリシジンＢ
_５あるいはピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドを添加して
３日間培養した。その後、細胞数を算定し、細胞増殖阻
害効果を判定した。各腫瘍細胞に対するピエリシジンＢ
_５及びピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドのＩＣ_５０値
は、それぞれＡ４３１細胞においては２．０μｇ／ｍ
ｌ、０．５０μｇ／ｍｌ、ＫＢ細胞においては０．２０
μｇ／ｍｌ、０．３３μｇ／ｍｌであった。

【００３４】このように本発明化合物は抗腫瘍活性を示
した。

【００３５】試験例３ ピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドの抗菌作用を次の如く
試験した。

【００３６】すなわち、ピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシ
ドの普通栄養寒天板上での各種細菌、並びに寒天板上で
の各種カビに対する最低発育阻止濃度を日本化学療法学
会標準法によって測定した。その結果を次の第１表に示
す。

【００３７】 第１表 最低発育阻止濃度 試験菌 (MIC.) (μg/ml) スタヒロコッカス・アウレウス ＦＤＡ２０９ｐ １２．５ スタヒロコッカス・アウレウス・スミス ２５ スタヒロコッカス・アウレウス ＭＳ９６１０ ２５ ミクロコッカス・ルテウス ＦＤＡ１６ ０．７８ バチルス・アンスラシス １２．５ バチルス・ズブチリス ＮＲＲＬ Ｂ−５５８ ６．２５ バチルス・ズブチリス ＰＣＩ ２１９ １２．５ バチルス・セレウス ＡＴＣＣ １０７０２ １２．５ コリネバクテリウム・ボビス １８１０ ６．２５ エシエリヒア・コリ ＮＩＨＪ １２．５ エシエリヒア・コリ Ｋ−１２ ＞１００ エシエリヒア・コリ ＢＥ １１２１ ３．１３ エシエリヒア・コリ ＢＥ １１８６ ３．１３ シゲラ・ディセンテリエ ＪＳ １１９１０ ６．２５ プロテウス・ミラビリス ＩＦＭ ＯＭ−９ １２．５ シュドモナス・エルギノサ Ａ３ １００ シュドモナス・エルギノサ ＧＮ３１５ ５０ クリプトコッカス・ミヤビナス Ｆ−１０ ５０ ピリクラリヤ・オリーゼ ５０ ピリクラリヤ・ササキ １．５６ キサントモナス・シトリ ３．１２ キサントモナス・オリーゼ ０．７８ トリコヒートン・アステロイデス ４２９ ６．２５ トリコヒートン・メンタグロヒテス Ｆ−１５（８３３） ６．２５アスペルギルス・フミガタス ２５ 従って、第３の本発明においては、式（Ｉ）のピエリシ
ジンＢ_５又は式（Ｉ′）のピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキ
シドを有効成分として含むことを特徴とする、イノシト
ールリン脂質代謝回転阻害剤が提供される。

【００３８】第４の本発明では式（Ｉ）のピエリシジン
Ｂ_５又は式（Ｉ′）のピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシド
を有効成分として含むことを特徴とする抗腫瘍剤が提供
される。

【００３９】また、第５の本発明では式（Ｉ′）のピエ
リシジンＢ_５ Ｎ−オキシドを有効成分として含むこと
を特徴とする抗菌剤が提供される。

【００４０】本発明によるピエリシジンＢ_５及びピエリ
シジンＢ_５ Ｎ−オキシドはストレプトミセス属に属す
るピエリシジンＢ_５又はピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシ
ド生産菌を培養してその培養物中にピエリシジンＢ_５又
はピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドを蓄積させ、その後
にそれを採取することによって製造できる。

【００４１】本発明の方法で使用できるストレプトミセ
ス属に属するピエリシジンＢ_５又はピエリシジンＢ_５
Ｎ−オキシド生産菌の一例には、東京都板橋区で採取さ
れた土壌より平成２年６月に微生物化学研究所において
分離された放線菌の菌株であってＭＪ２８８−ＯＦ３の
菌株番号を付された菌株がある。本菌株の菌学的特徴は
次に記載されるとおりである。

【００４２】ＭＪ２８８−ＯＦ３株の菌学的性状 １．形態 ＭＪ２８８−ＯＦ３株は、分枝した基中菌糸より、まっ
すぐ、あるいは曲がった気菌糸を伸長する。輪生枝およ
び胞子のうは認められない。気菌糸の先端には５０個以
上の胞子の連鎖を認め、胞子の大きさは約０．６〜０．
７×１．０〜１．２ミクロンであった。なお、胞子の表
面は平滑である。

【００４３】２．各種培地における生育状態 色の記載について［ ］内に示す標準は、コンティナー
・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアル（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒ
ａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ のｃｏｌｏｒ ｈ
ａｒｍｏｎｅｙｍａｎｕａｌ）を用いた。

【００４４】（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（２
７℃培養） うす黄〜うす黄茶［２ｇｃ，Ｂａｍｂｏｏ］の発育上
に、白〜明るい灰［３ｆｅ，Ｓｉｌｖｅｒ Ｇｒａｙ］
の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。

【００４５】（２）グルコース・アスパラギン寒天培地
（２７℃培養） 発育はうす黄［２ｅａ，Ｌｔ Ｗｈｅａｔ］〜うす黄茶
［２ｇｃ，Ｂａｍｂｏｏ］、気菌糸は着生せず、溶解性
色素は認められない。

【００４６】（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地
（ＩＳＰ−培地５、２７℃培養） 発育はオリーブ灰［２ｉｅ，Ｌｔ Ｍｕｓｔａｒｄ Ｔ
ａｎ］、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められな
い。

【００４７】（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ
−培地４、２７℃培養） うす黄茶［２ｇｃ，Ｂａｍｂｏｏ］の発育上に、明るい
茶灰［５ｄｃ，Ｐｕｓｓｙｗｉｌｌｏｗ Ｇｒａｙ］の
気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。

【００４８】（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地
７、２７℃培養） 発育は無色〜オリーブ灰［２ｉｅ，Ｌｔ Ｍｕｓｔａｒ
ｄ Ｔａｎ］、気菌糸は着生ぜず、溶解性色素は認めら
れない。

【００４９】（６）栄養寒天培地（２７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められ
ない。

【００５０】（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−
培地２、２７℃培養） うす黄茶［３ｉｅ，Ｃａｍｅｌ〜３ｌｅ，Ｃｉｎｎａｍ
ｏｎ］の発育上に、白の気菌糸をうっすらと着生し、溶
解性色素は認められない。

【００５１】（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培
地３、２７℃培養） 無色の発育上に、白〜茶白の気菌糸を着生し、溶解性色
素は認められない。

【００５２】（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７
℃培養） 無色の発育上に、白の気菌糸をわずかに着生し、溶解性
色素は認められない。

【００５３】（10）スターチ寒天培地（２７℃培養） うす黄［２ｅａ，Ｌｔ Ｗｈｅａｔ］〜うす黄茶［２ｇ
ｃ，Ｂａｍｂｏｏ］の発育上に、白の気菌糸をうっすら
と着生する。溶解性色素は認めらない。

【００５４】（11）リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培
養） 無色〜うす黄の発育上に、白の気菌糸をうっすらと着生
し、溶解性色素は認められない。

【００５５】（12）セルロース（濾紙片添加合成液、２
７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認めらな
い。

【００５６】（13）ゼラチン穿刺培養 １５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）、グルコース・
ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）のいずれにおい
ても、発育は無色〜うす黄、気菌糸は着生せず、溶解性
色素は認められない。

【００５７】（14）脱脂牛乳（３７℃培養） 発育は無色〜うす黄茶、気菌糸は着生せず、溶解性色素
も認められない。

【００５８】３．生理的性質 （１）生育温度範囲 イースト・スターチ寒天培地（可溶性デンプン１．０
％、イースト・エキス０．２％、紐寒天３．０％、ｐＨ
７．０）を用い、６℃、２０℃、２４℃、２７℃、３０
℃、３７℃、５０℃の各温度で試験した結果、６℃、５
０℃を除き、そのいずれの温度でも発育したが、生育至
適温度は２７℃〜３０℃付近と思われる。

【００５９】（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチ
ン培地、２０℃培養：グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、２７℃培養） １５％単純ゼラチン培地では３週間培養の観察で液化を
認めない。グルコース・ペプトン・ゼラチン培地におい
ては、培養後５日目頃より液化が始まるが、その作用は
弱い。

【００６０】（３）スターチの加水分解（スターチ無機
塩寒天培地およびスターチ寒天培地、いずれも２７℃培
養） いずれの培地においても培養後３日目頃より水解性が認
められ、その作用は強い方である。

【００６１】（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂
牛乳、３７℃培養） 培養後１４日目頃より凝固状を呈し３〜４日間で完了
後、ゆっくりとペプトン化が進行するが、その作用は弱
い方である。

【００６２】（５）メラニン様色素の生成（トリプトン
・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１：ペプトン・イー
スト・鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６：チロシン寒天培
地、ＩＳＰ−培地７：いずれも２７℃培養） いずれの培地でも陰性である。

【００６３】（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴド
リーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９：２７℃培養） Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フラクトース
を利用して発育し、イノシトール、ラムノース、ラフィ
ノース、Ｄ−マンニトール、ラクトースは利用しない。
Ｄ−キシロース、シュクロースは、おそらく利用しない
と思われる。

【００６４】（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰
寒天培地、２７℃培養） 陰性である。

【００６５】（８）硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カ
リウム含有ペプトン水、ＩＳＰ−培地８：２７℃培養） 陽性である。

【００６６】（９）セルロースの分解（濾紙片添加合成
液、２７℃培養） 陰性である。

【００６７】以上の性状を要約すると、ＭＪ２８８−Ｏ
Ｆ３株は、その形態上まっすぐ、あるいは曲がった気菌
糸を伸長し、輪生枝及び胞子のうは認められない。又、
気菌糸の先端には５０個以上の胞子の連鎖を認め、胞子
の表面は平滑である。種々の培地で、無色〜うす黄茶の
発育上に白の気菌糸をうっすらと着生する場合が多く、
豊富な気菌糸を着生する時は明るい灰〜明るい茶灰を呈
する。溶解性色素は認められない。メラニン様色素の生
成は陰性である。スターチの水解性は強い方、蛋白分解
力は弱い方である。

【００６８】又、細胞壁に含まれる２，６−ジアミノピ
メリン酸はＬＬ−型であった。

【００６９】これらの性状より、ＭＪ２８８−ＯＦ３株
は、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属
に属すると考えられる。

【００７０】なお、ＭＪ２８８−ＯＦ３株を工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託申請し、平成３年３月２７
日、微工研菌寄第１２１３２号として受託された。

【００７１】次にピエリシジンＢ_５及びピエリシジンＢ
_５ Ｎ−オキシドの製造について説明する。

【００７２】本発明では、ストレプトミセス属に属する
ピエリシジンＢ_５又はピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシド
生産菌株を栄養源含有培地に接種して好気的に発育させ
ることによってピエリシジンＢ_５又はピエリシジンＢ_５
Ｎ−オキシドを含む培養物が得られる。

【００７３】栄養源としては放線菌の栄養源として使用
しうるものが使用される。栄養源として、例えば市販さ
れているペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リ
カー、綿実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、ＮＺ−
アミン、カゼインの水解物、硝酸ソーダ、硝酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウムなどの窒素源が使用でき、また
市販されているグリセリン、しょ糖、でん粉、グルコー
ス、ガラクトース、マンノース、糖蜜などの炭水化物あ
るいは脂肪などの炭素源が使用できる。更に、食塩、リ
ン酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウムなどの無機
塩を添加して使用できる。その他必要に応じて微量の金
属塩を添加することができる。

【００７４】これらの添加物はピエリシジンＢ_５又はピ
エリシジンＢ_５ Ｎ−オキシド生産菌が利用し、ピエリ
シジンＢ_５及び（又は）ピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシ
ドの生産に役立つ物であればよく、公知の放線菌の培養
材料はすべて用いることができる。

【００７５】ピエリシジンＢ_５及び（又は）ピエリシジ
ンＢ_５ Ｎ−オキシドの生産はストレプトミセス属に属
するピエリシジンＢ_５又はピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキ
シド生産能を有する微生物が使用される。具体的には、
本発明者らの分離したストレプトミセスＭＪ２８８−Ｏ
Ｆ３株がピエリシジンＢ_５又はピエリシジンＢ_５ Ｎ−
オキシド生産菌として利用でき、本株はピエリシジンＢ
_５及びピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドの両者を生産す
ることが本発明者等によって明らかにされているが、そ
の他の菌株については、抗生物質生産菌の単離の常法に
よって適当なものを自然界により分離することが可能で
ある。

【００７６】また、ストレプトミセスＭＪ２８８−ＯＦ
３株を含めてピエリシジンＢ_５及びピエリシジンＢ_５
Ｎ−オキシドの生産菌を放射線照射その他の変異処理に
付して、ピエリシジンＢ_５及び（又は）ピエリシジンＢ
_５ Ｎ−オキシドの生産能を高める余地も残されてい
る。更に遺伝子工学的手法によりピエリシジンＢ_５及び
ピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドの生産も可能である。

【００７７】ピエリシジンＢ_５又はピエリシジンＢ_５
Ｎ−オキシドはストレプトミセス属に属するピエリシジ
ンＢ_５又はピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシド生産菌を適
当な培地で好気的に培養し、その培養物から目的物を採
取することによって製造することができる。使用しうる
培養温度はピエリシジンＢ_５又はピエリシジンＢ_５Ｎ−
オキシド生産菌の発育が実質的に阻害されずに該抗生物
質を生産しうる範囲であれば、特に制約されるものでな
く、使用する生産菌に応じて選択できるが、好ましくは
２５−３０℃の範囲内の温度を挙げることが出来る。

【００７８】培養時間は、通常、抗生物質ピエリシジン
Ｂ_５又はピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドが十分に蓄積
するまで継続することができ、使用生産菌や、培地組
成、培養温度により異なるが、通常は４８−９６時間の
培養で目的の抗生物質を得ることができる。

【００７９】かくして、培養物中に蓄積された抗生物質
ピエリシジンＢ_５及び（又は）ピエリシジンＢ_５ Ｎ−
オキシドは、培養後に必要により、濾過、遠心分離など
のそれ自体公知の分離方法によって菌体を除去し、その
濾液上澄から適当な有機溶媒を用いた溶媒抽出法や、吸
着、高速液体クロマトグラフィー、向流分配法を利用し
たクロマトグラフィーを単独でまたは、組み合わせて使
用することにより単離精製して採取することができる。

【００８０】ここに用いられる有機溶媒としては、クロ
ロホルム、酢酸エチルなど、抗生物質ピエリシジンＢ_５
及び（又は）ピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドを溶解で
き、水に実質的に不溶なものを挙げることができる。ま
た、吸着クロマトグラフィー担体としては、活性炭、シ
リカゲル、多孔性ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂
を用いることができる。

【００８１】また、分離した菌体からは、適当な有機溶
媒を用いた溶媒抽出法や菌体破砕による溶出法により菌
体から抽出し上記と同様に単離、精製して採取すること
ができる。ここに用いられる有機溶媒としてはメタノー
ル、アセトンなど、抗生物質ピエリシジンＢ_５及びピエ
リシジンＢ_５ Ｎ−オキシドを溶解でき、菌体を破壊で
きるものを挙げることができる。

【００８２】かくして、前記した抗生物質ピエリシジン
Ｂ_５及びピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドが得られる。

【００８３】次の実施例により本発明を更に詳しく説明
する。

【００８４】実施例１．抗生物質ピエリシジンＢ_５及び
ピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドの製造 寒天斜面培地に培養したストレプトミセスＭＪ２８８−
ＯＦ３株（微工研菌寄第１２１３２号）を、シュークロ
ース４．０％、味の素プロリッチ２．５％、ＮａＣｌ
０．２５％、ＣａＣＯ_３（沈降性）０．３２％、ＣｕＳ
Ｏ_４・５Ｈ_２Ｏ０．０００５％、ＭｎＣｌ_２・４Ｈ_２Ｏ
０．０００５％、ＺｎＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ ０．０００
５％を含む液体培地（ｐＨ７．４に調製）を５００ｍｌ
容三角フラスコに１１０ｍｌずつ分注し、常法により１
２０℃で２０分間滅菌したものに接種し、その後、２７
℃で３日間振盪培養した。これにより、種母培養液を得
た。

【００８５】この種母培養液を、同様に５００ｍｌ容三
角フラスコに１１０ｍｌずつ分注滅菌した同上組成の培
地成分を含む液体培地に２％接種し、２７℃で４日間振
盪培養した。

【００８６】この様にして得られた培養液を遠心分離器
にかけ菌体を分離し、この菌体にアセトン１ｌを加え、
撹拌後濾過した。この濾液を減圧下で濃縮したあと、先
の遠心上清液（１０．８ｌ）と合わせ酢酸エチル（１４
ｌ）でピエリシジンＢ_５及びピエリシジンＢ_５ Ｎ−オ
キシドを抽出した。

【００８７】この抽出液を減圧下に濃縮し、得られた残
渣４．６５ｇをシリカゲルカラム（２００ｍｌ）にかけ
て、ピエリシジンＢ_５をクロロホルム、ピエリシジンＢ
_５Ｎ−オキシドをクロロホルム−メタノール（５０：
１）で展開溶出した。

【００８８】第１にピエリシジンＢ_５物質の単離精製を
以下の如く行なった。

【００８９】ピエリシジンＢ_５含有画分を集め、減圧下
に濃縮して得られた油状物（７１６．０ｍｇ）を、再度
シリカゲルカラム（３０ｍｌ）にかけてトルエン−酢酸
エチル（１０：１）で展開溶出した。この溶出活性画分
を集め、濃縮後、セファデックスＬＨ−２０（１５０ｍ
ｌ）にかけて酢酸エチルで展開して精製した。次に溶出
画分を濃縮し、遠心分配クロマトグラフ（ｃｅｎｔｒｉ
ｆｕｇａｌ ｐａｒｔｉｔｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒａｐｈ：ＣＰＣ 三鬼エンジニアリング社製）により
分離精製した。溶媒系としてヘキサン−アセトニトリル
混合溶媒（１：１）の下層を固定相に、上層を移動相に
用いて精製を行なった。更に、溶媒系をヘキサン−アセ
トニトリル−２８％アンモニア水混合溶媒（１２５：１
２５：１）に変え、再度、遠心分配クロマトグラフを行
ないピエリシジンＢ_５物質を６．３ｍｇ得た。

【００９０】第２にピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシド物
質の単離精製を以下の如く行なった。

【００９１】ピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドを含む画
分を集め、濃縮物（９７６．４ｍｇ）を再度、シリカゲ
ルカラム（４０ｍｌ）にかけて、クロロホルム−メタノ
ール（３０：１）で溶出した。この溶出液を減圧下で濃
縮し得られた油状物（５２３．０ｍｇ）を遠心分配クロ
マトグラフを用いて精製を行なった。溶媒系としてクロ
ロホルム−メタノール−水混合溶媒（５：６：４）の下
層を固定相に、上層を移動相に使用した。次に活性画分
を分取高速液体クロマトグラフィー（カラム：センシュ
ーパックＯＤＳ、３０φ×２５０ｍｍ；溶媒系：８５％
メタノール水）にかけ、３９．９ｍｇのピエリシジンＢ
_５ Ｎ−オキシドを油状物として得た。

【００９２】

【発明の効果】本発明のピエリシジンＢ_５及びピエリシ
ジンＢ_５ Ｎ−オキシド物質はヒト癌細胞の増殖やイノ
シトールリン脂質代謝回転を阻害し、細胞情報伝達系に
関連した新しいタイプの抗腫瘍物質として期待される優
れた新規物質である。更に、イノシトールリン脂質代謝
回転を介した細胞内シグナル情報伝達系を解明する上に
おいて、より重要な試薬になり得る可能性がある。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の抗生物質ピエリシジンＢ_５の紫外部吸
収スペクトルを示す。なお、実線はメタノール中の吸収
スペクトルを、大破線は０．１Ｎ ＮａＯＨ−メタノー
ル中の吸収スペクトルを、また破線は０．１Ｎ ＨＣｌ
−メタノール中の吸収スペクトルを表わす。

【図２】ピエリシジンＢ_５（クロロホルム中）の赤外部
吸収スペクトルを示す。

【図３】本発明の抗生物質ピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキ
シドの紫外部吸収スペクトルを示す。なお、実線はメタ
ノール溶液中で測定した吸収スペクトルを示し、大破線
は、０．１Ｎ ＮａＯＨ−メタノール溶液中で測定した
スペクトルを示し、破線は、０．１Ｎ ＨＣｌ−メタノ
ール溶液中で測定したスペクトルを示す。

【図４】ピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシド（クロロホル
ム中）の赤外部吸収スペクトルを示す。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成４年１月１０日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００７３

【補正方法】変更

【補正内容】

【００７３】栄養源としては放線菌の栄養源として使用
しうるものが使用される。栄養源として、例えば市販さ
れているペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リ
カー、綿実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、ＮＺ−
アミン、カゼインの水解物、硝酸ソーダ、硝酸アンモニ
ウム、硫酸アンモニウムなどの窒素源が使用でき、また
市販されているグリセリン、しょ糖、でん粉、グルコー
ス、ガラクトース、マンノース、糖蜜などの炭水化物あ
るいは脂肪などの炭素源が使用できる。更に、食塩、リ
ン酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウムなどの無機
塩を添加して使用できる。その他必要に応じて微量の金
属塩を添加することができる。

【手続補正２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図３

【補正方法】変更

【補正内容】

【図３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 17/12 8931−4Ｂ //(Ｃ１２Ｐ 17/12 Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ (72)発明者 濱田 雅 東京都新宿区内藤町１番地26 秀和レジデ ンス405号 (72)発明者 長縄 博 東京都大田区田園調布本町３番17号 (72)発明者 梅澤 一夫 東京都渋谷区広尾３丁目１番２−505号 (72)発明者 高橋 良和 東京都多摩市桜ケ丘３丁目２番地の３

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の式（Ｉ）： で表わされる化合物であるピエリシジンＢ_５及び下記の
   式（Ｉ′）： で表わされる化合物であるピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキ
   シドからなる群から選ばれる抗生物質、ピエリシジンＢ
   _５又はピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシド。
2. 【請求項２】 ストレプトミセス属に属するピエリシジ
   ンＢ_５又はピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシド生産菌を培
   養し、その培養物から請求項１に示された式（Ｉ）のピ
   エリシジンＢ_５又は式（Ｉ′）のピエリシジンＢ_５ Ｎ
   −オキシドを採取することを特徴とする、ピエリシジン
   Ｂ_５又はピエリシジンＢ_５ Ｎ−オキシドの製造法。
3. 【請求項３】 請求項１に示された式（Ｉ）の抗生物質
   ピエリシジンＢ_５又は式（Ｉ′）のピエリシジンＢ_５
   Ｎ−オキシドを有効成分とするイノシトールリン脂質代
   謝回転阻害剤。
4. 【請求項４】 請求項１に示された式（Ｉ）の抗生物質
   ピエリシジンＢ_５又は式（Ｉ′）のピエリシジンＢ_５
   Ｎ−オキシドを有効成分とする抗腫瘍剤。
5. 【請求項５】 請求項１に示された式（Ｉ′）の抗生物
   質ピエリシジンＢ_５Ｎ−オキシドを有効成分とする抗菌
   剤。