JPH05184383A - 二重特異性抗体 - Google Patents
二重特異性抗体Info
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- JPH05184383A JPH05184383A JP3240139A JP24013991A JPH05184383A JP H05184383 A JPH05184383 A JP H05184383A JP 3240139 A JP3240139 A JP 3240139A JP 24013991 A JP24013991 A JP 24013991A JP H05184383 A JPH05184383 A JP H05184383A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 抗体を化学的に処理することなく標識剤ある
いは細胞毒活性剤による標識が可能で、自由に標識剤等
を変更できる、二重特異性を有するモノクローナル抗体
を提供する。 【構成】 二つの異なる抗原に対して特異性を有する抗
体であって、該抗原の一方がビオチンまたはビオチン誘
導体であり、他方が該第一の抗原と異なる抗原である二
重特異性抗体は、ビオチンまたはビオチン誘導体に対し
て特異性を有する抗ビオチン・モノクローナル抗体産生
細胞と、ビオチンまたはビオチン誘導体以外の抗原に対
して特異性を有するモノクローナル抗体産生細胞との細
胞融合により得られる融合細胞により得られる。
いは細胞毒活性剤による標識が可能で、自由に標識剤等
を変更できる、二重特異性を有するモノクローナル抗体
を提供する。 【構成】 二つの異なる抗原に対して特異性を有する抗
体であって、該抗原の一方がビオチンまたはビオチン誘
導体であり、他方が該第一の抗原と異なる抗原である二
重特異性抗体は、ビオチンまたはビオチン誘導体に対し
て特異性を有する抗ビオチン・モノクローナル抗体産生
細胞と、ビオチンまたはビオチン誘導体以外の抗原に対
して特異性を有するモノクローナル抗体産生細胞との細
胞融合により得られる融合細胞により得られる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、二重特異性抗体に関す
るものであり、更に詳しくは、ビオチンまたはビオチン
誘導体及び該ビオチンまたはビオチン誘導体とは異なる
抗原に対して特異性を有する二重特異性抗体に関する。
るものであり、更に詳しくは、ビオチンまたはビオチン
誘導体及び該ビオチンまたはビオチン誘導体とは異なる
抗原に対して特異性を有する二重特異性抗体に関する。
【０００２】
【従来の技術】血液や尿などの体液中の微量物質を高感
度に測定する方法として、免疫学的測定法が医療分野、
特に診断の分野において広く利用されている。特に、１
９７５年、Ｍｉｌｓｔｅｉｎらがマウスのミエローマ細
胞と脾臓中の抗体産生細胞との細胞融合によるモノクロ
ーナル抗体の生産方法を発表して以来、ハイブリドーマ
法によるモノクローナル抗体は、その特異性が高いこ
と、単一の抗体を比較的簡単にかつ大量に供給すること
が可能であることなどの利点を有するため、非常に注目
され、盛んに研究、利用されてきた。
度に測定する方法として、免疫学的測定法が医療分野、
特に診断の分野において広く利用されている。特に、１
９７５年、Ｍｉｌｓｔｅｉｎらがマウスのミエローマ細
胞と脾臓中の抗体産生細胞との細胞融合によるモノクロ
ーナル抗体の生産方法を発表して以来、ハイブリドーマ
法によるモノクローナル抗体は、その特異性が高いこ
と、単一の抗体を比較的簡単にかつ大量に供給すること
が可能であることなどの利点を有するため、非常に注目
され、盛んに研究、利用されてきた。
【０００３】このモノクローナル抗体をトレーサー抗体
として使用する場合には、この抗体分子にラジオアイソ
トープ、酵素あるいは蛍光物質などを化学的な処理を施
して結合させて用いている。しかし、抗体分子にこのよ
うな化学的処理を行うと、抗体分子に損傷を与え、抗体
の比活性が低下し、また抗体の安定性に影響を及ぼし、
これらがアッセイ系の安定性や感度の低下の原因となっ
ている。
として使用する場合には、この抗体分子にラジオアイソ
トープ、酵素あるいは蛍光物質などを化学的な処理を施
して結合させて用いている。しかし、抗体分子にこのよ
うな化学的処理を行うと、抗体分子に損傷を与え、抗体
の比活性が低下し、また抗体の安定性に影響を及ぼし、
これらがアッセイ系の安定性や感度の低下の原因となっ
ている。
【０００４】一方、モノクローナル抗体の特異性が高い
ことを利用して、抗体分子中に二つの異なる抗原認識性
を持たせ、抗体の利用範囲を拡大する方法が研究されて
おり、このような二重特異性抗体の一方の結合親和性が
酵素を直接認識するものである抗体についてすでに報告
がなされている。しかし、この抗体は直接酵素を認識す
るものであるために、標識抗体として免疫学的診断の分
野において使用する場合には、酵素の種類、つまり標識
剤の種類に多様性をもたらせることができなかった。
ことを利用して、抗体分子中に二つの異なる抗原認識性
を持たせ、抗体の利用範囲を拡大する方法が研究されて
おり、このような二重特異性抗体の一方の結合親和性が
酵素を直接認識するものである抗体についてすでに報告
がなされている。しかし、この抗体は直接酵素を認識す
るものであるために、標識抗体として免疫学的診断の分
野において使用する場合には、酵素の種類、つまり標識
剤の種類に多様性をもたらせることができなかった。
【０００５】また、医薬の分野では、抗腫瘍剤を抗体に
結合せしめて、腫瘍部位に選択的に薬剤をデリバーする
方法が研究されているが、この場合も抗腫瘍剤である化
合物と腫瘍部位を認識する抗体の双方の修飾が必要とな
るため、抗腫瘍剤化合物や抗体に悪影響を与えてしま
い、簡単に多種多様な組み合わせを作り出すことは困難
であった。
結合せしめて、腫瘍部位に選択的に薬剤をデリバーする
方法が研究されているが、この場合も抗腫瘍剤である化
合物と腫瘍部位を認識する抗体の双方の修飾が必要とな
るため、抗腫瘍剤化合物や抗体に悪影響を与えてしま
い、簡単に多種多様な組み合わせを作り出すことは困難
であった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】以上のことに鑑み、広
範囲な標識剤あるいは細胞毒活性剤に適用可能であり、
安定性に優れた抗体の提供が要望されていた。
範囲な標識剤あるいは細胞毒活性剤に適用可能であり、
安定性に優れた抗体の提供が要望されていた。
【０００７】
【発明の目的】本発明は、抗体を化学的に処理すること
なく標識剤あるいは細胞毒活性剤による標識が可能であ
り、さらに、測定系における標識剤を変更したり、癌治
療において細胞毒活性剤を変更しても広く適用可能であ
る、二重特異性を有するモノクローナル抗体を提供する
ものである。
なく標識剤あるいは細胞毒活性剤による標識が可能であ
り、さらに、測定系における標識剤を変更したり、癌治
療において細胞毒活性剤を変更しても広く適用可能であ
る、二重特異性を有するモノクローナル抗体を提供する
ものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明に係る二重特異性
抗体は、ある種の抗原とビオチンまたはビオチン誘導体
の両方に特異性を有するモノクローナル抗体である。す
なわち、この二重特異性抗体とビオチン化した酵素、蛍
光物質あるいは細胞毒活性物質などとを組み合わせるこ
とによって、抗体分子を化学的に処理することなくトレ
ーサーあるいはターゲッティング剤として利用すること
を可能とし、抗体の安定性の増加、さらにはビオチン化
酵素などを異なる抗原測定系に使用したり、ビオチン化
した抗癌剤を使用して各種の抗癌剤をデリバーすること
をも可能にしたものである。
抗体は、ある種の抗原とビオチンまたはビオチン誘導体
の両方に特異性を有するモノクローナル抗体である。す
なわち、この二重特異性抗体とビオチン化した酵素、蛍
光物質あるいは細胞毒活性物質などとを組み合わせるこ
とによって、抗体分子を化学的に処理することなくトレ
ーサーあるいはターゲッティング剤として利用すること
を可能とし、抗体の安定性の増加、さらにはビオチン化
酵素などを異なる抗原測定系に使用したり、ビオチン化
した抗癌剤を使用して各種の抗癌剤をデリバーすること
をも可能にしたものである。
【０００９】本発明に係る二重特異性抗体は、下記の手
順に従って作製することが可能である。
順に従って作製することが可能である。
【００１０】まず、測定すべき抗原に対するモノクロー
ナル抗体産生ハイブリドーマ、及びビオチンに対するモ
ノクローナル抗体産生ハイブリドーマをそれぞれ通常の
方法に従って作製する。次に、これらハイブリドーマに
おける核酸生合成サルベージ経路のそれぞれ別の酵素を
欠損させる。すなわち抗原に対するモノクローナル抗体
産生ハイブリドーマはヒポキサンチン グアニン ホス
ホリボシル トランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）欠損細
胞、ビオチンに対するモノクローナル抗体産生細胞はチ
ミジン キナーゼ（ＴＫ）欠損細胞とする。この２つの
異なった酵素欠損細胞をポリエチレングリコール法によ
り融合させた後、ＨＡＴ培地（正常培地にヒポキサンチ
ン（１０−４Ｍ）、アミノプテリン（４×１０−７Ｍ）
およびチミジン（１．６×１０−５Ｍ）を加えた培地）
を用いて融合細胞のみを選択する。このようにして得ら
れたハイブリッド ハイブリドーマから、クローニング
により抗原とビオチンとを同時に認識する抗体を産生し
ている細胞株を選択し、得られたモノクローナル抗体産
生株をマウス腹腔中に投与し、抗体含有腹水を作製し、
この腹水より目的とする抗体を得る。この抗体は抗原に
対する結合親和性と、ビオチンに対する結合親和性を持
つ二重特異性抗体であり、この抗体をトレーサーとして
用いて抗原の測定系を作製する。またこの抗体を腫瘍部
位等ヘの細胞毒活性をもつ化合物を運搬するためのター
ゲッティング剤として用いることもできる。上記モノク
ローナル抗体産生株は、工業技術院微生物工業技術研究
所に寄託されており、微工研菌寄第１１５３１号（ＴＢ
ＨＦ２Ｈ６）あるいは微工研菌寄第１１５３２号（ＴＢ
ＨＦ１Ｈ５０）であるハイブリッド ハイブリドーマが
産生する抗体は、ビオチン及びヒト血清アルブミンに対
して特異性を有する二重特異性抗体で、それを用い、ビ
オチン−ＨＲＰＯを標識剤として使用することにより、
ヒト血清アルブミンをＥＩＡにより測定することができ
る。
ナル抗体産生ハイブリドーマ、及びビオチンに対するモ
ノクローナル抗体産生ハイブリドーマをそれぞれ通常の
方法に従って作製する。次に、これらハイブリドーマに
おける核酸生合成サルベージ経路のそれぞれ別の酵素を
欠損させる。すなわち抗原に対するモノクローナル抗体
産生ハイブリドーマはヒポキサンチン グアニン ホス
ホリボシル トランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）欠損細
胞、ビオチンに対するモノクローナル抗体産生細胞はチ
ミジン キナーゼ（ＴＫ）欠損細胞とする。この２つの
異なった酵素欠損細胞をポリエチレングリコール法によ
り融合させた後、ＨＡＴ培地（正常培地にヒポキサンチ
ン（１０−４Ｍ）、アミノプテリン（４×１０−７Ｍ）
およびチミジン（１．６×１０−５Ｍ）を加えた培地）
を用いて融合細胞のみを選択する。このようにして得ら
れたハイブリッド ハイブリドーマから、クローニング
により抗原とビオチンとを同時に認識する抗体を産生し
ている細胞株を選択し、得られたモノクローナル抗体産
生株をマウス腹腔中に投与し、抗体含有腹水を作製し、
この腹水より目的とする抗体を得る。この抗体は抗原に
対する結合親和性と、ビオチンに対する結合親和性を持
つ二重特異性抗体であり、この抗体をトレーサーとして
用いて抗原の測定系を作製する。またこの抗体を腫瘍部
位等ヘの細胞毒活性をもつ化合物を運搬するためのター
ゲッティング剤として用いることもできる。上記モノク
ローナル抗体産生株は、工業技術院微生物工業技術研究
所に寄託されており、微工研菌寄第１１５３１号（ＴＢ
ＨＦ２Ｈ６）あるいは微工研菌寄第１１５３２号（ＴＢ
ＨＦ１Ｈ５０）であるハイブリッド ハイブリドーマが
産生する抗体は、ビオチン及びヒト血清アルブミンに対
して特異性を有する二重特異性抗体で、それを用い、ビ
オチン−ＨＲＰＯを標識剤として使用することにより、
ヒト血清アルブミンをＥＩＡにより測定することができ
る。
【００１１】さらに、微工研菌寄第１２２８７号（ＴＢ
ＣＦ１Ｈ３）であるハイブリッドハイブリドーマが産生
する抗体は、ビオチン及び癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対
して特異性を有する二重特異性抗体である。
ＣＦ１Ｈ３）であるハイブリッドハイブリドーマが産生
する抗体は、ビオチン及び癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対
して特異性を有する二重特異性抗体である。
【００１２】該ビオチンあるいはビオチン誘導体とは異
なる抗原（第二の抗原）に対するモノクローナル抗体を
産生するハイブリドーマとしては、ヒト血清アルブミン
に対するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマＨＳＡ
Ｆ６Ｈ１Ｃ１１，ＨＳＡＦ６Ｈ３３Ｃ１１、癌胎児性抗
原に対するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマＣＥ
ＡＦ２２Ｈ５，ＣＥＡ３５１９、エラスターゼー１に対
するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマＥＬＳＦ１
３Ｈ４、ＩｇＥに対するモノクローナル抗体産生ハイブ
リドーマＩＧＥＦ３Ｈ２２、インスリンに対するモノク
ローナル抗体産生ハイブリドーマＩＮＳＦ９Ｈ２、扁平
上皮癌関連抗原ＳＣＣに対するモノクローナル抗体産生
ハイブリドーマＳＣＣＦ１Ｈ３、ＴＳＨに対するモノク
ローナル抗体産生ハイブリドーマＴＳＨＦ８Ｈ４などを
挙げることができるが、該第二の抗原に対するモノクロ
ーナル抗体産生ハイブリドーマとしては、上記のような
処理をして、二重特異性抗体を製造しうるようなもので
あれば、特に限定されずに用いることができる。
なる抗原（第二の抗原）に対するモノクローナル抗体を
産生するハイブリドーマとしては、ヒト血清アルブミン
に対するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマＨＳＡ
Ｆ６Ｈ１Ｃ１１，ＨＳＡＦ６Ｈ３３Ｃ１１、癌胎児性抗
原に対するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマＣＥ
ＡＦ２２Ｈ５，ＣＥＡ３５１９、エラスターゼー１に対
するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマＥＬＳＦ１
３Ｈ４、ＩｇＥに対するモノクローナル抗体産生ハイブ
リドーマＩＧＥＦ３Ｈ２２、インスリンに対するモノク
ローナル抗体産生ハイブリドーマＩＮＳＦ９Ｈ２、扁平
上皮癌関連抗原ＳＣＣに対するモノクローナル抗体産生
ハイブリドーマＳＣＣＦ１Ｈ３、ＴＳＨに対するモノク
ローナル抗体産生ハイブリドーマＴＳＨＦ８Ｈ４などを
挙げることができるが、該第二の抗原に対するモノクロ
ーナル抗体産生ハイブリドーマとしては、上記のような
処理をして、二重特異性抗体を製造しうるようなもので
あれば、特に限定されずに用いることができる。
【００１３】この場合における第二の抗原としては、タ
ンパク質、ポリペプチド、多糖類、核酸及びこれらの結
合物などを挙げることができる。このようなもののうち
には、燐タンパク質、リポタンパク質、糖タンパク質、
ムコタンパク質、細菌、ウイルス、腫瘍細胞、リケッチ
アあるいはそれらの表面抗原などが挙げられる。
ンパク質、ポリペプチド、多糖類、核酸及びこれらの結
合物などを挙げることができる。このようなもののうち
には、燐タンパク質、リポタンパク質、糖タンパク質、
ムコタンパク質、細菌、ウイルス、腫瘍細胞、リケッチ
アあるいはそれらの表面抗原などが挙げられる。
【００１４】このような抗原のうち、タンパク質及びポ
リペプチドとしては、ソマトトロピン、プロラクチン、
インスリン、ＬＨ−ＲＨ、ゴナドトロピンなどのホルモ
ン類、チロキシン結合グロブリン、α１−アンチトリプ
シン、α１−酸性糖タンパク質、α２−マクログロブリ
ン、アルブミンなどの血漿タンパク質、免疫グロブリン
あるいはそれらの断片、補体因子、血液凝固因子、セク
レチン、ガストリンなどの組織ホルモン類などが挙げら
れる。
リペプチドとしては、ソマトトロピン、プロラクチン、
インスリン、ＬＨ−ＲＨ、ゴナドトロピンなどのホルモ
ン類、チロキシン結合グロブリン、α１−アンチトリプ
シン、α１−酸性糖タンパク質、α２−マクログロブリ
ン、アルブミンなどの血漿タンパク質、免疫グロブリン
あるいはそれらの断片、補体因子、血液凝固因子、セク
レチン、ガストリンなどの組織ホルモン類などが挙げら
れる。
【００１５】この他、癌関連抗原として知られたもの、
例えばＣＥＡ，ＡＦＰ，ＳＣＣ，Ｓｐａｎ−１，ＣＡ１
９−９，ＣＡ１２５，Ｂ７２・３抗原（ＴＡＧ−７
２），Ｔ抗原などをあげることができる。
例えばＣＥＡ，ＡＦＰ，ＳＣＣ，Ｓｐａｎ−１，ＣＡ１
９−９，ＣＡ１２５，Ｂ７２・３抗原（ＴＡＧ−７
２），Ｔ抗原などをあげることができる。
【００１６】また、細胞表面のリセプターなどもあげら
れる。
れる。
【００１７】さらにまた、第二の抗原としては、グラム
陽性菌、グラム陰性菌に存在する各種抗原、リケッチ
ア、マイコプラズマあるいは肝炎ウイルス、腫瘍ウイル
ス、ＡＩＤＳ原因ウイルスなどの各種ウイルス及びその
産生抗原が挙げられる。またこれらの抗原のうちには、
各種アルカロイド、各種ステロイド、ペニシリン系及び
セファロスポリン系抗生物質、ゲンタマイシン、カナマ
イシン、エリスロマイシン等の抗生物質、バルビツール
酸系薬物、カテコールアミン、エフェドリン等の薬物、
クロルプロマジン、アゼピン類、ビタミン類、プロスタ
グランジン類をはじめとする各種の薬剤・薬物が挙げら
れる。これらの抗原は、本発明の目的を達成しうる限
り、特に限定せずに選ぶことができ、当該分野の文献な
どにより知られているものの中から選ぶことができる。
陽性菌、グラム陰性菌に存在する各種抗原、リケッチ
ア、マイコプラズマあるいは肝炎ウイルス、腫瘍ウイル
ス、ＡＩＤＳ原因ウイルスなどの各種ウイルス及びその
産生抗原が挙げられる。またこれらの抗原のうちには、
各種アルカロイド、各種ステロイド、ペニシリン系及び
セファロスポリン系抗生物質、ゲンタマイシン、カナマ
イシン、エリスロマイシン等の抗生物質、バルビツール
酸系薬物、カテコールアミン、エフェドリン等の薬物、
クロルプロマジン、アゼピン類、ビタミン類、プロスタ
グランジン類をはじめとする各種の薬剤・薬物が挙げら
れる。これらの抗原は、本発明の目的を達成しうる限
り、特に限定せずに選ぶことができ、当該分野の文献な
どにより知られているものの中から選ぶことができる。
【００１８】このようにして得られた二重特異性抗体
は、血液などの体液中の抗原を測定するサンドイッチ法
や、組織中の抗原を測定する組織染色法など、免疫学的
測定系に利用することができる。
は、血液などの体液中の抗原を測定するサンドイッチ法
や、組織中の抗原を測定する組織染色法など、免疫学的
測定系に利用することができる。
【００１９】さらにまた抗癌剤やリシン、ジフテリアト
キシンといった細胞毒活性を有する化合物をビオチン化
し、特にはビオチンと癌関連抗原とを認識する二重特異
性抗体をそのビオチン化細胞毒活性化合物と反応せしめ
て抗体−薬物コンジュゲートを形成することができる。
こうして得られた抗体−薬物コンジュゲートはその二重
特異性抗体の認識する特定の部位、例えば腫瘍細胞への
薬物のデリバーを可能にする。こうして得られた二重特
異性抗体を利用すればただ一種の抗体を利用して種々の
薬物を運搬することが可能になる。
キシンといった細胞毒活性を有する化合物をビオチン化
し、特にはビオチンと癌関連抗原とを認識する二重特異
性抗体をそのビオチン化細胞毒活性化合物と反応せしめ
て抗体−薬物コンジュゲートを形成することができる。
こうして得られた抗体−薬物コンジュゲートはその二重
特異性抗体の認識する特定の部位、例えば腫瘍細胞への
薬物のデリバーを可能にする。こうして得られた二重特
異性抗体を利用すればただ一種の抗体を利用して種々の
薬物を運搬することが可能になる。
【００２０】サンドイッチ法による抗原の測定は、以下
のように行うことができる。
のように行うことができる。
【００２１】測定すべき抗原に対する抗体を不溶性担体
に結合させて得られた固相化抗体に対して、血清や尿な
どの検体を反応させた後、未反応液を洗浄除去する。次
に、測定抗原及びビオチンに対し結合親和性を有する二
重特異性抗体溶液を反応させる。さらに固相を洗浄した
後、これに酵素を結合したビオチン溶液を混合し、反応
を行う。この反応は、予め二重特異性抗体とビオチン化
酵素を混合しておき、この混合溶液を検体を反応させた
後の固相と反応させても良い。このビオチン化酵素と反
応した固相を洗浄し、基質溶液を加え酵素反応を行わせ
る。酵素反応を停止させた後、反応溶液の吸光度を測定
し、検体の代わりに標準抗原を用いて作成された標準曲
線より測定すべき抗原濃度を求めることができる。
に結合させて得られた固相化抗体に対して、血清や尿な
どの検体を反応させた後、未反応液を洗浄除去する。次
に、測定抗原及びビオチンに対し結合親和性を有する二
重特異性抗体溶液を反応させる。さらに固相を洗浄した
後、これに酵素を結合したビオチン溶液を混合し、反応
を行う。この反応は、予め二重特異性抗体とビオチン化
酵素を混合しておき、この混合溶液を検体を反応させた
後の固相と反応させても良い。このビオチン化酵素と反
応した固相を洗浄し、基質溶液を加え酵素反応を行わせ
る。酵素反応を停止させた後、反応溶液の吸光度を測定
し、検体の代わりに標準抗原を用いて作成された標準曲
線より測定すべき抗原濃度を求めることができる。
【００２２】本発明の二重特異性抗体は、一方の抗原認
識部位がビオチンを認識するものであり、ビオチンは蛋
白質や核酸、その他様々な化学物質と結合することがで
きるため、標識剤として酵素に限定されることなく蛍光
物質等、種々の化合物を使用することが可能である他、
抗腫瘍剤等の種々の薬物をも用いることができる。さら
に、ビオチンはアビジンとのシステムを利用することに
より、測定系の感度を上げることも可能である。
識部位がビオチンを認識するものであり、ビオチンは蛋
白質や核酸、その他様々な化学物質と結合することがで
きるため、標識剤として酵素に限定されることなく蛍光
物質等、種々の化合物を使用することが可能である他、
抗腫瘍剤等の種々の薬物をも用いることができる。さら
に、ビオチンはアビジンとのシステムを利用することに
より、測定系の感度を上げることも可能である。
【００２３】
【実施例】以下、本発明を実施例に基づいて説明する。
【００２４】実施例１ 抗ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）抗体産生ハイブリドー
マの作製 ＨＳＡ（Ｍｉｌｅｓ Ｉｎｃ．）５０μｇをフロインド
コンプリート アジュバント（ヤトロン）とでエマル
ジョンを調製し、これをＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下に注
射した。これを２週間ごとに４回行い、さらに２週間後
にＨＳＡ５０μｇを生理食塩水に溶かし腹腔中に投与し
た。このマウスの脾臓細胞を３日後に摘出し、マウスミ
エローマ細胞（Ｐ３×６３Ａｇ８・Ｕ１：Ｐ３Ｕ１）と
ポリエチレングリコール法を用いて細胞融合させた。こ
の融合細胞をＨＡＴ培地で選択後、培養上清の抗ＨＳＡ
抗体活性を１２５Ｉ標識したＨＳＡを用いて調べ、さら
にクローニングを行い、抗ＨＳＡモノクローナル抗体産
生ハイブリドーマ（ＨＳＡＦ６Ｈ１Ｃ１１，ＨＳＡＦ６
Ｈ３３Ｃ１１）を確立した。
マの作製 ＨＳＡ（Ｍｉｌｅｓ Ｉｎｃ．）５０μｇをフロインド
コンプリート アジュバント（ヤトロン）とでエマル
ジョンを調製し、これをＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下に注
射した。これを２週間ごとに４回行い、さらに２週間後
にＨＳＡ５０μｇを生理食塩水に溶かし腹腔中に投与し
た。このマウスの脾臓細胞を３日後に摘出し、マウスミ
エローマ細胞（Ｐ３×６３Ａｇ８・Ｕ１：Ｐ３Ｕ１）と
ポリエチレングリコール法を用いて細胞融合させた。こ
の融合細胞をＨＡＴ培地で選択後、培養上清の抗ＨＳＡ
抗体活性を１２５Ｉ標識したＨＳＡを用いて調べ、さら
にクローニングを行い、抗ＨＳＡモノクローナル抗体産
生ハイブリドーマ（ＨＳＡＦ６Ｈ１Ｃ１１，ＨＳＡＦ６
Ｈ３３Ｃ１１）を確立した。
【００２５】抗ＨＳＡモノクローナル抗体産生ハイブリ
ドーマを２，６，１０，１４−テトラメチルペンタデカ
ン（プリスタン：アルドリッチ社）処理したマウスの腹
腔中に投与し、抗体含有腹水を作製した。
ドーマを２，６，１０，１４−テトラメチルペンタデカ
ン（プリスタン：アルドリッチ社）処理したマウスの腹
腔中に投与し、抗体含有腹水を作製した。
【００２６】産生されたモノクローナル抗体のサブクラ
スは、ＩｇＧ１であった。 実施例２ ビオチンに対するモノクローナル抗体の作製 キャリア蛋白としてのウサギＩｇＧに結合したビオチン
（ＶＥＣＴＥＲ Ｌａｂ．）１００μｇをフロインド
コンプリート アジュバント（ヤトロン）とでエマルジ
ョンを調製し、これをＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下に投与
した。これを２週間ごとに２回行い、さらに２週間後に
ウサギＩｇＧに結合したビオチン１００μｇを生理食塩
水に溶かし腹腔中に投与した。このマウスの脾臓細胞を
３日後に摘出し、マウスミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）と
ポリエチレングリコール法を用いて細胞融合を行った。
この融合細胞をＨＡＴ培地で選択後、培養上清の抗ビオ
チン抗体活性をホースラディッシュ パーオキシデース
を標識したビオチン［ビオチン−ＨＲＰＯ］（ＶＥＣＴ
ＥＲ Ｌａｂ．）を用いて調べ、さらにクローニングを
行い、抗ビオチン・モノクローナル抗体産生ハイブリド
ーマを確立した。
スは、ＩｇＧ１であった。 実施例２ ビオチンに対するモノクローナル抗体の作製 キャリア蛋白としてのウサギＩｇＧに結合したビオチン
（ＶＥＣＴＥＲ Ｌａｂ．）１００μｇをフロインド
コンプリート アジュバント（ヤトロン）とでエマルジ
ョンを調製し、これをＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下に投与
した。これを２週間ごとに２回行い、さらに２週間後に
ウサギＩｇＧに結合したビオチン１００μｇを生理食塩
水に溶かし腹腔中に投与した。このマウスの脾臓細胞を
３日後に摘出し、マウスミエローマ細胞（Ｐ３Ｕ１）と
ポリエチレングリコール法を用いて細胞融合を行った。
この融合細胞をＨＡＴ培地で選択後、培養上清の抗ビオ
チン抗体活性をホースラディッシュ パーオキシデース
を標識したビオチン［ビオチン−ＨＲＰＯ］（ＶＥＣＴ
ＥＲ Ｌａｂ．）を用いて調べ、さらにクローニングを
行い、抗ビオチン・モノクローナル抗体産生ハイブリド
ーマを確立した。
【００２７】これらハイブリドーマから分泌されるモノ
クローナル抗体ＢＲＩＦ２Ｈ１５Ｃ２３を選んだ。この
モノクローナル抗体のサブクラスは、ＩｇＧ１であっ
た。
クローナル抗体ＢＲＩＦ２Ｈ１５Ｃ２３を選んだ。この
モノクローナル抗体のサブクラスは、ＩｇＧ１であっ
た。
【００２８】実施例３ サルベージ経路酵素欠損ハイブリドーマの作製 （ａ）抗ＨＳＡ・モノクローナル抗体産生細胞のＨＧＰ
ＲＴ欠損化 対数増殖期の抗ＨＳＡ・モノクローナル抗体産生ハイブ
リドーマ（ＨＳＡＦ６Ｈ１Ｃ１１，ＨＳＡＦ６Ｈ３３Ｃ
１１）をＭＮＮＧ（Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトローＮ−ニ
トロソグアニジン）を１μｇ／ｍｌ含む培地で３時間培
養し、変異原処理を行った。変異原処理後、２日間通常
の培地で細胞を増殖させた後、８−アザグアニンを２０
μｇ／ｍｌ添加した培地で培養を行った。この８−アザ
グアニン添加培地で増殖可能な細胞（８−アザグアニン
耐性細胞）の一部をＨＡＴ倍地中で培養し増殖しなかっ
た細胞（サルベージ経路が働いていない細胞）を選ん
だ。さらにＥＬＩＳＡ法でＨＳＡに対し抗体活性のある
細胞を選び、この細胞とＨＧＰＲＴ欠損マウスミエロー
マ細胞（Ｐ３Ｕ１）とをポリエチレングリコール法によ
り細胞融合を行った。この融合細胞のうち、ＨＡＴ培地
中で増殖不可能な細胞（ＨＳＡＦ６Ｈ１Ｇ，ＨＳＡＦ６
Ｈ３３Ｊ）を選んだ。８−アザグアニン耐性細胞株がＨ
ＡＴ培地中で増殖不可能であることと、Ｐ３Ｕ１細胞と
融合させてもＨＡＴ培地中で増殖可能とならないことか
ら、この８−アザグアニン耐性細胞はＨＧＰＲＴ欠損細
胞であることが確認された。
ＲＴ欠損化 対数増殖期の抗ＨＳＡ・モノクローナル抗体産生ハイブ
リドーマ（ＨＳＡＦ６Ｈ１Ｃ１１，ＨＳＡＦ６Ｈ３３Ｃ
１１）をＭＮＮＧ（Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトローＮ−ニ
トロソグアニジン）を１μｇ／ｍｌ含む培地で３時間培
養し、変異原処理を行った。変異原処理後、２日間通常
の培地で細胞を増殖させた後、８−アザグアニンを２０
μｇ／ｍｌ添加した培地で培養を行った。この８−アザ
グアニン添加培地で増殖可能な細胞（８−アザグアニン
耐性細胞）の一部をＨＡＴ倍地中で培養し増殖しなかっ
た細胞（サルベージ経路が働いていない細胞）を選ん
だ。さらにＥＬＩＳＡ法でＨＳＡに対し抗体活性のある
細胞を選び、この細胞とＨＧＰＲＴ欠損マウスミエロー
マ細胞（Ｐ３Ｕ１）とをポリエチレングリコール法によ
り細胞融合を行った。この融合細胞のうち、ＨＡＴ培地
中で増殖不可能な細胞（ＨＳＡＦ６Ｈ１Ｇ，ＨＳＡＦ６
Ｈ３３Ｊ）を選んだ。８−アザグアニン耐性細胞株がＨ
ＡＴ培地中で増殖不可能であることと、Ｐ３Ｕ１細胞と
融合させてもＨＡＴ培地中で増殖可能とならないことか
ら、この８−アザグアニン耐性細胞はＨＧＰＲＴ欠損細
胞であることが確認された。
【００２９】（ｂ）抗ビオチン・モノクローナル抗体産
生細胞のＴＫ欠損化 対数増殖期の抗ビオチン・モノクローナル抗体産生ハイ
ブリドーマ（ＢＲＩＦ２Ｈ１５Ｃ２３）をＭＮＮＧ１μ
ｇ／ｍｌ含む培地で３時間培養し、変異原処理を行っ
た。変異原処理後、２日間通常の培地で細胞を増殖させ
た後、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（Ｂｕｄ
Ｒ：シグマ Ｂ−５００２）を３０μｇ／ｍｌ添加した
培地で培養した。このＢｕｄＲ添加培地で増殖可能な細
胞（ＢｕｄＲ耐性細胞）の一部をＨＡＴ培地中で培養し
増殖しなかった細胞（サルベージ経路が働いていない細
胞）を選んだ。さらにＥＬＩＳＡ法でビオチンに対し抗
体活性である細胞を選び、これとＰ３Ｕ１細胞とをＰＥ
Ｇ法により細胞融合させ、ＨＡＴ培地で増殖可能な細胞
（ＢＲＩＦ２Ｈ１５Ｂ１）を選んだ。ＢｕｄＲ耐性細胞
がＴＫ欠損細胞であれば、ＨＧＰＲＴ欠損細胞であるＰ
３Ｕ１細胞との融合細胞は、お互いの欠損酵素を補って
ＨＡＴ培地中で増殖可能となる。得られた融合細胞はＨ
ＡＴ培地中で増殖が確認され、このＢｕｄＲ耐性細胞が
ＴＫ欠損細胞であることが確認された。 実施例４ 二重特異性抗体（ＴＢＨＦ１）の作製 実施例３（ａ）で作製したハイブリドーマＨＳＡＦ６Ｈ
１Ｇ（ＨＧＰＲＴ−）と、実施例３（ｂ）で作製したハ
イブリドーマＢＲＩＦ２Ｈ１５Ｂ１（ＴＫ−）のそれぞ
れ１．１×１０７細胞とをポリエチレングリコール法に
より細胞融合を行った。融合後、ＨＡＴ培地中で培養し
細胞増殖をした融合細胞を選び出し、この融合細胞の培
養上清のＨＳＡとビオチンへの抗体活性をＥＬＩＳＡ法
を用いて調べた。次に、この抗体をＨＳＡを固相化した
ＥＬＩＳＡプレートに反応させ、これにビオチン−ＨＲ
ＰＯを反応させた。固相上のＨＲＰＯ活性をｏ−フエニ
レンジアミンとＨ２Ｏ２を用いて測定した。抗体活性測
定後、二重特異性抗体活性のある融合細胞のクローニン
グを行い、ハイブリッド ハイブリドーマ（表１）を確
立した。
生細胞のＴＫ欠損化 対数増殖期の抗ビオチン・モノクローナル抗体産生ハイ
ブリドーマ（ＢＲＩＦ２Ｈ１５Ｃ２３）をＭＮＮＧ１μ
ｇ／ｍｌ含む培地で３時間培養し、変異原処理を行っ
た。変異原処理後、２日間通常の培地で細胞を増殖させ
た後、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（Ｂｕｄ
Ｒ：シグマ Ｂ−５００２）を３０μｇ／ｍｌ添加した
培地で培養した。このＢｕｄＲ添加培地で増殖可能な細
胞（ＢｕｄＲ耐性細胞）の一部をＨＡＴ培地中で培養し
増殖しなかった細胞（サルベージ経路が働いていない細
胞）を選んだ。さらにＥＬＩＳＡ法でビオチンに対し抗
体活性である細胞を選び、これとＰ３Ｕ１細胞とをＰＥ
Ｇ法により細胞融合させ、ＨＡＴ培地で増殖可能な細胞
（ＢＲＩＦ２Ｈ１５Ｂ１）を選んだ。ＢｕｄＲ耐性細胞
がＴＫ欠損細胞であれば、ＨＧＰＲＴ欠損細胞であるＰ
３Ｕ１細胞との融合細胞は、お互いの欠損酵素を補って
ＨＡＴ培地中で増殖可能となる。得られた融合細胞はＨ
ＡＴ培地中で増殖が確認され、このＢｕｄＲ耐性細胞が
ＴＫ欠損細胞であることが確認された。 実施例４ 二重特異性抗体（ＴＢＨＦ１）の作製 実施例３（ａ）で作製したハイブリドーマＨＳＡＦ６Ｈ
１Ｇ（ＨＧＰＲＴ−）と、実施例３（ｂ）で作製したハ
イブリドーマＢＲＩＦ２Ｈ１５Ｂ１（ＴＫ−）のそれぞ
れ１．１×１０７細胞とをポリエチレングリコール法に
より細胞融合を行った。融合後、ＨＡＴ培地中で培養し
細胞増殖をした融合細胞を選び出し、この融合細胞の培
養上清のＨＳＡとビオチンへの抗体活性をＥＬＩＳＡ法
を用いて調べた。次に、この抗体をＨＳＡを固相化した
ＥＬＩＳＡプレートに反応させ、これにビオチン−ＨＲ
ＰＯを反応させた。固相上のＨＲＰＯ活性をｏ−フエニ
レンジアミンとＨ２Ｏ２を用いて測定した。抗体活性測
定後、二重特異性抗体活性のある融合細胞のクローニン
グを行い、ハイブリッド ハイブリドーマ（表１）を確
立した。
【００３０】このハイブリッド ハイブリドーマをプリ
スタン処理したＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔中に投与し、
抗体含有腹水を作製した。この腹水中のＩｇＧ１濃度は
２．４〜１３ｍｇ／ｍｌであった。
スタン処理したＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔中に投与し、
抗体含有腹水を作製した。この腹水中のＩｇＧ１濃度は
２．４〜１３ｍｇ／ｍｌであった。
【００３１】
【表１】 実施例５ 二重特異性抗体（ＴＢＨＦ２）の作製 ＨＳＡＦ６Ｈ３３Ｊ（ＨＧＰＲＴ−）とＢＲＩＦ２Ｈ１
５Ｂ１（ＴＫ−）のそれぞれ３．２×１０５細胞を実施
例４の二重特異性抗体（ＴＢＨＦ１）の作製と同様にポ
リエチレングリコール法で細胞融合を行った。この融合
細胞をＨＡＴ培地で選択後、二重特異性抗体活性を測定
し、さらにクローニングを行って、ハイブリッド ハイ
ブリドーマ（表２）を確立した。
５Ｂ１（ＴＫ−）のそれぞれ３．２×１０５細胞を実施
例４の二重特異性抗体（ＴＢＨＦ１）の作製と同様にポ
リエチレングリコール法で細胞融合を行った。この融合
細胞をＨＡＴ培地で選択後、二重特異性抗体活性を測定
し、さらにクローニングを行って、ハイブリッド ハイ
ブリドーマ（表２）を確立した。
【００３２】このハイブリッド ハイブリドーマをプリ
スタン処理したＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔中に投与し、
抗体含有腹水を作製した。この腹水中のＩｇＧ１濃度は
１．６〜１１ｍｇ／ｍｌであった。
スタン処理したＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔中に投与し、
抗体含有腹水を作製した。この腹水中のＩｇＧ１濃度は
１．６〜１１ｍｇ／ｍｌであった。
【００３３】
【表２】 実施例６ 二重特異性抗体を用いたＨＳＡサンドイッチ法ＥＩＡ 抗ＨＳＡ．モノクローナル抗体ＨＳＡＦ６Ｈ１を固相化
（２μｇ／ｂｅａｄ）したビーズに、ＨＳＡ希釈溶液
（１０００，３００，１００，３０，１０ｎｇ／ｍｌ）
１００μｌ及び５０ｍＭリン酸緩衝液２００μｌを室温
で３時間反応させた。これを精製水で２回洗浄した後、
二重特異性抗体ＴＢＨＦ２Ｈ６腹水希釈溶液１００μｌ
及び５０ｍＭリン酸緩衝液２００μｌを４℃で一晩反応
させた。精製水で２回洗浄後、さらにビオチン−ＨＲＰ
Ｏ希釈溶液（１×１０６）３００μｌを室温で３時間反
応させた。精製水で２回洗浄後、ビーズを反応用試験管
に移し、基質溶液（ｏ−フェニレンジアミン、Ｈ
２Ｏ２）３００μｌを加え、室温で１５分間インキュベ
ート後、１Ｎ硫酸１０００μｌで反応を停止させ、反応
溶液の４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。このよう
にして得られた結果を図１に示した。
（２μｇ／ｂｅａｄ）したビーズに、ＨＳＡ希釈溶液
（１０００，３００，１００，３０，１０ｎｇ／ｍｌ）
１００μｌ及び５０ｍＭリン酸緩衝液２００μｌを室温
で３時間反応させた。これを精製水で２回洗浄した後、
二重特異性抗体ＴＢＨＦ２Ｈ６腹水希釈溶液１００μｌ
及び５０ｍＭリン酸緩衝液２００μｌを４℃で一晩反応
させた。精製水で２回洗浄後、さらにビオチン−ＨＲＰ
Ｏ希釈溶液（１×１０６）３００μｌを室温で３時間反
応させた。精製水で２回洗浄後、ビーズを反応用試験管
に移し、基質溶液（ｏ−フェニレンジアミン、Ｈ
２Ｏ２）３００μｌを加え、室温で１５分間インキュベ
ート後、１Ｎ硫酸１０００μｌで反応を停止させ、反応
溶液の４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。このよう
にして得られた結果を図１に示した。
【００３４】実施例７ 抗ＣＥＡ・モノクローナル抗体産生細胞のＨＧＰＲＴ欠
損化 抗ＣＥＡ・モノクローナル抗体産生ハイブリドーマであ
るＣＥＡ３５１９株を実施例３（ａ）と同様に処理し
て、ヒポキサンチン・グアニン・ホスホリボシルトラン
スフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）欠損株を作製した。ＣＥＡ
３５１９株を使用して８−アザグアニン耐性で且つＨＡ
Ｔ感受性細胞を２０種得た。
損化 抗ＣＥＡ・モノクローナル抗体産生ハイブリドーマであ
るＣＥＡ３５１９株を実施例３（ａ）と同様に処理し
て、ヒポキサンチン・グアニン・ホスホリボシルトラン
スフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）欠損株を作製した。ＣＥＡ
３５１９株を使用して８−アザグアニン耐性で且つＨＡ
Ｔ感受性細胞を２０種得た。
【００３５】実施例８ 抗ＣＥＡ二重特異性抗体の作製 ＣＥＡ３５１９株から実施例７に従って作製されたＨＡ
Ｔ感受性細胞のうちの一つＡ２株と実施例３（ｂ）で作
製されたＴＫ欠損株ＢＲＩＦ２Ｈ１５Ｂ１細胞とを、実
施例４あるいは５と同様にして処理した。各細胞は２．
８×１０６個づつを用い、１：１で融合し、４００個の
ウェル中に播いた。その結果、１８個のウェル中に細胞
の増殖が認められた。ＨＡＴスクリーニングでＣＥＡと
ビオチンとの両方に対する抗体活性を持つものを、選別
し、２回のさらなるスクリーニング処理を施して、４種
のクローン即ちＨ３，Ｈ４，Ｈ５，Ｈ６，の各クローン
を確立（ここで得られたものをＴＢＣＦ１細胞と称し
た。）し、そのうちＨ３，Ｈ４及びＨ５のクローンはマ
ウス腹水化処理した。この操作も実施例４及び５に準じ
て行った。
Ｔ感受性細胞のうちの一つＡ２株と実施例３（ｂ）で作
製されたＴＫ欠損株ＢＲＩＦ２Ｈ１５Ｂ１細胞とを、実
施例４あるいは５と同様にして処理した。各細胞は２．
８×１０６個づつを用い、１：１で融合し、４００個の
ウェル中に播いた。その結果、１８個のウェル中に細胞
の増殖が認められた。ＨＡＴスクリーニングでＣＥＡと
ビオチンとの両方に対する抗体活性を持つものを、選別
し、２回のさらなるスクリーニング処理を施して、４種
のクローン即ちＨ３，Ｈ４，Ｈ５，Ｈ６，の各クローン
を確立（ここで得られたものをＴＢＣＦ１細胞と称し
た。）し、そのうちＨ３，Ｈ４及びＨ５のクローンはマ
ウス腹水化処理した。この操作も実施例４及び５に準じ
て行った。
【００３６】実施例９ 実施例８で得られたＴＢＣＦ１Ｈ３クローンから得られ
たＴＢＣＦ１Ｈ３抗体（マウス腹水の希釈液で、ＳＲＩ
Ｄによる抗体濃度２００μｇ／ｍｌ）をもちいてＣＥＡ
のサンドイッチ法ＥＩＡを行った。
たＴＢＣＦ１Ｈ３抗体（マウス腹水の希釈液で、ＳＲＩ
Ｄによる抗体濃度２００μｇ／ｍｌ）をもちいてＣＥＡ
のサンドイッチ法ＥＩＡを行った。
【００３７】ＣＥＡ４２３０抗体を固相化したビーズ１
個を０，４，１０，４０，２００及び５００ｎｇ／ｍｌ
の希釈列のＣＥＡ溶液１００μｌ及び緩衝液２００μｌ
とからなる液中に入れ、室温で３時間撹拌しながら反応
させた。精製水で３回洗浄した後上記ＴＢＣＦ１Ｈ３抗
体（２００μｇ／ｍｌ）１００μｌ及び緩衝液２００μ
ｌを加えた。４℃で１５時間反応せしめ、精製水で３回
洗浄した。
個を０，４，１０，４０，２００及び５００ｎｇ／ｍｌ
の希釈列のＣＥＡ溶液１００μｌ及び緩衝液２００μｌ
とからなる液中に入れ、室温で３時間撹拌しながら反応
させた。精製水で３回洗浄した後上記ＴＢＣＦ１Ｈ３抗
体（２００μｇ／ｍｌ）１００μｌ及び緩衝液２００μ
ｌを加えた。４℃で１５時間反応せしめ、精製水で３回
洗浄した。
【００３８】次にビオチン−ＨＲＰＯ溶液を３００μｌ
加え、室温で３時間撹拌しながら反応させた後、３回精
製水で洗浄した。ビーズを反応用試験管に移し、ｏ−フ
ェニレンジアミンを含有する基質溶液３００μｌを加え
た後、室温で３０分間反応させ、１Ｎ硫酸１０００μｌ
を加え反応を停止させ、４９２ｎｍにおける吸光度を測
定した。なお、ここで用いられた緩衝液は５０ｍＭリン
酸緩衝液（１％ＢＳＡ，ｐＨ７．４）であった。
加え、室温で３時間撹拌しながら反応させた後、３回精
製水で洗浄した。ビーズを反応用試験管に移し、ｏ−フ
ェニレンジアミンを含有する基質溶液３００μｌを加え
た後、室温で３０分間反応させ、１Ｎ硫酸１０００μｌ
を加え反応を停止させ、４９２ｎｍにおける吸光度を測
定した。なお、ここで用いられた緩衝液は５０ｍＭリン
酸緩衝液（１％ＢＳＡ，ｐＨ７．４）であった。
【００３９】ここでえられたＣＥＡの標準曲線を図２に
示した。
示した。
【００４０】
【発明の効果】本発明における二重特異性抗体は、ビオ
チン化した酵素や蛍光物質などと組み合わせることによ
って、従来の化学的手法により酵素や蛍光物質を結合さ
せた標識抗体の代わりに使用することが可能であって、
抗体分子を化学的に処理することなくトレーサートとし
て使用することができるので、製造効率の向上、安定性
の増加、さらにはビオチン化酵素などを異なる抗原の測
定系に共通試薬として用いることができるなどの利点を
有する。
チン化した酵素や蛍光物質などと組み合わせることによ
って、従来の化学的手法により酵素や蛍光物質を結合さ
せた標識抗体の代わりに使用することが可能であって、
抗体分子を化学的に処理することなくトレーサートとし
て使用することができるので、製造効率の向上、安定性
の増加、さらにはビオチン化酵素などを異なる抗原の測
定系に共通試薬として用いることができるなどの利点を
有する。
【図１】本発明のハイブリッド ハイブリドーマが分泌
するモノクローナル抗体を使用して作成されたＨＳＡの
サンドイッチ法ＥＩＡの標準曲線を示したものである。
するモノクローナル抗体を使用して作成されたＨＳＡの
サンドイッチ法ＥＩＡの標準曲線を示したものである。
【図２】実施例９で得られたＣＥＡのサンドイッチ法Ｅ
ＩＡの標準曲線を示す。
ＩＡの標準曲線を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｕ 8310−2Ｊ 33/531 Ａ 8310−2Ｊ 33/574 Ｅ 9015−2Ｊ 33/577 Ｂ 9015−2Ｊ (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (6)
- 【請求項１】 二つの異なる抗原に対して特異性を有す
る抗体であって、該抗原の一方がビオチンまたはビオチ
ン誘導体であり、他方が該第一の抗原と異なる抗原であ
ることを特徴とする二重特異性抗体。 - 【請求項２】 ビオチンまたはビオチン誘導体に対して
特異性を有する抗ビオチン・モノクローナル抗体産生細
胞と、ビオチンまたはビオチン誘導体以外の抗原に対し
て特異性を有するモノクローナル抗体産生細胞との融合
細胞により産生されることを特徴とする請求項１に記載
の二重特異性抗体。 - 【請求項３】 該第一の抗原と異なる抗原が、タンパク
質、多糖類、核酸及びこれらの結合物である、請求項１
または２に記載の二重特異性抗体。 - 【請求項４】 該第一の抗原と異なる抗原が、ヒト血清
アルブミン、癌胎児性抗原、エラスターゼ−１、Ｉｇ
Ｅ、インスリン、扁平上皮癌関連抗原（ＳＣＣ）、ＴＳ
Ｈである、請求項１または２に記載の二重特異性抗体。 - 【請求項５】 融合細胞ＴＢＨＦ１Ｈ５０［（受託番
号）微工研菌寄第１１５３２号］、ＴＢＨＦ２Ｈ６
［（受託番号）微工研菌寄第１１５３１号］あるいはＴ
ＢＣＦ１Ｈ３［（受託番号）微工研菌寄第１２２８７
号］が分泌する請求項１または２に記載の二重特異性抗
体。 - 【請求項６】 ビオチン誘導体がビオチン化酵素あるい
はビオチン化した蛍光物質である請求項１ないし４のい
ずれかに記載の二重特異性抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3240139A JPH05184383A (ja) | 1990-06-19 | 1991-06-17 | 二重特異性抗体 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2-158817 | 1990-06-19 | ||
| JP15881790 | 1990-06-19 | ||
| JP3240139A JPH05184383A (ja) | 1990-06-19 | 1991-06-17 | 二重特異性抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05184383A true JPH05184383A (ja) | 1993-07-27 |
Family
ID=26485819
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3240139A Pending JPH05184383A (ja) | 1990-06-19 | 1991-06-17 | 二重特異性抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05184383A (ja) |
Cited By (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| EP2289944A2 (en) | 2003-10-10 | 2011-03-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Bispecific antibody substituting for functional proteins |
| EP2311945A1 (en) | 2003-10-14 | 2011-04-20 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Bispecific antibodies substituting for functional proteins |
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| US11150254B2 (en) | 2014-09-26 | 2021-10-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for measuring reactivity of FVIII |
| US11214623B2 (en) | 2014-09-26 | 2022-01-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody capable of neutralizing substance having activity alternative to function of coagulation factor VIII (FVIII) |
| US11352438B2 (en) | 2016-09-06 | 2022-06-07 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods of using a bispecific antibody that recognizes coagulation factor IX and/or activated coagulation factor IX and coagulation factor X and/or activated coagulation factor X |
| US11649262B2 (en) | 2015-12-28 | 2023-05-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for promoting efficiency of purification of Fc region-containing polypeptide |
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