JPH0547223B2 - - Google Patents
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- JPH0547223B2 JPH0547223B2 JP59221861A JP22186184A JPH0547223B2 JP H0547223 B2 JPH0547223 B2 JP H0547223B2 JP 59221861 A JP59221861 A JP 59221861A JP 22186184 A JP22186184 A JP 22186184A JP H0547223 B2 JPH0547223 B2 JP H0547223B2
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- gel
- water
- acid
- sulfate
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［産業上の利用分野］
本発明は吸着体の滅菌方法に関する。さらに詳
しくは、硫酸化多糖類を水不溶性担体に固定して
なる体外循環治療用吸着体の滅菌方法に関する。 ［従来の技術］ 従来より体液中の有害成分を選択的に除去する
目的で、有害成分に特異的な親和性を有する物質
（いわゆるリガンド）を水不溶性担体に固定した
吸着体を体外循環治療に用いる試みがなされてい
る。治療に用いるためには滅菌が不可欠である
が、安全上の問題、使用時の取り扱いなどの点か
ら薬剤滅菌は不適当で、高圧蒸気滅菌が好まし
い。しかるにこれらの吸着体を高圧蒸気滅菌する
とリガンドの失活や脱離がおこり、事実上高圧蒸
気滅菌を施した体外循環治療用吸着体は実現して
いない。とくにリガンドとして硫酸化多糖類を用
いた吸着体は、高圧蒸気滅菌により脱硫酸などの
分解をおこしやすいことが知られている。 ［発明が解決しようとする問題点］ 硫酸化多糖類を水不溶性担体に固定した体外循
環治療用吸着体を121℃で20分間というようなき
びしい条件で滅菌すると、固定されている硫酸化
多糖類が加水分解してはずれたりするため、血液
中の有害成分を除去する性能が充分でなくなると
いう問題が生ずる。 本発明は前記のごとき蒸気滅菌をしたばあいに
生ずる問題を解決するためになされたものであ
る。 ［問題を解決するための手段］ 本発明は、硫酸化多糖類を水不溶性担体に固定
してなる体外循環治療用吸着体に蒸気滅菌を施す
にあたり、PH５〜９にコントロールされた水性溶
媒中で滅菌することを特徴とする吸着体の滅菌方
法に関する。 ［実施例］ 本発明に用いる硫酸化多糖類としては、たとえ
ばヘパリン、デキストラン硫酸、コンドロイチン
硫酸、コンドロイチンポリ硫酸、ヘパラン酸、ケ
ラタン硫酸、ヘパリチン硫酸、キシラン硫酸、カ
ロニン硫酸、セルロース硫酸、キチン硫酸、キト
サン硫酸、ペクチン硫酸、イヌリン硫酸、アルギ
ン酸硫酸、グリコーゲン硫酸、ポリラクトース硫
酸、カラゲニン硫酸、デンプン硫酸、ポリグルコ
ース硫酸、ラミナリン硫酸、ガラクタン硫酸、レ
バン酸、メベサルフエートなどがあげられるが、
これらに限定されるものではなく、一般に体外循
環治療用吸着体の製造に用いられる硫酸化多糖類
であれば使用しうる。前記硫酸化多糖類の具体例
のうちでは、ヘパリン、デキストラン硫酸、コン
ドロイチンポリ硫酸が好ましい。 本発明に用いる水不溶性担体としては、たとえ
ば通常アフイニテイークロマトグラフイーに用い
られる担体であるアガロース、デキストラン、ポ
リアクリルアミドなどの軟質ゲル、多孔質ガラ
ス、多孔質シリカなどの無機多孔体、合成高分子
からなるポリマーゲル、多孔質セルロースゲルな
どがあげられるが、これらに限定されるものでは
ない。これらのうちでは無機多孔体、ポリマーハ
ードゲルなどの硬質ゲルが充分な体液流量が得ら
れる、詰まりを生じにくいなどの理由から好まし
く、とりわけ多孔質セルロースゲルが、 (1) 機械的強度が比較的高く、強靭であるため撹
拌などの操作により破壊されたり微粉を生じた
りすることが少なく、カラムに充填したばあい
に体液を高流速で流しても圧密化したり、目詰
まりしたりしないので高流速で流すことが可能
となり、また細孔構造が高圧蒸気滅菌などによ
つて変化を受けにくい、 (2) ゲルがセルロースで構成されているため親水
性であり、硫酸化多糖類の結合に利用しうる水
酸基が多数存在し、非特異吸着も少ない、 (3) 空孔容積を大きくしても比較的強度が高いた
め、軟質ゲルに劣らない吸着容量がえられる、 (4) 安全性が合成高分子ゲルなどに比べて高いな
どの優れた点を有しており、該多孔質セルロー
スゲルに硫酸化多糖類を保持させることによつ
て、高流速で選択的に有害成分を吸着除去しう
る吸着体がえられる。なお多孔質セルロースゲ
ルを用いた吸着体については特願昭58−68116
号明細書に詳細に記載されている。 本発明においては硫酸化多糖類を水不溶性担体
に固定して体外循環治療用吸着体が製造される。 水不溶性担体に硫酸化多糖類を固定させる方法
には公知の種々の方法を用いることができる。す
なわち、物理的方法、イオン結合法、共有結合法
などがあげられる。固定化された硫酸化多糖類は
脱離しにくいことが重要であるため、結合の強固
な共有結合法が好ましく、その他の方法を用いる
にしても脱離を防ぐようにすることが好ましい。
また必要に応じてスペーサーを水不溶性担体と硫
酸化多糖類との間に導入してもよい。 本発明においてはこのようにして製造された体
外循環治療用吸着体が、PH５〜９にコントロール
された水性溶媒中で、通常121℃で20分間程度の
条件で、蒸気滅菌法により滅菌され、使用され
る。 蒸気滅菌する際のPHが５未満になると、蒸気滅
菌された吸着体の吸着活性の低下が著しくなつた
り、固定された硫酸化多糖類の加水分解による脱
離が著しくなつたりする。またPHが９をこえても
PH５未満と同様の現象が生じる。なおPH５未満の
ばあいには吸着体の吸着活性の低下が主としてお
こり、PH９をこえるばあいには硫酸化多糖類の加
水分解による脱離が主としておこり、いずれも吸
着体性能が低下する。 蒸気滅菌するばあいに用いる水性溶媒のPHのコ
ントロール法にはとくに限定はなく、蒸気滅菌中
にPHの変化を自動的に測定しながら、自動的にPH
調整を行なつてもよく、また緩衝液を用いて行な
つてもよい。緩衝液を用いてPH調整すると、特別
な装置が不要で安定にPH調整することができると
ともに、滅菌された体外循環治療用吸着体の保存
中のPH変化にもとづく活性低下や、リガンドであ
る硫酸化多糖類の脱離も抑制されるため好まし
い。 緩衝液の調製に用いる緩衝剤としては、たとえ
ばクエン酸、リン酸、酢酸、ホウ酸、酒石酸、炭
酸、マレイン酸、グリシンなど、あるいはこれら
のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩など
のように人体に安全なものが好ましく、これらは
単独で用いてもよく、２種以上混合して用いても
よい。 水性溶媒のPH調整に緩衝液を用いるばあいの緩
衝液の濃度はとくに限定はなく、緩衝液として働
くかぎり使用しうるが、体外循環治療用吸着体と
して使用する前に行なう洗浄が容易であるなどの
理由から、0.001〜10％（重量％、以下同様）が
好ましく、0.01〜２％がさらに好ましい。 このようにして製造された本発明により滅菌さ
れた体外循環治療用吸着体は、たとえば入口と出
口に体液成分は通過するが吸着体は通過しないフ
イルター、メツシユなどを装着したカラムに吸着
体を充填し、該カラムを体外循環回路に組み込
み、血液、血漿などをカラムに通して行なう体外
循環治療などの用途に限定なく使用しうる。 つぎに本発明の方法を実施例にもとづき説明す
る。 製造例 １ 架橋ポリアクリレートゲル（全多孔性のハード
ゲル）であるトヨパールHW75（蛋白質の排除限
界50000000、粒径50〜100μｍ、東洋曹達(株)製）
10mlに飽和NaOH水溶液６mlおよびエピクロル
ヒドリン15mlを加えて撹拌しながら、50℃で２時
間反応させ、エポキシ化ゲルをえた。えられたゲ
ルに濃アンモニア水20mlを加えて50℃で２時間撹
拌し、アミノ基を導入した。 一方、ヘパリン200mgを10mlの水に溶解してPH
4.5に調整したのち、上記アミノ基を導入したゲ
ル30mlを加えた。そののち１−エチル−３−（ジ
メチルアミノプロピル）−カルボジイミド200mgを
PHを4.5に保ちながら添加し、４℃で24時間振盪
した。反応終了後、2M食塩水溶液、0.5M食塩水
溶液、水を用いてこの順に洗浄し、ヘパリン固定
化ゲル（以下、Ａ−１という）をえた。 製造例 ２ 架橋ポリアクリレートゲルであるトヨパール
HW75 10mlに、飽和NaOH水溶液６mlおよびエ
ピクロルヒドリン15mlを加えて撹拌しながら、50
℃で２時間反応させたのち、ゲルをアルコールお
よび水を用いてこの順に洗浄してエポキシ化され
たゲルを加えた。 えられたゲル２mlに極限粘度数0.055dl／ｇ、
平均重合度40、硫黄含量19％のデキストラン硫酸
ナトリウム0.5ｇおよび水２mlを加えた（デキス
トラン硫酸ナトリウムの濃度は約13％）。ついで
PH12に調整して40℃で16時間振盪し、ゲルを濾別
し、2M食塩水溶液、0.5M食塩水溶液、水を用い
てこの順に洗浄して、デキストラン硫酸ナトリウ
ムが固定されたゲル（以下、Ａ−２という）をえ
た。 製造例 ３ デキストラン硫酸をヘパリンにかえたほかは製
造例２と同様にしてヘパリンが固定されたトヨパ
ールHW75（以下、Ａ−３という）をえた。 製造例 ４ 多孔質ガラスFPG2000（平均粒径1950Å、比表
面積13m2／ｇ、粒径80〜120メツシユ、和光純薬
(株)製）を希硝酸中で３時間加熱し、水洗乾燥後
500℃で３時間加熱したのち、γ−アミノプロピ
ルトリエトキシシランの10％トルエン溶液中に入
れ、３時間還流し、メタノールで洗浄して、γ−
アミノプロピル処理ガラスをえた。 一方、ヘパリン200mgを10mlの水に溶解し、PH
4.5に調整した。これに２ｇのγ−アミノプロピ
ル処理ガラスを加えたのち、１−エチル−３−
（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド200mg
をPH4.5に保ちながら添加し、４℃で24時間振盪
した。反応終了後、2M食塩水溶液、0.5M食塩水
溶液、水を用いてこの順に洗浄し、ヘパリンが固
定された多孔質ガラス（以下、Ｂ−１という）を
えた。 製造例 ５ ヘパリンをコンドロイチンポリ硫酸にかえたほ
かは製造例４と同様にしてコントロイチンポリ硫
酸を固定したFPG2000（以下、Ｂ−２という）を
えた。 製造例 ６ デキストラン硫酸800mgを0.25M NaIO4水溶液
10mlに溶解し、室温で４時間撹拌後、エチレング
リコール200mgを加えて１時間撹拌した。この溶
液をPH８に調整したのち、製造例４と同様にして
得られたγ−アミノプロピル処理FPG2000 ４ml
を加え、24時間振盪した。反応終了後、ゲルを濾
別、水洗し、これを１％HaBH4水溶液10mlに懸
濁して15分間還元し、濾過、水洗してデキストラ
ン硫酸を固定したFPG2000（以下、Ｂ−３とい
う）をえた。 製造例 ７ 多孔質ガラスFPG2000を希硝酸中で３時間加
熱し、水洗後500℃で３時間加熱した。これをγ
−グリシドキシプロピルトリメトキシシランの10
％トルエン溶液中に入れ、３時間還流し、メタノ
ールで洗浄してγ−グリシドキシプロピル処理ガ
ラスをえた。 一方、デキストラン硫酸２ｇを10mlの水に溶解
し、PH9.2に調整したのち、これに２ｇの上記γ
−グリシドキシプロピル処理ガラスを加えて45℃
で16時間反応させた。反応終了後、2M食塩水溶
液、0.5M食塩水溶液、水を用いてこの順に洗浄
し、デキストラン硫酸を固定したFPG2000（以
下、Ｂ−４という）をえた。 製造例 ８ 多孔質セルロースゲルとしてCKゲルＡ−３（排
除限界分子量50000000、粒径45〜105μｍ、チツ
ソ(株)製）10mlに20％NaOH4ｇ、ヘプタン12ｇお
よびノニオン系界面活性剤TWEEN20を１滴加
えた。40℃で２時間撹拌後、エピクロルヒドリン
５ｇを加えて２時間撹拌し、ゲルを水洗濾過して
エポキシ化セルロースゲルをえた。導入されたエ
ポキシ基の量はカラム体積１mlあたり30μMであ
つた。 えられたゲル２mlに極限粘度数0.027dl／ｇ、
硫黄含量17.7％のデキストラン硫酸ナトリウム
0.12ｇおよび水２mlを加え（デキストラン硫酸ナ
トリウムの濃度は約2.5％）、PH11に調整して45℃
で16時間振盪した。そののちゲルを濾別して、
2M食塩水溶液、0.5M食塩水溶液および水を用い
てこの順に洗浄し、デキストラン硫酸ナトウムが
固定されたセルロースゲル（以下、Ｃ−１とい
う）をえた。 製造例 ９ CKゲルＡ−３を吸引濾過して10ｇとり、これ
に20％NaOH4ｇおよびヘプタン12ｇを加え、さ
らにノニオン系界面活性剤TWEEN20を１滴加
えて撹拌し、ゲルを分散させた。40℃で２時間撹
拌後、これにエピクロルヒドリン５ｇを加えて40
℃で２時間撹拌した。静置後上澄液をすて、ゲル
を水洗濾過してエポキシ化ゲルをえた。これに15
mlの濃アンモニア水を加えて40℃で1.5時間撹拌
し、内容物を吸引濾過、水洗してアミノ基の導入
されたセルロースゲルをえた。 一方、ヘパリン200mgを10mlの水に溶解し、こ
れに上記アミノ基導入セルロースゲルを加えてPH
4.5に調整した。そののち１−エチル−３−（ジメ
チルアミノプロピル）−カルボジイミド200mgをPH
4.5に保ちながら添加し、４℃で24時間振盪した。
反応終了後、2M食塩水溶液、0.5M食塩水溶液、
水を用いてこの順に洗浄し、ヘパリン固定化ゲル
（以下、Ｃ−２という）をえた。 製造例 10 デキストラン硫酸をコンドロイチンポリ硫酸に
かえたほかは製造例８と同様にして、コンドロイ
チンポリ硫酸が固定されたCKゲルＡ−３（以下、
Ｃ−３という）をえた。 製造例 11 デキストラン硫酸をヘパリンにかえたほかは製
造例８と同様にしてヘパリンの固定されたCKゲ
ルＡ−３（以下、Ｃ−４という）をえた。 実施例１〜18および比較例１〜11 製造例１〜11でえられた第１表に示すゲル（吸
着体）10ｇ（湿重量）を硬質ガラス製フラスコに
とり、第１表に示す水性溶媒10mlを加え、121℃
で40分間高圧蒸気滅菌を施した。 各吸着体につき滅菌前、滅菌後の水性溶媒の
PH、リガンド量を測定した。結果を第１表に示
す。
しくは、硫酸化多糖類を水不溶性担体に固定して
なる体外循環治療用吸着体の滅菌方法に関する。 ［従来の技術］ 従来より体液中の有害成分を選択的に除去する
目的で、有害成分に特異的な親和性を有する物質
（いわゆるリガンド）を水不溶性担体に固定した
吸着体を体外循環治療に用いる試みがなされてい
る。治療に用いるためには滅菌が不可欠である
が、安全上の問題、使用時の取り扱いなどの点か
ら薬剤滅菌は不適当で、高圧蒸気滅菌が好まし
い。しかるにこれらの吸着体を高圧蒸気滅菌する
とリガンドの失活や脱離がおこり、事実上高圧蒸
気滅菌を施した体外循環治療用吸着体は実現して
いない。とくにリガンドとして硫酸化多糖類を用
いた吸着体は、高圧蒸気滅菌により脱硫酸などの
分解をおこしやすいことが知られている。 ［発明が解決しようとする問題点］ 硫酸化多糖類を水不溶性担体に固定した体外循
環治療用吸着体を121℃で20分間というようなき
びしい条件で滅菌すると、固定されている硫酸化
多糖類が加水分解してはずれたりするため、血液
中の有害成分を除去する性能が充分でなくなると
いう問題が生ずる。 本発明は前記のごとき蒸気滅菌をしたばあいに
生ずる問題を解決するためになされたものであ
る。 ［問題を解決するための手段］ 本発明は、硫酸化多糖類を水不溶性担体に固定
してなる体外循環治療用吸着体に蒸気滅菌を施す
にあたり、PH５〜９にコントロールされた水性溶
媒中で滅菌することを特徴とする吸着体の滅菌方
法に関する。 ［実施例］ 本発明に用いる硫酸化多糖類としては、たとえ
ばヘパリン、デキストラン硫酸、コンドロイチン
硫酸、コンドロイチンポリ硫酸、ヘパラン酸、ケ
ラタン硫酸、ヘパリチン硫酸、キシラン硫酸、カ
ロニン硫酸、セルロース硫酸、キチン硫酸、キト
サン硫酸、ペクチン硫酸、イヌリン硫酸、アルギ
ン酸硫酸、グリコーゲン硫酸、ポリラクトース硫
酸、カラゲニン硫酸、デンプン硫酸、ポリグルコ
ース硫酸、ラミナリン硫酸、ガラクタン硫酸、レ
バン酸、メベサルフエートなどがあげられるが、
これらに限定されるものではなく、一般に体外循
環治療用吸着体の製造に用いられる硫酸化多糖類
であれば使用しうる。前記硫酸化多糖類の具体例
のうちでは、ヘパリン、デキストラン硫酸、コン
ドロイチンポリ硫酸が好ましい。 本発明に用いる水不溶性担体としては、たとえ
ば通常アフイニテイークロマトグラフイーに用い
られる担体であるアガロース、デキストラン、ポ
リアクリルアミドなどの軟質ゲル、多孔質ガラ
ス、多孔質シリカなどの無機多孔体、合成高分子
からなるポリマーゲル、多孔質セルロースゲルな
どがあげられるが、これらに限定されるものでは
ない。これらのうちでは無機多孔体、ポリマーハ
ードゲルなどの硬質ゲルが充分な体液流量が得ら
れる、詰まりを生じにくいなどの理由から好まし
く、とりわけ多孔質セルロースゲルが、 (1) 機械的強度が比較的高く、強靭であるため撹
拌などの操作により破壊されたり微粉を生じた
りすることが少なく、カラムに充填したばあい
に体液を高流速で流しても圧密化したり、目詰
まりしたりしないので高流速で流すことが可能
となり、また細孔構造が高圧蒸気滅菌などによ
つて変化を受けにくい、 (2) ゲルがセルロースで構成されているため親水
性であり、硫酸化多糖類の結合に利用しうる水
酸基が多数存在し、非特異吸着も少ない、 (3) 空孔容積を大きくしても比較的強度が高いた
め、軟質ゲルに劣らない吸着容量がえられる、 (4) 安全性が合成高分子ゲルなどに比べて高いな
どの優れた点を有しており、該多孔質セルロー
スゲルに硫酸化多糖類を保持させることによつ
て、高流速で選択的に有害成分を吸着除去しう
る吸着体がえられる。なお多孔質セルロースゲ
ルを用いた吸着体については特願昭58−68116
号明細書に詳細に記載されている。 本発明においては硫酸化多糖類を水不溶性担体
に固定して体外循環治療用吸着体が製造される。 水不溶性担体に硫酸化多糖類を固定させる方法
には公知の種々の方法を用いることができる。す
なわち、物理的方法、イオン結合法、共有結合法
などがあげられる。固定化された硫酸化多糖類は
脱離しにくいことが重要であるため、結合の強固
な共有結合法が好ましく、その他の方法を用いる
にしても脱離を防ぐようにすることが好ましい。
また必要に応じてスペーサーを水不溶性担体と硫
酸化多糖類との間に導入してもよい。 本発明においてはこのようにして製造された体
外循環治療用吸着体が、PH５〜９にコントロール
された水性溶媒中で、通常121℃で20分間程度の
条件で、蒸気滅菌法により滅菌され、使用され
る。 蒸気滅菌する際のPHが５未満になると、蒸気滅
菌された吸着体の吸着活性の低下が著しくなつた
り、固定された硫酸化多糖類の加水分解による脱
離が著しくなつたりする。またPHが９をこえても
PH５未満と同様の現象が生じる。なおPH５未満の
ばあいには吸着体の吸着活性の低下が主としてお
こり、PH９をこえるばあいには硫酸化多糖類の加
水分解による脱離が主としておこり、いずれも吸
着体性能が低下する。 蒸気滅菌するばあいに用いる水性溶媒のPHのコ
ントロール法にはとくに限定はなく、蒸気滅菌中
にPHの変化を自動的に測定しながら、自動的にPH
調整を行なつてもよく、また緩衝液を用いて行な
つてもよい。緩衝液を用いてPH調整すると、特別
な装置が不要で安定にPH調整することができると
ともに、滅菌された体外循環治療用吸着体の保存
中のPH変化にもとづく活性低下や、リガンドであ
る硫酸化多糖類の脱離も抑制されるため好まし
い。 緩衝液の調製に用いる緩衝剤としては、たとえ
ばクエン酸、リン酸、酢酸、ホウ酸、酒石酸、炭
酸、マレイン酸、グリシンなど、あるいはこれら
のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩など
のように人体に安全なものが好ましく、これらは
単独で用いてもよく、２種以上混合して用いても
よい。 水性溶媒のPH調整に緩衝液を用いるばあいの緩
衝液の濃度はとくに限定はなく、緩衝液として働
くかぎり使用しうるが、体外循環治療用吸着体と
して使用する前に行なう洗浄が容易であるなどの
理由から、0.001〜10％（重量％、以下同様）が
好ましく、0.01〜２％がさらに好ましい。 このようにして製造された本発明により滅菌さ
れた体外循環治療用吸着体は、たとえば入口と出
口に体液成分は通過するが吸着体は通過しないフ
イルター、メツシユなどを装着したカラムに吸着
体を充填し、該カラムを体外循環回路に組み込
み、血液、血漿などをカラムに通して行なう体外
循環治療などの用途に限定なく使用しうる。 つぎに本発明の方法を実施例にもとづき説明す
る。 製造例 １ 架橋ポリアクリレートゲル（全多孔性のハード
ゲル）であるトヨパールHW75（蛋白質の排除限
界50000000、粒径50〜100μｍ、東洋曹達(株)製）
10mlに飽和NaOH水溶液６mlおよびエピクロル
ヒドリン15mlを加えて撹拌しながら、50℃で２時
間反応させ、エポキシ化ゲルをえた。えられたゲ
ルに濃アンモニア水20mlを加えて50℃で２時間撹
拌し、アミノ基を導入した。 一方、ヘパリン200mgを10mlの水に溶解してPH
4.5に調整したのち、上記アミノ基を導入したゲ
ル30mlを加えた。そののち１−エチル−３−（ジ
メチルアミノプロピル）−カルボジイミド200mgを
PHを4.5に保ちながら添加し、４℃で24時間振盪
した。反応終了後、2M食塩水溶液、0.5M食塩水
溶液、水を用いてこの順に洗浄し、ヘパリン固定
化ゲル（以下、Ａ−１という）をえた。 製造例 ２ 架橋ポリアクリレートゲルであるトヨパール
HW75 10mlに、飽和NaOH水溶液６mlおよびエ
ピクロルヒドリン15mlを加えて撹拌しながら、50
℃で２時間反応させたのち、ゲルをアルコールお
よび水を用いてこの順に洗浄してエポキシ化され
たゲルを加えた。 えられたゲル２mlに極限粘度数0.055dl／ｇ、
平均重合度40、硫黄含量19％のデキストラン硫酸
ナトリウム0.5ｇおよび水２mlを加えた（デキス
トラン硫酸ナトリウムの濃度は約13％）。ついで
PH12に調整して40℃で16時間振盪し、ゲルを濾別
し、2M食塩水溶液、0.5M食塩水溶液、水を用い
てこの順に洗浄して、デキストラン硫酸ナトリウ
ムが固定されたゲル（以下、Ａ−２という）をえ
た。 製造例 ３ デキストラン硫酸をヘパリンにかえたほかは製
造例２と同様にしてヘパリンが固定されたトヨパ
ールHW75（以下、Ａ−３という）をえた。 製造例 ４ 多孔質ガラスFPG2000（平均粒径1950Å、比表
面積13m2／ｇ、粒径80〜120メツシユ、和光純薬
(株)製）を希硝酸中で３時間加熱し、水洗乾燥後
500℃で３時間加熱したのち、γ−アミノプロピ
ルトリエトキシシランの10％トルエン溶液中に入
れ、３時間還流し、メタノールで洗浄して、γ−
アミノプロピル処理ガラスをえた。 一方、ヘパリン200mgを10mlの水に溶解し、PH
4.5に調整した。これに２ｇのγ−アミノプロピ
ル処理ガラスを加えたのち、１−エチル−３−
（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド200mg
をPH4.5に保ちながら添加し、４℃で24時間振盪
した。反応終了後、2M食塩水溶液、0.5M食塩水
溶液、水を用いてこの順に洗浄し、ヘパリンが固
定された多孔質ガラス（以下、Ｂ−１という）を
えた。 製造例 ５ ヘパリンをコンドロイチンポリ硫酸にかえたほ
かは製造例４と同様にしてコントロイチンポリ硫
酸を固定したFPG2000（以下、Ｂ−２という）を
えた。 製造例 ６ デキストラン硫酸800mgを0.25M NaIO4水溶液
10mlに溶解し、室温で４時間撹拌後、エチレング
リコール200mgを加えて１時間撹拌した。この溶
液をPH８に調整したのち、製造例４と同様にして
得られたγ−アミノプロピル処理FPG2000 ４ml
を加え、24時間振盪した。反応終了後、ゲルを濾
別、水洗し、これを１％HaBH4水溶液10mlに懸
濁して15分間還元し、濾過、水洗してデキストラ
ン硫酸を固定したFPG2000（以下、Ｂ−３とい
う）をえた。 製造例 ７ 多孔質ガラスFPG2000を希硝酸中で３時間加
熱し、水洗後500℃で３時間加熱した。これをγ
−グリシドキシプロピルトリメトキシシランの10
％トルエン溶液中に入れ、３時間還流し、メタノ
ールで洗浄してγ−グリシドキシプロピル処理ガ
ラスをえた。 一方、デキストラン硫酸２ｇを10mlの水に溶解
し、PH9.2に調整したのち、これに２ｇの上記γ
−グリシドキシプロピル処理ガラスを加えて45℃
で16時間反応させた。反応終了後、2M食塩水溶
液、0.5M食塩水溶液、水を用いてこの順に洗浄
し、デキストラン硫酸を固定したFPG2000（以
下、Ｂ−４という）をえた。 製造例 ８ 多孔質セルロースゲルとしてCKゲルＡ−３（排
除限界分子量50000000、粒径45〜105μｍ、チツ
ソ(株)製）10mlに20％NaOH4ｇ、ヘプタン12ｇお
よびノニオン系界面活性剤TWEEN20を１滴加
えた。40℃で２時間撹拌後、エピクロルヒドリン
５ｇを加えて２時間撹拌し、ゲルを水洗濾過して
エポキシ化セルロースゲルをえた。導入されたエ
ポキシ基の量はカラム体積１mlあたり30μMであ
つた。 えられたゲル２mlに極限粘度数0.027dl／ｇ、
硫黄含量17.7％のデキストラン硫酸ナトリウム
0.12ｇおよび水２mlを加え（デキストラン硫酸ナ
トリウムの濃度は約2.5％）、PH11に調整して45℃
で16時間振盪した。そののちゲルを濾別して、
2M食塩水溶液、0.5M食塩水溶液および水を用い
てこの順に洗浄し、デキストラン硫酸ナトウムが
固定されたセルロースゲル（以下、Ｃ−１とい
う）をえた。 製造例 ９ CKゲルＡ−３を吸引濾過して10ｇとり、これ
に20％NaOH4ｇおよびヘプタン12ｇを加え、さ
らにノニオン系界面活性剤TWEEN20を１滴加
えて撹拌し、ゲルを分散させた。40℃で２時間撹
拌後、これにエピクロルヒドリン５ｇを加えて40
℃で２時間撹拌した。静置後上澄液をすて、ゲル
を水洗濾過してエポキシ化ゲルをえた。これに15
mlの濃アンモニア水を加えて40℃で1.5時間撹拌
し、内容物を吸引濾過、水洗してアミノ基の導入
されたセルロースゲルをえた。 一方、ヘパリン200mgを10mlの水に溶解し、こ
れに上記アミノ基導入セルロースゲルを加えてPH
4.5に調整した。そののち１−エチル−３−（ジメ
チルアミノプロピル）−カルボジイミド200mgをPH
4.5に保ちながら添加し、４℃で24時間振盪した。
反応終了後、2M食塩水溶液、0.5M食塩水溶液、
水を用いてこの順に洗浄し、ヘパリン固定化ゲル
（以下、Ｃ−２という）をえた。 製造例 10 デキストラン硫酸をコンドロイチンポリ硫酸に
かえたほかは製造例８と同様にして、コンドロイ
チンポリ硫酸が固定されたCKゲルＡ−３（以下、
Ｃ−３という）をえた。 製造例 11 デキストラン硫酸をヘパリンにかえたほかは製
造例８と同様にしてヘパリンの固定されたCKゲ
ルＡ−３（以下、Ｃ−４という）をえた。 実施例１〜18および比較例１〜11 製造例１〜11でえられた第１表に示すゲル（吸
着体）10ｇ（湿重量）を硬質ガラス製フラスコに
とり、第１表に示す水性溶媒10mlを加え、121℃
で40分間高圧蒸気滅菌を施した。 各吸着体につき滅菌前、滅菌後の水性溶媒の
PH、リガンド量を測定した。結果を第１表に示
す。
【表】
【表】
［発明の効果］
本発明の方法によると、体外循環治療用吸着体
を通常の条件である121℃で20分という条件より
もきびしい121℃で40分間という条件で蒸気滅菌
しても、リガンドの脱離が少なく良好な品質の循
環治療用吸着体がえられる。
を通常の条件である121℃で20分という条件より
もきびしい121℃で40分間という条件で蒸気滅菌
しても、リガンドの脱離が少なく良好な品質の循
環治療用吸着体がえられる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 硫酸化多糖類を水不溶性担体に固定してなる
体外循環治療用吸着体に蒸気滅菌を施すにあた
り、PH５〜９にコントロールされた水性溶媒中で
滅菌することを特徴とする吸着体の滅菌方法。 ２ PHのコントロールされた水性溶媒が緩衝液で
ある特許請求の範囲第１項記載の滅菌方法。 ３ 緩衝液がクエン酸、リン酸、酢酸、ホウ酸、
酒石酸、炭酸、マレイン酸、グリシンおよびそれ
らの塩の少なくとも１種を用いた緩衝液である特
許請求の範囲第２項記載の滅菌方法。
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59221861A JPS61100261A (ja) | 1984-10-22 | 1984-10-22 | 吸着体の滅菌方法 |
| AU48772/85A AU584548B2 (en) | 1984-10-22 | 1985-10-16 | Sterilization of adsorbent and column having improved storability including sterilized adsorbent for use in extracorporeal circulation treatment |
| NZ213860A NZ213860A (en) | 1984-10-22 | 1985-10-16 | Sterilisation of absorbent and column having improved storability including sterilised adsorbent for use in extracorporeal circulation treatment |
| CA000493224A CA1250276A (en) | 1984-10-22 | 1985-10-17 | Sterilization of adsorbent and column having improved storability including sterilized adsorbent for use in extracorporeal circulation treatment |
| EP85113283A EP0179420B1 (en) | 1984-10-22 | 1985-10-19 | Sterilization of adsorbent and column having improved storability including sterilized adsorbent for use in extracorporeal circulation treatment |
| DE8585113283T DE3581262D1 (de) | 1984-10-22 | 1985-10-19 | Sterilisation eines adsorbens sowie eine saeule mit lagerfaehigkeit die das sterilisierte adsorbens enthaelt zur verwendung in der extrakorporalen blutbehandlung. |
| US06/789,540 US4744899A (en) | 1984-10-22 | 1985-10-21 | Sterilization of adsorbent and column having improved storability including sterilized adsorbent for use in extracorporeal circulation treatment |
| CN85109640A CN85109640A (zh) | 1984-10-22 | 1985-10-21 | 吸附剂的消毒和改善了贮存性的装有消过毒的吸附剂、用于体外循环治疗的吸附柱 |
| FI854096A FI90206C (fi) | 1984-10-22 | 1985-10-21 | Menetelmä adsorbentin höyrysteriloimiseksi ja steriloitu adsorptiokolonni |
| ZA858104A ZA858104B (en) | 1984-10-22 | 1985-10-22 | Sterilization of adsorbent and column having improved storability including sterilized adsorbent for use in extracorporeal circulation treatment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59221861A JPS61100261A (ja) | 1984-10-22 | 1984-10-22 | 吸着体の滅菌方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61100261A JPS61100261A (ja) | 1986-05-19 |
| JPH0547223B2 true JPH0547223B2 (ja) | 1993-07-16 |
Family
ID=16773335
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59221861A Granted JPS61100261A (ja) | 1984-10-22 | 1984-10-22 | 吸着体の滅菌方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61100261A (ja) |
| ZA (1) | ZA858104B (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8912117B2 (en) * | 2009-02-20 | 2014-12-16 | Jnc Corporation | Cellulose gel for purification of immunoglobulin |
-
1984
- 1984-10-22 JP JP59221861A patent/JPS61100261A/ja active Granted
-
1985
- 1985-10-22 ZA ZA858104A patent/ZA858104B/xx unknown
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| AFFINITY CHROMATOGRAPHY PRINCIPLES&METHODS=1982 * |
| DEXTRAN FRACTIONS DEXTRAN SULPHATE DEAE-DEXTRAN DEFINED POLYMERS FOR BIOLOGICAL RESEARCH=1980 * |
| HEPARIN-SEPHAROSE CL-6BFOR AFFINITY CHROMATOGRAPHY=1983 * |
| PROC.NATL.ACAD.SCI.USA=1981 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA858104B (en) | 1986-06-25 |
| JPS61100261A (ja) | 1986-05-19 |
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |