JPH0548240B2 - - Google Patents
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- JPH0548240B2 JPH0548240B2 JP59224116A JP22411684A JPH0548240B2 JP H0548240 B2 JPH0548240 B2 JP H0548240B2 JP 59224116 A JP59224116 A JP 59224116A JP 22411684 A JP22411684 A JP 22411684A JP H0548240 B2 JPH0548240 B2 JP H0548240B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hbsag
- carrier
- inorganic salt
- purifying
- hepatitis
- Prior art date
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明は遺伝子操作により得られるＢ型肝炎抗
原（以下、HBsAgという。）の精製方法に関す
る。 〔従来の技術〕 HBsAgはＢ型肝炎ワクチンの主成分である。 Ｂ型肝炎ワクチンは、HBsAg陽性のキヤリア
ー血液からHBsAg粒子を分離精製し、ホルマリ
ン処理などの不活化操作を行つた後、HBsAgの
免疫原性を高めるために、アジユバントとしてア
ラム・ゲルを加えたものとして開発、実用化され
た。 このようにして作られたＢ型肝炎ワクチンは感
染発症の予防だけでなく、感染源となるキヤリア
ーの発生阻止にも有効であることから、Ｂ型肝炎
の絶滅も可能である。 しかし、Ｂ型肝炎ワクチンの生産についてはい
くつかの問題点がある。第１は、HBsAgの原材
料をキヤリアーの血液に依存していることから、
ワクチンの供給が制約されるということである。
第２は、キヤリアーの血液中には少量ながら感染
性のＢ型肝炎ウイルス（HBV）が含まれること
から、唯一の感染しえる動物であるチンパンジー
を用いての安全試験が必要になるということであ
る。 このようなワクチンの生産上の難点を克服する
方法として、遺伝子操作の技術が導入された。 組換えDNA技術は異種のDNAをフアージ又は
プラスミドDNAにつなぎ、大腸菌で増やすとい
う方法で開始された。そして、HBV−DNAの全
塩基配列の決定、ワクチンとして使われるべき
HBsAg遺伝子の同定、大腸菌での形質発現を経
て酵母でのHBsAgの生産へと発展していつた。 たとえば、酵母由来HBsAg（ｙ−HBsAg）は、
SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動による
と、分子量23000〜25000のポリペプチドのみから
なり、これはヒト由来HBsAg（ｈ−HBsAg）の
グリコシル化されていないポリペプチドと一致す
るものである。また、ｈ−HBsAgと同じ22nｍ
の直径をもち、塩化セシウム溶液中での浮上密度
は、ｈ−HBsAgと同じである。 前述したＢ型肝炎ワクチンの生産上の難点を克
服するために、遺伝子操作の技術によりHBsAg
を大量に得、それを高度精製することによりワク
チンとする方法が確立されつつある。 ところが、遺伝子操作を経た菌よりHBsAgを
精製してＢ型肝炎ワクチンを製造する際には、原
料中に蛋白質を主とする菌体成分が夾雑してく
る。これらの夾雑物質は、従来の血漿由来
HBsAgの精製方法では充分に除去することがで
きない。 〔発明が解決しようとする問題点〕 そこで本発明者らは、かかる技術的背景の下に
鋭意研究を重ねた結果、遺伝子操作を経た菌体内
または菌体外に生産されたHBsAgを効率よく精
製する方法を見出し、本発明を完成した。 すなわち、本発明は、遺伝子操作により得られ
るHBsAgを比較的高濃度の無機塩存在下で担体
に特異的に吸着させることによりHBsAgを効率
よく精製する方法である。 本発明は、遺伝子操作により得られ、かつ夾雑
蛋白質を含む未精製のHBsAgを５〜25w／ｖ％
の無機塩存在下で疎水性基を有する担体に接触さ
せ、HBsAgを該担体に特異的に吸着させること
を特徴とするHBsAgの精製方法である。 〔問題点を解決するための手段及び作用〕 本発明において用いられるHBsAgは遺伝子操
作に由来して調製されたものであれば、特に限定
されない。従つて遺伝子操作を経てHBsAgを発
現する菌体（例えば、大腸菌、酵母、枯草菌な
ど）を、凍結融解法、ガラスビーズ法、高圧法、
超音波処理法、酵素処理法等の公知の方法で処理
して得られるHBsAg抽出画分、あるいはこの抽
出画分を各種分画法、吸着クロマトグラフイー、
アフイニテイクロマトグラフイー、ゲル過、密
度勾配遠心分離法、透析等の公知の方法で部分精
製した画分などを用いることができる。（特開昭
58−104887号、同59−48082号、特願昭59−
115189号等参照）。 本発明において用いられる無機塩としては、陰
イオン側から見て、硫酸塩、リン酸塩、塩酸塩な
どが、また陽イオン側から見て、アンモニウム
塩、ナトリウム塩、カリウム塩などが例示される
が、好適には硫酸アンモンニウム、硫酸ナトリウ
ム、塩化ナトリウム、あるいはリン酸塩の一種
（例えばリン酸１ナトリウム、リン酸１カリウム、
リン酸２ナトリウムなど）が用いられる。 添加濃度は５〜25W／Ｖ％が好適である。
5W／Ｖ％以下ではHBsAgが担体に吸着されず、
また25W／Ｖ％以上ではHBsAgとともに夾雑蛋
白質も吸着されてしまうのでいずれも不適当であ
る。 本発明において用いられる担体としては疎水性
基を有する固定化担体が挙げられる。固定化担体
としてはアミノ酸コポリマー、セルロース、アガ
ロース、デキストラン、オリアクリルアミド等が
用いられ、疎水性基としてはフエニルアラニン、
炭素数２〜８のアルキル基、フエニル基が用いら
れる。その固定化方法は公知の方法を用いればよ
い。一例を挙げれば、臭化シアンで活性化したセ
フアロース4Bとフエニルアラニン溶液を混合し、
室温で16時間反応させることにより固定化フエニ
ルアラニンを得ることができる。 このようにして得られた担体を用いることによ
り、収率良く、しかも高純度のHBsAgを得るこ
とができる。 本発明に係るHBsAgの吸着クロマトグラフイ
ーは以下の通りである。なお本発明においてクロ
マトグラフイーはカラム法、バツチ法のどちらを
用いても良い。 すなわち、粗HBsAg液に無機塩を５〜25w／
ｖ％になるように添加調整後、同濃度の無機塩溶
液で平衡化した担体と接触、吸着させる。その
後、２〜５倍量の上記無機塩溶液で洗つて、未吸
着の夾雑蛋白質を洗い流した後、５〜20v／ｖ％
（好ましくは10v／ｖ％）エタノールを含むPH６
〜８の緩衝液（例えばリン酸緩衝液）で吸着され
ているHBsAgを溶出する。溶出液は担体１ml当
たり１〜２ml程度用いられる。 このようにして得られる溶出画分は、公知の精
製方法を用いることにより、さらに高度に精製さ
れる。また、公知の精剤化技術を施すことにより
HBワクチンとして臨床に供することができる。 〔発明の効果〕 本方法で精製されたHBsAgは、SDS（Sodium
Dodecyl Sulfate）存在下でポリアクリルアミド
ゲル電気泳動を行う際に分子量25000の部分に単
一のバンドを示し、発熱性物質の混入もなく、ま
た動物に免疫すると強いHBs抗体を産生せしめ
る作用を有している。 本発明により得られるHBsAgは夾雑物質の極
めて少ない高品質のHBsAgである。従来の血漿
由来HBsAgの精製方法では充分に取り除くこと
ができなかつた菌体由来の夾雑蛋白質を、本発明
の精製方法により取り除くことができる。従つ
て、遺伝子操作を経て得られたHBsAgを用いて
も、従来品と同等の安全性に優れたHBワクチン
を製造することが可能である。 〔実施例〕 実施例 １ HBs抗原産生酵母１Kgを0.1Mリン酸緩衝液
（PH10.0）１に懸濁し、PH10に調整したのち、
超音波処理することによりHBsAgを抽出した。
抽出中に再度PHを10に調整した。超音波処理後
10000ｇで20分間遠心分離することにより沈殿を
除去し、抽出液を得た。 このようにして得た抽出液のPHを7.2に調整し
たのち、抽出液１当り硫安を70ｇ添加し、別途
調製されたフエニルアラニン−セフアロース4B
のカラムへ注入しHBs抗原を吸着させた。上記
と同じ濃度の硫安液で十分に洗浄し、不純物質を
除去した後、10v／ｖ％エタノール含有0.1Mリン
酸緩衝液（PH7.2）を用いてHBs抗原を溶出した。
溶出液中のHBs抗原の精製度は抽出液の280倍
〔RPHA法によりHBsAg比活性（RPHA titer／
A280）を測定〕で回収率は70％であつた。 尚フエニルアラニン−セフアローズ4Bの調製
法は臭化シアンで活性化したセフアローズ4Bに
フエニルアラニン溶液を加え、室温で16時間反応
させることにより行つた。 同様にして、抽出原液に各種無機塩を添加した
後、同濃度の無機塩溶液で平衡化したフエニルア
ラニン−セフアロース4Bカラムに注入し、充分
に洗浄後10v／ｖ％エタノール含有0.1Mリン酸緩
衝液（PH7.2）で溶出した。この溶出画分の
HBsAg比活性（RPHA Titer／A280）を測定し
た。結果を第１表に示す。
原（以下、HBsAgという。）の精製方法に関す
る。 〔従来の技術〕 HBsAgはＢ型肝炎ワクチンの主成分である。 Ｂ型肝炎ワクチンは、HBsAg陽性のキヤリア
ー血液からHBsAg粒子を分離精製し、ホルマリ
ン処理などの不活化操作を行つた後、HBsAgの
免疫原性を高めるために、アジユバントとしてア
ラム・ゲルを加えたものとして開発、実用化され
た。 このようにして作られたＢ型肝炎ワクチンは感
染発症の予防だけでなく、感染源となるキヤリア
ーの発生阻止にも有効であることから、Ｂ型肝炎
の絶滅も可能である。 しかし、Ｂ型肝炎ワクチンの生産についてはい
くつかの問題点がある。第１は、HBsAgの原材
料をキヤリアーの血液に依存していることから、
ワクチンの供給が制約されるということである。
第２は、キヤリアーの血液中には少量ながら感染
性のＢ型肝炎ウイルス（HBV）が含まれること
から、唯一の感染しえる動物であるチンパンジー
を用いての安全試験が必要になるということであ
る。 このようなワクチンの生産上の難点を克服する
方法として、遺伝子操作の技術が導入された。 組換えDNA技術は異種のDNAをフアージ又は
プラスミドDNAにつなぎ、大腸菌で増やすとい
う方法で開始された。そして、HBV−DNAの全
塩基配列の決定、ワクチンとして使われるべき
HBsAg遺伝子の同定、大腸菌での形質発現を経
て酵母でのHBsAgの生産へと発展していつた。 たとえば、酵母由来HBsAg（ｙ−HBsAg）は、
SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動による
と、分子量23000〜25000のポリペプチドのみから
なり、これはヒト由来HBsAg（ｈ−HBsAg）の
グリコシル化されていないポリペプチドと一致す
るものである。また、ｈ−HBsAgと同じ22nｍ
の直径をもち、塩化セシウム溶液中での浮上密度
は、ｈ−HBsAgと同じである。 前述したＢ型肝炎ワクチンの生産上の難点を克
服するために、遺伝子操作の技術によりHBsAg
を大量に得、それを高度精製することによりワク
チンとする方法が確立されつつある。 ところが、遺伝子操作を経た菌よりHBsAgを
精製してＢ型肝炎ワクチンを製造する際には、原
料中に蛋白質を主とする菌体成分が夾雑してく
る。これらの夾雑物質は、従来の血漿由来
HBsAgの精製方法では充分に除去することがで
きない。 〔発明が解決しようとする問題点〕 そこで本発明者らは、かかる技術的背景の下に
鋭意研究を重ねた結果、遺伝子操作を経た菌体内
または菌体外に生産されたHBsAgを効率よく精
製する方法を見出し、本発明を完成した。 すなわち、本発明は、遺伝子操作により得られ
るHBsAgを比較的高濃度の無機塩存在下で担体
に特異的に吸着させることによりHBsAgを効率
よく精製する方法である。 本発明は、遺伝子操作により得られ、かつ夾雑
蛋白質を含む未精製のHBsAgを５〜25w／ｖ％
の無機塩存在下で疎水性基を有する担体に接触さ
せ、HBsAgを該担体に特異的に吸着させること
を特徴とするHBsAgの精製方法である。 〔問題点を解決するための手段及び作用〕 本発明において用いられるHBsAgは遺伝子操
作に由来して調製されたものであれば、特に限定
されない。従つて遺伝子操作を経てHBsAgを発
現する菌体（例えば、大腸菌、酵母、枯草菌な
ど）を、凍結融解法、ガラスビーズ法、高圧法、
超音波処理法、酵素処理法等の公知の方法で処理
して得られるHBsAg抽出画分、あるいはこの抽
出画分を各種分画法、吸着クロマトグラフイー、
アフイニテイクロマトグラフイー、ゲル過、密
度勾配遠心分離法、透析等の公知の方法で部分精
製した画分などを用いることができる。（特開昭
58−104887号、同59−48082号、特願昭59−
115189号等参照）。 本発明において用いられる無機塩としては、陰
イオン側から見て、硫酸塩、リン酸塩、塩酸塩な
どが、また陽イオン側から見て、アンモニウム
塩、ナトリウム塩、カリウム塩などが例示される
が、好適には硫酸アンモンニウム、硫酸ナトリウ
ム、塩化ナトリウム、あるいはリン酸塩の一種
（例えばリン酸１ナトリウム、リン酸１カリウム、
リン酸２ナトリウムなど）が用いられる。 添加濃度は５〜25W／Ｖ％が好適である。
5W／Ｖ％以下ではHBsAgが担体に吸着されず、
また25W／Ｖ％以上ではHBsAgとともに夾雑蛋
白質も吸着されてしまうのでいずれも不適当であ
る。 本発明において用いられる担体としては疎水性
基を有する固定化担体が挙げられる。固定化担体
としてはアミノ酸コポリマー、セルロース、アガ
ロース、デキストラン、オリアクリルアミド等が
用いられ、疎水性基としてはフエニルアラニン、
炭素数２〜８のアルキル基、フエニル基が用いら
れる。その固定化方法は公知の方法を用いればよ
い。一例を挙げれば、臭化シアンで活性化したセ
フアロース4Bとフエニルアラニン溶液を混合し、
室温で16時間反応させることにより固定化フエニ
ルアラニンを得ることができる。 このようにして得られた担体を用いることによ
り、収率良く、しかも高純度のHBsAgを得るこ
とができる。 本発明に係るHBsAgの吸着クロマトグラフイ
ーは以下の通りである。なお本発明においてクロ
マトグラフイーはカラム法、バツチ法のどちらを
用いても良い。 すなわち、粗HBsAg液に無機塩を５〜25w／
ｖ％になるように添加調整後、同濃度の無機塩溶
液で平衡化した担体と接触、吸着させる。その
後、２〜５倍量の上記無機塩溶液で洗つて、未吸
着の夾雑蛋白質を洗い流した後、５〜20v／ｖ％
（好ましくは10v／ｖ％）エタノールを含むPH６
〜８の緩衝液（例えばリン酸緩衝液）で吸着され
ているHBsAgを溶出する。溶出液は担体１ml当
たり１〜２ml程度用いられる。 このようにして得られる溶出画分は、公知の精
製方法を用いることにより、さらに高度に精製さ
れる。また、公知の精剤化技術を施すことにより
HBワクチンとして臨床に供することができる。 〔発明の効果〕 本方法で精製されたHBsAgは、SDS（Sodium
Dodecyl Sulfate）存在下でポリアクリルアミド
ゲル電気泳動を行う際に分子量25000の部分に単
一のバンドを示し、発熱性物質の混入もなく、ま
た動物に免疫すると強いHBs抗体を産生せしめ
る作用を有している。 本発明により得られるHBsAgは夾雑物質の極
めて少ない高品質のHBsAgである。従来の血漿
由来HBsAgの精製方法では充分に取り除くこと
ができなかつた菌体由来の夾雑蛋白質を、本発明
の精製方法により取り除くことができる。従つ
て、遺伝子操作を経て得られたHBsAgを用いて
も、従来品と同等の安全性に優れたHBワクチン
を製造することが可能である。 〔実施例〕 実施例 １ HBs抗原産生酵母１Kgを0.1Mリン酸緩衝液
（PH10.0）１に懸濁し、PH10に調整したのち、
超音波処理することによりHBsAgを抽出した。
抽出中に再度PHを10に調整した。超音波処理後
10000ｇで20分間遠心分離することにより沈殿を
除去し、抽出液を得た。 このようにして得た抽出液のPHを7.2に調整し
たのち、抽出液１当り硫安を70ｇ添加し、別途
調製されたフエニルアラニン−セフアロース4B
のカラムへ注入しHBs抗原を吸着させた。上記
と同じ濃度の硫安液で十分に洗浄し、不純物質を
除去した後、10v／ｖ％エタノール含有0.1Mリン
酸緩衝液（PH7.2）を用いてHBs抗原を溶出した。
溶出液中のHBs抗原の精製度は抽出液の280倍
〔RPHA法によりHBsAg比活性（RPHA titer／
A280）を測定〕で回収率は70％であつた。 尚フエニルアラニン−セフアローズ4Bの調製
法は臭化シアンで活性化したセフアローズ4Bに
フエニルアラニン溶液を加え、室温で16時間反応
させることにより行つた。 同様にして、抽出原液に各種無機塩を添加した
後、同濃度の無機塩溶液で平衡化したフエニルア
ラニン−セフアロース4Bカラムに注入し、充分
に洗浄後10v／ｖ％エタノール含有0.1Mリン酸緩
衝液（PH7.2）で溶出した。この溶出画分の
HBsAg比活性（RPHA Titer／A280）を測定し
た。結果を第１表に示す。
【表】
【表】
実施例 ２
実施例１と同様にして得た抽出液にエアロジル
を2w／ｖ％添加し、HBs抗原を吸着させ、更に
生理食塩水で洗浄した後、0.5M塩化ナトリウム
（PH9.3）でHBs抗原を溶出させた。 本溶出工程でのHBs抗原の回収率は100％であ
つた。この溶出液１に硫安を60ｇ添加し、実施
例と同様にフエニルアラニン−セフアローズ4B
にてHBs抗原を精製した。 溶出液中のHBs抗原の精製度はエアロジル溶
出液の52倍で、回収率は80％であつた。 実施例 ３ HBsAg生産酵母より得られる抽出原液に硫酸
アンモニウム（最終濃度6.8w／ｖ％）を添加し
た後、同濃度の無機塩溶液で平衡化した各種疎水
性基（リガンド）−セフアロース4Bカラムに注入
し、充分に洗浄後10v／ｖ％エタノール含有0.1M
リン酸緩衝液（PH8.0）で溶出した。この溶出画
分のHBsAg比活性（RPHA Titer／A280）を測
定した。結果を第２表に示す。
を2w／ｖ％添加し、HBs抗原を吸着させ、更に
生理食塩水で洗浄した後、0.5M塩化ナトリウム
（PH9.3）でHBs抗原を溶出させた。 本溶出工程でのHBs抗原の回収率は100％であ
つた。この溶出液１に硫安を60ｇ添加し、実施
例と同様にフエニルアラニン−セフアローズ4B
にてHBs抗原を精製した。 溶出液中のHBs抗原の精製度はエアロジル溶
出液の52倍で、回収率は80％であつた。 実施例 ３ HBsAg生産酵母より得られる抽出原液に硫酸
アンモニウム（最終濃度6.8w／ｖ％）を添加し
た後、同濃度の無機塩溶液で平衡化した各種疎水
性基（リガンド）−セフアロース4Bカラムに注入
し、充分に洗浄後10v／ｖ％エタノール含有0.1M
リン酸緩衝液（PH8.0）で溶出した。この溶出画
分のHBsAg比活性（RPHA Titer／A280）を測
定した。結果を第２表に示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 遺伝子操作により得られ、かつ夾雑蛋白質を
含む未精製のHBsAgを５〜25w／ｖ％の無機塩
存在下で疎水性基を有する担体に接触させ、
HBsAgを該担体に特異的に吸着させることを特
徴とするHBsAgの精製方法。 ２ 無機塩が、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウ
ム、塩化ナトリウム、あるいはリン酸塩の一種を
少なくとも含む特許請求の範囲第１項記載の
HBsAgの精製方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59224116A JPS61103895A (ja) | 1984-10-26 | 1984-10-26 | ＨＢｓＡｇの精製方法 |
| KR1019850007837A KR890001069B1 (ko) | 1984-10-26 | 1985-10-24 | B형 간염 항원의 정제방법 |
| ES548174A ES8605295A1 (es) | 1984-10-26 | 1985-10-24 | Procedimiento de depuracion de antigeno del tipo de la hepa-titis |
| CA000493846A CA1256042A (en) | 1984-10-26 | 1985-10-25 | Process for the purification of hbsag |
| DE8585113597T DE3579100D1 (de) | 1984-10-26 | 1985-10-25 | Verfahren zur reinigung von hbsag. |
| EP85113597A EP0179485B1 (en) | 1984-10-26 | 1985-10-25 | A process for the purification of hbsag |
| US06/792,081 US4694074A (en) | 1984-10-26 | 1985-10-28 | Process for the purification of HBsAg |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59224116A JPS61103895A (ja) | 1984-10-26 | 1984-10-26 | ＨＢｓＡｇの精製方法 |
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