JPH05501253A

JPH05501253A - 骨の治癒方法及び治癒用組成物

Info

Publication number: JPH05501253A
Application number: JP2514583A
Authority: JP
Inventors: ピッカート　ローレン　アール
Original assignee: プロサイト　コーポレーション
Priority date: 1989-10-13
Filing date: 1990-10-11
Publication date: 1993-03-11
Also published as: FI921609A7; CA2067505A1; DE69018084T2; DK0495877T3; NO921454L; ATE120203T1; FI921609L; EP0495877A1; WO1991005797A1; FI921609A0; KR927003079A; AU6605090A; US5059588A; AU648520B2; NO921454D0; DE69018084D1; ES2069750T3; EP0495877B1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】骨の治療方法及び治療用組成物技術分野本発明は、一般に骨の治癒に関するものであり、更に詳しくは、活性治療物質として、また溢血動物の骨及びその他の硬い組織の治癒を促進、加速するための薬剤の製造に使用するための金属−ペプチド錯体に関する。

発明の背景ヒト及びその他の温血動物の骨の治癒の機構及び進行はしばしば不完全であり、または許容し得ない程遅いペースで進行する。硬い組織（例えば、骨）の治癒の初期の機構は一般に三段階プロセスとして特徴づけることができる。

治癒の第一段階は、傷をきれいにし、治癒応答を開始するために適当な型の白血球の動員を伴う。この目的のために、生体は血流を損傷領域中に封鎖し、毒性のスーパーオキシド分子を分泌する好中球と称される白血球タイプをその領域に封鎖して細菌を死滅させ、一般炎症を誘発する。

第二段階は肉芽組織（即ち、コラーゲン及びその他の物質の弛んだ基質中の繊維芽細胞、マクロファージ、及び新しい血管の混合物）の形成を伴う。この治癒段階中に、スーパーオキシドイオンの生産及び炎症反応か抑制され、その間にマクロファージが侵入して組織砕片をきれいにして、マスト細胞及び繊維芽細胞が後に続（通路を開き、脈管形成因子を分泌して毛細血管内皮細胞を誘引する。

また、単核細胞が、繊維芽細胞活性化因子を分泌すると共にマクロファージに転化するのに関与する。マスト細胞は、新しい毛細血管の成長を増幅する“ヘルパー細胞”として利用できる。その他に、構造タンパク質コラーゲンをその領域に分泌する繊維芽細胞、その他の細胞の増殖がある。骨の構造物質を更に合成するために治癒領域中への軟骨細胞及び遺骨細胞の移行がある。

第三の最終段階は、新しい結合組織及び青成分の改造及び形成を伴う。

軟骨と骨の形成を誘導し得ると言われている幾つかの物質があったが、当業界では温血動物の骨及びその他の硬い組織の治癒を促進する組成物及び方法に対する要望がある。本発明はこのような組成物及び方法を提供し、更にその他の関連する利点を与える。

発明の開示簡単に言えば、本発明は活性治療物質として使用するための金属−ペプチド錯体及びその誘導体を提供する。加えて、溢血動物の冒された骨及びその他の硬い組織、例えば軟骨の治癒を促進する薬剤の製造に使用するための化合物が開示される。本発明の目的のため、“冒された骨”という用語は、骨の骨折、欠陥、外傷または手術による変性もしくは移植を含む。

更に詳しくは、本発明は冒された骨の治癒を促進し、冒された骨の肉芽組織の形成を誘導し、骨中の人工器具の移植の如き、冒された骨に関連する新しい骨の成長の形成を促進するための錯体を提供する。

その他に、溢血動物の骨及びその他の硬い組織の治癒を促進し、加速する金属− ペプチド錯体及びその誘導体を含む製薬組成物及び器具が開示される。

本明細書に記載された金属−ペプチド錯体は、グリシル−し−ヒスチジル−Ｌ− リシン：銅（Ｉ　Ｉ　Ｘ　Ｇ）ＩＬ−Ｃｕと称する）、Ｌ−リシル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン：銅（Ｉ　ＩＸＬＨＧ−Ｃｕと称する）、並びにＧＨＬ−Ｃｕ及びＬＨＧ−Ｃｕの種々の誘導体を含む。

ＧＨＬ−Ｃｕの誘導体は一般式：［グリシル−し−ヒスチジル−し−リシン−Ｃｏ−Ｒ］　：銅（ＩＩ）を有する。

（式中、Ｒは一間２部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルキル部分、６〜１２個の炭素原子を含むアリール部分、１−１８個の炭素原子を含むアルコキシ部分、及び６〜１２個の炭素原子を含むアリールオキシ部分からなる群から選ばれ、またはＲはＬ−プロリル−し−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ −バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−トリプトファン、または（グリシル）。

−り一トリブトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）。

上記の誘導体の他に、その他の化学修飾を行ってＧｌ（Ｌ誘導体技ヒ訛−Ｃｕ誘導体の生物活性を変えることができる。例えば、グリシンは、アラニン、セリン、及びバリンを含む種々のその他の小さいアミノ酸により置換されてもよい。更に、その分子の銅（ＩＩ）結合親和性は、グリシンの如きＮ−末端アミノ酸を添加してグリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リシンをグリシル−Ｌ−グリシル−し− ヒスチジを上記の誘導体に添加して相当するテトラペプチドをつくることができる。ヒスチジル残基中のイミダゾール基の銅（ＩＩ）に対する結合親和性は、３ −メチルヒスチジンによるヒスチジンの置換により、または別の炭素原子を鎖に付加することによりリシル側鎖を延長することにより変性し得る。同様に、分子をＧａ−Ｃｕ及びその誘導体に付加して三成分錯体を生成でき、例えばヒスチジン、またはその他のアミノ酸及びイミダゾール環化合物を付加してＧ）Ｌ−Ｃｕ −ヒスチジン錯体を生成することができる。

ＬＨＧ−Ｃｏの誘導体は一般式：［Ｌ−リシル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−〇〇−Ｒコ　：銅（ＩＩ）を有する。

（式中、Ｒは一■２部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルキル部分、６〜１２個の炭素原子を含むアリール部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルコキシ部分、及び６〜Ｉ２個の炭素原子を含むアリールオキシ部分からなる群から選ばれ、またはＲはＬ−プロリル−し−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ −バリル−し−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−トリプトファン、または（グリシル）。

−Ｌ−トリプトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）。

上記の誘導体の他に、その他の化学修飾を行ってＬＨＧ誘導体及ｆｆ１ＨＧ−Ｃｕ誘導体の生物活性を変えることができる。例えば、リシンは、アラニン、セリン、及びバリンを含む種々のその他の小さいアミノ酸により置換されてもよい。

更に、その分子の銅（ＩＩ）結合親和性は、グリシンの如きＮ−末端アミノ酸を添加してＬ−リシルーし一ヒスチジルーグリシンをグリシル−し−リシル−し− ヒスチジル−し−グリシンに変換することにより高めることができる。その他に、グリシンを上記の誘導体に添加して相当するテトラペプチドをつくることができる。ヒスチジル残基中のイミダゾール基の鋼（ＩＩ）に対する結合親和性は、ヒスチジンの３−メチルヒスチジンによる置換により、または別の炭素原子を鎖に付加することによりリシル側鎖を延長することにより変性し得る。同様に、分子ｔ−Ｇｌ（Ｌ−Ｃｕ及びその誘導体に添加して三成分錯体を生成でき、例えばヒスチジン、またはその他のアミノ酸及びイミダゾール環化合物を添加してＧ）Ｌ−Ｃｕ−ヒスチジン錯体を生成するｑとができる。

当業者は、銅をその他の金属で置換して本発明の方法に使用するための活性組成物を生じることができることを認める。

治癒を促進し、肉芽組織の形成を誘導し、本明細書に記載された冒された骨に関連する新しい骨の成長の形成を促進する方法は、一般に、所望の目的を達成するために治療有効量の上記の組成物の−一つを動物に投与することを含む。

本発明のその他の特徴は、以下の詳細な説明及び図面を参照した後に明らかになる。

図面の簡単な説明図１は本発明の代表的な組成物の使用による骨モデルの乾燥重量の増加をグラフで示す１、図２は本発明の代表的な組成物の使用による骨モデルの刺激をグラフで示す。

図３は本発明の代表的な組成物の使用による骨モデル中の血管形成の刺激をグラフで示す。

図４は本発明の代表的な組成物の使用による骨モデル中のコラーゲン合成の刺激をグラフで示す。

図５は未治療の骨欠陥及び本発明の代表的な組成物で治療された骨欠陥の治癒を示す三組の写真である。

図６は偽薬及び本発明の代表的な組成物で治療された骨欠陥の＝・対の顕微鏡写真である。

図７は図６より高い倍率の偽薬及び本発明の代表的な組成物で治療された骨欠陥の一対の顕微鏡写真である。

して使用でき、また温血動物の骨及びその他の硬い組織の治癒の促進に使用するのに適した薬剤の製造に使用し得る。これらの組成物を含む製薬製剤の適用は肉芽組織の形成及び骨の全治癒速度を加速するのに有益である。本発明の組成物は米国特許第４．７６０．０５１号、同第４．６６５．０５４号及び同第４．８１０．６９３号明細書に詳しく記載されており、これらは参考として本明細書に含まれる。

本発明に於いて、ｌ：Ｉ　、２：Ｉまたはそれ以下のＧＨＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ− Ｃｕまたはこれらの誘導体対銅の比を使用することができる。しかしながら、好ましい実施態様に於いて、最適の治癒はＧｌ（ＬまたはＬＨＧ分子当たり０．５〜０．９の銅原子の比で生じる。

ＧＨＬまたはＬＨＧに対し過剰のモル数の銅（＞１．００）は弛く結合され、骨の治癒を増進するよりも抑制することがある。

Ｇ）ＩＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ−Ｃｕ及びこれらの誘導体を含む製薬製剤は、液体、ローション、クリーム、またはゲルの形態であってもよい。また、製薬製剤は、生物学上許される物質、例えば、ポリアクリル酸、ヒアルロン酸、コラーゲン、サンゴ、またはヒドロキシアパタイトと混合されたＧＨＩ、−Ｃｕ、　Ｌ）ｔＧ −Ｃｕ及びこれらの誘導体からなってもよい。これらは、治癒プロセス中に骨折した骨または外傷を受けた骨を固定化し、接続するのに使用される認められた型の外科用器具中に順に混入し得る。

例えば、このような外科用器具は、骨折部分を一緒に保持するのに使用されるピン及びプレート並びに骨中に適所に保持されることを必要とする人工接合材（例えば、ヒップ）を含む。こうして、ＧＨＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ−Ｃｕ及びこれらの誘導体の適用は、器具と骨の界面で使用し得る。これらの組成物は器具の初期の配置中に使用でき、または器具と骨の付着がその後弛んだ場合に使用し得る。また、これらの生物学上許される物質の種々の金属イオン塩、例えばヒアルロン酸ナトリウムが使用し得る。

本発明の製薬製剤中の有効投薬量は約０４０５重量％〜約５重１％のＧＨ＋、− Ｃｕ、　ＬＨＧ−Ｃｕ及びこれらの誘導体を含む。好ましい範囲は約０．１重量％〜１．Ｑ重量％である。

本発明の別の実施態様に於いて、製薬製剤は約０．５重量％〜約５重Ｉ％の乳化剤または表面活性剤を含んでもよい。ノニオン系表面活性剤が本発明の目的に好ましい。好適なノニオン系表面活性剤の例は、ノニルフェノキシポリエトキシエタノール（ノンオキシツール（Ｎｏｎｏｘｙｎｏ　ｌ　）−９）、ポリオキシエチレンオレイルエーテル（ブリジ（Ｂｒｉｊ）−９７）、種々のポリオキシエチレンエーテル（トリトン（Ｔｒｉｔ−ｏｎｓ））　、及び種々の分子量のエチレンオキサイドとプロピレンオキサイドのブロックコポリマー（例えば、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）６８）である。

また、製薬製剤は約１重量％〜約ｌＯ重量％の成る種のイオン系表面活性剤を含んでもよい。これらのイオン系表面活性剤は、ノニオン系表面活性剤に加えて、またはそれに代えて使用し得る。イオン系表面活性剤の例はラウリル硫酸ナトリカム泣び同様の化合物を含む。

乳化剤または表面活性剤に加えて、またはこれらに代えて、製薬製剤は約１重量％〜約２０重量％の浸透促進剤を含んでもよい、、浸透促進剤の例はジメチルスルホキシド（１）ＭＳＯ）及び尿素である。骨に適用される液体製薬製剤の場合には、ジメチルスルホキシドｔＤＭｓｏ）の如き浸透促進剤の濃度は製薬製剤の約３０重電％〜約８０重量０６を構成し得る。３製薬製剤の残りは不活性な生理学−Ｌ許される担体を含む７．この担体は、それが細菌発育■１止食塩水（０，９ｍｇ、／’ｍｌのペンシルアルコールを含む食塩水）、及びワセリン系クリーム（ＵＳＰ親水性軟膏及び同様のクリー仏、例えば、ユニヘース（ｔｌｎｉｂ−ａｓｐ）、バーニークー１′〜ヒス（Ｔ”ａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓｌ）＠含むが１、：、ス′）らに限定されない、−１下記の代表的な製薬製剤が本発明の方法に使用するのに適する、製薬製剤Ａ：ＧＩＩｌ、、−Ｃｕ　０．４％（−・／Ｗ）トド「用シルエチルセルｏ−Ｘ　３．０％プロピ１ノングリ＝１〜ル　２０．０％、ノンオキシツール−９３，０９６ラウーノノＬ硫酸ｆ＋−リウム　２．０％ベンジルアルコール　２．０５０ハのリン酸緩衝液　６９゜６％製薬製剤Ｂ：ＧＨＬ−Ｃｕ　０．４％（ｗ／ｗ）ＧＵ−Ｃｕ　Ｏ，４％（ｗ／い細菌発育阻止食塩水　３０．０ｍ１ＧＨＬ−Ｃｕ　Ｏ，４％（ｗ／ｖ）ヒアルロン酸ナトリウム　２．０％滅菌水　９７．６％製薬製剤ＥＧＨＬ−Ｃｕ　０．４％（ｗ／ｖ）ヒドロキシプロピルセルロース　２，０％滅菌水　７４４６％ヒトロキシグロピルセルロース　２０°ｔ１′ノニノオキシツール−９３，０％滅菌水　９４．６％製薬製剤Ｇ・Ｇ１１１、−Ｃｕ　Ｏ，４Ｘ（ｗ／ｗ）度を加速するのに充分な量が有効であり、治療は治癒の進行が指示するようにし植されて、骨の治癒がめられる領域にＧＨＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ−Ｃｕ及びこれらの誘導体の源を直接に与える。

同様に、本発明の方法はまたその他の硬い組織、例えば軟骨の治療、または歯の修復に使用し得る。

上記のように、本発明の組成物はＧＨＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ−Ｃｕまたはこれらの誘導体を含む。

ＧＨＬ−Ｃｕ誘導体の合成に於ける全化学反応は、次式のように表し得る。

ＧＨＬ−ＯＨ＋Ｒ−Ｈ−−−＞ＧＨＬ−Ｒ＋Ｈ，０その反応は、リジンとその他の二種のアミノ酸を組み合わせてＧ）ｆＬとする前にＲ基をアミノ酸リジンに付加することにより最も容易に行われる。ＧＨＬ−Ｒの生成及び単離後に、銅（ＩＩ）がその分子に錯化されて生物活性錯体を生成する。

ＧＡ−Ｃｕの更に脂質親和性の誘導体を生成するための全反応は、下記の式のように表し得る。

１辺シン−〇〇　＋Ｒ−Ｈ−＞リシン−Ｒ＋Ｈ２Ｏ２辺シン−Ｒ＋ブロックされたし一ヒスチジンー・−〉ブロックされたし一ヒスチジンーし一すシンーＲ３）ブロックされたし一ヒスチジンーし一すシンーＲ−−＞部分ブロックされたし一ヒスチジンーし一すシンーＲ４）部分ブロックされたし一ヒスチジンーし一すシンーＲ＋ブロックされたグリシン−・・−〉ブロックされたグリシル−し−ヒスチジン−し−リシン−Ｒ５）ブロックされたグリシル−し−ヒスチジン−し−リシン−Ｒ−−一・〉グリシル −し−ヒスチジン−し−リシン−Ｒ６）グリシル−し−ヒスチジン−し−リシン −Ｒ十銅（ＩＩ）−−−−・−〉グリシル−し−ヒスチジンルーリシン−Ｒ：銅（ＩＩ）ＬＨＧ−Ｃｕの更に脂質親和性の誘導体を生成するための全反応は、リシン−ＯＨに代えてグリシン−ＯＨが初期の反応成分であり、ブロックされたりシンが工程４でブロックされたグリシンに代えて使用される以外は、ＧＨＬ−Ｃｕに関して上記されたものと同じである。

以下の実施例を要約すると、実施例１はグリシル−し−ヒスチジル−し−リシンベンジルエステル、銅（ＴＩ）の合成を示す。実施例２はグリシルルーヒスチジル−し−リシンｎ−オクチルエステル：銅（ＩＩ）の合成を示す。実施例３は、（Ａ）グリシル−し−ヒスチジル−し−リジンｎ−ステアリルエステル：銅（ＩＩ）の合成、及び（Ｂ）別の操作によるその合成を示す。いずれかの操作に基いて、当業者はｎ−パルミチルアルコール（１６個の炭素）に代えてｎ−ステアリルアルコール（１８個の炭素）を使用してグリシル−し−ヒスチジル−し−リシンｎ−ステアリルエステル：銅（ＩＩ）を生成し得る。実施例４は、（Ａ）固相合成によるグリシル−し−ヒスチジル−し−リシル−し−プロリル−し−バリル −Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン：銅（ＩＩ）及びグリシル−し＝ヒスチジルーし一リシルーし一バリルーＬ−フェニルアラニルーＬ−バリン：銅（ＩＩ）の合成、並びに（Ｂ）溶液合成によるグリシル−し−ヒスチジルルーリシル−し −バリルルーフェニルアラニル−Ｌ−バリンの調製を示す。実施例７は本発明のペプチドへの銅の添加を教示する。実施例８は本発明の代表的な組成物の使用による骨モデルに於ける肉芽組織の形成を促進する際のＧ）ＩＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ −Ｃｕ及びこれらの誘導体の有効性を示す。実施例９及び１１は骨の治癒に於けるＧＨＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ−Ｃｕ及びこれらの誘導体を含む製薬製剤の使用効果を示す。

以下の実施例に於いて、本発明の特別な実施態様が説明の目的のために本明細書に記載されるが、本発明の精神及び範囲から逸脱しないで種々の改良がなし得ることが理解される。

実施例動物に使用するためのＧＨＬ　、　ＬＨＧ　、　ＧＨＬ−Ｃｕ及ＲＩＧ−Ｃｕの調製ＧＨＬ及ＵＨＧを、グラス中で蒸留水（５０■／ｍ１）に溶解し、次いで３ ℃で１時間にわたって２０．０００ｘｇで遠心分離することにより精製した。これは合成操作から残っている水に難溶性の物質を除去する。上澄みを凍結乾燥し、次いで０．５％の酢酸の溶媒中で３℃でセファデックス（Ｓｅｔ）ｈａｄｅｘ）Ｇ−１０カラムに通す。前の溶媒の後に溶離する生ピーク（２５４ｎｏに於ける吸収により監視される）を凍結乾燥して乾固する。精製したＧ）ＩＩ、またはＬＨＧを等モル量の酢酸第二銅及び水酸化ナトリウムと合わせることによりＧＨＬ−Ｃｕ及汎ＨＧ−Ｃｕを調製し、次いで発表された方法（Ｐｅｒｋｉｎｓら、Ｉｎｏｒｇ、　Ｃｈｉｉ　Ａｃｔａ　６７：９３−９９．１９８４）によりエタノール添加及び低温の使用により沈殿させた。

薬品の源以下の実施例に使用した薬品及びペプチド中間体は下記の供給業者から購入し得る。シグマ・ケミカル社（ミズーリイ州、セントルイス）、ペニンスラ・ラボラトリイズ社（カリフォルニア州、サンカルロス）、アルドリッジ・ケミカル社（ウィスコンシン州、ミルウォーキイ）、ベガ・バイオケミカルズ社（アリシナ州、タクソン）、ピアス・ケミカル社（イリノイ州、ロックフォード）、リサーチ・バイオケミカルズ社（オハイオ州、クレーブランド）、パン・ウォーターズ・アンド・ロジャース社（カリフォルニア州、サウスサンフランシスコ）、ベーケム社（カリフォルニア州、トランス）。

ンー酢酸エチルに溶解し、カップリング剤としてジシクロへキシルカルボジイミドを使用してＮ”−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ１ｍ−ベンジルオキシカルボニルルーヒスチジンにカップリングさせた。重炭酸ナトリウム（１０％）を添加し、生成物を有機層に抽出した。生成物、Ｎ“−ｔ−ブチルオキシカルボニル −Ｎ１ｍ−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎｏ−ベンジルオキシカルボニル−し−リシンベンジルエステルを溶液から結晶化させた。ブロックされたジペプチドのＮ−末端基を、ジクロロメタン中５０％のトリフルオロ酢酸中で３０分間攪拌することにより除去し、次いで減圧で蒸発させた。生成物、Ｎ　Ｉｍ−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎ＠−ベンジルオキシカルボニル−し−リシンベンジルエステルをカップリング剤としてジシクロへキシルカルボジイミドを使用してリシンにカップリングさせた。ブロッキング基を氷酢酸中で１０％のパラジウム／カーボンを使用して接触水素化により除去した。凍結乾燥後に、生成物、グリシルル−ヒスチジル−し一リシンベンジルエステルを水に溶解し、ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ　）５０Ｘ−４陽イオン交換樹脂によるイオン交換クロマトグラフィー及び０．１Ｍの水酸化アンモニウムによる溶離により精製し、溶離液を直ちに酢酸で中和した。更に中性ｐＨで陰イオン交換カラムバイオレックス（Ｂ　１ｏＲｅｘ　）６３に通して、遊離カルボン酸基を有する分解生成物を除去した。

グリシル−し−ヒスチジル−し−リシンベンジルエステルを水に溶解し、等モルの酢酸銅を添加した。ｐＨを水酸化ナトリウムで中性まで上げた。その溶液を３ ℃で１時間にわたって２０．０００Ｘｇで遠心分離して水難溶性物質を除去した。上澄みを凍結乾燥してグリシル−し−ヒスチジル−し−リシンベンジルエステル：銅（ＩＩ）を得た。

Ｎｏ−ベンジルオキシカルボニル−し−リジン、ｎ−オクタツール、ベンゼン、及びｐ−トルエンスルホン酸−水和物の混合物を、ディーン・スタークトラップを使用して一夜還流させて水を除去した。冷却後、乾燥エチルエーテルを添加した。

次いで、その溶液を０℃で一夜にわたって沈殿させた。沈殿した固体の一部を炭酸カリウム溶液５０ｍ１及びジクロロメタン５０ｍ１に添加した。抽出後、層を分離し、有機相を水洗し、食塩水で洗浄し、次いで無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。

濾過し、蒸発させ、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製してｎ−オクチルＮ°−ベンジルオキシカルボニル−し−リシネートを得た。その生成物をテトラヒドロフランに溶解し、Ｎ’−１−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−Ｎ　’ ″−ベンジルオキシカルボニルー一ヒスチジン、イソブチルクロロホルメート及びトメチルモルホリンと混合した。蒸発後、水及び酢酸エチルを添加した。その生成物を有機相に抽出し、これを無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過し、蒸発させ、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製してｎ−オクチルＮ ”−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎｌｈ″−ベンジルオキシカルボニル−し− ヒスチジル−Ｎ１−ベンジルオキシカルボニル−し−リシネートを得た。

その生成物をジクロロメタン中の５θ％のトリフルオロ酢酸に３０分間で溶解し、次いで蒸発させて、ｎ−オクチルＮ１１ｌ−ベンジルオキシカルボニル−し− ヒスチジル−Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し−リシネートを生成した。これをテトラヒドロフランに溶解し、イソブチルクロロホルメート、Ｎ−メチルモルホリン及びベンジルオキシカルボニル−グリシンを添加してｎ−オクチルベンジルオキシカルボニルグリシンＮ’″−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎ′″−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−リシネートを生成した。これを氷酢酸に溶解し、−夜にわたって水素化した。

得られたクリンル士−ヒスチジルＩ、−リジンのｎ−オクチルエステルを、等モル量の二酢酸鋼の添加により銅錯体に変換した。ｐＨを水酸化すトリウムで中性まで上げた。その溶液を３℃で１時間にわた。って２０．　ＯｆｌＯｘｇて遠心分離して水難溶性物質を除去した１、−ヒ澄みを凍結乾燥してグルシル−し−ヒスチジル−Ｌ−リシンローオクチルエステル　鋼（ＩＩ）を得た６、Ｎａ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−リジン、ｎ−ステアリルアルコール、ベンセン、及びｐ−１−ルエンスルホン酸−水和物の混合物を、ディージ・スタークトラップを使用して一夜還流させて水を除去した１、冷却後、乾燥プロピルエーテルを添加して全容量を６倍に増加した。その溶液を０°Ｃで一夜にわたって沈殿させ、濾過した。濾液の一一部を炭酸カリウム溶液５０田１及びジクｌニアｏメタン５０ｍ１に添加した。抽出後、層を分離し、有機相を水洗し、食塩水で洗浄し、次いで無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過し、蒸発させ、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製してｎ−ステアリルＮ０−ペンジルオキシカルボニルーし一すシネートを得た３、その生成物をテトラヒドロフランに溶解し、Ｎ′″−１−プチルオギン力ルボニルーＮ”″−ベンジルオキシカルボニルー１．−ヒスチジン及びイソブチルクロロホルメート及びＮ−メチルモルホリンと混合した。蒸発後、水及び酢酸プロピルを添加し、その生成物を有機相に抽出し、次いで無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過し、蒸発させ、フランシュカラムクロマトグラフィーにより精製してｎ−ステアリルＮ”−１−ブチルオキシカルボニル−Ｎ１町ベンンルオキシ力ルボニルーＬ−ヒスチジル−Ｎａ− ベンジルオキシカルボニル−１２−リシネートを得た。

その生成物をジクロロメタン中の５０％のトリフルオロ酢酸に３０分間で溶解し、次いで蒸発させて、ｎ−ステアリルＮ”−ペンジルオキシカルボニ／ｌ用、− ヒスチジル−Ｎ６−ペンジルオキシカルボニルーし一すシネートを生成し、これをテトラヒドロフラン、イソブチルクロロホルメート、Ｎ−メチルモルホリン及びベンノルオキシカルボニル−グリシンに溶解してｎ−ステアリルベ〕／ンルオキシー力ルポニルグリシルＮ″−ペンンルオキシカルボニルーＬ−ヒスチ／ル− Ｎ′−ヘンンルオキシカルボニルーＬ−リシネートを生成した。その生成物をジクロロメタン中５０％のトリフルオロ酢酸に３０分間で溶解し、次いで蒸発させて、ローステアリルエステルグリシル−Ｉ、−ヒスチノルーＩ７−リジンを生成した。

得られた分子、グリシル−１，−ヒスチジル−し−リシンｎ−ステアリルエステルを、等モル量の二酢酸銅の添加により銅錯体に変換した。ｐＨを水酸化ナトリウムで中性まで上げて動物研究に有益な生成物を得た。

ｎ−ステアリルアルコールをＢ−パルミチルアルコールに置換することにより、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リシンｎ一式ルミチルエステルを同様にして合成し得る。

Ｎａ−ベンジルオキシカルボニル−し−リジン、ｎ−ステアリルアルコール、ｐ −トルエンスルホン酸−水和物、及びベンゼンを、ディージ・スタークトラップを使用して一緒に還流させて発生する水を共沸により除去した。室温に冷却し、次いで乾燥エチルエーテルを添加した後、ｎ−ステアリルＮ°−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−リシネートＩ）−トルエンスルホン酸塩を濾過により回収し、２Ｍの重炭酸カリウム水溶液で処理し、ジクロロメタンで抽出した１、蒸発させて遊離アミンを得、これを乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に再度溶解し、− １５℃で乾燥Ｔ中のＮ’−１−ブチルオキシカルボニル−Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジン、Ｎ−メチルモルホリン、及びイソブチルクロロホルメートの攪拌溶液に添加した。

得られる充分に保護されたジペプチドエステルを室温で１．／１のトリフルオロ酢酸／ンクロロメタンで処理し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で中和し、酢酸エチルで抽出する、っ蒸発させて部分脱ブロックされたジペプチドを得、これを乾燥ＴＩ（Ｆに再度溶解し、−１５℃で乾燥ＴＩ（Ｆ中のベンジルオキシカルボニル−グリシン、Ｎ−メチルモルホリン及びイソブチルクロロホルメートの攪拌溶液に添加する。生成した充分に保護されたトリペプチドエステルを氷酢酸中で室温でＰｄ−Ｃ触媒の存在下で水素ガスによる処理により完全に脱ブロックする。

濾過し、蒸発させ、微結晶性セルロースカラムで精製し、続いて凍結乾燥して所望のトリペプチドをその三酢酸塩として得た。

得られた分子、グリシル−し−ヒスチジル士−リンンローステアリルエステルを等モル量の一酢酸銅の添加により銅錯体に変換した。ｐＨを水酸化すトリウムて中性まで上げて動物研究に有益な生成物を得た。

ｎ−ステアリルアルコールをｎ−パルミチルアルコールに置換することにより、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−１，−リシンｎ−パルミチルエステルを同様にして合成し得る。

アラニル−Ｌ−バリン　銅（＋１）及びグリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リシル −し−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン　銅（ＩＩ）の固相合成ペプチド分野で普通の通常の固相法（Ｊ、　５ｔｅｉｖａｒｔ及びＪ、　Ｙｏｕｎｇ、　Ｓｏｌ　ｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐ−ｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　、　１９８４）によりこれらのペプチドを合成する。

面憎に言えば、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−０−樹脂を、反応試薬としてジシクロへキシルカルボジイミドを使用してその他のブロックされたアミノ酸で逐次カップリングした。保護アミノ酸、固相合成用樹脂、及びカップリング剤は、カリフォルニア州カルロスにあるペニンスラ・ラボラトリイズから得た。所望のペプチドを得るため、ブロックされたアミノ酸を逐次添加する。３７ノ化水素を使用して最終ペプチドを脱ブ［フックする。最終ペプチドを０．５％の酢酸（＝溶解し、セファデックスＧ−１５カラム（］７−マシア）に通すことにより精製する。っ等モル量の酢酸第二銅を添加し、続いて凍結乾燥して活性分子を生成する。、側鎖保護のためにドブ升ルオキシ力ルボニル保護基及びカップリングのｔ二めの混合酸無水物法を使用する通常の溶液相法ｌ、二よりマルチグラム（ｍｌＪｌｔｉ−ｇｒ門）量のグリシル−し−ヒスチジル−し−リンルーＩ、−バリルーＬ−フェニルアラニル−１，−パリ〉を合成し／、−〇簡単に言えば、１．−バＩｌンベンジルエステルｐ−スルホン酸塩を、カップリング剤としてイソブチルクロロホルｌ −４及び唱メチルモルポリンを使用してｔ−ブチルオキシカルボニル−し一フＬニルアラニ′／とカップ１にノブした（−２０℃で２時間、次いで周囲温度で１時＆’Ｊ）。次いでジペプチドのｔ−ブチルオキシカルボニル保護基をジクロロメタン中３０％のトリフルオロ酢酸（′：より室温で３０分間で除去した。、所望のペプチドを得るため、ブロックされたアミノ酸（ｔ−ブチルオキシカルボニル−１、−バリン、Ｎ”　−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ”−ヘンノルオキシカルボニル−し−リシン、Ｎ　’−ｔ−プチルオキシカルボニルーＮ’−ヘンジルオキシカルボニル−１４−ヒスチジン、ヘンノルオキシカルボニルーグリシン）を逐次添加した。最終ペプチドを水から凍結乾燥し、Ｃ−１８逆相カラムによる液体クロマトグラフィーにより精製して所望のへキサペプチドをマルチグラム量で生成した。

実施例５Ｌ−リシル−し−ヒスチ些ソヒ’）”　しとダハ１成α Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ−−ヘンシルオキシカルボニル−し−ヒスチジンをテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解し、１当量のＮ−メチルモルホリンで中和した。次いでそれを、イソブチルクロロホルメート及びトメチルモルホリンを使用してヘンノルグリシネートｐ−トルエンスルホン酸塩とカップリングした。−２０℃で２時間、周囲温度で更に１時間後に、その反応を２Ｎの重炭酸カリウム水溶液で停止した。その生成物を酢酸エチルで抽出（７、最初にＩＭのクエン酸水溶液で洗浄ンジルオキシカルボニルル−ヒスチノルーグリシネ−１・を得た。

この生成物を無水のメタノール性塩化水素（０℃で飽和）に５分間で溶解し、続いて減圧下で溶媒を除去し、ベンジルＮ　Ｉｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ −ヒンルーし一ヒスチジルーグ＋１シネートを生成した（−２０℃で３時間、次いで周囲温度で１時間ン。次いでこの生成物をメタノール２／酢酸Ｃ１：１（ｖ／ｖ）］に溶解し、１０％のＰｄ−Ｃ触媒の存在ドで一夜にわたって水素化した。得られたＬ−男シル佳−ヒスチジルーグリシ〕／を水から数回凍結乾燥し、次い″ｃｃ−１８逆相カラムによる液体クロマトグラフィーにより精製（−７で所望のトリベブｆド三酢酸塩を泡状の白色の固体として得た。

ンの合成 α窒素のためのｔ−ブチルオキシカルボニル保護基、側鎖保護のためのベンジルオキシカルボニル基及びカップリングのための混合酸無水物法を使用する通常の溶液相法によりマルチグラム量のし一リシルーし一ヒスチジルーグリシルーし一バリルーＬ−フェニルアラニルーＬ−バリンを合成した。簡単に言えば、Ｌ−バリンベンジルエステルｐ−スルホン酸塩を、カップリング剤としてイソブチルクロロポルメート及びトメチルモルホリンを使用してｔ−ブチルオキシカルボニル −し−フェニルアラニンとカップリングした（−２０℃で２時間、次いで周囲温度で１時間）。次いでジペプチドのｔ−ブチルオキシカルボニル保護基をジクロロメタン中３０％のトリフルオロ酢酸により室温で３０分間で除去した。所望のペプチドを得るため、ブロックボニル−し−ヒスチジン、Ｎ、Ｎ−ジベンジルオキシカルボニル−し−リジン）を逐次添加した。氷酢酸中で５日間にわたって１０％のＰｄ−Ｃ触媒の存在下で水素ガスを使用して最終ペプチドを完全に脱保護した。最終ペプチドを水から凍結乾燥し、Ｃ−１８逆相カラムによる液体クロマトグラフィーにより精製して所望のへキサペプチドをマルチグラム量で生成した。

上記の系統的な合成は、最小の精製でもって高純度のマルチグラム量の所望の生成物を与える点で幾つかの固相法よりも利点を与えた。

必要とされるモル量の超純粋な塩化第二銅（例えば、ニュージャーシイにあるケミカル・グイナミクス社から入手し得るウルトラログ（Ｕｌ　ｔｒａｌｏｇ）９９．９９９％）を蒸留水中のグリシル−し−ヒスチジル−し−リシン、もしくはリシル−し−ヒスチジル−Ｌ−グリシンまたはこれらの誘導体の溶液に添加することにより精ＥＨＬ−ＣＬ１．　ＬＨＧ−Ｃｕ及びこれらの誘導体をあらゆるモル比で調製し得る。塩化第二銅の添加後に、溶液のｐＨをほぼ中性に調節する。

生成した沈殿は当業界で既知の方法により遠心分離及び濾過により除去し得る。

実施例８ラットに移植した骨モデルに於ける肉芽組織の形成に関するＧＨＬ−Ｃｕ、　Ｉ、ＨＧ−Ｃｕ及びこれらの誘導体の効果ラット中のステンレス鋼チャンバの皮下移植は骨の治癒を監視するための再現可能なモデルを与える。このモデルは骨折部分または骨のその他の型の外傷に見られる肉芽組織の形成の初期のイベントを多くの方法で模擬する。これらのチャンバの移植は骨の治癒に関与する一連の段階を反映する一連の応答−フィブリンクロット形成、白血球の浸潤、コラーゲン合成、及び新しい血管形成を誘発する。

そのアッセイはラットの背部正中線の夫々の側の二つのステンレス鋼チャンバ（テフロン末端キャップを備えたｌＸ２．５ｃｍの円筒形の３１２ＳＳ　、２０メツシユ）の移植を伴う。チャンバの封入を可能にする１週間後に、夫々のラットの−っのチャンバにＧＡ−Ｃｕのｌ０ｍｇ／ｍｌ溶液（１，２＋ｎｌを注入し、他のチャンバに同容量の食塩水を注入した。注入を５日目、７日目、８日目、１２日目、１３日目、１５日目及び１９日目に行った。チャンバを１５日目及び２９日目に取り出した。

チャンバを凍結乾燥し、内部の内容物を生化学分析のために取り出した。調べた生化学パラメーターは、全乾燥重量、タンパク質含量、血管形成（アルカリ性ホスファターゼ活性）、及びコラーゲン含量（酸加水分解後のヒドロキシプロリン含量）を含む。対照と比較して本発明の化合物を使用した場合に試験した全ての生化学パラメーターで有意な増加が見られた。

タンパク質含量は、標準物質としてウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を使用してロウリイの方法（Ｌｏｗｒｙら、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｔｎ、　１９３　：２６５−２７５．１９５１　）により測定した。血管形成は、基質としてｐ−ニトロフェニルホスフェートを使用してアルカリ性ホスファターゼ活性の量を測定することによりめた（Ｌｙｌｅｓら、Ｃ，Ｂｉｏｃｈｅｔ　Ｐｈａｒｍ、　３３：２５６９−２５７４．１９８４）。コラーゲン含量は、酸加水分解及びコラーゲンに特異的なアミノ酸であるヒドロキシプロリンに関する比色アッセイ（Ｂｅｒｇｍａｎら、Ｒ，ＣＩ　ｉｎ、　Ｃｈｉｍ、Ａｃｔａ２７：　３４７−３４９．１９７０）により測定した。

全タンパク質はチャンバ当たりのタンパク質の■数（ＢＳＡに対して）として表され、血管形成はチャンバ当たりのアルカリ性ホスファターゼ（ＡＰ）単位（この場合、１単位；１分当たりの４０５ｎｍに於ける吸光度のｌ、ｏの増加を生じるホモジネートの量）として表され、ヒドロキシプロリン（ｌ（Ｐ、コラ−ケン含量）はチャンバ当たりのＨＰのμｇ数として表される。対照データとの比較は、夫々のパラメーターに関して治療／対照（Ｔ／Ｃ）の比を測定することにより行われる。

データの要約を表１に示す。比較データを示すグラフが図１〜図４として含まれる。チャンバ乾燥重量及び全タンパク質含量の相違は１５日目及び２９日目の両方で明らかであり、最高のＴ／Ｃ比は１５日目で約２であった。対照的に、血管形成またはコラーゲン含量の相違は１５日目に検出できなかった。しかしながら、２９日目までに、血管形成（Ｔ／Ｃ＝３．２）及びチャンバのコラーゲン（Ｔ／Ｃ＝１．９）含量の両方で有意差があった。

表１骨の治癒モデルに於ける肉芽組織形成に関するＧＨＬ−Ｃｕの効果日数　乾燥重量　タンパク質　コラーゲン　血管形成■　■／チャンバ　μｇＨＰ／チャンバ　ＡＰ単位／チャンバ対照　４２±１４３４±９１８３±２１６　６．２±１．８日目Ｌ−Ｃｕ　９２±４６６９±３２　２４３±２１５　６．５±３．２Ｔ／Ｃ＝　［２，２］［２，０］　［１，１］　［１，０］対照　９５±３２５６± １８９７８±６４４　６．４±５．０日目Ｌ−Ｃｕ　１６５±３８７７±１９　１８４９　＋５４６　２０．３±１０．０Ｔ／Ｃ＝　［１，７］　［１，４つ　［１，９］　［３，２］ＧＨＬ−Ｃｕ、　ＬＨＧ−Ｃｕ及びこれらの誘導体は骨の治癒活性を示した。一つの代表的な研究に於いて、体重的３５０〜４００■の雄のラットを骨に孔を開け、次いでこれらｋｇ）で鎮静した。毛髪を左上部の後肢から切取り、その領域を無菌方式で準備した。＃】５ブレードを使用して、腸骨の隆線の直ぐ下に延びるほぼ大腿骨の位置に続く上部の肢の外側表面で２ｃｍの切開を行った。犬腿筋膜張筋を露出し、筋肉フィルターに平行に切開した（１ｃｍの切開）。筋肉を注意して退縮させて大腿骨の上にある外側の床筋を露出した。大腿骨への接近を、この筋肉の切開及び退縮後に終了した。これは骨の外側及び腹側の表面を１ｃｍ露出させた。骨膜エレベータ−を使用して、大腿骨の表面から骨膜を取り除いた。この時点で、出血は殆ど見られなかった。直径１ａｎの切開バーをフィツトしたドレメル（Ｄｒｅｍｅｌ　）ドリルを使用して、大腿骨に約０．７５ＤＤの深さまで孔を開けた。骨髄侵入の稀な場合を除いて出血は殆ど見られなかった。その領域を濯注し、止血した。この時点で、本発明の組成物の製薬製剤を、露出した骨の表面に適用した。クローミック縫合糸を使用して筋肉を層中で閉じ、皮膚をステンレス鋼製の傷クリップで閉じた。筋肉の構造及び機能は手術後に無傷であり、病的状態は手術操作と殆ど関連しなかった。

７日〜１４日後に、動物を死亡させ、それらの大腿骨を取り出した。骨の成長の形跡を、ワイルド（Ｗｉｌｄ）解剖顕微鏡を使用して欠陥の肉眼の視覚化、及びその後の組織学的調製（カルシウム除去、パラフィン包埋、及びトリクローム染色）により測定した。

骨の治癒プロセスを加速するために製薬製剤Ｂを使用して手術の１２〜１４日後の結果を表２に要約する。対照は治療しない骨からなっていた。目視検査は軟質物質または適度に軟質の物質による生じた欠陥の充填のないこと（−）または充填（＋）を明らかにした。顕微鏡検査（ミクロと称する）は欠陥の充填率を明らか動物＃　Ｒｘ　目視検査（＋／−）　ミクロ（充填率、％）１０３１１　１　＋（軟質）　１００１０３１２　１　−　読み取り不能１０３１３　２　−　読み取り不能１０３１４　２　−　読み取り不能１０３１５　１　＋（軟質）８０１０３１６　２　＋（適度に軟質）２０１０３１７　１　−　読み取り不能１０３４６　１　＋（適度に軟質）１００治療（Ｒｘ）Ｉ−製薬製剤Ｂ２＝対照、未治療骨髄がドリルビットにより入れられたものは、生じた欠陥中に軟質〜適度に軟質の組織を発達させたことが明らかであった（１匹／処理グループ）。組織は治療した骨中で更に頻繁に観察された。

製薬ゲル中の本発明の化合物による骨の治癒第二の研究に於いて、欠陥を骨中に生じ、実施例９に記載したのと同じ方法で製薬製剤Ｅを露出した骨に適用した。

７日目及び１４４日目結果を表３に示す。

表３動物＃　Ｒｘ　日数　目視検査（＋／−）　ミクロ（充填率、％）＋０４５８　２　１４　＋（軟質）５０１０４５９　２　１４　＋　２５治療（Ｒｘ）Ｉ−偽薬ゲル２＝製薬製剤Ｅ治療した骨の欠陥及び偽薬ゲルで治療した骨の欠陥の目視例を図５に示す。７日目の二つの骨を図５Ａに示し、治療した骨を左側に示し、対照を右側に示す。

図５Ｃは偽薬ゲルで治療した骨の接写写真であり、図５Ｂは骨の石灰化のインフラックス及び肉芽組織を示すＧＨＬ−Ｃｕで治療した骨の写真である。ＧＨＬ− Ｃｕで治療した骨の標本はコアー（骨髄）から突き出ている種々の量の硬い血管新生した骨を含む。対照の標本は一般に少ない充填を有し、しかも更に軟質の繊維状の性質を有する。

図６は偽薬で治療した骨（図６Ａ）及びＧＨＬ−Ｃｕで治療した骨（図６Ｂ）の一対の顕微鏡写真、倍率４０、トリクローム染色である。ＧＨＬ−Ｃｕ標本（図６Ｂ）では骨膜層（４０）が偽薬で治療した骨（図６Ａ）よりも良く発達しており、しかも連続している。

加えて、新しい（網状）骨（２０）の吻合間の島（ｉｎｔｅｒａｎａｓｔｏｍｏｓｉｎｇ　１ｓｌａｎｄｓ）が図６Ｂで観察される。また、図６Ｂ中の小柱間の間隙（３０）は、成熟した骨に見られるような、脂肪細胞及び血管チャネルで充填されている。更に、Ｇ）ＩＬ−Ｃｕで治療した骨では小柱間の間隙の間の連絡が少なく、これは更に堅いコンンステンシーを示す。

既存の骨（１０）が冒された骨の領域を包囲している。

７日の治療期間は、組織学的に、且つ肉眼で調べた場合に、治療した骨と対照の骨の間で差異を生じた。本発明の組成物は対照よりも更に迅速に骨の成長を刺激した。

図７は偽薬で治療した骨の欠陥（図７Ａ）及びＧｌ（Ｌ、−Ｃｕで治療した骨の欠陥（図７Ｂ）の一対の顕微鏡写真、倍率６３、トリクローム染色である。Ｇ）ｔＬ−Ｃｕで治療した欠陥中の新しい骨（２０）の密度の増加及び全般に増加した組織密度並びに骨細胞の凝集が図７Ｂ中に見られる。小柱間の間隙（３０）、骨膜層（４０）、及び既存の骨（１０）が容易に同定される。

これらの結果は、本発明の組成物による治療が冒された骨の治癒を増大し、冒された骨中の肉芽組織の形成を誘導し、冒された骨中の新しい骨の成長の形成を加速したことを示す。

以上から、本発明の特別な実施態様が説明の目的で本明細書に記載されたが、本発明の精神及び範囲から逸脱しないで種々の改良がなし得ることが理解される。

それ故、本発明は、請求の範囲による以外は限定されない。

０　ｏ　。

国際調査報告Ｉ、１１．、．１＾、−０ｉ帥Ｎ・　ＰＣＴ／ＵＳ　９０１０５８３８

Claims

【特許請求の範囲】

１．下記の一般式：［グリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リシン−ＣＯ−Ｒ］：銅（ＩＩ）（式中、ＲはＬ−トリプトファンまたは（グリシル）ｎ−Ｌ−トリプトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）を有する化合物。
２．下記の一般式：［Ｌ−リシル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ］：銅（ＩＩ）（式中、Ｒは−ＮＨ２部分、Ｌ−トリプトファンまたは（グリシル）ｎ−Ｌ−トリプトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）を有する化合物。
３．下記の一般式：［グリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リシン−ＣＯ−Ｒ］：銅（ＩＩ）（式中、ＲはＬ−トリプトファンまたは（グリシル）ｎ−Ｌ−トリプトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）を有する化合物を含むことを特徴とする活性治療物質として使用するための組成物。
４．下記の一般式：［Ｌ−リシル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ］：銅（ＩＩ）（式中、Ｒは−ＮＨ２部分、Ｌ−トリプトファンまたは（グリシル）ｎ−Ｌ−トリプトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）を有する化合物を含むことを特徴とする活性治療物質として使用するための組成物。
５．浸透剤または表面活性剤を更に含む請求の範囲第３項または第４項に記載の組成物。
６．温血動物の冒された骨の治癒を促進するための薬剤の製造に使用するための化合物であって、化合物がグリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リシン：銅（ＩＩ）；Ｌ−リシル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン：銅（ＩＩ）；［グリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リシン−ＣＯ −Ｒ］：銅（ＩＩ）（式中、Ｒは−ＮＨ２部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルキル部分、６〜１２個の炭素原子を含むアリール部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルコキシ部分、及び６〜１２個の炭素原子を含むアリールオキシ部分からなる群から選ばれ、またはＲはＬ−プロリル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−トリプトファン、または（グリシル）ｎ−Ｌ−トリプトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）；及び［Ｌ−リシル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ］：銅（ＩＩ）（式中、Ｒは−ＮＨ２部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルキル部分、６〜１２個の炭素原子を含むアリール部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルコキシ部分、及び６〜１２個の炭素原子を含むアリールオキシ部分からなる群から選ばれ、またはＲはＬ−プロリル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−トリプトファン、または（グリシル）ｎ−Ｌ−トリプトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）からなる群から選ばれることを特徴とする上記の化合物。
７．温血動物の冒された骨の肉芽組織の形成を誘導するための薬剤の製造に使用するための化合物であって、化合物がグリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リシン：銅（ＩＩ）；Ｌ−リシル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン：銅（ＩＩ）；［グリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リシン−ＣＯ −Ｒ］：銅（ＩＩ）（式中、Ｒは−ＮＨ２部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルキル部分、６〜１２個の炭素原子を含むアリール部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルコキシ部分、及び６〜１２個の炭素原子を含むアリールオキシ部分からなる群から選ばれ、またはＲはＬ−プロリル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−トリプトファン、または（グリシル）ｎ−Ｌ−トリプトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）；及び［Ｌ−リシル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ］：銅（ＩＩ）（式中、Ｒは−ＮＨ２部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルキル部分、６〜１２個の炭素原子を含むアリール部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルコキシ部分、及び６〜１２個の炭素原子を含むアリールオキシ部分からなる群から選ばれ、またはＲはＬ−プロリル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−トリプトファン、または（グリシル）ｎ−Ｌ−トリプトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）からなる群から選ばれることを特徴とする上記の化合物８．温血動物の骨中に移植された人工器具に関連する新しい骨の成長の形成を加速するための薬剤の製造に使用するための化合物であって、化合物がグリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リシン：銅（ＩＩ）；Ｌ−リシル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン：銅（ＩＩ）；［グリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リシン−ＣＯ −Ｒ］：銅（ＩＩ）（式中、Ｒは−ＮＨ２部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルキル部分、６〜１２個の炭素原子を含むアリール部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルコキシ部分、及び６〜１２個の炭素原子を含むアリールオキシ部分からなる群から選ばれ、またはＲはＬ−プロリル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−トリプトファン、または（グリシル）ｎ−Ｌ−トリプトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）；及び［Ｌ−リシル−Ｌ−ヒスチジル−グリシン−ＣＯ−Ｒ］：銅（ＩＩ）（式中、Ｒは−ＮＨ２部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルキル部分、６〜１２個の炭素原子を含むアリール部分、１〜１８個の炭素原子を含むアルコキシ部分、及び６〜１２個の炭素原子を含むアリールオキシ部分からなる群から選ばれ、またはＲはＬ−プロリル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン、Ｌ−トリプトファン、または（グリシル）ｎ−Ｌ−トリプトファン（式中、ｎ＝１〜２）である）からなる群から選ばれることを特徴とする上記の化合物。