JPH0579077B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

〔技術分野〕 本発明は、新規抗生物質RK−634並びにその
製造法と、RK−634を有効成分とする農園芸用
殺菌剤に関する。 〔発明の背景〕 従来、農園芸用殺菌剤として銅剤、水銀剤、砒
素剤の如き重金属化合物や有機塩素系薬剤、有機
リン酸系薬剤等が用いられてきたが、これらはい
ずれも動物や人体に有害で、土壌に対する汚染が
あつたり、自然界に残留して長時間動・植物に作
用し、これら薬剤による環境汚染が重大な社会問
題となり、その使用が禁止ないしは制限されてい
る現状にある。しかしながら、稲の主要病害をは
じめとする各種植物病害は、対象薬剤の減少や耐
性菌の出現に伴つて増加の傾向を示しており、そ
の対策として対象病害に著効を示し、且つ安全性
の高い新たな農薬の開発が強く望まれている。 〔発明の目的〕 本発明の目的は、各種植物病害に有効な新規抗
生物質とその製造法に提供することにある。更
に、本発明の目的は、上記抗生物質を有効成分と
する農園芸用殺菌剤を提供することにある。 〔発明の構成〕 本発明の抗生物質RK−634は、後述の理化学
的性質を有する文献未載の新規な抗生物質であ
り、キユウリ灰色かび病、キユウリ炭疽病等の各
種植物病害に対して優れた防除効果を奏し、且つ
植物体に何ら薬害を及ぼさず、その旋用にあたり
人体に何らの影響を与えない優れた農園芸用殺菌
剤である。 以下に、本発明を詳細に説明する。 ＜抗生物質RK−634の製造＞ （使用する微生物） 本発明の抗生物質RK−634を生産する微生物
はストレプトミセス（Streptomyces）属に属す
る抗生物質RK−634の生産能を有する菌種であ
る。その一例として、ストレプトミセス・エスピ
ー・RK−634（Streptomyces sp.RK−634）（以
下“RK−634株”と称する。） を挙げることができ、該微生物は、上記の特性を
有し、本発明の抗生物質RK−634を有利に生産
するものであり、本発明の製造法に有効に利用し
得るものである。 また、上記RK−634株の自然的及び人工的変
異株は勿論、ストレプトミセス属に属する菌種で
後述の抗生物質RK−634の生産能を有する微生
物はすべて本発明方法において使用することがで
きる。 上記RK−634株は、沖縄県名護市で採取され
た土壌中より分離された土壌放線菌であり、工業
技術院微生物工業技術研究所に平成元年６月３日
付寄託され、その微生物受託番号は、微工研菌寄
第10771号（FERM Ｐ−10771）である。 RK−634株は、次の菌学的性質を有する。 １ 形態的特徴 本菌株、RK−634株を１％イーストエキスト
ラクト、１％グルコースを含む液体培地で培養
し、この菌体を6N塩酸110℃18時間加水分解した
ものの薄層クロマトグラフイーでは、Ｌ，Ｌ−ジ
アミノピメリン酸を検出した。寒天平板上に発育
したものの電子顕微鏡観察では、気菌系は直状を
呈し灰色で、胞子は表面が平滑で円筒状である。 ２ 各種培地上における生育状態（27℃、20日間
培養、色調はデイスクリプテイブ・カラー・ネ
ームズ・デイクシヨナリ（Descriptive Color
Names Dictionary）による） １ スターチ・イーストエキス寒天培地 発 育：良 好 気 菌 糸：豊 富 気菌糸色調：5ih（リードグレイ） 可溶性色素：な し ２ イーストエキス・モルトエキス寒天培地 発 育：良 好 気 菌 糸：豊 富 気菌糸色調：7dc（ダークピンク） 可溶性色素：な し ３ オートミール寒天培地 発 育：不 良 気 菌 糸：な し 可溶性色素：な し ４ 蔗糖無機塩類寒天培地 発 育：良 好 気 菌 糸：豊 富 気菌糸色調：5fe（アツシユ） 可溶性色素：な し ５ 蔗糖硝酸塩寒天培地 発 育：良 好 気 菌 糸：豊 富 気菌糸色調：3dc（ナチユラル） 可溶性色素：な し ６ グルコース・アスパラギン寒天培地 発 育：普 通 気 菌 糸：普 通 気菌糸色調：2ba（パール） 可溶性色素：な し ７ グリセロール・アスパラギン寒天培地 発 育：良 好 気 菌 糸：豊 富 気菌糸色調：3ba，5dc（パール、グレイ） 可溶性色素：な し ８ 栄養寒天培地 発 育：不 良 気 菌 糸：な し 可溶性色素：な し ９ チロシン寒天培地 発 育：良 好 気 菌 糸：豊 富 気菌糸色調：ｃ（グレイ） 可溶性色素：暗褐色 10 ペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地 発 育：良 好 気 菌 糸：な し 可溶性色素：な し ３ 糖の利用 Ｄ−グルコース 利用する Ｄ−キシロース 〃 Ｌ−アラビノース 〃 Ｄ−マンニトール 〃 イノシトール 〃 ラフイノース 疑わしい シユクロース 〃 Ｄ−フラクトース 利用しない ４ その他の生理的性質 本菌株は澱粉の加水分解、脱脂乳の凝固化と液
化、メラニンの形成の反応は陽性であり、ゼラチ
ンの液化、可溶性色素の形成の反応は陰性であ
る。 以上のことから、本菌はストレプトミセスに属
することは明らかであり、これらの性質をバージ
イズ・マニユアル・オブ・デターミネイテイブ・
バクテリオロジイ（Bergey's Manual of
Determi native Bacteriorogy）記載のもので検
索すると、最も近縁のものは、ストレプトミセ
ス・アンテイバイオテクス（Streptomyces
antibioticus）、ストレプトミセス・ノボリトエン
シス（Streptomyces noboritoensis）である。 （培養法及び精製法） 本発明の抗生物質RK−634を得るに当つては、
ストレプトミセス属に属する上記抗生物質生産菌
を、抗生物質を生産する通常の方法で培養するこ
とができる。培養の形態は、液体培養でも固体培
養でもよく、工業的に有利に培養するためには、
前記生産菌の胞子懸濁液又は培養液を培地に接種
し、通気攪拌培養を行えばよい。 培地の栄養源としては特に限定されることはな
く、微生物の培養に通常用いられる炭素源、窒素
源その他を培地中に含有させることができる。炭
素源としては、澱粉、デキストリン、グリセリ
ン、グルコース、シユークロース、ガラクトー
ス、イノシトール、マンニトールなどが、また窒
素源としては、ペプトン、大豆粉、肉エキス、米
ぬか、麩、尿素、コーンステイープリカー、アン
モニウム塩、硝酸塩、その他の有機または無機の
窒素化合物が用いられる。その他、無機塩類、た
とえば食塩、燐酸塩類、カリウム、カルシウム、
亜鉛、マンガン、鉄等の金属塩類を適宜に添加し
てもよく、必要に応じて消泡剤として、動、植、
鉱物油等を添加してもよい。培養温度、培養時間
等の培養条件は使用菌の発育に適し、しかもRK
−634の生産が最高となるような条件が選ばれる。
たとえば、培地のPHは４〜９、特に中性付近がよ
く、培養の適温は25〜35℃程度がよい。しかし、
これらの培養組成物、培地の水素イオン濃度、培
養温度、攪拌条件などの培養条件は使用する菌株
の種類や、外部の条件などに応じて好ましい結果
が得られるように適宜調節されるべきであること
はいうまでもない。このようにして得られる培養
物から、RK−634を得るには、代謝産物を採取
するのに通常用いられる手段を適宜に利用して採
取し得る。たとえば、RK−634と不純物との溶
解度差を利用する手段、イオン結合力の差を利用
する手段、吸着親和力の差を利用する手段、分子
量の差を利用する手段のいずれも、それぞれ単
独、又は、適宜組合せて、あるいは反復して使用
される。具体的には、RK−634は、培養濾液に
その大部分が存在する。その培養液を各種のイオ
ン交換クロマトグラフイー、ゲル濾過クロマトグ
ラフイー、吸着クロマトグラフイー、液体クロマ
トグラフイー、セルロース分配クロマトグラフイ
ー等を組合せて精製すると、RK−634及びその
他の活性成分を含む画分が得られる。この画分を
凍結乾燥して得られた粉末を更に高速液体クロマ
トグラフイー（たとえば、ヌクレオジル5C₁₈、50
％メタノールの系で展開）により精製し、RK−
634の精製白粉粉末を得る。 こうして得られたRK−634の理化学的性質及
び生物学的性質は次のとおりである。 ＜抗生物質RK−634の理化学的性質及び生物学
的性質＞ 形 状： 白色粉末 分解点： 129〜131℃ 元素分析：炭素61.28％ 水素9.15％ 窒素 3.37％ C₆₃H₁₁₁N₃O₂₀として計算値 炭素61.49％ 水素9.09％ 窒素 3.41％ 分子量： 1229 HR−FABMS（Ｍ＋Ｈ）⁺ｍ／ｚ；
1230，7890 比旋光度；〔α〕²⁰ _D＝15.1°（c0.34メタノール） 紫外線吸収スペクトル：λ^McOH _nax（Ｅ１％ １cm） （第１図に示す） 227肩（228），232（241），240肩
（168） 赤外線吸収スペクトル：KBr中（第２図に示
す） 990，1060，1120，1180，1250，
1290，1370，1455，1600，1630，
1710〜20，2930〜70，3400cm^-1 溶解性： メタノールに可溶、アセトンに僅
溶、水、クロロホルム、酢酸エチル
に難溶 呈色反応：陽性；レミユー、過ヨウ素酸−ベン
ジジン、坂口 凝陽性； ニンヒドリン（黄色） 塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質 pKa′；4.9（70％メチルセロソルブ中） 抵菌スペクトル：通常の寒天平板希釈法による
検定を行つた。

【表】 ＜他物質との比較＞ 本物質は、アザロマイシン（azalomycin）、コ
ピアマイシン（copiamycin）、グアニジルフンジ
ン（guanidyl fungin）、ニフイマイシン
（niphimycin）に類縁の物質と考えられるが、本
物質に一致する分子式を有するものはないので、
RK−634を新規抗生物質と結論した。 （RK−634を有効成分とする農園芸用殺菌剤） 本発明の有効成分を農園芸用殺菌剤として使用
する場合には、通常、当該技術分野において知ら
れている農薬製剤と同様に適当な固体担体、液体
担体、乳化分散剤等を用いて粒剤、粉剤、乳剤、
水和剤、錠剤、油剤、噴霧剤、煙霧剤等の任意の
剤型に製剤化して適用することができる。これら
の担体としては、クレー、カオリン、ベントナイ
ト、酸性白土、珪藻土、炭酸カルシウム、固体担
体として、ニトロセルロース、デンプン、アラビ
アゴム等々が、また液体担体として水、メタノー
ル、エタノール、アセトン、ジメチルホルムアミ
ド、エチレングリコール等が挙げられる。また、
製剤上、一般に使用される補助剤、例えば、高級
アルコールの硫酸エステル、ポリオキシエチレ
ン・アルキル・アリルエーテル、アルキル・アリ
ル・ポリエチレン・グリコールエーテル、アルキ
ル・アリル・ソルビタン・モノラウレート、アル
キル・アリル・スルホネート、第４級アンモニウ
ム塩、ポリアルキレンオキサイド等を適宜配合す
ることができる。 有効成分の配合割合は、乳剤、水和剤として
は、10〜90％程度が適当であり、粉剤、油剤等と
しては、0.1〜10％程度が適当であるが、使用目
的によつてこれらの濃度を適宜増減してもよい。 また、本発明の薬剤は、他の殺菌剤や除草剤、
殺虫剤、肥料物質、土壌改良剤と適宜混合して使
用することができる。 以下に、本発明を製造例、実施例及び試験例に
よつて具体的に説明するが、本発明はこれに何ら
限定されるものではない。 なお、「％」、「部」はそれぞれ重量％、重量部
を表す。 製造例 グルコース２％、可溶性デンプン１％、肉エキ
ス0.1％、乾燥酵母0.4％、大豆粉2.5％、食塩0.2
％、リン酸第２カリウム0.005％の組成からなる
７の培地に前記RK−634株を接種して、27℃
で96時間振とう培養した。この培養液を濾過し、
濾液５と菌体に分けた。菌体は５の80％アセ
トンで抽出した後、濃縮してアセトンをとばし
1.5まで濃縮した後、濾液と合わせて酢酸エチ
ル５を２回用いて抽出を行い抽出物は破棄す
る。下層はブタノール３と２を用いて２回抽
出を行うと活性物質は完全にブタノールに移行す
る。ブタノールは減圧濃縮しシラツプを得る。こ
の後、ジクロロメタンで充填したシリカゲルカラ
ム（45φ×400H）を用いてクロマトを行う。ジ
クロロメタン−メタノールの比を30：１→20：１
→15：１と変えていくと15：１で活性が出始め
る。活性部分を集めて濃縮し、ブタノール−メタ
ノール−水（８：１：１）で充填したシリカゲル
カラム（30φ×500H）を用いて再度クロマトを
行う。ブタノール−メタノール−水を８：１：１
→５：１：１→４：１：２に変えていくと４：
１：２で活性が出始める。活性部分を集め、減圧
濃縮しシラツプ1.5ｇを得る。そのうち0.4ｇを用
いてメタノールで充填したSephadex LH−20カ
ラム（25φ×1200H）を用いたクロマトを行う。
残りのシラツプも同様にクロマトを行いほとんど
単一のRK−634物質105mgが得られた。最後に逆
相カラムNucleosil 5C₁₈（20φ×300H）を用いた
高速液体クロマトグラフイーにより、82％メタノ
ール、8.5ml／minの展開で26分のところにRK−
634物質の単一ピークが現れる。これを収集し減
圧濃縮し凍結乾燥すると無色白色粉末43mgが得ら
れた。 実施例１ （水和剤） RK−634、10部、ラウリル硫酸ナトリウム５
部、ジナフチルメタンジスルホン酸ソーダホルマ
リン縮合物２部及びクレー83部を混合粉砕して水
和剤100部を得る。 実施例２ （乳剤） RK−634、８部、エチレングリコール10部、
ジメチルホルムアミド20部、アルキル・ジメチル
ベンジル・アンモニウムクロライド10部及びメタ
ノール52部を混合溶解して乳剤100部を得る。 実施例３ （粉剤） RK−634、0.2部、ステアリン酸カルシウム0.5
部、タルク50部及びクレー49.3部を混合粉砕して
粉剤100部を得る。 実施例４ （粉剤） RK−634、10部、デンプン15部、ベントナイ
ト72部及びラウリルアルコール硫酸エステルのナ
トリウム塩３部を混合粉砕して粉剤100部を得る。 試験例 (1) キユウリ灰色かび病に対する防除試験 イ 供試植物播種後、空調温室（昼間最高28℃、
夜間最低20℃、湿度60％、日照時間は１日12時
間になるように水銀灯で補光する）内で13日間
栽培した１ポツト１本植えの本葉一葉期キユウ
リ（相模半白）を用い、一区３連とした。 ロ 葉液の施用 散布液は供試薬剤をアセトンに溶解し、蒸留水
を加え、展着剤１滴を添加した。薬剤最終濃度は
500ppmとし、アセトンの最終濃度は５％以下に
なるように調整した。 又無処理区の散布液として５％アセトン水溶液
を用いた。 ハ 接種及び発病 接種源は、胞子接種用としてPSAプレー培地
上の中央に直径0.6mmの灰 色かび病菌Botrytis
cinereaの菌叢片を移植し、５〜７日間20℃の培
養を経て形成された胞子を１％−イーストエキス
トラクト、５％−グルコース液に懸濁したものを
用いた。（接種源の胞子濃度：５×10⁵／ml〜１×
10⁶／ml）。接種は、ポリビニール製接種箱内で、
供試植物50株につき20ccをクロマト用噴霧器によ
り均一に噴霧して行つた。 また、菌叢接種としては同様に３日間培養して
菌叢を直接供試植物の本葉に貼付して接種を行つ
た。 接種後、接種箱内に十分水を噴霧し、湿度90％
以上、20℃暗黒下に72時間放置し発病させた。 ニ 調査および防除価の算出 病斑の直径を計測した。防除価（％）は、次式
より算出した。 防除価＝〔１−試験区の発病直径／無処理区の
発病直径〕×100（％） (2) キユウリ炭疽病に対する防除試験 イ 供試植物 播種後、空調温室（昼間最高28℃、夜間最低20
℃、湿度60％、日照時 間は１日12時間になるよ
うに水銀灯で補光した）内で２週間生育させた、
１ポツト１本植えの本葉一葉期キユウリ幼苗（相
模半白）を用い、一区３連とした。 ロ 薬剤の施用 散布液は供試薬剤をアセトンに溶解し、蒸留水
を加え、展着剤１滴を添加した。薬剤最終濃度は
500ppm、アセトンの最終濃度は５％以下になる
ように調整した。薬剤の施用は供試植物をター
ン・テーブル上に置き、回転させながら、スプレ
ーガンによつて散布した。その後、２時間室温で
風乾した。対照薬剤として、通常、ダコニール水
和剤750ppm及びコントロールとして５％アセト
ン水溶液を用いた。 ハ 接種及び発病 接種源は、PSAピレート培地に20℃、10日間
生育させた炭疽病菌Colletotrichum Iagenarium
の胞子を滅菌水に懸濁し、50mlに展着剤１滴を添
加して接種源とした（接種源の胞子濃度：15×
10⁵／ml）。 接種は、ポリ塩化ビニール製接種箱内で、供試
植物50株につき接種菌液20mlをクロマト用噴霧器
で均一に噴霧して行つた。 接種後、接種箱内に水を噴霧し、湿度90％以
上、25℃暗黒下に24時間放置した後、湛水した開
放棚に植物を移し、湿度70％、温度25℃で72時間
放置し発病させた。この発病期間中は水銀灯で１
日12時間人工照明を行つた。 ニ 調査および防除価の算出 植物本葉上の病斑総数を計測し、各区合計した
病斑数を用い次式により防除価（％）を算出し
た。 ロ 防除価＝〔１×試験区の病斑総数／無処理区
の病斑総数〕×100（％） なお、無処理区の病斑総数200〜300、対照薬剤
の防除価95％以上となるよう検定条件を調整し
た。 (3) イネごま葉枯病に対する防除試験 イ 供試植物 播種後３週間空調温室（昼間最高28℃、夜間最
低20℃、湿度60％）内で生育させた１ポツト10本
植えのイネ（愛知旭）を用いた。 薬剤の施用 散布液は供試薬剤をアセトンに溶解し、蒸留水
を加え、展着剤１滴を添加した。薬剤最終濃度は
500ppm、アセトンの最終濃度は５％になるよう
に調整した。対照薬剤として、トリアジン水和剤
250ppmを用いた。 供試植物をターン・テーブル上に置き、回転さ
せながら、スプレーガンによつて散布した。その
後、室温で風乾した。 ハ 接種及び発病調査 接種源は、PSAプレート培地で28℃、２週間
培養したごま葉枯病菌Cochliobolus miyabeanus
の胞子を用い、胞子濃度は15×10⁴〜２×10⁵／ml
とした。 接種は、予め湿温にしておいた接種箱内でエア
ーブラシによつて行つた。接種後25°、湿室暗黒
下に24時間入れた後、植物を出して25℃１日12時
間の水銀灯による人工照明下で発病させた。４日
後に病斑を計測した。 ニ 防除価 次式により防除価（％）を算出した。 防除価＝〔１×試験区の病斑総数／無処理区の
病斑総数〕×100（％） 以上の結果を下記に示す。 濃 度 防 除 価 (ppm) (%) 灰 色 炭疽病 ごま葉 かび病 枯 病 100 97 82 81 75 92 77 79 50 88 60 75 25 ０ 43 64 （発明の効果） 上記の試験結果から、本発明の農園芸用殺菌剤
は、上記植物病害に対して、高い防除価を示し、
優れた農薬を提供し得ることが明らかとなつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の抗生物質RK−634の紫外
線吸収スペクトルを示す図であり、第２図は、抗
生物質RK−634の赤外線吸収スペクトルを示す
図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記の理化学的性質を有する抗生物質RK−
   634。 形 状： 白色粉末 分解点： 129〜131℃ 元素分析：炭素61.28％ 水素9.15％ 窒素 3.37％ C₆₃H₁₁₁N₃O₂₀としての計算値 炭素61.49％ 水素9.09％ 窒素 3.41％ 分子量： 1229 HR−FABMS（Ｍ＋Ｈ）⁺ｍ／ｚ；
   1230，7890 比旋光度；〔α〕²⁰ _D＝＋15.1°（c0.34メタノール） 紫外線吸収スペクトル：λ^MeOH _nax（Ｅ１％ １cm） 227肩（228），232（241），240肩
   （168） 赤外線吸収スペクトル：KBr中 990，1060，1120，1180，1250，
   1290，1370，1455，1600，1630，
   1710〜20，2930〜70，3400cm^-1 溶解性： メタノールに可溶、アセトンに僅
   溶、水、クロロホルム、酢酸エチル
   に難溶 呈色反応：陽性；レミユー、過ヨウ素酸−ベン
   ジジン、坂口 凝陽性； ニンヒドリン（黄色） 塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質 pKa′；4.9（70％メチルセロソルブ中） ２ ストレプトミセス（Streptomyces）属に属
   する抗生物質RK−634生産菌を培養し、その培
   養物から抗生物質RK−634を分離採取すること
   を特徴とする抗生物質RK−634の製造法。 ３ 抗生物質RK−634生産菌がストレプトミセ
   ス・エスピー・RK−634（Streptomyces sp.RK
   −634）である請求項２に記載の製造法。 ４ 抗生物質RK−634を有効成分として含有す
   ることを特徴とする農園芸用殺菌剤。