JPH06206898A - 血管作動性小腸ペプチドの新規誘導体 - Google Patents

血管作動性小腸ペプチドの新規誘導体

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JPH06206898A
JPH06206898A JP4334850A JP33485092A JPH06206898A JP H06206898 A JPH06206898 A JP H06206898A JP 4334850 A JP4334850 A JP 4334850A JP 33485092 A JP33485092 A JP 33485092A JP H06206898 A JPH06206898 A JP H06206898A
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 本発明は構造が修飾された血管作動性小腸ペ
プチド（ＶＩＰ）の新規誘導体、それらの薬剤組成物、
および男性陰萎の治療でのそれらの使用に関する。 【構成】 本発明の新規誘導体は、血管作動性小腸ペプ
チド（ＶＩＰ）とＶＩＰ７−２８とＶＩＰ１６−２８断
片由来であり、天然の配列の５位、１７位そして１９位
のアミノ酸残基が他の天然または非天然のアミノ酸で置
換されており、これらは少なくとも１つの末端脂肪親和
性基を有する。 この修飾ＶＩＰ配列および断片は通常
のペプチド鎖作成法により調製される。 この新規誘導
体およびそれらを含む組成物は経皮投与に適している。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の技術分野】本発明は構造が修飾された血管作動
性小腸ペプチド（ＶＩＰ）の新規誘導体、それらの薬剤
組成物、および男性陰萎の治療でのそれらの使用に関す
る。さらに詳しくは本発明は、精力と陰茎の勃起を向上
させるための、適当な軟膏組成物中の、脂肪親和性末端
基を含む修飾ＶＩＰコンジュゲートの合成と経皮投与に
関する。
【０００２】
【文献】 １． Ｓａｉｄ，Ｓ．ａｎｄ Ｍｕｔｔ，Ｖ．，Ｎａｔ
ｕｒｅ ２２５，８６３（１９７０）． ２． Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｐ．Ｏ．ｅｔ ａｌ．，
Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３５０，２０９（１９８４）． ３． Ｏｔｔｅｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉ
ｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊ．２８８，９（１９８４）． ４． Ｄｉｘｏｎ，Ａ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｎｄ
ｏｃｒｏ．１００，２４９（１９８４）． ５． Ｇｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３１５
（１９８４）． ６． Ｇｏｚｅｓ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉ
ｎｏｌｏｇｙ １２５，２９４５（１９８９）． ７． ＥＰ−０３５４ ９９２ Ａ２；Ｕ．Ｓ．５，１
４７，８５５． ８． Ｗａｇｎｅｒ，Ｇ．ａｎｄ Ｇｅｒｓｔｅｎｂｅ
ｒｇ，Ｔ．，Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｕｒｏｌ．５ １７１
（１９８７）． ９． ＵＳ ４，６０５，６４１． １０． Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．，Ｊ．Ａ
ｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９（１９６３）． １１． Ｓｔｅｕａｒｔ，Ｊ．Ｍ．ａｎｄ Ｙｏｕｎ
ｇ，Ｊ．Ｄ．，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｃｏｒｐ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩ．，１９
８４（２ｎｄｅｄｉｔｉｏｎ）． １２． Ｏｋｕｍｕｒａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅ
ｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３７，１３７５（１９８
９）． １３． Ｓａｃｈｓ，Ｂ．Ｄ．ｉｎ ″Ｎｏｒｍｏｎｅ
ｓ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｕｒ ｉｎ Ｈｉｇｈｅｒ
Ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓ″（Ｅｄｓ．Ｂａｌｔｈａｚ
ａｒｔ，Ｊ．Ｐｒｏｖｅ，Ｅ．ａｎｄ Ｇｉｌｌｅｓ，
Ｒ．）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｂｅｒｌｉｎ
Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（１９８３）ｐ．８６． １４． Ｗｅｍｅｒ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１３３，
２２８（１９８５）．
【０００３】
【発明の背景と先行技術】男性陰萎は男性の少なくとも
１０−１５％を襲う広く見られる症状である。米国だけ
でも１，０００万人以上の男性がある程度の陰萎にかか
っている。原則的には４０才以上の男性は老齢化にとも
なう神経内分泌的不全による陰萎を時々経験する。
【０００４】かかった人や回りの人の生活に悪影響を与
える陰萎は、精神的または肉体的な問題のいずれによっ
ても引き起こされる。陰萎に関連する追加の問題は、特
に医師の有している従来の治療法が限られていることも
あって、患者が医師に相談に来ないことである。器質性
の原因による陰萎の治療法には、手術や移植そしてパパ
ベリンまたはフェノキシベンズアミンのような平滑筋弛
緩剤の注射がある。
【０００５】陰茎の移植による陰萎の治療には重大な短
所がある。この治療法には手術が必要であり、陰茎の勃
起組織の完全で不可逆な破壊があり、将来正常な勃起能
力が失われてしまう。
【０００６】パパベリンまたはフェノキシベンズアミン
による陰萎の治療は、しばしば持続勃起症となり、勃起
が典型的には数時間から２４時間の範囲まで固定されて
しまう。これは患者を困惑させるのみでなく、痛みがあ
り勃起組織に不可逆な障害を与える。パパベリンで持続
勃起症が起きなくても、これは注射後最初の２時間は焼
けるような痛みがあり、繰り返し使用すると海綿組織内
繊維症を引き起こす。さらにフェノキシベンズアミンは
発癌性であると考えられており、従って将来の有効な陰
萎治療薬とは考えられない。
【０００７】上記すべてを考慮すると、陰萎の他人に知
られず効率的かつ自身で調節できる治療法が望まれる。
薬剤の経皮投与は自分で調節可能であり他人に知られる
ことなく手術も必要としないため、このような治療にと
って薬剤の経皮投与は魅力的な方法と考えられる。本発
明の薬剤および薬剤組成物を用いる治療は持続勃起症を
引き起こさない。
【０００８】陰茎の勃起機構には内分泌系、神経系およ
び血管系が正常であることが必要である。最初セドとム
ット（Ｓ．Ｓａｉｄ ａｎｄ Ｖ．Ｍｕｔｔ）（１）に
単離された、広範囲の生理作用を示す血管作動性小腸ペ
プチド（ＶＩＰ）は、神経伝達物質介在性の陰茎勃起の
いくつかの基準を満たすことが見いだされた（２）。Ｖ
ＩＰは海綿性平滑筋神経を分布させる繊維中に見いださ
れた。これはまた勃起中に増加しており（３、４）、陰
萎の男性では減少していた（５）。さらに外来性ＶＩＰ
を注射すると男性に陰茎の勃起を引き起こした（３）。
ＶＩＰの全身性注射は、実験的に雄の能力を低下させた
ラットの性行動を刺激し、ＶＩＰの脂肪親和性誘導体お
よびＶＩＰ７−２８とＶＩＰ１６−２８断片は経皮投与
すると性行動を上昇させる（７）ことが最近証明され
た。正常対象者の研究で、正常男性の海綿体中に２０μ
ｇのＶＩＰを注射すると性的刺激を与えなくても陰茎が
わずかに膨張したが勃起は引き起こさないことが証明さ
れた。しかし性的刺激を与えた場合わずか１μｇのＶＩ
Ｐの海綿体への投与で完全な勃起が促進された（８）。
【０００９】天然のＶＩＰ配列のアミノ酸のいくつかが
他のアミノ酸で置換されており、１位（いわゆるＮ−末
端）のヒスチジンは随時アセチル化されている既知のＶ
ＩＰ類似体（９）もある。このような化合物による男性
の性行動の上昇は報告されていない。
【００１０】日本国際４−５９７９４号（１９９２年月
２６日発行）は、注射投与による陰萎の治療と気管支収
縮の防止を適応症とする、Ｌ−ロイシン−１７−ＶＩＰ
−ＨＳｅ−ＮＨ２で表される修飾ＶＩＰのアミド化ホモ
セリン誘導体について記載している。
【００１１】本発明の目的は、男性陰萎の経皮的治療の
ための改良された薬剤と組成物を提供することである。
【００１２】
【発明の要約】ＶＩＰ、２９アミノ酸ペプチドの配列は
以下の通りである：
【化２】
【００１３】本発明は、少なくとも１つの適当な脂肪親
和性末端基を有する構造を修飾したＶＩＰは、同じ脂肪
親和性末端基（１つまたは２つ以上）を有する天然の修
飾されていないＶＩＰに比較して、経皮投与による男性
陰萎の治療に著しく有効であるという驚くべき観察に基
づいている。すなわちステロイルＶＩＰ（Ｓｔ−ＶＩ
Ｐ）のアミノ酸配列の比較的小さな変化が生物活性の上
昇を誘導する。少なくとも１つの脂肪親和性末端基を有
する修飾ＶＩＰは男性陰萎の経皮的治療の非常に魅力的
な薬剤であることが、一般に示された。さらに放射標識
ＶＩＰおよび同じ脂肪親和性末端基を有する修飾ＶＩＰ
を同量適用した時の組織への浸透の上昇が評価された。
【００１４】同様に本発明において、少なくとも１つの
脂肪親和性末端基を有する修飾したＶＩＰ７−２８とＶ
ＩＰ１６−２８断片は、組織への浸透力が改良されたた
め、対応する同じ末端基を有する非修飾断片よりも著し
い有効性を示した。
【００１５】さらにある種の担体は組織への浸透の効率
を上昇させ、上記の構造を修飾した脂肪親和性末端基含
有ＶＩＰおよび構造を修飾した脂肪親和性末端基含有Ｖ
ＩＰ７−２８とＶＩＰ１６−２８断片の薬剤組成物を、
経皮投与による男性陰萎の治療用のさらに有効な薬剤と
することが見いだされた。
【００１６】本発明において、式Ｉ
【化３】 （式中、Ｒ１とＲ２は同じであるかまたは異なり、それ
ぞれ水素、飽和または不飽和の脂肪親和性基またはＣ１
−Ｃ４ヒドロカルビルまたはカルボキシリックアシルで
あるが、ただしＲ１とＲ２の少なくとも１つは脂肪親和
性基であり；Ｙ１とＹ２は同じであるかまたは異なり、
それぞれ−ＣＨ２−または−ＣＯ−、または関連するＲ
１またはＲ２が水素である場合は結合であり；Ｘ１、Ｘ
２およびＸ３は同じであるかまたは異なり、それぞれ天
然のまたは非天然のアミノ酸であるが、ただしＸ１ と
Ｘ３がバリンの場合Ｘ２はメチオニンではない）の配列
を有する修飾血管作動性小腸ペプチド（ＶＩＰ）のコン
ジュゲートまたは式Ｉの配列の修飾ＶＩＰ７−２８また
はＶＩＰ１６−２８断片のコンジュゲート、およびこの
ようなコンジュゲートの官能性誘導体が提供される。
【００１７】上記官能性誘導体は、２位と２７位の少な
くとも１つのアミノ酸残基は官能基を有する、生物活性
のあるコンジュゲートである任意の化合物である。
【００１８】Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は好ましくはロイシ
ン、イソロイシン、ノルロイシン、バリン、トリプトフ
ァン、フェニルアラニンおよびメチオニンなどの脂肪親
和性アミノ酸残基である。
【００１９】本発明の特に好ましい化合物は、上記式Ｉ
においてＸ２はノルロイシン残基であり、Ｘ１とＸ３は
それぞれバリンであり、Ｙ１は−ＣＯ−でありＲ１はＣ
１７アルキルである化合物である。
【００２０】本発明の新規化合物のペプチド鎖は固相合
成（１０、１１）による調製が最適であり、いったんこ
れらが作成されると、水素でない末端基Ｒ１Ｙ１−およ
び／またはＲ２Ｙ２−が結合される。
【００２１】Ｙ１および／またはＹ２がカルボニル基
（すなわち末端Ｒ１ＣＯ−および／またはＲ２ＣＯ−を
有する化合物）の時、Ｒ１ＣＯ−およびＲ２ＣＯ−いず
れかまたは両方とも通常のアシル化法により導入され
る。
【００２２】Ｙ１が−ＣＨ２−である本発明の化合物
（すなわち末端Ｒ１−ＣＨ２−を有する化合物）の調製
においては、Ｒ１−ＣＨ２−−ラジカルは、まずアルデ
ヒドＲ１ＣＨ＝Ｏを結合させ、次に得られるＲ１−ＣＨ
＝Ｎ−基を公知の技術により還元して導入される。末端
Ｒ２−ＣＨ２−を有する化合物は、式Ｒ２−ＣＨ２−Ｎ
Ｈ２のアミンでペプチドを切断することにより得られ
る。
【００２３】さらに方法において、活性成分として式Ｉ
の化合物、および薬剤として許容される適当な担体より
なる、哺乳動物の雄の陰萎の治療のための経皮投与用薬
剤組成物が与えられる。
【００２４】担体は好ましくは活性成分の組織への浸透
を上昇させるものの中から選択される。適当な担体の例
としてはグリセリン、潤滑剤、ニトログリセリンそして
セフゾール（ＳｅｆｓｏｌＴＭ）、およびこれらの混合
物がある。セフゾールは、グリセリルモノカプリレー
ト、プロピレングリコールジデカノエート、プロピレン
グリコールジカプリレート、グリセリルトリカプリレー
トおよびソルビタンモノカプリレートの商標（ニッコー
ケミカルズ（Ｎｉｋｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、東
京）であり、本発明の組成物において好適な担体であ
る。これらのうちグリセリルモノカプリレートが特に好
ましい。
【００２５】本発明はさらに、規定された種類のコンジ
ュゲートの遅延放出、コンジュゲートを含み皮膚への投
与用に適合させたアプリケーターよりなるディスペンサ
ーを与える。
【００２６】必要な場合はアプリケーター中のコンジュ
ゲートは、規定された種類の薬剤組成物中に製剤化する
ことができる。
【００２７】本発明の化合物は、特に経皮投与による男
性陰萎の治療に有用である。この治療法は先行技術に比
較していくつかの利点がある。まずこれは手術を必要と
せず組織の破壊がない。さらにこれは他の薬剤に関連す
るような持続勃起症や焼けるような痛みがない。また経
皮投与は、海綿体内注射に比較して、他人に知られるこ
となく、またはるかに便利な投与法である。さらにこの
方法は長時間の準備をすることなく自然の精力を可能に
する連続的な徐放装置の使用を可能にし、従って患者は
通常見られるように困惑することがない。
【００２８】
【図面の説明】以下の具体的な説明においては添付の図
面が参照される。
【００２９】図１Ａ、１Ｂ、１Ｃおよび１Ｄは実施例６
に記載の陰茎反射運動の生物学的試験の結果を示す。
【００３０】図２と３は実施例７に記載の皮膚への浸透
実験の結果を示す。
【００３１】
【具体的な実施態様の説明】以下の例は本発明の種々の
面を例示するが、これらは決して本発明を限定するもの
ではない。
【００３２】例１：ステロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰの
合成 上記の新規ＶＩＰコンジュゲートの合成は、本発明の最
も好ましい化合物、すなわちステアロイル−ノルロイシ
ン１７−ＶＩＰ（Ｓｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＰ）の合成によ
り示される。
【００３３】メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ＭＢＨ
Ａ）（ノバ（Ｎｏｖａ）（スイス）より購入）上のメリ
フィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）（１０、１１）の
固相法の一般原理により、機械シェーカー中でペプチド
鎖を用手法で作成する。すべての試薬、メチレンクロリ
ド（ＣＨ２Ｃｌ２）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭ
Ｐ）、およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、メ
ルク（Ｍｅｒｃｋ）（ドイツ）の分析用製品である。ト
リフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ジイソプロピルエチルアミ
ン（ＤＩＥＡ）、およびＮ、Ｎ−ジシクロヘキシルカル
ボジイミド（ＤＣＣ）はアルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃ
ｈ）（米国）より購入した。１−ヒドロキシベンゾトリ
アゾール（ＨＯＢＴ）はノバ（Ｎｏｖａ）（スイス）よ
り購入した。すべての保護したアミノ酸誘導体（Ｂｏｃ
−ＡＡ）はＬ−体であり、バケム（Ｂａｃｈｅｍ）（ス
イス）より得た。Ｎα−アミノ基は合成を通じて、ｔ−
ブチルオキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）基により保護し
た。側鎖官能基は以下のように保護した：Ｓｅｒ、ＡＳ
ｐ、Ｔｈｒはベンジルで；Ｌｙｓは２−クロロ−ベンジ
ルオキシカルボニルで；Ｔｙｒは２，６−ジクロロベン
ジルで；Ｈｉｓはベンジルオキシカルボニルで、そして
Ａｒｇはｐ−トルエンスルホニルで保護した。
【００３４】ＤＣＣ（０．４２ｇ；２ミリモル）とＨＯ
ＢＴ（０．２７２ｇ；２ミリモル）を薬剤として用い
て、Ｂｏｃ−Ａｓｎ（０．４６ｇ；２ミリモル）をメチ
ルベンズヒドリルアミン樹脂（１ｇ）に結合させて合成
を開始した。アミノ酸解析から添加量（０．３９ミリモ
ル／ｇ）を決定した。ポリマー上の未反応の残存アミノ
基は、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中の無水酢酸とトリエ
チルアミン（それぞれ１ｍｌと０．５ｍｌ）で反応させ
てキャップをした。表１に概略を示した実験計画に従
い、Ｂｏｃ−Ａｓｎ−ＭＢＨＡ樹脂でペプチド鎖の作成
を開始した。
【００３５】
【表１】
【００３６】すべての洗浄と反応の溶媒を１０ｍｌ／ｇ
樹脂の量まで測定した。すべての結合反応は、結合反応
前にＤＣＣで調製したＢｏｃ−アミノ酸誘導体のＨＯＢ
Ｔ活性エステルを用いて行った。Ｂｏｃ−アミノ酸１−
ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル（Ｂｏｃ−ＡＡ
−ＯＢＴ）と増殖している鎖のα−アミノ酸のモル比
４：１を結合反応に使用した。数ｍｇ（約３）のポリマ
ーをピリジン−水のニンヒドリン溶液中で２分間沸騰さ
せて結合反応を追跡した。Ｂｏｃ−アミノ酸の反応は２
回行い完全に反応させた。２回目の結合反応でＢｏｃ−
ＡＡ−ＯＢＴの半分の量を使用した。原則として各結合
工程の後に、残存アミノ基は、樹脂をメチレンクロリド
中の無水酢酸（１０％）とジイソプロビルエチルアミン
（５％）で処理してキャップした。
【００３７】ペプチド鎖作成の完了後常法に従いＣＨ２
Ｃｌ２中の５０％ＴＦＡでＨｉｓのｔ−Ｂｏｃ保護基を
除去し、試薬としてＤＣＣ（０．４２ｇ；２ミリモル）
とＨＯＢＴ（０．２７ｇ；２ミリモル）を用いて新しい
遊離α−アミノ基をステアリン酸（０．３７ｇ；２ミリ
モル）に結合させた。反応は４５分進行させ、２回繰り
返した。充分に作成したペプチド−樹脂を実験計画に従
いＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した後、Ｐ２Ｏ５上で真空下で一
晩乾燥させた。保護基の脱保護と樹脂からのベプチドの
切断は無水ＨＦ法により行った。すなわちペプチド−樹
脂（１ｇ）を、１．５ｍｌのｐ−チオクレゾールとｐ−
クレゾール（１：１、ｖ／ｖ）の存在下でテフロンＴＭ
ＨＦ装置（マルチプルペプチドシステム（Ｍｕｌｔｉｐ
ｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｔｅｍ））中で、０℃で１
時間処理した。真空によりＨＦを除去し、樹脂は過酸化
物を含まないエーテルで処理し、濾過し、エーテルで洗
浄し、乾燥し、そして水中５０％の酢酸で抽出した（３
×２５ｍｌ）。水層濾液の凍結乾燥により粗ステアロイ
ル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰが得られた（４００−５００ｍ
ｇ）。粗生成物を５０％酢酸水溶液に溶解し、０．１Ｎ
酢酸を溶出液として用いてセファデックスＧ−２５カラ
ム（７５×２ｃｍ）に通した。溶出を２７４ｎｍで分光
学的に追跡した。最初に現れたピ一クを集めた。水溶液
の凍結乾燥により、ＨＦ−切断工程で捕捉剤（ｓｃａｖ
ｅｎｇｅｒ）として加えた芳香族添加剤を含まないペプ
チドが得られた。収率は５０−７０％であった。
【００３８】セファデックス分画生成物について高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による精製を行っ
た。しかしこれは粗生成物について行うことができる。
メルク（Ｍｅｒｃｋ）ＲＰ−８カラム（７μＭ；２５０
×２５ｍｍ）で精製を行った。１０％アセトニトリル中
でペプチドを添加し、水中０．１％ＴＦＡと７５％アセ
トニトリル中０．１％ＴＦＡの線形勾配により５ｍｌ／
分の流速で溶出した。画分を集め分析ＨＰＬＣで調べた
後切り取った。得られた画分をプールし、凍結乾燥し
た。純粋なペプチドの収率は３０−３５％であった。
【００３９】生成物の純度は分析ＨＰＬＣ（メルク（Ｍ
ｅｒｃｋ）ＲＰ−８、１２５×１０ｍｍカラム）と、各
構成アミノ酸の予測値を与えたアミノ酸解析（広範囲の
酸加水分解（６Ｎ、ＨＣｌ））で確認した。
【００４０】ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰはアミ
ノ酸配列が変化していないステアロイル−ＶＩＰよりも
安定である。他の脂肪親和性誘導体は全く同じ方法でＮ
ｌｅ１７−ＶＩＰに結合させる。すなわちＨｉｓのｔ−
Ｂｏｃ保護基を除去した後、上記のようにＤＣＣとＨＯ
ＢＴを用いて新しい遊離α−アミノ基を適当なカルボン
酸に結合させる。
【００４１】例２：ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ
の合成 Ｓｔ−Ｎｌｅ１７一ＶＩＰ合成の別法は以下の通りであ
る。
【００４２】４−（２’、４’−ジメトキシフェニル−
アミノメチル）−フェノキシ樹脂（ノバ（Ｎｏｖａ）
（スイス）より購入）上でメリフィールド（Ｍｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄ）の固相法の一般原理により、機械シェーカ
ー中でベプチド鎖を用手法で作成する。すべての試薬、
メチレンクロリド（ＣＨ２Ｃｌ２）、Ｎ−メチルピロリ
ドン（ＮＭＰ）、およびジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）はメルク（Ｍｅｒｃｋ）（ドイツ）の分析用製品で
ある。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ジイソプロピルエ
チルアミン（ＤＩＥＡ）、およびＮ、Ｎ−ジシクロヘキ
シルカルボジイミド（ＤＣＣ）はアルドリッチ（Ａｌｄ
ｒｉｃｈ）（米国）より購入した。１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）はノバ（Ｎｏｖａ）（スイ
ス）より購入した。すべての保護したアミノ酸誘導体
（ＦＭＯＣ−ＡＡ）はＬ−体であり、バケム（Ｂａｃｈ
ｅｍ）（スイス）より得た。Ｎα−アミノ基は合成を通
じて、フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）基
により保護した。側鎖官能基は以下のように保護した：
Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｔｈｒはｔ−ブチルで；Ｌｙｓはｔ−
ブチルオキシカルボニルで；Ｈｉｓはベンジルオキシメ
チル（Ｂ０Ｍ）で；そしてＡｒｇはメトキシトリメチル
フェニルスルホニルで保護した（Ｍｔｒ）。
【００４３】工程１と２（実験計画参照）に従い、市販
のポリマー：４−（２’、４’−ジメトキシフェニル−
ＦＭＯＣ−アミノエチル）−フェノキシ樹脂（０．４７
ミリモルのアミノ基／ｇ）から、ＦＭＯＣ基を除去して
合成を開始した。２つの反応容器に含まれている１０ｇ
のポリマーを使用した。各容器中の使用した溶媒の量は
２０−２５ｍｌであった。試薬としてＤＣＣ（０．８４
ｇ、４ミリモル）とＨＯＢＴ（０．５５ｇ、４ミリモ
ル）を用いて、樹脂（５ｇ）にＦＭＯＣ−Ａｓｎ（０．
９２ｇ、４ミリモル）を結合させてペプチド鎖の作成を
開始した。結合反応を繰り返した。ポリマー上の未反応
の残存アミノ基は、ＣＨ２Ｃｌ２中の無水酢酸（１０
％）とジイソプロピルエチルアミン（５％）で反応させ
てキャップをした。表２に概略を示す実験計画に従い、
ＦＭＯＣ−Ａｓｎ−樹脂からペプチド鎖作成を開始し
た。
【００４４】
【表２】
【００４５】すべての洗浄と反応の溶媒は１０ｍｇ／ｇ
樹脂の量まで測定したが、結合反応（工程１０）では約
５ｍｌ／ｇの樹脂の量を使用した。各結合工程の前にＤ
ＣＣにより調製したＦＭＯＣ−アミノ酸誘導体のＨＯＢ
Ｔ活性エステルを用いて、すべての結合反応を行った。
２：１のモル比のＦＭＯＣ−アミノ酸１−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾールエステル（ＦＭＯＣ−ＡＡ−ＯＢＴ）
と増殖しているペプチド鎖のα−アミノ基を、結合反応
に使用した。ピリジン−水中にニンヒドリン溶液中の数
ｍｇ（約３）のポリマーを２分沸騰させて、結合反応を
追跡した。ＦＭＯＣ−アミノ酸の結合反応を２回または
それ以上繰り返して完全に反応させた。２回目の（必要
な場合は他の）結合反応では、ＦＭＯＣ−ＡＡ−ＯＢＴ
の半分の量を使用した。ニンヒドリン反応が陰性であっ
た場合のみ（工程１５；実験計画参照）、次のアミノ酸
の添加を目的とする以降の工程を開始した。原則的に各
結合工程の完了の後に、メチレンクロリド中の無水酢酸
（１０％）とジイソプロピルエチルアミン（５％）で樹
脂を処理して、残存しているアミノ基をキャップした。
【００４６】ペプチド鎖作成が完了した後、常法に従い
ＤＭＦ中のピペリジンによりＨｉｓのＦＭＯＣ保護基を
除去し、試薬としてＤＣＣ（０．８４ｇ、４ミリモル）
とＨＯＢＴ（０．５４ｇ、４ミリモル）を用いて新しい
遊離α−アミノ基をステアリン酸（０．７４ｇ、４ミリ
モル）に結合させた（各反応容器中）。反応を１２０分
進行させ、２回繰り返した。充分作成したペプチド−鎖
を含む樹脂を、実験計画に従いＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、
次にＰ２Ｏ５上で真空下で一晩乾燥させた。保護基の脱
保護と樹脂からのペプチドの切断は以下のようにして行
った。１ｇの乾燥樹脂を１００ｃｃのフラスコ中に入
れ、ここにリオアニゾール（２ｍｌ）とエタンジチオー
ル（２ｍｌ）を加えた。この混合物を氷浴中で４℃に冷
却し、２０ｍｌのトリフルオロ酢酸を加え、５分後トリ
フルオロエメタンスルホン酸（２ｍｌ）も加えた。この
混合物を室温で５０分静かに撹拌した。
【００４７】反応混合物を４℃に冷却し、５００ｍｌの
無水エーテル中に注いだ。４℃で６０分撹拌した後、固
形物質（樹脂とペプチド）をシンターロート中で濾過
し、無水エーテルで洗浄、乾燥し、次に５０％酢酸水溶
液（１００ｍｌ）で抽出した。ペプチドを含む得られた
溶液を高真空中で濃縮し、残渣（約１５ｍｌ）をセファ
デックスＧ２５カラム（４５×６ｃｍ）にのせた。カラ
ムを０．１Ｎ酢酸で４５ｍｌ／時間の流速で溶出した。
溶出を２７４ｎｍで追跡した。目的の画分を含む水溶液
の凍結乾燥により、酸分解切断工程で捕捉剤として加え
た芳香族添加物を含まないペプチドが得られた。収率は
約４００ｍｇの白色の粉末であった。
【００４８】この物質は広範囲の酸加水分解後のアミノ
酸解析により、目的のアミノ酸含量と比率を示した。セ
ファデックス分画生成物について高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）によりさらに精製を行った。しかし
これは粗生成物について行うことができる。メルク（Ｍ
ｅｒｃｋ）ＲＰ−８カラム（７μＭ；２５０×２５ｍｍ
カラム）で精製を行った。水中の３５％アセトニトリル
中でペプチドを添加し、３５％アセトニトリルと水中
０．１％ＴＦＡと７５％アセトニトリル中０．１％ＴＦ
Ａの線形勾配により１０ｍｌ／分の流速で溶出した。画
分を集め分析ＨＰＬＣで調べた後切り取った。得られた
画分をプールし、凍結乾燥した。純粋なペプチドの収率
は３０−３５％であった。
【００４９】例３．Ｒ１−ＣＨ２−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ
誘導体の調製 実施例１に記載したようにポリマー支持体、メトイルベ
ンズヒドリルアミン樹脂（ＭＢＨＡ）（０．３９ミリモ
ルＡｓｎ／ｇ）上でペプチド鎖を作成する。最後のアミ
ノ酸残基（ヒスチジン）取り込みの後、Ｎ−α−保護基
（ｔ−Ｂｏｃ）をＴＦＡにより除去し、ポリマーをＤＩ
ＥＡで処理し、洗浄し、ニンヒドリン試験をする。次に
ポリマーをエチルアルコール（１ｇ／１０ｍｌ）に懸濁
し、対応するアルデヒドＲ’−ＣＨ＝Ｏを加え（１当量
の遊離Ｎ−末端アミノ基に対して３−４当量のアルデヒ
ド）、混合物を室温で一晩静かに撹拌する。ポリマーを
濾過し、エタノールで洗浄し（３×１０ｍｌ）、エタノ
ールとＮａＢＨ４（１当量のシッフ塩基（Ｒ’−ＣＨ＝
Ｎ−Ｈｉｓ．．．）に対し３−４当量の還元剤）に再懸
濁し、混合物を室温で２時間静かに撹拌する。あるいは
ＮａＢＨ３ＣＮ（１当量のシッフ塩基に対し３−４当
量）を用いることもできる（０．１−０．２ｍｌの酢酸
の存在下）。縮合と還元反応は他の溶媒（例えばＤＭＦ
またはＮＭＰ）中で行うこともできる。還元反応完了
後、ポリマーを瀘過し、洗浄し乾燥し、ステアロイル−
Ｎｌｅ１７−ＶＩＰで記載したようにＨＦで処理する。
粗生成物は例１に記載の方法と同じ方法で精製して、目
的の最終生成物を得る。
【００５０】生成物の純度は分析ＨＰＬＣ（メルク（Ｍ
ｅｒｃｋ）ＲＰ−８、１２５×４ｍｍカラム）と、広範
囲の酸加水分解（６Ｎ ＨＣｌ）後各構成アミノ酸の予
測値を与えるアミノ酸解析により確認した。
【００５１】上記と同様の方法を用いてＶＩＰの以下の
ステロイル類似体が得られた： Ｓｔ−Ｌｅｕ５、 Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ Ｓｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ Ｓｔ−Ｌｅｕ５、Ｌｅｕ１７−ＶＩＰ Ｓｔ−Ｔｈｒ５−ＶＩＰ
【００５２】生成物の純度はステアロイル−Ｎｌｅ１７
−ＶＩＰのように分析ＨＰＬＣと、各構成アミノ酸の予
測値を与えるアミノ酸解析により確認した。
【００５３】例４： Ｒ１ −Ｙ１−ＮＨ−Ｎｌｅ１７
−ＶＩＰ−ＮＨ−Ｒ２の調製 最初のアミノ酸（Ｂｏｃ−Ａｓｎ）を次のようにして１
％架橋クロロメチル化ポリスチレン（ケマログ（Ｃｈｅ
ｍａｌｏｇ）、サウスプレインフィールド（Ｓｏｕｔｈ
Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ）、ニュージャージー州、米
国）に結合させた：無水エタノール（３５ｍｌ）中のア
ミノ酸誘導体（５ミリモル；１．１６ｇ）にトリエチル
アミン（４．７５ミリモル；０．６６ｍｌ）を加え、混
合物を室温で５分放置した。次にポリマー（５ｇ）を加
え、混合物を７８℃で６０時間静かに還流させた。ある
いは５ミリモルのＢｏｃ−Ａｓｎをエタノール（１２ｍ
ｌ）と水（３ｍｌ）の混合液に溶解し、ＣｓＣＯ３の２
０％水溶液でｐＨを７．５に調製した。ベンゼンで溶液
を３回フラッシュ蒸発させ、残渣をデシケーター中でＰ
２Ｏ５上で５時間乾燥させた。次にＤＭＦ（３０ｍｌ）
を加えて物質を溶解し、次に５ｇのポリマーを加えて混
合物を５０℃で３６時間撹拌した。アミノ酸解析により
のせる量（０．４ミリモル／ｇ）を決めた。
【００５４】ペプチド鎖の作成は例１のように行った。
しかしＢｏｃ−Ａｓｎ（β−ベンジルエステル）の代わ
りにＢｏｃ−Ａｓｎ（β−シクロヘキシルエステル）を
用いた。シクロヘキシル基はアミノ分解に対して安定で
ある。目的のペプチド鎖の作成が完了後、ポリマーを洗
浄し上記したように乾燥した。次に生成物を無水エタノ
ール、またはエタノールとＤＭＦの１：１ｖ／ｖ混合物
（１ｇ／１０ｍｌ）に懸濁し、次に対応するアミン（Ｒ
２−ＮＨ２；２０ミリモル）を加え、混合物を室温で４
８時間静かに撹拌した。Ｎ−ブタノール：酢酸：Ｈ
２Ｏ：ピリジン（１５：３：１２：１０ｖ／ｖ）を溶媒
系として用いてＴＬＣにより、ポリマー支持体から離れ
た生成物が現れた。このポリマーをエタノール（３×１
０ｍｌ）、ＤＭＦ（３×１０ｍｌ）で抽出し、溶媒を高
真空で除去し、油性で半固体の残渣を上記のようにＨＦ
で処理して側鎖保護基を除去した。粗生成物はステアロ
イルーＮｌｅ１７−ＶＩＰで記載した方法と同じ方法で
精製して、目的の最終生成物を得た。
【００５５】例５：軟膏組成物 以下の軟膏組成物を調製し、本発明の脂肪親和性コンジ
ュゲート化修飾ＶＩＰ誘導体の経皮投与について試験し
た。修飾していないＶＩＰ誘導体の同様のコンジュゲー
トを比較のために試験した。
【００５６】１・担体としてグリセリンを含む軟膏：こ
の軟膏は以下のようにして調製した：２ｇグルセリン＋
１０ｍｇステアロイル−ＶＩＰ＋７滴のＤＭＳＯ（ジメ
チルスルホキシド）。各ラットに、約１０μｌの軟膏中
３０−５０μｇのステアロイル−ＶＩＰを与えた（図１
のＧＬＹ）。
【００５７】２．担体として潤滑剤を含む軟膏：この軟
膏はグリセリンだけを潤滑剤（Ｋ−Ｙルブリケーティン
グジェリー（Ｋ−Ｙ Ｌｕｂｒｉｃａｔｉｎｇ Ｊｅｌ
ｌｙ）、ジョンソンアンドジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ
＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ）、プロピレングリコールとグリ
セリンを含む）で置換して、上記のようにして調製し
た。７滴のＤＭＳＯは約１３０μｌに等しい。（図１の
ＬＵＢ）。
【００５８】３．担体として潤滑剤とニトログリセリン
を含む軟膏 １．７ｍｌのニトログリセリン（１ｍ／ｍｌ）で上記
（２）のようにして調製した（図１のＬＵＢ−ＮＴ
Ｇ）。
【００５９】４．担体としてセフゾール（Ｓｅｆｓｏ
ｌ）３１８ＴＭを含む軟膏 この軟膏の組成は以下の通りである：３１．２μｌの１
０％セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８ＴＭ（グリセリ
ルモノカプリレート）、３１．２μｌのＤＭＳＯ中０．
２４ｍｇのステアロイル−ＶＩＰ（１匹当り１−２μ
ｌ）（図１のＳＥＦＳ）または３１．２μｌのＤＭＳＯ
中０．２４ｍｇのステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ
（図１のＳＥＦＳ）。
【００６０】例６：陰茎反射の生物試験 生物試験では、修飾したＶＩＰコンジュゲートまたはそ
のままのＶＩＰコンジュゲートの経皮投与後の睾丸摘出
ラットで陰茎反射を測定した。最初のタイプの生物実験
では、種々の担体を有するステアロイル−ＶＩＰの組成
の陰茎反射に対する影響を測定し、セフゾール（Ｓｅｆ
ｓｏｌ）が最も有効な担体であることがわかった。さら
に別の実験では、セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８
ＴＭと組成物になったステアロイルーＶＩＰの効果を、
セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８ＴＭと組成物になっ
たステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰと比較した。
【００６１】第２のタイプの生物実験では、いくつかの
放射標識したＶＩＰ誘導体の種々の組織での分布を追跡
した。
【００６２】（ａ）方法陰萎の動物モデル 睾丸摘出により性機能が低下しているラットを使用し
た。雄のラット（２５０−３００ｇ、約３月令）を、１
２時間明るく１２時間暗いサイクルの中に保持した。実
験はいつも暗い期間に行った。雄のラットの睾丸を摘出
し、１４−２１日間毎日注射する形で、部分テストステ
ロン補充（体重１００ｇ当り４μｇ）を行った。実験は
手術後１週間目に行った。
【００６３】陰茎反射（勃起）の直接評価 薬剤の経皮投与の後に陰茎勃起の直接評価を可能にす
る、陰茎の性的反射を測定する方法を用いた。うまく再
現できるかどうかは、暫定的に組織し機能的に関連する
行動単位か正確に働くか否かに大きく依存する。これら
の実験では我々は勃起過程の最終段階（陰茎が赤くなっ
て、膨張と伸張をともない完全に勃起すること）に集中
し、最初のＥ２とカップ（ｃｕｐ） （１３）までの潜
伏時間を追跡した。
【００６４】試験のために各ラットをあおむけにして、
体の前側をゆるく取り付けた円筒形でおおった（直径７
ｃｍ）。胴体の回りにベルトを取り付け、陰茎亀頭を鞘
から突き出させて、陰茎の後部に取り付けた薄い木のア
プリケーターで腹部に対して垂直になるように保持し
た。雄の足は観察者が押え、実験の間この状態を維持し
た。１回の実験は４５分間である。Ｅ２とカップの潜伏
時間と数を記録しブロットした。
【００６５】Ｅ２は、陰茎の先がカップ状の構造になる
カップが後に続く完全勃起と定義され、亀糖は膨れ上が
り、陰茎の末端がその基部より大きくなる。この最終段
階にはＥ２が必要であり、おそらく射精には必須と考え
られる（１３）。すべての変数を使用して、試験したラ
ットの精力の信頼できる尺度が得られる。
【００６６】（ｂ）結果 ステアロイル−ＶＩＰとステアロイル−Ｎｌｅ１７−Ｖ
ＩＰ（Ｓｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ）よりなる異なる軟膏
組成物の局所投与の陰茎反射への影響を図１Ａと１Ｂに
示す。
【００６７】各変数につき６から１０匹のラットをこの
方法で試験した。対照ラットにはＳｔ−ＶＩＰまたはＳ
ｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰのない軟膏組成物を与えた。
【００６８】図１Ａ：最初のＥ２までの潜伏時間 図１Ａに示すように、セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１
８ＴＭ中のＳｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰよりなる組成物を
用いた時、最初のＥ２までの最も短い時間が観察された
（レーン５のＳＦＦＳ．）。この組成物のＥ２潜伏時間
は約１分である。
【００６９】図１Ｂ：最初のカップまでの潜伏時間 再び図１Ａに示すように、セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）
３１８ＴＭ中のＳｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰの経皮投与の
後に、最初のカップまでの最も短い時間が観察された
（レーン５、ＳＥＦＳ．、最も短い潜伏時間＝１０
分）。
【００７０】図１Ｃ：Ｅ２の数 図１Ａと１Ｂに一致してセフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３
１８ＴＭ中のＳｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰの組成物を用い
てラットを治療した時、Ｅ２の最大数が得られる（レー
ン５のＳＥＦＳ．）。この組成物を用いた時のＥ２の数
は、ステアロイル−ＶＩＰやセフゾール（Ｓｅｆｓｏ
ｌ）３１８ＴＭの組成物で観察されるＥ２の数よりはる
かに多い（レーン４のＳＥＦＳ．）。これらの結果は構
造を修飾したＶＩＰコンジュゲートの優秀性を明白に示
している（試験期間中Ｅ２は３４対２４）。
【００７１】図１Ｄ：カップの数 上記図に一致してセフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８
ＴＭ中のＳｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰを含有する組成物を
用いて観察されたカップの数が最大である（レーン５の
ＳＥＦＳ．）。ステアロイル−ＶＩＰおよびＳｔ−Ｎｌ
ｅ１７−ＶＩＰと一緒にセフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３
１８ＴＭを用いるカップの数は、それぞれ１２と２０で
あった（レーン４とレーン５を比較）。
【００７２】これらのすべての実験の主要な結論は、ス
テアロイル−ＶＩＰのアミノ酸配列の比較的小さな変更
（すなわち１７位のＭｅｔをＮｌｅで置換）が精力を刺
激する薬剤の有効性を大きく増加させることである。
【００７３】第２の結論はセフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）
３１８ＴＭは、ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰとと
もにステアロイル−ＶＩＰの経皮投与用の最も適した担
体であることである。試験した４つのすべての変数によ
ると、ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰを含むセフゾ
ール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８ＴＭを含有する組成物の経
皮投与は、セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８ＴＭとス
テアロイル−ＶＩＰの組成物よりも効率的である。
【００７４】例７：皮膚浸透実験と体内分布 これらの実験は２群に分けられる。第１の群の実験で
は、放射標識ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ（セフ
ゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８ＴＭ中）の経皮投与した
時の体の種々の臓器への分布の経時変化を求めた。第２
の群の実験では、セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８
ＴＭとの４つの放射標識ＶＩＰ誘導体の経皮投与後の浸
透を比較している。各データの点には２から４匹のラッ
トを使用した。誘導体はクロラミンＴ法（１４）を用い
て１２５Ｉで標識した。
【００７５】第１の群の実験ではステアロイル−Ｎｌｅ
１７−ＶＩＰを１２５Ｉで放射標識した。各ラットに
は、６μｌの放射性物質＋２６μｌ軟膏（例５の軟膏Ｎ
ｏ．４）中の２２０万ＣＰＭを与えた。各時間の点には
２つの独立した実験で２匹のラットを使用した。口から
の吸入を避けるためラットの口をシールした。局所投与
の後指定した時間にラットを殺し、２重に組織試料を取
り、重さを計りガンマカンター中で計測した。測定した
組織は肺（ＬＵ）、心臓（ＨＥ）、腎臓（ＫＩ）、肝臓
（ＬＩ）および小腸（ＩＮ）である。
【００７６】図２に示す結果は、投与後１５−６０分に
ピークの分配があり、２．５時間後にステアロイル−Ｎ
ｌｅ１７−ＶＩＰか消失した。
【００７７】第２の群の実験では、セフゾール（Ｓｅｆ
ｓｏｌ）３１８ＴＭとＶＩＰ、Ｓｔ−ＶＩＰ、Ｎｌｅ
１７−ＶＩＰおよびＳｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰの組成物
を調製した。図２のように実験を行ったが、各ラットに
は２．４万ＣＰＭを与えたところが異なる。各変数につ
き２−４匹のラットを使用した。薬剤の投与３０分後に
ラットを殺した。
【００７８】図３に示す結果は性反射の結果に一致し、
最高濃度はＳｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰについて観察さ
れ、これが最も効率的薬剤であった。
【００７９】陰茎反射実験のように、最後の実験は皮膚
浸透と組織分布の点から他の誘導体に比較してＳｔ−Ｎ
ｌｅ１７−ＶＩＰの優秀性を示している。
【００８０】例８：毒性研究： ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰの毒性の程度と副作
用を調べるために、２つのタイプの実験を行った：１．
急性毒性研究；２．繰り返し投与毒性研究。
【００８１】薬剤は以下のように調製した：５３９ｍｇ
のステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ＋２．３１ｍｌの
１０％セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）＋２．３１ｍ１４０
％イロプロパノール。実験動物はラットである（体重１
６０−３００ｇ）。
【００８２】急性毒性研究では、３つの投与ルートを選
んだ：１．皮下；２．静脈注射；３．経口。皮下投与と
経口投与の場合、７ｍｇ／ラット（これは生物学的に活
性な投与量の１０００倍である）の投与量で死んだもの
はなく重大な副作用も認められなかった。静脈注射の場
合は、ＬＤ５０は７ｍｇ／ラットであった。繰り返し投
与毒性研究では、毎日局所投与（性器に）の場合３．５
ｍｇ／ラットの投与量でも死んだものもなく副作用も認
められなかった。これらをまとめると、この物質は毒性
がなく臨床治験に使用できることを示唆している。
【図面の簡単な説明】
【図１Ａ】 種々の軟膏組成物による最初のＥ２までの
潜伏時間を示す。
【図１Ｂ】 種々の軟膏組成物による最初のカップまで
の潜伏時間を示す。
【図１Ｃ】 種々の軟膏組成物によるＥ２の数を示す。
【図１Ｄ】 種々の軟膏組成物によるカップの数を示
す。
【図２】標識Ｓｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰの体内への分布
の経時変化を示す。
【図３】各種標識ＶＩＰ誘導体の各種臓器への分布を示
す。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年１月１１日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正内容】
【書類名】 明細書
【発明の名称】 血管作動性小腸ペプチドの新規誘導体
【特許請求の範囲】
【化１】 （式中、Ｒ１とＲ２は同じであるかまたは異なり、それ
ぞれ水素、飽和または不飽和の脂肪親和性基またはＣ１
−Ｃ４ヒドロカルビルまたはカルボキシリックアシルで
あるが、ただしＲ１とＲ２の少なくとも１つは脂肪親和
性基であり；Ｙ１とＹ２は同じであるかまたは異なり、
それぞれ−ＣＨ２−または−ＣＯ−、または関連するＲ
１またはＲ２が水素である場合は結合であり；Ｘ１、Ｘ
２およびＸ３は同じであるかまたは異なり、それぞれ天
然のまたは非天然のアミノ酸であるが、ただしＸ１とＸ
３がバリンの場合Ｘ２はメチオニンではない）の配列を
有する修飾血管作動性小腸ペプチド（ＶＩＰ）のコンジ
ュゲートまたは式Ｉの配列の修飾ＶＩＰ７−２８または
ＶＩＰ１６−２８断片のコンジュゲート、およびこのよ
うなコンジュゲートの官能性誘導体。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の技術分野】本発明は構造が修飾された血管作動
性小腸ペプチド（ＶＩＰ）の新規誘導体、それらの薬剤
組成物、および男性陰萎の治療でのそれらの使用に関す
る。さらに詳しくは本発明は、精力と陰茎の勃起を向上
させるための、適当な軟膏組成物中の、脂肪親和性末端
基を含む修飾ＶＩＰコンジュゲートの合成と経皮投与に
関する。
【０００２】
【文献】 １． Ｓａｉｄ，Ｓ．ａｎｄ Ｍｕｔｔ，Ｖ．，Ｎａｔ
ｕｒｅ ２２５，８６３（１９７０）． ２． Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｐ．Ｏ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．
Ｐｈｙｓｉｏｌ．３５０，２０９（１９８４）． ３． Ｏｔｔｅｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉ
ｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊ．２８８，９（１９８４）． ４． Ｄｈｘｏｎ，Ａ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｎｄ
ｏｃｒｏ．１００，２４９（１９８４）． ５． Ｇｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ３１５
（１９８４）． ６． Ｇｏｚｅｓ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉ
ｎｏｌｏｇｙ １２５，２９４５（１９８９）． ７． ＥＰ−０ ３５４ ９９２ Ａ２；Ｕ．Ｓ．５，
１４７，８５５． ８． Ｗａｇｎｅｒ，Ｇ．ａｎｄ Ｇｅｒｓｔｅｎｂｅ
ｒｇ，Ｔ．，Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｕｒｏｌ． ５ １７１
（１９８７）． ９． ＵＳ ４，６０５，６４１． １０． Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．，Ｊ．Ａｍ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９（１９６３）． １１． Ｓｔｅｕａｒｔ，Ｊ．Ｍ．ａｎｄ Ｙｏｕｎ
ｇ，Ｊ．Ｄ．，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｃｏｒｐ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，１１１．，１９
８４（２ｎｄｅｄｉｔｉｏｎ）． １２． Ｏｋｕｍｕｒａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅ
ｍ． Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３７，１３７５（１９８
９）． １３． Ｓａｆｈｓｈｓ，Ｂ．Ｄ．ｉｎ “Ｈｏｒｍｏ
ｎｅｓ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｕｒ ｉｎ Ｈｉｇｈ
ｅｒ Ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓ”（Ｅｄｓ．Ｂａｌｔｈ
ａｚａｒｔ，Ｊ．Ｐｒｏｖｅ，Ｅ．ａｎｄ Ｇｉｌｌｅ
ｓ，Ｒ．）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ−Ｂｅｒｌ
ｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（１９８３）ｐ．８６． １４． Ｗｅｒｎｅｒ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１３３，２２８（１９８
５）．
【０００３】
【発明の背景と先行技術】男性陰萎は男性の少なくとも
１０−１５％を襲う広く見られる症状である。米国だけ
でも１，０００万人以上の男性がある程度の陰萎にかか
っている。原則的には４０才以上の男性は老齢化にとも
なう神経内分泌的不全による陰萎を時々経験する。
【０００４】かかった人や回りの人の生活に悪影響を与
える陰萎は、精神的または肉体的な問題のいずれによっ
ても引き起こされる。陰萎に関連する追加の問題は、特
に医師の有している従来の治療法が限られていることも
あって、患者が医師に相談に来ないことである。器質性
の原因による陰萎の治療法には、手術や移植そしてパパ
ベリンまたはフェノキシベンズアミンのような平滑筋弛
緩剤の注射がある。
【０００５】陰茎の移植による陰萎の治療には重大な短
所がある。この治療法には手術が必要であり、陰茎の勃
起組織の完全で不可逆な破壊があり、将来正常な勃起能
力が失われてしまう。
【０００６】パパベリンまたはフェノキシベンズアミン
による陰萎の治療は、しばしば持続勃起症となり、勃起
が典型的には数時間から２４時間の範囲まで固定されて
しまう。これは患者を困惑させるのみでなく、痛みがあ
り勃起組織に不可逆な障害を与える。パパベリンで持続
勃起症が起きなくても、これは注射後最初の２時間は焼
けるような痛みがあり、繰り返し使用すると海綿組織内
繊維症を引き起こす。さらにフェノキシベンズアミンは
発癌性であると考えられており、従って将来の有効な陰
萎治療薬とは考えられない。
【０００７】上記すべてを考慮すると、陰萎の他人に知
られず効率的かつ自身で調節できる治療法が望まれる。
薬剤の経皮投与は自分で調節可能であり他人に知られる
ことなく手術も必要としないため、このような治療にと
って薬剤の経皮投与は魅力的な方法と考えられる。本発
明の薬剤および薬剤組成物を用いる治療は持続勃起症を
引き起こさない。
【０００８】陰茎の勃起機構には内分泌系、神経系およ
び血管系が正常であることが必要である。最初セドとム
ット（Ｓ．Ｓａｉｄ ａｎｄ Ｖ．Ｍｕｔｔ）（１）に
単離された、広範囲の生理作用を示す血管作動性小腸ペ
プチド（ＶＩＰ）は、神経伝達物質介在性の陰茎勃起の
いくつかの基準を満たすことが見いだされた（２）。Ｖ
ＩＰは海綿性平滑筋神経を分布させる繊維中に見いださ
れた。これはまた勃起中に増加しており（３、４）、陰
萎の男性では減少していた（５）。さらに外来性ＶＩＰ
を注射すると男性に陰茎の勃起を引き起こした（３）。
ＶＩＰの全身性注射は、実験的に雄の能力を低下させた
ラットの性行動を刺激し、ＶＩＰの脂肪親和性誘導体お
よびＶＩＰ７−２８とＶＩＰ１６−２８断片は経皮投与
すると性行動を上昇させる（７）ことが最近証明され
た。正常対象者の研究で、正常男性の海綿体中に２０μ
ｇのＶＩＰを注射すると性的刺激を与えなくても陰茎が
わずかに膨張したが勃起は引き起こさないことが証明さ
れた。しかし性的刺激を与えた場合わずか１μｇのＶＩ
Ｐの海綿体への投与で完全な勃起が促進された（８）。
【０００９】天然のＶＩＰ配列のアミノ酸のいくつかが
他のアミノ酸で置換されており、１位（いわゆるＮ−末
端）のヒスチジンは随時アセチル化されている既知のＶ
ＩＰ類似体（９）もある。このような化合物による男性
の性行動の上昇は報告されていない。
【００１０】日本国際４−５９７９４号（１９９２年２
月２６日発行）は、注射投与による陰萎の治療と気管支
収縮の防止を適応症とする、Ｌ−ロイシン−１７−ＶＩ
Ｐ−ＨＳｅ−ＮＨ２で表される修飾ＶＩＰのアミド化ホ
モセリン誘導体について記載している。
【００１１】本発明の目的は、男性陰萎の経皮的治療の
ための改良された薬剤と組成物を提供することである。
【００１２】
【発明の要約】ＶＩＰ、２９アミノ酸ペプチドの配列は
以下の通りである：
【化２】
【００１３】本発明は、少なくとも１つの適当な脂肪親
和性末端基を有する構造を修飾したＶＩＰは、同じ脂肪
親和性末端基（１つまたは２つ以上）を有する天然の修
飾されていないＶＩＰに比較して、経皮投与による男性
陰萎の治療に著しく有効であるという驚くべき観察に基
づいている。すなわちステロイルＶＩＰ（Ｓｔ−ＶＩ
Ｐ）のアミノ酸配列の比較的小さな変化が生物活性の上
昇を誘導する。少なくとも１つの脂肪親和性末端基を有
する修飾ＶＩＰは男性陰萎の経皮的治療の非常に魅力的
な薬剤であることが、一般に示された。さらに放射標識
ＶＩＰおよび同じ脂肪親和性末端基を有する修飾ＶＩＰ
を同量適用した時の組織への浸透の上昇が評価された。
【００１４】同様に本発明において、少なくとも１つの
脂肪親和性末端基を有する修飾したＶＩＰ７−２８とＶ
ＩＰ１６−２８断片は、組織への浸透力が改良されたた
め、対応する同じ末端基を有する非修飾断片よりも著し
い有効性を示した。
【００１５】さらにある種の担体は組織への浸透の効率
を上昇させ、上記の構造を修飾した脂肪親和性末端基含
有ＶＩＰおよび構造を修飾した脂肪親和性末端基含有Ｖ
ＩＰ７−２８とＶＩＰ１６−２８断片の薬剤組成物を、
経皮投与による男性陰萎の治療用のさらに有効な薬剤と
することが見いだされた。
【００１６】本発明において、式Ｉ
【化３】 （式中、Ｒ１とＲ２は同じであるかまたは異なり、それ
ぞれ水素、飽和または不飽和の脂肪親和性基またはＣ１
−Ｃ４ヒドロカルビルまたはカルボキシリックアシルで
あるが、ただしＲ１とＲ２の少なくとも１つは脂肪親和
性基であり；Ｙ１とＹ２は同じであるかまたは異なり、
それぞれ−ＣＨ２−または−ＣＯ−、または関連するＲ
１またはＲ２が水素である場合は結合であり；Ｘ１、Ｘ
２およびＸ３は同じであるかまたは異なり、それぞれ天
然のまたは非天然のアミノ酸であるが、ただしＸ１とＸ
３がバリンの場合Ｘ２はメチオニンではない）の配列を
有する修飾血管作動性小腸ペプチド（ＶＩＰ）のコンジ
ュゲートまたは式Ｉの配列の修飾ＶＩＰ７−２８または
ＶＩＰ１６−２８断片のコンジュゲート、およびこのよ
うなコンジュゲートの官能性誘導体が提供される。
【００１７】上記官能性誘導体は、２位と２７位の少な
くとも１つのアミノ酸残基は官能基を有する、生物活性
のあるコンジュゲートである任意の化合物である。
【００１８】Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は好ましくはロイシ
ン、イソロイシン、ノルロイシン、バリン、トリプトフ
ァン、フェニルアラニンおよびメチオニンなどの脂肪親
和性アミノ酸残基である。
【００１９】本発明の特に好ましい化合物は、上記式Ｉ
においてＸ２はノルロイシン残基であり、Ｘ１とＸ３は
それぞれバリンであり、Ｙ１は−ＣＯ−でありＲ１はＣ
１７アルキルである化合物である。
【００２０】本発明の新規化合物のペプチド鎖は固相合
成（１０、１１）による調製が最適であり、いったんこ
れらが作成されると、水素でない末端基Ｒ１Ｙ１−およ
び／またはＲ２Ｙ２−が結合される。
【００２１】Ｙ１および／またはＹ２がカルボニル基
（すなわち末端Ｒ１ＣＯ−および／またはＲ２ＣＯ−を
有する化合物）の時、Ｒ１ＣＯ−およびＲ２ＣＯ−いず
れかまたは両方とも通常のアシル化法により導入され
る。
【００２２】Ｙ１が−ＣＨ２−である本発明の化合物
（すなわち末端Ｒ１−ＣＨ２−を有する化合物）の調製
においては、Ｒ１−ＣＨ２−−ラジカルは、まずアルデ
ヒドＲ１ＣＨ＝Ｏを結合させ、次に得られるＲ１−ＣＨ
＝Ｎ−基を公知の技術により還元して導入される。末端
Ｒ２−ＣＨ２−を有する化合物は、式Ｒ２−ＣＨ２−Ｎ
Ｈ２のアミンでペプチドを切断することにより得られ
る。
【００２３】さらに方法において、活性成分として式Ｉ
の化合物、および薬剤として許容される適当な担体より
なる、哺乳動物の雄の陰萎の治療のための経皮投与用薬
剤組成物が与えられる。
【００２４】担体は好ましくは活性成分の組織への浸透
を上昇させるものの中から選択される。適当な担体の例
としてはグリセリン、潤滑剤、ニトログリセリンそして
セフゾール（ＳｅｆｓｏｌＴＭ）、およびこれらの混合
物がある。セフゾールは、グリセリルモノカプリレー
ト、プロピレングリコールジデカノエート、プロピレン
グリコールジカプリレート、グリセリルトリカプリレー
トおよびソルビタンモノカプリレートの商標（ニッコー
ケミカルズ（Ｎｉｋｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、東
京）であり、本発明の組成物において好適な担体であ
る。これらのグリセリルモノカプリレートが特に好まし
い。
【００２５】本発明はさらに、規定された種類のコンジ
ュゲートの遅延放出、コンジュゲートを含み皮膚への投
与用に適合させたアプリケーターよりなるディスペンサ
ーを与える。
【００２６】必要な場合はアプリケーター中のコンジュ
ゲートは、規定された種類の薬剤組成物中に製剤化する
ことができる。
【００２７】本発明の化合物は、特に経皮投与による男
性陰萎の治療に有用である。この治療法は先行技術に比
較していくつかの利点がある。まずこれは手術を必要と
せず組織の破壊がない。さらにこれは他の薬剤に関連す
るような持続勃起症や焼けるような痛みがない。また経
皮投与は、海綿体内注射に比較して、他人に知られるこ
となく、またはるかに便利な投与法である。さらにこの
方法は長時間の準備をすることなく自然の精力を可能に
する連続的な徐放装置の使用を可能にし、従って患者は
通常見られるように困惑することがない。
【００２８】
【図面の説明】以下の具体的な説明においては添付の図
面が参照される。
【００２９】図１Ａ、１Ｂ、１Ｃおよび１Ｄは実施例６
に記載の陰茎反射運動の生物学的試験の結果を示す。
【００３０】図２と３は実施例７に記載の皮膚への浸透
実験の結果を示す。
【００３１】
【具体的な実施態様の説明】以下の例は本発明の種々の
面を例示するが、これらは決して本発明を限定するもの
ではない。
【００３２】例１：ステロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰの
合成 上記の新規ＶＩＰコンジュゲートの合成は、本発明の最
も好ましい化合物、すなわちステアロイル−ノルロイシ
ン１７−ＶＩＰ（Ｓｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＰ）の合成によ
り示される。
【００３３】メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ＭＢＨ
Ａ）（ノバ（Ｎｏｖａ）（スイス）より購入）上のメリ
フィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）（１０、１１）の
固相法の一般原理により、機械シェーカー中でペプチド
鎖を用手法で作成する。すべての試薬、メチレンクロリ
ド（ＣＨ２Ｃｌ２）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭ
Ｐ）、およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、メ
ルク（Ｍｅｒｃｋ）（ドイツ）の分析用製品である。ト
リフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ジイソプロピルエチルアミ
ン（ＤＩＥＡ）、およびＮ、Ｎ−ジシクロヘキシルカル
ボジイミド（ＤＣＣ）はアルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃ
ｈ）（米国）より購入した。１−ヒドロキシベンゾトリ
アゾール（ＨＯＢＴ）はノバ（Ｎｏｖａ）（スイス）よ
り購入した。すべての保護したアミノ酸誘導体（Ｂｏｃ
−ＡＡ）はＬ−体であり、バケム（Ｂａｃｈｅｍ）（ス
イス）より得た。Ｎα−アミノ基は合成を通じて、ｔ−
ブチルオキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）基により保護し
た。側鎖官能基は以下のように保護した：Ｓｅｒ、Ａｓ
ｐ、Ｔｈｒはベンジルで；Ｌｙｓは２−クロロ−ベンジ
ルオキシカルボニルで；Ｔｙｒは２，６−ジクロロベン
ジルで；Ｈｉｓはベンジルオキシカルボニルで、そして
Ａｒｇはｐ−トルエンスルホニルで保護した。
【００３４】ＤＣＣ（０．４２ｇ；２ミリモル）とＨＯ
ＢＴ（０．２７２ｇ；２ミリモルを薬剤として用いて、
Ｂｏｃ−Ａｓｎ（０．４６ｇ；２ミリモル）をメチルベ
ンズヒドリルアミン樹脂（１ｇ）に結合させて合成を開
始した。アミノ酸解析から添加量（０．３９ミリモル／
ｇ）を決定した。ポリマー上の未反応の残存アミノ基
は、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中の無水酢酸とトリエチ
ルアミン（それぞれ１ｍｌと０．５ｍｌ）で反応させて
キャップをした。表１に概略を示した実験計画に従い、
Ｂｏｃ−Ａｓｎ−ＭＢＨＡ樹脂でペプチド鎖の作成を開
始した。
【００３５】
【表１】
【００３６】すべての洗浄と反応の溶媒を１０ｍｌ／ｇ
樹脂の量まで測定した。すべての結合反応は、結合反応
前にＤＣＣで調製したＢｏｃ−アミノ酸誘導体のＨＯＢ
Ｔ活性エステルを用いて行った。Ｂｏｃ−アミノ酸１−
ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル（Ｂｏｃ−ＡＡ
−ＯＢＴ）と増殖している鎖のα−アミノ酸のモル比
４：１を結合反応に使用した。数ｍｇ（約３）のポリマ
ーをピリジン−水のニンヒドリン溶液中で２分間沸騰さ
せて結合反応を追跡した。Ｂｏｃ−アミノ酸の反応は２
回行い完全に反応させた。２回目の結合反応でＢｏｃ−
ＡＡ−ＯＢＴの半分の量を使用した。原則として各結合
工程の後に、残存アミノ基は、樹脂をメチレンクロリド
中の無水酢酸（１０％）とジイソプロピルエチルアミン
（５％）で処理してキャップした。
【００３７】ペプチド鎖作成の完了後常法に従いＣＨ２
Ｃｌ２中の５０％ＴＦＡでＨｉｓのｔ−Ｂｏｃ保護基を
除去し、試薬としてＤＣＣ（０．４２ｇ；２ミリモル）
とＨＯＢＴ（０．２７ｇ；２ミリモル）を用いて新しい
遊離α−アミノ基をステアリン酸（０．３７ｇ；２ミリ
モル）に結合させた。反応は４５分進行させ、２回繰り
返した。充分に作成したペプチド−樹脂を実験計画に従
いＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した後、Ｐ２Ｏ５上で真空下で一
晩乾燥させた。保護基の脱保護と樹脂からのペプチドの
切断は無水ＨＦ法により行った。すなわちペプチド−樹
脂（１ｇ）を、１．５ｍｌのｐ−チオクレゾールとｐ−
クレゾール（１：１、ｖ／ｖ）の存在下でテフロンＴＭ
ＨＦ装置（マルチプルペプチドシステム（Ｍｕｌｔｉｐ
ｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｔｅｍ）中で、０℃で１時
間処理した。真空によりＨＦを除去し、樹脂は過酸化物
を含まないエーテルで処理し、濾過し、エーテルで洗浄
し、乾燥し、そして水中５０％の酢酸で抽出した（３×
２５ｍｌ）。水層濾液の凍結乾燥により粗ステアロイル
−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰが得られた（４００−５００ｍ
ｇ）。粗生成物を５０％酢酸水溶液に溶解し、０．１Ｎ
酢酸を溶出液として用いてセファデックスＧ−２５カラ
ム（７５×２ｃｍ）に通した。溶出を２７４ｎｍで分光
学的に追跡した。最初に現れたピークを集めた。水溶液
の凍結乾燥により、ＨＦ−切断工程で捕捉剤（ｓｃａｖ
ｅｎｇｅｒ）として加えた芳香族添加剤を含まないペプ
チドが得られた。収率は５０−７０％であった。
【００３８】セファデックス分画生成物について高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による精製を行っ
た。しかしこれは粗生成物について行うことができる。
メルク（Ｍｅｒｃｋ）ＲＰ−８カラム（７μＭ；２５０
×２５ｍｍ）で精製を行った。１０％アセトニトリル中
でペプチドを添加し、水中０．１％ＴＦＡと７５％アセ
トニトリル中０．１％ＴＦＡの線形勾配により５ｍｌ／
分の流速で溶出した。画分を集め分析ＨＰＬＣで調べた
後切り取った。得られた画分をプールし、凍結乾燥し
た。純粋なペプチドの収率は３０−３５％であった。
【００３９】生成物の純度は分析ＨＰＬＣ（メルク（Ｍ
ｅｒｃｋ）ＲＰ−８、１２５×１０ｍｍカラム）と、各
構成アミノ酸の予測値を与えたアミノ酸解析（広範囲の
酸加水分解（６Ｎ、ＨＣ１））で確認した。
【００４０】ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰはアミ
ノ酸配列が変化していないステアロイル−ＶＩＰよりも
安定である。他の脂肪親和性誘導体は全く同じ方法でＮ
ｌｅ１７−ＶＩＰに結合させる。すなわちＨｉｓのｔ−
Ｂｏｃ保護基を除去した後、上記のようにＤＣＣとＨＯ
ＢＴを用いて新しい遊離α−アミノ基を適当なカルボン
酸に結合させる。
【００４１】例２：ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ
の合成 Ｓｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ合成の別法は以下の通りであ
る。
【００４２】４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−
アミノメチル）−フェノキシ樹脂（ノバ（Ｎｏｖａ）
（スイス）より購入）上でメリフィールド（Ｍｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄ）の固相法の一般原理により、機械シェーカ
ー中でペプチド鎖を用手法で作成する。すべての試薬、
メチレンクロリド（ＣＨ２Ｃｌ２）、Ｎ−メチルピロリ
ドン（ＮＭＰ）、およひジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）はメルク（Ｍｅｒｃｋ）（ドイツ）の分析用製品で
ある。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ジイソプロピルエ
チルアミン（ＤＩＥＡ）、およびＮ、Ｎ−ジシクロヘキ
シルカルボジイミド（ＤＣＣ）はアルドリッチ（Ａｌｄ
ｒｉｃｈ）（米国）より購入した。１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）はノバ（Ｎｏｖａ）（スイ
ス）より購入した。すべての保護したアミノ酸誘導体
（ＦＭＯＣ−ＡＡ）はＬ−体であり、バケム（Ｂａｃｈ
ｅｍ）（スイス）より得た。Ｎα−アミノ基は合成を通
じて、フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）基
により保護した。側鎖官能基は以下のように保護した：
Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｔｈｒはｔ−ブチルで；Ｌｙｓはｔ−
ブチルオキシカルボニルで；Ｈｉｓはベンジルオキシメ
チル（ＢＯＭ）で；そしてＡｒｇはメトキシトリメチル
フェニルスルホニルで保護した（Ｍｔｒ）。
【００４３】工程１と２（実験計画参照）に従い、市販
のポリマー：４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−
ＦＭＯＣ−アミノエチル）−フェノキシ樹脂（０．４７
ミリモルのアミノ基／ｇ）から、ＦＭＯＣ基を除去して
合成を開始した。２つの反応容器に含まれている１０ｇ
のポリマーを使用した。各容器中の使用した溶媒の量は
２０−２５ｍｌであった。試薬としてＤＣＣ（０．８４
ｇ、４ミリモル）とＨＯＢＴ（０．５５ｇ、４ミリモ
ル）を用いて、樹脂（５ｇ）にＦＭＯＣ−Ａｓｎ（０．
９２ｇ、４ミリモル）を結合させてペプチド鎖の作成を
開始した。結合反応を繰り返した。ポリマー上の未反応
の残存アミノ基は、ＣＨ２Ｃｌ２中の無水酢酸（１０
％）とジイソプロピルエチルアミン（５％）で反応させ
てキャップをした。表２に概略を示す実験計画に従い、
ＦＭＯＣ−ＡＳｎ−樹脂からペプチド鎖作成を開始し
た。
【００４４】
【表２】
【００４５】すべての洗浄と反応の溶媒は１０ｍｇ／ｇ
樹脂の量まで測定したが、結合反応（工程１０）では約
５ｍｌ／ｇの樹脂の量を使用した。各結合工程の前にＤ
ＣＣにより調製したＦＭＯＣ−アミノ酸誘導体のＨＯＢ
Ｔ活性エステルを用いて、すべての結合反応を行った。
２：１のモル比はＦＭＯＣ−アミノ酸１−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾールエステル（ＦＭＯＣ−ＡＡ−ＯＢＴ）
と増殖しているペプチド鎖のα−アミノ基を、結合反応
に使用した。ピリジン−水中にニンヒドリン溶液中の数
ｍｇ（約３）のポリマーを２分沸騰させて、結合反応を
追跡した。ＦＭＯＣ−アミノ酸の結合反応を２回または
それ以上繰り返して完全に反応させた。２回目の（必要
な場合は他の）結合反応では、ＦＭＯＣ−ＡＡ−ＯＢＴ
の半分の量を使用した。ニンヒドリン反応が陰性であっ
た場合のみ（工程１５；実験計画参照）、次のアミノ酸
の添加を目的とする以降の工程を開始した。原則的に各
結合工程の完了の後に、メチレンクロリド中の無水酢酸
（１０％）とジイソプロピルエチルアミン（５％）で樹
脂を処理して、残存しているアミノ基をキャップした。
【００４６】ペプチド鎖作成が完了した後、常法に従い
ＤＭＦ中のピペリジンによりＨｉｓのＦＭＯＣ保護基を
除去し、試薬としてＤＣＣ（０．８４ｇ、４ミリモル）
とＨＯＢＴ（０．５４ｇ、４ミリモル）を用いて新しい
遊離α−アミノ基をステアリン酸（０．７４ｇ、４ミリ
モル）に結合させた（各反応容器中）。反応を１２０分
進行させ、２回繰り返した。充分作成したペプチド−鎖
を含む樹脂を、実験計画に従いＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、
次にＰ２Ｏ５上で真空下で一晩乾燥させた。保護基の脱
保護と樹脂からのペプチドの切断は以下のようにして行
った。１ｇの乾燥樹脂を１００ｃｃのフラスコ中に入
れ、ここにリオアニゾール（２ｍｌ）とエタンジチオー
ル（２ｍｌ）を加えた。この混合物を氷浴中で４℃に冷
却し、２０ｍｌのトリフルオロ酢酸を加え、５分後トリ
フルオロエメタンスルホン酸（２ｍｌ）も加えた。この
混合物を室温で５０分静かに攪拌した。
【００４７】反応混合物を４℃に冷却し、５００ｍｌの
無水エーテル中に注いだ。４℃で６０分攪拌した後、固
形物質（樹脂とペプチド）をシンターロート中で濾過
し、無水エーテルで洗浄、乾燥し、次に５０％酢酸水溶
液（１００ｍｌ）で抽出した。ペプチドを含む得られた
溶液を高真空中で濃縮し、残渣（約１５ｍｌ）をセファ
デックスＧ２５カラム（４５×６ｃｍ）にのせた。カラ
ムを０．１Ｎ酢酸で４５ｍｌ／時間の流速で溶出した。
溶出を２７４ｎｍで追跡した。目的の画分を含む水溶液
の凍結乾燥により、酸分解切断工程で捕捉剤として加え
た芳香族添加物を含まないペプチドが得られた。収率は
約４００ｍｇの白色の粉末であった。
【００４８】この物質は広範囲の酸加水分解後のアミノ
酸解析により、目的のアミノ酸含量と比率を示した。セ
ファデックス分画生成物について高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）によりさらに精製を行った。しかし
これは粗生成物について行うことができる。メルク（Ｍ
ｅｒｃｋ）ＲＰ−８カラム（７μＭ；２５０×２５ｍｍ
カラム）で精製を行った。水中の３５％アセトニトリル
中でペプチドを添加し、３５％アセトニトリルと水中
０．１％ＴＦＡと７５％アセトニトリル中０．１％ＴＦ
Ａの線形勾配により１０ｍｌ／分の流速で溶出した。画
分を集め分折ＨＰＬＣで調べた後切り取った。得られた
画分をプールし、凍結乾燥した。純粋なペプチドの収率
は３０−３５％であった。
【００４９】例３．Ｒ１−ＣＨ２−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ
誘導体の調製 実施例１に記載したようにポリマー支持体、メトイルベ
ンズヒドリルアミン樹脂（ＭＢＨＡ）（０．３９ミリモ
ルＡｓｎ／ｇ）上でペプチド鎖を作成する。最後のアミ
ノ酸残基（ヒスチジン）取り込みの後、Ｎ−α−保護基
（ｔ−Ｂｏｃ）をＴＦＡにより除去し、ポリマーをＤｌ
ＥＡで処理し、洗浄し、ニンヒドリン試験をする。次に
ポリマーをエチルアルコール（１ｇ／１０ｍｌ）に懸濁
し、対応するアルデヒドＲ’−ＣＨ＝Ｏを加え（１当量
の遊離Ｎ−末端アミノ基に対して３−４当量のアルデヒ
ド）、混合物を室温で一晩静かに攪拌する。ポリマーを
濾過し、エタノールで洗浄し（３×１０ｍｌ）、エタノ
ールとＮａＢＨ４（１当量のシッフ塩基（Ｒ’−ＣＨ＝
Ｎ−Ｈｉｓ．．．）に対し３−４当量の還元剤）に再懸
濁し、混合物を室温で２時間静かに攪拌する。あるいは
ＮａＢＨ３ＣＮ（１当量のシッフ塩基に対し３−４当
量）を用いることもできる（０．１−０．２ｍｌの酢酸
の存在下）。縮合と還元反応は他の溶媒（例えばＤＭＦ
またはＮＭＰ）中で行うこともできる。還元反応完了
後、ポリマーを濾過し、洗浄し乾燥し、ステアロイル−
Ｎｌｅ１７−ＶＩＰで記載したようにＨＦで処理する。
粗生成物は例１に記載の方法と同じ方法で精製して、目
的の最終生成物を得る。
【００５０】生成物の純度は分析ＨＰＬＣ（メルク（Ｍ
ｅｒｃｋ）ＲＰ−８、１２５×４ｍｍカラム）と、広範
囲の酸加水分解（６Ｎ ＨＣｌ）後各構成アミノ酸の予
測値を与えるアミノ酸解析により確認した。
【００５１】上記と同様の方法を用いてＶＩＰの以下の
ステロイル類似体が得られた： Ｓｔ−Ｌｅｕ５、Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ Ｓｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ Ｓｔ−Ｌｅｕ５、Ｌｅｕ１７−ＶＩＰ Ｓｔ−Ｔｈｒ５−ＶＩＰ
【００５２】生成物の純度はステアロイル−Ｎｌｅ１７
−ＶＩＰのように分析ＨＰＬＣと、各構成アミノ酸の予
測値を与えるアミノ酸解析により確認した。
【００５３】例４：Ｒ１−Ｙ１−ＮＨ−Ｎｌｅ１７−Ｖ
ＩＰ−ＮＨ−Ｒ２の調製 最初のアミノ酸（Ｂｏｃ−Ａｓｎ）を次のようにして１
％架橋クロロメチル化ポリスチレン（ケマログ（Ｃｈｅ
ｍａｌｏｇ）、サウスプレインフィールド（Ｓｏｕｔｈ
Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ）、ニュージャージー州、米
国）に結合させた：無水エタノール（３５ｍｌ）中のア
ミノ酸誘導体（５ミリモル；１．１６ｇ）にトリエチル
アミン（４．７５ミリモル；０．６６ｍｌ）を加え、混
合物を室温で５分放置した。次にポリマー（５ｇ）を加
え、混合物を７８℃で６０時間静かに還流させた。ある
いは５ミリモルのＢｏｃ−Ａｓｎをエタノール（１２ｍ
ｌ）と水（３ｍｌ）の混合液に溶解し、ＣｓＣＯ３の２
０％水溶液でｐＨを７．５に調製した。ベンゼンで溶液
を３回フラッシュ蒸発させ、残渣をデシケーター中でＰ
２Ｏ５上で５時間乾燥させた。次にＤＭＦ（３０ｍｌ）
を加えて物質を溶解し、次に５ｇのポリマーを加えて混
合物を５０℃で３６時間攪拌した。アミノ酸解析により
のせる量（０．４ミリモル／ｇ）を決めた。
【００５４】ペプチド鎖の作成は例１のように行った。
しかしＢｏｃ−Ａｓｎ（β−ベンジルエステル）の代わ
りにＢｏｃ−Ａｓｎ（β−シクロヘキシルエステル）を
用いた。シクロヘキシル基はアミノ分解に対して安定で
ある。目的のペプチド鎖の作成が完了後、ポリマーを洗
浄し上記したように乾燥した。次に生成物を無水エタノ
ール、またはエタノールとＤＭＦの１：１ｖ／ｖ混合物
（１ｇ／１０ｍｌ）に懸濁し、次に対応するアミン（Ｒ
２−ＮＨ２；２０ミリモル）を加え、混合物を室温で４
８時間静かに攪拌した。Ｎ−ブタノール：酢酸：Ｈ
２Ｏ：ピリジン（１５：３：１２：１０ｖ／ｖ）を溶媒
系として用いてＴＬＣにより、ポリマー支持体から離れ
た生成物が現れた。このポリマーをエタノール（３×１
０ｍｌ）、ＤＭＦ（３×１０ｍｌ）で抽出し、溶媒を高
真空で除去し、油性で半固体の残渣を上記のようにＨＦ
で処理して側鎖保護基を除去した。粗生成物はステアロ
イル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰで記載した方法と同じ方法で
精製して、目的の最終生成物を得た。
【００５５】例５：軟膏組成物 以下の軟膏組成物を調製し、本発明の脂肪親和性コンジ
ュゲート化修飾ＶＩＰ誘導体の経皮投与について試験し
た。修飾していないＶＩＰ誘導体の同様のコンジュゲー
トを比較のために試験した。
【００５６】１．担体としてグリセリンを含む軟膏：こ
の軟膏は以下のようにして調製した：２ｇグリセリン＋
１０ｍｇステアロイル−ＶＩＰ＋７滴のＤＭＳＯ（ジメ
チルスルホキシド）。各ラットに、約１０μｌの軟膏中
３０−５０μｇのステアロイル−ＶＩＰを与えた（図１
のＧＬＹ）。
【００５７】２．担体として潤滑剤を含む軟膏：この軟
膏はグリセリンだけを潤滑剤（Ｋ−Ｙブリケーティング
ジェリー（Ｋ−Ｙ Ｌｕｂｒｉｃａｔｉｎｇ Ｊｅｌｌ
ｙ）、ジョンソンアンドジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ
＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ）、プロピレングリコールとグリセ
リンを含む）で置換して、上記のようにして調製した。
７滴のＤＭＳＯは約１３０μｌに等しい。（図１のＬＵ
Ｂ）。
【００５８】３．担体として潤滑剤とニトログリセリン
を含む軟膏 １．７ｍｌのニトログリセリン（１ｍ／ｍｌ）で上記
（２）のようにして調製した（図１のＬＵＢ−ＮＴ
Ｇ）。
【００５９】４．担体としてセフゾール（Ｓｅｆｓｏ
ｌ）３１８ＴＭを含む軟膏 この軟膏の組成は以下の通りである：３１．２μｌの１
０％セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８ＴＭ（グリセリ
ルモノカプリレート）、３１．２μｌのＤＭＳＯ中０．
２４ｍｇのステアロイル−ＶＩＰ（１匹当り１−２μ
ｌ）（図１のＳＥＦＳ）または３１．２μｌのＤＭＳＯ
中０．２４ｍｇのステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ
（図１のＳＥＦＳ）。
【００６０】例６：陰茎反射の生物試験 生物試験では、修飾したＶＩＰコンジュゲートまたはそ
のままのＶＩＰコンジュゲートの経皮投与後の睾丸摘出
ラットで陰茎反射を測定した。最初のタイプの生物実験
では、種々の担体を有するステアロイル−ＶＩＰの組成
の陰茎反射に対する影響を測定し、セフゾール（Ｓｅｆ
ｓｏｌ）が最も有効な担体であることがわかった。さら
に別の実験では、セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８
ＴＭと組成物になったステアロイル−ＶＩＰの効果を、
セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８ＴＭと組成物になっ
たステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰと比較した。
【００６１】第２のタイプの生物実験では、いくつかの
放射標識したＶＩＰ誘導体の種々の組織での分布を追跡
した。
【００６２】（ａ）方法陰萎の動物モデル 睾丸摘出により性機能が低下しているラットを使用し
た。雄のラット（２５０−３００ｇ、約３月令）を、１
２時間明るく１２時間暗いサイクルの中に保持した。実
験はいつも暗い期間に行った。雄のラットの睾丸を摘出
し、１４−２１日間毎日注射する形で、部分テストステ
ロン補充（体重１００ｇ当り４μｇ）を行った。実験は
手術後１週間目に行った
【００６３】陰茎反射（勃起）の直接評価 薬剤の経皮投与の後に陰茎勃起の直接評価を可能にす
る、陰茎の性的反射を測定する方法を用いた。うまく再
現できるかどうかは、暫定的に組織し機能的に関連する
行動単位が正確に働くか否かに大きく依存する。これら
の実験では我々は勃起過程の最終段階（陰茎が赤くなっ
て、膨張と伸張をともない完全に勃起すること）に集中
し、最初のＥ２とカップ（ｃｕｐ）（１３）までの潜伏
時間を追跡した。
【００６４】試験のために各ラットをあおむけにして、
体の前側をゆるく取り付けた円筒形でおおった（直径７
ｃｍ）。胴体の回りにベルトを取り付け、陰茎亀頭を鞘
から突き出させて、陰茎の後部に取り付けた薄い木のア
プリケーターで腹部に対して垂直になるように保持し
た。雄の足は観察者が押え、実験の間この状態を維持し
た。１回の実験は４５分間である。Ｅ２とカップの潜伏
時間と数を記録しプロットした。
【００６５】Ｅ２は、陰茎の先がカップ状の構造になる
カップが後に続く完全勃起と定義され、亀糖は膨れ上が
り、陰茎の末端がその基部より大きくなる。この最終段
階にはＥ２が必要であり、おそらく射精には必須と考え
られる（１３）。すべての変数を使用して、試験したラ
ットの精力の信頼できる尺度が得られる。
【００６６】（ｂ）結果 ステアロイル−ＶＩＰとステアロイル−Ｎｌｅ１７−Ｖ
ＩＰ（Ｓｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ）よりなる異なる軟膏
組成物の局所投与の陰茎反射への影響を図１Ａと１Ｂに
示す。
【００６７】各変数につき６から１０匹のラットをこの
方法で試験した。対照ラットにはＳｔ−ＶＩＰまたはＳ
ｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰのない軟膏組成物を与えた。
【００６８】図１Ａ：最初のＥ２までの潜伏時間 図１Ａに示すように、セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１
８ＴＭ中のＳｔ−Ｎｌｅ１７一ＶＩＰよりなる組成物を
用いた時、最初のＥ２までの最も短い時間が観察された
（レーン５のＳＥＦＳ＊）。この組成物のＥ２潜伏時間
は約１分である。
【００６９】図１Ｂ：最初のカップまでの潜伏時間 再び図１Ａに示すように、セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）
３１８ＴＭ中のＳｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰの経皮投与の
後に、最初のカップまでの最も短い時間が観察された
（レーン５、ＳＥＦＳ＊、最も短い潜伏時間＝１０
分）。
【００７０】図１Ｃ：Ｅ２の数 図１Ａと１Ｂに一致してセフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３
１８ＴＭ中のＳｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰの組成物を用い
てラットを治療した時、Ｅ２の最大数が得られる（レー
ン５のＳＥＦＳ＊）。この組成物を用いた時のＥ２の数
は、ステアロイル−ＶＩＰやセフゾール（Ｓｅｆｓｏ
ｌ）３１８ＴＭの組成物で観察されるＥ２の数よりはる
かに多い（レーン４のＳＥＦＳ＊）。これらの結果は構
造を修飾したＶＩＰコンジュゲートの優秀性を明白に示
している（試験期間中Ｅ２は３４対２４）。
【００７１】図１Ｄ：カップの数 上記図に一致してセフゾール（Ｓｅｆｓｏ１）３１８
ＴＭ中のＳｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰを含有する組成物を
用いて観察されたカップの数が最大である（レーン５の
ＳＥＦＳ＊）。ステアロイル−ＶＩＰおよびＳｔ−Ｎｌ
ｅ１７−ＶＩＰと一緒にセフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３
１８ＴＭを用いるカップの数は、それぞれ１２と２０で
あった（レーン４とレーン５を比較）。
【００７２】これらのすべての実験の主要な結論は、ス
テアロイル−ＶＩＰのアミノ酸配列の比較的小さな変更
（すなわち１７位のＭｅｔをＮｌｅで置換）が精力を刺
激する薬剤の有効性を大きく増加させることである
【００７３】第２の結論はセフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）
３１８ＴＭは、ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰとと
もにステアロイル−ＶＩＰの経皮投与用の最も適した担
体であることである。試験した４つのすべての変数によ
ると、ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰを含むセフゾ
ール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８ＴＭを含有する組成物の経
皮投与は、セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８ＴＭとス
テアロイル−ＶＩＰの組成物よりも効率的である。
【００７４】例７：皮膚浸透実験と体内分布 これらの実験は２群に分けられる。第１の群の実験で
は、放射標識ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ（セフ
ゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８ＴＭ中）の経皮投与した
時の体の種々の臓器への分布の経時変化を求めた。第２
の群の実験では、セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）３１８
ＴＭとの４つの放射標識ＶＩＰ誘導体の経皮投与後の浸
透を比較している。各データの点には２から４匹のラッ
トを使用した。誘導体はクロラミンＴ法（１４）を用い
て１２５Ｉで標識した。
【００７５】第１の群の実験ではステアロイル−Ｎｌｅ
１７−ＶＩＰを１２５Ｉで放射標識した。各ラットに
は、６μｌの放射性物質＋２６μｌ軟膏（例５の軟膏Ｎ
ｏ．４）中の２２０万ＣＰＭを与えた。各時間の点には
２つの独立した実験で２匹のラットを使用した。口から
の吸入を避けるためラットの口をシールした。局所投与
の後指定した時間にラットを殺し、２重に組織試料を取
り、重さを計りガンマカウンター中で計測した。測定し
た組織は肺（ＬＵ）、心臓（ＨＥ）、腎臓（ＫＩ）、肝
臓（ＬＩ）および小腸（ＩＮ）である。
【００７６】図２に示す結果は、投与後１５−６０分に
ピークの分配があり、２．５時間後にステアロイル−Ｎ
ｌｅ１７−ＶＩＰが消失した
【００７７】第２の群の実験では、セフゾール（Ｓｅｆ
ｓｏｌ）３１８ＴＭとＶＩＰ、Ｓｔ−ＶＩＰ、Ｎ１ｅ
１７−ＶＩＰおよびＳｔ−Ｎ１ｅ１７−ＶＩＰの組成物
を調製した。図２のように実験を行ったが、各ラットに
は２．４万ＣＰＭを与えたところが異なる。各変数につ
き２−４匹のラットを使用した。薬剤の投与３０分後に
ラットを殺した。
【００７８】図３に示す結果は性反射の結果に一致し、
最高濃度はＳｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰについて観察さ
れ、これが最も効率的薬剤である。
【００７９】陰茎反射実験のように、最後の実験は皮膚
浸透と組織分布の点から他の誘導体に比較してＳｔ−Ｎ
ｌｅ１７−ＶＩＰの優秀性を示している。
【００８０】例８：毒性研究： ステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰの毒性の程度と副作
用を調べるために、２つのタイプの実験を行った：１．
急性毒性研究；２．繰り返し投与毒性研究。
【００８１】薬剤は以下のように調製した：５３９ｍｇ
のステアロイル−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰ＋２．３１ｍｌの
１０％セフゾール（Ｓｅｆｓｏｌ）＋２．３１ｍｌ ４
０％イロプロパノール。実験動物はラットである（体重
１６０−３００ｇ）。
【００８２】急性毒性研究では、３つの投与ルートを選
んだ：１．皮下；２．静脈注射；３．経口。皮下投与と
経口投与の場合、７ｍｇ／ラット（これは生物学的に活
性な投与量の１０００倍である）の投与量で死んだもの
はなく重大な副作用も認められなかった。静脈注射の場
合は、ＬＤ５０は７ｍｇ／ラットであった。繰り返し投
与毒性研究では、毎日局所投与（性器に）の場合３．５
ｍｇ／ラットの投与量でも死んだものもなく副作用も認
められなかった。これらをまとめると、この物質は毒性
がなく臨床治験に使用できることを示唆している。
【図面の簡単な説明】
【図１Ａ】種々の軟膏組成物による最初のＥ２までの潜
伏時間を示す。
【図１Ｂ】種々の軟膏組成物による最初のカップまでの
潜伏時間を示す。
【図１Ｃ】種々の軟膏組成物によるＥ２の数を示す。
【図１Ｄ】種々の軟膏組成物によるカップの数を示す。
【図２】標識Ｓｔ−Ｎｌｅ１７−ＶＩＰの体内への分布
の経時変化を示す。
【図３】各種標識ＶＩＰ誘導体の各種臓器への分布を示
す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 イラナ ゴゼス イスラエル国ラマット ハシャロン，ハー マル ストリート 14 (72)発明者 マティティアフ フリドキン イスラエル国レホボト，ミラー ストリー ト 23

Claims (17)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式Ｉ 【化１】 （式中、Ｒ１とＲ２は同じであるかまたは異なり、それ
    ぞれ水素、飽和または不飽和の脂肪親和性基またはＣ１
    −Ｃ４ヒドロカルビルまたはカルボキシリックアシルで
    あるが、ただしＲ１とＲ２の少なくとも１つは脂肪親和
    性基であり；Ｙ１とＹ２は同じであるかまたは異なり、
    それぞれ−ＣＨ２−または−ＣＯ−、または関連するＲ
    １またはＲ２が水素である場合は結合であり；Ｘ１、Ｘ
    ２およびＸ３は同じであるかまたは異なり、それぞれ天
    然のまたは非天然のアミノ酸であるが、ただしＸ１とＸ
    ３がバリンの場合Ｘ２はメチオニンではない）の配列を
    有する修飾血管作動性小腸ペプチド（ＶＩＰ）のコンジ
    ュゲートまたは式Ｉの配列の修飾ＶＩＰ７−２８または
    ＶＩＰ１６−２８断片のコンジュゲート、およびこのよ
    うなコンジュゲートの官能性誘導体。
  2. 【請求項２】 Ｘ２はノルロイシン（ｎｏｒｌｅｕｃｉ
    ｎｅ）である、「請求項１」記載のコンジュゲート。
  3. 【請求項３】 Ｘ２とＸ３はそれぞれバリンである、
    「請求項１」または「請求項２」記載のコンジュゲー
    ト。
  4. 【請求項４】 Ｒ１はＣ１７アルキルである、「請求項
    １」から「請求項３」までのいずれか１項に記載のコン
    ジュゲート。
  5. 【請求項５】 Ｙ１とＹ２のいずれかは−ＣＯ−であ
    り、Ｒ１−Ｙ１とＲ２−Ｙ ２のいずれかは水素である、
    「請求項１」から「請求項４」までのいずれか１項に記
    載のコンジュゲート。
  6. 【請求項６】 Ｙ１とＹ２は両方とも−ＣＯＭである、
    「請求項５」記載のコンジュゲート。
  7. 【請求項７】 Ｙ１とＹ２のいずれかは−ＣＨ２−であ
    り、Ｒ１−Ｙ１とＲ２−Ｙ２のいずれかは水素である、
    「請求項１」から「請求項５」までのいずれか１項に記
    載のコンジュゲート。
  8. 【請求項８】 Ｙ１とＹ２は両方とも−ＣＨ２−であ
    る、「請求項７」記載のコンジュゲート。
  9. 【請求項９】 ２位から２７位までのアミノ酸残基の少
    なくとも１つは官能基を有する、「請求項２」から「請
    求項８」までのいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  10. 【請求項１０】 ステアロイル−ノルロイシン１７−Ｖ
    ＩＰ。
  11. 【請求項１１】 修飾ＶＩＰ７−２８またはＶＩＰ
    １６−２８断片のコンジュゲートである、「請求項１」
    記載のコンジュゲート。
  12. 【請求項１２】 随時薬剤として許容される担体ととも
    に、「請求項１」から「請求項１０」までのいずれか１
    項に記載のコンジュゲートを活性成分として含有する、
    経皮投与用の薬剤組成物。
  13. 【請求項１３】 上記薬剤として許容される担体は、グ
    リセリン、潤滑剤、ニトログリセリン、グリセリルモノ
    カプリレート、プロピレングリコールジデカノエート、
    プロピレングリコールジカプリレート、グリセリルトリ
    カプイリレートそしてソルビタンモノカプリレート、お
    よびこれらの混合物よりなる群から選択される、「請求
    項１１」記載の薬剤組成物。
  14. 【請求項１４】 上記活性成分はステアロイル−ノルロ
    イシン１７−ＶＩＰであり、上記薬剤として許容される
    担体はグリセリルモノカプリレートである、「請求項１
    ２」または「請求項１３」記載の薬剤組成物。
  15. 【請求項１５】 男性陰萎の治療用の薬剤組成物の調製
    のための、「請求項１」から「請求項１０」までのいず
    れか１項に記載のコンジュゲートの使用。
  16. 【請求項１６】 「請求項１」から「請求項１１」まで
    のいずれか１項に記載のコンジュゲートを含む、皮膚へ
    の投与用に適合させたアプリケーターよりなる遅延放出
    型経皮ディスペンサー。
  17. 【請求項１７】 上記コンジュゲートは「請求項１２」
    から「請求項１４」までのいずれか１項に記載の組成物
    の型である、「請求項１５」記載のディスペンサー。
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