JPH0622624B2

JPH0622624B2 - 低比重リポ蛋白質吸着材の再生方法

Info

Publication number: JPH0622624B2
Application number: JP60167498A
Authority: JP
Inventors: 徹黒田; 直邦山脇
Original assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1985-07-31
Filing date: 1985-07-31
Publication date: 1994-03-30
Anticipated expiration: 2009-03-30
Also published as: JPS6227967A

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、血漿脂質の増加に起因する各種疾患と密接な
関係を持つと考えられている低比重リポ蛋白質を選択的
に吸着除去する低比重リポ蛋白質吸着材の再生方法に関
する。

周知の如く、血液中の脂質、特に低比重リポ蛋白質の増
加、動脈硬化の原因あるいは進行と密接な関係を持つて
いると考えられている。動脈硬化が進むと心筋梗塞、脳
梗塞等循環器系の重篤な症状に陥る可能性が非常に高く
なり、死亡率も高い。

そこで、血液、血漿等の体液成分かから低比重リポ蛋白
質を選択的に吸着除去することによつて、上記の如き疾
患の進行を防止し、症状を軽減せしめ、さらには治ゆを
早めることが期待されていた。

（従来の技術）上記目的に使用可能な既存の技術には、アガロースゲル
にヘパリンを固定化した吸着材による吸着〔ルピエン
ピージエイら，アニユーアブローチトウーザ
マネージメントオブフアミリアルハイバーコレ
ステローレミア，リムーバルオブプラズマコレス
テロールベーストオンザプリンシプルオブ
アフイニテイークロマトグラフイー，ランセツト（Lu
pien，Ｐ−Ｊ，et.al.：Ａ new approach to the mana
gement of familial hypercholestero−lemim.Removal
of plasma−cholesterol bosed on the principle of a
ffinity chromato−graphy.Lancet），２：１２６１〜
１２６４，１９７６〕およびガラスパウダーまたはガラ
スビーズを用いたクロマトグラフイー〔カールソンエ
ルエー，クロマトグラフイツクセパレーシヨンオ
ブシーラムリポプロテインズオングラスパウダ
ーカラムズ，デスクリプシヨンオブザメソツド
アンドサムアプリケーシヨンズ，クリニカチミ
カアクタ（Carlson,L,A.：Chromatographic separati
on of seurm Iipoproteins on glass Powder colums.De
scription of the method and some applications.Cli
n.Chim.Acta），５：５２８〜５３８，１９６０〕があ
る。

また、最近になつて、体外循環による低比重リポ蛋白質
の吸着除去に適した改良発明（特開昭５９−１０２４３
６）や、低比重リポ蛋白質の吸着能力をさらに高めた吸
着材の発明（特願昭５８−８０７７７、特願昭５８−８
０７７８）がなされるようになり、技術的には進歩して
きた。

また、これらの吸着材で体液を処理し、低比重リポ蛋白
質を吸着除去した後、該吸着材から低比重リポ蛋白質を
脱着させ、吸着材を再生し、再使用しようとする試みも
なされてきた。

例えば、ヘパリンを固定化した吸着材の場合は、５％塩
化ナトリウムにより、リポ蛋白を洗浄する方法〔エドウ
インエーバーグタラーら，ラボラトリースタデ
イ，リムーバルオブプラズマリポプロテインズ
フロムサーキユレーテイングブラツドウイズア
ヘパリン−アガロースカラム，メイヨークリニツ
クプロシーデイング（Edwin A. Burgstaler et.al.：
Labolatory Study,Removal of plasma lipo-proteins f
rom circulating blood with a Heparin-Agarose colum
n.Mayo Clin Proc），５５：１８０〜１８４，１９８
０〕であり、ガラスを用いる場合には、potassium bica
rbonate-carbonate buffer（ｐＨ8.8,9.6,9.8およびC
O₃）でリポ蛋白を溶出する方法〔カームソンエルエ
ー，クロマトグラフイツクセパレーシヨンオブシ
ーラムリボプロテインズオングラスパウダーカラ
ム，デスクリプシヨンオブザメソツドアンド
サムアプリケーシヨンズ，クリニカチミカアクタ
（Carlson,L,A.：Chromatographic separation of seru
m lipoproteins on glass powder column.Description
of the method and some applicati-ons.Clin.Ctim.Act
a），５：５２８〜５３８，１９６０〕がある。

（発明が解決しようとする問題点）しかしながら、これらの吸着材再生方法は、従来の吸着
性能があまり高くない吸着材に対する再生手段としては
充分であつたとしても、最近の低比重リポ蛋白質吸着性
能の向上したポリアニオン系吸着材に対して、上記した
ような吸着材再生方法を適用してみても、吸着材は充分
には再生されず、改良が望まれていた。

（問題点を解決するための手段）本発明者らは、上記した問題を解決し、簡便で安全な、
効率の良い吸着材再生方法を提供するため鋭意研究した
結果、溶離液としてｐＨ（水素イオン濃度）が１１以上
であるアルカリ性の溶液を用いることにより、驚くほど
高い効率で簡単に、しかも安全に吸着材の再生ができる
ことを見出し、本発明を完成するに至つた。

すなわち、本発明は、体液中の低比重リポ蛋白質および
／または他のカチオン性物質を吸着した、表面にポリア
ニオン部を有する低比重リポ蛋白質吸着材をｐＨ（水素
イオン濃度）が１１以上であるアルカリ性溶液で洗浄す
ることを特徴とする低比重リポ蛋白質吸着材の再生方法
である。

本発明で低比重リポ蛋白質とは、分子量が2.2×10⁶から
3.5×10⁶、水和密度が1.003から1.034（ｇ／ml）、浮上
係数（1.063）が０から20×10^-13cm・sec^-1・dyn^-1・g^-1、
直径が20.0から30.0nmのリポ蛋白（SCANU,A.M.：plasma
lipoproteins:an introduction.“The Biochemistry o
f Atherosclerosis”ed.by SCANU A≧Ｍ．，１９７９，
Ｐ．３〜８，による）を言う。

また、他のカチオン性物質とは、カルシウム、マグネシ
ウム等の多価金属イオンやカチオン性の蛋白等を言い、
表面にポリアニオン部を有する吸着材に吸着され得る物
質を言う。

次に、本発明で対象とする吸着材の構成要件について詳
細に説明する。

本発明で言う低比重リポ蛋白質吸着材のポリアニオン部
とは、１分子の分子量が６００以上であり、１分子中に
負電荷を示す官能基、すなわち、カルボキシル基（COO
H,COO^-）、スルホン酸基（SO₃H,SO₃ ^-）など血漿中で負
電荷を示す官能基を多数個持つものを言う。例示する
と、ポリアクリル酸、ポリビニルスルホン酸、ポリビニ
ルリン酸、ポリメタクリル酸等のビニル系合成ポリアニ
オン、ポリスチレンスルホン酸、ポリ−α−メチルスチ
レンスルホン酸、ポリスチレンリン酸等のスチレン系ポ
リアニオン、ビニル系アニオンの共重合体、例えば、ス
チレン・マレイン酸共重合体のようなポリアニオン、ポ
リグルタミン酸、ポリアスパラギン酸等の合成ペプチド
系ポリアニオン、poly U、poly A等の合成核酸系ポリア
ニオンや、ポリリン酸、ポリホスフエイトエステルや、
アルギン酸、ヘパリン、デキストラン硫酸等の天然ポリ
アニオン性多糖があげられる。

中でも合成ポリアニオンは、その化学的安定性に優れ、
高圧蒸気滅菌、γ線滅菌、エチレンオキサイド滅菌等に
対しても安定なものを得易く、また、分子量の調節も比
較的簡便に行なえる等の点で天然の物より優れ、推奨で
きる。また、合成により得られるポリアニオンの場合、
天然の多糖類にみられるような補体の活性化を起こし難
いポリアニオンが容易に得られるため好ましい。さら
に、ビニル系アニオンのように、担体に対して直接グラ
フト重合を行なえるものは、担体に対して分子量の大き
いポリアニオンを高保持量で固定することができる点
で、より好ましい結果を与える。

また、吸着目的物質である低比重リポ蛋白質は、直径が
約２００Åという巨大なリポ蛋白であるため、ポリアニ
オン部の構造は鎖状構造であることが好ましく、吸着材
表面から長く伸びている方が好ましい。また、ポリアニ
オン部中の負電荷密度は、分子量３００当りに少なくと
も１個あるのが好ましい。さらに好ましくは、分子量２
００当りに１個以上であり、分子量７０から１５０の単
位に１個あるのが望ましい。ここで言う分子量には、負
電荷を示す官能基の分子量も含む。ポリアニオン部の分
子量は、小さくなると低比重リポ蛋白質をあまり吸着し
なくなるので、少なくとも６００は必要である。好まし
いのは２５００以上であり、10⁴から５×10⁶の範囲がさ
らに好ましい。

ポリアニオン部が持つ多数個の負電荷を示す官能基が、
低比重リポ蛋白質の多数点を認識することにより、強い
クーロン力で低比重リポ蛋白質を結合すると考えられ
る。

負電荷を示す官能基の中では、カルボキシル基（COOH,C
OO^-）が特に好ましい結果を与える。スルホン酸基（SO₃
H,SO₃ ^-）に比べて弱酸であるため、アルブミンのような
有用蛋白質に対する吸着性が小さい。また、血液凝固系
蛋白の吸着も少なく、活性化も起こし難い。さらに、補
体系蛋白も吸着し難い。

前記したポリアニオン部の中では、ポリアクリル酸、ポ
リメタクリル酸のようなポリカルボン酸が特に安定であ
り、推奨できる。

負電荷の密度は吸着材１ml当り１μeqから１meqの範囲
が低比重リポ蛋白質の吸着性能が良く、吸着選択性が良
く、凝固線溶系、補体系への影響が少ない適当な範囲で
ある。１μeq／mlより負電荷密度が低くなると、低比重
リポ蛋白質の吸着能力が実用性能に満たず、１meqを越
えると非選択的な吸着が増え、凝固線溶系、補体系に悪
影響を与える。より好ましい範囲は５μeq／mlから７０
０μeq／ml、さらに好ましいのは１０μeq／mlから５０
０μeq／mlである。

負電荷密度の測定は、通常の陽イオン交換樹脂のイオン
交換容量測定方法に準じて行なうことができる。

本発明で言う低比重リポ蛋白質吸着材を製造する方法
は、例えば、担体を活性化し、ポリアニオンを共有結合
させる方法、担体にアニオンモノマーをグラフト重合さ
せ、ポリアニオンのグラフト鎖を形成させる方法などが
挙げられる。

担体は、ポリアニオンを固定できればよく、親水性担
体、塑水性担体いいずれも使用できるが、疎水性担体を
用いる場合には、時に担体へのアルブミンの非特異的吸
着が生じるため、親水性担体の方が好ましい結果を与え
る。

不溶性担体の形状は、粒子状、繊維状、中空糸状、膜状
等いずれの公知の形状も用いうるが、ポリアニオンの保
持量、吸着材としての取扱い性よりみて、粒子状、繊維
状のものが好ましい。

担体は、ポリアニオンを固定できれば、どのような材質
のものを用いてもよい。使用できる担体としては、セル
ロース系ゲル、デキストラン系ゲル、アガロース系ゲ
ル、ポリアクリルアミド系ゲル、シリカ、多孔質ガラ
ス、ビニルポリマーゲル等の有機または無機の多孔体が
使用でき、通常のアフイニテイークロマトグラフイーに
用いられる担体用の材料は全て用いることができるが、
被吸着物質である低比重リポ蛋白質が直径２００〜３０
０Å、分子量2.2×10⁶〜3.5×10⁶と大きいので、担体の
排除限界分子量は２２０万以上、孔の直径は２００Å以
上ある方が吸着効率が高い。

前記した担体の中でも、特にビニルアルコール単位を主
構成成分とする架橋共重合体体からなる担体は、その親
水性のため血漿中のタンパク質等溶質との相互作用が小
さく、非特異吸着を最小限に低下させる。また、血漿中
の補体系、凝固系と相互作用しない等に極めて優れた特
性を有する。物理的特性の面でも、すぐれた孔径分布を
示し、耐熱性を有し、熱滅菌を可能ならしめ、さらには
合成高分子の特性である物理的機械的強度に優れてい
る。全血用吸着材の担体として用いる場合にも、血球成
分との相互作用が少なく、血栓形成や血球成分の非特異
粘着、残血等を最小限におさえる等の極めて優れた特性
を併せ持つている。

ビニルアルコール単位を主構成成分とする架橋重合体
は、水酸基を有するモノマーの重合またはポリマーの化
学反応による水酸基の導入により合成できる。両者を併
用して合成することもできる。重合方法としては、ラジ
カル重合法を用いることができる。架橋剤は重合時共重
合により導入してもよいし、また、ポリマーの化学反応
（ポリマー間、ポリマーと架橋剤）で導入してもよく、
両者を併用してもよい。

一例をあげると、ビニル系モノマーとビニル系またはア
リル系架橋剤との共重合により作ることができる。この
場合のビニル系モノマーとしては、酢酸ビニル、プロピ
オン酸ビニル等のカルボン酸のビニルエステル類、メテ
ルビニルエーテル、エチルビニルエーテル等のビニルエ
ーテル類を例示することができる。

架橋剤としては、トリアリルイソシアヌレート、トリア
リルシアヌレート等のアリル化合物類、エチレングリコ
ールジメタクリレート、ジエチレングリコールジメタア
クリレート等のジ（メタ）アクリレート類、ブタンジオ
ールジビニルエーテル、ジエチレングリコールジビニル
エーテル、テトラビニルグリオキザール等のポリビニル
エーテル類、ジアリリデンペンタエリスリツト、テトラ
アリロキシエタンのようなボリアリルエーテル類、グリ
シジルメタクリレート等のグリシジルアクリレート類を
用いることができる。また必要に応じて、他のコモノマ
ーを共重合したものも用いることができる。

ビニル系共重合体の場合には、カルボン酸のビニルエス
テルとイソシアヌレート環を有するビニル化合物（アリ
ル化合物）を共重合し、共重合体を加水分解して得られ
るポリビニルアルコールのトリアリルイソシアヌレート
架橋剤が、強度、化学的安定性の面で特に良好な担体を
与える。

ポリアニオンを不溶性担体の表面に固定する方法は、共
有結合、イオン結合、物理吸着、包埋あるいは重合体表
面への沈殿不溶化等あらゆる公知の方法を用いることが
できるが、固定化した化合物の溶出性から考えると、共
有結合により、固定、不溶化して用いることが好まし
い。そのため通常固定化酵素、アフイニテイクロマトグ
ラフイーで用いられる公知の担体の活性化方法、リガン
ドとの結合方法、および担体または活性化担体を幹ポリ
マーとし、ポリアニオンを枝とするグラフト重合の手法
を用いることができる。

活性化方法を例示すると、ハロゲン化シアン法、エピク
ロルヒドリン法、ビスエポキシド法、ハロゲン化トリア
ジン法、ブロモアセチルブロミド法、エチルクロロホル
マート法、１，１′−カルボニルジイミダゾール法等を
あげることができる。本発明の活性化方法は、リガンド
のアミノ基、水酸基、カルボキシル基、チオール基等の
活性水素を有する求核反応基と置換および／または付加
反応できればよく、上記の例示に限定されるものではな
いが、化学的安定性、熱的安的性等を考慮すると、エポ
キシドを用いる方法が好ましく、特にエピクロルヒドリ
ン法が推奨できる。

また、シリカ系、ガラス系等のシラノール基を持つ担体
については、γ−グリシドキシプロピルトリメトキシシ
ラン、γ−アミノプロピルトリエトキシシラン、γ−メ
ルカプトプロピルトリメトキシシラン、ビニルトリクロ
ロシラン等の各種シランカツプリング剤が好ましく用い
られる。

グラフト重合法を例示すると、連鎖移動反応を利用する
方法、放射線、紫外線などによる脱水素、脱ハロゲンな
どの反応を利用する方法、過酸化物の形成を利用する方
法などがあげられるが、水酸基、チオール、アルデヒ
ド、アミンなどの還元性基を有する担体に、セリウム
塩、鉄塩などを開始剤としてアニオンモノマーをグラフ
ト重合して行く方法が簡便であり、推奨できる。また、
グラフト重合の系は、比較的分子量の大きいポリアニオ
ンを担体の内部まで固定できるので好ましく用いられ
る。

担体にポリアニオンを２種類以上結合してもさしつかえ
ない。

以上、低比重リポ蛋白質吸着材の製造方法として、担体
を活性化した後ポリアニオンを結合する方法について説
明したが、これに限定されるものではない。

本発明吸着材は、体液の導出入口を備えた容器内に充填
保持されて使用されるのが一般的である。

第１図において、１は低比重リポ蛋白質吸着材を納めて
なる低比重リポ蛋白質吸着器の一例を示すものであり、
円筒２の一端開口部に、内側にフイルター３を張つたパ
ツキング４を介して体液導入口を有するキヤツプをネジ
嵌合し、円筒２の他端開口部に内側にフイルター３′を
張つたパツキング４′を介して体液導出口７を有するキ
ヤツプ８をネジ嵌合して容器を形成し、フイルター３お
よび３′の間隙に低比重リポ蛋白質吸着材を充填保持さ
せて吸着材層９を形成してなるものである。

吸着材層９には、低比重リポ蛋白質吸着材を単独で充填
してもよく、他の吸着材と混合もしくは積層してもよ
い。他の吸着材としては、例えば、幅広い吸着能を有す
る活性炭のようなものを用いることができる。これによ
り吸着材の相乗効果によるより広範な臨床効果が期待で
きる。吸着材層９の容積は、体外循環に用いる場合、５
０〜４００ml程度が適当である。本発明の装置を体外循
環で用る場合には、大略次の二通りの方がある。一つに
は、体内から取り出した血液を遠心分離器もしくは膜型
血漿分離器を使用して、血漿成分と血球成分とに分離し
た後、血漿成分を該装置に通過させ、浄化した後、血球
成分と合わせて体内にもどす方法であり、他の一つは体
内から取り出した血液を直接該装置に通過させ、浄化す
る方法である。

体液の通液方法としては、臨床上の必要に応じ、あるい
は設備の装置状況に応じて、連続的に通液してもよい
し、また断続的に通液使用してもよい。

ｐＨ（水素イオン濃度）が１１以上のアルカリ性溶液と
は、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液、
アンモニア水溶液等のようにアルカリ性を示す溶液であ
り、そのｐＨ（水素イオン濃度）が１１以上の濃度のも
のを言う。

吸着材のポリアニオン部との相互作用で吸着材に吸着さ
れている低比重リポ蛋白質、カルシウム、マグネシウム
等のカチオン性物質が、高いｐＨの塩基性溶液で洗浄さ
れることによつて吸着平衡がずれ、吸着材から脱離して
くるものと考えられる。

塩基性溶液のｐＨは、１１より低いと低比重リポ蛋白質
吸着材の再生効率が非常に低くなり、再生するためには
多量の再生液が必要になつてくる。また、ｐＨが非常に
高いものは再生効率が非常に良くなる反面、再生後の吸
着材を中性に戻すための洗浄に手間がかかる。より好ま
しいｐＨの範囲は１２から、13.7であり、さらに好まし
いのは12.5から13.5である。

次に、低比重リポ蛋白質吸着材の再生方法について、例
を挙げて説明する。

前述のように、低比重リポ蛋白質吸着材は、通常、容器
に充填され、第１図のようなリポ蛋白質吸着器として使
用される。この低比重リポ蛋白質吸着器に体液を流し、
体液中の低比重リポ蛋白質を吸着させる。使用後、再生
を始めるわけであるが、通常、先ず、低比重リポ蛋白質
吸着器の中に残留している体液を洗い出すために、吸着
器容量の１〜１０倍容量の生理的溶液（例えば、生理食
塩水）を用いて洗浄する。この操作は、この後に用いる
再生液が、体液に対して変性、凝集等の悪影響を及ぼす
ものでない場合には、省略してもさしつかえない。

次に、吸着材の再生液を低比重リポ蛋白質吸着器に流す
わけであるが、本発明の再生液、すなわち、ｐＨが１１
以上であるアルカリ性溶液は、吸着材に吸着している低
比重リポ蛋白質の脱着効率が非常に高いので、吸着器容
量の２〜５倍容量流せば、ほぼ完全に脱着できる。流速
も極端に速くない限り任意に選択でき、温度も任意に選
択できる。

最後に、次回使用することを考え、生理的溶液に置換す
るか、または保存するための殺菌剤のような保存液に置
換する。必要によつては、生理的溶液に置換してから、
湿熱滅菌、γ線滅菌等の滅菌操作を行なつてもよい。

上記したような操作により、低比重リポ蛋白質吸着材は
再生される。

また、必要により、体外循環により血液中の低比重リポ
蛋白質を吸着除去している最中にも、低比重リポ蛋白質
吸着材を再生できる。この場合には、低比重リポ蛋白質
吸着器を２本あるいは２本以上使用し、一方を低比重リ
ポ蛋白質吸着用に、他方を再生用にという具合に２系統
に分け、無菌的に操作するのが好ましい。

（発明の効果）以上述べてきたように、本発明低比重リポ蛋白質吸着材
の再生方法によれば、非常に高い吸着能力を示し、高い
選択性を示すポリアニオン系吸着材の再生を完全に、か
つ簡便に、しかも安全に行なうことができるようになつ
たので、低比重リポ蛋白質吸着材の再使用が可能とな
り、１本の低比重リポ蛋白質吸着器で大量の低比重リポ
蛋白質を吸着することが可能となつた。

再生剤としてｐＨが１１以上のアルカリ性溶液を用いて
いるので、再生効率が良く、体外循環治療中における再
生をも可能にした。

本発明は、家族性高コレステロール血症治療用の低比重
リポ蛋白質吸着材の再生に有効であり、従来になく完全
な再生ができ、かつ安全である。

（実施例）以下、実施例により、本発明をさらに詳細に説明する。

実施例１第１図に示す低比重リポ蛋白質吸着器を用い、低比重リ
ポ蛋白質の吸着、再生、再吸着実験を行なつた。

低比重リポ蛋白質吸着器には、内径0.8cm、長さ2.0cm、
内容積mlの容器の中に低比重リポ蛋白質吸着材1.0mlを
詰めたものを用いた。

低比重リポ蛋白質吸着材は、以下に述べる方法で製造し
た。

酢酸ビニル１０００ｇ、トリアリルイソシアヌレート４
１４ｇ、酢酸エチル１０００ｇ、ヘプタン１０００ｇ、
ポリ酢酸ビニル（重合度５００）７０ｇおよび2,2′−
アゾビスイソブチロニトリル３６ｇよりなる均一混合液
と、ポリビニルアルコール１重量％、リン酸二水素ナト
リウム二水和物0.05重量％およびリン酸水素二ナトリウ
ム十二水和物1.5重量％を溶解した水とをフラスコに
入れ、十分撹拌した後、６５℃で１８時間、さらに７５
℃で５時間加熱撹拌して懸濁重合を行い、粒状共重合体
を得た。過、水洗、ついでアセトン抽出後、カセイソ
ーダ４６５ｇおよびメタノール２０よりなる溶液中
で、４０℃で１８時間、共重合体のエステル交換反応を
行つたた。得られた粒子の平均粒径は４０μｍであつ
た。

このゲルを内径7.5mm、長さ１２０cmのステンレス製カ
ラムに充填して、種々の分子量を持つデキストランやポ
リエチレングリコールの水溶液およびアルブミン、イム
ノグロブリンＧ、イムノグロブリンＭ、β−リボプロテ
イン、タバコ、モザイク、ウイルスのリン酸緩衡塩溶液
を測定したところ、それぞれ分子量の大きい順に溶出さ
れた。デキストランの排除限界分子量は約５×10⁶、タ
ンパク質の排除限界分子量は約２×10⁷であつた。ま
た、0.3Ｍ塩化ナトリウムおよび0.1Ｍリン酸ナトリウム
を含む水溶液を溶媒として、ヒト−γ−グロブリン、ヒ
ト−アルブミンの溶液を流したところ、ほとんど１００
％の回収率で回収され、ゲルの非特異的吸着は非常に少
なかつた。サンプルの測定はすべて流速は１ml／minで
実施した。

つぎにエステル交換され、水で十分に洗浄し、乾燥した
ゲル１５０ｇをジメチルスルホキシド１８００mlおよび
エピクロルヒドリン１２００mlからなる溶液中に懸濁
し、５０％水酸化ナトリウム水溶液１５０mlを加え、３
０℃にて５時間撹拌下反応させる。反応終了後ガラスフ
イルターで過し、３のジメチルスルホキシド、つい
で２０の水で洗浄してエポキシ基結合ゲルを得た。

該ゲルのエポキシ基結合量は１mlにつき0.11mmolであつ
た。該エポキシ基結合ゲルを用い、ポリアクリル酸（重
量平均分子量９×10⁴、米国アルドリツチ社製）をリガ
ドンとして結合させ、吸着材を作成した。

ポリアクリル酸4.5ｇを蒸留水で５００mlにし、これを
リガンド液とした。このリガンド液に、前記エポキシ基
結合ゲル１００mlを加え、５０℃で１６時間、振とうし
ながらリガンドの結合反応を行なつた。

この後、充分に水洗し、吸引脱水した後、0.1規定の水
酸化ナトリウム溶液中に３０分間浸し、ポリアクリル酸
をナトリウム型にし、その後、充分量の水洗を行ない、
低比重リポ蛋白質吸着材とした。

吸着実験は、家族性高コレステロール血症患者の血漿を
用いて行なつた。

先ず、低比重リポ蛋白質吸着器を生理食塩水でプライミ
ングしておき、次に、家族性高コレステロール血症患者
血漿を0.17ml/minの流速で低比重リポ蛋白質吸着器に流
した。吸着器ら流出してくる最初の生理食塩水１mlを捨
て、その後に出てくる血漿は１mlずつ試験管に受けて行
つた。血漿を１２ml流したところで、再生液として、0.
1規定の水酸化ナトリウム（ｐＨ１３）を用い、血漿と
同じ流速で５ml流した。この後、生理食塩水５mlで再生
液を洗浄した後、再び家族性高コレステロール血症患者
血漿を同流速で１２ml流し、再吸着テストを行なつた。

吸着、再生、再吸着テストの間の流出液全てについて、
そのコレステロール濃度を測定した結果が第２図であ
る。横軸が流出液の量であり、縦軸は、各々の流出液中
のコレステロールの濃度である。先ず第１回目の吸着テ
ストであるが、コレステロール（家族性高コレステロー
ル血症患者血漿であるから、ほとんどが低比重リポ蛋白
質コレステロールである）吸着量は、第２図中、斜線
部の面積で表わされ、計算すると24.6mgとなる。次に、
再生液で流出したコレステロール量は、第２図中、斜
線部の面積で表わされ、計算すると斜線部の面積に一
致し、吸着されたコレステロールの全てが再生液で脱着
し、吸着器外に流出したことがわかる。次に、２回目の
吸着テストによるコレステロール吸着量は、第２図中、
斜線部の面積で表わされるが、これも斜線部に一致
するので、低比重リポ蛋白質吸着材は、再生液で完全に
再生したことがわかる。

比較例１再生液として５％食塩水を用いたこと以外は、全て実施
例１と同様に行なつたところ、再生液により脱着したた
コレステロールは、第１回目のコレステロール再生量の
７０％であり、第２回目のコレステロール吸着量も、第
１回目の６８％と少なかつた。

すなわち、５％食塩水では、低比重リポ蛋白質吸着材の
完全な再生はできなかつた。

比較例２再生液として0.0001規定の水酸化ナトリウム溶液（ｐＨ
＝１０）を用いたこと以外は、全て実施例１と同様に行
なつたところ、再生液により脱着したコレステロール
は、第１回目のコレステロール吸着量の８５％であり、
第２回目のコレステロール吸着量も８４％と少なかつ
た。

すなわち、ｐＨ＝１０の水酸化ナトリウム溶液では、低
比重リポ蛋白質吸着材の完全な再生はできなかかつた。

実施例２再生液として、ｐＨ＝１２の水酸化カリウムム水溶液を
用いたこと以外は、全て実施例１と同様に行なつたとこ
ろ、第１回目のコレステロール吸着量、再生液によるコ
レステロールの脱着量、第２回目のコレステロール吸着
量は全て一致した。

すなわち、低比重リポ蛋白質吸着材は完全に再生され
た。

実施例３再生液として、ｐＨ＝１１の水酸化ナトリウム水溶液を
用いたこと以外は、全て実施例１と同様に行なつたとこ
ろ、再生液によるコレステロール脱着量は、第１回目の
コレステロール吸着量の９６％、第２回目のコレステロ
ール吸着量は、第１回目の９５％となり、低比重リポ蛋
白質吸着材が再生液によりほぼ完全に再生されたことが
わかつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、表面にポリアニオン部を有する低比重リポ蛋
白質吸着材を充填してなる低比重リポ蛋白質吸着器を示
す断面模式図、第２図は、実施例１の実験結果を示すグ
ラフである。１……低比重リポ蛋白質吸着器、２……円筒３，３′……フイルター、４……パツキング５……体液導入口、６，８……キヤツプ９……吸着材層

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】体液中の低比重リポ蛋白質および／または
他のカチオン性物質を吸着した、表面にポリアニオン部
を有する低比重リポ蛋白質吸着材を、ｐＨ（水素イオン
濃度）が１１以上であるアルカリ性溶液で洗浄すること
を特徴とする低比重リポ蛋白質吸着材の再生方法。