JPH0623108B2 - 腫瘍形成抑制用組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野： 本発明は温血動物において、インビトロでの腫瘍細胞に
関連する腫瘍の進行およびインビボでの実際の腫瘍の進
行を抑制することに関する。

癌という疾患は悪性腫瘍の進行によつて起こる。癌の原
因を減らしかつ克服することに膨大な医学的研究が託さ
れてきた。今日まで癌の治癒法は見出されていない。し
かし温血動物が癌に伴う苦悩を避ける機構については多
くのことが学ばれた。本発明はこれらの知見に基づい
て、腫瘍の進行を抑制する物質およびその進行を抑制す
る方法を提供する。

従来技術： 哺乳動物の体液に含まれる細胞には、リンパ球、単球、
マクロフアージおよび多形核細胞がある。これらの細胞
は下等哺乳類（たとえばけつ歯類）からヒトに至るまで
腫瘍の進行に対抗する自然の監視システムとして作用す
る。近年、“ナチユラルキラー（Natural Killer”また
は“ＮＫ”細胞と呼ばれる特定のリンパ球またはリンパ
球様細胞の小集団が腫瘍細胞を破壊し、これにより癌の
進行を阻止することが認められた。証明のウエートによ
れば、ＮＫ細胞が活性酸素種たとえば過酸化水素（H
₂O₂）、あるいは酸素含有ラジカルたとえばヒドロキシ
陰イオン（^・ＯＨ）および超酸化物陰イオン（Ｏ_２ ^・）
の発生に関連する細胞溶解活性をもつことが示唆され
る。ＮＫ細胞および活性酸素現象についてはハーベルマ
ンら“サイエンス”、２１４巻、２、１９８１年１０
月、２４−３０頁；ローデルら、“ネイチヤー”、２９
８巻、５、１９８２年８月、５６９−５７２頁；ナタン
ら、“ジヤーナル・オブ・イムノロジー”、１２９巻、
No.５、１９８２年１１月、２１６４−２１７１頁；お
よびマヴイエルら、“ジヤーナル・オブ・イムノロジ
ー”、１３２巻、No.４、１９８４年４月、１９８０−
１９８６頁に記載されている。

もちろん活性酸素種を放出する化合物は多数ある。しか
しこの因子のみがこの種の化合物が体内に導入されてＮ
Ｋ細胞の機能を補足し、あるいは腫瘍の形成が十分には
起こつていない部位へ導入されてＮＫ細胞を機能させ、
腫瘍の進行を抑制することを意味するわけではない。活
性酸素種を放出する化合物は一般にきわめて速やかにこ
れを行うが、ヒトなどの温血動物における腫瘍の進行に
対抗する効力は少なくともより緩慢なかつより持続的な
放出速度を必要とすると思われる。本発明がなされるま
では、これは効果的に達成されてはいなかつた。酸素の
放出が急速すぎると、腫瘍細胞および正常細胞が双方と
も攻撃される可能性がある。

本発明者らの米国特許第4,041,149号（１９７７年８月
９日付与）明細書には、有効成分がペルオクソジホスフ
エートである、口臭生成を抑制する種々の形態（歯科用
錠剤を含む）の組成物が記載されている。ペルオクソジ
ホスフエート化合物は、最初に急激に過酸化水素を供給
するのではないという点で大部分の酸素供給化合物と異
なる。むしろこれは過酸化水素を徐々に放出するので、
過酸化水素と等濃度のものを比較した場合、ペルオクソ
ジホスフエートにより放出される酸素の量は過酸化水素
により放出されて利用される酸素の量の１０分の１であ
る。さらに、温血動物（マウス、ラツト、ヒトなどを含
む）の体内に存在するアルカリホスフアターゼまたは酸
性ホスフアターゼの存在下では、２５℃で２０時間以内
に活性酸素の約５０％が放出されるにすぎない。

発明が解決しようとする問題点： 本発明の利点は、けつ歯類からヒトに及ぶ温血動物にお
いて、インビトロでの腫瘍細胞およびインビボでの実際
の悪性腫瘍の進行に対して腫瘍の進行が抑制されること
である。

本発明の他の利点は、徐々に酸素を放出する物質を生き
ている宿主に導入することによる腫瘍形成抑制法が提供
されることである。

問題点を解決するための手段： 特定の観点によれば本発明は、製剤用キヤリヤーに溶解
または分散したペルオクソ二リン酸の無毒性、水溶性の
薬剤学的に受容できる誘導体約0.1〜１０％の用量から
なる組成物に関する。

他の観点によれば本発明は、体重１Kg当たり約0.1〜６
ｇの無毒性用量の、ペルオクソ二リン酸の無毒性、水溶
性の薬剤学的に許容できる誘導体を製剤用キヤリヤーに
溶解または分散したものからなる組成物を、温血動物の
体重１Kg当たり１日につき約0.1〜６ｇが供給される様
式で経口摂取することにより温血動物宿主に投与するこ
とよりなる、悪性腫瘍細胞を含む腫瘍形成の抑制法に関
する。

特定の他の観点によれば本発明は、悪性腫瘍細胞を有す
る温血動物の体重１Kg当たり約0.1〜２ｇの無毒性用量
の、ペルオクソ二リン酸の無毒性、水溶性の製剤学的に
受容できる誘導体を製剤用キヤリヤーに溶解または分散
したものからなる組成物を、温血動物の体重１Kg当たり
約0.1〜２ｇが供給される様式で温血動物宿主に全身投
与することよりなる腫瘍形成抑制法に関する。

ペルオクソジホスフエート化合物（ＰＤＰ、ペルオクソ
二リン酸誘導体）は薬剤学的に受容できる無毒性化合物
であり、これは前記の米国特許第4,041,149号明細書に
示された塩を越えるものである。これらの化合物にはア
ルカリ金属（たとえばリチウム、ナトリウムおよびカリ
ウム）塩、アルカリ土金属（たとえばマグネシウム、カ
ルシウムおよびストロンチウム）塩、亜鉛塩およびスズ
塩、ならびに有機ペルオクソジホスフエートであるＣ
_1-12アルキル、アデニリル、グアニリル、シトシリルお
よびチミリルエステル、ならびに第四アンモニウム塩な
どの塩も含まれる。アルカリ金属塩、特にカリウム塩が
無機陽イオン性のもののうちでは好ましい。ペルオクソ
二リン酸四カリウムは分子量346.35および活性酸素含量
4.6％を有する安定な無臭の微細なさらさらした白色の
非吸湿性結晶性固体である。ペルオクソ二リン酸四カリ
ウムは０〜６１℃では４７〜５１％水溶性であるが、一
般の溶剤、たとえばアセトニトリル、アルコール、エー
テル、ケトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホ
キシドなどには不溶性である。２％水溶液は約9.6のpH
をもち、その飽和溶液は約10.9のpHをもつ。２５℃で１
０％水溶液は４か月後にも活性酸素の損失を示さず、５
０℃で１０％溶液は６か月間に３％の活性酸素損失を示
した。

有機塩は悪性腫瘍に対して投与するのに特に好適である
と思われる。有機エステルのうちでは、疎水性を与える
もの、たとえばＣ_1-12アルキル基を有するもの、ならび
に細胞による急速なペクオクソジホスフエート部分の取
込みを可能にするもの、たとえばアデニリル、グアニリ
ル、シトシリルおよびチミリルエステルが好ましい。

経口摂取に適した製剤は胃内pH（約１〜３）の胃酸によ
る分解に抵抗する物質でコーチングされた錠剤である。
ペクオクソジホスフエートはこのような胃酸により不活
化されるからである。固体ペルオクソジホスフエートの
打錠された顆粒を内包するキヤリヤーはこれよりも高い
pH（約5.5〜１０）をもつ腸液により溶解し、ペルオク
ソジホスフエートを不活化せず、ヒトその他の温血動物
に存在するフオスフアターゼによる酵素作用を受ける状
態に保持する。望ましい錠剤コーチング液は脂肪酸エス
テル、たとえばステアリン酸Ｎ−ブチル（一般に約４０
〜５０重量部、好ましくは約４５重量部）；ろう、たと
えばカルナウバろう（一般に約１５〜２５重量部、好ま
しくは約２０重量部）；脂肪酸、たとえばステアリン酸
（一般に約２０〜３０重量部、好ましくは２５重量
部）；およびセルロースエステル、たとえば酢酸フタル
酸セルロース（一般に約５〜１５重量部、好ましくは約
１０重量部）；および有機溶剤（一般に約４００〜９０
０部）よりなる。他の望ましいコーチング材料にはセラ
ツク、および無水マレイン酸とエチレン系化合物のコポ
リマー、たとえばポリビニルメチルエーテルが含まれ
る。この種のコーチングは、錠剤材料が一般にマンニト
ール約８０〜９０重量部およびステアリン酸マグネシウ
ム約３０〜４０重量部を含む、口腔内で分解される錠剤
とは異なる。

打錠されたペルオクソジホスフエート顆粒はペルオクソ
ジホスフエート約３０〜５０重量部を固体ポリヒドロキ
シ糖（たとえばマンニトール）約４５〜６５重量部とブ
レンドし、ポリヒドロキシ糖化合物溶液（たとえばソル
ビトール）約２０〜３５重量部で湿潤させ、篩分けして
サイズを一定にし、結合剤（たとえばステアリン酸マグ
ネシウム）約２０〜３５重量部とブレンドし、顆粒を打
錠機により圧縮して錠剤にすることにより製造される。
打錠された顆粒はこれにコーチング材料の溶液の泡を吹
付け、乾燥させて溶剤を除去することによつてコーチン
グされる。この種の錠剤は、一般に特別な保護コーチン
グのない圧縮された歯科用錠剤とは異なる。

投与が口径摂取によるものである場合、指示された様式
によるペルオクソジホスフエートの有効投与量は約0.1
〜６ｇ／Kg（体重）／日であり；投与が全身的なもの、
たとえば筋肉内、腹腔内または静脈内注射によるもので
ある場合、用量は約0.1〜２ｇ／Kg（体重）／日であ
る。

生理学的に受容できる発熱物質不含の溶剤は全身投与の
ために技術的に認められた様式で用いるのに適したキヤ
リヤーである。リン酸塩で約７〜7.4の生理的pHに緩衝
化された食塩液は全身投与のために好ましいキヤリヤー
である。この種の溶剤は歯みがき剤に一般に用いられる
保湿剤ビヒクルとは異なる。この種の液剤は一般に、脱
イオンした蒸留水を滅菌し、ツジらが“薬剤製造”（１
９８４年１０月、３５−４１頁）に記述したカブトガニ
アメーバ様細胞溶解質（ＬＡＬ）試験により発熱物質不
含であることを確認する検査を行い、次いでこれに発熱
物質不含の滅菌水中に調製されたリン酸塩緩衝液（たと
えばpH約8.5〜１０）およびペルオクソジホスフエート
誘導体約１〜１００mg、および約0.5〜1.5重量％の濃度
となる塩化ナトリウムを添加することにより調製され
る。この溶液は微孔質フイルターを通すことにより再度
滅菌したのち、使用するためにバイアルに充填される。
代替として塩化ナトリウム0.86重量％、塩化カリウム0.
03重量％および塩化カルシウム0.033重量％を含有する
リンゲル液など他の液剤を用いてもよい。

ペルオクソジホスフエート化合物（ＰＤＰ）はホスフア
ターゼ系酵素の存在下で次式に従つて徐々に過酸化水素
を放出する。

上記式中Ｘは無毒性の、薬剤学的に受容できる陽イオン
であるか、または有機エステル部分を完成する。ペルオ
クソジホスフエートを分解するホスフアターゼは唾液、
ならびに血漿、腸液および白血球中に存在する。緩徐な
酸素放出は、ペルオクソジホスフエート療法に関係する
悪性腫瘍細胞に対するＮＫ細胞の効力を補足するのに特
に有効である。温血動物を本発明に従つてＰＤＰで治療
する場合、少なくとも腫瘍が退縮する時点まで治療が続
けられる様式を採用することが望ましい。

下記の例により本発明を説明する。量は特に指示しない
限りすべて重量による。

例１ ＰＤＰの腫瘍細胞毒性についてのインビトロ試験 この試験ではネズミ骨髄腫（ＳＰ_２系列）細胞の増殖に
対するＰＤＰの効果を種々の濃度において調べた（表
１）。対照の正常細胞としてはヒト歯肉線維芽細胞を用
いた（表２）。細胞はウシ胎仔血清１０％、ＭＥＭビタ
ミン１ｘ、Ｌグルタミン１ｘ、ＮＥＡＡ_３ １ｘ、ゲン
タマイシン１ｘを補充したドウルベツコの改良イーグル
培地で増殖された。これを３７℃で加湿ＣＯ_２雰囲気に
おいてインキユベートした。培地２mlを含む２４穴ミク
ロタイタープレートのそれぞれの穴に約１〜３×１０^５
個の細胞を入れ、種々の濃度のＰＤＰ（カリウム塩）を
添加した。

インキユベーシヨン後に、表１に指示した時間に穴から
一定部分を取出すことにより細胞の生存力を判定した。
生存力はトリパン青排除試験により評価された。必要な
増殖条件を維持するためにそれぞれの穴に毎日新鮮な培
地を添加した。リン酸塩緩衝食塩液（ＰＢＳ）中で生存
する細胞の％をＰＤＰの場合と比較することにより抑制
率を算出した。データを表１にまとめる。

これらの結果は、対照である緩衝液に比べてＰＤＰのカ
リウム塩がネズミ骨髄腫（癌）細胞に対し高度に細胞毒
性を示し、かつ抑制的であることを示す。

表２は正常細胞（ヒト歯肉線維芽細胞）に対する作用を
述べる。

表２のデータは、ＰＤＰ１００〜５００mcg/mlでは細胞
の増殖に有意の作用はないが、1000および２５００mcg/
mlでは正常細胞についてすら生存率が低下することを示
す。骨髄腫細胞に対する作用（表１）が高い濃度におい
てすら正常細胞に関する作用（表２）よりも顕著である
ことは注目に値する。

ＰＤＰのリチウム塩、ナトリウム塩、マグネシウム塩、
カルシウム塩、ストロンチウム塩、亜鉛塩および第１ス
ズ塩、ならびに有機ペルオクソジホスフエートすなわち
ＰＤＰのＣ_1-12アルキル、アデニリル、グアニリル、シ
トシリル、チミリルエステルおよびテトラメチルアンモ
ニウム塩についても同様な結果が得られた。

例２ インビボでの腫瘍の進行に対するＰＤＰ、ピロリン酸カ
リウム（ＫＰＰ）およびＰＢＳ（リン酸塩緩衝化食塩
液）の作用 平均体重２０ｇ±３ｇ、各２５匹のグループの遺伝的に
等しいバルブ（Balb）／Ｃマウス７５匹を(a)対照はリ
ン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）で処置し、(b)ペルオクソ二リ
ン酸カリウム（ＰＤＰ）およびＰＢＳ（pH7.0）で処置
し、そして(c)ピロリン酸カリウム（ＫＰＰ）およびＰ
ＢＳで処置した（リン酸塩の対照として）。各動物にプ
リステイン（Pristane）0.2mlを腹腔内投与して動物を
悪性ＳＰ_２細胞（ネズミ骨髄腫癌腫細胞）接種に対し準
備した。３週間後に動物を下記の様式で経口摂取処置し
た。グループ(a)ＰＢＳ0.2mlを腹腔内投与；グループ
(b)ＰＢＳ0.2mlに懸濁したＰＤＰ2.0mgを投与；および
グループ(c)ＰＢＳ0.2ml中のＫＰＰ2.0mgを投与（連続
３日間）。３回目の注射の４８時間後に各動物にＳＰ_２
細胞（マウス腫瘍細胞、ネズミ骨髄腫）２〜３×１０^６
個を接種した（腹腔内）。その後動物にそれらそれぞれ
の物質を１日１回、５日間／週投与した。すなわち(a)
ＰＢＳ、(b)ＰＤＰまたは(c)ＫＰＰである。動物を腫瘍
の進行および死亡につき毎週採点した。データはマンテ
ル−ヘンツエル法（疾病の回想調査で得たデータの分析
の統計学的観点、ジヤーナル・オブ・ナシヨナル・キヤ
ンサー・インステイチユート、３巻、７１９−７４８
頁、１９５９年）を用いて分析された。表３，４および
５のデータは、ＰＤＰがＰＢＳまたはＫＰＰと比較して
マウスの腫瘍の進行を抑制するのに著しく有効であるこ
とを示し、これにより腫瘍の進行を抑制する効果は活性
酸素種の供給によるものであつてホスフエートによるも
のではないことが証明される。

ＰＢＳ、ＫＰＰおよびＰＤＰをそれぞれＰＢＳ中におい
て同濃度で筋肉内および静脈内に投与し、あるいは経口
的にステアリン酸Ｎ−ブチル４５部、カルナウバろう２
０部、ステアリン酸２５部および酢酸フタル酸セルロー
ス１０部の安定なキヤリヤー中１mg/ml（0.1％）の濃度
で投与した場合も同様な結果が得られた。

ＰＤＰの他の無機塩、特にリチウム塩、ナトリウム塩、
マグネシウム塩、カルシウム塩、ストロンチウム塩、亜
鉛塩および第１スズ塩を用いても同様な結果が得られ
た。ＰＤＰの有機化合物、特にＣ_1-12アルキル、アデニ
リル、グアニリル、シトシリル、チミリルエステル、お
よびテトラメチルアンモニウム塩もネズミ骨髄腫悪性腫
瘍細胞の増殖に対抗するのに有効である。

例３ ペルオクソ二リン酸カリウム５００部およびマンニトー
ル６４１部をブレンドし、１０％ソルビトール溶液32.5
部で湿潤させて湿つた顆粒となし、これを４９℃で乾燥
させ、１２メツシユの米国篩（篩開口1.68mm）で篩分け
した。次いでステアリン酸マグネシウム３５部を結合剤
として添加し、組成物を打錠機で圧縮することにより打
錠顆粒を製造した。

これらの錠剤を下記の腸溶コーチング液でコーチングし
た。

酢酸フタル酸セルロース １２０部 カルナウバろう ３０部 ステアリン酸 １０部 ９５％エタノール ４５０部 アセトン １０００部となるのに十分な量 コーチングは一般的なコーチングパン中での注液処理に
より行われた。

こうして製造された錠剤を摂取した場合、これらは胃を
分解されずに通過し、コーチングは次いで腸液により溶
解した。

例４ 脱イオンした蒸留水をオートクレーブ中で大気圧下に２
０分間滅菌した。冷後これをツジらが“薬剤製造”（１
９８４年１０月、３５−４１頁）に記載したカブトガニ
アメーバ様細胞溶解素（ＬＡＬ）を用いて発熱物質不含
につき試験した。５０部のペルオクソ二リン酸カリウ
ム、溶液の0.9％に相当する量の塩化ナトリウム、なら
びにＫＨ_２ＰＯ_４およびＮａ_２ＨＰＯ_４を含有する0.1
Ｍリン酸塩緩衝液（pH9.4）を発熱物質不含の滅菌水に
添加した。次いでこの溶液を0.5の微孔質フイルターに
通すことにより滅菌し、次いで無菌フアイルに充填し
た。

本発明を特定の例に関連して記述したが、これに種々の
変更をなしうることは当業者には明らかであり、これら
も本発明の範囲に含まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 33/42 8314−4Ｃ 47/02 Ｇ 7433−4Ｃ 47/12 Ｄ 7433−4Ｃ 47/14 Ｄ 7433−4Ｃ 47/38 Ｄ 7433−4Ｃ

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】製剤用キャリヤーに溶解又は分散されたペ
   ルオクソ二リン酸の無毒性、水溶性の薬剤学的に受容で
   きる誘導体0.1〜１０％の用量からなる腫瘍形成抑制用
   組成物において、 該製剤用キャリヤーが7.0〜7.4のpHを有するリン酸塩緩
   衝化食塩液であるか、または胃酸による分解に対して抵
   抗するがpH5.5〜１０の腸液によって分解されるコーチ
   ング錠材料である、該腫瘍形成抑制用組成物。
2. 【請求項２】製剤用キャリヤーがリン酸塩緩衝化食塩液
   である、特許請求の範囲第１項に記載の組成物。
3. 【請求項３】製剤用キャリヤーが胃酸による分解に対し
   て抵抗するがpH5.5〜１０の腸液によって分解されるコ
   ーチング錠材料である、特許請求の範囲第１項に記載の
   組成物。
4. 【請求項４】製剤用キャリヤーによる錠剤のコーチング
   が脂肪酸エステル４０〜５０重量部、ろう１５〜２５重
   量部、脂肪酸２０〜３０重量部、およびセルロースエス
   テル５〜１５重量部からなる、特許請求の範囲第３項に
   記載の組成物。
5. 【請求項５】脂肪酸エステルがステアリン酸Ｎ−ブチル
   であり、ろうがカルナウバろうであり、脂肪酸がステア
   リン酸であり、セルロースエステルが酢酸フタル酸セル
   ロースである、特許請求の範囲第４項に記載の組成物。
6. 【請求項６】ペルオクソ二リン酸の無毒性、水溶性の薬
   剤学的に受容できる誘導体がアルカリ金属、アルカリ土
   金属、亜鉛およびスズよりなる群から選ばれるものの塩
   である、特許請求の範囲第１項に記載の組成物。
7. 【請求項７】塩がペルオクソ二リン酸カリウムである、
   特許請求の範囲第６項に記載の組成物。
8. 【請求項８】誘導体がペルオクソ二リン酸のＣ_1-12アル
   キルエステルである、特許請求の範囲第１項に記載の組
   成物。
9. 【請求項９】ペルオクソ二リン酸の無毒性、水溶性の薬
   剤学的に受容できる誘導体を固体ポリヒドロキシ糖とブ
   レンドし、このブレンドをポリヒドロキシ糖化合物の溶
   液で湿潤させ、篩分けしてサイズを一定にし、これと結
   合剤をブレンドし、圧縮して打錠された顆粒となし、こ
   の打錠された顆粒を、胃酸によって無効にされずpH5.5
   〜１０の腸液によって溶解されるコーチング液のフィル
   ムを吹付けることによりコーチングすることよりなる、
   胃内を通過する際には分解されずpH5.5〜１０の腸液に
   よって溶解されるコーチングを有する打錠された顆粒の
   製法。
10. 【請求項１０】脱イオンした蒸留水を滅菌して発熱物質
    不含となし、次いでこれにリン酸塩緩衝液およびペルオ
    クソ二リン酸誘導体および塩化ナトリウムを添加するこ
    とよりなる、ペルオクソ二リン酸の無毒性、水溶性の薬
    剤学的に受容できる誘導体の胃内投与に適した液剤の製
    法。