JPH064031B2 - Ｄｎａ - Google Patents
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- JPH064031B2 JPH064031B2 JP59128335A JP12833584A JPH064031B2 JP H064031 B2 JPH064031 B2 JP H064031B2 JP 59128335 A JP59128335 A JP 59128335A JP 12833584 A JP12833584 A JP 12833584A JP H064031 B2 JPH064031 B2 JP H064031B2
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- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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- C07K14/58—Atrial natriuretic factor complex; Atriopeptin; Atrial natriuretic peptide [ANP]; Cardionatrin; Cardiodilatin
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
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- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
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- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
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- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
- C07K2319/75—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor containing a fusion for activation of a cell surface receptor, e.g. thrombopoeitin, NPY and other peptide hormones
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Description
【発明の詳細な説明】 ＜産業上の利用分野＞ 本発明はＤＮＡ配列に関する。さらに詳しくは、カルデ
イオデイラチンをコードするＤＮＡに関する。
イオデイラチンをコードするＤＮＡに関する。
カルデイオデイラチン(Cardiodilatin)は、分子量約750
0を示すペプチドであつて、心房由来の蛋白中の前駆体
蛋白を母体とし、筋弛緩作用を有することが知られてい
る。
0を示すペプチドであつて、心房由来の蛋白中の前駆体
蛋白を母体とし、筋弛緩作用を有することが知られてい
る。
＜従来の技術＞ ブタ由来のカルデイオデイラチンのＮ端側の30個のアミ
ノ酸配列は以下のとおりであることが知られている（ア
ナトミー アンド エムブリオロジー(Anatomy and Emb
ryology)168,307-313,1983）。Asn-Pro-Val-Tyr-Gly-Se
r-Val-Ser-AsnAla-Asp-Leu-Met-Asp-Phe-Lys-Asn-Leu-L
eu-Asp-His-Leu-Glu-Asp-Lys-Met-Pro-Leu-Glu-Asp そして、この前駆体蛋白自体についても蛋白レベルで検
討がなされているが、ＤＮＡレベルでは未だ解明されて
いない。
ノ酸配列は以下のとおりであることが知られている（ア
ナトミー アンド エムブリオロジー(Anatomy and Emb
ryology)168,307-313,1983）。Asn-Pro-Val-Tyr-Gly-Se
r-Val-Ser-AsnAla-Asp-Leu-Met-Asp-Phe-Lys-Asn-Leu-L
eu-Asp-His-Leu-Glu-Asp-Lys-Met-Pro-Leu-Glu-Asp そして、この前駆体蛋白自体についても蛋白レベルで検
討がなされているが、ＤＮＡレベルでは未だ解明されて
いない。
本発明者は、28個のアミノ酸からなる心房由来ペプチド
であり、Na+利尿作用等を有するカルデイオナトリン（C
ardionatrin）の前駆体蛋白をコードするｃＤＮＡフラ
グメントを得る検討過程において、カルデイオナトリン
をコードするＤＮＡ配列とともにカルデイオデイラチン
をコードするＤＮＡ配列が同上ｃＤＮＡフラグメント上
に存在することを解明し、本発明に到達した。
であり、Na+利尿作用等を有するカルデイオナトリン（C
ardionatrin）の前駆体蛋白をコードするｃＤＮＡフラ
グメントを得る検討過程において、カルデイオナトリン
をコードするＤＮＡ配列とともにカルデイオデイラチン
をコードするＤＮＡ配列が同上ｃＤＮＡフラグメント上
に存在することを解明し、本発明に到達した。
＜発明の構成＞ 本発明の要旨は、下記のアミノ酸配列 Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｅｕ で示されるカルディオディラチンをコードするＤＮＡ。
以下、本発明を詳細に説明する。
まず、本発明に係るカルデイオデイラチンをコードする
ＤＮＡ配列を含有するｃＤＮＡフラグメントの調製方法
の一例を示す。
ＤＮＡ配列を含有するｃＤＮＡフラグメントの調製方法
の一例を示す。
ヒト心臓断片をグアジニルチオシアネートとともにホモ
ジナイズし、CsCl平衡密度勾配超遠心によつて全ＲＮＡ
を分離する（チヤーグウイン(Chirgwin)ら、バイオケミ
ストリー(Biochemistry18、5294-5299,1979）。ついで、
常法によりこれをオリゴ（dt）セルロースカラムクロマ
トグラフイーで精製し、ポリ(Ａ)含有ＲＮＡを単離する
（ｍＲＮＡ原料）。
ジナイズし、CsCl平衡密度勾配超遠心によつて全ＲＮＡ
を分離する（チヤーグウイン(Chirgwin)ら、バイオケミ
ストリー(Biochemistry18、5294-5299,1979）。ついで、
常法によりこれをオリゴ（dt）セルロースカラムクロマ
トグラフイーで精製し、ポリ(Ａ)含有ＲＮＡを単離する
（ｍＲＮＡ原料）。
このｍＲＮＡ原料より、岡山とバーグ(Berg)の方法（モ
レキユラー アンド セルラー バイオロジー(Molecul
ar and Cellular Biology)2,161-170,1982）によつて、
ｃＤＮＡライブラリーを得る。すなわち、pBR322とSV40
のハイブリツドプラスミドを用いて、ベクタープライマ
ーとオリゴ（dG）テールリンカーを得る。このベクター
プライマーと上記ｍＲＮＡ共存下に逆転写酵素を作用さ
せてｃＤＮＡを合成し、その後制限酵素HindIIIで消化
し、ついで上記リンカーを用いて環化させる。その後、
ｍＲＮＡ部分をＤＮＡで置換して、ｃＤＮＡフラグメン
ト含有プラスミドを得る。
レキユラー アンド セルラー バイオロジー(Molecul
ar and Cellular Biology)2,161-170,1982）によつて、
ｃＤＮＡライブラリーを得る。すなわち、pBR322とSV40
のハイブリツドプラスミドを用いて、ベクタープライマ
ーとオリゴ（dG）テールリンカーを得る。このベクター
プライマーと上記ｍＲＮＡ共存下に逆転写酵素を作用さ
せてｃＤＮＡを合成し、その後制限酵素HindIIIで消化
し、ついで上記リンカーを用いて環化させる。その後、
ｍＲＮＡ部分をＤＮＡで置換して、ｃＤＮＡフラグメン
ト含有プラスミドを得る。
ついで、常法により、これを大腸菌（Escherichia col
i）等に形質転換し、アンピシリン耐性株を取得する。
i）等に形質転換し、アンピシリン耐性株を取得する。
ついで、カルデイオナトリン〔Ser-Leu-Arg -Asp-Arg-Ile-GlyをコードするＤＮＡ配列に相補性の下
記ヌクレオチドをプローブとして合成した。
記ヌクレオチドをプローブとして合成した。
このプロープを用いて、上述のｃＤＮＡライブラリーを
スクリーニングし同プローブとハイブリダイズするクロ
ーンを選択する。そのクローンより得られる。ｃＤＮＡ
フラグメントはマキサム−ギルバート法（メソツズ イ
ン エンザイモロジー(Methods in Enzymology)65,499-
560,1980）によつて塩基配列が決定される。
スクリーニングし同プローブとハイブリダイズするクロ
ーンを選択する。そのクローンより得られる。ｃＤＮＡ
フラグメントはマキサム−ギルバート法（メソツズ イ
ン エンザイモロジー(Methods in Enzymology)65,499-
560,1980）によつて塩基配列が決定される。
上述のとおり、本発明に係るカルデイオデイラチンをコ
ードするＤＮＡ配列は上記ｃＤＮＡフラグメントに含ま
れる。
ードするＤＮＡ配列は上記ｃＤＮＡフラグメントに含ま
れる。
ｃＤＮＡフラグメントの塩基配列の一例を第１図に示す
が、上記ｃＤＮＡフラグメントは必ずしも一定のヌクレ
オチド残基数を有することを要求されない。
が、上記ｃＤＮＡフラグメントは必ずしも一定のヌクレ
オチド残基数を有することを要求されない。
また、上記ｃＤＮＡフラグメントは、上記ヒト由来のも
のに限定されず、他の高等動物、たとえばウシ、ブタ、
ウマ、マウス、ラツト等に由来するものであつてもよ
い。
のに限定されず、他の高等動物、たとえばウシ、ブタ、
ウマ、マウス、ラツト等に由来するものであつてもよ
い。
＜発明の効果＞ 本発明に係るＤＮＡ配列あるいは同配列を含有する上記
したｃＤＮＡフラグメントは、常法により同配列の上流
に同配列の発現を可能とするプロモータ等の発現調節領
域を有する発現ベクターのクローニングサイトに導入す
ることによつて、これを鋳型とする翻訳によりカルデイ
オデイラチンを産生することができる。
したｃＤＮＡフラグメントは、常法により同配列の上流
に同配列の発現を可能とするプロモータ等の発現調節領
域を有する発現ベクターのクローニングサイトに導入す
ることによつて、これを鋳型とする翻訳によりカルデイ
オデイラチンを産生することができる。
得られるカルデイオデイラチンは、血管拡張剤（血圧降
下剤）として有用である。
下剤）として有用である。
＜実施例＞ 以下、実施例によりさらに本発明を詳細に説明する。
実施例１ (1) ヒト心臓断片を液体窒素中で破砕した後グアニジ
ウムチオシアネート水溶液を添加しホモジナイズした。
得られたホモジネートを、チヤーグウイン(Chirgwin)ら
の方法（バイオケミストリー(Biochemistry)18,5294-52
99,1979）にしたがつて、塩化セシウム平衡密度勾配超
遠心によつて全ＲＮＡを分離した。ついで、常法により
これをオリゴ（dT）セルロースカラムクロマトグラフイ
ーで精製し、ポリ(Ａ)含有ＲＮＡを単離し、ｍＲＮＡ原
料とした。
ウムチオシアネート水溶液を添加しホモジナイズした。
得られたホモジネートを、チヤーグウイン(Chirgwin)ら
の方法（バイオケミストリー(Biochemistry)18,5294-52
99,1979）にしたがつて、塩化セシウム平衡密度勾配超
遠心によつて全ＲＮＡを分離した。ついで、常法により
これをオリゴ（dT）セルロースカラムクロマトグラフイ
ーで精製し、ポリ(Ａ)含有ＲＮＡを単離し、ｍＲＮＡ原
料とした。
(2) 一方、岡山とバーグ(Berg)の方法（モレキユラー
アンド セルラー バイオロジー(Molecular and Cel
lular Biology2,161-170,1982)により、ｐＢＲ３２２と
ＳＶ４０のハイブリツドプラスミドを用いて、ベクター
プライマーとオリゴ（dG）テールリンカーを得た。
アンド セルラー バイオロジー(Molecular and Cel
lular Biology2,161-170,1982)により、ｐＢＲ３２２と
ＳＶ４０のハイブリツドプラスミドを用いて、ベクター
プライマーとオリゴ（dG）テールリンカーを得た。
すなわち、ｐＢＲ322とＳＶ40（マツプユニツト0.71−
0.86）のハイブリツドプラスミド400μｇを、ウシ血清
アルブミンを含む緩衝液中で制限酵素Kpnで３７℃、４
時間消化させた。
0.86）のハイブリツドプラスミド400μｇを、ウシ血清
アルブミンを含む緩衝液中で制限酵素Kpnで３７℃、４
時間消化させた。
ついで、常法によりエタノール沈殿によつてＤＮＡを回
収し、これをｄＴＴＰを含む緩衝液に溶解し、ターミナ
ルデオキシヌクレオチジルトランスフエラーゼを添加し
て、37℃で30分間反応させて、制限酵素KpnＩの消化部
位に約60個のdTテールを付加させた後、エタノール沈殿
によりＤＮＡを回収した。ついで、このＤＮＡのウシ血
清アルブミンを含む緩衝液中で、制限酵素HpaＩにより
消化した（37℃、５時間）。大きい方のＤＮＡフラグメ
ントを、アガロースゲル電気泳動により精製し、ガラス
パウダー法（ボーゲルステイン(Vogelstein)ら、プロシ
ーデイングズオブザナシヨナルアカデミーオブサイエン
シズオブザユーエヌエイ(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)7
6,615-619,1979）によつて回収した。その後、このＤＮ
Ａを０℃でオリゴ（dA）セルロースカラムに付し、水で
溶出させた後、エタノールで回収し、オリゴ（dT）テー
ルを有するベクタープライマーを得た。
収し、これをｄＴＴＰを含む緩衝液に溶解し、ターミナ
ルデオキシヌクレオチジルトランスフエラーゼを添加し
て、37℃で30分間反応させて、制限酵素KpnＩの消化部
位に約60個のdTテールを付加させた後、エタノール沈殿
によりＤＮＡを回収した。ついで、このＤＮＡのウシ血
清アルブミンを含む緩衝液中で、制限酵素HpaＩにより
消化した（37℃、５時間）。大きい方のＤＮＡフラグメ
ントを、アガロースゲル電気泳動により精製し、ガラス
パウダー法（ボーゲルステイン(Vogelstein)ら、プロシ
ーデイングズオブザナシヨナルアカデミーオブサイエン
シズオブザユーエヌエイ(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)7
6,615-619,1979）によつて回収した。その後、このＤＮ
Ａを０℃でオリゴ（dA）セルロースカラムに付し、水で
溶出させた後、エタノールで回収し、オリゴ（dT）テー
ルを有するベクタープライマーを得た。
他方、ｐＢＲ322とＳＶ40（マツプユニツト0.19〜0.3
2）とのハイブリツドプラスミド100μｇをウシ血清アル
ブミンを含む緩衝液中で、制限酵素PstＩにより消化し
た（37℃、１時間半）。ついで、ＤＮＡを回収し、ｄＧ
ＴＰを含む緩衝液に溶解し、ターミナルデオキシヌクレ
オチジルトランスフエラーゼを添加して、37℃で20分間
反応させ、約10〜15のdGテールを付加させた。回収した
ＤＮＡを、ウシ血清アルブミンを含む緩衝液中で制限酵
素HindIIIにより消化させ（37℃、１時間）、ついでア
ガロースゲル（1.8％）電気泳動に付し、小さいオリゴ
（dG）テールリンカーＤＮＡを抽出、回収した。
2）とのハイブリツドプラスミド100μｇをウシ血清アル
ブミンを含む緩衝液中で、制限酵素PstＩにより消化し
た（37℃、１時間半）。ついで、ＤＮＡを回収し、ｄＧ
ＴＰを含む緩衝液に溶解し、ターミナルデオキシヌクレ
オチジルトランスフエラーゼを添加して、37℃で20分間
反応させ、約10〜15のdGテールを付加させた。回収した
ＤＮＡを、ウシ血清アルブミンを含む緩衝液中で制限酵
素HindIIIにより消化させ（37℃、１時間）、ついでア
ガロースゲル（1.8％）電気泳動に付し、小さいオリゴ
（dG）テールリンカーＤＮＡを抽出、回収した。
(3) 岡山とバーグ(Berg)の方法（モレキユラー ア
ンド セルラー バイオロジー(Molecular and Cellula
r Biology)2,161-170,1982）により、ｃＤＮＡライブラ
リーを得た。
ンド セルラー バイオロジー(Molecular and Cellula
r Biology)2,161-170,1982）により、ｃＤＮＡライブラ
リーを得た。
すなわち、Tris−HCl（pH8.3）、HgCl2、KCl、ジチオス
レイトール、dATP、dTTP、dGTP及び〔32P〕dCTPを含む
水溶液に上記(1)で得られたmRNA30μｇと上記(2)で得ら
れたベクタープライマー10μｇを添加して、逆転写酵素
の存在下に37℃、20分間反応させ、プラスミド−ｃＤＮ
Ａ：ｍＲＮＡを合成し、これをエタノール沈殿しペレツ
ト状で回収した。このペレツトをCoCl2、ジチオスレイ
トール、ポリ(Ａ)、〔32P〕ｄＣＴＰ及びターミナルデ
オキシヌクレオチジルトランスフエラーゼを含有する緩
衝液に溶解し、37℃、10分間反応させ、末端あたりｄＣ
ＭＰの10〜15の残基を付加させた。
レイトール、dATP、dTTP、dGTP及び〔32P〕dCTPを含む
水溶液に上記(1)で得られたmRNA30μｇと上記(2)で得ら
れたベクタープライマー10μｇを添加して、逆転写酵素
の存在下に37℃、20分間反応させ、プラスミド−ｃＤＮ
Ａ：ｍＲＮＡを合成し、これをエタノール沈殿しペレツ
ト状で回収した。このペレツトをCoCl2、ジチオスレイ
トール、ポリ(Ａ)、〔32P〕ｄＣＴＰ及びターミナルデ
オキシヌクレオチジルトランスフエラーゼを含有する緩
衝液に溶解し、37℃、10分間反応させ、末端あたりｄＣ
ＭＰの10〜15の残基を付加させた。
ついで、回収したオリゴ（dC）テールプラスミド−ｃＤ
ＮＡ：ｍＲＮＡを含有するペレツトをウシ血清アルブミ
ンを含む緩衝液に溶解し、制限酵素HindIIIで37℃、１
時間消化し、エタノール沈殿により、HindIII消化オリ
ゴ（dC）テールｃＤＮＡ：ｍＲＮＡプラスミドを回収し
た。
ＮＡ：ｍＲＮＡを含有するペレツトをウシ血清アルブミ
ンを含む緩衝液に溶解し、制限酵素HindIIIで37℃、１
時間消化し、エタノール沈殿により、HindIII消化オリ
ゴ（dC）テールｃＤＮＡ：ｍＲＮＡプラスミドを回収し
た。
これを前記(2)で得られたオリゴ（dG）テールリンカー
ＤＮＡを含む緩衝液に溶解し、65℃、２分間インキユベ
ートし、さらに42℃、30分間保持し、０℃に冷却した。
ついで、β−ＮＡＤ（ニコチンアデニンジヌクレチド）
存在下、大腸菌（E.coli）ＤＮＡリガーゼを加えて、一
夜インキユベートした。その後、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、
ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰ、β−ＮＡＤ、E.coll DNAリガー
ゼ、E.coli DＮＡポリメラーゼ及びE.coll R Nase Hを
添加して、この混合物を12℃、１時間、次いで室温で１
時間インキユベートした後、冷却し、反応を停止させ目
的とするｃＤＮＡフラグメント含有プラスミドを得た。
ＤＮＡを含む緩衝液に溶解し、65℃、２分間インキユベ
ートし、さらに42℃、30分間保持し、０℃に冷却した。
ついで、β−ＮＡＤ（ニコチンアデニンジヌクレチド）
存在下、大腸菌（E.coli）ＤＮＡリガーゼを加えて、一
夜インキユベートした。その後、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、
ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰ、β−ＮＡＤ、E.coll DNAリガー
ゼ、E.coli DＮＡポリメラーゼ及びE.coll R Nase Hを
添加して、この混合物を12℃、１時間、次いで室温で１
時間インキユベートした後、冷却し、反応を停止させ目
的とするｃＤＮＡフラグメント含有プラスミドを得た。
ついで、このプラスミドを用いて常法により、大腸菌
（E.coli）ＨＢ101をトランスフオームさせた。
（E.coli）ＨＢ101をトランスフオームさせた。
(4) 一方、カルデイオナトリンのMet-Asp-Arg-Ile-Gly
をコードするＤＮＡ配列に相補性のあるヌクレオチドを
２つのグループとして合成した。
をコードするＤＮＡ配列に相補性のあるヌクレオチドを
２つのグループとして合成した。
ついで、このオリゴＩ，IIをプローブとしてｃＤＮＡラ
イブラリーをスクリーニングし、40,000のトランスフオ
ーマントより同プローブとハイブリダイズする12個のク
ローンを選択した。この12個のクローンより、ｃＤＮＡ
フラグメントを抽出し、制限酵素地図を作成し、それに
基いて、マキサム−ギルバート法（メソツズ イン エ
ンザイモロジー(Methods in Enzymology)65,499-560,19
80）によつてフラグメントの塩基配列を決定した。第１
図は、このｃＤＮＡフラグメントの塩基配列及びそれよ
り想定されるアミノ酸配列を示し、図中、 はカルデイオデイラチンの配列部分（アミノ酸残基数７
２）を示す（あわせて、制限酵素切断部位を示す）。ま
た、 はカルデイオナトリンの配列部分を示す。）。
イブラリーをスクリーニングし、40,000のトランスフオ
ーマントより同プローブとハイブリダイズする12個のク
ローンを選択した。この12個のクローンより、ｃＤＮＡ
フラグメントを抽出し、制限酵素地図を作成し、それに
基いて、マキサム−ギルバート法（メソツズ イン エ
ンザイモロジー(Methods in Enzymology)65,499-560,19
80）によつてフラグメントの塩基配列を決定した。第１
図は、このｃＤＮＡフラグメントの塩基配列及びそれよ
り想定されるアミノ酸配列を示し、図中、 はカルデイオデイラチンの配列部分（アミノ酸残基数７
２）を示す（あわせて、制限酵素切断部位を示す）。ま
た、 はカルデイオナトリンの配列部分を示す。）。
なおカルデイオデイラチンのＤＮＡ配列は、その分子量
7,500から推定されるアミノ酸の数が72〜75であり、か
つ生体内でプロセツシングされやすいアルギニンの位置
から推定した。
7,500から推定されるアミノ酸の数が72〜75であり、か
つ生体内でプロセツシングされやすいアルギニンの位置
から推定した。
上記ヒト由来のカルデイオデイラチンは、上述のブタ由
来のカルデイオデイラチン（アナトミー アンド エン
ブリオロジー(Anatomy and Embryology)168,307-313,19
83）と比較し、Ｎ端側30個のアミノ酸配列においては、
４箇所相違する。
来のカルデイオデイラチン（アナトミー アンド エン
ブリオロジー(Anatomy and Embryology)168,307-313,19
83）と比較し、Ｎ端側30個のアミノ酸配列においては、
４箇所相違する。
第１図は、本発明に係るカルデイオデイラチンをコード
するＤＮＡ配列を含有するｃＤＮＡフラグメントの塩基
配列及びそれより想定されるアミノ酸配列を示す図であ
る。
するＤＮＡ配列を含有するｃＤＮＡフラグメントの塩基
配列及びそれより想定されるアミノ酸配列を示す図であ
る。
Claims (1)
- 【請求項１】下記のアミノ酸配列 Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｅｕ で示されるカルディオディラチンをコードするＤＮＡ。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59128335A JPH064031B2 (ja) | 1984-06-21 | 1984-06-21 | Ｄｎａ |
| US06/721,579 US4851349A (en) | 1984-04-12 | 1985-04-10 | Expression vectors encoding cardionatrin and cardiodilatin |
| EP85400726A EP0159943B1 (en) | 1984-04-12 | 1985-04-11 | Expression vectors, dna fragments, peptides, hosts, and process for production of proteins |
| DE8585400726T DE3584029D1 (de) | 1984-04-12 | 1985-04-11 | Expressionsvektoren, dns-fragmente, peptide, wirte und verfahren zur herstellung von peptiden. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59128335A JPH064031B2 (ja) | 1984-06-21 | 1984-06-21 | Ｄｎａ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS619289A JPS619289A (ja) | 1986-01-16 |
| JPH064031B2 true JPH064031B2 (ja) | 1994-01-19 |
Family
ID=14982246
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59128335A Expired - Lifetime JPH064031B2 (ja) | 1984-04-12 | 1984-06-21 | Ｄｎａ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH064031B2 (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60262592A (ja) * | 1984-06-08 | 1985-12-25 | Suntory Ltd | 利尿作用を有するポリペプチドをコードするｄｎａ |
-
1984
- 1984-06-21 JP JP59128335A patent/JPH064031B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS619289A (ja) | 1986-01-16 |
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