JPH0643303B2

JPH0643303B2 - 抗癌活性を有する薬剤組成物および抗癌活性増強剤

Info

Publication number: JPH0643303B2
Application number: JP31027588A
Authority: JP
Inventors: ベルント・バルレッツェン; レイダー・オフテブロ; ロルフ・オラフ・ラーセン; エリク・オライ・ペッターセン; ジョン・マイケル・ドーニッシュ
Original assignee: Norsk Hydro ASA
Current assignee: Norsk Hydro ASA
Priority date: 1988-12-09
Filing date: 1988-12-09
Publication date: 1994-06-08
Anticipated expiration: 2009-06-08
Also published as: JPH02184625A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、抗癌剤として活性のある薬剤組成物および抗
癌活性増強剤に関する。

〔従来の技術および課題〕

癌患者においてはアスコルビン酸（ビタミンＣ）のレベ
ルがしばしば低く、これは腫瘍細胞によつてアスコルビ
ン酸の利用が増大するためであろうということがある時
期知られていた。そのために、アスコルビン酸が抗癌治
療において有益な抗癌治療製剤となり得ることが示唆さ
れた。カメロン(Cameron)らによつて総説されているよ
うに（Cancer Res.,３９巻６６３〜６８１頁，１９７９
年）、いくつかの臨床治験は、アスコルビン酸の投与を
受けた癌患者の生存期間が有意に増大することを示し
た。しかしながら、今日ではアスコルビン酸は抗癌剤と
して広く使用されていない。

もつと最近では、新規な抗癌剤を提供するために、アス
コルビン酸の他の化合物との付加物を形成することが提
案されている。このようにして、たとえば、エルヴイン
(Elvin)らは、メチルグリオキサールやアセチルアクロ
レインのようなアルデヒドとのアスコルビン酸付加物
が、マウスでのエールリツヒ腹水癌の成長を阻害するこ
とを報告した(Eur.J.Cancer Clin.Oncol,１７（７）
巻，１９８１年，７５９−６５頁）。さらに、とくにア
スコルビン酸のエーテル、およびそのケタールやアセタ
ールの脈管形成阻害剤としての利用について、欧州特許
公開第００８６５４４号において提案されている。脈管
形成は新しい血管成長、たとえば腫瘍成長に含まれる新
しい血管の増殖の方法に関する。

さらにもつと最近では、５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ
−アスコルビン酸とその金属塩が抗癌性の特性を現わす
ということが、欧州特許公開第０１４８０９４号で開示
されている。該化合物は、塩化亜鉛の存在下で、ベンズ
アルデヒドもしくはたとえばα，α−ジメトキシトルエ
ンと、Ｌ−アスコルビン酸を反応させることによつて製
造可能であり、下記に示した化学構造式を有する。

〔課題を解決するための手段〕我々は、現在、５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコ
ルビン酸とその金属塩のヒト癌細胞における細胞毒性効
果が、もし本抗癌剤をＬ−アスコルビン酸もしくは当該
塩と同時に投与するならば、相乗的に増大することを偶
然に発見した。５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコ
ルビン酸と当該塩の抗癌性効果を高める能力がＬ−アス
コルビン酸にあるということは、癌患者の治療に対して
新しいアプローチの可能性を切り開くことになる。

我々はまた、少なくとも類似の相乗効果が、ベンジリデ
ン部分のアルデヒド基の１位で重水素化した５，６−Ｏ
−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビン酸および薬剤的に受
容可能な当該塩でも示されることを発見した。

このようにして、本発明は、抗癌剤として有益な薬剤組
成物を提供する。前記薬剤組成物は活性成分として、
（ｉ）Ｌ−アスコルビン酸もしくは薬剤的に受容可能な
当該塩と、（ii）５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アス
コルビン酸、ベンジリデン部分のアルデヒド基の１位で
重水素化した５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコル
ビン酸と薬剤的に受容可能な前記酸の塩より選ばれた化
合物を含む。

本発明は、Ｌ−アスコルビン酸もしくは薬剤的に受容可
能な当該塩を含有する、５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ
−アスコルビン酸、ベンジリデン部分の少なくともアル
デヒド基の１位で重水素化した５，６−Ｏ−ベンジリデ
ン−Ｌ−アスコルビン酸および薬剤的に受容可能な塩か
ら選ばれた化合物の抗癌活性増強剤をも包含するもので
ある。

こゝで有益とされる重水素化５，６−Ｏ−ベンジリデン
−Ｌ−アスコルビン酸は、その分子の他の部分でも、部
分的にもしくは完全に重水素化されていても良い。すな
わち、ベンジリデン部分のアルデヒド基の１位での重水
素化原子に加えて、その構造に１つ以上の水素原子が重
水素原子により置換されていても良い。

〔実施例〕

本発明で述べている抗癌性の相乗効果は、以下に記述し
た実験により実証される。これらの実験において、我々
はＬ−アスコルビン酸（Ascと略記）および５，６−Ｏ
−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビン酸のナトリウム塩
（BASSと略記）もしくはベンジリデン部分のアルデヒド
基の１位で重水素化した５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ
−アスコルビン酸のナトリウム塩（BASS-d₁と略記）を
使用した。

（実施例１）相乗効果を実証するために用いた生物学的材料と方法細胞培養技術：頸部の癌腫を起源とする確立した系NHIK3025(Nordbye,
K.,とOftebro,R.Exp.Cell Res.,第５８巻４５８頁，１
９６９；Oftebro,R.,とNordbye,K.,Exp.Cell Res.,第５
８巻４５９−４６０頁，１９６９年）のヒト細胞は培養
液Ｅ２ａ（Puck,T.T.ら，J.Exp.Med.,第１０６巻１４５
−１６５頁，１９５７年）に２０％ヒト血清および１０
％ウマ血清(Grand Island Biological Co.)を補充して
培養を行なつた。細胞は組織培養フラスコ中で単層とて
成長する。細胞は付着した後には囲りに移動せず、細胞
の数世代に亘つて、倒立顕微鏡(inverted microscope)
で同じ細胞が観察されるように品質は保持される。細胞
は頻繁な再培養、つまり二日目および三日目毎に培養を
くり返すことにより連続的な指数増殖の状態に保持され
ている。

細胞生存率：細胞生存率を測定するため、適当数の細胞をプラスチツ
クのペトリ皿（φ＝５cm）に播種した。各々の皿に播種
された細胞の数は生存細胞の数が一皿あたり約１５０に
なるように調整を行なつた。一方、指数的に増殖する
（非同時性の）細胞は播種前にトリプシン消化を行な
い、同調細胞が、選択後直ちに播種された。約２時間後
に、細胞は皿の底に付着し、培養液を適当な薬物濃度を
含む培養液で置換することにより、処理を開始した。所
望した時間処理した後に、薬物を含有する培養液を取除
き、新鮮な培養液を添加した。皿は薬物の添加もしくは
除去の際に加えられる培養液と同じ培養液で一度洗つ
た。CO₂インキユベーター中で３７℃１０〜１２日後、
細胞をエタノールで固定し、コロニーが数えられる前に
メチレンブルーで染色した。

タンパク合成：タンパク合成の速度を、レーニング(Rφnning,φ．W.)
らが記述したように算出した(J.Cell Physiol.,第１０
７巻４７−５７頁１９８１）。簡単に述べると、細胞性
タンパクは一定の比放射能（０．５Ci／モル）を有する
（^１４Ｃ）バリンで、実験に先立ち、２日間の前培養を
行ない、飽和するまでラベル化を行なつた。これは、細
胞内バリンやタンパク分解によつて生じたバリンによる
（^１４Ｃ）バリンの希釈が無視できるように、高濃度の
バリンを用いることによつて達成された（Ｒφnning,
φ．W.,ら，Exp.Cell Res.第１２３巻６３−７２頁，１
９７９年）。このようにして比放射能を一定レベルに保
持した。タンパク合成の速度は、一定の比活性の
（^３Ｈ）バリンの取り込みから算出した。取り込みの測
定は、各測定時期の開始におけるタンパクの（^１４Ｃ）
全放射能に係り、時間あたりのパーセンテイジとして表
わした（Ｒφnning,φ．W.ら，J.Cell,Physiol．第１０
７巻４７−５７頁，１９８１）。

生物学的効果単独、もしくは同時に組み合わせるかのどちらかで用い
たBASSおよびアスコルビン酸(Asc)の細胞毒性効果は、
非同時性の指数的に増殖するNHIK３０２５細胞について
調べた。細胞を３７℃で２４時間処理すると、プラスチ
ツクのペトリ皿の底に付着した。処理後コロニーを形成
することができた細胞の数を記録した。一回の実験結果
を表１に示す。活性成分（すなわち、OmM BASSおよびOm
M Asc）を含まない培養液で処理した細胞の生存率を
１．０であると定義し、対照として用いた。

表１におけるデーターは、BASSとAscを組み合わせて使
用すると、BASSもしくはAsc単独の場合よりもずつと強
い細胞毒性効果を誘導することをはつきりと示してい
る。たとえば、１．０mM BASSを単独で使用すると、生
存率は０．７６である。同様に、１．２mM Asc単独の場
合には、生存率は０．８となる。このようにして、組み
合わせて用いた二つの薬剤が単に追加的な相互に独立し
た効果のみを誘導したとするならば、その生存率は０．
７６×０．８＝０．６１となるであろう。しかしなが
ら、表１から上記の濃度で二種の薬剤を組み合わせて処
理した後の生存率は０．１６である。すなわち、組み合
わせて処理すると、単なる追加的効果でなく、むしろ相
乗的効果を生じ、細胞毒性において約４倍の増大とな
る。

（実施例２）前記の表１に報告した実験に類似した実験をさらに行な
い、表２に概要したデーターを得た。

表２から、本発明の同一相乗効果を再び見ることができ
る。

（実施例３）たとえ短時間の処理でも、たとえば４時間でも、下記の
表３からわかるように、同様の相乗効果が実証される。

（実施例４）我々のまだ未公開の係属中の英国特許出願第８７０５７
８０号において、我々は、ある芳香族アルデヒドとその
誘導体が、少なくともアルデヒド基の１位にある時、生
体内の抗癌性効果を高める作用を有することを示した。
そのため、我々は、重水素化BASS(BASS-d1)をアスコル
ビン酸と一緒に用いた時の細胞毒性効果を試験するため
に実験を行なつた。その結果を下記の表４に示す。

表４から、Ascの高濃度では少なくとも、BASS-d1の相乗
効果は、いくらか上位であると思われるけれども、BASS
もしくはBASS-d1が用いられた場合の相乗効果はほぼ等
価レベルで実証されるということがわかる。

（実施例５）相乗効果が他の糖で得られるかどうか決定するために、
我々はグルコースと組み合わせたBASSで、２４時間NHIK
３０２５細胞を処理した。実験結果を下記の表５に示
す。表の中では、細胞培養液に添加した種々の濃度のグ
ルコースと組み合わせて１．６mM BASSで処理後、細胞
生存率を記録している。

表５から、どのようにしても、グルコースがBASSの細胞
失活能力を改善しないということがわかる。そして、グ
ルコースの非存在下と８mMまでのグルコース存在下との
両者の間でBASSの細胞毒性における統計学上有意な改善
は見られない。

我々はまた、Ｌ−アスコルビン酸を、４，６−Ｏ−ベン
ジリデングルコースのような他の芳香族アルデヒドもし
くはアルデヒド誘導体と組み合わせて用いた場合の効果
を研究したが、いかなる相乗効果も観察することができ
なかつた。

（実施例６）初期の研究から、タンパク合成阻害の決定が抗癌活性の
有益な指標になるということは公知である。本研究にお
いて、我々は、BASSとAsc単独によつて誘導される場合
と、二種の活性薬剤を同時に組み合わせることによつて
誘導されるタンパク合成阻害を試験した。この実験は同
様に処理したサンプルをも含んでいた。しかし、ここで
はBASS-d1をBASSの代わりに使用した。結果は以下の表
６に示す。

表６に示した結果から、タンパク合成の速度は対照では
４．５％／時間（１時間あたりの全細胞性タンパクの平
均パーセント）であることがわかる。BASSもしくはAsc
どちらか単独で３．２mM用いると、タンパク合成の速度
は、１．５−１．７％／時間までに減少する結果となつ
た。しかしながら、両者の薬物を同時に用いると、１．
０mM BASSと１．０mM Ascの濃度で、タンパク合成速度
をこのレベル（１．７３％／時間）まで減少するのに充
分である。

上記の表１〜６に与えたデーターから、一方での化合物
BASSもしくはBASS-d1および他方での化合物Ascを、一緒
に使用すると、独立して作用しないということが明白で
ある。さらに、AscおよびBASSもしくはBASS-d1の相乗効
果は、組み合わせて用いた場合の濃度の合計と同じ濃度
で一種の薬物を単独で使用した時の効果よりも強い。こ
れは、二種の薬物BASSとAscにより誘導された相乗効果
が、二者間の反応生成物またはある種の細胞性感作から
生ずるにちがいないということを示している。この感作
は、細胞への取り込みの増大、修復過程の阻害、もしく
は単純に化学的回復の減少の結果であろう。しかしなが
ら、現時点では、我々の観察した相乗効果に対する説明
は未知である。

上記の実験は５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコル
ビン酸と部分的に重水素化した誘導体のナトリウム塩を
用いたけれども、他の薬剤的に受容可能な塩、とくに他
の薬剤的に受容可能なアルカリおよびアルカリ土類金属
塩を使用することも本発明の範囲内に含む。しかしなが
ら、ナトリウム塩は水によく溶けるので、好ましい。

同様に、ある場合では、Ｌ−アスコルビン酸の薬剤的に
受容可能な塩を使用する方が、フリーの酸自体を使用す
るより、むしろ好ましいかも知れない。

また、本発明の薬剤組成物は、マウスの生体内において
も抗癌活性を発現することが確認されている。

本発明の活性成分を含む薬剤組成物は、当業者に周知の
数多くの方法により、薬剤的に受容可能な賦形剤もしく
は担体とともに製剤化し得る。本発明による薬剤組成物
は、経口的にあるいは非経口的に投与し得る。経口投与
の際には、本組成物を錠剤、カプセル、粒状糖衣錠もし
くは粉末の形にする。非経口投与の際には、組成物を注
射もしくは静脈点滴に適した形にすることが可能であ
り、または、座薬としても用いることが出来る。

本組成物の活性成分は、固形もしくは液状の従来の薬剤
的に受容可能な担体とともに、とり込むことにより、製
剤化し得る。たとえば、表面活性剤、ベヒクル、潤滑
剤、アジユバントおよび薬理学的に受容可能なフイルム
形成材料を、薬剤製剤業界において周知の如く、使用す
ることが出来る。

本発明による薬剤組成物中の活性成分の含量は、製剤の
形により変更可能である。経口投与の際には、５，６−
Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビン酸もしくは薬剤的
に受容可能な塩の含量は、一般的に約０．１〜２０重量
％であり、アスコルビン酸もしくは当該塩の等量ととも
に組成物中に包含する。非経口投与に対しては、粘膜を
通して吸収されるために、各活性成分の量は約０．０１
〜１０重量％であり、その好ましい比は１：１となるで
あろう。重水素化化合物に対しては相応量が適用される
であろう。

患者が最適な治療効果を得るために各活性成分の所望用
量の投与を確実に受けるために、二種の活性成分を薬剤
組成物中に一緒に製剤化することが好ましいけれども、
もし、患者が、相乗効果が明らかとなる、各活性成分の
正しい用量を受けるならば、各活性成分を別々に投与し
ても本発明の範囲内に入る。

各活性成分の各々の適した用量範囲は次の通りである。
経口投与のためには、５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−
アスコルビン酸もしくは当該塩もしくは重水素化アルデ
ヒド誘導体は、毎日二回まで体重１kgあたり１０〜７５
mgの範囲である。アスコルビン酸もしくは当該塩に対す
る受容可能な範囲は、毎日二回まで体重１kgあたり１０
〜１００mgとなるであろう。静脈点滴もしくは注射に際
して、５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビン酸
もしくはそのアルカリ土類塩もしくは重水素化化合物に
対する適した範囲は、一日二回まで体重１kgあたり１０
〜７５mgとなるであろう。アスコルビン酸ナトリウムも
しくは炭酸ナトリウムで緩衝化したアスコルビン酸は、
生理学的に受容可能なレベル、通常一日二回まで、体重
１kgあたり約１０〜１００mgで、薬物と組み合わせて投
与し得る。

このように、成人患者に対しては、１．５〜３ｇのBASS
もしくはBASS-d1を５ｇ以下のＬ−アスコルビン酸もし
くはその塩と組み合わせて、１日あたり経口的に投与す
るのが好ましい。点滴のためには、成人患者は、１．５
〜３ｇのBASSもしくはBASS-d1を、５〜１０ｇのＬ−ア
スコルビン酸もしくはその塩のいずれかと組み合わせ
て、または単独で、投与を受けるのが好ましい。後者の
単独の場合は、Ｌ−アスコルビン酸もしくは当該塩を、
それからまた単独で投与するのが好ましい。

注射もしくは点滴での薬物組み合わせの場合の生理学的
pHは、薬剤業界で公知の如く、緩衝剤を包含することに
よつて確立されるであろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者エリク・オライ・ペッターセンノルウェー国、0594 オスロ５、シュタートスラード・マチーセンス・ヴェイ 15 (72)発明者ジョン・マイケル・ドーニッシュノルウェー国、0767 オスロ７、ランディングスヴェイエン 136

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（ｉ）Ｌ−アスコルビン酸もしくは薬剤的
に受容可能な当該塩と、（ii）５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビン
酸、ベンジリデン部分のアルデヒド基の１位で少なくと
も重水素化した５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコ
ルビン酸および前記の酸の薬剤的に受容可能な塩から選
ばれた化合物、を活性成分として含む癌治療用薬剤組成物。
【請求項２】薬剤的に受容可能な塩がアルカリ金属およ
びアルカリ土類金属の塩から選択される請求項第１項に
記載の薬剤組成物。
【請求項３】活性成分（ii）が下記式の化合物からな
る、請求項第１項または第２項に記載の薬剤組成物。
〔式中、Ｘは水素または薬剤的に受容可能な金属カチオ
ンを示す〕
【請求項４】経口投与のための、薬剤的に受容可能な担
体または賦形剤を含む、請求項第１項乃至第３項のいず
れかに記載の薬剤組成物。
【請求項５】活性成分（ii）と等量の前記活性成分
（ｉ）を、０．１〜２０重量％含む、請求項第４項に記
載の薬剤組成物。
【請求項６】非経口投与のための、薬剤的に受容可能な
担体または賦形剤を含む、請求項第１項乃至第３項のい
ずれかに記載の薬剤組成物。
【請求項７】活性成分（ｉ）と（ii）の各々を０．１〜
１０重量％含む、請求項第６項に記載の薬剤組成物。
【請求項８】Ｌ−アスコルビン酸もしくは薬剤的に受容
可能な当該塩を有する、５，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ
−アスコルビン酸、ベンジリデン部分の少なくともアル
デヒド基の１位で重水素化した５，６−Ｏ−ベンジリデ
ン−Ｌ−アスコルビン酸および薬剤的に受容可能な塩か
ら選ばれた化合物の抗癌活性増強剤。