JPH06503305A - 抗ｈｉｖ−１剤としてのデキストリン硫酸とその組成体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗ＨＩＶ−１剤としてのデキストリン硫酸とその組成体本発明は、薬学的に作用 する物質及び組成に関し、特に、ヒト免疫不全ウィルス−Ｉ型（ＨＩＶ−１）及 び関連するライスルに対する薬品としてのそのような物質及び組成の利用に関す る。

硫酸で処理された多糖類が、抗ＨＩＶ作用を有することが、知られており、例え ば、欧州特許第２４０，０９８号明細書に開示されている。この明細書は、比較 的小さい分子量のデキストリンの硫化によって得られる、強く硫酸で処理された オリゴ糖を開示している。

本発明に基づけば、ＨＩＶ−１及び関連ウィルスに対する薬品が提供され、その 薬品は、グルコースユニット当たり、最大で２つの硫酸塩グループを含むデキス トリン硫酸であるか、そのデキストリン硫酸を含んでいる。デキストリンは、グ ルコースの高分子の混合物であり、グルコースユニットは、硫酸塩グループによ って、１個または複数の２．３．６位置で置換されても良い。

本発明はまた、そのような薬品を含む組成を提供する。

更に、本発明は、ＨＩＶ−１及び関連ウィルスに対するそのような薬品及び組成 の使用法をも提供する。

本発明で使用されるデキストリン硫酸は、グルコースユニット当たり、２個以上 の硫酸塩グループを有し、好適なデキストリン硫酸は、グルコースユニット当た り、約１個または０．　５から１．５個、より好ましくは、１．２個以上の硫酸 塩グループを有する。より好ましくは、その薬品は、２−硫酸デキストリンまた は６−硫酸デキストリンであるか、またはそれらの混合物である。

２−硫酸デキストリンは、６−硫酸デキストリンと概ね等しいＨＩＶ−１ウイル スに対する作用を有することが発見された。しかしながら、後者はより強い抗凝 固作用を有し、そのために２−硫酸デキストリンがとりわけ好ましい薬品である 。

２−硫酸デキストリン及び６−硫酸デキストリンに比べ、３−硫酸デキストリン は、比較的弱い抗ＨＩＶ作用を有することもまた発見された。従って、ある特定 の量の硫酸塩に対し、デキストリン硫酸の抗ＨＩＶ作用は、３−硫酸デキストリ ンの割合に反比例する。多くの反応条件の元では、デキストリン内のグルコース の３−ＯＨグループの残渣は、２−ＯＨ及び６−ＯＨグループよりも、反応しな いことが明らかにされている。従って、硫酸塩グループあたりの強化された抗Ｈ ＩＶ作用は、硫化の程度を比較的低く保つこと、従って、３−硫酸の存在を減少 することによって得られる。

しかしながら、特定のデキストリン硫酸を、抗ＨＩＶ剤として選択する場合、対 立する要因が存在する。即ち、一般的に言えば、 １、ある一定の硫酸塩の量に対して、 （ａ）分子量を増すほど、毒性が増し、（ｂ）分子量を増すほど、抗ＨＩＶ作用 が増す。

２、ある一定の分子量に対して、 （ａ）硫酸塩の量を増すほど、毒性が増し、（ｂ）硫酸塩の量を増すほど、抗Ｈ ＩＶ作用が増す。

事実、デキストリン硫酸は、満足な抗ＨＩＶ作用が、受容できない毒性と共に現 れるため、また、分子量が余りにも多くなるか、硫酸塩の含有量が余りにも多く なるために、実際には使用できないとみなされている。

置換段階を２の最大値に限定することによって、本発明は、適切な抗ＨＩＶ作用 を有し、かつ毒性を受容可能な限界内に保つデキストリン硫酸を製造することを 可能にした。

比較的低い段階の置換によって、３−硫酸デキストリンの割合を低く保ち、３− 置換によるデキストリン硫酸の毒性が回避される。即ち２．３．６−硫酸を与え るためにデキストリンが充分に置換されるならば、硫酸塩グループの１／３が３ −硫酸グループであり、それは抗ＨＩＶ作用を強化する範囲の全ての割合以外の 更なる毒性を増加する。置換の段階が２未満に保たれるときに、３−硫酸が起こ る範囲は、硫化プロセスの特性と共に変化するが、しかし通常は概ね２−硫酸ま たは３−硫酸の範囲よりも小さい。現在のところ、利用可能な分析技術は、３つ の利用可能な場所での硫化の範囲を正確に分析することを容易に可能にはしない が、しかしデキストリン硫酸のｎ、ｍ、ｒ、スペクトラムの実験は、実際の目的 のために充分な分析の表示を与える。もちろん、合計の硫酸塩の量は、従来の分 析方法、通常は硫黄の量を決定するにより、計算される。

本発明に用いられるデキストリン硫酸の分子量は、広範囲に亘って変化して良い 。例えば、本発明に用いられるデキストリン硫酸は、デキストリン硫酸を準備す るために用いられるデキストリンに対して決定されたように、１５゜０００から ２５．００．０の重量平均分子量を有して良い。

デキストリンの分子量を決定するために用いられる技術は、Ａ１５Ｏｐ等による 、Ｊ　Ｃｈｒｏｔｒｒａｔｏｇｔａｐｈｙ　２４６．２２７−２４０（１９８９ 年）に記載されたように、デキストラン標準と共に測定される、クロマトグラフ ィーカラムを用いた、高圧液体クロマトグラフィーである。

始めにデンプンを加水分解することによって、デキストリンが準備され、次にデ キストリンが硫化されて、デキストリン硫酸が作られる。例えば、アルカリ水の 培地内で、トリメチルアミン／硫黄三酸化物錯体を用いることが、主に２−硫酸 塩を与える。ジメチルホルムアミド内のシフラミン酸でデキストリンを処理する ことによって、６−硫酸塩が得られる。始めにデキストリンをアセチル化し、次 にジメチルホルムアミド内のトリメチルアミン／硫黄三酸化物錯体で処理し、最 後に水酸化ナトリウム水溶液と共にアセチルを取り除くことによって、３−硫酸 塩が得られる。

小さい分子量の物質の割合が低いデキストリン硫酸を用いることが好ましい。上 述されたように、デンプンの加水分解、概ね、希薄な酸または加水分解された酵 素による種々のデンプンの処理によって、デキストリンが作られる。

そのような方法は、広い範囲の重合を伴ったグルコース高分子を生み出す。重合 の程度（Ｄ、Ｐ、）は、１または２から比較的大きい数まで変化する。デンプン を直接加水分解した物は、重量百分率６０％以上のり、Ｐ、１２未満を有する物 質を含む。本発明の好ましい視点に於ては、デキストリン誘導体は、Ｄ、Ｐ、が １２よりも大きい、比較的大きな割合を占めるグルコース高分子を含む。好まし くは、デキストリン誘導体は、Ｄ、Ｐ、が１２よりも大きい、少なくとも重量百 分率５０％のグルコース高分子を含む。

より好ましくは、デキストリン誘導体は、Ｄ、Ｐ、１２未満の、重量百分率１０ ％未満のグルコース高分子を含む。

満の、重量百分率５％未満のグルコース高分子を含む。そのようなデキストリン 誘導体は、低いり、Ｐ、のデキストリンを除去するために分別されたデキストリ ンから調合される。溶媒沈澱及び膜精留を含む既知の分別技術が用いられても良 い。

グルコース高分子混合物を調合する方法は、英国特許第２．１３２，９１４号明 細書に記載され、比較的少ない割合の、低いり、Ｐ、を有するグルコース高分子 を伴ったグルコース高分子混合物を調合する方法は、英国特許第２゜１５４．４ ６９号明細書の例２に記載されている。この混合物は、２３，７００の重量平均 分子量を有し、１２よりも大きいり、Ｐ、を有する１９．９％の高分子と、２か ら１０までのり、Ｐ、を有する７、９％の高分子とを含む。

デキストリン誘導体が、大きい分子量の物質を殆ど含まないか、全く含まないこ ともまた好ましい。より好ましくは、デキストリン誘導体は、４０，０００より も大きい分子量の物質を殆ど含まないか全く含まない。

デキストリン硫酸は、ＨＩＶ−１及び関連するウィルスに対して特に有効な薬品 である。そのメカニズムは解明されていないが、デキストリン硫酸は、ウィルス が細胞に付着することを妨げるように作用する。その特別な球状の配座のために 、デキストリン硫酸は、ウィルスが細胞に付着すること及びウィルスの侵入を特 に効果的に妨げることのできる比較的接近して充填された硫酸塩グループの単体 を提供する。デキストリン硫酸は、比較的低い密度で効果的である。更に、上述 されたデキストリン硫酸の球状の配座は、硫化の程度が比較的低い場合でさえも 、その物質がＨＩＶ−１及び関連するウィルスに対して効果的であることを明ら かにする。即ち、グルコース当たり１つの硫酸塩という、またはそれより低い硫 化の程度は、比較的低い濃度でも効果的であることが知られている。強く硫化さ れた物質によって経験される副作用及び毒性を回避するような低いレベルに、硫 酸塩の量を保つことができることは、１つの利点である。

デキストリン硫酸は、腸内に（経口によることを含む）服用でき、しかし好まし くは、非経口的に即ち静脈注射によって投与される。しかしながら、腹膜を通じ て行われる投与は、ウィルスの複製が広範囲に亘っているリンパ系内に、少なく とも幾つかの抗ＨＩＶ剤を直接入れることができるので、静脈注射による投与よ りも効果的である。

本発明はまた、不活性の基剤または希釈剤を伴った、上述したような本発明に基 づく薬品を含む組成をも提供する。

更に、本発明は、ＨＩＶ−４及び関連ウィルスに対する本発明の薬品または組成 の使用方法を提供し、薬品または組成は、好ましくは腹膜を通して投与される。

本発明の薬品は、腹膜を通しての投与に適合していることが好ましい。

更に本発明は、ＨＩＶ−１及び関連ウィルスの治療のための薬品の組成の製造で 用いるための、本発明に基づいて上述された薬品を提供する。

更に本発明は、患者に薬学上有効な量の本発明の薬品を投与する過程を有する、 ＨＩ　Ｖ−１または関連ウィルスを保有する人間または動物の治療方法を提供す る。

以下の例は、デキストリン硫酸を調合する方法を例示している。

匠ユ　−　３−　デキストリンの　Ａ 英国特許第２，１５４，４６９号明細書の例２の上述されたデキストリンの１６ ．２ｇが、ジメチルホルムアミド（１５０ｍｌ）内で攪拌され、融解するまで加 熱さね、そして周囲温度になるまで冷却される。無水酢酸（２３ｍ　ｌ。

０．２４ｍｏｌｅ）がゆっくりと攪拌されながら加えられる。過渡的な沈澱が・ 起こり、再び融解したとき、トリエチルアミン（２５ｍｌ、０．１８ｍｏｌｅ） が加えられ、混合物が２日間攪拌される。そして溶液は、細い流れとして攪拌さ れながら水（７００ｍｌ）中に注がれ、沈澱物が濾過され、水洗いされ、乾燥さ れて、２３ｇの白い粉末が得られる。

ジメチルホルムアミド（７５ｍｌ）内のアセチル化されたデキストリン（１２， ３ｇ）は、融解するまで攪拌され、そして、トリメチルアミン−硫黄三酸化物錯 体（１５ｇ）が加えられ、混合物が周囲温度で一晩攪拌させる。更に、トリメチ ルアミン−イオン三酸化物（Ｌｏｇ）が加えられ、混合物が６０℃で３時間加熱 される。溶液が冷却さねヘ　アセトン（５００ｍｌ）内に注がれ、粘性のある残 渣を得る。

上澄み液が取り除かれ、残渣が新鮮なアセトン（５０ｍｌ）と共に練られ、そし て上澄み液が取り除かれる。残渣が、水（１５０ｍ　ｌ）中で融解し、残留した アセトンが、真空中で取り除かれる。水（１０ｍｌ）に対してＮａＯＨ（５ｇ） の水溶液が加えられ、トリメチルアミンガスが発生する。強塩基性の溶液は２時 間貯蔵され、４日間水に対して透析され、凍結乾燥さね、１０．２ｇを得る。１ ．　Ｒ，スペクトラムは、酢酸エステルのピーク（１７５０ｃｍ−’）と硫酸塩 のピーク（１２４０ｃｍ−’）とを示す。

生成物（１０ｇ）は水（１５０ｍｌ）中で再び融解され、水溶液中のＮａＯＨ（ Ｉｇ）が加えられ、混合物は周囲温度で３時間攪拌される。水溶液は、エタノー ル（３００ｍ１）に注がね、上澄み液は取り除かね、粘性のある残渣が、新鮮な エタノール（１５０ｍｌ）と共に練られ、固体を得る。固体は、濾過して取り除 かれ、メタノールによって洗浄され、乾燥され、灰色の粉末を得る。粉末は、水 （２００ｍｌ）内で融解され、脱色用の炭（５ｇ）が加えられる。

溶液は暖められ、そして２回濾過さね、凍結乾燥されて、４６．９％、７．２ｇ の硫酸塩を得る。

匠ユ　−　６−　デキストリンの　Ａ ジメチルホルムアミド（１００ｍｌ）内の例１と等しい１０ｇのデキストリンが 、７８℃に加熱され、かつ攪拌される。デキストリンが全て融解したとき、シフ ラミン酸（２２，５ｇ）が加えら瓢　反応が１．５時間続く。水（５ｍｌ）中の ＮａＯＨ（５ｇ）の水溶液と、エタノール（５０ｍｌ）が加えられ、かつ混合物 がジエチルエーテル（４００ｍｌ）内に注がれる。固体が濾過されて取り除かれ 、エーテルで洗浄され、空気によって乾燥される。固体は、水（１００ｍｌ）内 で融解され、酢酸ナトリウム（５０ｇ）が加えられ、溶液は、４日間水に対して 透析され、そして凍結乾燥され、４７．２％、１５．４ｇの硫酸塩を得る。

匠ユ　−　２−　デキストランの　Ａ 蒸留水（１５０ｍｌ）内の例１と等しい４０ｇのデキストリンが、丸底フラスコ 内で３０℃で攪拌される。デキストリンが全て融解したとき、トリメチルアミン ／硫黄三酸化物（５１ｇ）が溶液へ加えられる。混合物は、３０分間攪拌される 。水酸化ナトリウム（６２，５ｍｌ、４０％ｗ　／　ｖ　）が、１時間に亘って 滴下されて混合物に加えられる。そして混合物は、２時間強、攪拌され、真空に よって濾過される。結果として得られた固体は、水道水に対して１日間透析され 、蒸留水に対して１日間透析される。そして透析された溶液は、減少された圧力 のもとての蒸発によって濃縮される。濃縮された溶液は、３６％　ｗ／ｗ（ｗｒ ｔ　ｄｒｙ　５ｏｌｉｄｓ）の硫酸塩に３０ｇの融解しない固体を含んでいた。

例１．２、及び３の生成物は、それらのｎ、ｍ、ｒ、スペクトラムの実験から、 各々、３−１６−１及び２−硫酸塩であると特定された。

始めのデキストリンの１３Ｃｎ、ｍ、ｒ、スペクトラムは、６本の線を示す。そ れらの線は、標準の化合物を参照することによって、１００．３、Ｃ−１ニア７ ．６、Ｃ−４ニア３．９、Ｃ−３ニア２．２及び７１．８、Ｃ−２及びＣ−５： ６１．１、Ｃ−６と指定される。

グルコースの３−及び６−硫酸塩のｎ、ｍ、ｒ、スペクトラムは、　（Ｓ、Ｈｏ ｎｄａ、　Ｙ、Ｙｕｋｉ及びに、ＴａｈｉｕｒａによるＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔ ｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　（１９７３年）２８巻の１３０頁から１５０頁）に報告 され、かつ砂糖と比較された。即ち、３−０−硫酸塩は、Ｃ−３に対する８、５ ｐｐｍまたは９．５ｐｐｍの下方領域へのシフト、Ｃ−２に対する１、ｌｐｐｍ の上方領域へのシフト、Ｃ−４に対する２、２ｐｐｍの上方領域へのシフトを引 き起こし、かつ他の位置では多少の変化を伴うことが観測された。６−〇−硫酸 塩は、Ｃ−６に対する６、２ｐｐｍの下方領域へのシフト、Ｃ−５に対する１、 ７ｐｐｍの上方領域へのシフト、Ｃ−４に対する０、３ｐｐｍの上方領域へのシ フトを引き起こし、かつ他の位置では多少の変化を伴うことが観測された。

例１の生成物のｎ、ｍ、ｒ、スペクトラムは、変形されていなイＣ−６−ＯＨの 特徴である、６１．ｌｐｐｍでの強い信号を示す。顕著な新しい信号が、８２． ２ｐｐｍ及び８２．５ｐｐｍに現れている。これらは、Ｄ−グルコース−３−硫 酸塩のＣ−３に対して報告される８２．７ｐｐｍの化学的なシフトに近く、従っ て、デキストリン３−硫酸塩に指定される。この指定は、Ｃ−４に対する始めの デキストリンの７７．６１）Ｉｌｐｍの信号の実質上の消失によって支持される 。Ｏ−３での置換は、Ｃ４に対する信号の上方領域へのシフトを引き起こすこと が予想され、その信号を他の信号の範囲内に配置する。７０．２ｐｐｍと７０゜ ８ｐｐｍの新しいピークは、始めの位置７２．　２ｐｐｍと７１．８ｐｐｍから の上方領域へのシフトによって、３−硫酸塩のＣ−２に属する。Ｃ−１領域は、 元々のデキストリンの領域から僅かに上方領域の１００．ｌｐｐｍと９８゜３ｐ ｐｍとの間に６本の隣接して隔てられた線を示す。このデータから、例１の生成 物は略全体的に３−位置で硫化されていることが明かである。

例２の生成物のｎ、ｍ、ｒ、スペクトラムは、６１．６ｐｐｍの元々のＣ−６の ピークが大きく減少し、新しいピークがＣ−６−０−硫酸塩（６，４ｐｐｍ下方 領域へシフト）及びＣ−６−０−硫酸塩に隣接するＣ−５（２，５または２．９ ｐｐｍ上方領域へシフト）に対して、各々、６７．５ｐｐｍと６９．３ｐｐｍに 現れていることを示している。このデータは、例２の生成物が主として、６−位 置に置換されていることを示す。

例３の生成物のｎ、ｍ、ｒ、スペクトラムは、元々のデキストリンのスペクトラ ムと比較して、６１．６ｐｐｍの置換されいないＣ−６−ＯＨに対する主な信号 、自由な３−ＯＨを示す、７８．　ｉｐｐｍの平静なＣ−４信号及び、１００、 　３ｐｐｍの元々の位置から９９．８ｐｐｍまで上方領域にシフトした主なＣ− １信号を示している。このデータから、例３の生成物は、主として２−位置に置 換されていることが明らかになる。次の例では、ＨＩＶ−１に対するデキストリ ン硫酸の有効性が試験され、他の物質、即ちデキストラン、硫酸デキストラン及 びジドビダイン（ＡＺＴ）と比較された。

ｌ　−ＨＩＶ−１に・　る２−デキストリンの肱丘 デキストリン硫酸は、分子量が５００，０００であり、Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉ ｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙから入手することができ、更にカラムクロマトグラフィ ーによって精製される。このデキストリンは分子量が９０，０００である。２− 硫酸デキストリン（ＮＢＳＤ２４と呼ばれ、上述された例３に記載されたように 調合される。）は、赤外線分析によって示されるように、グルコースユニット当 たり１つの硫酸塩グループを含んでいる。

元素分析は、グルコースユニット当たり１．１硫酸塩グループに等価な１２．７ ％の硫黄を示している。

通常の人体の抹消血リンパ球（Ｐ　Ｂ　Ｌ）は、保存料を必要としないヘパリン に採集された静脈血から、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（スエーデンのウプサ ラのＰｈａｒｍａｃｉａ　ｃｈｅｎｉｃａｌｓ）によって精留される。それは、 ３日間に亘って植物性血球凝集素（ＰＨＡ）（１ｕ　ｇ／ｍ　Ｉ）によって細胞 分裂するように刺激され、２０％の仔牛の胎児の血清（Ｆ　ＣＳ）＋インターロ イキンー２　（ＩＬ２）（５０−１００ｕ／ｍ＋）を補足された培地ＰＲＭ１１ ６４０に保持される。

人間のＴ−白血病細胞ラインＣ８１６６は、１０％ＦＣ８と共にＰＲＭ１１６４ ０内で成長する。

ＨＩＶ−１の様々な種類（ＲＦ、Ｉ　Ｉ　Ｉ　ＢＳＣＢＬ−４、Ｚ８４、及びＺ １２９）が、長期に亘って感染したＨ９細胞内で生み出される。感染していない Ｈ９細胞の５倍の余剰分が培養に加えられてから５日後に、表面に浮いている物 質が採取され、遠心分離によって不純物を取り除かれ、液体窒素内に貯蔵される 。

ＨＩＶによる、ＣＤ４＋の細胞編成効果の誘導体０８１６６は、多核巨細胞の形 成（シンシチューム）によって分析される。

次の表は、０８１６６伝染性検定に於ける、シンシチューム誘導によって決定さ れる、２つの硫化された物質、硫化されていないデキストラン、及びＡＺＴに対 するＨＩＶ−１の感受性を例示している。

（以下余白） ＨＩＶ−１（ＲＦ）は、薬剤の変化する濃度のもとで、Ｃ８１６６細胞に１０倍 希釈されて滴下される。シンシチュームが生み出される、ウィルスの最終的な濃 度が示されている。表中の数値は、実際に決定された数値の１０を底とする対数 を表している。即ち、表中の−６という数値は、１０−６という決定された数値 を表す。ＮＤは、結果がある特定の薬剤の濃度で決定されないことを表す。１０ 　ｕ　ｇ／ｍ＋の濃度では、２−硫酸デキストリン及びデキストリン硫酸は、各 々伝染性の力価を３１ｏｇだけ減少させ、それは、ＡＺＴによってもたらされた ３１ｏｇの減少に相当する。デキストリンは、ＨＩＶの複製に対して効果的では ない。１　ｕ　ｇ　／　ｍ　Ｉでは、デキストリン硫酸（２１ｏｇ）及びＡＺＴ 　（２，５ｌ　ｏｇ）で抑制が起こる。これらの結果は、次の表に示すように、 比色検定によって確認される。

れる、ＨＩＶ−１（ＲＦ）の抑制は、目視により判断され、−符号によって表さ れている。

次の表は、Ｃ８１６６細胞内でのＨＩＶ−１の伝染性力価（対数表示）の減少を 例示している。

これらの結果は、ＡＺＴまたはデキストリン硫酸よりも、大きな効果を伴って、 ２−硫酸デキストリンが、０８１６６セルでのシンシチューム誘導を抑制するこ とを示す。

餞５−２−　デキストリンの、 例４で試験された物質の相対的な特性は、［３Ｈ］−チミジンの相対的な吸収に よって測定されるような、薬剤の存在下に於ける、細胞の生存能力を参考にする ことによって評価される。９６マイクロ力価プレート（ｍｉｃｒｏ　ｔｉｔｒｅ 　ｐｉａｔｅｓ）内の人間のＰＢＬ　（１０６細胞−ウェル（ｗｅｌｌ）　）は 、３日間増加された濃度の薬剤の存在下に於いて、ＰＨＡに刺激される。　［３ ）（コーチミジン（０，５ｕＣｉ／ｗｅ　Ｉ　Ｉ）による５時間の試験の後に、 細胞が採取され、数えられる。

表示された結果は、４倍の実験の平均を表現し、薬剤の存在のもとての［３Ｈ］ 　−チミジンに対する百分率として表され、薬剤なしに制御された実験と比較さ れる。結果は以下に与えられている。

（以下余白） チミジンの吸収［用いな（申滴での％）デキストランは、その分子量が９０，０ ００であり、デキストラン硫酸は、その分子量が５００，０００である。

実際には、２００ｕｇ／ｍ＋濃度付近では、特定の薬剤を用いる必要がある。こ のような濃度では、ＡＺＴは非常に高い毒性を有し、デキストラン硫酸もまた高 い毒性を有することが分かる。比較すると、２−硫酸デキストリンは、硫化され ていないデキスト１ンよりも毒性が低い。

皿６　−　２−　３−　び６−　デキスト１ンの性 デキストラン硫酸、各々が例３．１及び２の２−１３−及び６−硫酸デキストリ ン誘導体の５０ｕ　ｌの標本は、１時間に亘って、５０．５．０．５、及び０， ０５ｕｇ／ｕｌという最終的な濃度で、１ｍｌ中に４Ｘ１０５個の細胞が存在す る（５０ｕｌの）Ｍ８１６６　ＪＨＩＩの培地内で３７℃に保温される。１０３ ＴＣＩＤ　（Ｉ　Ｉ　Ｉｂ、ＲＦ。

ＣＢＬ２０）または１０２７ＣＩ　Ｄ　（ＲＵＴの５０ｕ１が加えられ、培地は 、制御培地、エフェクタが存在しない）が９０％十のシンジチアを示すまで保温 される（２〜３日）。

抑制濃度は、シンジチアの形成が、最終的な点で制御されたシンジチアの１０％ 未満であることがみいだされる最小の濃度に設定される。結果は次の表に示され ている。

（以下余白） デキストラン硫酸は、分子量がｓ、ｏｏｏである。これらの結果は、２−及び６ −硫酸デキストリンは、デキストラン硫酸及び３−硫酸デキストリンに比較して 、総合的なより大きい有効性を有することを示している。　（６−硫酸デキスト リンは、ＲＦに対して、デキストリン硫酸よりも有効である。） ｒ　−デキスト１ンの　の 試験される物質は、各々、１ｍｇ／ｍ１＝１．ＯＯＯｕｇ／ｍｌの濃度になるよ うに、ベローナル緩衝液中で、溶解され、ベローナル緩衝液中の１＝１０の希釈 によって、更なる１１００ｕ／ｍ＋への希釈が行われる。貯蔵された正規の血漿 （１ｍｌ）が９本のプラスチック間の各々に入れられている。そして、試験され る物質を含む溶液が、１〜３００ｕｇ／ｍｌの範囲の最終的な濃度を得るために 、血漿に加えられ、どの場合でも、体積はベローナル緩衝液と併せて１．５ｍｌ である。結果として得られた混合物は、３７℃で３０分間保温され、続いて各々 の標本から０１２ｍ１の２つのアリコートが試験管に抽出され（標本Ａ及びＢ） 、０．１ｍｌの７Ｕボバイントｃｙンビン（Ｂｏｖｉｎｅ　Ｔｈｒｏｍｂｉｎ） が加えられ、血餅の形成の時間が測定された。次の結果が得られた。

（以下余白） ＯＡ　１７　１７　１７　１７　１７ Ｂ　１７　１６　１７　１７　１７ １　Ａ　１７　２０　１９　１７　２５Ｂ　１７　２０　１９　１８　２５ ５　Ａ　２１　３２　４７　２２　４２Ｂ　２２　３３　４８　２４　４６ １０　Ａ　２７　５３　９１　３０　＞１８０Ｂ　２８　５５　９２　３０　＞ １８０２０　Ａ　３１　８３　１６２−　４０　＞１８０Ｂ　３３　８３　１６ ６　４１　＞１８０５０　Ａ　＞１８０　１２３　＞１８０　６２　＞１８０Ｂ 　＞１８０　１２０　＞１８０　６４　＞１８０１００　Ａ　＞１８０　１５０ 　＞１８０　８５　＞１８０Ｂ　＞１８０　１５０　＞１８０　８７　＞１８０ ２００　Ａ　＞１８０　＞１８０　＞１８０　１１０　＞１８０Ｂ　＞１８０　 ＞１８０　＞１８０　１１４　＞１８０３００　Ａ　＞１８０　＞１８０　＞１ ８０　＞１８０　＞１８０Ｂ　＞１８０　＞１８０　＞１８０　＞１８０　＞１ ８０これらの結果から、最も少ない抗凝析作用のデキストリン物質は２−及び３ −硫酸であることが分かる。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成５年３月２５日−

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．ＨＩＶ−１及び関連ウィルスに対する薬剤であって、グルコースユニット当 たり最大で２硫酸塩グループを含むデキストリン硫酸からなるか、または該デキ ストリン硫酸を有することを特徴とする薬剤。
2. ２．グルコースユニット当たり、０．５硫酸塩グループから１．５硫酸塩グルー プが存在すること特徴とする請求項１に記載の薬剤。
3. ３．グルコースユニット当たり１．２硫酸塩グループまでが存在することを特徴 とする請求項２に記載の薬剤。
4. ４．２−硫酸デキストリン、６−硫酸デキストリン及び該２−硫酸デキストリン と該６−硫酸デキストリンの混合物の何れかからなることを特徴とする請求項１ 乃至３の何れかに記載の薬剤。
5. ５．前記デキストリン硫酸が、１２よりも大きいＤ．Ｐ．を有する、少なくとも 重量百分率５０％のグルコース高分子を含むことを特徴とする請求項１乃至４の 何れかに記載の薬剤。
6. ６．前記デキストリン硫酸が、１２未満のＤ．Ｐ．を有する、重量百分率１０％ 未満のグルコース高分子を含むことを特徴とする請求項１乃至５の何れかに記載 の薬剤。
7. ７．前記デキストリン硫酸が、１２未満Ｄ．Ｐ．を有する、重量百分率５％未満 のグルコース高分子を含むことを特徴とする請求項６に記載の薬剤。
8. ８．前記デキストリン硫酸の重量平均分子量が、１５，０００から２５，０００ であることを特徴とする請求項１乃至７の何れかに記載の薬剤。
9. ９．前記デキストリン硝酸が、４０，０００よりも大きい分子量の高分子を含ま ないことを特徴とする請求項１乃至８の何れかに記載の薬剤。
10. １０．不活性の基剤又は希釈剤と共に、請求項１乃至９の何れかに記載された薬 剤を有することを特徴とする組成体。
11. １１．ＨＩＶ−１及び関連ウィルスに対する、請求項１乃至１０の何れかに記載 された薬剤または組成体の利用方法。
12. １２．前記薬剤が腹膜を通して投与されることを特徴とする請求項１１に記載の 薬剤または組成体の利用方法。
13. １３．腹膜からの投与に適合したことを特徴とする請求項１乃至９の何れかに記 載の薬剤。
14. １４．ＨＩＶ−１及び関連ウィルスの治療のための薬剤の組成体の製造に用いら れることを特徴とする請求項１乃至９の何れかに記載の薬剤。
15. １５．前記ＨＩＶ−１または関連ウィルスを有する人間または動物の治療方法で あって、 前記人間または動物に、薬剤有効量の、請求項１乃至９の何れかに記載の薬剤を 投与する過程を有することを特徴とする治療方法。
16. １６．前記ＨＩＶ−１又は関連ウィルスを有する人間又は動物の患者の治療方法 に用いることを特徴とする請求項１乃至９の何れかに記載の薬剤。