JPH06505704A

JPH06505704A - 改変ヌクレオシド間結合

Info

Publication number: JPH06505704A
Application number: JP3517556A
Authority: JP
Inventors: マテウッチ，マーク; ジョーンズ，ロバート　ジェイ．; マンガー，ジョン
Original assignee: ギリアド　サイエンシズ，インコーポレイテッド
Priority date: 1990-09-20
Filing date: 1991-09-20
Publication date: 1994-06-30
Also published as: EP0549686A4; KR930702366A; EP0549686A1; CA2092002A1; AU8646091A; US5596086A; WO1992005186A1; AU662298B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

ヌクレオシド　Ａの本願は、１９９０年９月２０日に出願された米国特許出願系０７７５８５、７８０号の一部継続出願であり、上記の出願に基づいて、米国特許法第１２０条に基づいて優先権を主張するものであり、かつ上記出願のすべての内容を本願に援用する。皮五公！本発明は、新規な改変オリゴヌクレオチド、その構築法およびそのアンチセンス治療法への使用に関する。さらに詳しくは、本発明は、ヌクレアーゼに対して耐性の改変ヌクレオシド間結合を有し、細胞に侵入する能力が増強され、江出１ａＬｎ血の両方で標的のオリゴヌクレオチド配列に結合できる、新規なオリゴヌクレオチドに関する。本発明の改変オリゴヌクレオチドは、アンチセンスＤＮＡを用いてタンパク質の合成を中断させるか、さもなければメツセンジャーＲＮＡまたは二本鎖ＤＮＡを不活性化する治療に特に有用である。！ｌ挟歪アンチセンスオリゴヌクレオチドは、相補的核酸（すなわち、センス鎖配列）を水素結合によって結合する合成オリゴヌクレオチドであり、その結果、これらの配列の翻訳を阻害する。アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いる、核酸レベルの治療介入にはいくつもの利点がある。例えば、遺伝子の発現は、アンチセンスのオリゴマーを用いて阻害し得る。遺伝子発現の阻害は、遺伝子でコードされるタンパク質の阻害より効率的である。なぜなら、単一のＤＮＡ配列が転写されると、曹ＲＮＡの多数のコピーが生じ、そのｍＲＮＡが多数のタンパク質分子に翻訳されるからである。アンチセンス治療法は、病因が特定のＤＮＡの配列もしくはＲＮＡの配列を特徴としているか、または該配列に関連している疾患に対して特に有用である。治療剤として利用されるオリゴマーは、直接投与され得るか、または江■」で生成され得、疾患が進行するのに必要なりＮＡもしくはＲＮＡに相補的なオリゴマーである。このオリゴマーは、上記の標的核酸配列に特異的に、結合し、その結果、標的配列の通常の機能を阻害する。疾患が進行するのに必要なタンパク質をコードするｍＲＮＡの塩基配列に相補的な塩基配列を有するオリゴマーは、特に有用である。このｍＲＮＡと特異的にハイブリダイズすることによって、上記タンパク質の合成が中断される。しかし、投与されるオリゴマーを二重らせんＤＮＡの主溝に挿入することによって特異的な三重らせんを形成し得る適切なオリゴマーを使うことにより、二本鎖ＤＮＡを結合することもできる。治療の対象になる配列の解明は、もちろん、各標的の症状または疾患に対して特異的な問題である。一般的な原理は充分に理解され確立されているとはいえ、特定オリゴマーのプローブの設計には、配列についての予備情報が大量に必要である。アンチセンスオリゴマープローブの重要な特徴は、投与されるオリゴマーの骨格の構造である。具体的に述べれば、その骨格は、ｉｎ　ｖｉｖｏで安定なヌクレオシド結合を含有していなければならず、かつそのオリゴマーがリン酸ジエステル結合を攻撃するヌクレアーゼのような内在性ヌクレアーゼに対して耐性であるように構築されていなければならない。同時にそのオリゴマーは、標的のＤＮＡまたはＲＮＡとハイブリダイズする能力も保持していなけらばならない（Ａｇａｒｗａｌ、に、Ｌ３ら、ｈｃｌｅｔｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ　（１９７９）　６：３００９；　Ａｇａｒｗａｌ、Ｓ、ら、Ｐｒｏｃ　ＮａｔｌＡｃａｄ　Ｓｅｔ　ＵＳＡ　＜１９８８）　８５ニア０７９）　ｏ　これらの特性を保証するために、別のヌクレオシド間結合を含有する多数の改変オリゴヌクレオチドが構築された。これらのオリゴヌクレオチドのいくつかは、Ｕｈｌｍａｎｎ、　Ｅ、およびＰｅｙｍａｎ、Ａ、、Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｅｖｉｅ９３　（１９９０）　９０：５４３−５８４に記載されている。これらの中には次のものがある。すなわち、メチルホスホネート（リンと結合している酵素のうちの１つがメチルで置換されているもの）、ホスホロチオ、）−−ト（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ）　（上記の酵素の１つがイオウで置換されているもの）、および種々のアミデート（酵素が、ＮＯ３、または、モルホリゾートもしくはピペラジデートのような有機アミン誘導体で置換されているもの）である。これらの置換によって、大部分の場合、安定性が増強されるが、その結合中にキラルなリンが生成する欠点があり、２１のジアステレオマー（ｎはオリゴマー中の改変されたジエステル結合の数）が生成する。これら多数のジアステレオマーが存在すると、改変オリゴヌクレオチドが標的配列とハイブリダイズする能力を著しく弱める。これらの置換基のいくつかはまた、負の電荷を保持する能力を有し、電荷を有する基が存在するとその化合物の細胞膜を通過する能力が低下する。その結合の明確な性質によって、これらの改変された結合に関連する他の多数の欠点がある。カルボネートジエステルを使うことも教示されている。しかし、これは非常に不安定であり、かつカルボネートジエステルの結合は、ホスホジエステル中のリンが示す四面体立体配置を維持しない。同様に、カルバメートの結合は、アキラルであるが、三方対称性を与える。そしてこの結合を有するポリｄＴはポリｄＡと強くハイブリダイズしないことが報告されている（　Ｃｏａｌｌ、　Ｊ、Ｍ、　、ら、Ｔｅｔ　Ｌｅｔｔ　（１９８７）　２８ニア４５；　５ｔｉｒｃｈａｋ、　Ｅ、　Ｐ、　、ら、Ｌ曳ＬＬ工ＩＬ（１９８？）　５２：４ＺＯ２）。本願出願人が権利を所有している、１９９０年７月３０日付で出願された係属中の米国特許出願第５５７．９５７号には、式−ＹＣＸ２Ｙ−（式中、Ｙは独立して０もしくはＳであり、各Ｘは安定化する置換基であり、独立して選択される）で表される改変された結合が記載されている。アンチセンス治療法に有用なオリゴマーの一般的な構築法は、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ、　Ｅ、およびＰｅｙｍａｎ、Ａ、、Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅｖｉ　ｗｓ（１９９０）　９０：５４３〜５８４；　ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｋｒｏｌ、Ａ、Ｒ，、ら、氾旦堕立Ｉ山匹ｅｓ　（１９８８）　ｉ：９５８〜９７ｆＢ　および５ｔｅｉｎ、　Ｃ，Ａ、ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　（１９８ｇ＞　４８：２６Ｓ９〜２６６８に概説されている。これらはすべて本願に援用されている。本発明は、ヌクレアーゼの消化に対して耐性で、生理的条件下で安定であり、かつ細胞侵入性を高めるために中性、または正に荷電し得るヌクレオシド間結合を提供する。さらに、この結合はアキラルであり得、そのため、生成した化合物に多数のジアステレオマーが生成するという問題がない。ｌ匪立皿示本発明は、改変ヌクレオシド間結合とも呼ばれる改変された骨格結合を含有する新規なオリゴヌクレオチドの構築に基づ（。これらのオリゴヌクレオチドは１，１１１　ｖｉｖｏで安定であり、内在性ヌクレアーゼに対して耐性であり、かつ標的ヌクレオチド配列にハイブリダイズし得る。１つの実施態様において、本発明は、改変オリゴヌクレオチドまたはその誘導体に関する。ここで、その改変は、３°および隣接する５°ヌクレオシド間の１個以上のホスホジエステル結合を、ヌクレオシド間結合を形成する原子の少なくとも１つが窒素、酸素およびイオウから選択され、残りの原子は炭素である、長さが２−４原子のヌクレオシド間結合で置換することを包含する。他の実施態様において、本発明の主題は式（１）で表されるオリゴマー、またはその誘導体に関する：（以下余白）式中、各Ｒは独立して、Ｈ，ＯＨ，ＯＣＨ３％５（Ｈ３，０Ｃ３Ｈ６（０−アリル）　ＯＣ３［１７（０−プロピル）、５Ｃ３Ｈ５またはＦであり、そして、各日は独立して、プリン残基もしくはピリミジ残基または類似の残基であり、そして各Ｑは独立して、ホスホジエステル類似体、または長さが２〜４のヌクレオシド間結合であって、そのヌクレオシド間結合を形成する少な（とも１つの原子が窒素、酵素もしくはイオウから選択され、残りは炭素であり、ｎは１〜２００であり、但し、少なくとも１つのＱはホスホジエステル類似体ではない。さらに他の実施態様において、本発明は、ヌクレオチド配列の存在で媒介される疾患を治療する方法に関し、このような治療を要する被験体に、該ヌクレオチド配列を特異的に結合し得る上記改変オリゴヌクレオチドの、該ヌクレオチド配列を不活性化するのに有効な量を投与する工程を包含する。本発明の上記およびその他の実施態様は、当業者ならば、本願の開示事項を見て容易に実施し得る。

【ｉ囚囚星ユ鳳里図１〜１５は、本発明のヌクレオシド間結合を合成するのに使用できる１２の化学反応シーケンス図である。さらに各図について具体的に述べると、次のとおりである。図１は、５゛末端に窒素を有する、長さが３原子の結合の生成を示す。図２は、３°末端に窒素を有する、長さが３原子の結合の生成を示す。図３は、中央部に窒素原子を有する、長さが３原子の結合の生成を示す。図４は、３°末端に酸素を有し、モして５°末端に窒素を有する、長さが４原子の結合の生成を示す。図５は、３°末端に窒素を有し、そして５゛末端に酸素を有する、長さが４原子の結合の生成を示す。図６は、５′末端に窒素を有する、長さが２原子の結合の生成を示す。図７は、３°末端に窒素を有する、長さが２原子の結合の生成を示す。図８は、３°末端にイオウを有する、異なる３種類の、長さが３原子の結合の生成を示す。図９は、３°末端にイオウを有する、異なる３種類の、長さが２原子の結合の生成を示す。図１０は、５°末端にイオウを有する、異なる３種類の、長さが２原子の結合の生成を示す。図１１は、３°末端に酸素を有する、長さが３原子の結合の生成を示す。図１２は、５゛末端に酸素を有する、長さが３原子の結合の生成を示す。図１３は、３°末端に誘導体化された窒素を有する、長さが３原子の結合の生成を示す。図１４は、モルホリノ基を含有する結合の生成を示す。図１５は、３°末端にイオウを有する、長さが３原子の結合の生成を示す。図１６は、ＤＮＡ二本鎖の結合のフットプリントアッセイの概略およびその理想化された試験結果を示す。１１象説皿本発明を実施する際には、特に記載がない限り、化学、分子生物学、生化学、タンパク質化学、および組換えＤＮＡ法の通常の方法を使用する。これらの方法は当該技術分野の技術の範囲内にある。上記の方法は文献に充分説明されている。例えば、Ｏｌｉ　ｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　Ｓ　ｎｔｈｅｓｉｓ　（Ｍ、Ｊ、Ｇａｌｔ編集、１９８４）　；Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｈｂ　Ｉｄｉｚａｔ　ｏｎ　（Ｂ、Ｄ、ＨａｍｅｓおよびＳ、　Ｊ、Ｈｉｇｇｉｎｓ編集、１９８４）　；　Ｓａ＋＊ｂｒｏｏｋ、Ｆｒ１ｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｔｓ、　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃ１ｏｎｉｎ　：　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　Ｍａｎｕａｌ、第２版（１９８９）　；ならびにｔｈｅ　５ｅｒｉｅｓ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚ　ｍｏｌ　のシリーズ（Ｓ、　Ｃｏ１ｏｖｉｃｋおよびＮ、　Ｋａｐｌａｎ編集、Ａｃａｄｅ＋ｉｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ、）を参照ＯＡ、定鳳本発明を説明するのに、下記の用語を使用するが、これらを以下に示すように定義する。本明細書で使用する用語「アンチセンス」治療法は、標的核酸配列に特異的に結合するＤＮＡもしくはＲＮＡのオリゴマーまたはそれらの誘導体の投与またはＬＩＩＬｓｉｔｕでの生成を意味する。その結合は、通常の塩基対相補性によるか、または例えば、ＤＮＡ二本鎖に結合する場合、二重らせんの主溝での特異的な相互作用によって行われ得る。一般に用語「アンチセンス」は、本明細書の当該技術分野において一般に用いられる技術範囲を意味し、オリゴヌクレオチド配列に対する特異的な結合に基づくすべての治療法を包含する。用を吾「オリゴマー」または「オリゴヌクレオチド」は、１つより多いヌクレオチドのＲＮＡおよびＤＮＡ配列（一本鎖および二本鎖の両方）を包含する。用語「ヌクレオシド」は、糖またはその誘導体を意味し、以下に述べるように、プリン、ピリミジンもしくはその類似体を含有し、以下のように定義されるが、ホスホジエステル類似体または改変ヌクレオシド間結合のような結合する配列がない。用語［５−ヌクレオシドは、リンカ−に対して５°炭素結合点を与えるヌクレオシドを意味する。リンカ−の「５′」末端は、５“ヌクレオシドに結合する。リンカ−の「３′」末端は、次のヌクレオシドの３°の位置に結合する。正確には３゛および／または５°炭素を含有していない改変ヌクレオシドが存在していても、用語「３°」と「５°」は、類推して用いられていると理解するべきである。用語オリゴマーの「誘導体」は、当該技術分野で通常認識されている誘導体が含まれる。例えば、オリゴヌクレオチドは、インターカレーター、ＤＮＡ二重らせんの小溝と特異的に相互作用する物質、および標識（放射性、蛍光、酵素など）のように任意に選択された他の結合体のような、各種の物質に共有結合している。これらの付加部分は、結合自体の一部として改変された骨格結合によって誘導体化され得る（しかし、必ずしも誘導体化される必要はない）。例えば、アクリジンのようなインターカレーターは、例えばＲＮＡまたはＤＮＡの末端５°位、ＲＮＡの２°位ですべての利用し得る一ＯＨもしくは一３Ｈ１またはピリミジンの５位に結合させたＯＨもしくはＳＨ，例えばシトシンの５位のメチルの代わりに、−ＣＨ２Ｃ［ｌ２ＣＨ２０■もしくは−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ■２ＳＨを５位に含有する誘導体化された形態、を介して結合された一Ｒ−ＣＨ２−Ｒ−によって結合され得る。通常の結合を介して結合された置換体を含む、広範な種類の置換体を結合し得る。従って、式（１）のオリゴマー中に示した一〇Ｈ部分は、ホスホネート基で置換し得、標準の保護基で保護され得、または他のヌクレオチドと別の結合を作るように活性化し得、または連結する置換体に結合され得る。５°末端のＯＨは通常リン酸化されており、また２°の−ＯＨまたは３゛末端の０■置換体もリン酸化され得る。これらのヒドロキシル基はまた、標準の保護基に誘導体化され得る。さらに、特に、本願出願人が権利を所有する係属中の米国特許出願第４２５，８５７号に開示されている２°誘導体のヌクレオチド残基、および本願出願人が権利を所有する係属中の米国特許出願第５５７．９５７号に開示されているホルムアセタール／ケタール盟の結合が含まれる。これらの出願は両方とも、それらのすべてを本願に援用している。２°位が改変されているＤＮＡオリゴマーおよびヌクレオシドの合成は、２゛フルオロ化合物については、Ｕｅｓｕｇｊ、Ｓ、ら、旺匹肚虹■、ＬＸ、（１９８１）　２０：３０５６〜３０６２；　Ｃｏｄｉｎｇｔｏｎ、Ｊ、Ｆ、ら、Ｊ　Ｏｒ　ａｎｉｃ　Ｃｈｅｗ、（１９６４）　２９：５６４〜５６９；　Ｆａｚａｋｅｒｌｅｙ、Ｇ、Ｖ、ら、ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、（１９８５）　１８２：３６５〜３６９に記載されており、２−０−アリル化合物（ＯＣ３Ｂｓ）については５ｐｒｏａｔ、　Ｂ、　Ｓ、ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｔ山江」競（１９９１）　ｕニア３３〜７３８に記載されており、モして２−アジド化合物については、Ｈｏｂｂｓ、　Ｊ、ら、　’ｏｃｈ　ｍ１ｓｔｒ　（１９７３）　［：５１３８〜５１４５に記載されている。これらの誘導体も特に本発明に含まれる。本発明に記載されるオリゴマーに考えられる特定の改変は、本願出願人が権利を所有する係属中の米国特許出願第６９０，７８６号に記載されているような二本鎖スイッチングできる部分、本願出願人が権利を所有する係属中の米国特許出願第６４０，６５４号に記載されているような共有結合架橋に影響を及ぼすＲ４゜Ｎ′−エタノシトシン（アジリジニルシトシン）のような成分、および本願出願人が権利を所有する係属中の米国特許出願第６４３．３１１２号に記載されているような二本鎖標的核酸にオリゴマーが結合しやす（する塩基類似体の８−ヒドロキシ−Ｒ６−メチルアデニンのような分子を包含する。上記の特許出願は本願に援用されている。用語［ホスホジエステル類似体」は、通常のホスホネートの類似体および他の結合基を意味する。これらの他の結合基には、限定されないが、ＨＯ−Ｐ＝Ｏ（Ｐ（０）ＯＨ）が、Ｐ（０）Ｓ　、　Ｐ（Ｑ）ＮＲ２、Ｐ（０）Ｒ，Ｐ（０）ＯＲ ’、ＣＯｌまたはＣＮＲ２（但し、ＲはＨもしくはアルキル（１−６Ｇ）であり、Ｒｏはアルキル（１−６Ｃ）である）で置換されている実施態様を包含する。同じオリゴマー中のすべてのホスホジエステル類似体が、同じである必要はなく、唯一の必要条件は、これらの結合のうちの少なくとも１つが、本明細書に記載されるように、改変されたヌクレオシド間結合であることである。また「誘導体」の定義は、通常のリボース糖カ、式（２）に示すようなモルホリンのような複素環化合物で置換されている物質を包含する。これらの誘導体は、本明細書ではＢが誘導体化された塩基を表す「モルホリンＢ」と呼ぶ。プリンとピリミジンの「類似」体は、当該技術分野で広く知られているものであり、その多くは化学療法剤として利用されている。網羅して挙げたものではないがその例としては、４−アセチルシトシン、８−ヒドロキシーＮ６−メチルアデノシン、アジリジニルシトシン、プソイドイソシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５− カルボキンメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチルアミ／メチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｒ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルアデニン、１−メチルプソイドウラシル、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２．２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｒ６−メチルアデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキュエオシン、５−メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メト牛シウラシル、２−メチルチオ−Ｒ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル− ５−オキシ酢酸、オキシブトキンシン、プソイドウラシル、キュエオシン、２− チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、プソイドウラシル、キュエオシン、２−チオシトシン、および２．６−ジアミツプリンがある。特に好ましい類似体は５−メチルシトシン（本明細書ではｒｃｍｅＪと略記する）である。用語［同一立体の（ｉｓｏｓｔｅｒｉｃ）　Ｊは、ヌクレオシド間結合の空間特性と配向特性、およびこれらの特性が、天然のホスホジエステル結合の特性と非常に類似しているので、同一立体の結合を含有する改変オリゴヌクレオチドが、天然のオリゴヌクレオチドに取って換わり、置換し、模倣しおよび／またはハイブリダイズする事実を述べるために用いられる。本発明は、アンチセンスに基づいた治療に有用な新規の化合物、およびこの化合物を製造する際の中間体、ならびにこれらの化合物およびその中間体の合成方法に関する。一般に、本発明の化合物は、その改変された結合によってヌクレオチドに対する増加した安定性、そして、増加した細胞に侵入する能力を示す。本発明の改変オリゴヌクレオチドは、式１のＱの中に含まれる少なくとも１つのホスホジエステル基が、本明細書に記載の改変されたヌクレオシド間結合で置換されている。好ましくは、未改変オリゴヌクレオチド中の多数のホスホジエステル結合が、本明細書に記載の改変された骨格結合で置換される。１つの改変ヌクレオシド間結合が、この構造内で繰り返し使用され得、あるいは、所望により、種々の改変ヌクレオシド間結合が用いられ得る。これらの置換結合は本来、／％イブリダイズする能力を増強するためにキラルでない方が好ましいが、本発明の有用な化合物には、キラル体を利用する化合物も含まれ得る。結合部分のＱには、隣接する、３゛と５°ヌクレオシドの間の１つ以上の結合を、長さが２〜４原子のヌクレオシド間結合で置換した置換体を包含する。ここで、そのヌクレオシド間結合を形成する少なくとも１つの原子は、窒素、酸素、またはイオウから選択され、残りは炭素である。上記の２〜４個の原子の少なくとも１つは、　ＮＲの形態の窒素であり、ここで、Ｒは水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、アリール、スルホンアミド、ホスホルアミデート、ＮＲ’、ＯＲ’ 、（ここで、Ｒｏは水素、低級アルキル、ヘテロアルキルもしくはアリールである）である。好ましい改変されたヌクレオシド間結合は、Ｑとして表１に示す構造を包含する。（以下余白）ここで、Ｒはさきに定義したのと同じである。特に好ましいヌクレオシド間結合としては、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ。 −ＮＲ−ＣＢ２−ＣＨ２−１−ＣＨ２−ＮＲ−ＣＨ２−１−ＣＨ２−ＣＨ２−０ −１−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−１−Ｓ−ＣＨ２−Ｃ［１２−および−０−ＣＨ２− ＣＨ２−ＮＲ−が含まれる。本発明の化合物は、同種の結合型のオリゴマーに限定されず、交互にもしくはランダムに分布したホスホジエステル類似体および改変された骨格結合を想定し得ることは、明らかである。本発明のオリゴマーは、一度に１つのヌクレオチド残基を合成するので、個々の各結合、および個々の各ｒＢＪ置換体の種類は自由に選択され得る。Ｑの結合は安定でなければならない。Ｑ結合中に存在する置換体の種類を広げることができる程度は、得られる生成物の安定性を簡単にアッセイすることによって容易に決定し得る。そして、その決定およびこれらの結合の利用可能性を予想するのは、当該技術分野の範囲内にある。さらに、Ｑはそれ自体が官能基を含有している場合、治療の際に添加物として有用な所望の部分、例えばネトロブシンおよびその誘導体、アントラマイシン、キノキサリン抗生物質、アントラマイシンおよびピロロ（１−４）ベンゾジアゼピン誘導体のようなインターカレーターまたは小溝反応性物質を連結するのに利用し得ることに注目すべきである。本発明のオリゴマーは、任意の数の、本発明の改変ヌクレオシド間結合を含有し得る。これらの結合は、Ｑについて選択される実施態様によって、互いに同一または異なっていてもの置換体、および糖残基のいずれのパターンも使用され得る。い（つかの好ましい実施態様では、改変されたヌクレオシド間結合は、規則的なパターンで交互に変化する。例えば、１つの改変されたリンカ−に２つのホスホジエステル類似体結合が続き、次に１つの改変されたリンカ−が続くなどのパターンである。その他の例は、例えば、１つの改変結合に、１つのホスホジエステル類似体、改変結合および、ホスホジエステル類似体が続くような交互する結合を包含する。その結果、２種の結合が１つ毎に変化する。各種の規則的な変化のパターンは容易に得られる。１つ以上のこれらの糖残基に、任意の改変が行われ得ることも明らかであるが、はとんどの場合、リボシル残基の間の標準の３−５゛ヌクレオチド結が最も好都合である。場合によっては、構造をさらに省略した記号が用いられ得る。例えば、標準のＤＮＡ　（またはＲＮＡ）において、その配列は、一般に塩基だけの配列、例えばＡＴＧ　ＣＯＣＴＧＡのような配列で示される。一般に、それがＲＮＡの配列かまたはＤＮＡの配列のいずれを表しているのか、予め簡単に述べられる。本発明の化合物では、別の生理学的ＤＮＡ分子もしくはＲＮＡ分子の改変について類似の命名法が用いられ、改変された骨格結合で置換されるホスホジエステル結合が、その構造で示される。従って、５−ＴＣＴＣｍｅ　（０−（Ｊ１２ −Ｃ１１２−ＮＨ）　ＴＣｍｅ　（０−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ）　ＴＣｉｅ　（０−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ）ＴＣｍｅ　（０−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ）　ＴＴＴＴ−３°は、指定の位置で置換された４つのホスホジエステル結合を有するオリゴヌクレオチドＴＣＴＣｉｉｅＴＣｍｅＴＣｍｅＴＣｍｅＴＴＴＴ　（Ｃ＋Ｉｅは５−メチルシトシンを表す）を表す。８．１歴庄上丘亙造本発明の改変オリゴマーは、天然のオリゴヌクレオチドに同一立体である。この特性によって、改変オリゴマーは、天然の配列とハイブリダイズでき、このような天然の配列を同定するハイブリダイゼーシブンブローブとして有用になる。本発明の改変オリゴマーは、さきに述べたように、アンチセンス治療法に用いるのに有用である。この治療法の特定の標的には、ウィルス疾患、悪性の細胞増殖、細菌性疾患、および実際に、特徴的なりＮＡもしくはＲＮＡまたはその生産物の存在に関連するすべての症状が含まれる。本発明の化合物は、他の改変オリゴヌクレオチド類似体と同じ方法で利用され得、そのような利用方法は、当該技術分野で従来用いられている方法である。従って、本発明の改変オリゴマーは、治療、診断および研究に有用である。治療の用途では、本発明のオリゴマーは、上記に概略を述べたアンチセンス治療法に適した方法で利用される。本明細書で使用されるアンチセンス治療法は、相補性、または他の特異的な結合手段、例えばＤＮＡ二重らせんの主導における配列特異的配向もしくは他のすべての特異的結合モードによって特定のＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列を標的することを包含する。このような治療を行うために、本発明のオリゴマーは、全身投与、および局所または局在化投与を含む各種の投与を行うために処方され得る。投与法と処方は、一般に、Ｒｅ５ｉｎ旺ｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅ虹１ｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓの最新版、Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ、、　Ｅａｓｔｏｎ、　ＰＡに記載されている。全身投与は、筋肉内注射、静脈内注射、腹腔内注射および皮下注射を含む注射が好ましい。注射を行うために、本発明のオリゴマーは、液体水剤で処方されるが、ノ＼ンクス液またはリンゲル液のような生理的適合性の緩衝液中に処方することが好ましい。さらに、本発明のオリゴマーは固体剤型で処方され得、使用する直前に再溶解もしくは懸濁され得る。凍結乾燥した剤型も含まれる。全身投与は粘膜経由もしくは皮膚経由で行われ得、または本発明の化合物は経口投与も行われ得る。粘膜経由もしくは皮膚経由で投与を行うには、バリヤーを透過するのに適した浸透剤が製剤中に用いられる。このような浸透剤は、当該技術分野で広く知られており、例えば、粘膜経由投与には、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が含まれる。さらに、浸透を容易にするために界面活性剤が用いられ得る。粘膜経由投与は、例えば鼻腔内スプレーによって行われ得るが、または坐剤も用いられ得る。経口投与を行うには、本発明のオリゴマーは、カプセル剤、錠剤および持続剤（ｔｏｎｉｃｓ）のような通常の経口投与剤型に製剤される。局所投与用には、本発明のオリゴマーは、当該技術分野で広く知られている軟膏、膏薬、ゲル剤またはクリーム剤に製剤される。本発明のオリゴマーは治療に使用されるのに加えて、診断剤として用いられ、診断剤が特異的に結合する標的ＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列の存在または不在を検出し得る。このような診断試験は、塩基相補性によるハイブリダイゼーション、または通常の手段によって検出される三重らせんの形成によって行われる。例えば、本発明のオリゴマーは、放射性標識、蛍光標識または色素標識を用いて標識され得、かっ固相支持体に結合した標識の存在を検出し得る。あるいは、これらの形態を特異的に認識する抗体によって、二重らせんまたは三重らせんの存在で検出し得る。このようなオリゴマーをプローブとして用いてアッセイを行う方法は公知である。上記の用途に加えて、本発明のオリゴマーが遺伝子の発現を阻害する能力は、組換え系内で発現のレベルを測定することによって、ｉｎ　ｖｉｔｒｏの系で証明され得る。本発明の特異的に結合するオリゴマーが標的のＲＮＡの活性またはＤＮＡの活性を妨害もしくは阻害する機構は、必ずしも確立されていないので本発明の一部分ではない。例えば、本発明のオリゴマーが標的のｍＲＮＡを探している場合、翻訳が阻害され得る。さらに標的を結合することによって、ｍＲＮＡメツセージの分解が促進され得るか、またはＲＮＡのさらなるプロセシングが阻害され得る。三重らせんの形成によって、対象のＤＮＡの転写もしくは複製が阻害され得、さらに感染性ＲＮＡの逆転写または感染性ＤＮＡの複製が妨害される。また、免疫機能は、例えば「アンブリジエン（ａ＋＊ｐｌｉｇｅｎ）　Ｊ系のような二本鎖ＲＮＡで誘発される機構、または全身性エリテマトーデスを抑制するのに利用される機構に類似する生理機構を通じて調節され得ると考えられる。本発明のオリゴマーは、標的化の機構またはその作用の機構にかかわらず、特定のオリゴヌクレオチド配列を標的にする能力が特徴である。最終的に、ＤＮＡは、骨格のオリゴマー特性を物質的に破壊しないで改変する、インターカレーター、キレータ−１親油性基、標識、または他のすべての置換部分を含む各種の部分に誘導体化され得ることが分かる。０．４区盗皇金成改変ヌクレオシド間結合を含有する本発明のオリゴマーは、オリゴヌクレオチド誘導体の合成の当該技術分野で公知の反応を使って合成され得る。例えば、Ｆｌａｎｄｏｒ、　Ｊ、およびＹａｍ、　Ｓ。Ｙ、、Ｔｅｔ　Ｌｅｔｔｓ　（１９９０）　３１：５９７〜６００；　Ｍａｔｔｓｏｎ、Ｒ，Ｊ、ら、Ｊ　ＯｒＬ工恒Ｊ（１９９０）　５５：２５５２〜２５５４；　Ｃｈｕｎｇ、Ｃ，に、ら、Ｌユ」Ｌ工種１（１９８９）　５４：２７６７〜２７６９を参照。表１に具体的に列挙した各種の結合から分かるように、本発明の結合は、その連結構造中に、１つ以上の窒素、イオウ、および／または酸素の原子を含有するよう変化し得る。これらの原子の、結合中の位置は、「５°」末端から、「中央部」、「３゛」末端へと変化し得る。このセフシロンでは、結合内の窒素原子、酸素原子およびイオウ原子が種々の位置と組み合わせに至る経路を提供する、一連の代表的な合成反応系について述べる。具体的に述べると、図１に示す図式１は、３°ヌクレオシドの５゛末端に窒素を有する、長さが３原子の結合を含有するヌクレオチドニ量体の生成を示す。図２に示す図式２は、５°ヌクレオシドの３ °末端に窒素を有する、長さが３原子の結合の生成を示す。図３に示す図式３は、中央に窒素を有する、長さが３原子の結合の生成を示す。図４に示す図式４は、３′末端に酸素を有し、かつ５゛末端に窒素を有する、長さが４原子の結合の生成を示す。図５に示す図式５は、３°末端に窒素を有し、かつ５°末端に酸素を有する、長さが４原子の結合の生成を示す。図５に示す図式６は、５°末端に窒素を有する、長さが２原子の結合の生成を示す。図７に示す図式７は、３゛末端に窒素を有する、長さが２原子の結合の生成を示す。図８に示す図式８は、３°末端にイオウを有する、長さが３原子の結合の異なる３種類の生成を示す。図９に示す図式９は、３′末端にイオウを有する、長さが２原子の結合の異なる３種類の生成を示す。図１０に示す図式１０は、５°末端にイオウを有する、長さが２原子の結合の異なる３種類の生成を示す。図１１に示す図式１１は、３°末端に酸素を有する、長さが３原子のオリゴマー結合の生成を示す。図１２に示す図式１２は、５°末端に酸素を有する、長さが３原子の結合の生成を示す。図１３に示す図式１３は、３°末端に窒素を有する、長さが３原子の結合のアルキル誘導体の生成を示す。図１４に示す図式１４は、長さが３原子のモルホリノ誘導体の生成を示す。最後に、図１５に示す図式１５は、３°末端にイオウを有する、長さが３原子の結合の生成を示す。これらの図式は、オリゴヌクレオチド化学の分野において実施されている技術として知られている様に改変され得る。例えば、塩基の保護は、これらの合成図式では必ずしも示されていないが、保護されることが望ましく、当該技術分野で公知の試薬および方法を用いて実施され得る０例えば、Ｐｒｏｔｅｃｔ　ｖ　Ｇ　ｏｕ　ｓ　’　Ｏｒ　ａ　ｉｃ　Ｓ止ｕ口ｃＴｂｅｏｄｏｒａ　Ｗ、　Ｇｒｅｅｎｓ、　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙおよび５ｏｎｓ、　１９８１）を参照。同様に、いくつかの場合に保護基の使用が示されているが、例示されている改変オリゴマーを合成するために反応物をブロックすることは必ずしも必要でない。図１に戻って、図式１に示す最初の２つのステップは、チミンが保護されたシトシンに誘導体化されるステップである。図式１における第３のステップとこれに続くステップは、改変された骨格物質の合成を示す。図式１に化合物１として示す物質のような出発物質は、３°−デオキシ−３°−２−アリルヌクレオシドである。これらのアリル物質は、Ｆｌａｎｄｏｒ、Ｊ、およびＹａ■、ｓ。Ｙｌ、の前記文献に記載されている３“−デオキシ−３°−２−プロパニルチミジル誘導体に類似している。図式ｌのステップ１において、ヌクレオシド糖の反応性の５−ヒドロキシルを、ジメトキシトリチルクロリド（ＤＭＴＣＩ）と反応させてこれを保護して、化合物２を生成させる。他の同等の保護基が用いられ得る。次のステップにおいて、化合物２の４位のカルボキシルの酸素をアミンに変換させてシトシンを得る。このアミンは、次にベンゾイル基と結合させる。上記の反応は、まず第１に、トリエチルアミンとトリアゾールの存在下で４°カルボキシルをＰＯＣｌ３と反応させる３つのサブステップで行われる。この反応の生成物を回収し、低温でアンモニアガスで処理してアミン基を生成させる。その生成物を回収して、新たに付加されたアミンを、塩化ベンゾイルもしくはＦＭＯＣＮＨＳエステルのような適切な保護基と反応させる。このようにして図式１に化合物３として示す物質が得られる。便宜上、化合物３とその保護されたシトシン残基を図に示すように略記しである。次に化合物３の３°−アリル基を、例えば０８”　／　Ｎａ１Ｏ４で酸化してアルデヒドの中間体４を得る。生成したアルデヒド４を次に５−デオキシヌクレオシド、５°−アミノヌクレオシド、３−保護ヌクレオシド（これは公知の化合物の範囲からも選択され得る）と反応させ、生成したイミンを還元する。この還元アルキル化反応は、チタンイソプロポ牛シトおよび水素化シアノホウ素のような適切な触媒を用いて有利に行ワレ得る（Ｍａｔｔｓｏｎ、　Ｒ，Ｊ、らの前記文献参照）。このようにして、−ＣＨ２−ＣＪｉ２−ＮＵ−で改変されたヌクレオシド間結合によって結合した一対の保護されたヌクレオシドが得られる。図式１に示す化合物６が代表的なものである。次に、その３−ヒドロキル保護基を除去して、化合物７を得る。ヌクレオシド間結合のアミン基を、例えばＦＭＯＣ基で保護して化合物８を得て、次にパン・ブームの試５９％　（Ｖａｎ　Ｂｏｏｌｓｒｅａｇｅｎｔ）　（ＶＢ）を用いて３ °−ヒドロキシルにホスホネート基を付加する。このようにして、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−で改変されたヌクレオシド間結合によって連結された２つのヌクレオシド、遊離の３−ホスホネート基およびブロックされた５゛位を有する二量体９が得られる。この二量体は、次に、通常の化学的方法を用いて成長中のオリゴヌクレオチドに付加され得る。あるいは、得られた二量体もしくはオリゴマーは、制御された多孔ガラス（ＣＰＧ）のような固相支持体に結合するための便利なリンカ−として、スクシニル化され得る。上記のように結合された改変オリゴマーは、例えばＦｒｏｅｈｌｅｒ、　Ｂ、　、ら、鳳虹虹虹Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ　（１９８６）口：５３９９に記載されているようなＨ−ホスホネートの化学を用いて行う標準のオリゴヌクレオチド合成の出発物質として使用され得る。この合成法では、ジクロロ酢酸を含有する塩化メチレンを用いて５−ヒドロキシルの脱保護を行い、塩化アセチル／ピリミジン／アセトニトリルの存在下にてＳ−ＤＭＴ保護塩基３−ホスホネートで処理し、次に上記の脱保護と結合の手順を、所望の回数だけ繰り返す。あるいは、オリゴヌクレオチドを延長するため、標準のオリゴヌクレオチド合成法に類似の固相支持体（Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ、Ｍ。ら、Ｊ　Ａｍ　Ｃｈｅｓ＋　Ｓａｃ　（１９８１）　１０３：３１８５）に、遊離の３−０■をエステル結合を通じて結合し得る。最終生成物は、ＴＨＦまたは他の不活性溶媒を含有する塩基性水性媒体中でヨウ素により処理し、次に水酸化アンモニウムで処理するような標準の方法を用いて、固相支持体から除去される。付加されたヌクレオチドに結合したヌクレオチド塩基の脱保護も標準の方法で行われる。同様に、ヌクレオシド間リンカー中に存在する窒素を保護するＦＭＯＣ基は、通常どおりに除去され得、所望により、本願に記載している他のＲ基で置換され得る。改変ヌクレオシド間結合は、連続する合成における通常の単量体の代わりに、例えば図１に示す図式１で述べたステップで合成した改変された結合を含有する保護二量体を用いることによって、オリゴヌクレオチドの任意の位置に入れられ得る。ホスホルアミデートまたはホスボネート化学のようなりＮＡ合成化学は、上記の方法と類似の方法で、単量体もしくは二量体を連結するのに利用され得る。図２に戻り、３゛位に窒素を有する、長さが３原子の結合を生成する代表的経路（図式２）を示す。図式２において、ステップ１は、３゛位にＮ３基を有する５ −メチルシトシン銹導体１１の生成に関するステップである。ステップ２で、このＮ３基を、例えば水素と水素化（ｈｙｄｒｏｇｅｎｉｔｉｖｅ）触媒とによってアミンに還元して化合物１２を得る。一方、ステップ３は公知のエステル化合物１３によって開始される（米国特許第４．８８２．３１６号（１９８９）およびＬ虹り川ｅｍ　（１９８１）　４６：５９４）。この物質は、塩基で処理してそのエステル基を加水分解し、次いで酸で処理して遊離酸１４が得られる。次に、この酸を、例えばボラン還元剤を用いて選択的に還元してアルコール１５とする。このアルコール１５は、例えばカルボジイミドを用いて、アルデヒド１Ｇに変換される。次に、このアルデヒド１６と、さきに述べた１２とをステップ６で連結し、次いで、ＴＢＡＦ　（テトラブチルアンモニウムフルオシド）、ＦＭＯＣ−ＮＦＩＳ、およびＴＥＡＲを含むパン・ブーム試薬で処理することによって、図式１で利用したのと類似の方法でホスホネート１８に変換する。反応図式３（図３に示す）では、出発物質は、化合物３のような３゛−アルキル置換保護ヌクレオシドである。ステップ１において、そのアルキル二重結合は、そのアルキル基を化合物１９に結合することによって置換される。ステップ２は、図式１のステップ３に類似しているが、化合物２１中に存在する３゛−アルデヒド置換基を生成させるために使用され得る。このアルデヒドを、次に、ステップ３で公知のアミン２２に結合し得、そして図式１と２で充分に述べたステップと類似のステップ４でホスホネートに変換し得る。図４には、酸素と窒素を含有する結合の製造経路を示す。遊離の３°−ヒドロキシルを、ステップ１で、水素化ナトリウムの存在下、ヨウ化アリルと反応させてそのアリル基を遊離ヒドロキシルと結合させ、化合物２６を得る。図式４のステップ２には、チミジン類似体２６を保護されたシトシン２７に変換する３つのサブステップの工程が包含される。図式１に示したのと同様にして、次に化合物２７のアリル基を酸化してアルデヒド２８とする。次に、このアルデヒド２８を、ステップ４においてアミン置換ヌクレオシド誘導体５と反応させて、本発明の結合によって連結した２つのヌクレオシドを生成させて「二量体２９」を得る。次にこの二量体を、図式１で述べた方法を用いてホスホネート体３０に変換する。図５に示す図式５は、窒素が３゛位に配置され、酸素が５゛位に配置されている点で、事実上図式４の「逆」である。事実上同じ反応が、異なるブロッキングと置換のパターンを用いて行われ、逆の配向が得られる。図６に示す図式６は長さが２原子の結合を示す。この図式では、代表的なヌクレオシド類似体の出発物質として、アルデヒド２１（図式３で製造される）とアミン５（図式１で入手できる）を用いる。これらの物質を、図式２のステップ６および７に類似のステップ１および２で結合させ、次いでホスホネートに変換させる。図７に示す図式７も２原子の結合に関するものであるが、この場合「５°」末端に窒素がある。この反応シーケンスは公知の５°ニトリル３８で始まり、このニトリルがステップ１でアルデヒド３９に変換される。次いで、このアルデヒドはステップ２でアミン１２（予め製造しておく）に結合させ、次にステップ３でホスホネートに変換させるが、これらのステ７ブもやはり図式２のステップ６および７に類似のステップである。図８に示す図式８は、結合の３゛末端に種々の酸化状態でイオウを有し、かつ長さが３原子のリンカ−を含有する物質が得られる経路を示す。この図式は公知のチオール４２で始まる。ステップ１．２および３はすべて、上記のチミジン類似体４２からシトシン類似体４５を生成させるステップである。ステップ４で、化合物１５（図式２で製造される）のアルコール基にロシル（ｌｏｓｙｌ）クロリドを反応させる。次にトシレート４６をステップ５でチオール４５と結合させてイオウを含有する「二量体」４７を得る。−３−としてイオウを含有する二量体４７はステップ６に示すようにしてホスホネートに直接変換され得る。あるいは、テップ８および１０に示すようにしてそれぞれのホスホネートに変換する。図式９では、長さが２原子のイオウを含有する結合が構築される。図式７で製造したアルデヒド３９を、水素化ホウ素還元剤で還元して、アルコール５３にする。得られたアルコールはトシレート５４に変換させ、次にこのトシレートを、ステ、プ３において、図式８で得られるチオール４５に結合させて、「二量体」５５を得る。二量体５５は次に、ステップ４．５−６および７−８それぞれによって酸化してまたは酸化しないでホスホネートに変換される。図１０は、アルデヒド基とチオール基の位置を変えただけの図式８および９によ（似た図式１０を示す。この図式でもやはり、イオウの酸化状態によって互いに異なる３つのファミリーの物質６７．６８、および６９が生成される。図式１１と１２はそれぞれ、連結基の３°末端と５°末端に存在する酸素で連結された物質を得る代表的な経路である。図式１１に２つの経路を示す。一方の経路では、「５°」　トシレート４６を「３°」アルコール７０と反応させて二量体７１を得て、この二量体をホスホネートに変換して化合物７２を得る。あるいは、３′トシレート７８を５°アルコール７７と反応させて化合物７１を得ることができる。図式１２では、３°アルデヒド４を還元して３°アルコール７４にし、このアルコールを５°トシレート７３に結合させて酸素を含有する連結物質７５を得て、これをホスホネート７６に変換するが、または代わりに３゛トシレート８０を５ °アルコールと反応させて同じ生成物を得る。図１３の図式１３は、長さが３原子の結合の３°アミンのアルキル誘導体の合成法を示す。アジド１０を水素化してアミン８０を生成させる。アミン８１．８２および８３を、アセトアルデヒド、トルエンおよびチタンイソプロポキシドで処理し、次に生成物を、アミン１２について記載したのと同様にしてアルデヒド１６と結合させて二量体８４〜８６を得て、これらをさらに化合物１８について記載したのと同様にして、対応するホスホネート８７〜８９に変換する。３゛アミンのアシル化誘導体は、二量体９０を出発物質として用い、化合物１７について説明したのと同様にして製造される。その生成物は、最終的に下記のようにしてホスホネートに変換される。モルホリノ基を含有する結合の合成（図１４の図式１４）は、保護された５°メチルウリジン９６を出発物質として用いる。生成したモルホリン９７をアルデヒドと反応させて二量体を形成し、続いて、化合物１８について記載したのと同様にして、ホスホネート９８に変換する。アミナール（ａｍｉｎａｌ）誘導体をアミン８０から製造し、これをアシル化してカルバメート９９を得、これをアルキル化してチオアミナール１００を製造し、これを最終的に対応するホスホネートに変換する。図１５の図式１５は、３°にイオウを有する、長さが３原子の結合の製造法を示す。ＤＭＦ中のアルコール４２とピリジンをヨウ化メチルトリフエノキシホスホニウム中で反応させる。この生成物をチオ硫酸ナトリウムで飽和してヨウ化物１０３を得る。チオール４２とアセトニトリルとを、アセトアミドおよびＤＭＦによって結合させ、次にヨウ化物を添加して、最終的に二量体１０４を得る。次にこの二量体を化合物１８について記載したのと同様に処理してホスホネートに変換する。下記の実施例は例示を目的とするものであり、本発明を限定するものではない。（以下余白）Ｄ、■ 実】１」上Ｃ１ｅ　Ｃ２−ＣＩ　−ＮＲＴのこの実施例で使用および生成した化合物を図１の図式１に示す。化合物１　（２，２１ｇ、　８．３０　＋ｅｓｏｌ）　（Ｆｌａｎｄｏｒ、　Ｊ、およびＹａｍ、　Ｓ、Ｙｌ、Ｔｅｔ　Ｌｅｔｔｓ　（１９９Ｇ）　３１：５９７−６００：Ｌ力Ｉｊ第１（１９８９＞　５４：２７６フー２７６９）を含むフラスコに、ピリジン（２５ｍｌ）を加え、溶液を蒸発乾固した。ピリジン（２５ｍｌ）を再度加え、次に、ＤＭＴ−ＣＩ（３，６７ｇ、　１０．３４　ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１８時間攪拌し、１０％の炭酸水素ナトリウム水溶液に加えた。粗生成物をＣＨＣｌ３で抽出（３Ｘ　５０■ｌ）、乾燥しくＮａ２５Ｏｊ）、乾固するまでストリッピングし、シリカゲルでクロマトグラフを行い（５％ＭｅＯＨ／ＭＣ）　（メチレンクロライド）、生成物２（４，２０ｇ）を得た。化合物２（１，６０ｇ、　２．８１　ｍ＋５ｏｌ）、ＥＴ３Ｎ（７，８１ｏ１．５６　ｉｎ＋ｏｌ）、１．２．４　トリアゾール（３，８８ｇ、　５６園■ｏｆ）およびアセトニトリル（７５ｍｌ）を含む溶液に、０°Ｃで、ＰＯＣｌ２（０，４９ｍｌ、　４．２　ｍｍｏｌ）を１７２時間にわたって滴下して加えた。この混合物を水（１５０ｇｅｌ）に加え、粗生成物をクロロホルムで抽出（３Ｘ　１００ｍ１）、乾燥しくＮａ２５Ｏ４）、濃縮した。残渣をアセトニトリル（７５ｍｌ）に溶解し、０°Ｃに冷却した。溶液にアンモニアガスを１５分間バブリングさせて通した。溶液を周囲温度まで緩め、１８時間攪拌した。反応混合物を１０％炭酸水素ナトリウム水溶液に加え、粗生成物をクロロホルムで抽出（３Ｘ　１００ｍ１）、乾燥しくＮａ２５Ｏ４）、濃縮した。濃縮物をピリジン（７５ｍｌ＞に溶解し、０℃に冷却した。ベンゾイルクロライド（０，４９ｉ＋１．４．２　ｗ＋ｍｏｌ）を１０分間にわたって滴下して加えた。１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）を加え、溶液を３０分間攪拌した。粗生成物をクロロホルムで抽出（３Ｘ　７５＋ｓｌ）、乾燥しくＮａ２５Ｏａ）、濃縮乾固した。トルエン（２００ｍｌ）を加え、溶液を再び乾固するまで濃縮した。シリカゲルクロマトブラフイー（１％ＥＴ３Ｎ１５から１０％ＭｅＯＨ／ＭＣ）によって、３　（１，６５ｇ）を得た。ジオキサン（２５ｍｌ＞および１％炭酸水素ナトリウム水溶液（２０１）中の３　（６７２Ｂ、　１　＋ｕ＋ｏｌ）の溶液に、四酸化オスミウム（０，５■ｌ、　２．５重量％のｔ−ブチルアルコール溶液）を加え、溶液を５分間攪拌した。過ヨウ素酸ナトリウム（２，９ｇ、　１５　ｍｌ１ａｌ）を４分割して加え、混合物を１８時間攪拌した。溶液を１０％炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（１００ｍｌ＞に加え、粗生成物をクロロホルムで抽出（３Ｘ　１５ｍ１）、乾燥しくＮａ：＋５Ｏ−）、濃縮した。得られた油状物を塩化メチレン（５０ｍｌ）に溶解し、セライトを通して濾過し濃縮した（３１０■ｇ）。このアルデヒドに、５− アミ／、３−（ｏ−ｔブチルジメチルンリル）チミジン（１８０＋ｓｇ、　５．１　ｍｍｏｌｅ）、トルエン（１５ｌｌ１ｌ）およびチタンテトライソプロポキシド（，２７５ｍ１．０．９２　ｍ＋５ｏｌｅ）を加えた。１時間攪拌の後、無水エタノール（２０ｍｌ）および水素化ンアノホウ素ナトリウム（ｓｏｄｉｕ■ ｅｙａｎ。ｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ）（１０ｍｇ、　１．５　ｍｌｅｏｌ）を加え、１８時間攪拌して反応させた。溶液を１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）に加え、粗生成物をクロロホルムで抽出（３ｘ　５０＋ｓｌ）、乾燥しくＮａ２５Ｏ４）、乾固するまでストリッピングした。次に、シリカでクロマトグラフを行い（１％Ｅ’ｈＮ１５から１０％ＭｅＯＨ／ＭＣ）、生成物６（２３０＋ｓｇ）を得た。　（Ｌ叶しΩｅｍ　（１９９０）　５５：２５５２−２５５４を参照）化合物６　（２２７ｇ＋ｍ、０．２２　＋ｕ＋ｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍｌ）およびフ・ノ化テトラブチルアンモニウム（ＴＨＦ中１．０　Ｍ、　０．５　ｍｌ）に加えた。反応溶液を２時間攪拌し、濃縮した。次に、シリカゲルカラムに負荷しクロマトグラフを行い（１％ＥＴ３Ｎ１５〜１０〜１５％ＭｅＯＨ／ＭＣ）、生成物７　（１７４ｍｇ）を得た。アセトニトリル（５■ｌ）およびメタノール（５ｍｌ）中の化合物７　（１６０ｍｇ、　０．１７５ｖｏｌ）の溶液にＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニルオキシ）コハク酸イミド（１００ｍｇ、　ＸＳ）を加え、溶液を１５分間攪拌した。粗生成物を乾固するまで濃縮した。トルエン（５０ｍｌ）を加え、溶液を再度蒸発乾固し、生成物８（２００＋ｓｇ）を得た。化合物８　（２００ｍｇ、　１．８　ｍｍｏｌ）をピリジンで共沸蒸留して乾燥した（２　Ｘ　５０　ｍｌ）。ビリジ：／（２１１１）およびＭＣ（２ｍｌ）中の化合物８　（７１１液に、０℃で、２−クロロ−４１（−１，３，２−ベンゾジオキサホスホリン−４−オン（ＭＣＣ１０＠、　０．５　＋ａ１．０．５　ｖ＋＋ｏｌ）を加えた。溶液を４５分間攪拌し、ｐＨ７，５の炭酸水素トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＢ）（ＬＭ、　１０　ｍｌ）でクエンチした。粗生成物を４：ＩＭＣ／ｎ−ブタ／−ルで抽出（３Ｘ　２５　ｍｌ）、乾燥しくＮａ２５Ｏｎ）、５０　ｍｌのアセトニトリルで希釈した。溶液を濃縮し、シリカゲルでクロマトグラフを行った（１％ｐｙｒ／　Ｏから２０％Ｈ２０／アセトニトリル）。生成物を含む画分を濃縮し、トルエンで希釈して再度濃縮した。次に、生成物を３：ＩＭＣ／ｎ−ブタノールに溶解し、ｐＨ７，５の炭酸水素トリエチルアンモニウムによって逆抽出した。有機相を乾燥しくＮａ２５Ｏａ）、アセトニトリル（５０ｍｌ）テ希Ｈして濃縮し、最終生成物９　（１２５＋＊ｇ）を得た。ＦＭＯＣ基は、通常の方法により置換できる。支鬼五１Ｃ１ｅ　ＮＲ−ＣＩ＋２−ＣＲＴの− この実施例で使用および生成した化合物を図２の図式２に示す。化合物ｌＯを、化合物２（実施例１）について記載したのと類似の方法によって、５−メチルシトシン（Ｃｔｓｅ−Ｃｍ）７１．　導体１１に変換した。化合物１１　（２，００ｇ、　２．９０　＋ｕ＋ｏｌ）、１０％炭素担持パラジウム（２００＋ｉｇ）、酢酸エチル（２０−１）、およびメタノール（２００ｍｌ）の混合物を、大気圧で６時間水素化した。反応混合物をセライトを通して濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物を、シリカゲルでクロマトグラフを行い（０，５％ＴＥＡ１５％ＭｅＯＨ／ＭＣ）、生成物１２　（ＩＪＯｇ）を得た。化合物１３　（４，２６ｇ、　１０　ｍｍｏｌ）　（米国特許番号４，８８２，３１６゜Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ、　Ｊ、Ａ、およびＴｈｏｍａｓ、　Ｈ，ＪＳＬ江り江聾（１９８１）４６：５９４）をジオキサン（３０ｍｌ）および水（１０ｍｌ）に溶解し、水酸化リチウム（４２６ｗａｇ）で２時間処理した。溶液を、水冷したＯＬＭ　Ｈ；ＰＯ４（ｔｏｏ　ｍｌ）およびクロロホルム（１００ｍｌ）に加えた。粗生成物をクロロホルムで抽出（２Ｘ　５０　＋ｍｌ）、Ｎａ２５Ｏａで乾燥し濃縮した。シリカゲルでクロマトグラフを行い（５％メタノール／　ＭＣ）カルボン酸１４　（３，２６ｇ）を得た。テトラヒドロフラン（５０■１）中のカルボン酸１４　（１，１０ｇ。２．７６　ｍｌ１ｏｌ）の溶液に、ＢＨ３−ＴＨＦ　（３０ｍｌ、　ＴＨＦ中１．０Ｍ）をＯ’Ｃで３分割して加えた。混合物を水金した炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）にゆっくりと加えた。生成物をクロロホルムで抽出（３Ｘ　５０■ｌ）、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濃縮してアルコール１５　（１，０４ｇ＞を得た。ＤＭＳＯ（２０ｍｌ）中の１５　（１，０４ｇ　、　２．７０　ｍｅａｌ）の溶液を、ＮＮ’シンクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，１，７４ｇ）およびジクロル酢酸（１００μｌ）で処理し、混合物を１８時間攪拌した。反応混合物を５％炭酸水素水溶液に加えた。粗生成物をクロロホルムで抽出（３Ｘ　５Ｇ　ｌ１ｌ）　Ｌ、硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮した。シリカゲルでクロマトグラフを行い（５％ＭｅＯＨ／ＭＣ）　、アルデヒド１６　（４０３醜ｇ）を得た。アルデヒド１６とアミン１２を合わせ、次に化合物６（実施例１）について記載したのと類似の方法によって、ホスホネート１８に変換した。合成の後で、ＦＭＯＣ基は通常の方法により置換できる。Ｌ１五ｌＣｍｅ　ＣＨ２−ＮＲ−ＣＩ（２Ｔの−１この実施例で使用および生成した化合物を図３の図式３に示す。２０の調製：　（減圧下、ピリジンで共沸して）乾燥した化合物３　（０，２０ｇ、　０．３５　ｍｍｏｌ）の試料に、乾燥したＣＨＣｌ３　（２，０鮭、エタノールを含まないもの）を加え、溶液になるまで室温で攪拌する。この溶液に４ −メチル−１，２，４−トリアゾリン−３゜５−ジオン（０，０６ｇ、　０．５３　ａ＋ｍｏ１．　Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、Ｉｎｃ。）を加えた。生成した赤い溶液を光から保護し、−晩室温で攪拌した。この淡黄色溶液の分析は、大部分が未反応物質であることを示した。更に、４−メチル− １，２，４−）リアゾリン−３，５−ジオン（０，０８ｇ、　０．７１　ｍｍｏｌ）を加えた。そして、反応混合物を光から保護し、−晩室温で攪拌した。反応混合物をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）で希釈し、有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、分離してＮａ２５Ｏｉで乾燥した。溶媒を除去して暗黄色の油状物を得た。この油状物は、溶離液として、ＣＢ２Ｃ１２中イソプロピルアルコールの４％− ２０％段階勾配を用いるカラムクロマトグラフィー（Ｂａｋｅｒ、　Ｉｎｃ、　シリカゲル、粒径−４０ｕ　Ｍ）により精製した（Ｍｅｒｃｋのシリカゲルでは、精製中に重大な分解を生じる）。この精製により透明な油状物９７　＋ａｇ（４０％）を得た。この油状物の’ＨＮＭＲスペクトル特性は、２０の構造と一致した。化合物２０を、３について記載したようにして２１に酸化した。化合物２１をアミン２２と合わせ、次に、化合物３について記載したのと類似の方法によって、ホスホネート２４に変換した。ＦＭＯＣ基は、通常の方法により置換できる。支皿叢まＣｍｅ　０−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲＴの−この実施例で使用および生成した化合物を図４の図式４に示す。ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の２５　（１，６３ｇ、　３．００　ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＨ（４２０ｍｇ、油中に６０％分散）を加え、溶液を１時間攪拌した。ヨウ化アリル（０，３０ｍｌ）を加え、溶液を更に４時間攪拌した。反応混合物を５％重炭酸塩水溶液に加え、粗生成物をＭＣで抽出し、飽和塩水で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥した。これを濃縮してくっきりした（ｃｒｉｓｐ）黄色の泡状の生成物２６　（１，６９ｇ）を得た。化合物２６を、化合物３について前述した方法によってアルデヒド２８に変換した。アルデヒド２８を化合物５と合わせ、次に、化合物６について前述した方法によってホスホネート３０に変換した。ＦＭＯＣ基は、通常の方法により置換できる。爽胤匠旦モルホリンＣＣ■２ＣＨ２−ＯＴの− Ａ、Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−Ｃ１ｈ−０−Ｓｉ　Ｍｅ　ｔ−ｂｕリンカ−の−５＋ｇｌのエタノールアミンおよび５１のピリジンを減圧下で蒸発させ、ｌｏｍｌのピリジンを加えた。そして、ジメチルｔ−ブチルシリルクロライド３ｇを加えた。２０℃で１６時間攪拌して反応させた。反応物を塩化メチレンに加えて希釈し、ｐＨ９のリン酸ナトリウムバッファーで２回抽出した。有機相をＮａ２５Ｏｊで乾燥し、減圧下で蒸発乾固して所望のリンカ−を得た。１．２ｇのシチジンを２５　ｍｌの水に溶解し、１．１５　ｇの過ヨウ素酸ナトリウムを加えた。溶液を２０℃で１６時間攪拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物を１０−１のメタノール中に懸濁させた。０．２６　ｍｌの酢酸を（バートＡからの）０−ジメチルｔ−ブチルシリルエタノールアミン１．９ｇおよび水素化シアノホウ素ナトリウム０．５９　ｇと共に加えた。これを２０℃で１６時間攪拌した。ｐＨ９のリン酸ナトリウムバッファーを加えた後、反応物を塩化メチレンで抽出した。有機相をＮａ２５Ｏａを用いて乾燥し、減圧下で溶媒を蒸発させた。この残渣を、アセトニトリルを溶離液として用い、生成物を溶出するために１０％までのＨ２Ｏの勾配をかけるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。Ｃ６５゛ジメトキシト１チルヒドロキシエチルモルホ１ノＮ−ベンゾイルシチジンのバートＢからのシリル基で保護したヒドロキシエチルモルホリノシチジンｏ、ｓｓ　ｇを、ピリジン１０１中のトリメチルシリルクロライド０．６１で３０分間処理した。次に、塩化ベンゾイル０．１６　ｍｌを加え３０分間攪拌して反応させ、塩化メチレンとｐＨ９のリン酸ナトリウムバッファー中に抽出した。有機相をＮａ２５Ｏａで乾燥し減圧下で蒸発させた。ピリジンを蒸発させた残渣を、ピリジン５■１中に溶解し、塩化ジメトキシトリチル０．４５ｇで処理した。残渣を１時間後に塩化メチレンで希釈し、ｐＨ９のリン酸ナトリウムバッファーに対して抽出した。有機相をＮａ２５Ｏａで乾燥し、次に、減圧下で蒸発させた。残渣をトルエン中に溶解して再度蒸発させ、次いで、ＴＨＦ中の０．７モルフ・ノ化テトラブチルアンモニウム５冒ｌで処理し、掲題の化合物を得た。それから１時間後に、これを減圧下で蒸発させ、塩化メチルを溶離液として用い、１０％までのイソプロパツールの勾配をかけるシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。Ｄ、アルデヒドのバートＣで生成した化合物（５８■ｇ）を２５０μｌのベンゼンおよび２５０μ ｌのＤＭＳｏ、　８μｌのピリジン、および４μｌのトリフルオロ酢酸に溶解し、続いてジシクロへキシルカルボジイミド６０　ｍｇを溶解した。２０℃で４８時間経過後に、反応物を塩化メチレンで希釈し、炭酸水素すｌ−ＩＪウム溶液で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させ、アセトニトリルおよびトルエンに溶解し蒸発させた。アルデヒドは直接用いた。Ｅ、Ｍ°アミノチミジンへの　−・力・・プｉング他の類似化合物について記載したようにして、還元的アルキル化、３°脱シリル化、ＦＭＯＣによる窒素の保護、３°亜リン酸化とオリゴヌクレオチドへのカップリングを実施した。支嵐五工この実施例のオリゴマーを、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ、　Ｂ、Ｃ，ら、ＮｕｅｌｅｉｅＡｃｉｄ　Ｒｅｓ　（１９８６）　ｌｌ：５３９９が記載する通常の方法を用いて合成したが、ただし、Ｃｍｅ（ＣＨ；ニーＣＨ２−ＮＦＭＯＣ）Ｔダイマーンントンを組み込んだ。このダイマーは、実施例１に記載した方法を用いて構築した。合成の結果生成するオリゴマーに対し、濃アンモニアによって２０℃で１６時間脱保護を行ない、通常の方法を用いてゲル精製した。支嵐五Ｌ５’−ＴＣＴＣｍｅ　０−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨＴＣＩＩｌｅ　０−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨＴＣｍｅＯ−ＣＨ２−ＣＨ−ＮＨＴＣｍｅ　０−ＣＨ２−ＣＨ−ＮＨＴＴＴＴ−３’の−この実施例のオリゴマーを、実施例６と同様に、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ、　Ｂ、Ｃ，ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｒｅｓ　（１９８６）　１４：５３９９が記載する通常の方法を用いて合成したが、ただし、ＣＩｌｅ（Ｃｌ１ｅ（０−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＦダイマーシントンを組み込んだ。このダイマーは、実施例４に記載した方法を用いて構築した。合成の結果生成するオリゴマーに対し、濃アンモニアによって２０”Ｃで１６時間脱保護を行ない、通常の方法を用いてゲル精製した。実１１匹」− ５”−ＴＣＴＣＴＣＣＨ２−ＣＨ２−０ＴＣＣＨ２−ＣＨ２−０ＴＣＴＴ　Ｔ− ３’の−この実施例で調製されるオリゴマーは、通常のヌクレオチドおよび改変されたヌクレオシド間の結合からなるものであった。ここでそれぞれの改変された結合の前の（ｐｒｅｅｅｅｄｉｎｇ）Ｃは、ヒドロキシエチルモルホリノシチジンであった。このオリゴマーは、実施例６と同様に、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ、　Ｂ、Ｃ，ら、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ　Ｒｅｓ　（１９８６）　１４：５３９９が記載する通常の方法を用いて合成したが、ただし、Ｃ（Ｃ）１２−ＣＨ２−０）Ｔダイマーシントンを組み込んだ。このダイマーは、実施例５に記載した方法を用いて構築した。合成の結果生成するオリゴマーに対し、濃アンモニアによって２０°Ｃで１６時間脱保護を行ない、通常の方法を用いてゲル精製した。裏１１生主・ＲＮＡに・　るバイブ１　イゼーション実施例６．７および８で合成した化合物に対して相補的なＲＮＡ配列を、Ｔ７転写（Ｍｉｌｌｉｇａｎ、　Ｔ、Ｆ、ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｏｄ　ｓ　（１９８７＞　１５：８７８３）を用いて合成した。これらのＲＮＡを、各々の化合物がその相補体にハイブリダイズする能力を、類似の配列と比較する試験に用いた。この類似の配列では、改変された結合はホスホジエステルで置換している。これらの化合物およびコントロールとともに形成される複合体の融点を、１００＋ｓＭ　ＮａＣ１，５０＋ａＭ　Ｔｒｉｓ、　ｐ）Ｉ　７．５を用いて、標準的な条件下で５ｕｕｓｅｒｓ　Ｍ、Ｆ、ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ’ｄｓユｅｓ　（１９８６）　１４ニア４２１が記載した方法で測定した。結果を表２に示す。ここで、＊で識別されているヌクレオシドは、実施例で記載した改変された結合によって識別されるヌクレオシドを表わす。Ｋ１シＬＴＣＴＣｍｅ会ＴＣｍｅ會ＴＣｍｅｍＴＣｍａ会ＴＴＴＴ　（貧）２．（ｐ４　６）　６２６２−０ＴＣＴＣ☆ＴＣｍｅ會ＴＣｍａ”ＴＣｍｅ”ＴＴｒＴ　（％＠ｆＪ　７）　５０．５ＴＣＴＣｍａＴＣｍａＴＣｍｅＴＣｍｅＴＴＴＴ　６１．５Ｔｃ’ｒｃ’ｒｃ嚢’ｒｃ＊’ｒｃ’ｒ’ｒｒ’ｒ　（’ｉｅ：　’ｆ４％２４９’Ｊ　８）　”’ｒｃ’ｒｃ’ｒｃ’ｒｃ’ｒｃ’ｒ’ｒｒＴｓ７．０表２に示すように、実施例６の改変された結合を含むオリゴマーは、コントロールよりもより良く結合し、実施例８のオリゴマーは、ジエステルコントロールとほぼ同等に結合する。１五１上ｌ二　゛せんＤＮＡへの　ＡＣｏｏｎｅｙ、　Ｍ、ら、８オｌ並（１９８８）　２ｗ：４５６により記載された「フットプリント」アッセイを、改変されたオリゴマーの二重らせんＤＮＡへの結合能を示すために用いた。このアッセイは、二重らせんに結合したオリゴマーが、ＤＮアーゼ１による加水分解から二重らせんを保護する能力に基づく。０．１−１０μＭの範囲の種々の濃度の検体オリゴマーを、ｐ３２で放射標識した、１゜＋ａＭ　ＮａＣ＋、１４０　ＭｍにＣ１，１ｗ＋Ｍ　ＭｇＣｌ２．１　ｍＭスペルミン、および２０■Ｍ　ＭＯＰＳバッファー中の１　ｎＭ濃度の標的配列を有する制限フラグメントと、ｐＨ７で２時間インキュベートした。これらの実施例で調製したオリゴマーに対する標的配列は、表２と同じであった。制限された加水分解を可能にするためにＤＮアーゼ１を加え、次に試料を変性し、ＤＮＡフラグメントをサイズに基づいて分離するポリアクリルアミドゲル電気泳動を実施した。フ・ノドプリントアッセイの原理の概要と理想化した結果を図１６に示す。図１６に示すように、［２！した二重らせんは、ＤＮアーゼで処理したとき、各ジエステル結合部での開裂に相当する長さのオリゴマーを生成する。したがって、理想化されたゲルでは、左に示される連続したバンドが得られる。一方、二重らせんがオリゴマーに結合することによって保護されている場合は、オリゴマーに結合することによって保護される領域の、ジエステル結合部での開裂に相当する一連の長さは、ゲルから消失している。この「フットプリント」は、保護の領域を示す。フットプリント領域のバンドが完全に消失しているか、または、弱くしか現れないことを観察すれば、結果を半定量的に評価できる。改変されたオリゴマーおよびホスホジエステルオリゴマーは、オリゴマーの濃度が１ｇＭで、９０％より高い保護を示した。従って、改変されたオリゴマーおよび通常のオリゴマーが、二重らせんに対して、類似の親和性を持つことが明らかとなった。尖１ｊＬＬ上Ｔ　ＮＲ−Ｃｆｌ　−ＣＩｌ　Ｔの図１３の図式１３に示すように、３°アミンのアルキル誘導体の調製をアジドｌＯより始めた。１０％炭素担持パラジウム（１，０ｇ）を含むメタノール（５０＋ｓｌ）中の化合物１０　（３，０ｇ、　５．３　＋＊ｍｏ１）を、２００　ｐｓ＋で１８時間、水素化した。触媒を濾過によて取り除き、溶媒をロータリーエバポレーションで除去してアミン８０　（２，３ｇ、　７５％）を得た。アミン８１　（１，２６ｇ、　２．３２　ｍｍｏｌ）、アセトアルデヒド（０，７９醜１．３．０１　ｔｗ＋ｏｌ）およびトルエン（２５■諷ｏ１）を含む溶液に、チタンイソプロポキシド（０，９０■１゜３．０１■ｍｏｌ）を加え、溶液を２時間攪拌した。この時点で、無水エタノール（２５ｓｍｏｌ）および水素化シアノホウ素ナトリウムを加えた。続いて、混合物を１８時間攪拌し、乾固するまでストリッピングした。シリカゲルで粗生成物のクロマトグラフを行い（１％ＥＴ３Ｎ／３〜５〜８％２ −プロパツール／ＭＣ）、くっきりした白色の泡状物の生成物（１，０４ｇ、　７８．５％）を得た。同様の方法で、アミン８２および８３を調製した。次に、化合物８１−８３を、アミン１２について記載したように、アルデヒド１６と結合させ、ダイマー８４−８６を得た。これらのダイマーを化合物１８について記載したように、相当するホスホネート８７−８９に変換した。３゛アミンをアシル化した誘導体の調製を、ダイマー９０より始めた。このダイマーは、化合物１７について記載したようにして調製した。ダイマー９０を、フッ化テトラブチルアンモニウムを用いて、化合物７について記載したようにして脱保護し、ダイマー９１を得た。アミン９１　（２００Ｂ、　０．２５■０１）、エチルアセテート（５１）および５％炭酸水素ナトリウム水溶液（５ｇ＋１）の溶液に、クロロギ酸エチル（３０μＬ、　０．３１　ｍｍｏｌ）を加えた。有機相を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮した。シリカゲルで組成生物のクロマトグラフを行い（３〜５〜１０〜１５％２−プロパツール／　ＭＣ）、生成物９２　（１８５ｍｇ、８５％）を得た。同様にして、カルバメート９３を調製した。続いて、化合物９２および９３を、化合物１８について記載したようにしてホスホネート９４および９５に変換した。支監匠上１モルホリンＴＣＴの図１４の図式１４に示すモルホリン誘導体９７を、保護基をつけた５−メチルウリジン９６から調製した。ジオール９６　（５，９０ｇ、　１０．５　ｓｍｏｌ）、酢酸アンモニウム（４，０６ｇ、　５２．６　園ｍｏｌ）、およびメタノールを含む溶液に、過ヨウ素酸ナトリウム（２，２５ｇ、　１０．５　ｍｗ＋ｏｌ）を加えた。この混合物を１時間攪拌し、濾過した。続いて、水素化シアノホウ素ナトリウム（１，３２ｇ、　２１■■ｏｌ）を加えた。次に、溶液を１８時間攪拌し濃縮した。粗生成物を、塩化メチレンおよびリン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ９，０）とに分配し、有機相を濃縮した。シリカゲルで生成物のクロマトグラフを行い（３〜５〜８％メタノール／ＭＣ）、＜っきすした白色の泡状物９７　（５，０５ｇ、　８８％）を得た。モルホリン９７をアルデヒド１６と反応させてダイマーを形成させた。続いて、化合物１８について記載したようにしてホスホネート９８に変換した。アミナール（ａｍｉｎａｌ）誘導体１０１をアミン８０から調製した。このアミナール誘導体をクロロギ酸エチルによりアシル化し、カルバメート９９を得た。カルバメート９９を水素化ナトリウムの存在下でクロロメチルメチルスルフィドによりアルキル化し、チオアミナール１００を得た。化合物１００をアルコール３１の存在下、臭素で活性化し、ダイマーｌＯ１を得た。次にこのダイマーを、化合物１８について記載したようにして、相当するホスホネート１０２に変換した。支五匠上１一−Ｃ−−の　。この実施例で使用および生成した化合物を図１５の図式１５に示す。ＤＭＦ（１０ｍＬ）およびピリジン（５ｍＬ）中のアルコール４６（０，７９ｇ、　２．０　ｍｍｏｌ）の溶液に、ヨウ化メチルチオフェノキシホスホニウムを加え、３時間攪拌して反応させた。反応をメタノール（５ｍＬ）でクエンチし、ロータリーエバポレーターで溶媒を除去した。粗生成物を塩化メチレンに溶解し、チオ硫酸ナトリウムの飽和水溶液および炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液で抽出、乾燥し、濃縮した。次にシリカゲルでクロマトグラフを行い、ヨウ化物１０３　（０，３６ｇ）を得た。。チオール４２　（０，２５ｇ、　０．３７　ｓｍｏｌ）およびアセトニトリル（１０＋ｓＬ）を含む溶液に、ビス（トリメチルシリル）アセトアミドを加えた。３０分後に溶媒を蒸発させ、ＤＭＦ（５ｍＬ）およびヨウ化物１０３　（０，２０ｇ＋　０．４１１−ｏｌ）を加えた。３時間攪拌して反応させ、次に、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液でクエンチした。粗生成物を塩化メチレンで抽出、乾燥し、濃縮した。シリカゲルでクロマトグラフを行い、ダイマー１０４を得た。ダイマー１０４を、化合物１８について記載したようにしてホスホネート１０５に変換した。このように、アンチセンス療法で用いるための改変されたオリゴマーを開示した。本発明の好適な実施例を詳細に記載したが、添付の請求の範囲で定義されるように、本発明の精神と範囲からはずれることなく、自明の変更が成し得ると理解される。Ｅｔ３向反応１ｌｌｉ１式□　１４Ｆｉｇｕｒｅ　１４哨＋オリゴ７クレオチドＦｉｇｕｒｅ　１６国際調査報告フロントページの続き（７２）発明者　ジョーンズ、ロバート　ジェイ。アメリカ合衆国　カリフォルニア　９４０１５ダリー　シティ−、キャメロット　コート　８３（７２）発明者　マンガー、ジョンアメリカ合衆国　カリフォルニア　９４１１０サンフランシスコ、バレンシア　ストリート１３４１

Claims

【特許請求の範囲】

１．改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体であって、該改変が、３′および隣接する５′ヌクレオシド間の少なくとも１つ以上のホスホジエステル結合を、長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合で置換することを包含し、ヌクレオシド間の結合を形成する原子の少なくとも１つが、窒素、酸素、およびイオウから選択され、残りが炭素である、改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体。
２．改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体であって、該改変が、３′および隣接する５′ヌクレオシド間の少なくとも１つ以上のホスホジエステル結合を、長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合で置換することを包含し、ヌクレオシド間の結合を形成する原子の少なくとも１つが窒素であり、残りが炭素である、改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体。
３．前記少なくとも１つの窒素原子がＮＲの形態であり、Ｒが水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、アリール、スルホンアミド、ホスホルアミデート、ＮＲ′ 、ＯＲ′、▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼であり、Ｒ′が水素、低級アルキル、ヘテロアルキルあるいはアリールである、請求項２に記載の改変オリゴヌクレオチド。
４．前器ヌクレオシド間の結合が、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ からなる構造の群から選択され、但し、各構造の左端が３′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する５′ヌクレオシドに結合する、請求項３に記載の改変オリゴヌクレオチド。
５．前記ヌクレオシド間の結合が、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ、−ＮＲ−ＣＨ２ＣＨ２−あるいは−ＣＨ２−ＮＲ−ＣＨ２−である、請求項４に記載の改変オリゴヌクレオチド。
６．Ｒが、水素、メチルあるいはエチルである、請求項５に記載の改変オリゴヌクレオチド。
７．改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体であって、該改変が、３′および隣接する５′ヌクレオシド間の少なくとも１つ以上のホスホジエステル結合を、長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合で置換することを包含し、ヌクレオシド間の結合を形成する原子の少なくとも１つが酸素であり、残りが炭素である、改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体。
８．前記ヌクレオシド間の結合が、 −Ｏ−ＣＨ２− −ＣＨ２−Ｏ− −Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２− −ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２− −ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ− からなる構造の群から選択され、但し、各構造の左端が５′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する３′ヌクレオシドに結合する、請求項７に記載の改変オリゴヌクレオチド。
９．前記ヌクレオシド間の結合が、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−である、請求項８に記載の改変オリゴヌクレオチド。
１０．前記ヌクレオシド間の結合が、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−である、請求項８に記載の改変オリゴヌクレオチド。
１１．改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体であって、該改変が、３′および隣接する５′ヌクレオシド間の少なくとも１つ以上のホスホジエステル結合を、長さが２から３原子のヌクレオシド間の結合で置換することを包含し、ヌクレオシド間の結合を形成する原子の少なくとも１つがイオウであり、残りが炭素であり、該ヌクレオシド間の結合が、−Ｓ−ＣＨ２− −ＣＨ２−Ｓ− −Ｓ−ＣＨ２− ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ からなる構造の群から選択され、但し、各構造の左端が５′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する３′ヌクレオシドに結合する、改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体。
１２．前記ヌクレオシド間の結合が、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−である、請求項１１に記載の改変オリゴヌクレオチド。
１３．改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体であって、該改変が、３′および隣接する５′ヌクレオシド間の少なくとも１つ以上のホスホジエステル結合を、長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合で置換することを包含し、ヌクレオシド間の結合を形成する原子の少なくとも１つが窒素であり、少なくとも１つが酸素であり、残りが炭素である、改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体。
１４．前記少なくとも１つの窒素原子がＮＲの形態であり、Ｒが水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、アリール、スルホンアミド、ホスホルアミデート、ＮＲ ′、ＯＲ′、▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼であり、Ｒ′が水素、低級アルキル、ヘテロアルキルあるいはアリールである、請求項１３に記載の改変オリゴヌクレオチド。
１５．前記ヌクレオシド間の結合が、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼，およびび▲数式、化学式、表等があります ▼ からなる構造の群から選択され、但し、各構造の左端が５′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する３′ヌクレオシドに結合する、請求項１４に記載の改変オリゴヌクレオチド。
１６．Ｒが、水素、メチルあるいはエチルである、請求項１９に記載の改変オリゴヌクレオチド。
１７．前記ヌクレオシド間の結合が、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ−である、請求項１６に記載の改変オリゴヌクレオチド。
１８．改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体であって、該改変が、３′および隣接する５′ヌクレオシド間の少なくとも１つ以上のホスホジエステル結合を、長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合で置換することを包含し、ヌクレオシド間の結合を形成する原子の少なくとも１つが窒素であり、少なくとも１つがイオウであり、残りが炭素である、改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体。
１９．前記少なくとも１つの窒素原子がＮＲの形態であり、Ｒが水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、アリール、スルホンアミド、ホスホルアミデート、ＮＲ ′、ＯＲ′、▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼であり、Ｒ′が水素、低級アルキル、ヘテロアルキルあるいはアリールである、請求項１８に記載の改変オリゴヌクレオチド。
２０．前記少なくとも１つのイオウ原子が、▲数式、化学式、表等があります▼ ｏｒ▲数式、化学式、表等があります▼。の形態である、請求項１９に記載の改変オリゴヌクレオチド。
２１．前記ヌクレオシド間の結合が、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ からなる構造の群から選択され、但し、各構造の左端が５′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する３′ヌクレオシドに結合する、請求項２０に記載の改変オリゴヌクレオチド。
２２．Ｒが、水素、メチルあるいはエチルである、請求項２１に記載の改変オリゴヌクレオチド。
２３．改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体であって、該改変が、３′および隣接する５′ヌクレオシド間の少なくとも１つ以上のホスホジエステル結合を、長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合で置換することを包含し、ヌクレオシド間の結合を形成する原子の少なくとも１つがイオウであり、少なくとも１つが酸素あり、残りが炭素である、改変オリゴヌクレオチドあるいはその誘導体。
２４．前記少なくとも１つのイオウ原子が、▲数式、化学式、表等があります▼ 。の形態である、請求項２３に記載の改変オリゴヌクレオチド。
２５．前記ヌクレオシド間の結合が、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼および，▲数式、化学式、表等があります▼ 。からなる構造の群から選択され、Ｒが、前記定義の通りであり、但し、各構造の左端が５′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する３′ヌクレオシドに結合する、請求項２４に記載の改変オリゴヌクレオチド。
２６．下記式のオリゴマーあるいはその誘導体：▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＯＣ３Ｈ５（Ｏ−アリル）、ＯＣ３Ｈ７（Ｏ−プロピル）、ＳＣ３Ｈ５またはＦであり、そして各Ｂは、独立して、プリンまたはピリミジン残基、あるいは類似残基、そして各Ｑは、独立して、ホスホジエステル類似体、または長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合であり、該ヌクレオシド間の結合を形成する少なくとも１つの原子が、窒素、酸素、あるいはイオウから選択され、残りは炭素であり、ｎは１ −２００であり、但し、少なくとも１つのＱは、ホスホジエステル類似体ではない。
２７．下記式のオリゴマーあるいはその誘導体：▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＯＣ３Ｈ５（Ｏ−アリル）、ＯＣ３Ｈ７（Ｏ−プロピル）、ＳＣ３Ｈ５またはＦであり、そして各Ｂは、独立して、プリンまたはピリミジン残基、あるいは類似残基、そして各Ｑは、独立して、ホスホジエステル類似体、または、長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合であり、該ヌクレオシド間の結合を形成する少なくとも１つの原子が窒素から選択され、残りは炭素であり、ｎは１−２００であり、但し、少なくとも１つのＱは、ホスホジエステル類似体ではない。
２８．前記少なくとも１つの窒素原子がＮＲの形態であり、Ｒが水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、アリール、スルホンアミド、ホスホルアミデート、ＮＲ ′、ＯＲ′、▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼であり、Ｒ′が水素、低級アルキル、ヘテロアルキルあるいはアリールである、請求項２７に記載のオリゴマー。
２９．前記ヌクレオシド間の結合が、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ からなる構造の群から選択され、但し、各構造の左端が５′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する３′ヌクレオシドに結合する、請求項２８に記載のオリゴマー。
３０．前記少なくとも１つのヌクレオシド間の結合が、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ −、−ＮＲ−ＣＨ２−ＣＨ２−あるいは−ＣＨ２−ＮＲ−ＣＨ２−である、請求項２９に記載のオリゴマー。
３１．Ｒが、水素、メチル、またはエチルである、請求項３０に記載のオリゴマー。
３２．下記式のオリゴマーあるいはその誘導体：▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＯＣ３Ｈ５（Ｏ−アリル）、ＯＣ３Ｈ７（Ｏ−プロピル）、ＳＣ３Ｈ５またはＦであり、そして各Ｂは、独立して、プリンまたはピリミジン残基、あるいは類似残基、そして各Ｑは、独立して、ホスホジエステル類似体、または長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合であり、該ヌクレオシド間の結合を形成する少なくとも１つの原子が酸素から選択され、残りは炭素であり、ｎは１−２００であり、但し、少なくとも１つのＱは、ホスホジエステル類似体ではない。
３３．前記少なくとも１つのヌクレオシド間の結合が、−Ｏ−ＣＨ２− −ＣＨ２−Ｏ− −Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ− −ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ− −ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ− からなる構造の群から選択され、但し、各構造の左端が５′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する３′ヌクレオシドに結合する、請求項３２に記載のオリゴマー。
３４．前記少なくとも１つのヌクレオシド間の結合が、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２− である、請求項３３に記載のオリゴマー。
３５．前記少なくとも１つのヌクレオシド間の結合が、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ− である、請求項３３に記載のオリゴマー。
３６．下記式のオリゴマーあるいはその誘導体：▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＯＣ３Ｈ５（Ｏ−アリル）、ＯＣ３Ｈ７（Ｏ−プロピル）、ＳＣ３Ｈ５またはＦであり、そして各Ｂは、独立して、プリンまたはピリミジン残基、あるいは類似残基、そして各Ｑは、独立して、ホスホジエステル類似体、または長さが２から３原子のヌクレオシド間の結合であり、該ヌクレオシド間の結合を形成する少なくとも１つの原子がイオウから選択され、残りは炭素であり、少なくとも１つの該ヌクレオシド間の結合は、 −Ｓ−ＣＨ２− −ＣＨ２−Ｓ− ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ からなる群から選択され、但し、各構造の左端が５′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する３′ヌクレオシドに結合し、ｎは１−２００であり、但し、少なくとも１つのＱは、ホスホジエステル類似体ではない。
３７．前記少なくとも１つのヌクレオシド間の結合が、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２− である、請求項３６に記載のオリゴマー。
３８．下記式のオリゴマーあるいはその誘導体：▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＯＣ３Ｈ５（Ｏ−アリル）、ＯＣ３Ｈ（Ｏ−プロピル）、ＳＣ３Ｈ５またはＦであり、そして各Ｂは、独立して、プリンまたはピリミジン残基、あるいは類似残基、そして各Ｑは、独立して、ホスホジエステル類似体、または長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合であり、該ヌクレオシド間の結合を形成する少なくとも１つの原子が窒素から選択され、少なくとも１つは酸素であり、残りは炭素であり、ｎは１−２００であり、但し、少なくとも１つのＱは、ホスホジエステル類似体ではない。
３９．前記少なくとも１つの窒素原子がＮＲの形態であり、Ｒが水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、アリール、スルホンアミド、ホスホルアミデート、ＮＲ ′、ＯＲ′、▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼であり、Ｒ′が水素、低級アルキル、ヘテロアルキルあるいはアリールである、請求項３８に記載のオリゴマー。
４０．前記ヌクレオシド間の結合が、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ からなる構造の群かおら選択され、但し、各構造の左端が５′ヌからなる構造の群から選択され、但し、各構造の左端が５′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する３′ヌクレオシドに結合する、請求項３９に記載のオリゴマー。
４１．Ｒが、水素、メチル、またはエチルである、請求項４８に記載のオリゴマー。
４２．前記少なくとも１つのヌクレオシド間の結合が、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２− ＮＨ−である、請求項４１に記載のオリゴマー。
４３．下記式のオリゴマーあるいはその誘導体：▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＯＣ３Ｈ５（Ｏ−アリル）、ＯＣ３Ｈ７（Ｏ−プロピル）、ＳＣ３Ｈ５またはＦであり、そして各Ｂは、独立して、プリンまたはピリミジン残基、あるいは類似残基、そして各Ｑは、独立して、ホスホジエステル類似体、または長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合であり、該ヌクレオシド間の結合を形成する少なくとも１つの原子が窒素から選択され、少なくとも１つはイオウであり、残りは炭素であり、ｎは１−２００であり、但し、少なくとも１つのＱは、ホスホジエステル類似体ではない。
４４．前記少なくとも１つの窒素原子がＮＲの形態であり、Ｒが水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、アリール、スルホンアミド、ホスホルアミデート、ＮＲ ′、ＯＲ′、▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼であり、Ｒ′が水素、低級アルキル、ヘテロアルキルあるいはアリールである、請求項４３に記載のオリゴマー。
４５．前記少なくとも１つのイオウ原子が、−Ｓ−，▲数式、化学式、表等があります▼ｏｒ▲数式、化学式、表等があります▼。の形態である、請求項４４に記載のオリゴマー。
４６．前記ヌクレオシド間の結合が、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ からなる構造の群から選択され、但し、各構造の左端が５′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する３′ヌクレオシドに結合する、請求項４５に記載のオリゴマー。
４７．Ｒが、水素、メチル、またはエチルである、請求項４６に記載のオリゴマー。
４８．下記式のオリゴマーあるいはその誘導体：▲数式、化学式、表等があります▼（１）ここで、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＳＣＨ３、ＯＣ３Ｈ５（Ｏ−アリル）、ＯＣ３Ｈ７（Ｏ−プロピル）、ＳＣ３Ｈ５またはＦであり、そして各Ｂは、独立して、プリンまたはピリミジン残基、あるいは類似残基、そして各Ｑは、独立して、ホスホジエステル類似体、または長さが２から４原子のヌクレオシド間の結合であり、該ヌクレオシド間の結合を形成する少なくとも１つの原子がイオウから選択され、少なくとも１つは酸素であり、残りは炭素であり、ｎは１−２００であり、但し、少なくとも１つのＱは、ホスホジエステル類似体ではない。
４９．前記少なくとも１つのイオウ原子が、−Ｓ−，▲数式、化学式、表等があります▼ＯＲ▲数式、化学式、表等があります▼。の形態である、請求項４８に記載のオリゴマー。
５０．前記ヌクレオシド間の結合が、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼および▲数式、化学式、表等があります▼ からなる構造の群から選択され、Ｒは、前記定義の通りであり、但し、各構造の左端が３′ヌクレオシドに結合し、そして各構造の右端が隣接する５′ヌクレオシドに結合する、請求項４９に記載のオリゴマー。
５１．前記誘導体が、標識との結合体を含む、請求項２６に記載のオリゴマー。
５２．前記誘導体が、インターカレーターとの結合体を含む、請求項２６に記載のオリゴマー。
５３．前記誘導体が、薬剤との結合体を含む、請求項２６に記載のオリゴマー。
５４．ヌクレオチド配列の存在により媒介される疾病を治療する方法であって、このような治療を必要とする被験体に、該ヌクレオチド配列を効果的に不活性化するために、該ヌクレオチド配列に特異的に結合し得る量の、請求項１に記載の改変オリゴヌクレオチドを投与することを包含する、方法。
５５．ヌクレオチド配列の存在により媒介される疾病を治療する方法であって、このような治療を必要とする被験体に、該ヌクレオチド配列を効果的に不活性化するために、該ヌクレオチド配列に特異的に結合し得る量の、請求項２６に記載の改変オリゴヌクレオチドを投与することを包含する、方法。