JPH06508123A - 燐脂質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 燐脂質 技術分野 本発明は、高い量の（少なくとも３０％（Ｗ／Ｗ）のその合計脂肪酸含量の）オ メガ−３（以下に記載される）Ｗ３−脂肪酸、ドコサヘキサン酸、２２：６ｗ３ （以下、ＤＨ，Ａと記載）およびエイコサペンタン酸、２０：５ｗ３（以下、Ｅ ＰＡと記載）を組み合わせて有する海産物および／または合成起源の燐脂質、な らびにこれらの燐脂質の使用に関する。燐脂質は乳化剤、栄養物質として、エマ ルジョン中の薬理的活性剤、薬剤組成物中の成分としてまたは脂質粒子中の成分 として使用されている。

発明の背景 脂質エマルジョンは経口投与栄養物を利用するのが困難である患者にエネルギの 濃厚な熱源および必須脂肪酸源を構成するために静脈に使用することができるこ とが知られている。　− １９６０年代の始めから、静脈栄養供給に向けられかつ顕著でない副作用を有す る脂肪エマルジョンが利用可能であった（レトリンド、ニー氏著の脂肪酸の開発 、ＪＰＥＮ５　：Ｎｏ、３．第２３０頁−第３２３５頁、１９８１年）。

この開発作業は大豆油、コーン油、サフラワー油、綿実油等のごとき多数の種々 の脂肪および大豆燐脂質、卵黄燐脂質等のごとき種々の乳化剤を含むエマルジョ ンの作用を研究した。

栄養または治療用途のエマルジョンは、例えば、米国特許第４１６８３０８号明 細書に記載されている。

現在量も一般に使用される栄養エマルジョンは大豆油および／またはサフラワー 油のごとき植物油、卵黄燐脂質のごとき乳化剤およびグリセロールとともに水を 含む。

かかるエマルジョンの例は１９６２年以来製造されかつカビ・ファーマシア社に より販売されているイングランド（商標）である。イングランド（商標）１０％ は大豆油のごとき１０％の油および１．２％の卵黄燐脂質を含む。

脂質中の種々の脂肪酸は種々の生理的、生化学的および薬理的特性を有しかつ最 近数年、大きな関心は１８〜２２個の炭素原子を含有する、Ｗ３脂肪酸の重要性 に集中されていた。

Ｗ３脂肪酸エイコサペンタン酸（２０：　５ｗ３．ＥＰＡ）およびドコサヘキサ ン酸（２２：　６ｗ３．ＤＨＡ）は人間に必須の脂肪酸である。それらの栄養値 に加えて、それらはまた薬理作用を有することが知られている。最も知られかつ 重要なものは心臓血管作用、炎症性および自己免疫疾患についての有益な作用お よび脳および網膜機能の正常な成長のためのこれら脂肪酸の必要性である。

これらの作用は高い量のＷ３−脂肪酸を含有する良好な栄養組成物を発見するた めに多数の研究がなされたという重要性を有する。例えば、国際特許出願公開第 ＷＯ３７１０２２４７号明細書（バクスター）および米国特許第４８２０７３１ 号明細書（二ニー・イングランド・テイアコネス・ホスピタル）には海産物油が 使用されかつ高い量のｗ３−脂肪酸ＥＰＡおよびＤＭＡを含有する点が示されて いる。

患者はまた、例えば、植物油中に見出されるオメガ−６−脂肪酸（以下、ｗ６− 脂肪酸と記載）を必要とする。

それゆえ患者に付与される栄養分はまた適切な植物油を含有すべきである。ｗ６ −脂肪酸を含有する脂質エマルジョンの注入は、しかしながら、何人かの患者に 、回避されるべきであるコレステロールおよびトリグリセロールのレベルの上昇 を生じた。現在まで非経口栄養物に依存する何人かの患者は主としてｗ６−脂肪 酸を含有するエマルジョンが付与されるとき合計コレステロールおよびトリグリ セロールの一定の増加を回避することができなかった。ｗ６−脂肪酸はまた、例 えば過剰活動の炎症および免疫学的反応により、何人かの患者に過剰生産される とき、有害な作用を有するイコサノイドおよびロイコトリエンのレベルを増加す る。

ＥＰＡまたはＤＨＡを含有する燐脂質は、食品、化粧品、医薬品、農業等のこご とき種々の分野において有用であるとして知られておりそしてそれらの種々の製 造方法が開示された。例えば、日本特許第２０９７３９３号および同第１０５０ ８９０号明細書参照。

それぞれ、ＥＰＡ−トリグリセロール−エマルジョンおよびＤＨＡ−トリグリセ ロール−エマルジョン用の乳化剤のような、ＥＰＡまたはＤＨＡを含有する、燐 脂質の使用はバイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニ ケーション、第１５１巻、第３号、１３８６〜１３９４頁、１９８４年；リピツ ズ、第２２巻、第１２号、１０３１〜１０３４頁、１９８７年および血栓症研究 、第４４巻、６７３〜６８２ページ、１９８６年においてハマザキ・ティー等に より研究された。

ハマザキは、例えば、血小板およびＲＢＣ（赤血球）膜中のＥＰＡおよびＤＨＡ 両方のレベルが、それぞれＥＰＡまたはＤＨＡエマルジョンが短時間静脈中に注 入されたとき顕著に増加したことを発見した。血液脂質は、減少した自由脂肪酸 を除いて、不変であった。血小板凝集および白血球付着はＥＰＡ含有エマルジョ ンの投与後生として抑制された。

スウェーデン特許出願第８７０５１２２−３号は燐脂質が海産物油に富んだ食事 により給餌された動物の卵から引き出される少なくとも１０％（ｗ　／　ｗ　） 　ｗ　３−脂肪酸からなる乳化剤として卵からの燐脂質により脂肪エマルジョン を製造する方法に関連するものである。

この燐脂質にＷ３−脂肪酸を組み込む方法はしかしながら自然の制限を備えてい る。記載された通常の脂質エマルジョンにおいて治療的作用のレベル以下と見做 される約２％（Ｗ／Ｗ）のＥＰＡのレベルにより、この方法により引き出された 燐脂質中に約１５％（ｗ／ｗ／）のｗ３−脂肪酸を超えることができなかった。

上述のスウェーデン特許出願に記載された非情脂質は推定された治療的作用を必 ずしも有しない。

食事のＥＰＡが炎症性疾患の治療に幾つかの臨床的利益を提供し得ることを示唆 する証拠がある（サーモン、ｎ−３ニユース、第１Ｉ巻（３）、１９８７年）の で、燐脂質中に高い量のＤＨＡならびにＥＰＡを有するのが重要である。

ドイツ連邦共和圓特許第３３４７２６９号明細書はＥＰＡおよび／またはＤＨＡ を含有するレシチンおよびリソ−レシチンを合成的に製造する方法を記載してい るが、Ｗ３−脂肪酸の組み込まれる合計量または製品の治療的使用について何も 明らかにしていない。

しかしながら、燐脂質の生物学的作用および効力は研究されず、かつそれらは、 植物油を含有するＷ６−脂肪酸とのエマルジョンにおいて高い量において組み合 わせてＥＰＡおよびＤＨＡのどときＷ３−脂肪酸を含有する、トリグリセリドの それらと、または高い量において組み合わせてＥＰＡおよびＤＨＡのどときＷ３ −脂肪酸を含有する燐脂質の治療的用途と比較されなかった。

発明の開示 トリグリセリドとしてそれらを使用するのに代えて、海産物または合成起源から の燐脂質中に組み合わせて、しかも栄養脂質エマルジョン中にＷ６−脂肪酸を含 有する植物油とともに、高い量においてｗ３−脂肪酸ＤＨＡおよびＥＰＡを使用 するとき、血清コレステロールおよびトリグリセリドの量が魚油として付与され た同一量のＷ３−脂肪酸によるより意外にも低いことを見出した。

燐脂質中にｗ３−脂肪酸のこの起源を使用することにより、あらゆる重要なかつ 必須なｗ６−脂肪酸とともに、すべての重要なｗ３−脂肪酸の量が生物学的膜中 で増加された。さらに、生物学的膜へのｗ３−脂肪酸の組み込みが思いがけなく 増大される。

また、全く意外なことは、ｗ３−脂肪酸ならびにｗ６−脂肪酸の生物学的膜中の 組み込みがより有効であり、そして効能が、（本発明による）ｗ３−脂肪酸に富 んだ燐脂質を使用することにより、エマルジョン中の海産物油としてまたはエマ ルジョン中に植物油として付与された同一量のｗ３−およびｗ６−脂肪酸による より高いということである。

最も意外でかつ重要なことはＤＭＡがとくに膜燐脂質中で増加されるという発見 である。これは生物学的膜において燐脂質中の最も重要なｗ３−脂肪酸である、 ＤＭＡがアラキドン酸と匹敵せずかつそのレベルを減少しないので最も重要なこ とであり、生物学的膜において燐脂質中で最も重要なｗ６−脂肪酸はＥＰＡと同 じである。

コレステロールエステルにおいてまたＥＰＡおよびアルファーリフレイン酸のレ ベルが増大する。

すべての脂質断片において、生物学的膜において最も重要なｗ６−脂肪酸である アラキドン酸のレベルは一定に維持される。これは、高い量のＥＰＡを含有して いる、海産物油の治療的投与を使用するとき観察される、生物学的膜におけるア ラキドン酸の減少に反している。（本発明による）魚燐脂質の投与後、しかしな がら、ｗ　６−脂肪酸のトリグリセリドのレベルと同様に増加される。

合計血清コレステロールおよびトリグリセリドの量はできるだけ低く保持されね ばならずかつ生物学的膜中のＷ６−およびｗ３脂肪酸のレベルがバランスして保 持されねばならないので栄養エマルジョンに関して最も重要である。

早産／新生児への栄養エマルジョンのためにかつ長期間ＴＰＮ　（合計非経口栄 養）において、必須の脂肪酸、ｗ３−脂肪酸ならびにｗ６−脂肪酸の通常のかつ 良好にバランスしたレベルを得ることが最も重要である。コレステロールエステ ルおよびトリグリセリド中のすべて重要なｗ３−およびｗ６−脂肪酸の増加とと もに燐脂質中のＤＨＡの特別な増加がｗ３−脂肪酸ならびにｗ６−脂肪酸の良好 にバランスした、増加したレベルの栄養条件を満たす。かかるエマルジョンはし たがって、例えば長期合計非経口栄養（ＴＰＮ）においてかつ普通の脳および網 膜の成長のためにｗ３−脂肪酸ならびにｗ６−脂肪酸を必要とする、早産／新生 児患者において栄養摂取的に有用である。

ラブ氏等著のリューマチ性疾患の年間記録、１９９゜年、第４９巻、第６１１頁 〜第６１４頁は非情脂質が免疫学的に活性の細胞中に蓄積されることを示した。

ビリアール・ティーアール氏等（「脂肪酸摂取およびクツペル細胞機能；魚油が イコサノイドおよびモノカイン製造をエンドトキシン刺激に変更する」、サージ エリ−１第１０４巻、第３４３頁〜第３４９頁、１９８８年）はＷ３−脂肪酸が 、Ｗ３−脂肪酸を有する魚油が経口で付与されるとき、クツペル細胞に組み込ま れかつクツペル細胞についての抗炎症作用を有することを示した。いまや意外に も見出したのは、海産物燐脂質を含有するｗ３−脂肪酸がクツペル細胞中に蓄積 しかつ海産物燐脂質からのＤＨＡが思いがけない特異性および効能により膜燐脂 質に組み込まれているということである。また、コレステロールエステル中で増 加される他の必須Ｗ３−脂肪酸、ＥＰＡおよびアルファーリフレイン酸、ならび に必須Ｗ６−脂肪酸が中性脂質中で増加される。Ｗ３−脂肪酸ならびにＷ６−脂 肪酸の膜脂質の増加はＷ３〜脂肪酸の効能がそれぞれエマルジョン中で、魚油お よび植物油中のＷ３−およびＷ６−脂肪酸の比較し得る量の投与後よりもエマル ジョン中で植物油とともに海産物燐脂質を含有するＷ３−脂肪酸（本発明）の投 与後著しく高いことを示す。

本発明による燐脂質はクツペル細胞中に蓄積しかつしたがって増加した炎症およ び免疫学的反応を有する疾患、例えば１敗血症、リウマチ様開節炎または他の自 己免疫および炎症性疾患の治療のために刺激された免疫学的に活性の細胞中でｗ 　６　／　ｗ　３−脂肪酸比を減少するのに使用され得る。

本発明はしたがって、例えば長期ＴＰＮにおいておよび早産／新生児に関して、 必須脂肪酸の要求に合うように栄養エマルジョンとして使用することができる組 み合わせの高い量においてオメガ−３ｗ−脂肪酸ＤＨＡおよびＥＰＡを有する燐 脂質を含有する植物油および／または魚油からなるエマルジョンに関する。この エマルジョンはまた血清脂質低下および抗炎症作用、止血に関する作用、および より高い投与量において免疫抑制作用を有する、良好なｗ３−７ｗ６−脂肪酸バ ランスの治療目的に使用することができる。

また、本発明は抗炎症性および免疫抑制作用を有する薬剤の製造のためのｗ３− 脂肪酸を含有する燐脂質の使用および低い血清トリグリセリドおよびコレステロ ールレベルおよびより良くバランスされたｗ６　／ｗ３脂肪酸比を付与しかつ抗 炎症性および免疫抑制作用および止血に関する作用を有する栄養エマルジョンの 製造のために組み合ねせてオメガ−３脂肪酸ＤＨＡおよびＥＰＡを有する燐脂質 の使用に関する。

本発明はまた、炎症性および免疫学的に活性の細胞中のイコサノイドの過剰生産 を有する疾患、リウマチ状関節炎、炎症性状態および通常の脳および網膜の成長 および機能についての治療的作用を有するオメガ−３−脂肪酸ＤＨＡおよびＥＰ Ａを含有する燐脂質に関する。

本発明の他の態様は同様な作用を有しまたは診断の目的で使用される薬剤と組み 合わせて高い量においてＥＰＡおよびＤＨＡを有する燐脂質を使用することにあ る。

エマルジョンは、大豆油、ココナツ油、綿実油、サフラワー油、ヒマワリ種油、 亜麻仁油、ルリヂサ油、クロッサスグリ種油、カノーラ油、海産胸部またはそれ らの混合物のごとき、０．５〜４０％（ｗ／ｖの合計エマルジョン）油、好まし くは５〜３０％（Ｗ／ｖ）からなる。

本発明による燐脂質の量は０．１〜３０％（Ｗ／ｖの合計エマルジョン）、好ま しくは０．　１〜１０％（Ｗ／Ｖ）にすることができる。Ｗ３−脂肪酸を含有す る燐脂質は海産物または合成起源からなることも可能である。

卵黄または大豆燐脂質のごとき他の燐脂質および／または合成乳化剤はまたエマ ルジョン中に補体として含有され得る。乳化剤の合計量は好ましくはＯ，１〜３ ０％（Ｗ／Ｖの合計エマルジョン）である。

エマルジョンはまた通常エマルジョン中に組み込まれる他の成分、例えば、脂肪 酸のモノグリセリド、グリセロールのごとき等浸透圧特性を調整するための成分 、アルファートコフェノールのごとき酸化防止剤、アミノ酸のごとき安定性を調 整するための成分およびフラクトースおよびグルコース等のごときカルボヒドラ ーゼを含有することができる。エマルジョンはまた投与されるべき１つまたはそ れ以上の生物に作用する化合物を含有することも可能である。

エマルジョンの製造は通常の方法において実施される。

かくして脂質は水性相、本発明による燐脂質および任意に他の乳化剤および補助 剤と適宜な混合装置中で混合される。混合物はその後所望の粒子サイズに均質化 される。

エマルジョンを適宜な粒子サイズに調整する方法は当該技術に熟練した者には良 く知られている。

患者に関して出来るだけ低い合計コレステロールおよびトリグリセリドの量およ び長期ＴＰＨにおいてかつ刺激された炎症性および免疫学的反応を有する状態に おいて、例えば新生児／早産児童に最適な生物膜中のｗ６／２３−脂肪酸比のバ ランスを保持するために栄養エマルジョンに関して最も関心がある。

本発明による燐脂質はまたリポソームまたは他のモノ−１二重−または多重層小 胞のごとき脂質粒子中の成分として考えることができる。

かかる小胞を製造するのに燐脂質を使用する手段および方法は多数の論文および 特許がこの技術分野において発表されている（リポソーム製造の概観はドラッグ ・デベロップメント・インダストリアル・ファーマシ−１第１５（１９）巻、第 １５２３頁〜第１５５４頁、１９８９年に認めることができる）ので当該技術に 熟練した者には周知である。

本発明の態様は、１つまたはそれ以上の生物に作用する成分を供給するか、また は非常に治療的に効力がある燐脂質用のそれ自体の投与形状であるように、種々 の脂質小胞の製造において高い含量のＷ３−脂肪酸を有する燐脂質を使用するこ とである。

追加の生物に作用する成分が小胞内に封入され得るかまたはそれらの膜の部分に するかまたは幾つかの場合に膜分子に結合され得る。

これらの組成は各生物に作用する分子に関して個々にテイラリングされかつ正味 の量、分子量および分子上の親水性または疏水性基の数に依存する。

生物に作用する化合物は、供給するのに適する、投与されたｗ３−脂肪酸または 他の薬物の治療的作用を強化するようにすることが可能である。

ｔＪｚ胞と組み合わせて使用される生物に作用する化合物はまたより特別な薬物 目標組成を作るための生物学的な受容体に対して親和力を有するリガンドにする ことができる。

本発明による燐脂質から制御される小胞は通常の方法で薬剤または診断製剤にお いて投与され得る。経口、頬側、非経口、眼球内、真個、肺、直腸、または経皮 的な使用のための製剤に適する追加の成分は当該技術に熟練した者には周知であ る。

本発明による燐脂質はまた通常の担体および／または希釈液と組み合わせて経口 、非経口、眼球、真個、肺、直腸または皮下製剤において投与され得る。投与形 状はまた、適切であるとき、モノグリセリドのごとき膜貫通を増加または制御す るための補助剤および増強剤および表面活性特性を有する化合物を含むことが可 能である。

図面の簡単な説明 第１図は種々のエマルジョンおよび溶液の投与後の血清コレステロール（Ｓ−Ｃ ＨＯＬ）のレベルを示すグラフ図（例４参照）である。

第２図は種々のエマルジョンおよび溶液の投与後の血清トリグリセリド（Ｓ−Ｔ Ｇ）のレベルを示すグラフ図（例４参照）である。

第３図、第４図および第５図は種々のエマルジョンおよび溶液の投与後の最も重 要なｗ３−脂肪酸ＤＨＡ　（２２：　６ｗ３）、ＥＰＡ　（２０：　５ｗ３）、 アルファーリルイン酸８１８：３ｗ３）およびＷ６−脂肪酸ジホモーガンマーリ ルイン酸（２０：３Ｗ６）およびガンマーリルイン酸（１８：　３ｗ６）の肝臓 燐脂質（ＰＬ；第３図）、肝臓コレステロール（ＣＥ；第４図）および肝臓トリ グリセリド（ＴＧ、第５図）のレベルを示すグラフ図である。魚油エマルジョン （ＦＯｅｍ）およびイントラリピド（Ｉ　Ｌ）に比して魚−燐脂質含有エマルジ ョン（＊、Ｆ−ＰＬｅｍ）の投与後および他のグループに比してＦＯｅｍ　（＋ ）後続計的に顕著に増加（ｐ＜ｏ。

０５、ＡＮＯＶＡ）する。

第６図はリルイン酸（１８：　２ｗ６）のレベルを示すグラフ図でありそして 第７図は種々のエマルジョンおよび溶液の投与後の肝臓脂質中のアラキドニン酸 （２０：　４ｗ６）のレベルを示すグラフ図（例４参照）である。略号の説明に 関しては第３図ないし第５図参照。

発明を実施するための最良の形態 エマルジョンの種々の変形および等個物は本発明の精神または範囲から逸脱する ことなく当該技術に熟練した者には明らかである。それゆえ、理解されるべきこ とは、本発明は本明細書に開示される特別な例および実施例に限定されないとい うことである。

魚鱗脂質は種々の方法において製造することができかつ以下においてかかる製造 は１例のみが示されている。

例 例１　魚鱗脂質の製造 １．５ｋｇの魚肉が６１および３１９５％エタノールにより連続２時間抽出され た。濾過およびプール後、エタノールは抽出物から蒸発させられた（真空、４０ ℃）。

１３４ｇが残された（この２２％が溶融可能な物質だった）。この残留物が１容 量のペトロリウムエーテル中に溶解され、濾過され、４容量−２０’Ｃアセトン 中に沈澱させられ、濾過されかつペトロリウムエーテル中に溶解された。この最 後の沈澱および溶解が二度行われた。４容量のアセトン中に再び沈澱後、溶液は 濾過されかつ窒素雰囲気中で凍結乾燥された。終了は２７ｇであった。

製造された魚鱗脂質は％において以下の脂肪酸含量を有した。

１４：ｏ　ミリスチン酸　２ １６二〇　パルミチン酸　２６ １６：１　パルミトレイン酸　２．１ １８二〇　ステアリン酸　３．　０ １８：１　オレイン酸　１１．３ １８＝２　リノール酸　１，１ ２０＝１　イコセノイツク酸　１．６ ２ｏ：４　アラキドニン酸　１．２ ２０：５　ＥＰＡ　１０．６ ２２：６　ＤＨＡ　３２．４ 脂肪酸の合計量：　１００％（Ｗ／Ｗ＞例２　本発明による魚鱗脂質エマルジョ ンの製造例１からの魚鱗脂質は、 １００ｇ　大豆油 １２、Ｏｇ　魚鱗脂質 ２２、２ｇ　グリセロール ８６０ｇ　水添加注入 ３、Ｏｍｌ　ＮａＯＨ１１ を含有するエマルジョンの製造に使用された。

成分は「タラックスーミキサ」中で混合されかつその後「ムーランーゴーランホ モジエナイザｊ中で均質化された。

使用された大豆油は％において以下の脂肪酸含量を有した。

１６二〇　パルミチン酸　１１ １８：Ｏステアリン酸　４ １８：１　オレイン酸　２３ １８：２　リノール酸　５５ １８：３　アルファーリルイン酸　７ 脂肪酸の合計量：　１００％（Ｗ／Ｗ）Ｗ３−脂肪酸の合計量は１２．２ｇ／ｌ エマルジョンでかつｗ　６　／　ｗ　３−脂肪酸比は４．５：ｌである。

例３　魚油および卵黄燐脂質を含有するエマルジョンの製造 このエマルジョンは例２に記載された方法により製造され、そして例２における と同量のＷ３−脂肪酸および同量のｗ　６　／　ｗ　３−脂肪酸比を含む。

エマルジョンは、 魚油　１０．０ｇ 大豆油　９０．０ｇ 卵黄燐脂質　１２．０ｇ グリセロール　２２．２ｇ 水添加注入　８６０ｇ ＮａＯＨ，ｌ　１　３．Ｏｍｌ を含有した。

酸化防止剤としてビタミンＥ（アルファートコフェロール）がエマルジョンに添 加された。

使用された魚油は％において以下の脂肪酸含量を有した。

１４：０　ミリスチン酸　６．３ １６：Ｏパルミチン酸　１４．７ １６：１　パルミトレイン酸　７．３ １８：Ｏステアリン酸　２．６ １８：１　バクセン酸　３．　１ １８：２　リノール酸　１．１ １８＝３　リルイン酸　０．　７ １８：４　ステアリドン酸　２．６ ２０：１　イコセン酸　１．６ ２０：４　アラキドニン酸　１．４ ２０：５　ＥＰＡ　１７．８ ２２：１　ドコサエン酸　２．２ ２２：５　ドコサペンタエン酸　２．９２２：６　ＤＨＡ　１３．５ 脂肪酸の合計量：１００％（Ｗ／Ｗ） 使用された卵黄燐脂質は％において以下の脂肪酸含量を有した。

１４：ｏ　ミリスチン酸　０．２ １６：ｏ　パルミチン酸　３１．５ １６：１　パルミトレイン酸　１．２ １８二〇　ステアリン酸　１４．１ １８＝１　オレイン酸　２８．０ １８：２　リノール酸　１．１ ２０：１　イコセン酸　１．６ ２０：４　アラキドニン酸　４．２ ２２：６　ＤＨＡ　５．　８ でありそしてｗ　６　／　ｗ　３−脂肪酸の比は４．８：１である。

例４　比較例（魚鱗脂質−魚油） この例の目的は本発明によるるエマルジョンにおける魚鱗脂質製剤の作用を研究 しかつそれを同一量のｗ３−脂肪酸、イントラリビド（商標）を含有する魚油エ マルジョンのごとき種々のエマルジョンと比較しかつまたそれを水溶液および生 理食塩水中の魚鱗脂質と比較することにあった。

１７０〜１９０ｇの到着時の重量を有する雄のスプレイブ・ドーリ−・ラットが 使用された。これらのラットは個々にケージ内に置かれかつ予め計量した小さい 革ベルトを備えた。静脈内カテーテルが麻酔下で７〜８日後に挿入された。手術 後動物は注入室中に置かれた。さらに４８が回収のために与えられた。外科手術 後ラットは基礎を据えた実験室の貯蔵規定食Ｒ３（スウェーデン国、ズーデルテ ーリエ所在のエラオース・アクチボラーグ社）および任意の香水が供給された。

これらのラットは無作為のユニットを使用して実験グループＡ−Ｅに無作為化さ れた。

６匹のラットが各実験グループにおいて使用された。

すべてのグループが５０　ｍ　ｌ　／　ｋ　ｇ体重（ｂ、Ｗ、　）／日を収容し た。

注入は、ＩＭＥＤ容量ポンプを介して、２０ｈ／日、通常午後１時から午前９時 の間に永続的な中央血管カテーテルを介して静脈に投与された。

食料消費は２４時間基準で記録された。ラットの全体的な外見が記録された。注 入は連続９日間付与された。

１０日に注入が午前７時に停止されかつ経口食料が取り上げられた。

グループＡ−Ｅは以下の注入が付与された。

Ａ：例２（Ｆ−ＰＬｅｍ、本発明）による１０％脂肪エマルジョン Ｂ：例３　（ＦＯｅｍ）による１０％脂肪エマルジョンＣ：大豆油として１０％ （ｗ　／ｖ　）油および１．２％卵黄燐脂質を含有する、１１０％イントラリピ ド（商標） Ｄ：魚鱗脂質　１２．０ｇ グリセロール　２２．２ｇ 水添加注入　９６７ｇ ＮａＯＨ１１３ｍｌ を含有する１、２％燐脂質溶液 Ｅ：０．９％ＮａＣ１−溶液 ｗ３−およびｗ６−脂肪酸の量は以下の通りであった。

ｇ／１ 合計ｗ３−ＦＡ　合計ｗ６−ＦＡ　ｗ６／ｗ３Ａ＝Ｅｘ２　（発明）　１２．２ 　５５．２　４．５８＝Ｅｘ３　（魚油）　１０．８　５１．６　４．８Ｃ＝イ ンドラリピツド　７．７　５６，８　７．４Ｄ＝魚燐脂質溶液　４．８　０．３ 　０．１注入を停止後約２時間、ラットはメブマール（商標）（６０ｍｇ／ｋｇ ）により麻酔された。血液サンプルが血清脂質の分析のために集められた。

血清脂質＝１ｍ１の血液から、血清が血清トリグリセリドおよび血清コレステロ ールの分析のために採られかつ分析まで一７０℃で凍結された。血清コレステロ ールは酵素により測定された。血清トリグリセリドは自由グリセロールおよび酵 素加水分解を除去後酵素により測定された。

組織病理学：肝臓、腎臓、心臓、肺、肝臓および胸腺が摘出され、計量されそし てパラフィン中に埋め込みかつ４〜５μｍに切断し、次いでヘマトキシリン−エ オシンにより染色することにより組織病理学的試験のために用意された。脂肪に 関してオイル・レッド・オーにより染色されたすべての組織からの凍結された断 片がまた試験された。

肝臓脂質中の脂肪酸の輪郭ニゲループＡ−Ｃのラットからの残りの脂質組織が中 性脂質および燐脂質（ＰＬ）中の脂肪酸輪郭の測定に使用された。試験された中 性脂質断片はコレステロールエステル（ＣＥ）およびトリグリセリド（ＴＧ）で あった。脂質材料は抽出されかつ脂肪酸は通常の方法を使用して引き出されかつ 分析された（ＧＬＣ）。

血清脂質について結果として生じるデータは第１図（血清コレステロール、５− ＣＨＯＬのレベル）および第２図（血清トリグリセリド、５−ＴＧのレベル）に 示した。肝臓脂質中の最も重要な脂肪酸のレベルは第３図〜第７図に示している 。結果は種々のエマルジョンおよび溶液に関する平均値±ＳＥＭとして表されて いる。

結果および結論 第１図は血清コレステロールレベルが本発明によるエマルジョンが使用されると き非常に低い（＊Ａ＜Ｂ、Ｃ；ｐｒｏ、０５．ＡＮＯＶＡ）ことを明瞭に示す。

しかしながら、最も意外な作用は血清グリセリドレベルを比較するときの結果で ある。第２図参照。そのレベルは意外にも低く　（０，３０ｍモル／１）かつ溶 液またはＮａＣ１溶液（０，６０ｍモル／１）中にインドラリピッド（商標）が 使用されるとき値の半分のみであった（＊Ａ＜Ｂ、　Ｃ，Ｄ、　Ｅ　；　ｐｏ、 ０５．　ＡＮＯＶＡ）。

脂質エマルジョン中の燐脂質から引き出され得る少量のｗ３−脂肪酸が生理的作 用を働かすことができるということは全く予期および知られていない。トリグリ セリド中のｗ３−脂肪酸の同一量（グループＢ）が同一の生物学的作用または脂 肪酸組み込みについての作用を慟がさない。燐脂質／トリグリセリド比は１０％ 脂質エマルジョンにおいて約１＝１０および２０％脂質エマルジョンにおいて２ ０％であり、かつ約３ｏ％ｗ３−脂肪酸を含有する、魚油に関する生物学的作用 のしきい値レベルが少なくとも油相の１０％であるので、脂質エマルジョンの燐 脂質中のｗ３−脂肪酸の量は生物学的作用を働かすと思われるためには少なくと も３０％（合計脂肪酸のｗ　／　ｗ　）にすべきである。

このように付与すると、本発明によるエマルジョンは患者にｗ６−およびｗ３− 脂肪酸のごときすべての必須の脂肪酸を収容させることができかつ非常に低レベ ルの血清コレステロールおよび血清トリグリセリドで残留させることができる。

組織病理学的データは魚油または魚鱗脂質を有するエマルジョンが肝臓のクツペ ル細胞中に主として蓄積され、これに反してインドラリピッド（商標）は同様に ヘパトサイト（肝細胞）中に蓄積される。しかしながら水溶液中の魚鱗脂質は肝 臓のクツペル細胞および膵臓の同様な細胞中にのみ蓄積された。これらの細胞は 免疫学的に活性である。免疫学的に活性の細胞に対するこの特別な蓄積は炎症性 かつ免疫学的反応についてのｗ３−脂肪酸の作用を容易にする。このことはリウ マチ状関節炎および敗血症のごとき炎症性または免疫学的疾患のために魚鱗脂質 を使用するときに重要である（ラブ氏等、１９９０年およびビリアール氏等、１ ９８８年）。

肝臓燐脂質および肝臓コレステロールエステル中の脂肪酸パターンはＥＰＡおよ びＤＨＡがｗ３−脂肪酸の同一量を含有する魚油エマルジョンに比べて本発明に よるエマルジョンにより治療後良好に組み込ませることを示す。

魚鱗脂質含有エマルジョン（Ｆ−ＰＬｅｍ）、魚油エマルジョン（ＦＯｅｍ）ま たは肝臓燐脂質（ＰＬ）、コレステロールエステル（ＣＥ）およびトリグリセリ ド（ＴＧ）における脂肪酸パターン中のインドラリピッド（Ｉ　Ｌ）により誘起 される変化は第３図〜第７図に示されている。燐脂質断片（第３図および第６図 ）において、見られる単なる変化はＦ−ＰＬｅｍ（発明、＊）（ｐ＜０．０５． ＡＮＯＶＡ）　により誘起され６ＤＨＡおよびＦＯｅｍ　（＋ｐ＜ｏ、０５．Ａ ＮＯＶＡ）により誘起されるＥＰＡの増加である。

燐脂質中のＤＨＡの特別な増加、ＤＨＡの主要プール、は脳および網膜成長に関 して重要である。ポリ不飽和脂肪酸、とくに脳中のＤＨＡの生物学的膜中の摂取 およびレベルはそれと肝臓（アンデルソン氏およびコナー氏著の脂質、１９８８ 年、第２３（４）巻、第２８６頁〜第２９０頁）および心臓（スワンソン氏等著 のブリティッシュ・ジャーナル・イブ・ニュトリション、１９８８年、第５９巻 、第５３５頁〜第５４５頁）において相関されている。かくして脳および心臓中 の同様な摂取の増強が魚油エマルジョンに比して本発明のエマルジョンの投与に 続いて期待されている。それゆえ、本発明のエマルジョンは通常の脳および網膜 成長および心臓血管疾患に同様に使用することができる。

肝臓コレステロールエステル断片（第４図および第６図）においてＦ−ＰＬｅｍ はＦＯｅｍ−およびＩＬ−グループに比してＤＨＡ、ＥＰＡおよびリノール酸（ １８：２ｗ６）をそしてＩＬグループに比して、α−リノール酸（１８：　３ｗ ３）を増加した。かくして、燐脂質形状において投与されたＷ３−脂肪酸はトリ グリセリド形状（魚油）中のＷ３−脂肪酸より膜脂質（燐脂質およびコレステロ ールエステル）中により効果的に組み込まれている。必須脂肪酸かつしたがって またＷ３−脂肪酸の主要断片は膜脂質に働かされる。

ｗ６−脂肪酸のいずれかの減少はＦ−ＰＬｅｍグループ中には見られなかった。

これに反して、Ｗ６−脂肪酸リノール酸（１８：　２ｗ６、第６図）、ガンマ− リノール酸（１８：　３ｗ６）およびジホモ−ガンマ−リノール酸（２０：　３ ｗ６）　、ならびにアルファーリノール酸（１８：３ｗ３）（第５図）は、ＦＯ ｅｍ−およびＩＬ−グループに比して、トリグリセリド断片において増加された 。アラキドン酸（２０：　４ｗ６）のレベルはすべての脂質断片（第７図）にお いて不変であった。この知見は生物学的膜中のアラキドン酸が重要なため顕著で ある。

Ｗ３−脂肪酸含有燐脂質は、本発明に示されるように、ヘパトライト中よりもク ツペル細胞中により多く摂取されるので、組み込まれたＷ３−脂肪酸の相対的な 増加は肝臓全体中よりも免疫学的に活性の細胞（クツペル細胞および他のマクロ ファージ）中において同様により高いと予期されている。これはＷ３−脂肪酸に より働かされる抗炎症性および免疫抑制作用のために重要である。

燐脂質中のＷ３−脂肪酸により得られた生物学的作用はかかる薬剤または同様な 作用を有する薬剤と組み合わせて治療目的に使用されかつ燐脂質小胞（リポソー ム）中に含むことができる。

結論 本発明によるエマルジョン中の海産物燐脂質は、同様な量のＷ３−脂肪酸および 同様なｗ　６　／　ｗ　３−脂肪酸比を含む、魚油エマルジョンと比較されると き意外に低い血清トリグリセリドおよび血清コレステロールを生じることを示し た。海産物燐脂質はエマルジョン中に比較し得るＷ３−脂肪酸の量を含む魚油よ り生物学的膜中にＷ３−脂肪酸のより有効な組み込みを誘起する。

これらの結果は膜脂質中の非常に好適な脂肪酸パターンはすべての重要なＷ３− 脂肪酸ならびにＷ６−脂肪酸リノール、ガンマ−リノールおよびジホモ−ガンマ −リノール酸の増加により、得られることを示す。本発明のｗ３−脂肪酸含有燐 脂質はそれゆえ、良くバランスされたパターンにおいてＷ３−脂肪酸（本発明の 燐脂質からの）ならびにＷ６−脂肪酸（植物油中の）の増加を可能にするので、 あらゆる必須脂肪酸の増大が必要なすべての状態において重要である。

これらの結果はｗ３−およびｗ６−脂肪酸のより有効な利用および組み込みのた めに植物油エマルジョン中にｗ３−脂肪酸含有燐脂質の使用に関して密接な関係 を有する。Ｗ３−脂肪酸含有燐脂質はまた免疫学的に活性の細胞中にＷ３−脂肪 酸のより特別な組み込みを許容する。

本発明は増加した血清脂質のレベル、増加した炎症性応答および増加した免疫学 的活性を有する状態にかつまた脳および網膜の成長にとくに密接な関係を有する 。

燐脂質中のＷ３−脂肪酸により得られた生物学的作用はかかる薬剤または同様な 作用を有する薬剤と組み合わせて治療目的に使用することができかつ燐脂質小胞 （リポソーム）中に含ませることができる。

、ＦＩＧ　１ ＦＩＧ　２ ＦＩＧ　３ １ε：３ｗ６２０：３ｗ６１８：３ｗ３２０：５ｗ：１２２：６ｗ：１ＦＩＧ　 ４ ＦＩＧ　５ ＦＩＧ　６ ＦＩＧ　７ 国際調査報告 １＋い−、１エユ１゜、１１７、ρＣＴ／ＳＥ　９２１００３３３国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）植物油および／または海産物油、水性相および乳化剤としての燐脂質からな るエマルジヨンにおいて、燐脂質が海産物および／または合成起源からなりかつ 少なくとも３０％（ｗ／ｗ）の量においてオメガ−ｗ３−脂肪酸を含有すること を特徴とするエマルジヨン。 ２）少なくとも３０％（ｗ／ｗ）の量において存在するｗ３−脂肪酸がＤＨＡお よびＥＰＡであることを特徴とする請求の範囲第１項に記載のエマルジヨン。 ３）油の量が０．５〜４０％（ｗ／ｖ）そしてオメガ−脂肪酸を含有する燐脂質 の量が０．１〜３０％（ｗ／ｖ）であることを特徴とする請求の範囲第１項また は第２項に記載のエマルジヨン。 ４）１つまたはそれ以上の生物に作用する化合物を含有することを特徴とする請 求の範囲第３項に記載のエマルジヨン。 ５）低い血液トリグリセリドおよびコレステロールレベルを付与する栄養エマル ジヨンの製造のために少なくとも３０％（ｗ／ｗ）の量においてオメガ−３−脂 肪酸を含有する海産物および／または合成起源の燐脂質の使用。 ６）抗炎症性および／または免疫抑制作用を有する薬剤の製造のために少なくと も３０％（ｗ／ｗ）の量においてオメガ−３−脂肪酸を含有する海産物および／ または合成起源の燐脂質の使用。 ７）オメガ−３−脂肪酸がＤＨＡおよびＥＰＡであることを特徴とする請求の範 囲第５項または第６項に記載の使用。 ８）治療目的により少なくとも３０％（ｗ／ｗ）の量においてオメガ−３−脂肪 酸を含有する海産物および／または合成起源の燐脂質。 ９）オメガ−３−脂肪酸が少なくとも３０％（ｗ／ｗ）の量においてＤＨＡおよ びＥＰＡであることを特徴とする請求の範囲第８項に記載の燐脂質。 １０）炎症性作用および免疫学的作用に効果を有することを特徴とする請求の範 囲第８項または第９項に記載の燐脂質。 １１）疾患がリウマチ状関節炎または敗血症であることを特徴とする請求の範囲 第１０項に記載の燐脂質。 １２）通常の脳および網膜成長および作用について効果的であることを特徴とす る請求の範囲第８項または第９項に記載の燐脂質。 １３）燐脂質のその含量が３０％（ｗ／ｗ）の量においてオメガ−３−脂肪酸を 含有することを特徴とするモノ、二および／または多層の小胞またはその混合物 。 １４）オメガ−３−脂肪酸がＥＰＡおよびＤＨＡであることを特徴とする請求の 範囲第１３項に記載のモノ、二および／または多層小胞子またはその混合物。 １５）請求の範囲第１３項または第１４項に記載の小胞、担体および／または希 釈液および小胞と組み合わされた任意に１つまたはそれ以上の生物に作用する化 合物からなることを特徴とする組成物。 １６）請求の範囲第８項または第９項に記載の燐脂質およびそれを１つまたはそ れ以上の生物に作用する化合物との組み合わせにおいて経口、鼻側、肺、直腸、 眼球、皮下または非経口投与に適合させるための担体および／または希釈液から なることを特徴とする薬剤組成物。 １７）請求の範囲第８項または第９項に記載の燐脂質からなることを特徴とする 栄養組成物。