JPH0673083A - 新規糖質分解酵素インヒビター - Google Patents
新規糖質分解酵素インヒビターInfo
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- JPH0673083A JPH0673083A JP4251946A JP25194692A JPH0673083A JP H0673083 A JPH0673083 A JP H0673083A JP 4251946 A JP4251946 A JP 4251946A JP 25194692 A JP25194692 A JP 25194692A JP H0673083 A JPH0673083 A JP H0673083A
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- Japan
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- formula
- novel
- glycolytic enzyme
- salt
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 新規糖質分解酵素阻害作用物質を提供する。
【構成】 式（化１）：
【化１】
で表される新規糖質分解酵素インヒビター又はその塩。
ストレプトミセス属に属する菌を培養することによる上
記化合物の製造方法。及び式（化１）で表される化合物
を含有する新規糖質分解酵素インヒビター又はその塩
を、不溶性担体に固定化して得たアフィニティ担体。 【効果】 グルコアミラーゼに対する親和性が強すぎ
ず、かつ有用な糖質分解酵素阻害作用を有する。
ストレプトミセス属に属する菌を培養することによる上
記化合物の製造方法。及び式（化１）で表される化合物
を含有する新規糖質分解酵素インヒビター又はその塩
を、不溶性担体に固定化して得たアフィニティ担体。 【効果】 グルコアミラーゼに対する親和性が強すぎ
ず、かつ有用な糖質分解酵素阻害作用を有する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、糖質分解酵素に対して
阻害活性を示す新規糖質分解酵素インヒビター（以下、
糖質分解酵素インヒビターをＧＡＩと略述する）、その
製造法及びそれを不溶性担体に固定化したアフィニティ
担体に関する。
阻害活性を示す新規糖質分解酵素インヒビター（以下、
糖質分解酵素インヒビターをＧＡＩと略述する）、その
製造法及びそれを不溶性担体に固定化したアフィニティ
担体に関する。
【０００２】
【従来の技術】天然に存在するアミラーゼインヒビター
としては、動植物及び微生物起源のものが多数見出され
ているが、大別すると、含窒素オリゴ糖、アミノ糖、ペ
プチドグルカン、ペプチド及びタンパク質に分類され
る。その中で、主として研究されてきたのが含窒素オリ
ゴ糖であり、その構造はアミノサイクリトール誘導体で
あることが判明している。従来、糖質分解酵素を阻害す
るアミノサイクリトール誘導体としてはアカボース（特
公昭５４−３９４７４号公報）、トレスタチン（特開昭
５４−１６３５１１号公報）、アディポシン（特開昭５
４−１０６４０２号公報）、アミロスタチン（特開昭５
０−１２３８９１号公報）、オリゴスタチン（特開昭５
３−２６３９８号公報）、バリオールアミン（特開昭６
１−２０５２１５号公報）などが知られている。アカボ
ースは小腸α−グルコシダーゼを阻害して、肥満、糖尿
病の予防治療などの薬効を示す。また糸状菌グルコアミ
ラーゼを強く阻害するため、固定化アカボースカラムは
グルコアミラーゼの迅速な精製などへの応用が検討され
ている。しかしながら、アカボースのグルコアミラーゼ
に対する親和力が強すぎるため、固定化アカボースカラ
ムの再生に長時間を要するなどの問題がある。
としては、動植物及び微生物起源のものが多数見出され
ているが、大別すると、含窒素オリゴ糖、アミノ糖、ペ
プチドグルカン、ペプチド及びタンパク質に分類され
る。その中で、主として研究されてきたのが含窒素オリ
ゴ糖であり、その構造はアミノサイクリトール誘導体で
あることが判明している。従来、糖質分解酵素を阻害す
るアミノサイクリトール誘導体としてはアカボース（特
公昭５４−３９４７４号公報）、トレスタチン（特開昭
５４−１６３５１１号公報）、アディポシン（特開昭５
４−１０６４０２号公報）、アミロスタチン（特開昭５
０−１２３８９１号公報）、オリゴスタチン（特開昭５
３−２６３９８号公報）、バリオールアミン（特開昭６
１−２０５２１５号公報）などが知られている。アカボ
ースは小腸α−グルコシダーゼを阻害して、肥満、糖尿
病の予防治療などの薬効を示す。また糸状菌グルコアミ
ラーゼを強く阻害するため、固定化アカボースカラムは
グルコアミラーゼの迅速な精製などへの応用が検討され
ている。しかしながら、アカボースのグルコアミラーゼ
に対する親和力が強すぎるため、固定化アカボースカラ
ムの再生に長時間を要するなどの問題がある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記
の問題点を解決する新規糖質分解酵素阻害作用物質を提
供することにある。
の問題点を解決する新規糖質分解酵素阻害作用物質を提
供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明を概説すると、第
１の発明は、式（化１）：
１の発明は、式（化１）：
【０００５】
【化１】
【０００６】で表される新規ＧＡＩ又はその塩、第２の
発明は、ストレプトミセス属に属する菌を培養して、式
（化１）で表される新規ＧＡＩ又はその塩を採取するこ
とを特徴とする新規ＧＡＩ又はその塩の製造法、及び第
３の発明は、式（化１）で表される化合物を含有する新
規ＧＡＩ又はその塩を、不溶性担体に固定化して得たア
フィニティ担体に関する。
発明は、ストレプトミセス属に属する菌を培養して、式
（化１）で表される新規ＧＡＩ又はその塩を採取するこ
とを特徴とする新規ＧＡＩ又はその塩の製造法、及び第
３の発明は、式（化１）で表される化合物を含有する新
規ＧＡＩ又はその塩を、不溶性担体に固定化して得たア
フィニティ担体に関する。
【０００７】本発明者らは広島大学工学部第３類化学系
発酵菌株保存室より分譲された一菌株ストレプトミセス
カスタネオグロビスポルス( Streptomyces castaneog
lobisporus ) ＨＵＴ６２０２株を培養し、得られた培
養液中に糖質分解酵素阻害活性を有する物質が存在する
ことを見出した。そのＧＡＩの採取方法について検討
し、その物質の単離に成功し、かつアミノサイクリトー
ル構造を有するその化学構造を解明した。更に、新規Ｇ
ＡＩ群の固定化について検討し、アフィニティ担体の製
造法を確立し、本発明を完成した。
発酵菌株保存室より分譲された一菌株ストレプトミセス
カスタネオグロビスポルス( Streptomyces castaneog
lobisporus ) ＨＵＴ６２０２株を培養し、得られた培
養液中に糖質分解酵素阻害活性を有する物質が存在する
ことを見出した。そのＧＡＩの採取方法について検討
し、その物質の単離に成功し、かつアミノサイクリトー
ル構造を有するその化学構造を解明した。更に、新規Ｇ
ＡＩ群の固定化について検討し、アフィニティ担体の製
造法を確立し、本発明を完成した。
【０００８】第１の本発明の要旨とするところは、式
（化１）で表される新規ＧＡＩ（以下、ＧＡＩ−１と略
述する）又はその塩にある。ＧＡＩ−１は後記の実施例
に示すごとく、ＧＡＩ−１生産菌の培養ろ液を活性炭、
イオン交換樹脂、ゲルろ過、高速液体クロマトグラフィ
ーなどにより精製し、白色粉末として採取できる。
（化１）で表される新規ＧＡＩ（以下、ＧＡＩ−１と略
述する）又はその塩にある。ＧＡＩ−１は後記の実施例
に示すごとく、ＧＡＩ−１生産菌の培養ろ液を活性炭、
イオン交換樹脂、ゲルろ過、高速液体クロマトグラフィ
ーなどにより精製し、白色粉末として採取できる。
【０００９】ＧＡＩ−１の物性は次のとおりである。す
なわち、融点は２００−２０５℃である。質量分析法で
得られる分子量は１００３である。 元素分析値は（Ｃ37Ｈ65ＮＯ30・２Ｈ2 Ｏとして） 理論値：Ｃ、４２．７３ ； Ｈ、６．６９ ； Ｎ、
１．３５（％） 実測値：Ｃ、４２．１５ ； Ｈ、６．３３ ； Ｎ、
１．４１（％） であり、Ｃ37Ｈ65ＮＯ30の分子式を得る。また、溶解性
は、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチルに不溶、エタ
ノール、メタノールに可溶、水に易溶である。
なわち、融点は２００−２０５℃である。質量分析法で
得られる分子量は１００３である。 元素分析値は（Ｃ37Ｈ65ＮＯ30・２Ｈ2 Ｏとして） 理論値：Ｃ、４２．７３ ； Ｈ、６．６９ ； Ｎ、
１．３５（％） 実測値：Ｃ、４２．１５ ； Ｈ、６．３３ ； Ｎ、
１．４１（％） であり、Ｃ37Ｈ65ＮＯ30の分子式を得る。また、溶解性
は、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチルに不溶、エタ
ノール、メタノールに可溶、水に易溶である。
【００１０】ＧＡＩ−１の赤外部吸収スペクトル（臭化
カリウム錠）は添付図面の図１に示され、ν ３４０
０、２９３０、１６４０、１４１０、１１５０、１０２
０ｃｍ-1に特異吸収帯を示す。なお、図１において、縦
軸は透過率（％）、横軸は波数（ｃｍ-1）を示す。
カリウム錠）は添付図面の図１に示され、ν ３４０
０、２９３０、１６４０、１４１０、１１５０、１０２
０ｃｍ-1に特異吸収帯を示す。なお、図１において、縦
軸は透過率（％）、横軸は波数（ｃｍ-1）を示す。
【００１１】ＧＡＩ−１のプロトン核磁気共鳴スペクト
ルは添付図面の図２に示されるように、δ １．３、
２．４５、３．４〜４．２、５．２、５．３、５．３
５、５．４ｐｐｍに吸収を示す。なお、図２において、
縦軸は相対強度、横軸は化学シフト（δ、ｐｐｍ）を示
す。
ルは添付図面の図２に示されるように、δ １．３、
２．４５、３．４〜４．２、５．２、５．３、５．３
５、５．４ｐｐｍに吸収を示す。なお、図２において、
縦軸は相対強度、横軸は化学シフト（δ、ｐｐｍ）を示
す。
【００１２】ＧＡＩ−１及びメチル化ＧＡＩ−１のＦＡ
Ｂ／マススペクトルは、各々添付図面の図３及び図面の
図４に示されるが、ＧＡＩ−１はｍ／ｚ１００４に、メ
チル化ＧＡＩ−１はｍ／ｚ１２９８に各々の分子イオン
ピークを示す。なお、図３及び図４において、縦軸は相
対強度、横軸は質量数（ｍ／ｚ）を示す。
Ｂ／マススペクトルは、各々添付図面の図３及び図面の
図４に示されるが、ＧＡＩ−１はｍ／ｚ１００４に、メ
チル化ＧＡＩ−１はｍ／ｚ１２９８に各々の分子イオン
ピークを示す。なお、図３及び図４において、縦軸は相
対強度、横軸は質量数（ｍ／ｚ）を示す。
【００１３】また、ＧＡＩ−１の塩としては、例えば塩
酸塩、硫酸塩又は硝酸塩の形を取り得る。
酸塩、硫酸塩又は硝酸塩の形を取り得る。
【００１４】次に、第２の発明の方法において、ＧＡＩ
−１生産菌とはＧＡＩ−１を生産するストレプトミセス
属に属する放線菌であればいかなる菌株でもよく変異株
でもよい。本発明のＧＡＩ−１の生産に使用される生産
菌の例には、広島大学工学部第３類化学系発酵菌株保存
室より分譲可能なストレプトミセス カスタネオグロビ
スポルス ＨＵＴ６２０２株がある。
−１生産菌とはＧＡＩ−１を生産するストレプトミセス
属に属する放線菌であればいかなる菌株でもよく変異株
でもよい。本発明のＧＡＩ−１の生産に使用される生産
菌の例には、広島大学工学部第３類化学系発酵菌株保存
室より分譲可能なストレプトミセス カスタネオグロビ
スポルス ＨＵＴ６２０２株がある。
【００１５】次に、ＧＡＩ−１の製造法を具体的に説明
する。本発明の方法を実施するに当って、ＧＡＩ−１生
産菌を培養するのに用いる栄養源としては、通常の微生
物が利用しうる公知の栄養源を適宜使用できる。例え
ば、市販されているグルコース、でんぷん、しょ糖、乳
糖、糖みつ、又はグリセリンなどの炭水化物、又はそれ
らの組合せを炭素源として、市販されているペプトン、
肉エキス、酵母エキス、大豆粕などを窒素源として、食
塩、リン酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウムなど
を無機の栄養源としてそれぞれ使用できる。特に好まし
い培地成分としては、炭素源として可溶性でんぷん、窒
素源としてはペプトンがあり、一例として可溶性でんぷ
ん、グルコース、ペプトン、肉エキス、食塩などを含む
培地を用いるのが好ましい。
する。本発明の方法を実施するに当って、ＧＡＩ−１生
産菌を培養するのに用いる栄養源としては、通常の微生
物が利用しうる公知の栄養源を適宜使用できる。例え
ば、市販されているグルコース、でんぷん、しょ糖、乳
糖、糖みつ、又はグリセリンなどの炭水化物、又はそれ
らの組合せを炭素源として、市販されているペプトン、
肉エキス、酵母エキス、大豆粕などを窒素源として、食
塩、リン酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウムなど
を無機の栄養源としてそれぞれ使用できる。特に好まし
い培地成分としては、炭素源として可溶性でんぷん、窒
素源としてはペプトンがあり、一例として可溶性でんぷ
ん、グルコース、ペプトン、肉エキス、食塩などを含む
培地を用いるのが好ましい。
【００１６】ＧＡＩ−１の大量生産には液体培養が好ま
しい。培養温度としてはＧＡＩ−１生産菌が発育し、Ｇ
ＡＩ−１を生産する範囲の任意の温度を適用し得るが、
特に好ましい温度は２５〜３５℃である。培養は通常本
物質が培養物中に生産され、充分に蓄積するまで継続さ
れる。例えば、ＧＡＩ−１生産菌ストレプトミセスカス
タネオグロビスポルス ＨＵＴ６２０２株の場合は、５
００ｍｌ容坂口フラスコに、１％可溶性でんぷん、１％
グルコース、０．５％肉エキス、０．５％ペプトン及び
０．３％食塩（ｐＨ７．０）を含む培地１００ｍｌを入
れ、滅菌した後、これにＧＡＩ−１生産菌ストレプトミ
セス カスタネオグロビスポルス ＨＵＴ６２０２株の
斜面培養物の一白金耳量を接種し、２８℃で好気的に振
とう培養を行うと培養後４８〜１９２時間の間にＧＡＩ
−１の蓄積が認められる。
しい。培養温度としてはＧＡＩ−１生産菌が発育し、Ｇ
ＡＩ−１を生産する範囲の任意の温度を適用し得るが、
特に好ましい温度は２５〜３５℃である。培養は通常本
物質が培養物中に生産され、充分に蓄積するまで継続さ
れる。例えば、ＧＡＩ−１生産菌ストレプトミセスカス
タネオグロビスポルス ＨＵＴ６２０２株の場合は、５
００ｍｌ容坂口フラスコに、１％可溶性でんぷん、１％
グルコース、０．５％肉エキス、０．５％ペプトン及び
０．３％食塩（ｐＨ７．０）を含む培地１００ｍｌを入
れ、滅菌した後、これにＧＡＩ−１生産菌ストレプトミ
セス カスタネオグロビスポルス ＨＵＴ６２０２株の
斜面培養物の一白金耳量を接種し、２８℃で好気的に振
とう培養を行うと培養後４８〜１９２時間の間にＧＡＩ
−１の蓄積が認められる。
【００１７】ＧＡＩ−１の培養工程並びに精製工程中で
の追跡は次の方法によるグルコアミラーゼ活性阻害作用
測定に基づいて行う。グルコアミラーゼ活性の測定は、
岩野らの方法〔日本醸造協会誌、第１７巻、第３８３〜
３８６頁（１９７６）〕を改良して行う。すなわち、ア
スペルギルス ニガー由来のグルコアミラーゼ溶液１０
０μｌ、０．５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）
１００μｌ、インヒビター溶液５０μｌを加え、３７℃
１５分間、プレインキュベイションする。３７℃にあら
かじめ加温してある可溶性でんぷん溶液２５０μｌを加
えて、グルコアミラーゼ反応を開始する。３７℃２０分
間反応後、グルコースオキシダーゼ試薬を加えてグルコ
アミラーゼ反応を停止すると共に、遊離したグルコース
の定量を行う。
の追跡は次の方法によるグルコアミラーゼ活性阻害作用
測定に基づいて行う。グルコアミラーゼ活性の測定は、
岩野らの方法〔日本醸造協会誌、第１７巻、第３８３〜
３８６頁（１９７６）〕を改良して行う。すなわち、ア
スペルギルス ニガー由来のグルコアミラーゼ溶液１０
０μｌ、０．５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）
１００μｌ、インヒビター溶液５０μｌを加え、３７℃
１５分間、プレインキュベイションする。３７℃にあら
かじめ加温してある可溶性でんぷん溶液２５０μｌを加
えて、グルコアミラーゼ反応を開始する。３７℃２０分
間反応後、グルコースオキシダーゼ試薬を加えてグルコ
アミラーゼ反応を停止すると共に、遊離したグルコース
の定量を行う。
【００１８】ＧＡＩ−１生産菌の培養液中及び菌体中に
存在するＧＡＩ−１を培養物から採取するに当っては、
培養ろ液から吸着剤に吸着及び脱離させる方法で好収率
で採取できる。吸着剤として、活性炭、イオン交換樹脂
などが使用できる。例えば、ＧＡＩ−１は活性炭に吸着
され、３０％アセトン水で溶出される。培養ろ液にこれ
の３重量％の活性炭を入れて、かくはんし、水洗後、培
養ろ液の１／３容の３０％アセトン水で溶出すると、活
性画分が得られる。これを減圧下に濃縮すると、ＧＡＩ
−１の粗濃縮液が得られる。これを水で薄め、ダウエッ
クス５０Ｗ×４（ダウ・ケミカル社製、Ｈ+ 型）のカラ
ムに吸着させ、水洗後、０．０５Ｍピリジン酢酸緩衝液
（ｐＨ６．５）で溶出できる。これを減圧下濃縮するこ
とにより、粗ＧＡＩ−１を得ることができる。次に、こ
のものをシリカゲル（メルク社製）により精製する。次
に、アサヒパックＧＳ２２０（旭化成工業社製）とバイ
オゲルＰ−４（バイオラッド社製）を用いたゲルろ過に
より精製する。更に、高速液体クロマトグラフィーＴＳ
Ｋ−ｇｅｌＮＨ２−６０（東ソー社製）で精製する。以
上に述べた方法は、ＧＡＩ−１を実用的に製造すること
が可能な製造法である。
存在するＧＡＩ−１を培養物から採取するに当っては、
培養ろ液から吸着剤に吸着及び脱離させる方法で好収率
で採取できる。吸着剤として、活性炭、イオン交換樹脂
などが使用できる。例えば、ＧＡＩ−１は活性炭に吸着
され、３０％アセトン水で溶出される。培養ろ液にこれ
の３重量％の活性炭を入れて、かくはんし、水洗後、培
養ろ液の１／３容の３０％アセトン水で溶出すると、活
性画分が得られる。これを減圧下に濃縮すると、ＧＡＩ
−１の粗濃縮液が得られる。これを水で薄め、ダウエッ
クス５０Ｗ×４（ダウ・ケミカル社製、Ｈ+ 型）のカラ
ムに吸着させ、水洗後、０．０５Ｍピリジン酢酸緩衝液
（ｐＨ６．５）で溶出できる。これを減圧下濃縮するこ
とにより、粗ＧＡＩ−１を得ることができる。次に、こ
のものをシリカゲル（メルク社製）により精製する。次
に、アサヒパックＧＳ２２０（旭化成工業社製）とバイ
オゲルＰ−４（バイオラッド社製）を用いたゲルろ過に
より精製する。更に、高速液体クロマトグラフィーＴＳ
Ｋ−ｇｅｌＮＨ２−６０（東ソー社製）で精製する。以
上に述べた方法は、ＧＡＩ−１を実用的に製造すること
が可能な製造法である。
【００１９】第３の発明によれば、式（化１）で表され
る化合物を含有する新規ＧＡＩ又はその塩を固定化した
アフィニティ担体が提供される。ここで、式（化１）で
表される化合物以外の新規ＧＡＩとしては、下記式（化
２）：
る化合物を含有する新規ＧＡＩ又はその塩を固定化した
アフィニティ担体が提供される。ここで、式（化１）で
表される化合物以外の新規ＧＡＩとしては、下記式（化
２）：
【００２０】
【化２】
【００２１】において、ｎ＝１及び２の化合物がある。
【００２２】担体としては、アミノ基を有する水不溶性
ゲル例えば、アミノ化ポリビニルアルコール、アミノ化
セルロース、アミノ化アガロース、キトサン、キチンな
どが用いられる。
ゲル例えば、アミノ化ポリビニルアルコール、アミノ化
セルロース、アミノ化アガロース、キトサン、キチンな
どが用いられる。
【００２３】また、固定化の方法としては、公知の方法
が適用できるが、特に望ましいのはＧＡＩの還元末端と
担体のアミノ基間にシッフ塩基を形成させ、還元剤で還
元して、ＧＡＩを固定化することができる。還元剤とし
ては、例えば、水素化ほう素ナトリウム、水素化シアノ
ほう素ナトリウム、ピリジンボラン複合体、ジメチルア
ミンボラン複合体、又はトリメチルアミンボラン複合体
などが使用しうる。
が適用できるが、特に望ましいのはＧＡＩの還元末端と
担体のアミノ基間にシッフ塩基を形成させ、還元剤で還
元して、ＧＡＩを固定化することができる。還元剤とし
ては、例えば、水素化ほう素ナトリウム、水素化シアノ
ほう素ナトリウム、ピリジンボラン複合体、ジメチルア
ミンボラン複合体、又はトリメチルアミンボラン複合体
などが使用しうる。
【００２４】以上の本発明を使用することにより、安定
性の高いアフィニティ担体が得られる。得られたアフィ
ニティ担体の用途としては、グルコアミラーゼの高純度
精製等がある。
性の高いアフィニティ担体が得られる。得られたアフィ
ニティ担体の用途としては、グルコアミラーゼの高純度
精製等がある。
【００２５】
【実施例】次に、本発明の実施例を具体的に示すが、本
発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００２６】実施例１ ＧＡＩ−１生産菌ストレプトミセス カスタネオグロビ
スポルス ＨＵＴ６２０２株の斜面培養物から一白金耳
量をあらかじめ１２０℃、２０分間滅菌した培地（５０
０ｍｌ容坂口フラスコに１００ｍｌずつ分注した１％可
溶性でんぷん、１％グルコース、０．５％肉エキス、
０．５％ペプトン及び０．３％食塩を含むｐＨ７．０の
培地）に接種した。２８℃毎分１３０往復で振とう培養
し、経時的にＧＡＩ−１生産量を検討した。その結果、
グルコアミラーゼ阻害活性より定量したＧＡＩ−１の濃
度は、培養３日後に７０ｍｇ／リットルに達し、１２日
後まで安定に維持された。
スポルス ＨＵＴ６２０２株の斜面培養物から一白金耳
量をあらかじめ１２０℃、２０分間滅菌した培地（５０
０ｍｌ容坂口フラスコに１００ｍｌずつ分注した１％可
溶性でんぷん、１％グルコース、０．５％肉エキス、
０．５％ペプトン及び０．３％食塩を含むｐＨ７．０の
培地）に接種した。２８℃毎分１３０往復で振とう培養
し、経時的にＧＡＩ−１生産量を検討した。その結果、
グルコアミラーゼ阻害活性より定量したＧＡＩ−１の濃
度は、培養３日後に７０ｍｇ／リットルに達し、１２日
後まで安定に維持された。
【００２７】実施例２ 実施例１に示した培養条件で、ＧＡＩ−１生産菌ストレ
プトミセス カスタネオグロビスポルス ＨＵＴ６２０
２株を７２時間培養した種培養液３リットルを実施例１
と同様の培地２７リットルを含む５０リットル容培養槽
に接種し、２８℃で毎分１５リットルの無菌空気を通気
し、毎分３００回転で７２時間かくはん培養した。得ら
れた培養液３０リットルをケイ藻土をろ過助剤に用いて
ろ過し、水洗し、３０リットルのろ液を得た。このろ液
のグルコアミラーゼ阻害活性から定量したＧＡＩ−１濃
度は７６μｇ／ｍｌであった。得られた培養ろ液３０リ
ットルに、活性炭（武田薬品製、白鷺印）９００ｇを加
えてかくはんし、ＧＡＩ−１を吸着させた。ろ過して活
性炭を集め、水１２リットルで洗浄後、この活性炭を１
０リットルの３０％アセトン水中で３０分間かくはん
し、ＧＡＩ−１を溶出した。これをろ過し、ろ液を減圧
下に濃縮して、褐色シラップを得た。得られた粗ＧＡＩ
−１を５００ｍｌの脱イオン水に溶解し、ダウエックス
５０Ｗ×４のカラムに吸着させ、脱イオン水で洗浄後、
０．０５Ｍピリジン−酢酸緩衝液（ｐＨ６．５）８リッ
トルで溶出した。ＧＡＩ−１を含む溶出液を減圧下に、
濃縮乾固して、３．１４ｇのシラップを得た。この粗Ｇ
ＡＩ−１を脱イオン水に溶かし、シリカゲルカラム（１
８×１０００ｍｍ）にかけた。ｎ−プロパノール−酢酸
エチル−水（容量比６：１：１）混液で展開し、次に、
ｎ−プロパノール−酢酸エチル−水（容量比６：１：
３）混液で溶出し、ＧＡＩ−１を含む活性画分を集め
て、減圧下に濃縮乾固し、５０６ｍｇの粉末を得た。得
られた粗ＧＡＩ−１を水に溶解し、１０回に分けて、ア
サヒパックＧＳ−２２０（７．６×５００ｍｍ）にか
け、水で展開して、ゲルろ過クロマトグラフィーを行っ
た。活性画分を集め、減圧下に濃縮して２１０ｍｇの粉
末を得た。このものを次に、バイオゲルＰ−４のカラム
（２０×１０００ｍｍ、２本直列）にかけ、ゲルろ過ク
ロマトグラフィーを行った。活性画分を集め、減圧下に
濃縮して５６ｍｇの粉末を得た。次に高速液体クロマト
グラフィー（ＴＳＫｇｅｌ ＮＨ２−６０）を行い、Ｇ
ＡＩ−１の粉末２１ｍｇを得た。こうして得られたＧＡ
Ｉ−１のグルコアミラーゼ阻害活性（ＩＣ５０）は３２
μｇ／ｍｌであった。
プトミセス カスタネオグロビスポルス ＨＵＴ６２０
２株を７２時間培養した種培養液３リットルを実施例１
と同様の培地２７リットルを含む５０リットル容培養槽
に接種し、２８℃で毎分１５リットルの無菌空気を通気
し、毎分３００回転で７２時間かくはん培養した。得ら
れた培養液３０リットルをケイ藻土をろ過助剤に用いて
ろ過し、水洗し、３０リットルのろ液を得た。このろ液
のグルコアミラーゼ阻害活性から定量したＧＡＩ−１濃
度は７６μｇ／ｍｌであった。得られた培養ろ液３０リ
ットルに、活性炭（武田薬品製、白鷺印）９００ｇを加
えてかくはんし、ＧＡＩ−１を吸着させた。ろ過して活
性炭を集め、水１２リットルで洗浄後、この活性炭を１
０リットルの３０％アセトン水中で３０分間かくはん
し、ＧＡＩ−１を溶出した。これをろ過し、ろ液を減圧
下に濃縮して、褐色シラップを得た。得られた粗ＧＡＩ
−１を５００ｍｌの脱イオン水に溶解し、ダウエックス
５０Ｗ×４のカラムに吸着させ、脱イオン水で洗浄後、
０．０５Ｍピリジン−酢酸緩衝液（ｐＨ６．５）８リッ
トルで溶出した。ＧＡＩ−１を含む溶出液を減圧下に、
濃縮乾固して、３．１４ｇのシラップを得た。この粗Ｇ
ＡＩ−１を脱イオン水に溶かし、シリカゲルカラム（１
８×１０００ｍｍ）にかけた。ｎ−プロパノール−酢酸
エチル−水（容量比６：１：１）混液で展開し、次に、
ｎ−プロパノール−酢酸エチル−水（容量比６：１：
３）混液で溶出し、ＧＡＩ−１を含む活性画分を集め
て、減圧下に濃縮乾固し、５０６ｍｇの粉末を得た。得
られた粗ＧＡＩ−１を水に溶解し、１０回に分けて、ア
サヒパックＧＳ−２２０（７．６×５００ｍｍ）にか
け、水で展開して、ゲルろ過クロマトグラフィーを行っ
た。活性画分を集め、減圧下に濃縮して２１０ｍｇの粉
末を得た。このものを次に、バイオゲルＰ−４のカラム
（２０×１０００ｍｍ、２本直列）にかけ、ゲルろ過ク
ロマトグラフィーを行った。活性画分を集め、減圧下に
濃縮して５６ｍｇの粉末を得た。次に高速液体クロマト
グラフィー（ＴＳＫｇｅｌ ＮＨ２−６０）を行い、Ｇ
ＡＩ−１の粉末２１ｍｇを得た。こうして得られたＧＡ
Ｉ−１のグルコアミラーゼ阻害活性（ＩＣ５０）は３２
μｇ／ｍｌであった。
【００２８】実施例３ ＧＡＩ−１が７０重量％、式（化２）で表される化合物
におけるｎ＝１のものが１０重量％、及びｎ＝２のもの
が２０重量％なる組成の新規ＧＡＩ混合物６４．５ｍｇ
とアミノトヨパール（東ソー社製）９８０ｍｇ（湿重
量）との混合物を０．２Ｍ Ｋ2 ＨＰＯ4 （ｐＨ９．
０）１ｍｌ中に懸濁し、８０℃、４時間加熱して、シッ
フ塩基を形成させた。次に、還元剤としてジメチルアミ
ンボラン複合体６０ｍｇを加え、６０℃，２４時間加熱
して還元アミノ化反応を行った。反応物は小カラムに注
入し、水１００ｍｌで洗浄した。得られたアフィニティ
担体は安定性の高いものであった。
におけるｎ＝１のものが１０重量％、及びｎ＝２のもの
が２０重量％なる組成の新規ＧＡＩ混合物６４．５ｍｇ
とアミノトヨパール（東ソー社製）９８０ｍｇ（湿重
量）との混合物を０．２Ｍ Ｋ2 ＨＰＯ4 （ｐＨ９．
０）１ｍｌ中に懸濁し、８０℃、４時間加熱して、シッ
フ塩基を形成させた。次に、還元剤としてジメチルアミ
ンボラン複合体６０ｍｇを加え、６０℃，２４時間加熱
して還元アミノ化反応を行った。反応物は小カラムに注
入し、水１００ｍｌで洗浄した。得られたアフィニティ
担体は安定性の高いものであった。
【００２９】
【発明の効果】本発明により、グルコアミラーゼに対す
る親和性が強すぎず、かつ公知物質とは化学構造におい
て、明らかに相違し、しかも有用な糖質分解酵素阻害作
用を有する式（化１）で表されるアミノサイクリトール
誘導体とその実用的な製造法及び式（化１）で表される
化合物を含有するＧＡＩを不溶性担体に固定化して得た
安定性の高いアフィニティ担体が提供される。
る親和性が強すぎず、かつ公知物質とは化学構造におい
て、明らかに相違し、しかも有用な糖質分解酵素阻害作
用を有する式（化１）で表されるアミノサイクリトール
誘導体とその実用的な製造法及び式（化１）で表される
化合物を含有するＧＡＩを不溶性担体に固定化して得た
安定性の高いアフィニティ担体が提供される。
【図１】臭化カリウム錠で測定したＧＡＩ−１の赤外線
吸収スペクトルを示す図である。
吸収スペクトルを示す図である。
【図２】重水中で測定したＧＡＩ−１のプロトン核磁気
共鳴スペクトルを示す図である。
共鳴スペクトルを示す図である。
【図３】ＧＡＩ−１のＦＡＢマススペクトルを示す図で
ある。
ある。
【図４】メチル化ＧＡＩ−１のＦＡＢマススペクトルを
示す図である。
示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/70 ＡＥＤ Ｃ１２Ｎ 9/99 (Ｃ１２Ｐ 19/26 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 高山 卓美 滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号 寳酒造 株式会社中央研究所内 (72)発明者 小埜 和久 広島県広島市高屋高美ケ丘４丁目14番９号 (72)発明者 岡 智 広島県広島市西区己斐上３丁目５番40号
Claims (3)
- 【請求項１】 下記式（化１）： 【化１】 で表される新規糖質分解酵素インヒビター又はその塩。
- 【請求項２】 ストレプトミセス属に属する菌を培養し
て、請求項１記載の新規糖質分解酵素インヒビター又は
その塩を採取することを特徴とする新規糖質分解酵素イ
ンヒビター又はその塩の製造方法。 - 【請求項３】 式（化１）で表される化合物を含有する
新規糖質分解酵素インヒビター又はその塩を、不溶性担
体に固定化して得たアフィニティ担体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4251946A JPH0673083A (ja) | 1992-08-28 | 1992-08-28 | 新規糖質分解酵素インヒビター |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4251946A JPH0673083A (ja) | 1992-08-28 | 1992-08-28 | 新規糖質分解酵素インヒビター |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0673083A true JPH0673083A (ja) | 1994-03-15 |
Family
ID=17230336
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4251946A Pending JPH0673083A (ja) | 1992-08-28 | 1992-08-28 | 新規糖質分解酵素インヒビター |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0673083A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0452896B1 (en) * | 1990-04-17 | 1994-02-16 | Sanden Corporation | Lubrication for scroll compressor |
-
1992
- 1992-08-28 JP JP4251946A patent/JPH0673083A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0452896B1 (en) * | 1990-04-17 | 1994-02-16 | Sanden Corporation | Lubrication for scroll compressor |
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