JPH0692302B2 - 神経病治療剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロプテリ
ンを有効成分として含有してなる、テトラヒドロビオプ
テリン（以下、BH₄という）欠乏に起因する神経病の治
療剤に関する。

〔従来の技術および発明が解決しようとする問題点〕

本明細書でいうBH₄欠乏に起因する神経病の例として
は、具体的にはパーキンソン病、フェニルケトン尿症、
内因性うつ病、小児自閉症があげられる。パーキンソン
病は運動障害を主症状とする老年に多発する神経病であ
るが、その原因は脳の黒質−線条体系のドーパミン作動
性神経細胞の変性減少に伴う脳線条体のドーパミン欠乏
症であるといわれている。ドーパミンの欠乏は、その前
駆体であるＬ−ドパを生合成するためのチロシン水酸化
酵素の活性の低下、およびその補酵素であるテトラヒド
ロビオプテリンの減少に起因すると考えられている。ま
たフェニルケトン尿症は、肝臓および脳内神経細胞中で
BH₄の生合成ができず強度の欠乏状態になることに由来
している。さらに代謝異常性小児自閉症にもBH₄の治療
効果が期待されている。

パーキンソン病患者の治療には上記の知見をもとにＬ−
ドーパの投与が過去10数年にわたって行なわれてきた
が、最近ではBH₄の投与で治療効果のあることが知られ
ている（特開昭59-25323号公報）。さらに同様なチロシ
ン水酸化酵素の補酵素活性を有するプテリン誘導体の開
発が進められており、たとえば１′,2′−ジアセチル−
テトラヒドロビオプテリン、６−メチル−5,6,7,8−テ
トラヒドロプテリンまたはＬ−セプアプテリンなどに治
療効果のあることが知られている（同公報）。これらの
ビオプテリン補酵素関連化合物には天然の補酵素である
BH₄と同程度の効果は期待できる。しかしながら、これ
を凌駕する効果を期待できる化合物は知られていなかっ
た。

フェルケトン尿症については肝臓中でのフェニルアラニ
ン水酸化酵素が作用する程度のBH₄を投与する低投与治
療と、多量に投与して脳中に移行させ神経細胞中の欠乏
状態を回復する大量投与法が行なわれてきた。しかしな
がら、BH₄が血液脳関門を通過しにくいため充分な効果
をあげるに到っていない。

このようにBH₄欠乏に起因する神経病の治療のためフェ
ニルアラニン水酸化酵素、チロシン水酸化酵素あるいは
トリプトファン水酸化酵素の補酵素活性を有し、血液脳
関門を通過しやすい治療剤の出現が持たれていた。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、BH₄が血液脳関門を通過し難いことに
よって脳内BH₄欠乏に起因する神経病を治療する際に脳
内での濃度を高めるためBH₄を大量に投与する必要があ
ったという問題点を解決し、血液脳関門を通過しやす
く、少量の投与で効果のある治療剤を提供することにあ
る。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明の式： であらわされる６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロプ
テリン（以下、6HMPH₄という）は、同じくBH₄を補酵素
とするトリプトファン水酸化酵素の補酵素活性を示すこ
とが知られている（カトーら；ビオシミカ エ ビオフ
ィジカアクタ（Biochimica et Biophysica Acta）、61
1、241〜250（1980）、246頁）。

本発明者らは、6HMPH₄がBH₄と同様にチロシン水酸化酵
素およびフェニルアラニン水酸化酵素の補酵素活性を有
し、しかも血液脳関門を通過しやすい点でBH₄よりはる
かにすぐれていることを見出し、本発明を完成するに至
った。

すなわち本発明は、6HMPH₄を有効成分として含有してな
る、パーキンソン病やフェニルケトン尿症などのBH₄欠
乏に起因する神経病の治療剤に関する。

〔作用および実施例〕

本発明の治療剤の有効成分である6HMPH₄は６位の炭素原
子に関して立体異性体が存在するが、本発明の治療剤に
おいて有効なのは（6R）体である。しかしながら、（6
R）体が含まれておれば（6S）体が共存してもよい。

本発明の治療剤の投与方法としては経口投与でも注射で
もよい。注射によるばあい、静脈注射、筋肉注射などの
従来の注射方法であってよい。また経口投与のばあいは
錠剤、丸剤、カプセル剤、粉剤、液剤、懸濁剤などの慣
用的な剤形で投与されてよい。本発明の治療剤は、医薬
組成物として有効成分のほかに慣用される医薬用担体ま
たは賦形剤を含み、さらに他の併用しうる医薬も含むこ
とができる。

経口剤は、たとえば6HMPH₄をアスコルビン酸／6HMPH₄＝
1/1〜10/1の比率でアスコルビン酸とよく配合し、所定
量を粉末状でカプセル化するか、または打錠して錠剤化
することによって調製することができる。また注射剤
は、たとえば6HMPH₄粉末の所定量を殺菌処理済のリンゲ
ル水中に溶解することによって調製することができる。

本発明の治療剤の有効投与量は、投与時期や症状などに
応じて適宜定めることができるが、通常0.1〜500mg/kg
体重／日、好ましくは１〜100mg/kg体重／日である。

なお、本発明の治療剤の有効成分である6HMPH₄は、たと
えばマックス・ビスコンチーニら〔ヘルベチカ シミカ
アクタ（Helvetica CHimica Acta）、56,1710〜1715
（1973）〕の方法により合成することができる。

（１）6HMPH₄のフェニルアラニン−４−ヒドロキシラー
ゼの補酵素活性の測定 フェニルアラニン−４−ヒドロキシラーゼは、ラット肝
臓より、アール・シマン（R.SHIMAN）ら〔ジャーナル
オブ バイオロジカル ケミストリー（J.B.C.）254
巻、11300〜11306頁（1979）、255巻、4793〜4800頁（1
980）〕の方法にしたがって精製した酵素を使用した。

つぎの反応液（全量40μｌ）： フェニルアラニン−４−ヒドロキシラーゼ 6.7ユニット ジヒドロプテリンリダクターゼ 7.8ユニット カタラーゼ 500ユニット KH₂PO₄緩衝液（pH6.8） 5.6μＭ NADH（還元型ニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチ
ド） 0.5M ４−トリチウム−フェニルアラニン 7.8mM （約700000dpm） 補酵素活性検体 0.1〜1.0mM を37℃で45分間インキュベートしたのち、PH5.5の酢酸
ナトリウム溶液50μｌを加えて反応を終了させた。反応
容器を氷水浴中で０℃に冷却し、Ｎ−ヨードサクシニミ
ドを50mg/mlの濃度で含むジメチルスルホキシド25μｌ
を加え、新しく生成したチロシンの芳香環の３および５
位をヨード化した。これによりトリチウムは³HOHとして
遊離した。５分後、30％のトリクロロ酢酸50μｌを加え
て反応を終了させた。トリチウム置換水は、つぎの３層
よりなるイオン交換カラムから溶出することにより他の
反応系構成物から分離させた。カラムは、頂部より底部
に向って レワチット（Lewatit）SP 1080 （60〜150メッシュ、H⁺型、20×5mm） 活性炭 １×5mm レワチット（Lewatit）MP 5080 （60〜160メッシュ、アセテート型、５×5mm） なる３層より構成されていた。トリチウム置換水は、液
体シンチレーションカウンターで定量した。

6HMPH₄とBH₄について第１図に示すようにラインウィー
バー・バークプロットしてVmaxとKm値を求めた。結果を
第１表に示す。

第１表においてVmaxは、反応時間45分中に反応液40μｌ
中に生成したチロシンの濃度をあらわす。

（２）6HMPH₄のチロシン−３−ヒドロキシラーゼの補酵
素活性の測定 酵素源としてラットの線条体を使用した。凍結した線条
体組織を、0.1％トリトンX-100 を含む0.05M KH₂PO₄
緩衝液（pH6.64）の５倍量中でホモジナイズした。ホモ
ジネートを４℃において40,000×ｇで15分間遠心分離に
かけ、上清液を集めた。酵素活性測定はつぎの組成から
なる反応液100μｌを、7mlのシンチレーションバイアル
中において37℃で15分間インキュベートした。

3,5−ジトリチウムチロシン （100M） （約600,000dpm） 硫酸第１鉄アンモニウム 10μＭ カタラーゼ 7500ユニット アスコルビン酸 1.0mM KH₂PO₄緩衝液（pH6.64） 50mM 補酵素^＊活性検体酵素 1.0〜10mM ＊BH₄、6HMPH₄いづれも（6R,S）体を使用した。

3.0M炭酸ソーダ（pH11.69）50μｌを加えて反応を終了
させ、さらにトルエン5mlを加えて10秒間はげしく渦巻
かせた。15分間静置して有機溶媒層を分離し、バイアル
のトリチウム含量をシンチレーションカウンターで測定
した。

6HMPH₄とBH₄について第１図に示すようにラインウィー
バー・バークプロットをしてVmaxおよびKm値を求めた。
結果を第２表に示す。

第２表においてVmaxは、反応時間15分中に反応液100μ
ｌ中に生成したドーパの濃度をあらわす。

（３）ラットの脳への6HMPH₄の移行試験 ラットの腹腔に6HMPH₄およびBH₄をそれぞれ50mg/kg体重
注射し、２時間後にラットを屠殺した。脳の線条体、海
馬、小脳をとり出し、それらの組織における6HMPH₄およ
びBH₄の含有量をつぎの方法によりしらべた。

100ml中にジチオエリスリトール5mgを含む0.1N HClを用
い、線状体は200μｌ中において、小脳は1200μｌ中に
おいて、海馬は400μｌ中においてホモジナイズした。
ホモジネートはドライアイス中で凍結保存した。必要に
応じて解凍し、39000×ｇで20分間遠心分離し、上清をH
PLCで分析した。なおホモジネートの収率は内部標準と
してネオプテリンを加えて補正した。

HPLC:S5 ODS−カラム 溶出液 H₂O 2l中に Na₂HPO₄・2H₂O 2.35g クエン酸 5.6g オクタンスルホン酸 650mg EDTA 45mg ジチオエリスリトール 50mg ２−プロパノール 140ml を含む 溶出速度 1ml/分 6HMPH₄およびBH₄の脳内組織への移行性を比較した結果
を第３表に示す。

第３表から、いづれの組織に対する移行性も6HMPH₄がBH
₄に比べてすぐれていることがわかる。とくい6HMPH₄はB
H₄に比べて線条体では３倍、海馬および小脳では６〜７
倍の濃度に達していることがわかる。

〔発明の効果〕

本発明の治療剤は、その有効成分である6HMPH₄が血液脳
関門を通過しやすいためBH₄のように大量に投与する必
要がなく、パーキンソン病、フェニルケトン尿症などの
脳内BH₄欠乏に起因する神経病の治療に有効に用いるこ
とができる。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は、（１）6HMPH₄のフェニルアラニ
ン−４−ヒドロキシラーゼの補酵素活性の測定、および
（２）6HMPH₄のチロシン−３−ヒドロキシラーゼの補酵
素活性の測定における、6HMPH₄とBH₄についてのライン
ウィーバー・バークプロットをそれぞれあらわす。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロプテ
   リンを有効成分として含有してなる、テトラヒドロビオ
   プテリン欠乏に起因する神経病の治療剤。
2. 【請求項２】該神経病がパーキンソン病である特許請求
   の範囲第１項記載の治療剤。
3. 【請求項３】該神経病がフェニルケトン尿症である特許
   請求の範囲第１項記載の治療剤。
4. 【請求項４】該神経病が内因性うつ病である特許請求の
   範囲第１項記載の治療剤。
5. 【請求項５】該神経病が小児自閉症である特許請求の範
   囲第１項記載の治療剤。