JPH07101973A - Ｗｋ−３４１９ａ物質およびｗｋ−３４１９ｂ物質並びにその製造法 - Google Patents
Ｗｋ−３４１９ａ物質およびｗｋ−３４１９ｂ物質並びにその製造法Info
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- JPH07101973A JPH07101973A JP5248035A JP24803593A JPH07101973A JP H07101973 A JPH07101973 A JP H07101973A JP 5248035 A JP5248035 A JP 5248035A JP 24803593 A JP24803593 A JP 24803593A JP H07101973 A JPH07101973 A JP H07101973A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 低分子のｇｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合
阻害物質およびそのｇｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合
阻害物質を精製する方法を得る。 【構成】 ｇｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合阻害物質
ＷＫ−３４１９、およびストレプトミセス属に属するｇ
ｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合阻害物質ＷＫ−３４１
９生産菌を培地に培養し、その培養物からｇｐ１２０と
ＣＤ４蛋白質との結合阻害物質ＷＫ−３４１９を採取す
ることにより、ｇｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合阻害
物質ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂを物
質を採取するものである。 【効果】 ｇｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合阻害物質
ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質はｇ
ｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合阻害を有する低分子物
質であり、ｇｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合によって
生じるＡＩＤＳに対して有効な治療効果が期待される。
阻害物質およびそのｇｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合
阻害物質を精製する方法を得る。 【構成】 ｇｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合阻害物質
ＷＫ−３４１９、およびストレプトミセス属に属するｇ
ｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合阻害物質ＷＫ−３４１
９生産菌を培地に培養し、その培養物からｇｐ１２０と
ＣＤ４蛋白質との結合阻害物質ＷＫ−３４１９を採取す
ることにより、ｇｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合阻害
物質ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂを物
質を採取するものである。 【効果】 ｇｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合阻害物質
ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質はｇ
ｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合阻害を有する低分子物
質であり、ｇｐ１２０とＣＤ４蛋白質との結合によって
生じるＡＩＤＳに対して有効な治療効果が期待される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒトの免疫機構に作用
して免疫機構そのものを破壊する疾病に対する治療薬お
よび予防薬として有用なｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻
害物質ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物
質並びにそれらの製造法、並びにこれら物質を生産する
能力を有する実質的に純粋な微生物に関する。
して免疫機構そのものを破壊する疾病に対する治療薬お
よび予防薬として有用なｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻
害物質ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物
質並びにそれらの製造法、並びにこれら物質を生産する
能力を有する実質的に純粋な微生物に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＡＩＤＳは、ヒトの免疫機構に作用して
免疫機構そのものを破壊する疾病であり、全世界的に重
要な疾患の一つである。ＡＩＤＳの原因ウイルスがＨＩ
Ｖと確認されて以来（Ｇａｌｌｏ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａ
ｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ１９８４；２２４：５００−５０
３、Ｂａｒｒｅ−Ｓｉｎｏｕｓｓｉ，Ｆ．，ｅｔ ａ
ｌ．１９８３；２２０：８６８−８７１）、色々なタイ
プの抗ＨＩＶ薬の開発が行われている。しかし、それら
はＡＩＤＳを完全に治療できる抗ＡＩＤＳ薬ではなかっ
た。
免疫機構そのものを破壊する疾病であり、全世界的に重
要な疾患の一つである。ＡＩＤＳの原因ウイルスがＨＩ
Ｖと確認されて以来（Ｇａｌｌｏ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａ
ｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ１９８４；２２４：５００−５０
３、Ｂａｒｒｅ−Ｓｉｎｏｕｓｓｉ，Ｆ．，ｅｔ ａ
ｌ．１９８３；２２０：８６８−８７１）、色々なタイ
プの抗ＨＩＶ薬の開発が行われている。しかし、それら
はＡＩＤＳを完全に治療できる抗ＡＩＤＳ薬ではなかっ
た。
【０００３】現在までの研究の結果、ＨＩＶの抗原糖蛋
白質であるｇｐ１２０、宿主であるヒトの免疫担当細胞
であるＣＤ４＋細胞の膜表面上に存在する受容体である
ＣＤ４蛋白質（以下、ＣＤ４と称する）は、ＨＩＶが宿
主細胞に感染する際に最も重要な働きをしていることが
判明した。さらに、近年、ＨＩＶは免疫担当細胞である
ＣＤ４＋細胞だけではなく、マクロフアージや脳に存在
しているグリア細胞などにも感染することが報告されて
きているが、そのような細胞の膜表面上にもＣＤ４が存
在し、ＨＩＶとの結合に関与していることが示唆された
（Ｊｏｒｄａｎ，Ｃ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．：Ｊ．Ｖｉｒ
ｏｌ．１９９１；６５：７３６−７４２．Ｏｌｆｓｓｏ
ｎ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｃｑ．Ｉｍｍｕｎｕｅ．
Ｄｅｆｉｃ．Ｓｙｎｄ．１９９１；４：１５４−１６
４）。
白質であるｇｐ１２０、宿主であるヒトの免疫担当細胞
であるＣＤ４＋細胞の膜表面上に存在する受容体である
ＣＤ４蛋白質（以下、ＣＤ４と称する）は、ＨＩＶが宿
主細胞に感染する際に最も重要な働きをしていることが
判明した。さらに、近年、ＨＩＶは免疫担当細胞である
ＣＤ４＋細胞だけではなく、マクロフアージや脳に存在
しているグリア細胞などにも感染することが報告されて
きているが、そのような細胞の膜表面上にもＣＤ４が存
在し、ＨＩＶとの結合に関与していることが示唆された
（Ｊｏｒｄａｎ，Ｃ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．：Ｊ．Ｖｉｒ
ｏｌ．１９９１；６５：７３６−７４２．Ｏｌｆｓｓｏ
ｎ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｃｑ．Ｉｍｍｕｎｕｅ．
Ｄｅｆｉｃ．Ｓｙｎｄ．１９９１；４：１５４−１６
４）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】このように、ＨＩＶの
ヒトへの感染にはｇｐ１２０とＣＤ４が非常に重要な働
きをしていることが判明して以来、ｇｐ１２０とＣＤ４
との結合を阻害する試みが幾つか試行された。例えば、
可溶性のＣＤ４を遺伝子工学的に作成し、それをヒトの
体内に投与するような試みなども行われた。（Ｓｍｉｔ
ｈ．Ｄ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．：Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８
７；２３８：１７０４−１７０７）。しかしながら、こ
のような方法でｇｐ１２０とＣＤ４との結合を完全に阻
害することはできなかった。それ故、直接ｇｐ１２０と
ＣＤ４との結合を完全に阻害する化合物の出現が要望さ
れていた。
ヒトへの感染にはｇｐ１２０とＣＤ４が非常に重要な働
きをしていることが判明して以来、ｇｐ１２０とＣＤ４
との結合を阻害する試みが幾つか試行された。例えば、
可溶性のＣＤ４を遺伝子工学的に作成し、それをヒトの
体内に投与するような試みなども行われた。（Ｓｍｉｔ
ｈ．Ｄ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．：Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８
７；２３８：１７０４−１７０７）。しかしながら、こ
のような方法でｇｐ１２０とＣＤ４との結合を完全に阻
害することはできなかった。それ故、直接ｇｐ１２０と
ＣＤ４との結合を完全に阻害する化合物の出現が要望さ
れていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らはｇ
ｐ１２０とＣＤ４との結合阻害物質を微生物が生産する
代謝産物の中から検索した結果、土壌から分離したスト
レプトミセス属に属するＷＫ−３４１９株の培養物がｇ
ｐ１２０とＣＤ４との結合阻害活性を有することを見出
し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
ｐ１２０とＣＤ４との結合阻害物質を微生物が生産する
代謝産物の中から検索した結果、土壌から分離したスト
レプトミセス属に属するＷＫ−３４１９株の培養物がｇ
ｐ１２０とＣＤ４との結合阻害活性を有することを見出
し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
【０００６】次いで、該培養物からｇｐ１２０とＣＤ４
との結合阻害物質を分離、精製した結果、後記の理化学
的性質を有する各物質を得た。これらの物質は従来全く
知られていないことから、本物質をＷＫ−３４１９Ａ物
質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質と命名した。本発明はか
かる知見に基づいて完成されたものであって、後記の理
化学的性状を有するＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−
３４１９Ｂ物質を提供するものである。
との結合阻害物質を分離、精製した結果、後記の理化学
的性質を有する各物質を得た。これらの物質は従来全く
知られていないことから、本物質をＷＫ−３４１９Ａ物
質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質と命名した。本発明はか
かる知見に基づいて完成されたものであって、後記の理
化学的性状を有するＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−
３４１９Ｂ物質を提供するものである。
【０００７】更に本発明は、ストレプトミセス属に属
し、ｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻害物質ＷＫ−３４１
９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を生産する能力を
有する微生物を培地中で培養して培養物中にＷＫ−３４
１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を蓄積せしめ、
該培養物からＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１
９Ｂ物質を採取することを特徴とするｇｐ１２０とＣＤ
４との結合阻害物質ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−
３４１９Ｂ物質の製造法を提供するものである。
し、ｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻害物質ＷＫ−３４１
９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を生産する能力を
有する微生物を培地中で培養して培養物中にＷＫ−３４
１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を蓄積せしめ、
該培養物からＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１
９Ｂ物質を採取することを特徴とするｇｐ１２０とＣＤ
４との結合阻害物質ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−
３４１９Ｂ物質の製造法を提供するものである。
【０００８】更にまた、本発明は、ストレプトミセス属
に属し、ｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻害物質ＷＫ−３
４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を生産する能
力を有する実質的に純粋な微生物を提供するものであ
る。
に属し、ｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻害物質ＷＫ−３
４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を生産する能
力を有する実質的に純粋な微生物を提供するものであ
る。
【０００９】本発明のＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ
−３４１９Ｂ物質の理化学的性状を述べると以下の通り
である。 ＷＫ−３４１９Ａ物質 （１）性状 黄色粉末 （２）比旋光度 ＋１０℃（ｃ＝０．１，ｐｙｒｉｄｉｎｅ） （３）分子量 １３２５（質量分析による） （４）分子式 Ｃ61Ｈ45Ｎ7 Ｏ15Ｃｌ6 （５）紫外線吸収スペクトル（ＣＨ3 ＯＨ中） 図１に示す通り、少なくとも２１３、２３９（肩）、２
８３、２８８ｎｍ付近に特徴的な吸収を有する （６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠） 図２に示す通り、少なくとも３３９０、３２８０、１６
５０、１５００、１４９０、１４１０、１２１０ｃｍ-1
付近に特徴的な吸収を有する （７）溶剤に対する溶解性 メタノール、エタノール、ジメチルスルフオキシド、ア
ルカリ水に可溶性、ヘキサン、ジエチルエーテル、アセ
トン、酢酸エチルエステル、クロロホルム、ベンゼンに
不溶性
−３４１９Ｂ物質の理化学的性状を述べると以下の通り
である。 ＷＫ−３４１９Ａ物質 （１）性状 黄色粉末 （２）比旋光度 ＋１０℃（ｃ＝０．１，ｐｙｒｉｄｉｎｅ） （３）分子量 １３２５（質量分析による） （４）分子式 Ｃ61Ｈ45Ｎ7 Ｏ15Ｃｌ6 （５）紫外線吸収スペクトル（ＣＨ3 ＯＨ中） 図１に示す通り、少なくとも２１３、２３９（肩）、２
８３、２８８ｎｍ付近に特徴的な吸収を有する （６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠） 図２に示す通り、少なくとも３３９０、３２８０、１６
５０、１５００、１４９０、１４１０、１２１０ｃｍ-1
付近に特徴的な吸収を有する （７）溶剤に対する溶解性 メタノール、エタノール、ジメチルスルフオキシド、ア
ルカリ水に可溶性、ヘキサン、ジエチルエーテル、アセ
トン、酢酸エチルエステル、クロロホルム、ベンゼンに
不溶性
【００１０】ＷＫ−３４１９Ｂ物質 （１）性状 黄色粉末 （２）比旋光度 ＋１２℃（ｃ＝０．１，ｐｙｒｉｄｉｎｅ） （３）分子量 １３２５（質量分析による） （４）分子式 Ｃ61Ｈ45Ｎ7 Ｏ15Ｃｌ6 （５）紫外線吸収スペクトル（ＣＨ3 ＯＨ中） 図３に示す通り、少なくとも２１４、２３９（肩）、２
８５（肩）、２９１、３０４ｎｍ付近に特徴的な吸収を
有する （６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠） 図４に示す通り、少なくとも３３８５、１６４０、１５
００、１４１０、１２１５ｃｍ-1付近に特徴的な吸収を
有する （７）溶剤に対する溶解性 メタノール、エタノール、ジメチルスルフオキシド、ア
ルカリ水に可溶性、ヘキサン、ジエチルエーテル、アセ
トン、酢酸エチルエステル、クロロホルム、ベンゼンの
各試薬に不溶性
８５（肩）、２９１、３０４ｎｍ付近に特徴的な吸収を
有する （６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠） 図４に示す通り、少なくとも３３８５、１６４０、１５
００、１４１０、１２１５ｃｍ-1付近に特徴的な吸収を
有する （７）溶剤に対する溶解性 メタノール、エタノール、ジメチルスルフオキシド、ア
ルカリ水に可溶性、ヘキサン、ジエチルエーテル、アセ
トン、酢酸エチルエステル、クロロホルム、ベンゼンの
各試薬に不溶性
【００１１】上記の物質を生産する能力を有する微生物
（以下、ＷＫ−３４１９生産菌と称する）はストレプト
ミセス属に属するが、本発明においては該物質ＷＫ−３
４１９ＡおよびＷＫ−３４１９Ｂ生産能を有するもので
あればよく、特に制限されることはない。例えば、本発
明者らが分離したストレプトミセス エスピーＷＫ−３
４１９菌株は本発明の最も有効に使用され得る菌株の一
例であつて、本菌株の菌学的性状を示すと以下の通りで
ある。
（以下、ＷＫ−３４１９生産菌と称する）はストレプト
ミセス属に属するが、本発明においては該物質ＷＫ−３
４１９ＡおよびＷＫ−３４１９Ｂ生産能を有するもので
あればよく、特に制限されることはない。例えば、本発
明者らが分離したストレプトミセス エスピーＷＫ−３
４１９菌株は本発明の最も有効に使用され得る菌株の一
例であつて、本菌株の菌学的性状を示すと以下の通りで
ある。
【００１２】Ｉ．形態的性質 栄養菌糸は各種寒天培地で良く発達し、分断は観察され
ない。気菌糸はグルコース・アスパラギン寒天培地、ス
ターチ無機塩寒天培地などで豊富に着生し、ブルー系の
色調を呈する。顕微鏡下での観察では気菌糸の先端はら
旋状を呈し、２０個以上の胞子の連鎖が認められる。胞
子の大きさは、１．４×０．９μｍで卵型である。胞子
の表面はとげ状である。菌核、胞子のうおよび遊走子は
見い出されない。
ない。気菌糸はグルコース・アスパラギン寒天培地、ス
ターチ無機塩寒天培地などで豊富に着生し、ブルー系の
色調を呈する。顕微鏡下での観察では気菌糸の先端はら
旋状を呈し、２０個以上の胞子の連鎖が認められる。胞
子の大きさは、１．４×０．９μｍで卵型である。胞子
の表面はとげ状である。菌核、胞子のうおよび遊走子は
見い出されない。
【００１３】II．各種培地上での性状 イー・ビー・シャーリング（Ｅ．Ｂ．Ｓｈｉｒｌｉｎ
ｇ）とデー・ゴツトリーブ（Ｄ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）の
方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ・システ
マテイツク・バクテリオロジー、第１６巻、第３１３
頁、１９６６年）によつて調べた本生産菌の培養性状を
下記の表１および表２に示す。色調は標準色として、カ
ラー・ハーモニー・マニュアル第４版（コンテナー・コ
ーポレーション・オブ・アメリカ・シカゴ、１９５８
年）を用いて決定し、色票名とともに括弧内にそのコー
ドを併せて記した。以下は特記しない限り、各種培地上
で２７℃、１４日間培養した場合の観察の結果である。
ｇ）とデー・ゴツトリーブ（Ｄ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）の
方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ・システ
マテイツク・バクテリオロジー、第１６巻、第３１３
頁、１９６６年）によつて調べた本生産菌の培養性状を
下記の表１および表２に示す。色調は標準色として、カ
ラー・ハーモニー・マニュアル第４版（コンテナー・コ
ーポレーション・オブ・アメリカ・シカゴ、１９５８
年）を用いて決定し、色票名とともに括弧内にそのコー
ドを併せて記した。以下は特記しない限り、各種培地上
で２７℃、１４日間培養した場合の観察の結果である。
【００１４】
【表１】
【００１５】
【表２】
【００１６】III ．生理学的諸性質 （１）メラニン色素の生成 （イ）チロシン寒天 陽性 （ロ）ペプトン・イースト・鉄寒天 擬陽性 （ハ）トリプトン・イースト液 陽性 （２）チロシナーゼ反応 陽性 （３）硫化水素の生成 擬陽性 （４）硝酸塩の還元 陽性 （５）ゼラチンの液化（２１〜２３℃） 陰性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）
【００１７】 （６）スターチの加水分解 陽性 （７）脱脂乳の凝固（３７℃） 陰性 （８）脱脂乳のペプトン化（３７℃） 陽性 （９）生育温度範囲 １２〜３
８℃ （１０）炭素源の利用性（プリーダム・ゴツトリーブ寒
天培地） グルコース、アラビノース、キシロース、ラフイノー
ス、メリビオース、マンニトール、フラクトース、ラム
ノース、イノシトール、シュークロースを利用する。 （１１）セルロースの分解 陰性
８℃ （１０）炭素源の利用性（プリーダム・ゴツトリーブ寒
天培地） グルコース、アラビノース、キシロース、ラフイノー
ス、メリビオース、マンニトール、フラクトース、ラム
ノース、イノシトール、シュークロースを利用する。 （１１）セルロースの分解 陰性
【００１８】IV. 細胞壁組成 細胞壁のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。以上、本
菌の菌学的性状を要約すると次のとおりである。細胞壁
中のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。気菌糸の形態
はらせん状で、長い胞子鎖を形成する。胞子の表面はと
げ状である。各種培地上の諸性質としては、栄養菌糸は
黄色の色調を呈し、気菌糸はブルーあるいはブルーグレ
ー系の色調を呈する。可溶性色素はシュークロース・硝
酸塩寒天、酵母エキス・麦芽エキス寒天等で産生する。
菌の菌学的性状を要約すると次のとおりである。細胞壁
中のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。気菌糸の形態
はらせん状で、長い胞子鎖を形成する。胞子の表面はと
げ状である。各種培地上の諸性質としては、栄養菌糸は
黄色の色調を呈し、気菌糸はブルーあるいはブルーグレ
ー系の色調を呈する。可溶性色素はシュークロース・硝
酸塩寒天、酵母エキス・麦芽エキス寒天等で産生する。
【００１９】これらの結果から、本菌株はストレプトミ
セス属に属する菌種であり、プリドハムとトレスナーの
分類（バージーズ・マニュアル・オブ・デターミネーテ
イブ・バクテリオロジー、第８版、第７４８〜８２９
頁、１９７４年）によるブルーシリーズに属する菌種で
あると考えられる。
セス属に属する菌種であり、プリドハムとトレスナーの
分類（バージーズ・マニュアル・オブ・デターミネーテ
イブ・バクテリオロジー、第８版、第７４８〜８２９
頁、１９７４年）によるブルーシリーズに属する菌種で
あると考えられる。
【００２０】したがって、本菌株をストレプトミセス属
に属する菌株と同定し、ストレプトミセス エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＷＫ−３４１９
と命名した。本菌株は、ストレプトミセス エスピーＷ
Ｋ−３４１９として工業技術院生命工学工業技術研究所
に寄託されている（５生寄分第６２０号、ＦＥＲＭＰ−
１３５８３）。本菌株の寄託日は平成５年４月２日であ
る。
に属する菌株と同定し、ストレプトミセス エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＷＫ−３４１９
と命名した。本菌株は、ストレプトミセス エスピーＷ
Ｋ−３４１９として工業技術院生命工学工業技術研究所
に寄託されている（５生寄分第６２０号、ＦＥＲＭＰ−
１３５８３）。本菌株の寄託日は平成５年４月２日であ
る。
【００２１】以上、ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−
３４１９Ｂ物質について説明したが、菌の一般的性状と
しての菌学上の性状はきわめて変異し易く、一定したも
のではなく、自然的にあるいは通常行われる紫外線照射
または変異誘導体、例えばＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−
Ｎ−ニトロソグアジン、エチルメタンスルホネートなど
を用いる人工的変異手段により変異することは周知の事
実であり、このような人工的変異株は勿論、自然変異株
も含め、ストレプトミセス属に属し、ＷＫ−３４１９Ａ
物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を生産する能力を有す
る菌株はすべて本発明に使用することができる。
３４１９Ｂ物質について説明したが、菌の一般的性状と
しての菌学上の性状はきわめて変異し易く、一定したも
のではなく、自然的にあるいは通常行われる紫外線照射
または変異誘導体、例えばＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−
Ｎ−ニトロソグアジン、エチルメタンスルホネートなど
を用いる人工的変異手段により変異することは周知の事
実であり、このような人工的変異株は勿論、自然変異株
も含め、ストレプトミセス属に属し、ＷＫ−３４１９Ａ
物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を生産する能力を有す
る菌株はすべて本発明に使用することができる。
【００２２】また、細胞融合、遺伝子操作などの細胞工
学的に変異させた菌株も本発明のＷＫ−３４１９Ａ物質
およびＷＫ−３４１９Ｂ物質生産菌として包含される。
本発明において用いられる窒素栄養源としては、例えば
ペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、綿
実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、ＮＺ−アミン、
カゼインの水解物、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウムなど
が使用できる。また、本発明において用いられる炭素源
としては、例えばグリセリン、澱粉、グルコース、ガラ
クトース、マンノース等の炭水化物、あるいは脂肪等が
使用できる。
学的に変異させた菌株も本発明のＷＫ−３４１９Ａ物質
およびＷＫ−３４１９Ｂ物質生産菌として包含される。
本発明において用いられる窒素栄養源としては、例えば
ペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、綿
実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、ＮＺ−アミン、
カゼインの水解物、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウムなど
が使用できる。また、本発明において用いられる炭素源
としては、例えばグリセリン、澱粉、グルコース、ガラ
クトース、マンノース等の炭水化物、あるいは脂肪等が
使用できる。
【００２３】無機物としては、例えば食塩、リン酸塩、
炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、さらには微量の重
金属塩が添加される。その他必要に応じて微量の金属
塩、消泡剤としての動・植・鉱物油等を添加することも
できる。これらのものはＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷ
Ｋ−３４１９Ｂ物質の生産に役立つものであればよく、
公知の放線菌の培養材料はすべて用いることができる。
炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、さらには微量の重
金属塩が添加される。その他必要に応じて微量の金属
塩、消泡剤としての動・植・鉱物油等を添加することも
できる。これらのものはＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷ
Ｋ−３４１９Ｂ物質の生産に役立つものであればよく、
公知の放線菌の培養材料はすべて用いることができる。
【００２４】上記のＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−
３４１９Ｂ物質生産菌の大量培養には液体培養が好まし
く、培養温度は生産菌が発育し、物質ＷＫ−３４１９Ａ
物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を生産できる範囲で適
用できる。培養は以上に述べた条件を使用する物質ＷＫ
−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質生産菌の
性質に応じて適宜選択して行うことができる。
３４１９Ｂ物質生産菌の大量培養には液体培養が好まし
く、培養温度は生産菌が発育し、物質ＷＫ−３４１９Ａ
物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を生産できる範囲で適
用できる。培養は以上に述べた条件を使用する物質ＷＫ
−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質生産菌の
性質に応じて適宜選択して行うことができる。
【００２５】本物質ＷＫ−３４１９ＡおよびＷＫ−３４
１９Ｂは、培養物中、菌体内に主に存在する。菌体より
はアセトン、メタノール、エタノールなどの水混和性の
有機溶媒およびそれらの水混和溶液すなわち、含水アセ
トン、含水メタノール、含水エタノールなどで抽出する
ことができる。上述の抽出方法に加え、微生物生産物質
の精製採取に用いられる公知の方法、例えば吸着クロマ
トグラフイー、分配クロマトグラフイー、イオン交換ク
ロマトグラフイー、ゲル濾過クロマトグラフイー、薄層
クロマトグラフイーよりのかき取り、高速液体クロマト
グラフイー、遠心向流分配クロマトグラフイーなどを適
宜組合せあるいは繰り返すことによって、ＷＫ−３４１
９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を純粋に採取する
ことができる。
１９Ｂは、培養物中、菌体内に主に存在する。菌体より
はアセトン、メタノール、エタノールなどの水混和性の
有機溶媒およびそれらの水混和溶液すなわち、含水アセ
トン、含水メタノール、含水エタノールなどで抽出する
ことができる。上述の抽出方法に加え、微生物生産物質
の精製採取に用いられる公知の方法、例えば吸着クロマ
トグラフイー、分配クロマトグラフイー、イオン交換ク
ロマトグラフイー、ゲル濾過クロマトグラフイー、薄層
クロマトグラフイーよりのかき取り、高速液体クロマト
グラフイー、遠心向流分配クロマトグラフイーなどを適
宜組合せあるいは繰り返すことによって、ＷＫ−３４１
９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質を純粋に採取する
ことができる。
【００２６】このようにして、得られたＷＫ−３４１９
Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質は、遺伝子工学的に
作成したｇｐ１２０と、同じく遺伝子工学的に作成した
ＣＤ４蛋白質との結合阻害を、抗体を用いたＥＬＩＳＡ
法によつて測定したところ、ＩＣ50（５０％阻害濃度）
はそれぞれ４．４および２．７μｇ／ｍｌであった。
Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質は、遺伝子工学的に
作成したｇｐ１２０と、同じく遺伝子工学的に作成した
ＣＤ４蛋白質との結合阻害を、抗体を用いたＥＬＩＳＡ
法によつて測定したところ、ＩＣ50（５０％阻害濃度）
はそれぞれ４．４および２．７μｇ／ｍｌであった。
【００２７】
【発明の効果】以上に述べたとおり、本発明のＷＫ−３
４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質は、ｇｐ１２
０とＣＤ４との結合阻害活性を示す。従って、本発明の
方法により得られたｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻害物
質は単に、ｇｐ１２０とＣＤ４細胞との結合を阻害する
だけでなく、抗ＡＩＤＳ薬として有効である。
４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９Ｂ物質は、ｇｐ１２
０とＣＤ４との結合阻害活性を示す。従って、本発明の
方法により得られたｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻害物
質は単に、ｇｐ１２０とＣＤ４細胞との結合を阻害する
だけでなく、抗ＡＩＤＳ薬として有効である。
【００２８】次に、実施例を挙げて本発明を具体的に説
明するが、これによつて限定されるものではない。寒天
斜面培地で培養したストレプトミセス エスピーＷＫ−
３４１９株（ＦＥＲＭ Ｐ−１３５８３）より、グルコ
ース２．０％、澱粉（溶性）〔関東化学（株）製〕２．
４％、ペプトン〔極東製薬工業（株）製〕０．３％、肉
エキス〔極東製薬工業（株）製〕０．３％、酵母エキス
〔オリエンタル酵母工業（株）製〕０．５％からなる液
体培地（ｐＨ７．０）を１００ｍｌずつ分注した５００
ｍｌ容三角フラスコ６本に、１白金耳づつ採取した菌体
を無菌的に接種し、２７℃で４日間振とう培養して種培
養液を得た。
明するが、これによつて限定されるものではない。寒天
斜面培地で培養したストレプトミセス エスピーＷＫ−
３４１９株（ＦＥＲＭ Ｐ−１３５８３）より、グルコ
ース２．０％、澱粉（溶性）〔関東化学（株）製〕２．
４％、ペプトン〔極東製薬工業（株）製〕０．３％、肉
エキス〔極東製薬工業（株）製〕０．３％、酵母エキス
〔オリエンタル酵母工業（株）製〕０．５％からなる液
体培地（ｐＨ７．０）を１００ｍｌずつ分注した５００
ｍｌ容三角フラスコ６本に、１白金耳づつ採取した菌体
を無菌的に接種し、２７℃で４日間振とう培養して種培
養液を得た。
【００２９】この種培養液をスターチ２．４％、グルコ
ース０．１％、ペプトン０．３％、肉エキス０．５％、
酵母エキス０．５％、炭酸カルシウム０．４％、トレー
スメタル１ｍｌ／１００ｍｌ、セカード０．１％からな
る液体培地（ｐＨ７．０）３０l の入った５０容ジャー
・ファーメンターに接種し、２７℃で６日間通気攪拌培
養した。
ース０．１％、ペプトン０．３％、肉エキス０．５％、
酵母エキス０．５％、炭酸カルシウム０．４％、トレー
スメタル１ｍｌ／１００ｍｌ、セカード０．１％からな
る液体培地（ｐＨ７．０）３０l の入った５０容ジャー
・ファーメンターに接種し、２７℃で６日間通気攪拌培
養した。
【００３０】この培養液は遠心分離し、得られた菌体に
含水アセトンを加え、１時間攪拌した。菌体は濾過し、
得られた抽出液は減圧濃縮し、アセトンを留去した。ア
セトンを留去後、濃縮液を２ＮＨＣl にてｐＨ２に調整
し、等量の酢酸エチルエステルを加え、酢酸エチルエス
テルを抽出した。酢酸エチルエスエル抽出液は減圧濃縮
し、２０ｇの黄褐色粗物質Ｉを得た。これを少量のメタ
ノールに溶解し、少量のシリカゲル（Ｓｉｌｉｃａ ｇ
ｅl ６０、メルク社製）を添加、エバポレータにて溶媒
を除去し、粗物質Ｉをシリカゲルに吸着させた。
含水アセトンを加え、１時間攪拌した。菌体は濾過し、
得られた抽出液は減圧濃縮し、アセトンを留去した。ア
セトンを留去後、濃縮液を２ＮＨＣl にてｐＨ２に調整
し、等量の酢酸エチルエステルを加え、酢酸エチルエス
テルを抽出した。酢酸エチルエスエル抽出液は減圧濃縮
し、２０ｇの黄褐色粗物質Ｉを得た。これを少量のメタ
ノールに溶解し、少量のシリカゲル（Ｓｉｌｉｃａ ｇ
ｅl ６０、メルク社製）を添加、エバポレータにて溶媒
を除去し、粗物質Ｉをシリカゲルに吸着させた。
【００３１】粗物質Ｉを吸着させたシリカゲルは、クロ
ロホルム−メタノール−水（４０：１６：３）で調製し
たシリカゲルカラム〔５．０×２４ｃｍ、Ｓｉｌｉｃａ
ｇｅl ６０、メルク社製〕に付し、クロロホルム−メ
タノール−水（４０：１６：３）４０００ｍｌ、クロロ
ホルム−メタノール−水（１５：１０：２）４０００ｍ
ｌ、及び１００％メタノールで順次溶出した。ｇｐ１２
０とＣＤ４との結合阻害活性のある溶出画分を集めて減
圧濃縮し、５００ｍｇの黄色粗物質IIを得た。
ロホルム−メタノール−水（４０：１６：３）で調製し
たシリカゲルカラム〔５．０×２４ｃｍ、Ｓｉｌｉｃａ
ｇｅl ６０、メルク社製〕に付し、クロロホルム−メ
タノール−水（４０：１６：３）４０００ｍｌ、クロロ
ホルム−メタノール−水（１５：１０：２）４０００ｍ
ｌ、及び１００％メタノールで順次溶出した。ｇｐ１２
０とＣＤ４との結合阻害活性のある溶出画分を集めて減
圧濃縮し、５００ｍｇの黄色粗物質IIを得た。
【００３２】これを少量の５０％メタノールに溶解し、
５０％メタノール溶液で調製したセファデックスＬＨ２
０カラム（２．０×６０ｃｍ、ファルマシア社製）にて
ゲル濾過クロマトグラフイーを行い、５０％メタノール
溶液で展開した。ｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻害活性
のある溶出画分を集めて減圧濃縮し、２００ｍｇの黄色
物質III を得た。
５０％メタノール溶液で調製したセファデックスＬＨ２
０カラム（２．０×６０ｃｍ、ファルマシア社製）にて
ゲル濾過クロマトグラフイーを行い、５０％メタノール
溶液で展開した。ｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻害活性
のある溶出画分を集めて減圧濃縮し、２００ｍｇの黄色
物質III を得た。
【００３３】これをアセトニトリル−メタノール−４％
酢酸水（４０：５：５５）の混合溶液に溶解し、高速液
体クロマトグラフイー〔Ｃａｐｃｅｌｌ ｐａｋＣ１８
ＳＧ１２０、１０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ（株）資生
堂社製〕に数回に分けてかけ、アセトニトリル−メタノ
ール−４％酢酸水（４０：５：５５）の混合溶液を移動
相として２４０ｎｍの吸収を検出しながら、３．０ｍｌ
／分の流速において、２０〜３０分および３３〜４５分
に溶出するｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻害活性のある
ピークを集めた。それを減圧濃縮して溶媒を除去し、１
２ｍｇおよび２３ｍｇのＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷ
Ｋ−３４１９Ｂ物質の黄色粉末をそれぞれ得た。
酢酸水（４０：５：５５）の混合溶液に溶解し、高速液
体クロマトグラフイー〔Ｃａｐｃｅｌｌ ｐａｋＣ１８
ＳＧ１２０、１０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ（株）資生
堂社製〕に数回に分けてかけ、アセトニトリル−メタノ
ール−４％酢酸水（４０：５：５５）の混合溶液を移動
相として２４０ｎｍの吸収を検出しながら、３．０ｍｌ
／分の流速において、２０〜３０分および３３〜４５分
に溶出するｇｐ１２０とＣＤ４との結合阻害活性のある
ピークを集めた。それを減圧濃縮して溶媒を除去し、１
２ｍｇおよび２３ｍｇのＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷ
Ｋ−３４１９Ｂ物質の黄色粉末をそれぞれ得た。
【図１】ＷＫ−３４１９Ａ物質の紫外部吸収スペクトル
である。
である。
【図２】ＷＫ−３４１９Ａ物質の赤外部吸収スペクトル
である。
である。
【図３】ＷＫ−３４１９Ｂ物質の紫外部吸収スペクトル
である。
である。
【図４】ＷＫ−３４１９Ｂ物質の赤外部吸収スペクトル
である。
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 松崎 桂一 東京都港区白金５丁目９番１号 社団法人 北里研究所内
Claims (5)
- 【請求項１】 次の理化学的性質を有するｇｐ１２０と
ＣＤ４との結合阻害物質ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷ
Ｋ−３４１９Ｂ物質またはその塩。 ＷＫ−３４１９Ａ物質 （１）性状 黄色粉末 （２）比旋光度 ＋１０℃（ｃ＝０．１，ｐｙｒｉｄｉｎｅ） （３）分子量 １３２５（質量分析による） （４）分子式 Ｃ61Ｈ45Ｎ7 Ｏ15Ｃｌ6 （５）紫外線吸収スペクトル（ＣＨ3 ＯＨ中） 少なくとも２１３、２３９（肩）、２８３、２８８ｎｍ
付近に特徴的な吸収を有する （６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠） 少なくとも３３９０、３２８０、１６５０、１５００、
１４９０、１４１０、１２１０ｃｍ-1付近に特徴的な吸
収を有する （７）溶剤に対する溶解性 メタノール、エタノール、ジメチルスルフォキシド、ア
ルカリ水に可溶性、ヘキサン、ジエチルエーテル、アセ
トン、酢酸エチルエステル、クロロホルム、ベンゼンに
不溶性 ＷＫ−３４１９Ｂ物質 （１）性状 黄色粉末 （２）比旋光度 ＋１２℃（ｃ＝０．１，ｐｙｒｉｄｉｎｅ） （３）分子量 １３２５（質量分析による） （４）分子式 Ｃ61Ｈ45Ｎ7 Ｏ15Ｃｌ6 （５）紫外線吸収スペクトル（ＣＨ3 ＯＨ中） 少なくとも２１４、２３９（肩）、２８５（肩）、２９
１、３０４ｎｍ付近に特徴的な吸収を有する （６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠） 少なくとも３３８５、１６４０、１５００、１４１０、
１２１５ｃｍ-1付近に特徴的な吸収を有する （７）溶剤に対する溶解性 メタノール、エタノール、ジメチルスルフォキシド、ア
ルカリ水に可溶性、ヘキサン、ジエチルエーテル、アセ
トン、酢酸エチルエステル、クロロホルム、ベンゼンに
不溶性 - 【請求項２】 ストレプトミセス属に属し、ｇｐ１２０
とＣＤ４との結合阻害物質ＷＫ−３４１９Ａ物質および
ＷＫ−３４１９Ｂ物質を生産する能力を有する微生物を
培地に培養し、その培養物にｇｐ１２０とＣＤ４との結
合阻害物質ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３４１９
Ｂ物質を蓄積せしめ、該培養物からｇｐ１２０とＣＤ４
との結合阻害物質ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷＫ−３
４１９Ｂ物質を採取することを特徴とするｇｐ１２０と
ＣＤ４との結合阻害物質ＷＫ−３４１９Ａ物質およびＷ
Ｋ−３４１９Ｂ物質の製造法。 - 【請求項３】 ストレプトミセス属に属し、ｇｐ１２０
とＣＤ４との結合阻害物質ＷＫ−３４１９Ａ物質および
ＷＫ−３４１９Ｂ物質を生産する能力を有する微生物が
ストレプトミセス エスピーＷＫ−３４１９（ＦＥＲＭ
Ｐ−１３５８３）である請求項２記載の製造法。 - 【請求項４】 ストレプトミセス属に属し、ｇｐ１２０
とＣＤ４との結合阻害物質ＷＫ−３４１９Ａ物質および
ＷＫ−３４１９Ｂ物質を生産する能力を有する実質的に
純粋な微生物。 - 【請求項５】 微生物がストレプトミセス エスピーＷ
Ｋ−３４１９である請求項４に記載の微生物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5248035A JPH07101973A (ja) | 1993-10-04 | 1993-10-04 | Ｗｋ−３４１９ａ物質およびｗｋ−３４１９ｂ物質並びにその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5248035A JPH07101973A (ja) | 1993-10-04 | 1993-10-04 | Ｗｋ−３４１９ａ物質およびｗｋ−３４１９ｂ物質並びにその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07101973A true JPH07101973A (ja) | 1995-04-18 |
Family
ID=17172234
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5248035A Pending JPH07101973A (ja) | 1993-10-04 | 1993-10-04 | Ｗｋ−３４１９ａ物質およびｗｋ−３４１９ｂ物質並びにその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07101973A (ja) |
-
1993
- 1993-10-04 JP JP5248035A patent/JPH07101973A/ja active Pending
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